CN101289695A - 一种小麦黄色素含量性状相关蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种小麦黄色素含量性状相关蛋白及其编码基因与应用。本发明的小麦黄色素含量性状相关蛋白是由序列表中序列1或3或5或7以及它们经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与黄色素含量性状相关的蛋白质。本发明还提供了该蛋白的编码基因和基于小麦基因等位变异的特异性功能标记。利用本发明的标记，通过两次基因分型，可判断小麦携带的黄色素含量相关基因。应用本发明，可在发育早期筛选小麦品种，从而优化杂交组合，加快育种速度，降低育种成本。本发明提供的检测小麦黄色素含量性状的方法具有操作简单、稳定可靠、成本低廉、周期短的优点，适于推广应用，对快速改良小麦面制品颜色具有重要的理论意义和经济价值。

Description

一种小麦黄色素含量性状相关蛋白及其编码基因与应用
技术领域
本发明涉及一种小麦黄色素含量性状相关蛋白及其编码基因与应用。
背景技术
随着生活水平的提高，人们在关注食品营养品质的同时也对其外观品质提出了更高的要求。我国的传统食品如面条、馒头等对色泽的要求较高，具有白亮色泽的食品更受消费者欢迎(He等，2003；杨金等，2004)。为迎合消费者对面制品求白的心理，一些生产商向面粉中添加增白剂以提高面粉白度。近几年国家质检部门对面粉行业的质量抽检报告表明，我国多数面粉增白剂含量严重超标(焦淑婷等，2001)。大量使用增白剂会使面粉失去麦香味，长期食用增白剂超标的面粉会加重肝脏负担，引起慢性中毒，严重影响人体健康。
研究表明，面粉黄色素含量是影响面包、面条黄度的主要因素(杨金等，2004；He等，2004)。黄色素含量虽然在一定程度上受环境因素影响(Miskelly，1984)，但其主要受遗传因素调控，遗传力为0.67(Parker等，1998)或者更高0.88～0.97(Elouafi等，1995；Clarke等，2006)。我国312份普通冬小麦品种(系)间籽粒黄色素含量存在很大差异，变化范围为0.35～3.42mg/kg，相差约10倍，选择潜力很大(何中虎，2008，未发表)，通过育种途径改良小麦黄色素含量是完全可行的。
对于黄色素含量的常规选择方法是直接对面粉的黄色素含量进行测量，因此只能在高代(高代是指杂交育种中经过一次杂交，然后经多代自交和选择而获得的群体，该群体具有大体整齐一致的表现型和基因型，但还未审定成为品种，称为高代品系)进行选择，同时又由于环境等因素的影响，同一品种在不同年份、不同生长地点所表现出的表型值可能会有较大的差异。分子标记辅助选择(Marker assisted selection，MAS)是基于基因型的选择，不受外界环境因素的影响，被越来越广泛地应用于育种实践中。常用的分子标记类型有RFLP、AFLP、SSR等，但这些标记类型不能与目标基因共分离，同时在分子育种中应用成本较高，因此亟待开发准确而又经济的分子标记类型。功能标记(Functionalmarker)是一类基于基因特征序列开发的标记，与目标基因共分离，大大提高了选择的准确性(Bagge等，2007)，在MAS中有着广泛应用前景。
虽然影响黄色素的基因较多，但大量QTL定位表明，影响小麦黄色素含量的关键基因位于7A与7B染色体上(Parker等，1998；Elouafi等，2001；Mares等，2001；张立平等，2006；Kuchel等，2006)，可解释表型变异的30-60％。但与这些QTL紧密连锁的分子标记大多为AFLP和SSR等非基因特异性标记，不能与目标基因共分离，同时在分子育种中应用成本较高，因此不能广泛用于分子辅助育种。
发明内容
本发明的目的是提供一种小麦黄色素含量性状相关蛋白及其编码基因与应用。
本发明提供的小麦黄色素含量性状相关蛋白，是如下1)或2)或3)或4)或5)的蛋白质：
(1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(3)由序列表中序列5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(4)由序列表中序列7所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)将序列1、3、5或7所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与黄色素含量性状相关的由序列1、3、5或7衍生的蛋白质。
为了使所述蛋白便于纯化，可在由序列表中序列1、序列3、序列5或序列6所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。
表1标签的序列
  标签   残基   序列
  Poly-Arg   5-6(通常为5个)   RRRRR
  Poly-His   2-10(通常为6个)   HHHHHH
  FLAG   8   DYKDDDDK
  Strep-tag II   8   WSHPQFEK
  c-myc   10   EQKLISEEDL
上述蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述蛋白的编码基因可通过将序列表中序列2、序列4、序列6或序列8所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。
所述蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。
所述蛋白编码基因可为如下1)或2)或3)或4)或5)或6)的DNA分子：
1)其核苷酸序列是序列表中序列2所示的DNA分子；
2)其核苷酸序列是序列表中序列4所示的DNA分子；
3)其核苷酸序列是序列表中序列6所示的DNA分子；
4)其核苷酸序列是序列表中序列8所示的DNA分子；
5)在严格条件下与1)、2)、3)或4)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；
6)与1)、2)、3)或4)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。
上述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。
基于所述蛋白的编码基因及其等位变异，本发明还提供了两对标记引物。
本发明提供的标记引物A，是由序列表中序列9的核苷酸序列和序列10的核苷酸序列组成的一对引物。
本发明提供的标记引物B，是由序列表中序列11的核苷酸序列和序列12的核苷酸序列组成的一对引物。
基于所述编码基因及其等位变异以及所述标记引物，本发明提供了一种检测小麦黄色素含量性状的方法。
本发明提供的检测小麦黄色素含量性状的方法，是以待测小麦基因组DNA为模板，用所述标记引物A进行PCR扩增，检测PCR扩增产物中是否有156bp的条带或151bp的条带；如PCR扩增产物中无156bp的条带和151bp的条带，再以所述待测小麦基因组DNA为模板，用所述标记引物B进行PCR扩增，检测扩增产物中是否有428bp的条带。
所述方法中，如所述标记引物A的PCR扩增产物中有156bp的条带或151bp的条带，所述待测小麦为候选低黄色素含量小麦；如所述标记引物A的PCR扩增产物中无156bp的条带和151bp的条带，而所述标记引物B的PCR扩增产物中有428bp的条带，所述待测小麦为候选高黄色素含量小麦。
用所述标记引物A进行PCR扩增得到的扩增产物可通过6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测；用所述标记引物B进行PCR扩增得到的扩增产物可通过1.5％琼脂糖凝胶电泳进行检测。
所述小麦具体可为普通小麦。
所述方法在培育低黄色素含量小麦中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明所提供的蛋白及其编码基因，与小麦的黄色素含量性状有着紧密的相关性。本发明还提供了基于该小麦黄色素含量性状相关蛋白基因等位变异的特异性功能标记，利用该标记可以对小麦黄色素含量相关基因的变异进行分子标记辅助选择，从而培育低黄色素含量的优良小麦品种。应用本发明提供的蛋白及其编码基因以及功能标记辅助选择，可在发育早期筛选小麦品种，从而优化杂交组合，加快育种速度，降低育种成本。本发明提供的检测小麦黄色素含量性状的方法具有操作简单、稳定可靠、成本低廉、周期短的优点，适于推广应用，对快速改良小麦面制品颜色具有重要的理论意义和经济价值。
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。
附图说明
图1为普通小麦的4个黄色素含量性状相关蛋白编码基因等位基因的序列比对。
图2为15个样本的第一次分型鉴定结果。
图3为15个样本的第二次分型鉴定结果。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1、与黄色素含量性状相关的蛋白及其编码基因的获得
本实施例中所用到的引物序列见表2。
表2用于克隆Psy-B1位点等位基因的引物序列
Figure A20081011325600051
Figure A20081011325600061
1、Psy-Bla蛋白及其编码基因的获得
采取电子克隆结合常规PCR扩增的方法获取到了Psy-Bla蛋白编码基因，具体如下：
1)以玉米PSY基因(GenBank登录号U32636)的cDNA序列作为电子探针筛选GenBank小麦EST数据库，并将得到的序列进行电子拼接组建跨叠群(contig)。
2)根据EST序列CD862515、CD875290和CA598664组建的跨叠群设计引物P7B1，通过在中国春缺体-四体系中进行染色体定位发现其位于7B染色体上。根据该段测得的序列以及Psy-Ala的序列(GenBank登录号EF600063)设计引物P7B2和P7B3，以中麦16号的基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得基因全长序列。
3)将获得的Psy-Bla全长序列与Psy-Ala基因序列进行比对，确定其内含子区及起始密码子和终止密码子，并将外显子进行拼接，翻译获得Psy-Bla蛋白序列。
Psy-Bla蛋白的序列如序列表的序列1所示，Psy-Bla蛋白的编码基因序列如序列表的序列2所示。
2、Psy-Blb蛋白及其编码基因的获得
方法同步骤1中Psy-Bla蛋白的获得。以高优503的基因组DNA为模板进行PCR扩增。
Psy-Blb蛋白的序列如序列表的序列3所示，Psy-Blb蛋白的编码基因序列如序列表的序列4所示。
3、Psy-Blc蛋白及其编码基因的获得
应用引物P7B1扩增晋麦61的基因组DNA，分析PCR产物的序列，并根据该序列，同时参考Psy-Bla的序列，设计引物P7B4，PCR扩增晋麦61的基因组DNA，获得了Psy-Blc基因的中游序列。但该基因的上游序列以此方法未能获得。将Psy-Blc的基因序列与Psy-Bla的基因序列进行比对，确定其内含子区与终止密码子。拼接晋麦61的cDNA序列，进行翻译获得Psy-Blc蛋白序列。
Psy-Blc蛋白的序列如序列表的序列5所示，Psy-Blc蛋白的编码基因序列如序列表的序列6所示。
4、Psy-Bld蛋白及其编码基因的获得
应用引物P7B1扩增宁98084小麦的基因组DNA，分析PCR产物的序列，并根据该序列，同时参考Psy-Bla的序列，设计引物P7B5和P7B6，PCR扩增宁98084小麦的基因组DNA，获得了Psy-Bld基因的全长序列。将Psy-Bld的基因序列与Psy-Bla的基因序列进行比对，确定其内含子区与终止密码子。拼接宁98084小麦的cDNA序列，进行翻译获得Psy-Bld蛋白序列。
Psy-Bld蛋白的序列如序列表的序列7所示，Psy-Bld蛋白的编码基因序列如序列表的序列8所示。
来源于普通小麦的4个黄色素含量性状相关蛋白(Psy-Bla、Psy-Blb、Psy-Blc、Psy-Bld)编码基因等位基因的序列比对如图1所示。
实施例2、小麦黄色素含量与基因型的相关性分析
一、功能标记引物的设计
根据序列表中的序列2、序列4、序列6和序列8设计一对引物P1和P2(序列表中的序列9和序列表中的序列10)如下：
P1(上游引物)：5’-GCCACAACTTGAATGTGAAAC-3’，
P2(下游引物)：5’-ACTTCTTCCATTTGAACCCC-3’。
用引物P1和P2，可以扩增序列表中序列2所示核苷酸中151bp的核苷酸序列；可以扩增序列表中序列4所示核苷酸中156bp的核苷酸序列；不能扩增出序列表中序列6和序列8所示核苷酸中151bp或156bp的核苷酸序列。
根据序列表中的序列6和序列8设计一对引物P3和P4(序列表中的序列11和序列表中的序列12)如下：
P3(上游引物)：5’-GCCACCCACTGATTACCACTA-3’，
P4(下游引物)：5’-CCAAGGTGAGGGTCTTCAAC-3’。
用引物P3和P4，可以扩增出序列表中序列6所示核苷酸中428bp的核苷酸序列；不能扩增出序列表中序列8所示核苷酸中428bp的核苷酸序列。
二、小麦黄色素含量与所述基因的相关性分析
取217份来源于中国国家种质资源库的小麦品种，见表1。每份小麦品种取300粒种子，其中297粒检测黄色素含量，3粒提取基因组DNA。
1、小麦籽粒黄色素含量的检测
检测黄色素含量的具体方法如下：
将待测的籽粒用旋风磨磨成面粉；称取3.000g样品放入约30ml具塞试管或试剂瓶内，加入15.0ml水饱和正丁醇(100ml正丁醇加20ml蒸馏水，反复混匀，取饱和液部分)，盖紧塞子，放在混旋器上混合，使样品粉末充分湿润；把样品瓶放在往复振荡机上振荡1h，然后静置10min；将上部液体倒入离心管内，在4000rpm的离心机上离心约10min至液体清亮为止；每一批次均以中优9507面粉作为对照，取1.0cm比色皿，用分光光度计在436.5nm下测定离心后上清液的吸光度A；最终的黄色素含量(mg/kg)数值即为30.1A。
217份样本黄色素含量的检测结果见表3。
2、小麦基因型的测定
按常规方法提取小麦的基因组DNA，然后进行以下步骤：
1)第一次基因分型
①以小麦基因组DNA为模板，P1和P2为引物，进行PCR。
PCR反应体系为：模板DNA 50ng，Taq酶1U(北京天根生化科技公司)，上、下游引物(5μmol·L-1)各1μl，dNTP(25μmol·L-1)0.2μl，10×PCR缓冲液2μl，用无菌蒸馏水补充反应体系至20μl。
PCR反应程序为：首先95℃、5min；然后95℃、30s，60℃、30s，72℃、1min，共35个循环；最后72℃、5min。
扩增产物于4℃保存。
②6％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测
取20μl扩增产物，加入4μl变性载样指示剂(98％去离子甲酰胺，10mM EDTA pH8.0，0.1％溴酚蓝和0.1％二甲苯青)，94℃变性5min后，立即放入冰水混合物中冷却5-10min。取6μl变性的扩增样品进行电泳分离，银染显色。
图2为15个样本的第一次分型鉴定结果。泳道M表示分子量标准(Marker)；泳道01至15分别为以下品种的小麦：京冬8、冀麦38、宁98084、云麦42、皖麦38、烟农18、陕150、宁99415-8、山农1355、豫麦49号、郑州992、河农2552、冀3475、晋麦50、中优9701。
2)第二次基因分型
①将步骤1)中没有得到扩增条带的样本，以小麦基因组DNA为模板，P3和P4为引物，重新进行PCR。
PCR反应体系为：模板DNA 50ng，Taq酶1U(北京天根生化科技公司)，上、下游引物(5μmol·L-1)各1μl，dNTP(25μmol·L-1)0.2μl，10×PCR缓冲液2μl，用无菌蒸馏水补充反应体系至20μl。
PCR反应程序为：首先95℃、5min；然后95℃、30s，60℃、30s，72℃、1min，共35个循环；最后72℃、5min。
扩增产物于4℃保存。
②将PCR扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测。
图3为15个样本的第二次分型鉴定结果。泳道M表示分子量标准(Marker)；泳道01至15分别为以下品种的小麦：京冬8、冀麦38、宁98084、云麦42、皖麦38、烟农18、陕150、宁99415-8、山农1355、豫麦49号、郑州992、河农2552、冀3475、晋麦50、中优9701。
217个份样本的基因型测定结果见表3。
表3小麦的基因型和黄色素含量检测结果
  小麦品种   黄色素含量   第一次基因分型   第二次基因分型   基因型
  北京837   1.595   151bp   Psy-Bla
  CA8686   2.152   -   428bp   Psy-Blc
  CA9532   2.589   151bp   Psy-Bla
  CA9550   2.122   151bp   Psy-Bla
  CA9553   1.671   -   428bp   Psy-Blc
  CA9632   1.957   151bp   Psy-Bla
  CA9641   1.129   151bp   Psy-Bla
  CA9648   3.100   -   428bp   Psy-Blc
  CA9719   2.122   -   428bp   Psy-Blc
  CA9722   1.460   156bp   Psy-Blb
  冬丰611   2.152   156bp   Psy-Blb
  冬丰9801   1.701   151bp   Psy-Bla
  中麦9号   2.242   151bp   Psy-Bla
  中麦16号   2.528   151bp   Psy-Bla
  中优9507   1.460   151bp   Psy-Bla
  中优9701   1.189   156bp   Psy-Blb
  小偃54   0.933   156bp   Psy-Blb
  原冬6号   1.370   151bp   Psy-Bla
  原冬107   1.038   -   428bp   Psy-Blc
  原冬971   2.453   151bp   Psy-Bla
  原冬8585   1.821   151bp   Psy-Bla
  原冬9428   1.686   151bp   Psy-Bla
  农大116   1.204   151bp   Psy-Bla
  农大152   1.731   156bp   Psy-Blb
  农大3197   1.746   151bp   Psy-Bla
  农大3213   2.423   -   428bp   Psy-Blc
  农大3214   2.032   151bp   Psy-Bla
  农大3291   3.176   -   428bp   Psy-Blc
  农大3395   2.273   151bp   Psy-Bla
  农大99-5009   1.776   156bp   Psy-Blb
  京农8318   2.318   156bp   Psy-Blb
  京农97-86   1.505   156bp   Psy-Blb
  京农98-100   2.619   151bp   Psy-Bla
  京冬8   2.137   151bp   Psy-Bla
  京冬10号   2.634   151bp   Psy-Bla
  京411   2.634   -   428bp   Psy-Blc
  京9428   0.963   156bp   Psy-Blb
  晋麦45   1.671   151bp   Psy-Bla
  晋麦50   1.972   151bp   Psy-Bla
  晋麦60   1.957   156bp   Psy-Blb
  晋麦61   1.941   -   428bp   Psy-Blc
  晋麦67   1.084   151bp   Psy-Bla
  99G46   2.032   156bp   Psy-Blb
  99G66   2.905   151bp   Psy-Bla
  99G80   3.100   151bp   Psy-Bla
  晋农207   1.370   151bp   Psy-Bla
  晋农215   1.460   151bp   Psy-Bla
  晋农216   1.219   151bp   Psy-Bla
  晋农218   2.288   151bp   Psy-Bla
  河农2552   2.197   151bp   Psy-Bla
  河北农大341   1.234   151bp   Psy-Bla
  冀3475   2.017   -   428bp   Psy-Blc
  冀5066   0.813   151bp   Psy-Bla
  冀Z76   1.355   156bp   Psy-Blb
  冀麦38   1.114   156bp   Psy-Blb
  藁城8901   1.264   151bp   Psy-Bla
  高优503   1.580   156bp   Psy-Blb
  沧核030   1.776   151bp   Psy-Bla
  96C1   1.219   156bp   Psy-Blb
  HS97-10   1.309   156bp   Psy-Blb
  中育5号   1.821   151bp   Psy-Bla
  中育6号   2.303   151bp   Psy-Bla
  85中33   2.062   151bp   Psy-Bla
  93中6(37)   2.032   156bp   Psy-Blb
  98中18   2.875   -   428bp   Psy-Blc
  丰优6号   1.640   151bp   Psy-Bla
  丰优7号   0.828   156bp   Psy-Blb
  关封2号   1.249   156bp   Psy-Blb
  郑州81-1   1.309   -   428bp   Psy-Blc
  郑州9023   0.948   156bp   Psy-Blb
  郑州974   1.385   151bp   Psy-Bla
  郑州992   2.844   -   428bp   Psy-Blc
  豫农94268   2.438   -   428bp   Psy-Blc
  豫农95339   1.159   156bp   Psy-Blb
  豫麦21号   1.535   156bp   Psy-Blb
  豫麦25号   0.753   156bp   Psy-Blb
  豫麦28号   1.806   151bp   Psy-Bla
  豫麦34号   1.264   151bp   Psy-Bla
  豫麦35号   2.062   156bp   Psy-Blb
  豫麦47号   1.851   156bp   Psy-Blb
  豫麦49号   1.625   156bp   Psy-Blb
  豫麦50号   2.303   151bp   Psy-Bla
  豫麦51号   2.378   151bp   Psy-Bla
  豫麦54号   2.092   156bp   Psy-Blb
  豫麦57号   1.309   156bp   Psy-Blb
  豫麦62号   2.092   156bp   Psy-Blb
  豫麦63号   1.189   156bp   Psy-Blb
  豫麦69号   1.716   156bp   Psy-Blb
  豫麦70号   1.761   156bp   Psy-Blb
  周91177   2.197   156bp   Psy-Blb
  周麦13号   2.227   156bp   Psy-Blb
  兰考24号   2.017   151bp   Psy-Bla
  濮优9175   1.084   156bp   Psy-Blb
  山东924402-6   1.746   156bp   Psy-Blb
  山东928802   2.062   156bp   Psy-Blb
  山东94(6)006   1.294   151bp   Psy-Bla
  山东955159   2.032   151bp   Psy-Bla
  鲁95(6)161   1.761   -   428bp   Psy-Blc
  鲁麦21   1.836   151bp   Psy-Bla
  鲁麦22   1.866   151bp   Psy-Bla
  鲁麦23   1.656   151bp   Psy-Bla
  白玉149   1.084   156bp   Psy-Blb
  PH1521   1.084   151bp   Psy-Bla
  PH82-2-2   1.355   156bp   Psy-Blb
  PH85-1-1   1.204   156bp   Psy-Blb
  PH85-16   1.084   151bp   Psy-Bla
  山农1355   3.356   151bp   Psy-Bla
  山农2013   1.821   151bp   Psy-Bla
  山农413863   1.836   156bp   Psy-Blb
  山农60182   0.918   151bp   Psy-Bla
  山农617   1.550   151bp   Psy-Bla
  山农664   2.784   151bp   Psy-Bla
  山农990525   0.918   156bp   Psy-Blb
  烟239   1.460   156bp   Psy-Blb
  烟2801   2.694   156bp   Psy-Blb
  烟475   0.948   156bp   Psy-Blb
  烟99-5   1.038   156bp   Psy-Blb
  烟辐188   1.189   151bp   Psy-Bla
  烟农15   1.806   156bp   Psy-Blb
  烟农18   2.709   -   428bp   Psy-Blc
  烟优361   1.084   151bp   Psy-Bla
  济宁936098   2.333   -   428bp   Psy-Blc
  济麦1号   0.933   156bp   Psy-Blb
  运97169   3.416   -   428bp   Psy-Blc
  运丰早101   1.204   151bp   Psy-Bla
  运丰早898   1.475   156bp   Psy-Blb
  临汾125   2.227   -   428bp   Psy-Blc
  临汾127   2.227   156bp   Psy-Blb
  临汾133   1.174   151bp   Psy-Bla
  临汾137   1.099   156bp   Psy-Blb
  临汾5232   2.167   151bp   Psy-Bla
  临汾98-6269   1.008   156bp   Psy-Blb
  临旱6114   1.656   156bp   Psy-Blb
  临旱619   1.520   156bp   Psy-Blb
  临旱917   1.219   156bp   Psy-Blb
  临丰615   1.716   156bp   Psy-Blb
  临优1583   1.806   156bp   Psy-Blb
  陕150   0.858   156bp   Psy-Blb
  陕160   1.686   156bp   Psy-Blb
  陕229   1.339   151bp   Psy-Bla
  陕253   1.836   151bp   Psy-Bla
  陕302518   2.378   -   428bp   Psy-Blc
  陕354   2.739   -   428bp   Psy-Blc
  陕623   2.152   156bp   Psy-Blb
  陕898-33   1.249   156bp   Psy-Blb
  陕9314   1.355   156bp   Psy-Blb
  陕93302   1.821   151bp   Psy-Bla
  陕优225   1.400   151bp   Psy-Bla
  西农1163-20   1.355   151bp   Psy-Bla
  西农12208019   1.671   156bp   Psy-Blb
  西农336   0.482   156bp   Psy-Blb
  西农6426   0.753   156bp   Psy-Blb
  西农8925-13   1.264   156bp   Psy-Blb
  N9209-3   2.273   156bp   Psy-Blb
  中梁88303   1.806   156bp   Psy-Blb
  中梁88375   2.875   -   428bp   Psy-Blc
  883   1.881   156bp   Psy-Blb
  9(54)   1.324   -   428bp   Psy-Blc
  徐858   1.249   -   428bp   Psy-Blc
  徐州25号   2.152   -   428bp   Psy-Blc
  徐州826   2.905   -   428bp   Psy-Blc
  宁9-159   2.032   151bp   Psy-Bla
  宁9247   1.881   151bp   Psy-Bla
  宁9548   0.933   156bp   Psy-Blb
  宁97-18   0.346   156bp   Psy-Blb
  宁97-41   1.084   156bp   Psy-Blb
  宁9766   0.858   156bp   Psy-Blb
  宁98084   1.565   -   -   Psy-Bld
  宁9940   1.023   151bp   Psy-Bla
  宁99415-8   1.385   -   -   Psy-Bld
  宁9952   1.355   151bp   Psy-Bla
  99P102   1.565   151bp   Psy-Bla
  扬96-152   1.204   156bp   Psy-Blb
  扬96G25   1.249   151bp   Psy-Bla
  扬97-65   1.219   156bp   Psy-Blb
  扬麦158   0.978   151bp   Psy-Bla
  扬麦5号   1.535   151bp   Psy-Bla
  扬麦9号   1.791   151bp   Psy-Bla
  RF-1   1.851   156bp   Psy-Blb
  淮麦16   0.572   151bp   Psy-Bla
  淮麦17   1.159   -   428bp   Psy-Blc
  淮麦18号   2.182   -   428bp   Psy-Blc
  安农91168   1.279   -   428bp   Psy-Blc
  安农94022   1.069   156bp   Psy-Blb
  安农98005   1.490   156bp   Psy-Blb
  皖麦18   0.707   156bp   Psy-Blb
  皖麦19号   1.716   156bp   Psy-Blb
  皖麦33   0.662   156bp   Psy-Blb
  皖麦38   1.671   151bp   Psy-Bla
  鄂66378   1.159   156bp   Psy-Blb
  鄂81027   1.324   -   428bp   Psy-Blc
  鄂86642   0.617   156bp   Psy-Blb
  鄂91727   1.069   156bp   Psy-Blb
  川89-107   0.692   156bp   Psy-Blb
  川89-114   1.264   156bp   Psy-Blb
  川96003   0.768   156bp   Psy-Blb
  川育12   0.768   156bp   Psy-Blb
  R25   0.858   156bp   Psy-Blb
  R57   1.219   156bp   Psy-Blb
  R59   1.279   156bp   Psy-Blb
  绵阳26   0.888   156bp   Psy-Blb
  绵阳940112   0.677   151bp   Psy-Bla
  绵阳960107   0.692   156bp   Psy-Blb
  绵阳980127   1.144   151bp   Psy-Bla
  绵阳98-17   1.279   156bp   Psy-Blb
  绵阳98-20   1.159   156bp   Psy-Blb
  绵阳99-17   1.264   156bp   Psy-Blb
  风麦24   1.896   156bp   Psy-Blb
  凤麦27   1.008   156bp   Psy-Blb
  云麦39   1.610   151bp   Psy-Bla
  云麦42   1.219   156bp   Psy-Blb
  云麦44   2.408   151bp   Psy-Bla
  云麦46   0.993   156bp   Psy-Blb
  德麦4号   1.355   156bp   Psy-Blb
  引11-12   1.926   151bp   Psy-Bla
  992-17   1.144   156bp   Psy-Blb
  Y10-8   1.505   156bp   Psy-Blb
注：“-”表示无扩增产物。
3、基因分型检测结果验证
对217个样本的PCR产物进行测序，测序结果表明，151bp PCR产物是序列2(Psy-Bla基因)的自5′末端第2566-2716位脱氧核糖核苷酸，156bp PCR产物是序列4(Psy-Blb基因)的自5′末端第2566-2721位脱氧核糖核苷酸，428bp PCR产物是序列6(Psy-Blc基因)的自5′末端第2157-2584位脱氧核糖核苷酸，与电泳分型鉴定的结果一致。
217个样本中，86个样本基因型为Psy-Bla；95个样本基因型为Psy-Blb；36个样本基因型为Psy-Blc；2个样本基因型为Psy-Bld。对不同基因型小麦的黄色素含量进行统计分析，发现有显著差异，见表4。
表4小麦等位变异与籽粒黄色素含量关系的统计分析结果
Figure A20081011325600151
通过小麦黄色素含量与所述基因的相关性分析，得出以下结论：
以小麦基因组DNA为模板，先用引物P1和P2进行扩增，如果扩增出151bp的条带，说明基因型为Psy-Bla，具有较低黄色素含量；如果扩增出156bp的条带，说明基因型为Psy-Blb，具有低黄色素含量；对没有扩增条带的样本，用引物P3和P4进行扩增，如果扩增出428bp的条带，说明基因型为Psy-Blc，具有高的黄色素含量。
序列表
<110>中国农业科学院作物科学研究所
<120>一种小麦黄色素含量性状相关蛋白及其编码基因与应用
<130>CGGNARY81358
<160>12
<210>1
<211>421
<212>PRT
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>1
Met Ala Thr Thr Val Thr Leu Leu Leu Gly Ala Ala Ser Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Ala Ala Arg Asp Gly Val Gln Cys Ser Arg Met Leu Pro Arg
           20                   25                  30
Arg Arg Gln Gln Arg Pro Arg Trp Val Leu Cys Ser Leu Lys Tyr Gly
       35                   40                  45
Cys Leu Gly Val Gly Glu Pro Gly Glu Ala Gly Thr Arg Ser Ala Ala
    50                  55                  60
Ser Pro Val Tyr Ser Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Glu Ala Ala
65                  70                  75                  80
Val Ala Val Val Ser Ser Glu Gln Lys Val Tyr Asp Val Val Leu Lys
                85                  90                  95
Gln Ala Ala Leu Leu Lys Arg Gln Leu Arg Pro Gln Gln Ala Ala Pro
           100                 105                  110
Pro Ala Val Ala Arg Glu Leu Asp Ala Pro Arg Gly Gly Leu Gly Lys
        115                 120                125
Ala Tyr Ala Arg Cys Gly Glu Ile Cys Glu Glu Tyr Ala Lys Thr Phe
    130                 135                 140
Tyr Leu Gly Thr Leu Leu Met Thr Glu Glu Arg Arg Arg Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Ala Ile Tyr Val Trp Cys Arg Arg Thr Asp Glu Leu Val Asp Gly Pro
                165                 170                 175
Asn Ala Ser His Ile Thr Pro Gln Ala Leu Asp Arg Trp Glu Arg Arg
            180                 185                 190
Leu Glu Asp Leu Phe Ala Gly Arg Pro Tyr Asp Met Leu Asp Ala Ala
        195                 200                 205
Leu Ser Asp Thr Ile Thr Lys Phe Pro Ile Asp Ile Gln Pro Phe Lys
    210                 215                 220
Asp Met Ile Asp Gly Met Arg Thr Asp Leu Lys Lys Ala Arg Tyr Lys
225                 230                 235                 240
Asn Phe Asp Glu Leu Tyr Met Tyr Cys Tyr Tyr Val Ala Gly Thr Val
                245                 250                  255
Gly Leu Met Ser Val Pro Val Met Gly Ile Ala Pro Glu Ser Lys Ala
            260                 265                 270
Thr Ala Glu Ser Val Tyr Gly Ala Ala Leu Ala Leu Gly Leu Ala Asn
        275                 280                 285
Gln Leu Thr Asn Ile Leu Arg Asp Val Gly Glu Asp Ala Arg Arg Gly
    290                 295                 300
Arg Ile Tyr Leu Pro Gln Asp Glu Leu Ala Glu Ala Gly Leu Ser Asp
305                 310                 315                 320
Glu Asp Ile Val Lys Gly Val Val Thr Asp Lys Trp Arg Lys Phe Met
                325                 330                 335
Lys Arg Gln Ile Lys Arg Ala Arg Met Phe Phe Glu Glu Ala Glu Arg
            340                 345                 350
Gly Val Thr Glu Leu Arg Lys Glu Ser Arg Trp Pro Val Trp Ala Ser
        355                 360                 365
Leu Leu Leu Tyr Arg Gln Ile Leu Asp Glu Ile Glu Ala Asn Asp Tyr
    370                 375                 380
Asn Asn Phe Thr Lys Arg Ala Tyr Val Gly Lys Ala Lys Lys Val Leu
385                 390                 395                 400
Ala Leu Pro Val Ala Tyr Gly Lys Ser Leu Leu Leu Pro Ser Ser Leu
                405                 410                 415
Arg Asn Asn Gln Thr
            420
<210>2
<211>2935
<212>DNA
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>2
atggccacca ccgtcacgct gctgctcggg gcagcctcgt cccccggtga tggcgccgcg      60
cgggacggcg tccagtgctc ccgcatgttg cctaggagga ggcagcagag gccgcggtgg     120
gtgctctgct cgctcaagta cggctgcctc ggcgtcggcg agccggggga ggcgggaacc     180
cggagcgcgg cgtcgccggt ctactccagc ctcaccgtca gccccggcgg cgaggcggcc     240
gtcgccgtcg tctcctcgga gcagaaggtg tacgacgtgg tgctgaagca ggcggcattg     300
ctcaagcgcc agctccggcc acagcaggcg gcgccgcccg ccgtagccag ggagctggac     360
gcgccgcgcg gtgggctcgg gaaggcctac gcccgctgcg gcgagatctg cgaggagtac     420
gccaagacct tctacctcgg tacggtgctc cttcatgcat gcttactctg tttttcttga     480
gccatggtgg cagtctgccg catgccaagc ccatgttctg atgatcatgg agctcacccg     540
ttcatgtctg gtcgtgcatg gcagggacct tgctgatgac agaggagcgg cgacgcgcca     600
tatgggccat ctacggtaat caatctgaaa cctcaccatg cctggcttgg accctccatt     660
gttgctcccc tgctgtagta tcagtatgtg tcacacagtg tcagttagtt tcagtaatgt     720
gactgaaaat ggagctagtt tcattttcac ttcagatcgt cagaaagggc atgcccacat     780
tttgcatcag ttaaattgct acatattgta tttaacagca acttgcaaga atctttgaca     840
ctccccaaga ttattggcca cttttgtttt cagttaatgg cgtaaactag ttctggatgc     900
gaataatggc aaatagaaac atcgtggaac ttgcatgcta tacatttata tagatactcc     960
tatatagtat agtcagtgaa gaataaaggc ctcacataac acttttttta tatgccatta    1020
tgtgtggaag aatcaaatta ggctttttgt tggctaaatg gcctcaatag gatcaaagta    1080
catgagaaaa gtttgcaaga acatattcct cactacttaa ggaatgtgaa cctgaggttc    1140
tgtcagttct aaatgagata tactctaggc atcgaacact ttcagaatct gatgtatagc    1200
atcatttgtg cagtgtggtg caggaggaca gacgagctgg tggacggtcc caacgcgtcg    1260
cacatcacgc cgcaggcgct ggaccggtgg gagaggaggc tggaggacct cttcgccggg    1320
cgcccctacg acatgctcga cgccgcgctc tccgacacca tcaccaagtt ccccatagat    1380
attcaggtac cagctcgccg gtgcataatt gttcagtcca cattgtatga ttctggtaga    1440
agaacagagt ggtggtggat attccctgtc agcatcagat tctccctaga cctcacaatc    1500
tcagtgcaag atgaccggaa agtccgtgat tggtcaaaat tgtttcgttt gtcggccttt    1560
tattagtctc tgatgctgtt attgagttgt atgaactttt cacacattgt agtgggggct    1620
tatccagttg actagacgta tagtgggaat catctggtca aagatatgtt taatcaaagt    1680
ggggaaatta tagggagaat tttcaataag aattagtcct gaacatgcca agaacaagca    1740
ggaacttgga gatgatgtag aaggagaaat gaaaacatga attattgggc tgtattcctg    1800
gtcactgttt tttaccggag attgtgcttt tcggtctaat ttctcctaca aaccgcgtta    1860
ctgtgtattt cttttcttaa taaaatcggc agagctactg ccttgcattg tcaataagaa    1920
aaagttcatg ggttgttctt agcactacta cttatgaact atattattga tattctaaaa    1980
tgaccaatta cttttacata tgccagccct tcaaggacat gatcgacggg atgcggacgg    2040
acctcaagaa ggcaagatac aagaacttcg atgagctcta catgtactgc tactacgtcg    2100
caggcacggt ggggctgatg agcgtcccgg tgatgggcat tgcgcccgag tccaaggcga    2160
cggctgagag cgtctacggc gccgctctgg ctctcgggtt ggcgaaccag ctcaccaaca  2220
tactcaggga tgtcggagaa gagtaagcca ctcactcact accaatacag tgcaatgatt  2280
tttccttgta caatcatgat atggacattt tgagatagca ctatcctgaa tgttctggtg  2340
tttcgactaa ttttccagtg caagaagagg aaggatatat ttgccgcaag acgagctcgc  2400
ggaggcaggg ctctccgatg aagacatcgt caaaggagtc gtcactgaca agtggaggaa  2460
attcatgaag aggcagatca agagggcaag gatgttcttc gaggaggcag agcgaggggt  2520
gaccgagctc aggaaggaga gccggtggcc ggtaagtgcc ctaaagccac aacttgaatg  2580
tgaaacaaaa ctacatatag atctcatcat tgttaattat cagtagcaaa aatgaagcta  2640
tgtctagttt ataccccccc ccctcccact tggtataatc attgaaaaaa aatttagggg  2700
ttcaaatgga agaagtatca gtagagtgat aatatggttt tcaatttcat tgcaattgca  2760
ggtttgggcc tctctgttgt tgtaccggca gatcctcgat gagatcgaag cgaacgacta  2820
caacaacttc accaagaggg cctatgttgg aaaggcgaag aaagtgttgg cgctccctgt  2880
cgcatacggg aaatcgctgc tcttaccgtc ttcactgaga aataaccaga cctag       2935
<210>3
<211>421
<212>PRT
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>3
Met Ala Thr Thr Val Thr Leu Leu Leu Gly Ala Ala Ser Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Gly Ala Ala Arg Asp Gly Val Gln Cys Ser Arg Met Leu Pro Arg
            20                  25                  30
Arg Arg Gln Gln Arg Pro Arg Trp Val Leu Cys Ser Leu Lys Tyr Gly
        35                  40                  45
Cys Leu Gly Val Gly Glu Pro Gly Glu Ala Gly Thr Arg Ser Ala Ala
    50                  55                  60
Ser Pro Val Tyr Ser Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Glu Ala Ala
65                  70                  75                  80
Val Ala Val Val Ser Ser Glu Gln Lys Val Tyr Asp Val Val Leu Lys
                85                  90                  95
Gln Ala Ala Leu Leu Lys Arg Gln Leu Arg Pro Gln Gln Ala Ala Pro
            100                 105                 110
Pro Ala Val Ala Arg Glu Leu Asp Ala Pro Arg Gly Gly Leu Gly Lys
        115                 120                 125
Ala Tyr Ala Arg Cys Gly Glu Ile Cys Glu Glu Tyr Ala Lys Thr Phe
    130                 135                 140
Tyr Leu Gly Thr Leu Leu Met Thr Glu Glu Arg Arg Arg Ala Ile Trp
145                150                 155                 160
Ala Ile Tyr Val Trp Cys Arg Arg Thr Asp Glu Leu Val Asp Gly Pro
                165                 170                 175
Asn Ala Ser His Ile Thr Pro Gln Ala Leu Asp Arg Trp Glu Arg Arg
            180                 185                 190
Leu Glu Asp Leu Phe Ala Gly Arg Pro Tyr Asp Met Leu Asp Ala Ala
        195                 200                 205
Leu Ser Asp Thr Ile Thr Lys Phe Pro Ile Asp Ile Gln Pro Phe Lys
    210                 215                 220
Asp Met Ile Asp Gly Met Arg Thr Asp Leu Lys Lys Ala Arg Tyr Lys
225                 230                 235                 240
Asn Phe Asp Glu Leu Tyr Met Tyr Cys Tyr Tyr Val Ala Gly Thr Val
                245                 250                 255
Gly Leu Met Ser Val Pro Val Met Gly Ile Ala Pro Glu Ser Lys Ala
            260                 265                 270
Thr Ala Glu Ser Val Tyr Gly Ala Ala Leu Ala Leu Gly Leu Ala Asn
        275                 280                 285
Gln Leu Thr Asn Ile Leu Arg Asp Val Gly Glu Asp Ala Arg Arg Gly
    290                 295                 300
Arg Ile Tyr Leu Pro Gln Asp Glu Leu Ala Glu Ala Gly Leu Ser Asp
305                 310                 315                 320
Glu Asp Ile Val Lys Gly Val Val Thr Asp Lys Trp Arg Lys Phe Met
                325                 330                 335
Lys Arg Gln Ile Lys Arg Ala Arg Met Phe Phe Glu Glu Ala Glu Arg
            340                 345                 350
Gly Val Thr Glu Leu Arg Lys Glu Ser Arg Trp Pro Val Trp Ala Ser
        355                 360                 365
Leu Leu Leu Tyr Arg Gln Ile Leu Asp Glu Ile Glu Ala Asn Asp Tyr
    370                 375                 380
Asn Asn Phe Thr Lys Arg Ala Tyr Val Gly Lys Ala Lys Lys Val Leu
385                 390                 395                 400
Ala Leu Pro Val Ala Tyr Gly Lys Ser Leu Leu Leu Pro Ser Ser Leu
                405                 410                 415
Arg Asn Asn Gln Thr
            420
<210>4
<211>2940
<212>DNA
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>4
atggccacca ccgtcacgct gctgctcggg gcagcctcgt cccccggtga tggcgccgcg      60
cgggacggcg tccagtgctc ccgcatgttg cctaggagga ggcagcagag gccgcggtgg     120
gtgctctgct cgctcaagta cggctgcctc ggcgtcggcg agccggggga ggcgggaacc     180
cggagcgcgg cgtcgccggt ctactccagc ctcaccgtca gccccggcgg cgaggcggcc     240
gtcgccgtcg tctcctcgga gcagaaggtg tacgacgtgg tgctgaagca ggcggcattg     300
ctcaagcgcc agctccggcc acagcaggcg gcgccgcccg ccgtagccag ggagctggac     360
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gccaagacct tctacctcgg tacggtgctc cttcatgcat gcttactctg tttttcttga     480
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ttcatgtctg gtcgtgcatg gcagggacct tgctgatgac agaggagcgg cgacgcgcca     600
tatgggccat ctacggtaat caatctgaaa cctcaccatg cctggcttgg accctccatt     660
gttgctcccc tgctgtagta tcagtatgtg tcacacagtg tcagttagtt tcagtaatgt     720
gactgaaaat ggagctagtt tcattttcac ttcagatcgt cagaaagggc atgcccacat     780
tttgcatcag ttaaattgct acatattgta tttaacagca acttgcaaga atctttgaca     840
ctccccaaga ttattggcca cttttgtttt cagttaatgg cgtaaactag ttctggatgc     900
gaataatggc aaatagaaac atcgtggaac ttgcatgcta tacatttata tagatactcc     960
tatatagtat agtcagtgaa gaataaaggc ctcacataac acttttttta tatgccatta    1020
tgtgtggaag aatcaaatta ggctttttgt tggctaaatg gcctcaatag gatcaaagta    1080
catgagaaaa gtttgcaaga acatattcct cactacttaa ggaatgtgaa cctgaggttc    1140
tgtcagttct aaatgagata tactctaggc atcgaacact ttcagaatct gatgtatagc    1200
atcatttgtg cagtgtggtg caggaggaca gacgagctgg tggacggtcc caacgcgtcg    1260
cacatcacgc cgcaggcgct ggaccggtgg gagaggaggc tggaggacct cttcgccggg    1320
cgcccctacg acatgctcga cgccgcgctc tccgacacca tcaccaagtt ccccatagat    1380
attcaggtac cagctcgccg gtgcataatt gttcagtcca cattgtatga ttctggtaga    1440
agaacagagt ggtggtggat attccctgtc agcatcagat tctccctaga cctcacaatc    1500
tcagtgcaag atgaccggaa agtccgtgat tggtcaaaat tgtttcgttt gtcggccttt    1560
tattagtctc tgatgctgtt attgagttgt atgaactttt cacacattgt agtgggggct    1620
tatccagttg actagacgta tagtgggaat catctggtca aagatatgtt taatcaaagt    1680
ggggaaatta tagggagaat tttcaataag aattagtcct gaacatgcca agaacaagca    1740
ggaacttgga gatgatgtag aaggagaaat gaaaacatga attattgggc tgtattcctg    1800
gtcactgttt tttaccggag attgtgcttt tcggtctaat ttctcctaca aaccgcgtta  1860
ctgtgtattt cttttcttaa taaaatcggc agagctactg ccttgcattg tcaataagaa  1920
aaagttcatg ggttgttctt agcactacta cttatgaact atattattga tattctaaaa  1980
tgaccaatta cttttacata tgccagccct tcaaggacat gatcgacggg atgcggacgg  2040
acctcaagaa ggcaagatac aagaacttcg atgagctcta catgtactgc tactacgtcg  2100
caggcacggt ggggctgatg agcgtcccgg tgatgggcat tgcgcccgag tccaaggcga  2160
cggctgagag cgtctacggc gccgctctgg ctctcgggtt ggcgaaccag ctcaccaaca  2220
tactcaggga tgtcggagaa gagtaagcca ctcactcact accaatacag tgcaatgatt  2280
tttccttgta caatcatgat atggacattt tgagatagca ctatcctgaa tgttctggtg  2340
tttcgactaa ttttccagtg caagaagagg aaggatatat ttgccgcaag acgagctcgc  2400
ggaggcaggg ctctccgatg aagacatcgt caaaggagtc gtcactgaca agtggaggaa  2460
attcatgaag aggcagatca agagggcaag gatgttcttc gaggaggcag agcgaggggt  2520
gaccgagctc aggaaggaga gccggtggcc ggtaagtgcc ctaaagccac aacttgaatg  2580
tgaaacaaaa ctacatatag atctcatcat tgttaattat cagtagcaaa aatgaagcta  2640
tgtctagttt ataccccccc cccccccctc ccacttggta taatcattga aaaaaaattt  2700
aggggttcaa atggaagaag tatcagtaga gtgataatat ggttttcaat ttcattgcaa  2760
ttgcaggttt gggcctctct gttgttgtac cggcagatcc tcgatgagat cgaagcgaac  2820
gactacaaca acttcaccaa gagggcctat gttggaaagg cgaagaaagt gttggcgctc  2880
cctgtcgcat acgggaaatc gctgctctta ccgtcttcac tgagaaataa ccagacctag  2940
<210>5
<211>275
<212>PRT
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>5
Gly Thr Leu Leu Met Thr Glu Glu Arg Arg Arg Ala Ile Trp Ala Ile
1               5                   10                  15
Tyr Val Trp Cys Arg Arg Thr Asp Glu Leu Val Asp Gly Pro Asn Ala
            20                  25                  30
Ser His Ile Thr Pro Gln Ala Leu Asp Arg Trp Glu Arg Arg Leu Glu
        35                  40                  45
Asp Leu Phe Ala Gly Arg Pro Tyr Asp Met Leu Asp Ala Ala Leu Ser
    50                  55                  60
Asp Thr Ile Thr Lys Phe Pro Ile Asp Ile Gln Pro Phe Lys Asp Met
65                  70                  75                  80
Ile Asp Gly Met Arg Thr Asp Leu Lys Lys Ala Arg Tyr Lys Asn Phe
                85                  90                  95
Asp Glu Leu Tyr Met Tyr Cys Tyr Tyr Val Ala Gly Thr Val Gly Leu
            100                 105                 110
Met Ser Val Pro Val Met Gly Ile Ala Pro Glu Ser Lys Ala Thr Ala
        115                 120                 125
Glu Ser Val Tyr Gly Ala Ala Leu Ala Leu Gly Leu Ala Asn Gln Leu
    130                 135                 140
Thr Asn Ile Leu Arg Asp Val Gly Glu Asp Ala Arg Arg Gly Arg Ile
145                 150                 155                 160
Tyr Leu Pro Gln Asp Glu Leu Ala Glu Ala Gly Leu Ser Asp Glu Asp
                165                 170                 175
Ile Phe Arg Gly Val Val Thr Asp Lys Trp Arg Lys Phe Met Lys Arg
            180                 185                 190
Gln Ile Lys Arg Ala Arg Met Phe Phe Glu Glu Ala Glu Arg Gly Val
        195                 200                 205
Thr Glu Leu Arg Lys Glu Ser Arg Trp Pro Val Trp Ala Ser Leu Leu
    210                 215                 220
Leu Tyr Arg Gln Ile Leu Asp Glu Ile Glu Ala Asn Asp Tyr Asn Asn
225                 230                 235                 240
Phe Thr Arg Arg Ala Tyr Val Gly Lys Ala Lys Lys Val Leu Ala Leu
                245                 250                 255
Pro Val Ala Tyr Gly Arg Ser Leu Leu Leu Pro Tyr Ser Leu Arg Asn
            260                 265                 270
Asn Gln Thr
        275
<210>6
<211>2844
<212>DNA
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>6
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tagtgtcagt atgtgtcaca cagtgtcagt tagtttcagt aatgtgactg aattcatttt    300
cacttcagat cgtcagaaag ggcatgccca cattttgcat cagttaaatt gctgcatatt     360
taacagcaac ttgcaagaat attttgaaac tccccaagaa aatcggccac ttttcagtta     420
atggtgtgaa ctagttctgg atgcgaatca tggcaaatag aaacattgct gaacttgcat     480
gccatgtata catagacaca gttggtgaag aataaaggcc tcatataaca ctttttttat     540
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ctcaaattac ttaaggaatg tgaatctgag ggttgtgtca gttctaaatg agatatactc     780
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gaaactggga atcatctggt caaagatatg tttaatcaaa ctagggaaat tatagaaaag    1320
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cggagggagt atattcaata tttgttattg tggatacaat ttttttatta taaatttggt    1800
caaaagtttg actttcaaaa aaaaatttat aaccactaca ttaccgaacg gaaccactgc    1860
attatggaac ggagggagta tattctaaaa tgacagactc ttcatactta tgccagccct    1920
tcaaggacat gatcgacggg atgcggacag acctcaagaa ggcaagatac aagaacttcg    1980
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ctctcgggct ggcgaaccag ctcaccaaca tactcaggga tgtcggagaa gagtaagcca    2160
cccactgatt accactaaaa tgcaatggtt ttccctttct ctgaagaaca atcatgatat    2220
gagtattaaa atagcactgt ctgaaatttt gtgtgcatgc aaaatttctt ttccagtgcc    2280
cgaagaggaa ggatatatct accacaagac gagctcgcgg aggcggggct ctccgacgaa    2340
gacatcttca gaggagtcgt caccgacaag tggaggaaat tcatgaagag gcagatcaag    2400
agggcgagga tgttcttcga ggaggcggag cgaggggtaa ccgagcttag gaaggagagc    2460
cggtggccgg taagtgccct aataccacaa tttggaagct aaaaagaaaa acataaagtt    2520
ctcatcggtg ttaattatca gtaacagcga aggagctatg tgtagttgaa gaccctcacc  2580
ttggtataat cattgaagaa aaaatattag gggctcaact agaagaaagt atcacttaag  2640
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aaggccaaga aggtgctggc gctccctgtc gcgtacggga gatcgctgct cttaccgtat  2820
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<210>7
<211>431
<212>PRT
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>7
Met Ala Thr Thr Val Thr Leu Leu Leu Gly Ala Ala Ser Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Pro Gly Ala Gly Leu Ala Ala Gly Asp Gly Thr Ala Arg Asp Gly Val
            20                  25                  30
Gln Cys Ser Arg Leu Leu Pro Arg Arg Arg Gln Gln Arg Pro Arg Trp
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Val Leu Cys Ser Leu Lys Tyr Gly Cys Leu Gly Val Gly Glu Pro Gly
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Glu Ala Gly Thr Arg Ser Ala Ala Ser Pro Val Tyr Ser Ser Leu Thr
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Lys Val Tyr Asp Thr Val Val Lys Gln Ala Ala Leu Leu Lys Arg Gln
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        115                 120                 125
Leu Asp Ala Pro Arg Gly Gly Leu Gly Glu Ala Tyr Ala Arg Cys Gly
    130                 135                 140
Glu Ile Cys Glu Glu Tyr Ala Lys Thr Phe Tyr Leu Gly Thr Leu Leu
145                 150                 155                 160
Met Thr Glu Glu Arg Arg Arg Ala Ile Trp Ala Ile Tyr Val Trp Cys
                165                 170                 175
Arg Arg Thr Asp Glu Leu Val Asp Gly Pro Asn Ala Ser His Ile Thr
            180                 185                 190
Pro Gln Ala Leu Asp Arg Trp Glu Arg Arg Leu Glu Asp Leu Phe Ala
        195                 200                 205
Gly Arg Pro Tyr Asp Met Leu Asp Ala Ala Leu Ser Asp Thr Ile Thr
    210                 215                 220
Lys Phe Pro Ile Asp Ile Gln Pro Phe Lys Asp Met Ile Asp Gly Met
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Arg Thr Asp Leu Lys Lys Ala Arg Tyr Lys Asn Phe Asp Glu Leu Tyr
                245                 250                 255
Met Tyr Cys Tyr Tyr Val Ala Gly Thr Val Gly Leu Met Ser Val Pro
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Gly Ala Ala Leu Ala Leu Gly Leu Ala Asn Gln Leu Thr Asn Ile Leu
    290                 295                 300
Arg Asp Val Gly Glu Asp Ala Arg Arg Gly Arg Ile Tyr Leu Pro Gln
305                 310                 315                 320
Asp Glu Leu Ala Glu Ala Gly Leu Ser Asp Glu Asp Ile Phe Lys Gly
                325                 330                 335
Val Val Thr Asp Lys Trp Arg Lys Phe Met Lys Arg Gln Ile Lys Arg
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Ala Arg Met Phe Phe Glu Glu Ala Glu Arg Gly Val Thr Glu Leu Arg
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Lys Glu Ser Arg Trp Pro Val Trp Ala Ser Leu Leu Leu Tyr Arg Gln
    370                 375                 380
Ile Leu Asp Glu Ile Glu Ala Asn Asp Tyr Asn Asn Phe Thr Lys Arg
385                 390                 395                 400
Ala Tyr Val Gly Lys Ala Lys Lys Val Leu Ala Leu Pro Val Ala Tyr
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<210>8
<211>3440
<212>DNA
<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.)
<400>8
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ctcgccgccg gtgatggcac cgcgcgggac ggcgtccagt gctcccgcct gttgcctagg     120
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ggcgagccgg gggaggcggg aacccggagc gcggcgtcgc cggtgtactc cagcctgaca     240
gtcagcccgg gcggggacgc cgccgtcgcc gtcgtctcgt cggagcagaa ggtgtacgac     300
accgtggtga agcaggcggc attgctcaag cgccagctcc gcccgcagca gcagcaggcg     360
gcgccgcccg ccgtcgccag ggagctggac gcgccgcgcg gcgggctcgg ggaggcctac     420
gcccgctgcg gcgagatctg cgaggagtac gccaagacct tctacctcgg tacggtgctc     480
ctccatgcat gcttactctg tttttctatc ttcagccatg gtggcagtct gctgcatgcc     540
aagccgatgt tctggtgatc atggagctca ctcgttcatg tctggtcgtg catggcaggg     600
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tcacacagtg tgtcagtgtc agttagtttc agtaatgtga ctgaaaatgg agctagtttc     780
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gggaagtcta aggctctgtt tggtttatcg tttccatttc aaatacccct gtataactta    1860
cagacctccg cccgtcgttt tgctttccgg ccggaaatag ctcttggtca gtaagttaca    1920
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tcatacctga aatagcatta tgagaatgtt cttggttctg gttagtacta ttacttgaaa    2040
gttgaaacta tattctttat gttctaaagt gaccaactct tcatacatgt atcgttagat    2100
tcatcataag atgttgtttc atactccctc cgtctcaaaa ttcttgtctt agatttgtct    2160
agatacggat gtatttaaca ctaaaacata actagattca tcaaaattct tgtcttagat    2220
ttgtctagat acggatgtat ttaacactaa aacataactg gatacatccg tatttagaca    2280
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gccagccctt caaggacatg atcgacggga tgcggacaga cctcaagaag gcaagataca    2520
agaacttcga cgagctctac atgtactgct actacgttgc aggtacggtg gggctgatga    2580
gcgtcccggt gatgggcatt gcgcccgagt ccaaggcgac ggccgagagc gtctacggcg    2640
ccgctctggc tctcgggctc gcgaaccagc tcaccaacat actcagggat gttggagaag    2700
agtaagccac ccactgatta ccactaaaat gcaacggttt tcccttcctc taaagaacag    2760
gcatgatatg agtattaaaa tagcactgtc tgaatttttg tgtgtttgca atatttcttt    2820
tccagtgcgc gaagaggaag gatatatcta ccacaagacg agctcgcgga ggcggggctc    2880
tccgacgaag acatcttcaa aggagtcgtc accgacaagt ggaggaaatt catgaagagg    2940
cagatcaaga gggcgaggat gttcttcgag gaggcggagc gaggggtgac cgagcttagg    3000
aaggagagcc ggtggccggt aagtgaccta acaccacaac ttcaaagcca aacagaacta    3060
catacagagt tctcatcggc gttaattatc agtaacaacg aaaggagcta tgtgtagttc    3120
aagaccagca aaaaagaaac ctatgtgtat ttcaaggggg gccgctgccc ctcaccttgg    3180
tataatcatt gaagaataaa tattaggggc ttaaatagaa gaaagtatca cttgagtgat    3240
aatatggttt tgcattgcaa ttgcaggttt gggcctctct gttgctatac cggcagatcc    3300
tcgacgagat cgaagcgaac gactacaaca acttcaccaa gagggcctat gttgggaagg    3360
cgaagaaggt gctggcgctc cctgtcgcgt acgggagatc gctgctctta ccgtattcac    3420
tgagaaataa ccagacctag                                                3440
<210>9
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<400>9
gccacaactt gaatgtgaaa c                                                21
<210>10
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<400>10
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<210>11
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<400>11
gccacccact gattaccact a                                                21
<210>12
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<400>12
ccaaggtgag ggtcttcaac                                                  20

Claims (10)

1、一种检测小麦黄色素含量性状的标记引物A，是由序列表中序列9的核苷酸序列和序列10的核苷酸序列组成的一对引物。
2、一种检测小麦黄色素含量性状的标记引物B，是由序列表中序列11的核苷酸序列和序列12的核苷酸序列组成的一对引物。
3、一种检测小麦黄色素含量性状的方法，是以待测小麦基因组DNA为模板，用权利要求1所述的标记引物A进行PCR扩增，检测PCR扩增产物中是否有156bp的条带或151bp的条带；如PCR扩增产物中无156bp的条带和151bp的条带，再以所述待测小麦基因组DNA为模板，用权利要求2所述的标记引物B进行PCR扩增，检测扩增产物中是否有428bp的条带。
4、如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述方法中，如所述标记引物A的PCR扩增产物中有156bp的条带或151bp的条带，所述待测小麦为候选低黄色素含量小麦；如所述标记引物Λ的PCR扩增产物中无156bp的条带和151bp的条带，而所述标记引物B的PCR扩增产物中有428bp的条带，所述待测小麦为候选高黄色素含量小麦。
5、如权利要求3或4所述的方法，其特征在于：用所述标记引物A进行PCR扩增得到的扩增产物通过6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测；用所述标记引物B进行PCR扩增得到的扩增产物通过1.5％琼脂糖凝胶电泳进行检测。
6、如权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：所述小麦为普通小麦。
7、一种蛋白，是如下1)或2)或3)或4)或5)的蛋白质：
(1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(3)由序列表中序列5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(4)由序列表中序列7所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)将序列1、3、5或7所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与黄色素含量性状相关的由序列1、3、5或7衍生的蛋白质。
8、权利要求7所述蛋白的编码基因。
9、如权利要求8所述的基因，其特征在于：所述蛋白编码基因为如下1)或2)或3)或4)或5)或6)的DNA分子：
1)其核苷酸序列是序列表中序列2所示的DNA分子；
2)其核苷酸序列是序列表中序列4所示的DNA分子；
3)其核苷酸序列是序列表中序列6所示的DNA分子；
4)其核苷酸序列是序列表中序列8所示的DNA分子；
5)在严格条件下与1)、2)、3)或4)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；
6)与1)、2)、3)或4)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。
10、权利要求3-5中任一所述方法在培育低黄色素含量小麦中的应用。
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