CN101233867A - 苦参碱水剂植物杀菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种苦参碱水剂植物杀菌剂及其制备方法，旨在提供一种以中草药为原料，对人畜无害、低毒超高效，苦参碱含量高，成本低的植物杀菌剂及其制备方法。包括含有苦参碱的中药提取液17－25份，乳化剂10－20份，渗透剂4－8份，抗氧化剂0.1份，去离子水48－56份，所述含有苦参碱的中药提取液为按重量份数由苦参30－35份，山豆根20－35份，茶籽10－15份，胡黄藤12－19份，山苍7－10份，黄柏6－9份，厚朴5－9份混合后的提取液。该杀菌剂中含有约2.6％的超高含量苦参碱，对杀灭梨黑星病有特效，渗透性强，有利于植物的吸收，高效、低毒、无残留、无污染、无抗药性。
Description
技术领域
本发明属于生物农药领域，更具体的说，是涉及一种苦参碱水剂植物杀菌剂及其制备方法。
背景技术
我国是世界人口最多的国家，又是一个农业大国。发展农村经济，开发农业及相关产业是我国的重要政策之一。长期以来，我国广大农村农产品生产基地，因大量使用化学农药所造成的三害，病虫害所产生的抗药性，成了农作物、植物的隐性疾病。农药残留对食物链及环境的污染日渐突出。三害问题不但制约了农业的发展，同时已严重地危及人类生命与健康，它所造成的危害是不可估量的。长期使用化学制剂农药对环境及相关产业的危害，在人们生活各方面显现出来。为了制约这些危害，农业部在2007年销毁五种化学农药。甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效磷和硫胺等高毒有机磷农药，将涉及到288个农药制剂停止在农作物上使用。因此，绿色植物杀虫剂、杀菌剂将成为主要的发展方向，有广阔的市场发展前景。
现有的植物杀菌剂在农作物上使用时用量大，亩成本高，每亩地要使用250-500克，劳动力付出高，不是定向专杀。
发明内容
本发明是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种以中草药为原料，对人畜无害、低毒超高效，苦参碱含量高，使用成本低的苦参碱水剂植物杀菌剂。
本发明的另一个目的是提供一种苦参碱水剂植物杀菌剂的制备方法。
本发明通过下述技术方案实现：
一种苦参碱水剂植物杀菌剂，其特征在于，按重量份数包括含有苦参碱的中药提取液17-25份，乳化剂10-20份，渗透剂4-8份，抗氧化剂0.1份，去离子水48-56份组成，所述含有苦参碱的中药提取液为按重量份数以苦参30-35份，山豆根20-35份，茶籽10-15份，胡黄藤12-19份，山苍7-10份，黄柏6-9份，厚朴5-9份混合后为原料的提取液，其中每毫升含有苦参碱的中药提取液相当于1.25克生药。
所述乳化剂为中国农科院生产的BCM-101乳化剂，所述渗透剂为高金噻酮，所述抗氧剂为北京昌化伟业北京三九化工有限公司生产的FF-04抗氧剂。
在上述配方中按重量份数还可以加入二甲基亚砜1-5份作为消抗剂。
一种上述苦参碱水剂植物杀菌剂的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
(1)按重量份数称取苦参、山豆根、茶籽、胡黄藤、山苍、黄柏、厚朴，在水中浸泡1.5小时后，加热到40-50℃，保持20分钟，加入纤维素酶进行酶解，使苦参碱充分溶出，之后过滤得到中药液；其中，苦参30-35份，山豆根20-35份，茶籽10-15份，胡黄藤12-19份，山苍7-10份，黄柏6-9份，厚朴5-9份。所述纤维素酶的用量可以按照常规生产工艺确定，按重量份数最好为0.3-0.4份，纤维素酶的活力单位最好为100U，酶解条件为40℃恒温保持2.2小时。
(2)在上述中药液中加入木瓜蛋白酶进行澄清，澄清后的液体静置过滤后55-60℃低温真空浓缩至每毫升药液相当于1.25克生药，得到含有苦参碱的中药提取液。澄清剂木瓜蛋白酶的用量可以按照常规生产工艺确定。
(3)按重量份数取上述含有苦参碱的中药提取液17-25份投入罐中，在20℃开始搅拌，并依次加入乳化剂10-20份、渗透剂4-8份、抗氧剂0.1份、二甲基亚砜1-5份，去离子水48-56份缓慢升温至40℃继续搅拌20分钟，然后降温至20℃，再继续搅拌40分钟得到本发明的植物杀菌剂。所述乳化剂为中国农科院生产的BCM-101乳化剂，所述渗透剂为高金噻酮，所述抗氧剂为北京昌化伟业北京三九化工有限公司生产的FF-04抗氧剂。
本发明具有下述技术效果：
苦参为纯天然植物，具有清热解毒、杀虫的功能。本发明的苦参碱水剂植物杀菌剂中含有重量百分比约为2.6％的超高含量苦参碱，对杀灭梨黑星病有特效。通过选用合适的乳化剂、渗透剂、抗氧剂、二甲基亚砜等助剂，使苦参碱发挥最大限度的混合药力，渗透性强，有利于植物的吸收，亩成本低，每亩地只用23-30克，高效、低毒、无三害、无残留、无污染、无抗药性，不伤害害虫天敌，是纯天然绿色植物农药。适用各种果树、茶树、柑橘、棉花等作物，对人畜无毒、无害、无副作用，能够促生长，达到增产10-15％的效果。
通过本发明的方法制备的植物杀虫剂能有效保证杀虫剂中各中药成分的活性，使各种中药成分的作用得到充分发挥，达到高效的目的。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明详细说明。
实施例1
将经过筛选的苦参、山豆根、茶籽、胡黄藤、山苍、黄柏、厚朴去除杂质，粉碎成粗粉。取苦参35kg、山豆根20kg、茶籽10kg、胡黄藤19kg、山苍7kg、黄柏6kg、厚朴9kg投入到提取罐内，加入原料4倍体积的水浸泡1.5小时后，加热到40-50℃，保持20分钟。加入质量百分比浓度为2％活力单位为100U的纤维素酶20kg，40℃恒温保持2.2小时进行酶解，之后过滤得到中药液。在上述中药液中加入质量百分比浓度为8％的木瓜蛋白酶6.4kg进行澄清，澄清后的液体静置过滤后55-60度低温真空浓缩至每毫升药液相当于1.25克生药，得到含有苦参碱的中药提取液。
取上述含有苦参碱的中药提取液21kg，投入至合成罐中。温度控制在20℃开动搅拌，依次加入乳化剂BCM-101 20kg、渗透剂高金噻酮4kg、抗氧剂FF-04 0.1kg、二甲基亚砜1kg、去离子水54kg，缓慢升温至40℃，继续搅拌20分钟，然后降至20℃。再继续搅拌40分钟出料包装即可得到本发明的植物杀菌剂。
实施例2
制备过程与实施例1相同，其中苦参30kg、山豆根30kg、茶籽15kg、胡黄藤17kg、山苍8kg、黄柏7kg、厚朴7kg，质量百分比浓度为2％活力单位为100U的的纤维素酶20kg，质量百分比浓度为8％的木瓜蛋白酶6.4kg。含有苦参碱的中药提取液17kg，乳化剂BCM-101 18kg、渗透剂高金噻酮8kg、抗氧剂FF-04 0.1kg、去离子水56kg。
实施例3
制备过程与实施例1相同，其中苦参32kg、山豆根35kg、茶籽12kg、胡黄藤12kg、山苍10kg、黄柏9kg、厚朴5kg，质量百分比浓度为2％活力单位为100U的的纤维素酶20kg，质量百分比浓度为8％的木瓜蛋白酶6.4kg。含有苦参碱的中药提取液25kg，乳化剂BCM-101 10kg、渗透剂高金噻酮6kg、抗氧剂FF-04 0.1kg、二甲基亚砜5kg、去离子水54kg。
实施例4
制备过程与实施例1相同，其中苦参34kg、山豆根25kg、茶籽11kg、胡黄藤15kg、山苍9kg、黄柏8kg、厚朴6kg，质量百分比浓度为2％活力单位为100U的的纤维素酶20kg，质量百分比浓度为8％的木瓜蛋白酶6.4kg。含有苦参碱的中药提取液25kg，乳化剂BCM-101 15kg、渗透剂高金噻酮7kg、抗氧剂FF-04 0.1kg、二甲基亚砜4kg、去离子水48kg。
实施例5
制备过程与实施例1相同，其中苦参33kg、山豆根28kg、茶籽13kg、胡黄藤16kg、山苍8kg、黄柏7kg、厚朴8kg，质量百分比浓度为2％活力单位为100U的的纤维素酶20kg，质量百分比浓度为8％的木瓜蛋白酶6.4kg。含有苦参碱的中药提取液22kg，乳化剂BCM-101 16kg、渗透剂高金噻酮5kg、抗氧剂FF-04 0.1kg、二甲基亚砜2kg、去离子水55kg。
将上述实施例1制备的植物杀菌剂命名为2.6％苦参碱水剂委托天津市植物保护研究所对梨黑星病菌进行的杀菌剂毒力测定报告如下：
1试验目的
凹玻片法测定2.6％苦参碱水剂对梨黑星病菌(Venturia nashicola)的抑菌活性。
2试验条件
2.1供试靶标
梨黑星病菌(Venturia nashicola)，天津市植物保护研究所植病室保存。
2.2仪器设备
2.2.1电子天平(感量0.1mg)、离心机、显微镜、培养箱(LRH-250A生化培养箱)载玻片、凹玻片、培养皿、计数器、移液管(1ml、10ml)、微量移液器(量程5-20μl)。
3试验设计
3.1试材准各
将梨黑星病菌在PDA培养基上培养5d后，产生大量孢子后备用。
3.2试剂
3.2.1试验药剂
2.6％苦参碱水剂即本发明实施例1的植物杀菌剂，天津市恒源伟业生物科技发展有限公司提供。
3.1.2对照药剂
95.1％甲基硫菌灵原药(通用名thiophanateme-thyl)，天津市施普乐农药技术发展有限公司提供。
3.1.3其他试剂
溶剂：无水乙醇、丙酮；乳化剂：吐温80，用无菌水配制成0.05％吐温80无菌水溶液。
4试验方法
4.1孢子悬浮液配制
将培养好的梨黑星病菌孢子用无菌的去离子水从培养基上洗脱、过滤、离心(1000r/min)5min，倒去上清液，加入去离子水，再离心。最后用去离子水稀释为1×105个孢子，并加入0.5％葡萄糖溶液。
4.2药剂配制
先进行预备试验，初步找出抑菌率为10-80％时的药剂浓度，据此设定浓度梯度。用万分之一天平分别称取药剂。试验药剂用无水乙醇溶解，用无菌水稀释；甲基硫菌灵用少量丙酮溶解(溶剂的最终含量＜0.5％)，再用含0.05％吐温80的无菌水稀释成10000ppm的母液。再依次稀释成不同的浓度梯度。药剂的浓度梯度见表2。
4.3药剂处理
用移液器从低浓度到高浓度，依次吸取药液0.5ml分别加入小试管，吸取制备好的孢子悬浮液0.5ml，使药液与孢子悬浮液等量混合均匀。用微量移液器吸取混合液滴到凹玻片上，然后架放于带有浅水层的培养皿内，加盖保湿培养于20℃的培养箱内，三次重复。试验设不含药剂只含0.05％吐温80表面活性剂的处理作空白对照。
5数据调查与统计分析
5.1调查
5.2调查时问和次数
处理后24h，对照孢子萌发达到90％以上时，调查各处理孢子萌发情况，共调查1次。每处理各重复随机观察3个以上视野，调查孢子总数不少于200个，分别记录萌发数和孢子总数。
5.3数据计算和统计分析
根据调查数据计算各处理的孢子萌发相对抑制率。按如下公式计算。
空白对照孢子萌发率％＝孢子萌发数×100/调查的孢子总数
处理校正孢子萌发率％＝处理孢子萌发率×100/空白对照孢子萌发率
孢子萌发相对抑制率％＝(空白对照孢子萌发率-处理校正的孢子萌发率)×100/空白对照孢子萌发率
5.4统计分析
根据各药剂的浓度对数值及对应的孢子萌发相对抑制率值作回归分析，计算各药剂的EC50，EC90值及其95％置信限。
6试验结果与讨论
试验结果如表1和表2所示。表1、表2的结果表明，试验药剂对梨黑星病菌的孢子萌发有较好的抑制作用，空白对照的孢子萌发率平均达94.25％。试验药剂的EC50值为60.66μg/ml，EC90值为2547.58μg/ml，对照药剂95.1％甲基硫菌灵的抑菌效果好于苦参碱，其EC50值为2.14μg/ml，EC90值为52.55μg/ml。
本发明实施例1的植物杀菌剂对梨黑星病菌孢子有明显的抑制作用。其机理是抑制菌体生物合成，影响菌体的生物氧化过程。对照药剂甲基硫菌灵作用方式均为内吸性杀菌，具保护和治疗作用。甲基硫菌灵的作用机理为干扰病菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂。
试验药剂中含有的苦参碱目前生产上应用较少，不容易产生抗药性，而且属于植物源药剂，因此该药剂具有广阔的应用前景。
表1
| 药剂 | 浓度 | 浓度对数 | 孢子萌发率％ | 校正孢子萌发率％ | 孢子萌发相对抑制率％ | 校正抑制率几率值 |
| 试验药剂 | 200 | 2.3010 | 29.33 | 31.12 | 66.98 | 5.4394 |
| 100 | 2.0000 | 38.5 | 40.85 | 56.66 | 5.1677 | |
| 50 | 1.6990 | 49.25 | 52.25 | 44.56 | 4.8631 | |
| 10 | 1.0000 | 62.33 | 66.13 | 29.83 | 4.4708 | |
| 5 | 0.6990 | 72.5 | 76.92 | 18.38 | 4.0992 | |
| 95.1％甲基硫菌灵 | 100 | 2.0000 | 5.33 | 5.66 | 94.00 | 6.5548 |
| 50 | 1.6990 | 10.33 | 10.96 | 88.37 | 6.1937 | |
| 10 | 1.0000 | 18.25 | 19.36 | 79.46 | 5.8223 | |
| 5 | 0.6990 | 38.5 | 40.85 | 56.66 | 5.1677 | |
| 1 | 0.0000 | 54.33 | 57.64 | 38.84 | 4.7165 | |
| CK | 94.25 |
表2
| 药剂 | 回归方程及相关系数(r) | EC50(μg/ml) | EC90(μg/ml) | 95％置信限(μg/ml) | 标准误SE |
| 试验药剂 | Y＝3.5923+0.7895xr＝0.9931 | 60.66 | 2547.58 | 41.54～88.58 | 11.72 |
| 95.1％甲基硫菌灵 | Y＝4.6963+0.9214xr＝0.9827 | 2.14 | 52.55 | 0.93～4.93 | 0.91 |
Claims (6)
1、一种苦参碱水剂植物杀菌剂，其特征在于，按重量份数包括含有苦参碱的中药提取液17-25份，乳化剂10-20份，渗透剂4-8份，抗氧化剂0.1份，去离子水48-56份组成，所述含有苦参碱的中药提取液为按重量份数以苦参30-35份，山豆根20-35份，茶籽10-15份，胡黄藤12-19份，山苍7-10份，黄柏6-9份，厚朴5-9份混合后为原料的提取液，其中每毫升含有苦参碱的中药提取液相当于1.25克生药。
2、根据权利要求1所述的苦参碱水剂植物杀菌剂，其特征在于，所述乳化剂为BCM-101，所述渗透剂为高金噻酮，所述抗氧剂为FF-04。
3、根据权利要求1或2所述的专杀蚜虫的苦参碱水剂植物杀虫剂，其特征在于，按重量份数还含有二甲基亚砜1-5份。
4、一种权利要求1所述的苦参碱水剂植物杀菌剂的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
(1)按重量份数称取苦参、山豆根、茶籽、胡黄藤、山苍、黄柏、厚朴，在水中浸泡1.5小时后，加热到40-50℃，保持20分钟，加入纤维素酶进行酶解，过滤得到中药液；其中，苦参30-35份，山豆根20-35份，茶籽10-15份，胡黄藤12-19份，山苍7-10份，黄柏6-9份，厚朴5-9份；
(2)在上述中药液中加入木瓜蛋白酶进行澄清，澄清后的液体静置过滤后低温真空浓缩至每毫升药液相当于1.25克生药，得到含有苦参碱的中药提取液；
(3)按重量份数取上述含有苦参碱的中药提取液17-25份投入罐中，在20℃开始搅拌，并依次加入乳化剂10-20份、渗透剂4-8份、抗氧剂0.1份、二甲基亚砜1-5份，去离子水48-56份缓慢升温至40℃继续搅拌20分钟，然后降温至20℃，再继续搅拌40分钟得到本发明的植物杀菌剂。
5、根据权利要求4所述的苦参碱水剂植物杀菌剂的制备方法，其特征在于，所述纤维素酶按重量份数为0.3-0.4份，纤维素酶的活力单位在100U，酶解条件为40℃恒温保持2.2小时。
6、根据权利要求4所述的苦参碱水剂植物杀菌剂的制备方法，其特征在于，所述乳化剂为BCM-101，所述渗透剂为高金噻酮，所述抗氧剂为FF-04。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20080806 |