CN101254238B - 从植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分的方法，该方法属于中草药制备及化学化工技术领域；它首先采用有机萃取方法去除对α-葡萄糖苷酶低抑制活性组分，再用大孔吸附树脂和sephadexLH-20柱层析技术提取对α-葡萄糖苷酶有强烈抑制活性的有效组分，抑制剂的得率为4％；本发明工艺简单，易于操作，纯度高，且产物不含有害物质，对环境无污染；用本发明所得的植物提取物，不仅可用于降糖药物的开发，而且也可以进行物质结构的进一步研究。
Description
技术领域
本发明涉及一种从植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分的方法，属于中草药制备及化学化工技术领域。
背景技术
青钱柳是胡桃科的单一属种植物，是我国珍稀植物之一。其形态为落叶乔木，高可达20米，主要分布于海拔400米至800米的山坡或山窝的阔叶林中，习惯于云雾弥漫的阴凉环境。青钱柳是中国特有的天然保健食品资源。青钱柳叶含锗、硒、铬、钒、锌、铁、钙等多种微量元素。近年来，发现青钱柳具有降糖作用，但未见从其中提取a-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分的研究报道。
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，EC3.2.1.20)又叫α-D-葡萄糖苷水解酶，以前称作麦芽糖酶(maltase)。α-葡萄糖苷酶在自然界广泛分布，种类繁多，性质各异，几乎存在于所有生物体内。它在人类的糖原降解和动物、植物、微生物的糖类代谢方面具有重要的生理功能。它可以从低聚糖类底物(淀粉、糊精、蔗糖、麦芽糖等)的非还原末端切开α-1，4糖苷键，释放出葡萄糖。而α-葡萄糖苷酶抑制剂能抑制小肠刷状缘上各种α-葡萄糖苷酶，使淀粉类分解为麦芽糖进而分解为葡萄糖的速度和蔗糖分解为葡萄糖的速度减慢，其中对葡萄糖苷酶的抑制作用最强。研究证实，α-葡萄糖苷酶抑制剂可以防治餐后高血糖症和缓解高胰岛素血症，同时可以提高糖耐量，还可预防和治疗肥胖症和高三酰甘油血症，用于治疗因碳水化合物代谢紊乱而引起的疾病。阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖几种典型的α-葡萄糖苷酶抑制剂。此类降糖药的特点主要是降低餐后血糖而对降低空腹血糖无作用、安全和不增加胰岛素的分泌。
从天然植物中提取具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的成分，用于降糖药物、保健品和食品的开发，是目前α-葡萄糖苷酶抑制剂研究的重点之一。由于青钱柳具有明显的降糖作用，因此从青钱柳中提取相关的成分，可以开发降糖药物、保健品以及食品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从青钱柳叶片植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分的方法。
本发明的要点是首先采用有机萃取方法去处对α-葡萄糖苷酶低抑制活性组分，再用大孔吸附树脂和sephadexLH-20柱层析技术提取对α-葡萄糖苷酶有强烈抑制活性的有效组分；具体包括以下的工艺过程和步骤：
a.将青钱柳植物叶片进行粉碎，放入一容器，按1∶40(g/ml)加入50％乙醇溶液，在室温下震荡3h，收集提取液，反复3次，合并收集提取液；旋干后，用蒸馏水加热重溶；
b.按体积比1∶1加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分另作处理；水相部分按1∶1加入正丁醇萃取，正丁醇部分另作处理，收集萃取物进行下一步处理；
c.上述萃取物旋干重溶，上大孔吸附树脂柱，用水-乙醇梯度洗脱，乙醇浓度0-100％；洗脱流速0.4ml/min，收集30-40％乙醇洗脱峰，进一步处理；
d.将步骤c部分旋干重溶，上sephadexLH-20柱；用水-乙醇梯度洗脱，乙醇浓度0-100％，洗脱流速0.3ml/min；收集具有活性的乙醇洗脱峰，旋转蒸发回收乙醇溶剂，得到对α-葡萄糖苷酶具有强效抑制活性的组分。
本发明方法采用有机萃取和两步层析精致的联合工艺，最后得到对α-葡萄糖苷酶具有强效抑制活性的组分不仅可用于降糖药物的开发，而且也可以进行物质结构的进一步研究。本发明工艺简单，易于操作，纯度高，且产物不含有害物质，对环境无污染。
具体实施方式
下面将结合一下实施例对本发明作进一步的介绍：
实施例1
本实施例中α-葡萄糖苷酶抑制剂提取过程和步骤如下：
(1)首先将2g植物叶片进行粉碎；置250ml烧杯按1∶40(g/ml)比例加入50％乙醇溶液，室温震荡3h；室温，8000rpm/min离心20min，收获上清；植物残渣再加入50％乙醇溶液，反复3次重复提取；合并3次提取液；
(2)用旋转蒸发仪回收乙醇溶液，得0.72g固体，加100ml热水重溶；按1∶1比例加入乙酸乙酯溶液萃取，收集水相部分85ml；按1∶1比例在收获溶液中加入正丁醇溶液萃取，收集水相部分，旋干得0.48g固体，5ml热水重溶待用；
(3)上述样品上MARC(大孔吸附树脂)层析(填料高35cm，柱直径2.6cm)，用水-乙醇梯度洗脱，乙醇溶液浓度0-100％，洗脱流速0.4ml/min。分部收集洗脱液，活性检测后，收集30-40％乙醇洗脱峰，旋干后得固体0.42g，2ml热水重溶；
(4)MARC收获样品上sephadexLH-20层析柱(填料高90cm，柱直径1.6cm)，用水-乙醇梯度洗脱，乙醇溶液浓度0-100％，洗脱流速0.3ml/min。分部收集各乙醇洗脱峰，活性检测后，收获活性最高的部分，旋干后得固体0.06g。
实施例2
本实施例2的过程和实施例1完全相同，其步骤如下：
(1)首先将2g植物叶片进行粉碎；置250ml烧杯按1∶40(g/ml)比例加入50％乙醇溶液，室温震荡3h；室温，8000rpm/min离心20min，收获上清；植物残渣再加入50％乙醇溶液，反复3次重复提取；合并3次提取液；
(2)用旋转蒸发仪回收乙醇溶液，得0.81g固体，加100ml热水重溶；按1∶1比例加入乙酸乙酯溶液萃取，收集水相部分89ml；按1∶1比例在收获溶液中加入正丁醇溶液萃取，收集水相部分，旋干得0.52g固体，5ml热水重溶待用；
(3)上述样品上MARC(大孔吸附树脂)层析(填料高35cm，柱直径2.6cm)，用水-乙醇梯度洗脱，乙醇溶液浓度0-100％，洗脱流速0.4ml/min。分部收集洗脱液，活性检测后，收集40％乙醇洗脱峰，旋干后得固体0.45g，2ml热水重溶；
(4)MARC收获样品上sephadexLH-20层析柱(填料高90cm，柱直径1.6cm)，用水-乙醇梯度洗脱，乙醇溶液浓度0-100％，洗脱流速0.3ml/min。分部收集各乙醇洗脱峰，活性检测后，收获活性最高的部分，旋干后得固体0.07g；
由上述实施例中所得到的植物提取物在体外对α-葡萄糖苷酶的抑制试验叙述如下：
在试管中先后加入PH为6.8的100mM的磷酸钾缓冲液、0.044U/ml的α-葡萄糖苷酶5ul、一定量的植物提取抑制剂，用缓冲液调节反应总体系736ul，混匀后于37℃保温20min，再加入2.0mM对硝基苯-β-半乳糖苷(PNPG)64ul，在400nm连续测定1min，斜率即为酶的活力。抑制率为(未加抑制剂的酶活力-加抑制剂的酶活力)/未加抑制剂的酶活力×100％。该提取工艺最后结果如下表所示：
备注：步骤1.50％乙醇溶液提取；步骤2.乙酸乙酯萃取；步骤3.正丁醇萃取；步骤4.MARC层析；步骤5.SephadexLH-20层析。
Claims (1)
1.一种从植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂有效成分的方法，其特征在于该方法包括以下的工艺过程和步骤：
a、将青钱柳植物叶片进行粉碎，放入适当容器，按1∶40g/ml加50％乙醇溶液室温震荡3h，收集提取液，反复3次，合并收集提取液；旋干后，用适当体积蒸馏水加热重溶；
b、按体积比1∶1加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分另作处理；水相部分按1∶1加入正丁醇萃取，正丁醇部分另作处理，收集萃取物进行下一步处理；
C、上述萃取物旋干重溶，上大孔吸附树脂柱；用水-乙醇梯度洗脱，乙醇浓度0-100％；洗脱流速0.4ml/min；收集30-40％乙醇洗脱峰，进一步处理；
D、将步骤c部分旋干重溶，上sephadexLH-20柱；用水-乙醇梯度洗脱，乙醇浓度0-100％，洗脱流速0.3ml/min；收集具有活性的乙醇洗脱峰，旋转蒸发回收乙醇溶剂，得到对α-葡萄糖苷酶具有强效抑制活性的组分。
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