CN101277672A - 用于减少皮肤损伤的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

已经确定刻缺蛋白信号转导途径是用于预防和/或减少短期和长期UVB引发的皮肤损伤的筛选和治疗方法的靶标，例如，预防或减少UVB引发的皱纹。因此本发明的特征在于，用于预防或减少UVB引发的皮肤损伤的筛选和治疗方法，以及相关组合物，例如化妆品组合物。

Description

用于减少皮肤损伤的方法和组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2005年7月29日提交的U.S.Application Serial No.60/703,982的优先权，将其以完整形式通过参考并入本文。
联邦政府资助的研究或开发
依照National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases授予的Grant No.AR39190，美国政府可对本发明享有某些特权。
背景
刻缺蛋白(Notch)受体是富含半胱氨酸的跨膜多肽，认为该多肽通过发挥“守门员”的作用，判读细胞接收到的环境信号，由此介导细胞命运的决定。依赖于细胞类型和环境背景，刻缺蛋白的激活可促进增殖、分化，或者甚至是死亡。刻缺蛋白细胞结合配体(Delta和/或Jagged家族成员)的激活致使刻缺蛋白胞内结构域(NICD)由蛋白酶切割并且易位至细胞核，在细胞核中其通过与刻缺蛋白途径中的DNA结合组分，即RBP-Jκ的相互作用募集于(recruit to)靶基因。
概述
本发明部分基于以下发现，刻缺蛋白信号转导途径对于皮肤的保持和/或外观(appearance)是重要的。在一个实施方式中，本发明的发明人们发现刻缺蛋白信号转导途径在减少、治疗和/或预防皮肤损伤(例如紫外线B(UVB)引发的皮肤损伤和皱纹)中是重要的。因此，本发明的发明人们确定了刻缺蛋白信号转导途径是用于预防和/或减少急性和/或慢性光损伤的筛选和治疗方法的靶标，所述光损伤例如UVB引发的皮肤损伤(例如，预防和/或减少皱纹)。因此本发明的特征在于，用于减少、治疗和/或预防UVB引发的皮肤损伤例如皱纹的筛选和治疗方法，和相关组合物，例如，化妆品组合物。
因此，在一个方面，本发明的特征在于筛选试剂(agent)的方法，所述试剂预防和/或减少UVB引发的皮肤损伤，例如皱纹。所述方法包括鉴定增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中组分的表达、活性或水平的试剂，所述组分例如刻缺蛋白(例如，刻缺蛋白1)、Delta蛋白、Jagged蛋白或RBP-Jκ，通常是刻缺蛋白1。
所述方法还可包括，将刻缺蛋白信号转导途径中组分的表达、活性或水平的增加与所述试剂预防或减少皱纹的能力关联，例如，将鉴定的试剂确定为皱纹保护剂或皱纹减少剂(例如，提供与鉴定的试剂或其用途相关的印刷材料或计算机可读介质，例如信息化、市场性、指导性印刷材料或计算机可读介质)。关联(associating)的意思是，将增加刻缺蛋白信号转导途径中组分的表达、活性或水平的试验试剂(并且优选增加刻缺蛋白的表达、水平或活性的试验试剂)确定为能够预防、减少或治疗皱纹的试剂。所述关联步骤可包括：例如生成或提供记录，例如印刷品或计算机可读记录，例如实验室记录或数据集或电子邮件；将增加刻缺蛋白信号转导途径中组分的表达、活性或水平的试验试剂(并且优选增加刻缺蛋白的表达、水平或活性的试验试剂)确定为能够预防、减少或治疗皱纹的试剂。所述记录可包括其它信息，例如特定试验试剂鉴定器(identifier)、日期、方法的操作者(operator)，或关于试验试剂的来源、结构、纯化方法或生物活性的信息。可将所述记录或源自记录的信息用于例如将试验试剂确定为用于药物或治疗用途的化合物或候选试剂(例如，先导化合物)。可将鉴定的试剂确定为用于治疗或减少皱纹的试剂或潜力试剂。通过这种方法确定的试剂例如化合物，可用在例如皱纹治疗(或处理开发，例如，化妆品处理)中。
在一个实施方式中，所述方法包括评估(例如，测量)试剂对皮肤的影响，例如评估与皱纹相关的参数，例如皱纹的存在、程度或类型；和从筛选中选择试剂，例如预防或减少皮肤损伤(skin damage)的试剂，例如预防或减少皮肤中皱纹的试剂。优选地，评估试剂对皮肤的影响包括将所述试剂施用(例如，局部地)于组织或受试者，并且比较所述组织或受试者中与皱纹相关的参数，例如皱纹的存在、程度或类型，任选地与参照值比较，所述参照值例如对照或基线值，例如经不同处理的组织或受试者中相同参数的值，例如未施用所述试剂或施用了安慰剂的组织或受试者中相同参数的值。试剂对皮肤的影响可在存在或缺失皮肤损伤源时评估，所述皮肤损伤源例如引发皱纹形成的试剂或处理，例如UVB照射。在某些实施方式中，评估包括将评估所用的值输入数据库或其它记录中，所述值例如皱纹的存在、程度或类型的值。
在一个实施方式中，评估试剂对于预防或减少UVB引发的皱纹的能力。
在另外的实施方式中，受试者是实验动物，例如野生型或转基因实验动物，例如啮齿动物，例如大鼠、小鼠或豚鼠。受试者还可以是人。在进一步的实施方式中，评估步骤包括将所述试剂施用于受试者的皮肤，例如局部施用。
在一个实施方式中，确定增加或诱导刻缺蛋白的表达、活性或水平的试剂。
在另外的实施方式中，确定步骤包括：(a)提供包含外源核酸的细胞、组织或非人动物，所述核酸包含刻缺蛋白信号转导途径中组分的调节区(例如启动子或增强子)，所述调节区与编码报道多肽(例如基于光的，例如比色法或荧光可检测的标记，例如荧光报道多肽，例如GFP、EGFP、BFP、RFP)的核苷酸序列可操作地连接；(b)评估试验试剂增加细胞、组织或非人动物中报道多肽活性的能力；和(c)将使得报道多肽活性增加的试验试剂(例如相对于参考对照)选择作为增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中组分的试剂。在一个实施方式中，所述细胞或组织是皮肤细胞或组织，例如角质形成细胞或组织，例如皮肤外植体或人工皮肤组织。在另外的实施方式中，非人动物是含有所述核酸的转基因动物，例如转基因啮齿动物，例如小鼠、大鼠或豚鼠。在一个实施方式中，刻缺蛋白信号转导途径中的组分是刻缺蛋白。
在一个实施方式中，所述方法包括两个评估步骤，例如所述方法包括在第一系统中评估试验试剂的第一步，和在第二系统中评估试验试剂的第二步，所述第一系统例如细胞或组织系统，所述第二系统例如第二细胞或组织系统或在非人动物中。在另外的实施方式中，所述方法包括两个在相同类型系统中的评估步骤，例如在非人动物中的第一评估之后，在相同或不同的非人动物中再次评估所述试剂。两次评估的时间间隔可以是任何长度，例如天、星期、月或年。
在另外的实施方式中，评估试剂对UVB引发的皱纹的影响。例如，在UVB照射之前、期间和/或之后评估所述试剂。
增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中的组分(例如刻缺蛋白)的表达、活性或水平的试剂可以是粗制或半纯化的提取物，例如有机的，例如动物或植物提取物，或分离的化合物，例如小分子、蛋白质、脂质或核酸。通常的试剂是天然存在的试剂或提取物，例如植物或真菌提取物。例如，所述试剂可以是下述任何物质：(a)刻缺蛋白信号转导途径中的多肽组分，例如刻缺蛋白多肽或功能性片段或它们的模拟物(mimetic)(例如刻缺蛋白胞内结构域(NICD))；(b)刻缺蛋白信号转导途径中组分的肽或蛋白激动剂，其增加刻缺蛋白信号转导途径的活性，例如增加刻缺蛋白/刻缺蛋白配体复合物的形成或刻缺蛋白胞内结构域(NICD)的核定位；(c)小分子，其例如通过与其基因的启动子区结合，而增加刻缺蛋白信号转导途径中组分(例如刻缺蛋白、Delta、Jagged和RBP-Jκ基因)的表达；(d)抗体，例如其结合至刻缺蛋白途径组分，并且稳定或辅助刻缺蛋白途径组分与结合配偶体的结合，例如刻缺蛋白与Jagged/Delta的结合；(e)化合物，例如有机化合物，例如天然存在或合成的有机化合物，所述化合物增加刻缺蛋白信号转导途径中组分(例如刻缺蛋白、Delta、Jagged和RBP-Jκ)的表达；或(f)编码刻缺蛋白多肽的核苷酸序列，或其功能性片段、类似物、活化等位基因或激活剂。所述核苷酸序列可以是基因组序列或cDNA序列。所述核苷酸序列可包含：刻缺蛋白途径组分的编码区；启动子序列，例如来自刻缺蛋白途径组分基因或来自其它基因的启动子区；增强子序列；非翻译调节序列，例如5’非翻译区(UTR)，例如来自刻缺蛋白或来自其它基因的5’UTR，3’UTR，例如来自刻缺蛋白或来自其它基因的3’UTR；聚腺苷酸化位点；和/或绝缘子序列。在另外的实施方式中，通过增加刻缺蛋白信号转导途径中的内源性组分(例如刻缺蛋白、Delta、Jagged或RBP-Jκ)的表达水平，例如通过增加刻缺蛋白基因的转录或增加刻缺蛋白mRNA稳定性，来增加刻缺蛋白信号转导途径中组分(例如刻缺蛋白、Delta、Jagged或RBP-Jκ)的水平。在一个实施方式中，刻缺蛋白基因的转录如下增加：改变内源性因素刻缺蛋白基因的调节序列，例如在体细胞中，例如通过添加正调节元件(例如增强子或转录激活剂的DNA结合位点)；通过缺失负调节元件(例如转录阻抑物的DNA结合位点)和/或将内源性调节序列或其中的元件用其它基因的内源性调节序列或其中的元件替代，由此允许刻缺蛋白基因的编码区更有效地转录。在另外的实施方式中，所述试剂是粗制或部分纯化的植物提取物。
在一个方面，本发明的特征在于通过对受试者以减少、治疗或预防皮肤损伤的足够量施用增加刻缺蛋白途径活性(Notch pathway activity)、表达或水平的试剂(例如，刻缺蛋白途径激动剂(Notch pathway agonist))，由此减少、治疗和/或预防皮肤损伤(例如UVB引发的皮肤损伤和/或皱纹)的方法。在某些实施方式中，所述试剂增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中的组分，例如刻缺蛋白1。在某些实施方式中，所述方法进一步包括鉴定需要减少、治疗或预防皮肤损伤的受试者。在某些实施方式中，局部施用所述试剂。在某些实施方式中，受试者已经曝露于UVB照射或将会曝露于UVB照射。在某些实施方式中，所述试剂选自PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G(ouabain))、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)。刻缺蛋白途径的其它激动剂也可用于所述方法。
在另一个方面，本发明的特征在于通过向受试者以减少皱纹(例如，由曝露于UVB照射引发的皱纹)的足够量施用增加刻缺蛋白途径活性、水平或表达的试剂，由此降低受试者中一种或多种体征皮肤损伤的方法，所述皮肤损伤为例如一种或多种起皱(皱纹的数目或形态)、发红、发炎、脱皮(desquamaion)和色素沉着。在某些实施方式中，所述试剂增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中的组分，例如刻缺蛋白1。在某些实施方式中，所述试剂选自PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G)、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)。在某些实施方式中，局部施用所述试剂。所述试剂可以在组合物中，例如化妆品组合物。所述组合物可以是无菌的，和/或其可以进一步包含化妆品试剂。
在另外的方面，本发明的特征在于通过向受试者提供组合物以防止皮肤损伤(例如UVB引发的皮肤损伤)的方法，所述组合物包含防止皮肤损伤的足够量的增加刻缺蛋白途径活性、表达或水平的试剂。在某些实施方式中，所述组合物增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中的组分。在某些实施方式中，所述方法进一步包括向受试者提供使用所述组合物防止皮肤损伤(例如UVB引发的皮肤损伤和/或皱纹)的说明。在某些实施方式中，所述说明包含对于在日照之前、期间或之后向皮肤施用所述组合物的指导。所述组合物可包含刻缺蛋白途径激动剂，例如选自以下的试剂：PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G)、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)。所述组合物可包含化妆品试剂。
术语“刻缺蛋白途径”指介导刻缺蛋白信号传导的生物组分。所述途径包含，例如刻缺蛋白多肽本身，刻缺蛋白受体，和由受体激活调制的细胞质组分，包括STAT3和STAT5，激酶，和/或转录因子。术语“刻缺蛋白途径激动剂”指增加刻缺蛋白途径的活性的试剂，例如，增效(potentiate)、诱导或以其它方式增强刻缺蛋白受体多肽的一种或多种生物活性的试剂，所述生物活性为例如本文所述的生物活性。例如，与刻缺蛋白受体多肽相互作用(例如，结合)的激动剂。
在一个实施方式中，刻缺蛋白途径激动剂是刻缺蛋白配体(刻缺蛋白配体或其片段)或与刻缺蛋白配体的序列具有至少85、90、92、94、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，例如Delta或Jagged多肽。
在另外的实施方式中，刻缺蛋白途径激动剂是与刻缺蛋白受体相互作用的试剂。与刻缺蛋白受体相互作用的试剂能够激活所述受体或以其它方式使途径信号传导激动(agonize)。例如，刻缺蛋白途径激动剂是与刻缺蛋白受体相互作用的蛋白质。所述蛋白质可包含激动性(agonistic)的抗刻缺蛋白受体抗体(例如，全长抗体或抗原结合片段)，所述激动性的抗刻缺蛋白受体抗体与刻缺蛋白受体相互作用并且将其激活。所述蛋白质可包含模拟刻缺蛋白配体的抗独特型抗体(例如Delta或Jagged)。
在一个实施方式中，刻缺蛋白途径激动剂是调制细胞质刻缺蛋白途径组分的试剂。调制细胞质刻缺蛋白途径组分的试剂可以例如激活正作用的细胞质途径组分或抑制负作用的细胞质组分。示例性正作用细胞质组分包括刻缺蛋白胞内结构域(NICD)和RBP-Jκ。所述试剂还可以是正作用组分的模拟物，例如刻缺蛋白胞内结构域的组成性激活形式。
在一个实施方式中，刻缺蛋白途径激动剂是编码刻缺蛋白多肽的核酸、正作用的细胞质途径组分(例如，刻缺蛋白胞内结构域(NICD)或RBP-Jκ)、与刻缺蛋白受体相互作用(例如，结合和/或激活刻缺蛋白受体)的蛋白质和/或调制细胞质刻缺蛋白途径组分的蛋白质。
受试者可以是哺乳动物，并且通常是人(例如女性或男性，成年或幼年的人受试者)。
所述方法可进一步包括评估受试者中一种或多种体征的皮肤损伤，例如评估在施用之前、期间或之后受试者中一种或多种体征的皮肤损伤。这些体征的实例如本文中所述。所述方法可进一步包括评估受试者中的刻缺蛋白相关参数，例如与刻缺蛋白多肽、刻缺蛋白受体或刻缺蛋白途径活性的水平相关的参数。术语“参数”指信息，包括定性和定量的描述信息，例如数值、水平、量度等。“刻缺蛋白相关参数”指描述刻缺蛋白途径组分的参数，例如诸如刻缺蛋白多肽、刻缺蛋白受体或其它细胞质组分等组分的存在、缺失、水平、表达、稳定性、亚细胞定位或活性。所述参数还可以描述编码刻缺蛋白途径组分的mRNA。
在另一方面，本发明的特征在于组合物，例如化妆品组合物，其包含增加刻缺蛋白途径活性、表达或水平的试剂(例如刻缺蛋白途径的激动剂)。在某些实施方式中，所述试剂增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中的组分，例如刻缺蛋白1。所述化妆品组合物可进一步包含第二种成分，例如化妆品成分(例如香料(fragrance)、润湿剂(moisturizer)或防晒剂(sunscreen))。在某些实施方式中，增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径组分的试剂选自PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G)、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)。在某些实施方式中，所述试剂是刻缺蛋白信号转导途径中的组分，例如刻缺蛋白配体。这些组合物可以用在治疗和/或预防皮肤损伤(例如UVB引发的皮肤损伤和/或皱纹)的方法中。
在另一方面，本发明的特征在于组合物，例如用于局部应用的组合物，所述组合物包含减少皮肤损伤(例如UVB引发的皮肤损伤和/或皱纹)的足够量的增加刻缺蛋白途径活性、水平或表达的试剂。在某些实施方式中，所述试剂增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中的组分。所述试剂可以是例如PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G)、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)。所述组合物可进一步包含化妆品成分，例如香料或防晒剂。
在另一方面，本发明的特征在于，有效量的增加刻缺蛋白途径活性、水平或表达的试剂在制备药物或化妆品的中的用途，所述药物或化妆品预防、减少和/或治疗皮肤损伤，例如UVB引发的皮肤损伤和/或皱纹。在某些实施方式中，所述试剂增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中的组分。所述试剂可以是例如PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G)、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)。所述药物或化妆品可进一步包含化妆品成分，例如香料或防晒剂。
在另一个方面，本发明的特征在于试剂盒(kit)，其用于减少、治疗或预防受试者的皮肤损伤，例如UVB引发的皮肤损伤和/或皱纹，所述试剂盒包含组合物和使用该组合物防止皮肤损伤的说明，所述组合物包含增加刻缺蛋白途径活性、水平或表达的试剂，例如增加或诱导刻缺蛋白信号转导途径中组分的试剂。所述组合物可进一步包含化妆品成分，例如香料或防晒剂。所述说明可包含对于在日照之前、期间或之后向皮肤施用所述组合物的指导。
在另一方面，本发明的特征在于治疗受试者中与刻缺蛋白相关的病症的方法、鉴定需要治疗基于刻缺蛋白的病症(Notch-based disorder)的受试者和向受试者施用选自PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G)、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)的试剂。在某些实施方式中，基于刻缺蛋白的病症是癌症，例如皮肤癌、肝癌、前列腺癌或子宫颈癌。在某些实施方式中，癌细胞由人乳头瘤病毒感染。
在附图和以下的描述中将对本发明的一种或多种实施方式的细节进行阐述。本发明的其它特性、目标和优点在说明书和权利要求书中将是显而易见的。在此引入全部参考文献，作为参考。
附图描述
图1是描述在UVB处理之后的5天，经UVB照射的小鼠耳朵厚度的图。
图2A是描述在曝露于UVB的小鼠初级角质形成细胞(primarykeratinocyte)中，RBP-luc报道分子的萤光素酶活性的图表。
图2B是描述在曝露于UVB的小鼠初级角质形成细胞中，与GADPH相比，Hes-1的相对mRNA表达的图表。
图2C和2D是描述在曝露于UVB的小鼠皮肤中，与GADPH相比，Hes-1和角蛋白1的相对mRNA表达的图表。
图2E是描述曝露于UVB的小鼠初级角质形成细胞中TUNEL-阳性核(表示凋亡)的百分比的图表，所述细胞感染有表达激活的刻缺蛋白或GFP对照的腺病毒。
图2F是描述在UVB照射之后，每20mm2的刻缺蛋白野生型(Notch wt)和刻缺蛋白敲除型(Notch knock out)小鼠皮肤中的TUNEL-阳性角质形成细胞数目的图表。
图3A是描述在用4-硝基喹啉1-氧化物(4-NQO)处理之后，小鼠初级角质形成细胞中TUNEL-阳性核(表示凋亡)的百分比的图表，所述细胞感染有表达刻缺蛋白信号传导抑制剂MAM51(MSCV-DNMAML1)或GFP对照(MSCV-GFP)的小鼠干细胞病毒(MSCV)。
图3B是描述在UVB照射之后，小鼠初级角质形成细胞中TUNEL-阳性核(表示凋亡)的百分比的图表，所述细胞感染有表达刻缺蛋白信号传导抑制剂MAM51(MSCV-DNMAML1)或GFP对照(MSCV-GFP)的小鼠干细胞病毒(MSCV)。
详述
本发明人已经鉴定了刻缺蛋白信号转导途径是用于治疗、预防和/或减少皮肤损伤(例如UVB引发的皮肤损伤，例如皱纹)的筛选和治疗方法以及组合物(例如化妆品组合物)的靶标。本发明的特征在于具有刻缺蛋白诱导物作为活性成分的组合物。
皮肤损伤
损伤的皮肤的特征通常在于发炎、表皮增生(epidermal hyperplasia)、皮弹性组织变性(dermal elastosis)和基质蛋白降解、和存在小静脉周围淋巴组织细胞皮浸润(presence of perivenular lymphohistiocytic dermal infiltrate)中的一种或多种。本文描述的结果揭示刻缺蛋白防止皮肤损伤，例如由UVB照射引起的皮肤损伤。
将组合物的有效量定义为在对受试者施用时，所述组合物的量预防或减少受试者中一种或多种体征的皮肤损伤，例如发炎、表皮增生、皮弹性组织变性和基质蛋白降解、小静脉周淋巴组织细胞皮浸润和皱纹(例如细纹(finewrinkle))形成。向受试者施用的有效量通常基于多种因素，包括年龄、性别、体表面积、重量和皮肤状况。身体体表面积可由患者的高度和重量大致确定。参见，例如Scientific Tables，Geiry Pharmaceuticals，Ardley，New York，1970，537。如本领域技术人员所承认的，有效剂量将依赖于施用的途径、赋形剂的使用和共同使用的可能性以及其它处理例如其它减少皱纹的化合物的使用而变化。可以将实验动物用于测定组合物的有效量的方法中。
如本文所述，“预防或治疗皮肤损伤”意指为了减少、改进、减轻、改变、治疗(remedy)、改善(ameliorate)或影响皮肤损伤的外部特性(appearance)，而向具有皮肤损伤(例如皱纹)或具有皮肤损伤倾向或已经暴露于可能引起皮肤损伤的物质(例如UV照射，例如UVB照射)的受试者应用或施用治疗剂。所述治疗剂可以由受试者本人施用或由其他人(例如保健提供者或化妆品的提供者)向受试者施用。在本文所述方法的优选实施方式中，受试者的皮肤损伤被减少至少5％，通常是至少10％，例如至少20％、25％或更多。
在受试者中，所述方法和组合物可以预防性地使用，或者可将它们用以减少、治疗和/或预防进一步的皮肤损伤(例如皱纹)或减少皮肤损伤的外部特性。所述组合物也可用于制造预防、减少和/或治疗皮肤损伤(例如皱纹)的药物或化妆品。
皱纹
皱纹通常是皮肤的自然老化过程和曝露于太阳紫外线的结果。皱纹是一种皮肤表面的外形改变，而在组织学水平没有特定的结构变化。通常，如Kligman et al.(1985)Br.J.Derm.113：37-42中所述，对皱纹进行分类，在此将其引入作为参考。Kligman将皱纹分为三类：线状皱纹(linear wrinkle)、沟状皱纹(glyphic wrinkle)和波纹状皱纹(crinkle)。线状皱纹是直的，通常存在于面部皮肤，由自然老化或曝露于紫外光引起。沟状皱纹的形状为表观三角形或矩形(apparent triangles or rectangles)的皱纹，存在于曝露于日光的面部、手部和颈部，并且因曝露于紫外光或皮肤日射病(dermatoheliosis)而加剧。波纹状皱纹是在松弛皮肤上的细而弯曲的皱纹，存在于皮肤上的任何位置，但是通常在手背上和眼睑周围。
线状皱纹可以进一步分为子类(a)规则皱纹(regular wrinkle)和(b)细纹。规则皱纹是长、深、清晰的皱纹，并且也称为鱼尾纹(crow’s feet)。细纹是细而浅的。规则皱纹的宽度至少为约155微米(0-32Hz)，通常为约160-250微米。细纹的宽度少于约154微米，通常为约40-154微米(32-126Hz)，如计算所得，例如用二维傅立叶变换将三维形状数据变换为频域的数据，以由此获得功率谱来进行所述计算(使用，例如Shiseido Wrinkle Analyzer 3D Pro系统，基本上如Takasu et al.(1996)J.Soc.Cosmet.Chem.Japan 29：394-405；和公开于1995年5月2日的Japanese Published Patent Application No.07-113623中所述)。
筛选方法
刻缺蛋白信号转导途径，包括刻缺蛋白、Delta、Jagged和RBP-Jκ/CBF-1，已经充分表征(参见，例如Artavanis-Tsakonas et al.(1999)Science 284：770-776和Okuyama et al.(2004)J.Investig.Dermatol.Symp.Proc.9：248-252)。已将所述途径中的组分克隆，并且本领域的普通技术人员能够容易地获得它们的蛋白质和基因序列。例如，人刻缺蛋白cDNA和基因的克隆在Ellison et al.(1991)Cell 66：649-61；GenBank Accession No.NM_017617中描述。刻缺蛋白途径活性的报道构建体在例如Jarriault et al.(1995)Nature 377：355-8；Maier andGessler(2000)Biochern.Biophys.Res.Commun.225：652-60；Rangarajan et al.(2001)EMBO J.20：3427-36；Itoh et al.(2004)EMBO J.23：541-551；和Okuyamaet al.(2004)Developmental Cell 6：551-62中描述。刻缺蛋白控制的启动子通常含有至少一个用于RBP-Jκ/CBF-1结合的保守基序，通常是GGCGCC(SEQ IDNO：1)GTGGGAA(SEQ ID NO：2)和/或CAGC，或它们的变体。
增加刻缺蛋白途径活性的化合物是任何化合物，例如小分子、蛋白质、肽或抗体，其增加缺刻蛋白控制的启动子的表达。刻缺蛋白控制的启动子是由刻缺蛋白胞内结构域(NICD)诱导的启动子。示例性刻缺蛋白控制的启动子包括Hes-1、Hey-2(Herp2)、胱天蛋白酶3和p21的启动子。刻缺蛋白控制的启动子表达的增加可通过任何方法完成，所述方法包括增加刻缺蛋白途径中正调节物的表达、水平或活性，例如在刻缺蛋白的上游或下游；和减少刻缺蛋白途径中负调节物的表达、水平或活性，例如在刻缺蛋白的上游或下游。
存在许多评估试剂是否将具体mRNA或蛋白质的表达、水平或活性改变的方法。在一个实施方式中，通过例如报道分子(例如萤光素酶、LacZ或GFP)转录测定法来评估试验试剂调制(例如，增加或减少)(例如，永久地或暂时地)来自刻缺蛋白控制的启动子的表达的能力。例如，可将细胞或转基因动物与试验试剂接触，所述细胞或转基因动物的基因组包含与刻缺蛋白控制的启动子可操作地连接的报道基因，其后试验试剂增加或减少报道基因活性的能力可指示所述试剂调制刻缺蛋白的能力。在另外的实施方式中，在转基因动物中评估试验试剂调制刻缺蛋白表达、水平或活性的能力。试验试剂对刻缺蛋白表达、水平或活性的影响可针对细胞、细胞溶解物或受试者评估，通常是非人实验哺乳动物，例如，啮齿动物(例如，大鼠、小鼠、兔)或它们的外植体(例如，皮肤)。评估刻缺蛋白mRNA表达的许多方法是本领域公知的，例如Northern分析、核糖核酸酶保护测定法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)或RNA原位杂交(参见，例如Sambrook et al.Molecular Cloning：A Laboratory Manual(3rd ed.2001))。监测刻缺蛋白的水平可以通过例如Western分析、免疫测定法或原位杂交。测定刻缺蛋白活性(例如改变的启动子结合和/或转录活性)可以通过例如电泳迁移率变动分析、DNA足迹法或报道基因测定法。通常而言，评估试验试剂对刻缺蛋白表达、水平或活性的影响在转基因细胞或非人动物中，或在由其衍生的外植体或细胞中进行。小分子筛选的常规方法在例如Schrieber(2003)Chem.& Eng.News 81：51-61；和Flaumenhaft and Sim(2003)Chem.Biol.10：481-6中讨论。
试剂
在本文所述的筛选方法中待测试的试剂包括有机来源的粗制或纯化的提取物，例如动物或植物提取物，以及部分或完全纯化的或合成的试剂，例如小分子、多肽、脂质和/或核酸，和它们的文库(library)。鉴定为刻缺蛋白诱导物的试剂可以在本文所述的与皮肤损伤相关的方法和组合物中测试和/或使用。
本文鉴定了诱导刻缺蛋白的几种试剂，包括PDGF受体激酶抑制剂(例如，AG-370或AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉))、K+和H+离子载体(例如，尼日利亚菌素·钠)、肌动蛋白聚合作用的抑制剂(例如，松胞菌素D)、钠泵(Na+/K+ ATP酶)的抑制剂(例如，毒毛花苷G)、线粒体氧化磷酸化的抑制剂(例如，FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙))和c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂(例如，SP600125)。这些试剂和结构或功能上相似的试剂可以在刻缺蛋白相关的病症治疗中测试和/或使用，所述病症例如皮肤损伤、皱纹和癌症，例如皮肤癌、肝癌、子宫颈癌和前列腺癌，和由人乳头瘤病毒引起的癌症(参见，例如Talora et al.(2002)Genes Dev.16：2252-2263；Nicolas et al.(2003)NatureGenet.33：416-421；Qi et al.(2003)Cancer Res.63：8323-9)。其它刻缺蛋白诱导的试剂在Liu et al.(2003)Mol.Cell.Biol.23：14-25和US 2006/0128619中描述。此外，某些病毒编码的蛋白质能够调制刻缺蛋白途径的活性(参见，例如Hayward(2004)Semin.Cancer Biol.14：387-396和Hayward et al.(2006)SciSTKE 2006：re4)。可将刻缺蛋白途径的病毒激活剂直接施用于受试者或作为编码病毒激活剂的核酸施用。
在一个方面，将刻缺蛋白途径激动剂用以减少、治疗和/或预防，或改善皮肤损伤。示例性的刻缺蛋白途径激动剂包括刻缺蛋白多肽、刻缺蛋白胞内结构域、刻缺蛋白配体，例如Delta/Jagged、激活或激动刻缺蛋白受体的试剂和调制其它刻缺蛋白途径组分以激活刻缺蛋白途径信号传导的试剂。示例性的激动剂以高亲和力结合至刻缺蛋白受体，例如以低于约107M-1、约108M-1或约109M-1至1010M-1或更强的亲和力结合。
在一个实施方式中，刻缺蛋白途径激动剂是与刻缺蛋白受体相互作用的试剂，但并非刻缺蛋白配体。例如，所述试剂可以是免疫球蛋白，例如全长抗体或抗体片段，其与刻缺蛋白受体相互作用并且激活刻缺蛋白途径信号传导活性，例如通过活化所述受体来激活。所述抗体可以是设计为模仿刻缺蛋白配体的结合的抗独特型抗体。
在一个实施方式中，刻缺蛋白途径激动剂是稳定刻缺蛋白/配体相互作用的试剂，例如，通过与Delta/Jagged和刻缺蛋白受体之一或二者结合来稳定。
在一个实施方式中，刻缺蛋白途径激动剂是致使更多刻缺蛋白胞内结构域(NICD)或更多NICD靶向于核产生的分子(参见，例如，Kau and Silver(2003)Drug Discov.Today 8：78-85；Kau et al.(2004)Nature Reviews Cancer 4：1-12)。细胞内NICD的分布可由自动化显微术监测(Mitchison(2005)Chembiochem6：33-39)。
抗体
如本文中使用，术语“抗体”指包括至少一个免疫球蛋白可变区的蛋白质，例如提供免疫球蛋白可变域或免疫球蛋白可变域序列的氨基酸序列。例如，抗体可包括重(H)链可变区(在本文缩写为VH)，和轻(L)链可变区(在本文缩写为VL)。在另外的实例中，抗体包括两个重(H)链可变区和两个轻(L)链可变区。术语“抗体”包含抗体的抗原结合片段(例如，单链抗体、Fab片段、F(ab’)2片段、Fd片段、Fv片段和dAb片段)以及完整抗体，例如完整的和/或全长的IgA、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgE、IgD、IgM型免疫球蛋白(以及它们的亚型)。免疫球蛋白的轻链可以是κ或λ型。在一个实施方式中，抗体是糖基化的。抗体可能有抗体依赖性细胞毒性和/或补体介导的细胞毒性的功能，或可以在这些活性中的一种或两种上无功能。
VH和VL区可进一步细分为高可变性的区，称作“互补决定区”(“CDR”)，散布着更保守的的区(称作“框架区”(FR))。FR和CDR的范围已被精确限定(参见，例如Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，Fifth Edition，US Department of Health and Human Services，NIHPublication No.91-3242；和Chothia，C.et al.(1987)J.Mol.Biol.196：901-917)。在本文使用Kabat定义。每种VH和VL通常由三个CDR和四个FR组成，按以下顺序从氨基末端排列至羧基末端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、PR3、CDR3、FR4。
“免疫球蛋白结构域”指来自免疫球蛋白分子的可变域或恒定域的结构域。免疫球蛋白结构域通常含有两个由大约7个β-链形成的β-折叠，以及保守的二硫键(参见，例如，A.F.Williams and A.N.Barclay(1988)Ann.RevImmunol.6：381-405)。“免疫球蛋白可变域序列”指氨基酸序列，所述氨基酸序列能够形成足以在适合于抗原结合的构型中定位CDR序列的结构。例如，所述序列可以包含天然存在的可变域的全部或部分氨基酸序列。例如，所述序列可省略一个、两个或更多个N-或C-末端氨基酸、内部氨基酸，可以包含一个或多个插入物或额外的末端氨基酸，或可以包含其它变化。在一个实施方式中，包含免疫球蛋白可变域序列的多肽能够与其它免疫球蛋白可变域序列联合，形成靶结合结构(target binding structure)(或“抗原结合位点”)。
抗体的VH或VL链可进一步包含重链或轻链恒定区的全部或部分，由此分别形成重免疫球蛋白链或轻免疫球蛋白链。在一个实施方式中，抗体是两个重免疫球蛋白链和两个轻免疫球蛋白链的四聚物。所述重免疫球蛋白链和轻免疫球蛋白链可通过二硫键连接。重链恒定区通常包含三个恒定域，CH1、CH2和CH3。轻链恒定区通常包含CL结构域。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织或试剂的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和典型补体系统的第一组分(Clq)。
“有效人(effectively human)”免疫球蛋白可变区是包含足够数目人框架氨基酸位置的免疫球蛋白可变区，由此所述免疫球蛋白可变区在正常人体内不引起免疫应答。“有效人”抗体是包含足够数目人氨基酸位置的抗体，由此所述抗体在正常人体内不引起免疫应答。
“人源化”免疫球蛋白可变区是经修饰的免疫球蛋白可变区，所述修饰的特征在于使经修饰的形式与未修饰的形式相比引起较少的免疫应答；例如是经修饰而包括足够数目人框架氨基酸位置的免疫球蛋白可变区，由此该免疫球蛋白可变区在正常人体内不引起免疫应答。“人源化”免疫球蛋白的描述包括例如U.S.Patents No.6,407,213和5,693,762。在某些情况下，人源化免疫球蛋白可在一个或多个框架氨基酸位置包含非人氨基酸。
抗体可以通过多种方法产生，包括免疫法，例如使用动物；或体外方法例如噬菌体展示。可将抗原的全部或部分用作免疫原或用作选择用的靶标。在一个实施方式中，免疫的动物包含产生免疫球蛋白的细胞，其带有天然的、人的或部分人的免疫球蛋白基因座(loci)。在一个实施方式中，非人动物包含至少一部分人免疫球蛋白基因。例如，可以用人Ig基因座的大片段改造小鼠使其缺乏小鼠抗体的产生。因此，通过使用杂交瘤技术，能够产生和选择至少部分人的、具有期望的特异性的抗原特异性单克隆抗体。参见，例如XENOMOUSETM，Green et al.(1994)Nat.Gen.7：13-21；US 2003-0070185；U.S.Patent No.5,789,650；和WO 96/34096。
非人抗体也可在例如啮齿动物中产生。可将非人抗体人源化，例如，如EP 239 400；US Pat.Nos.6,602,503；5,693,761；和6,407,213中所述，可将非人抗体去免疫，或进行其它修饰以使其成为有效人抗体(make it effectivelyhuman)。
产生完全的人单克隆抗体可以例如使用体外接触抗原的人脾细胞，如Boerner et al.(1991)J.Immunol.147：86-95所述。它们可以通过所有组成成分克隆来制备，如Persson et al.(1991)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 88：2432-2436或Huang and Stollar(1991)J.lmmunol.Methods 141：227-236；以及U.S.Pat.No.5,798,230所述。也可将大型非免疫人噬菌体展示文库用以分离高亲和性抗体，使用标准噬菌体技术能够将所述抗体开发为人用治疗法(参见，例如Hoogenboom et al.(1998)Immunotechnology 4：1-20；Hoogenboom et al.(2000)Immunol Today 2：371-378；和US 2003-0232333)。
本文描述的抗体和其它蛋白质可以在原核和真核细胞中产生。在一个实施方式中，将抗体(例如scFv’s)在酵母细胞中表达，所述酵母细胞例如毕赤酵母属(Pichia)(参见，例如Powers et al.(2001)J.Immunol.Methods 251：123-35)、汉逊酵母属(Hanseula)或酵母属(Saccharomyces)。
抗体，尤其是全长抗体，例如IgG，能够在哺乳动物细胞中产生。用于重组表达的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括二氢叶酸还原酶阴性的CHO细胞，在Urlaub and Chasin(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220中描述，与DHFR选择标记一起使用，例如，如Kaufmanand Sharp(1982)Mol.Biol.159：601-621中描述)，淋巴细胞细胞系例如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞，COS细胞，K562，和来自转基因动物的细胞，例如来自转基因哺乳动物的细胞。例如，所述细胞可以是乳腺上皮细胞。
抗体和其它蛋白质也能够由转基因动物产生。例如，U.S.Pat.No.5,849,992描述在转基因动物的乳腺中表达抗体的方法。将转基因构建为包含乳特异性启动子和编码有利的抗体(例如本文所述的抗体)和用于分泌的信号序列的核酸序列。由这种转基因哺乳动物的雌性产生的乳包含其中被分泌的的有利蛋白，例如抗体或Fc融合蛋白。能够从所述乳中纯化该蛋白，或对于某些应用可直接使用。
本文上下文中描述的抗体的方法能够适用于其它蛋白，例如Fc融合蛋白和可溶性受体片段。
施用
用于预防或减少皱纹或其它皮肤状况，或用于治疗本文描述的其它病症的药物组合物，可以通过肠胃外途径施用，包括局部、皮下、腹膜内、肌内、鼻内和静脉内施用。通常使用局部施用。可以采用组合物的重复施用，例如重复的局部施用。可同时使用多于一种施用途径，例如将局部施用与口服施用结合。肠胃外剂型的实例包括活性剂在等渗盐水、5％葡萄糖或其它公知的可药用赋形剂中的水溶液。增溶剂例如环糊精或其它增溶剂可作为药用赋形剂用于递送减少皱纹的组合物。
本文描述的组合物还可采用常规方法配制成用于其它施用途径的剂型。可将药物组合物配制成例如口服施用的剂型，配制成胶囊、片剂(各包含经时释放和持续释放剂型)或凝胶密封剂(gel seal)。胶囊可以包含任何标准的可药用材料例如明胶或纤维素衍生物。片剂可以根据常规方法配制，通过将试剂和固体载体的混合物，同润滑剂进行压缩。固体载体的实例包括淀粉和糖皂土。药物组合物还可以硬壳片剂或胶囊的形式施用，所述片剂或胶囊包含例如作为黏合剂的乳糖或甘露醇和常规填充剂和压片剂。
本文所述的化合物例如减少皱纹的化合物的局部施用在上文所述的许多不同途径中表现为优选的施用途径。对于局部应用，所述组合物可包含与皮肤相容的介质。这种局部药物组合物可以多种形式存在，例如，以适合应用于皮肤的溶液、霜剂(cream)、软膏(ointment)、凝胶(gel)、洗剂(lotion)、洗发水(shampoo)或气溶胶(aerosol)剂型的形式。在预防或减少皱纹或在治疗本文描述的病症中有用的组合物中，活性成分的重量百分比通常是0.01-10％(例如0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％、5.0％或10)(基于组合物的总重)，所述活性成分与可药用载体混合。在本文描述的减少皱纹的组合物中可以采用多种载体材料，例如醇、芦荟凝胶、尿囊素、甘油、维生素A和E油、矿物油和聚乙二醇。其它添加剂例如防腐剂、香料、防晒剂或其它化妆品成分，可存在于所述组合物中。局部组合物可在应用后立即去除，或者其可在应用后留在皮肤表面，例如脸部一段延长的时间，例如过夜或整日。
UVB照射
UVB照射的主要来源是天然日光。UVB射线的强度随白昼时间、一年中的时节、天空中太阳的位置、海拔和与赤道的距离而变化。这些射线在夏季正午的几个小时间最强烈，尽管它们始终存在，甚至是在冬季的几个月内。考虑在海平面以上的距离和与赤道的距离也是重要的。海拔越高UVB射线的强度越强。因此，登山者、滑雪者和生活在高海拔的那些人具有长期UVB损伤的风险。同样，越接近赤道UV照射越强，则长期UVB损伤的风险越高。
雪、水和沙反射日光，使到达皮肤的UVB照射量放大。甚至在云遮住太阳时，在长期曝露下，UVB水平仍然能够高到足以引起皮肤损伤，例如皱纹。
UV指数(由Environmental Protection Agency制定)给出指定日期时太阳的UV射线的强度。存在四个种类——中(UV指数小于3)、高(UV指数是3-6)、很高(UV指数是6-10)和极高(UV指数大于10)。中UV指数的意思是在超过一小时之后将皮肤灼伤；极高水平的意思是在短于15分钟之内即灼伤皮肤。所述指标通常包含在天气预报中。临床上，以MED测量UVB照射。1MED是在敏感皮肤上产生晒斑(sunburn)所需的UVB量。因为UVB照射的效果是累积的，长期曝露于当急性照射时能够引起红斑或浮肿或灼伤的UVB水平以下的UVB水平(例如1MED以下)，结果能够产生长期或持续UVB引发的皱纹。例如，如果受试者持续曝露在太阳下，即使该受试者仅在低或中UV指数的日期内曝露于太阳下，所述受试者仍存在长期UVB引发的皱纹的风险。
皱纹的测量
化合物对皱纹的形成或外观的影响能够定性地评估，例如通过视觉观察；或能够定量地评估，例如通过计算机辅助的皱纹形态学测量。优选地，定量地分析皱纹形态学。测量皱纹的定量方法的实例包括但不限于，采用激光束的光学切割技术(optical cut technique)，由Hoshino(1992)Pixel 45：121提出，在此引入本文作为参考；或分析三维皮肤复制品的方法，例如Shiseido WrinkleAnalyzer 3D Pro系统(Takasu et al.(1996)J.Soc.Cosmet.Chem.Japan29：394-405；Japanese Published Patent Application No.07-113623，公开于1995年5月2日(相应于U.S.Patent Application Serial No.08/364,346))。可以使用SILFLO
Figure A20068003619400221
(Flexico Development Ltd.，Potters Bar，UK)系统或类似系统取得皮肤的复制品。分析皮肤复制品表面上的不规则性，即皱纹，例如用ShiseidoWrinkle Analyzer 3D Pro或类似系统，从而由对应于皮肤的二维平面上的点的高度提供三维形状数据。根据所述三维数据，计算各皱纹的长、宽、深、面积和体积。根据本文所述的规则皱纹和细纹的参数，由此能够对皱纹的不同类别包括规则皱纹和细纹的子类进行单独的识别和记分。
试剂盒
增加刻缺蛋白途径活性的试剂，例如通过本文描述的方法鉴定的试剂，例如AG-370、AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉)、尼日利亚菌素·钠、松胞菌素D、毒毛花苷G、FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙)或SP600125，可提供在试剂盒(kit)中。所述试剂盒包含(a)所述试剂，例如包含所述试剂的组合物，和(b)信息材料。所述信息材料可以是涉及本文所述的方法和/或用于本文所述方法的试剂用途的描述性、指导性、市场性或其它材料。例如，所述信息材料涉及皱纹或它们的预防或减少。
在一个实施方式中，信息材料可包含对于以适合的方式施用所述试剂来进行本文所述方法的说明书(instructions)，例如以适合的剂量、剂型或施用模式(例如本文所述的剂量、剂型或施用模式)。优选的剂量、剂型或施用模式是局部，例如局部施用在皮肤之上。在另外的实施方式中，信息材料可包含对适合的受试者施用所述试剂的说明书，所述受试者例如人，例如具有皱纹或存在具有皱纹的风险的人。例如，所述材料可包含向面部、颈部或手部施用所述试剂的说明书。
所述试剂盒的信息材料不受其形式限制。在许多情况下，所述信息材料，例如说明书，是以印刷品提供，例如印刷的文本、图纸和/或照片，例如标签或印刷纸张(printed sheet)。然而，信息材料也可以用其它形式提供，例如盲文、计算机可读材料、视频记录或音频记录。在另一个实施方式中，所述试剂盒的信息材料是联系信息，例如物理地址、电子邮件地址、网址或电话号码，由此该试剂盒的使用者能够获得有关试剂和/或其在本文所述方法中的用途的真实信息。当然，还可将所述信息材料以多种形式的任何组合提供。
除了所述试剂，试剂盒的组合物还可包含其它成分，例如溶剂或缓冲剂、稳定剂、防腐剂、香料或其它化妆品成分，和/或治疗本文所述的状况或病症的第二种试剂，例如防晒剂。可供选择的是，可将其它的成分包含在试剂盒中，但是包含在不同于所述试剂所在的组合物或容器中。在这些实施方式中，所述试剂盒可包含对于混合所述试剂与其它成分的说明书，或所述试剂与其它成分一起使用的说明书。
可将所述试剂以任何形式提供，例如液体、干燥或冻干的形式。优选所述试剂是基本上纯的和/或无菌的。在将所述试剂提供于液体溶液中时，所述液体溶液通常是含水溶液，例如无菌含水溶液。在将所述试剂作为干燥形式提供时，通常通过添加适合的溶剂来复原。所述溶剂例如无菌的水或缓冲液，任选地可以在所述试剂盒中提供。
试剂盒可包含用于容纳含有所述试剂的组合物的一个或多个容器。在某些实施方式中，试剂盒含有用于组合物和信息材料的单独容器、分配器(divider)或隔室(compartment)。例如，可将组合物容纳在瓶、小瓶或注射器中，而可将信息材料容纳在塑料套或包中。在其它实施方式中，将试剂盒中单独的元件都容纳在单一的、未分隔的容器中。例如，将组合物容纳在瓶、小瓶或注射器中，其上以标签的形式附上信息材料。在某些实施方式中，试剂盒包含多个(例如一包)独立的容器，各含有所述试剂的一种或多种单位剂型(例如本文描述的剂型)。例如，试剂盒包含复数个注射器、安瓿、箔包(foil packets)或罩板包装(blister packs)，各含有所述试剂的单一单位剂量。试剂盒中的容器可以是气密的和/或防水的。
试剂盒任选地包含适合于所述组合物施用的装置，例如注射器、吸入器、吸管、钳状骨针、称量匙、点滴器(例如，点眼药器)、拭子(例如，棉头拭子或木质拭子)，或任何这种递送装置。
仅应将以下具体实施例理解为说明性的，并非以任何方式对公开内容的其它部分进行限制。
实施例
实施例1：刻缺蛋白1防止因UVB照射的炎症
具有特异性缺失刻缺蛋白1基因的角质形成细胞的小鼠(Notch1-/-小鼠)描述于Rangarajan et al.(2001)EMBO J.20：3427-36中。测试雌性Notch 1-/-小鼠(Notch1 ko(Notch1敲除型))和Notch+/+同窝对照(野生型)(8周龄，n＝2每组)在UVB照射之后的耳膨胀反应。在照射之前和UVB照射(80和160mJ/cm2)之后三天内的每一天，使用厚度计(Mitsutoyo Corp.)测量耳厚度。结果示于表1(80mJ/cm2UVB)和表2(160mJ/cm2)。
表1.80mJ/cm2照射之后耳厚度的增加
             第0天      第1天    第2天    第3天
                                                       
Notch1 ko    100.0％    100.0    103.4    141.4
野生型       100.0％    100.0    100.0    100.0
表2.160mJ/cm2照射之后耳厚度的增加
             第0天      第1天    第2天    第3天
                                                      
Notch1 ko    100.0％    103.0    124.6    178.7
野生型       100.0％    100.0    120.4    148.2
在UVB照射之后，与野生型小鼠相比，在Notch1敲除小鼠中观察到了更多的膨胀。
在类似的实验中，将12周龄Notch1 ko和野生型对照同窝小鼠的右耳曝露于500mJ/cm2 UVB，而不对左耳进行处理并用作内部对照。在第0天进行处理，并且在UVB照射之后的5天期间测量耳厚度(图1)。在Notch1敲除小鼠中观察到了增加的响应UVB的膨胀。
这些结果说明刻缺蛋白1能够防止UVB引发的膨胀和炎症。
实施例2：刻缺蛋白1防止因UVB照射的皮肤损伤
修剪雌性Notch1-/-小鼠和Notch+/+同窝对照(8周龄，n＝1每组)的毛发，其后用于UVB照射实验以测量皮肤损伤(80、160和240mJ/cm2)。使用两只小鼠作为未照射对照。从小鼠(对照小鼠和UVB照射24、48和72小时之后的UVB照射小鼠)获得背部皮肤样品，对7μm切片进行苏木精和伊红(HE)染色。从小鼠获得代表性切片，并且使用Olympus BH-2显微镜(Olympus)评估。用五种分类来评估皮肤损伤(-：无损伤；±：轻微损伤；+：明显损伤；++强烈损伤：+++：严重损伤)。结果示于表3。
表3.UVB照射之后的皮肤损伤
Figure A20068003619400251
n.d.：未测定
在UVB照射之后，与野生型UVB照射小鼠相比，在Notch1 ko小鼠中观察到了更严重的皮肤损伤。组织学分析显示与野生型小鼠相比，在Notch1敲除小鼠的上层真皮和真皮内的弹性组织和纤维中炎症细胞的累积。这些结果说明刻缺蛋白1保护皮肤免于UVB照射引起的皮肤损伤。
实施例3：刻缺蛋白1敲除小鼠显示增加的皱纹形成
修剪雌性Notch-/-小鼠和Notch+/+同窝对照(10周龄，n＝2每组)的毛发，其后施以10周的UVB照射。与野生型小鼠相比，长期UVB照射(累积UVB剂量：6.8J/cm2)在Notch1缺陷型小鼠中产生了显著的皱纹形成。用五种分类来评估起皱现象(0：无皱纹；1：轻微起皱；2：明显起皱；3：强烈起皱；4：严重起皱)。
表4.长期UVB照射之后的起皱现象
                  小鼠数目
                  1    2    平均值
                                     
Notch1 ko         3    2    2.5
野生型            1    1    1
Notch1 ko(无UVB)  0    0    0
野生型(无UVB)     0    0    0
与野生型和未经照射的小鼠相比，在Notch1敲除小鼠中观察到了更多的起皱现象。与野生型和未经照射的小鼠相比，组织学分析显示了在Notch1敲除小鼠的上层真皮和真皮内的弹性组织中炎症细胞的累积。
实施例4：通过以基于细胞的测定法高通量筛选化学文库来鉴定角质形 成细胞中刻缺蛋白信号传导的激活剂
示出了在多种化合物中高通量筛选刻缺蛋白激活剂的结果。pHTS-RBP-萤光素酶报道质粒在TATA框之前含有来自EBV TP1启动子(Laux et al.(1994)J.Virol.68：6947-6958)的12个RBP-Jκ-结合重复序列(GTGGGAA；SEQ IDNO：2)，将所述质粒用于筛选刻缺蛋白激活剂。在将细胞铺板于384孔平板之前，将报道分子瞬时转染至293E/T细胞中。其后使用机器工具将纳升体积的所述化合物以针式点样转移(pin-transfer)至平板。所述筛选作为ICCB(Institute of Chemistry and Cell Biology)-Longwood Investigator InitiatedScreening Program的部分完成。
在这些初始实验中使用的文库是BIOMOL ICCB Known Bioactives文库。这种样本(collection)购买自BIOMOL(Plymouth Meeting，PA；目录#2840；www.biomol.com)并将其铺板。所述样本包含许多类化合物，包括离子通道阻滞剂、G蛋白偶联受体配体、第二信使调制剂、核受体配体、肌动蛋白和微管蛋白配体、激酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、基因调节剂、脂质生物合成抑制剂，以及扰动(perturb)细胞途径的其它充分表征的化合物。
将诱导超过2倍的刻缺蛋白应答的报道分子认为是阳性结果。这些分子被鉴定为细胞中刻缺蛋白途径的潜在正调节物的分子，示于表5中。
表5.刻缺蛋白途径的正调节物
  化合物   分子量  说明   参考文献
  AG-370   259  AG-370是酪氨酸激酶抑制剂的酪氨酸磷酸化抑制剂家族中成员，并且是PDGF受体激酶相对于EGF受体激酶的选择性抑制剂(IC50＝20μM)。AG-370抑制人骨髓成纤维细胞中PDGF诱导的有丝分裂发生。   Levitzki and Gilon，1991，Trends Pharmacol Sci.12：171-4；Bryckaert et al.，1992，Exp.Cell Res.199：255-61
  AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉)   266  PDGF受体酪氨酸激酶的强效抑制剂(IC50＝1μM)。还抑制FGF酪氨酸激酶和c-kit。诱导小细胞肺癌细胞系(H526)的凋亡   Kovalenko et al.，1997，Biochemistry 36：6260-9；Strutz et al.，2001，KidneyInt.59：579-92；Krystal et al.，1997，Cancer Res.57：2203-8
  尼日利亚菌素·钠   747  K+和H+离子载体。通过破坏膜电位刺激Ca2+从线粒体库(mitochondrial store)释放。诱导快速的胞内酸化，导致凋亡。   Vercesi et al.，1993，J.Biol.Chem.268：8564-8；Furlong et al.，1997，J.Cell Sci.110：653-61
  松胞菌素D   507.6   松胞菌素D是与肌动蛋白纤丝的倒钩端(barbed end)结合的细胞可透过性真菌毒素，同时抑制亚单位的结合与解离。其引起对肌动蛋白纤丝的破坏和对肌动蛋白聚合的抑制。   Cooper，1987，J.CellBiol.105：1473-8；Flanagan and Lin，1980，J.Biol.Chem.255：835-8；Goddette and Frieden，1986，J.Biol.Chem.261：15974-80；Schliwa，1982，J.CellBiol.92：79-91
  毒毛花苷G   728.8   毒毛花苷G是心钠泵(Na+/K+ ATP酶)的甾体抑制剂，近期被认定为是内源性肾上腺激素。在CNS中，能够将其用作诱导体内兴奋性神经毒性的工具。毒毛花苷G以及其它内源性毛地黄样化合物能够下调大鼠晶状体中14-3-3蛋白的表达。   McDonnough et al.，2002，Basic Res.Cardiol.97：I19-24；Schoner，2002，Eur.J.Biochem.269：2440-8；Veldhuis et al.，2003，J.Neurosci.23：4127-33；Lichtstein et al.，2000，Hypertens.Res.23：S51-3
  FCCP羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙   254.2   线粒体氧化磷酸化的强效可逆抑制剂。FCCP对于线粒体膜电位的去极化是有用的工具。用不同浓度的FCCP处理细胞致使部分(100nm)或全部(10μm)的去极化和凋亡。   Collins et al.，2000，Biochem.J.347：593-600；Keij et al.，2000，Cytometry 39：203-10；Gautier et al.，2000，Neuroreport 11：2953-6
  SP600125   220.2  新强效选择性JNK-1，-2，-3抑制剂(IC50＝0.11μM)。SP600125是可逆的ATP竞争性抑制剂，相对于一系列激酶具有＞20倍的选择性。其剂量依赖性地抑制c-jun的磷酸化和炎症基因COX-2、IL-2、IFN-γ和TNF-α的表达。在体内，其阻断LPS诱导的TNF-α的表达并且抑制抗CD3诱导的CD4+和CD8+胸腺细胞的凋亡。   Bennett et al.，2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA98：13681-6；Han et al.，2001，J.Clin.Invest.108：73-81Han et al.，2001，.1.Gun.invest.108：73-SI
总而言之，开发了鉴定和研究刻缺蛋白信号传导的正调节物的高通量基因方法。报道了对靶向活化刻缺蛋白途径的小分子候选物的鉴定。可将这些列于表5的分子用作刻缺蛋白诱导剂来治疗和/或预防受试者中刻缺蛋白相关的病症，例如癌症或皮肤损伤，或用作导向化合物(lead compound)，用于进一步的筛选，以鉴定在治疗和/或预防刻缺蛋白相关的病症中使用的试剂。
实施例5.UVB照射激活刻缺蛋白信号传导并且刻缺蛋白防止UVB诱导 的凋亡
在初级小鼠角质形成细胞中测量UVB对内源性刻缺蛋白活性的诱导。用刻缺蛋白应答性报道质粒(RBP-luc)瞬时转染初级角质形成细胞。在UVB处理(100mJ/cm2)24小时之后测量萤光素酶活性。在UVB处理的细胞中，RBP-luc报道分子的活性比对照未处理细胞高3倍(图2A)。还通过测定初级角质形成细胞中“规范(canonical)”刻缺蛋白应答性基因Hes-1的内源性表达来检测刻缺蛋白活性的诱导。将初级角质形成细胞曝露于50mJ/cm2 UVB处理，并且在24小时之后从处理细胞和对照细胞收集mRNA。通过实时RT-PCR分析所述mRNA，使用GAPDH水平来归一化。在UVB处理的细胞中，Hes-1表达比对照细胞高2-3倍(图2B)。UVB处理之后对Hes-1表达的诱导依赖于时间。对于Hey-2观察到了相似的结果。
还体内测量了UVB对内源性刻缺蛋白活性的诱导。用220mJ/cm2 UVB处理小鼠4小时。通过实时RT-PCR分析源自热分离表皮的mRNA，使用GAPDH水平来归一化。规范刻缺蛋白应答性基因Hes-1(图2C)和刻缺蛋白诱导的角质形成细胞分化标记角蛋白1(Keratin1)(图2C)在UVB处理的皮肤中比在对照皮肤中的表达高3-4倍。
还发现在体外和体内刻缺蛋白防止响应于UVB处理的凋亡。用表达组成性活性形式刻缺蛋白1或GFP对照的重组腺病毒感染初级小鼠角质形成细胞。在感染后16小时，用UVB照射(50mJ/cm2)所述细胞，在8小时之后通过TUNEL测定评估凋亡应答。与GFP对照相比，在表达组成性激活的刻缺蛋白1的细胞中，响应于UVB的凋亡减少了大约3倍(图2E)。类似地，刻缺蛋白1基因的缺失增加了体内角质形成细胞对UVB诱导的凋亡的易感性。将在表皮中诱导性缺失刻缺蛋白1的小鼠和野生型同窝对照曝露于UVB(160mJ/cm2)，并且在48小时之后通过TUNEL测定评估凋亡。在每种情况下分析两只小鼠，TUNEL阳性角质形成细胞的比率通过在超过三个独立的区域计数最少300个细胞来测定。在缺失了刻缺蛋白1的角质形成细胞中，UVB诱导的凋亡是2-3倍(图2F)。
实施例6.刻缺蛋白信号传导防止DNA损伤诱导的凋亡
为了证明刻缺蛋白信号传导针对DNA损伤诱导的凋亡具有保护功能，我们通过TUNEL测定法在用逆转录病毒载体感染的DNA损伤的初级人角质形成细胞中测量了凋亡，所述载体表达MAML1蛋白的51个氨基酸的肽(MAM51)，作为阻抑刻缺蛋白/CBF-1依赖性转录的特定工具(Weng et al.(2003)Mol.Cell Biol.23：655-664)。用2μM 4-硝基喹啉1-氧化物(4-NQO)或300mJ/cm2 UVB处理角质形成细胞，并在12小时之后测定凋亡。在表达MAM51的角质形成细胞中观察到了显著较高的凋亡应答(2-5倍)(图3A-B)，说明刻缺蛋白1防止了由这些DNA损伤试剂诱导的凋亡。
其它实施方式
已经描述了本发明的多个实施方式。然而，应该理解可以在不背离本发明的宗旨和范围的前提下进行各种修改。因此，其它实施方式也在所述权利要求书的范围之内。

Claims (33)

1.一种减少或治疗受试者中皮肤损伤的方法，包括对所述受试者施用增加刻缺蛋白途径活性的试剂，由此减少或治疗皮肤损伤。
2.权利要求1的方法，其中所述试剂是局部施用的。
3.权利要求1的方法，其中所述刻缺蛋白是刻缺蛋白1。
4.权利要求1的方法，其中所述受试者已经曝露于UVB照射或将会曝露于UVB照射。
5.权利要求1的方法，其中所述皮肤损伤是由UVB照射引发的。
6.权利要求1的方法，其中所述皮肤损伤是皱纹。
7.权利要求1的方法，其中所述试剂选自AG-370、AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉)、尼日利亚菌素·钠、松胞菌素D、毒毛花苷G、FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙)和SP600125。
8.一种化妆品组合物，其包含增加刻缺蛋白途径活性的试剂。
9.权利要求8的化妆品组合物，其中所述组合物进一步包含化妆品成分。
10.权利要求9的化妆品组合物，其中所述化妆品成分是香料。
11.权利要求9的化妆品组合物，其中所述化妆品成分是防晒剂。
12.权利要求8的化妆品组合物，其中所述试剂选自AG-370、AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉)、尼日利亚菌素·钠、松胞菌素D、毒毛花苷G、FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙)和SP600125。
13.权利要求8的化妆品组合物，其中将所述组合物配制成适合于局部应用。
14.一种筛选用于治疗皮肤损伤的试剂的方法，所述方法包括：
提供试验试剂；
测定所述试验试剂是否增加刻缺蛋白途径活性；和
将所述试验试剂增加刻缺蛋白途径活性的能力与该试验试剂减少皮肤损伤的能力关联，
由此筛选用于治疗皮肤损伤的试剂。
15.权利要求14的方法，进一步包括评估所述试剂对受试者中皮肤损伤的影响。
16.权利要求14的方法，进一步包括选择增加刻缺蛋白途径活性的试验试剂。
17.权利要求14的方法，其中所述测定步骤包括测定所述试验试剂是否增加或诱导刻缺蛋白。
18.权利要求14的方法，其中所述试验试剂选自下组：动物提取物、植物提取物、真菌提取物、小分子、蛋白质、脂质和核酸。
19.权利要求14的方法，其中所述测定步骤包括：
提供包含外源核酸的细胞、组织或非人受试者，所述核酸包含与编码报道多肽的核苷酸序列可操作地连接的刻缺蛋白信号转导途径中组分的调节区；和
评估所述细胞、组织或非人受试者中试验试剂增加报道多肽的活性的能力，
其中如果所述试验试剂相对于参考对照将报道多肽的活性增加，则将其确定为增加刻缺蛋白途径活性。
20.权利要求17的方法，其中所述测定步骤包括：
提供包含外源核酸的细胞、组织或非人受试者，所述核酸包含与编码报道多肽的核苷酸序列可操作地连接的刻缺蛋白调节区；和
评估所述细胞、组织或非人受试者中试验试剂增加报道多肽的活性的能力，
其中如果所述试验试剂相对于参考对照将报道多肽的活性增加，则将其确定为增加或诱导刻缺蛋白。
21.权利要求15的方法，其中所述评估步骤包括将所述试剂局部施用于受试者皮肤。
22.权利要求15的方法，其中所述受试者是实验动物。
23.权利要求15的方法，其中所述受试者是人。
24.权利要求15的方法，其中评估所述试剂对UVB引发的皱纹的影响。
25.一种治疗受试者中基于刻缺蛋白的病症的方法，所述方法包括：
鉴定需要治疗基于刻缺蛋白的病症的受试者；和
对所述受试者施用选自下组的试剂：AG-370、AG-1296(6，7-二甲氧基-3-苯基喹喔啉)、尼日利亚菌素·钠、松胞菌素D、毒毛花苷G、FCCP(羰酰氰化物-4-(三氟甲氧基)-苯腙)和SP600125。
26.权利要求25的方法，其中所述基于刻缺蛋白的病症是癌症。
27.权利要求26的方法，其中所述癌症是皮肤癌、前列腺癌或子宫颈癌。
28.权利要求26的方法，其中所述癌症由人乳头瘤病毒引起。
29.增加刻缺蛋白途径活性的试剂在制备用于治疗皮肤损伤的药物中的用途。
30.权利要求29的用途，其中所述药物配制成局部施用。
31.权利要求29的用途，其中所述刻缺蛋白是刻缺蛋白1。
32.权利要求29的用途，其中所述皮肤损伤由UVB照射引起。
33.权利要求29的用途，其中所述皮肤损伤是皱纹。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109839507A (zh) * 2017-11-27 2019-06-04 江苏坤辉生物科技有限公司 一种检测紫外光损伤的生物标志物及其应用
CN109862891A (zh) * 2016-08-24 2019-06-07 株式会社爱茉莉太平洋 包含细胞松弛素d的用于皮肤美白组合物

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005111072A2 (en) * 2004-04-29 2005-11-24 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Notch-based fusion proteins and uses thereof
JP2010536855A (ja) * 2007-08-23 2010-12-02 ザ・トラスティーズ・オブ・コランビア・ユニバーシティー・イン・ザ・シティー・オブ・ニューヨーク ヒト化Ｎｏｔｃｈ融合タンパク質の組成物および治療方法
US20110091387A1 (en) * 2007-11-15 2011-04-21 The General Hospital Corporation Methods and compositions for reducing skin damage
BRPI0912912A2 (pt) * 2008-08-22 2016-07-05 Univ Columbia proteína de fusão, método para tratar um indivíduo que tem um tumor, método para inibir a angiogênese em um indivíduo, método para tratar um indivíduo que tem câncer de ovário, método para tratar um indivíduo que tem distúrbio metabólico, uso da proteína de fusão, método para inibir linfangiogênese fisiológica ou linfangiogênese patológica em um indivíduo, método para inibir metástase tumoral em um indivíduo, método para inibir o crescimento de um tumor secundário em um indivíduo, método para inibir a cooptação de um vaso sanguíneo por um tumor em um indivíduo, método para tratar câncer de mama de um indivíduo
KR20190136107A (ko) * 2010-03-01 2019-12-09 엠디엔에이 라이프 사이언시즈 인코퍼레이티드 ＵＶ 관련된 ｍｔＤＮＡ 융합 전사체 및 이의 방법 및 용도
US9611024B2 (en) * 2011-08-03 2017-04-04 Lockheed Martin Corporation Ballonet measurement system
TW201329105A (zh) 2011-10-04 2013-07-16 Thr Trustees Of Columbia University In The City Of New York 人類ｎｏｔｃｈ１引誘物
EP3212773B1 (en) 2014-10-29 2021-09-15 Massachusetts Eye and Ear Infirmary Efficient delivery of therapeutic molecules to cells of the inner ear
FR3032120B1 (fr) * 2015-02-04 2020-10-23 Lvmh Rech Utilisation cosmetique d'un extrait de menthe poivree
US11241465B2 (en) 2017-03-20 2022-02-08 Es Biosolutions, Inc. Compositions and methods for skin treatments
CN109833479A (zh) * 2017-11-27 2019-06-04 上海交通大学 一种治疗或预防角蛋白1降解的药物及其应用
US11590152B2 (en) 2018-01-26 2023-02-28 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Treatment of hearing loss

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4646266A (en) * 1984-09-28 1987-02-24 Energy Conversion Devices, Inc. Programmable semiconductor structures and methods for using the same
US5554359A (en) * 1989-12-15 1996-09-10 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Pigmentation enhancer and method
SE8904296D0 (sv) * 1989-12-21 1989-12-21 Pharmacia Ab Transdermal system
GB9122362D0 (en) * 1991-10-22 1991-12-04 British Telecomm Resistive memory element
CA2186750C (en) * 1994-03-30 2008-08-05 Jens Hansen Use of fatty acid esters as bioadhesive substances
US5958458A (en) * 1994-06-15 1999-09-28 Dumex-Alpharma A/S Pharmaceutical multiple unit particulate formulation in the form of coated cores
US5751012A (en) * 1995-06-07 1998-05-12 Micron Technology, Inc. Polysilicon pillar diode for use in a non-volatile memory cell
US5915167A (en) * 1997-04-04 1999-06-22 Elm Technology Corporation Three dimensional structure memory
NO972803D0 (no) * 1997-06-17 1997-06-17 Opticom As Elektrisk adresserbar logisk innretning, fremgangsmåte til elektrisk adressering av samme og anvendelse av innretning og fremgangsmåte
US6072716A (en) * 1999-04-14 2000-06-06 Massachusetts Institute Of Technology Memory structures and methods of making same
US7575921B2 (en) * 1999-12-30 2009-08-18 Vbi Technologies, L.L.C. Spore-like cells and uses thereof
US6545891B1 (en) * 2000-08-14 2003-04-08 Matrix Semiconductor, Inc. Modular memory device
US6765813B2 (en) * 2000-08-14 2004-07-20 Matrix Semiconductor, Inc. Integrated systems using vertically-stacked three-dimensional memory cells
US6711043B2 (en) * 2000-08-14 2004-03-23 Matrix Semiconductor, Inc. Three-dimensional memory cache system
US20030120858A1 (en) * 2000-09-15 2003-06-26 Matrix Semiconductor, Inc. Memory devices and methods for use therewith
US6584541B2 (en) * 2000-09-15 2003-06-24 Matrix Semiconductor, Inc. Method for storing digital information in write-once memory array
US6407953B1 (en) * 2001-02-02 2002-06-18 Matrix Semiconductor, Inc. Memory array organization and related test method particularly well suited for integrated circuits having write-once memory arrays
US6618295B2 (en) * 2001-03-21 2003-09-09 Matrix Semiconductor, Inc. Method and apparatus for biasing selected and unselected array lines when writing a memory array
US6473332B1 (en) * 2001-04-04 2002-10-29 The University Of Houston System Electrically variable multi-state resistance computing
US7062602B1 (en) * 2001-04-09 2006-06-13 Matrix Semiconductor, Inc. Method for reading data in a write-once memory device using a write-many file system
US7003619B1 (en) * 2001-04-09 2006-02-21 Matrix Semiconductor, Inc. Memory device and method for storing and reading a file system structure in a write-once memory array
US6996660B1 (en) * 2001-04-09 2006-02-07 Matrix Semiconductor, Inc. Memory device and method for storing and reading data in a write-once memory array
US6881623B2 (en) * 2001-08-29 2005-04-19 Micron Technology, Inc. Method of forming chalcogenide comprising devices, method of forming a programmable memory cell of memory circuitry, and a chalcogenide comprising device
US20030047765A1 (en) * 2001-08-30 2003-03-13 Campbell Kristy A. Stoichiometry for chalcogenide glasses useful for memory devices and method of formation
US7000063B2 (en) * 2001-10-05 2006-02-14 Matrix Semiconductor, Inc. Write-many memory device and method for limiting a number of writes to the write-many memory device
GB0127922D0 (en) * 2001-11-21 2002-01-16 Novartis Ag Organic compounds
US7219271B2 (en) * 2001-12-14 2007-05-15 Sandisk 3D Llc Memory device and method for redundancy/self-repair
US6768661B2 (en) * 2002-06-27 2004-07-27 Matrix Semiconductor, Inc. Multiple-mode memory and method for forming same
US20050070567A1 (en) 2002-08-12 2005-03-31 The Regents Of The University Of Michigan Diagnosis and treatment of diseases arising from defects in the tuberous sclerosis pathway
US7192770B2 (en) * 2002-09-20 2007-03-20 The General Hospiatal Corporation Screening for skin wrinkling modulators
US8637366B2 (en) * 2002-12-19 2014-01-28 Sandisk 3D Llc Nonvolatile memory cell without a dielectric antifuse having high- and low-impedance states
US7176064B2 (en) * 2003-12-03 2007-02-13 Sandisk 3D Llc Memory cell comprising a semiconductor junction diode crystallized adjacent to a silicide
JP2006511965A (ja) * 2002-12-19 2006-04-06 マトリックス セミコンダクター インコーポレイテッド 高密度不揮発性メモリを製作するための改良された方法
US7285464B2 (en) * 2002-12-19 2007-10-23 Sandisk 3D Llc Nonvolatile memory cell comprising a reduced height vertical diode
US20050226067A1 (en) * 2002-12-19 2005-10-13 Matrix Semiconductor, Inc. Nonvolatile memory cell operating by increasing order in polycrystalline semiconductor material
GB0300428D0 (en) * 2003-01-09 2003-02-05 Lorantis Ltd Medical treatment
US6868022B2 (en) * 2003-03-28 2005-03-15 Matrix Semiconductor, Inc. Redundant memory structure using bad bit pointers
JP2007530417A (ja) * 2003-07-01 2007-11-01 プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ 細胞及び生物の寿命及びストレス応答を操作するための組成物
US7752380B2 (en) * 2003-07-31 2010-07-06 Sandisk Il Ltd SDRAM memory device with an embedded NAND flash controller
US7172840B2 (en) * 2003-12-05 2007-02-06 Sandisk Corporation Photomask features with interior nonprinting window using alternating phase shifting
US20050221200A1 (en) * 2004-04-01 2005-10-06 Matrix Semiconductor, Inc. Photomask features with chromeless nonprinting phase shifting window
US7307013B2 (en) * 2004-06-30 2007-12-11 Sandisk 3D Llc Nonselective unpatterned etchback to expose buried patterned features
US7398348B2 (en) * 2004-08-24 2008-07-08 Sandisk 3D Llc Method and apparatus for using a one-time or few-time programmable memory with a host device designed for erasable/rewritable memory

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109862891A (zh) * 2016-08-24 2019-06-07 株式会社爱茉莉太平洋 包含细胞松弛素d的用于皮肤美白组合物
CN109839507A (zh) * 2017-11-27 2019-06-04 江苏坤辉生物科技有限公司 一种检测紫外光损伤的生物标志物及其应用

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