CN101230327A - 一株可产生铁载体的植物病原真菌拮抗菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株植物病原真菌拮抗菌及其在防治植物病害中的应用。该植物病原真菌拮抗菌为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244。该植物病原真菌拮抗菌鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCCNo.2244在可以防治香蕉枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、橡胶棒孢霉落叶病菌、芒果炭疽病菌、竹子镰刀病菌引起的植物病害；特别是可以与香蕉共生，在香蕉体内稳定的生存并防治香蕉炭疽病菌、香蕉枯萎病菌。

Description

一株可产生铁载体的植物病原真菌拮抗菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株可产生铁载体的植物病原真菌拮抗菌及其应用，特别涉及一株可产生铁载体的植物病原真菌拮抗菌及其在防治植物病害中的应用。
背景技术
植物内生细菌是指一生或至少一生中的某一阶段能进入活体植物组织内，且它们的存在并未使植物组织的表型特征和功能有明显改变的细菌。1926年Perotti在许多健康植物根组织内发现内生细菌，随后这方面的研究有了很大进展，在许多植物的组织内发现了多种内生细菌。这些内生细菌将植物组织作为其栖息场所，且往往对宿主植物起到促生、防病虫、固氮、抗逆境(如干旱等)、抗动物(昆虫、线虫、食草哺乳动物等)摄食，抗病原真菌和细菌等作用，能够产生对宿主有利的活性代谢产物，还可作为外源基因载体而发挥作用，与病原菌不同，和植物是一种互利共生关系。
内生细菌在宿主植物体内稳定存在，并能长期发挥作用，因而利用拮抗性内生细菌进行病害防治有几个优点。首先，和抗病育种相比，拮抗性内生细菌能够起到类似抗病基因的作用而不需要进行抗病基因的分离以及相关的转基因试验操作，节省时间和资金，也不需要考虑转基因食品的生物安全性问题。其次，内生细菌存在于植物体内，和植物共生，基本不受外界环境(干燥、紫外线辐射、营养缺乏等)的影响，利用它进行病害防治不必考虑常规生物防治的防效稳定性问题。第三，内生菌在植物体内稳定存在，只需接种一次即可长期起到防病效果，和化学农药防治相比成本较低而且不存在环境污染问题。近年来，利用内生细菌进行植物病害的生物防治已经成为人们研究的热点。植物内生细菌生防机制主要有产生抗生素、竞争生态位和营养、诱导宿主产生系统抗性、灭活病菌萌发因子、产生胞外酶溶解病原菌细胞壁和降解毒素等几种方式。铁是生物生长所必须的营养因子之一，有些微生物能够产生一种特殊的能与铁结合的有机化合物，称为铁载体。它的主要基团是儿茶酚及异羟肟酸的衍生物，能牢固地与3价铁结合，溶解3价铁并将铁转运入细胞。有些内生细菌能产生铁载体，它在与不能产生铁载体或产生铁载体较少的有害微生物竞争铁素时占有优势，使它们得不到铁素而受抑制，从而改善宿主植物的营养，促进植物的生长，在铁素贫乏的土壤中这种效果更为明显。
香蕉炭疽病是全世界香蕉产区最重要的采后病害，主要为害成熟或近成熟果实，尤以为害贮运期的果实最烈，也为害花、根、假茎、地下球茎及果轴等部位。该病发生时，经常在果实上近果肩处出现黑点或黑褐色水渍状病斑，后扩大或几个斑点愈合成不规则大斑进一步扩展深入果皮内部，形成黑点，影响蕉果膨大和成熟，并在贮藏、运输和催熟期间腐烂变质。病菌具潜伏侵染特性，一旦感染，果皮及果肉变褐腐烂，品质降低，果实不耐贮运，货架期缩短。当病情急剧发展时，果实会迅速烂掉，损失惨重。香蕉炭疽病的病原菌为香蕉盘长孢(Gloeosporium musarum Cookeet Mass)，属半知菌亚门，腔孢纲。病菌以菌丝体和分生孢子盘在病叶和病残体上存活越冬，以分生孢子借风雨传播进行初侵染与再侵染。病菌生长最适温度为25～30℃，在果上病害发展最适温度约为32℃，一般香蕉产区温度条件都比较适宜。发病的决定因素是湿度，在多雨、大雾以及园圃潮湿的条件下，或贮运期气温高、湿度大往往发病严重。在自然条件下，病菌只产生无性阶段，分生孢子长椭圆形，无色单孢，聚一起时呈粉红色。目前主要用灭病威可湿性粉剂、多菌灵可湿性粉剂、石灰少量式波尔多液等农药直接处理果实进行防治，对果实的品质造成了很大影响并带来了农药残留问题，直接影响香蕉的品质与出口价格。采用拮抗性内生细菌防治植物病害因其独有的特点而成为当前的研究热点，已经有很多这方面的报道，但是直接运用香蕉内生细菌来防治香蕉炭疽病目前还未见报道。
铁载体是微生物分泌的用以吸收环境中铁离子的一种低分子量的化合物，而且它们抑制病原菌的作用方式可能仅仅是与病原体竞争对铁的利用。铁载体能够诱导系统的抗性。
发明内容
本发明的目的是提供一株植物病原真菌拮抗菌及其在防治植物病害中的应用。
本发明所提供的植物病原真菌拮抗菌为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244。
所述鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3，已于2007年11月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区大屯路)，保藏号为CGMCC No.2244。
所述鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244为革兰氏阴性杆菌，菌体大小约0.8～1.5×1.8～2.5μm之间，无芽孢，单生鞭毛，能运动。菌体在NA培养基平板上能形成浅白色的菌落，菌落突起，粘稠，湿润，边缘锯齿状，能产生铁载体。
所述鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244最适培养基为King B2培养基；培养温度为28～33℃，最适温度为33℃，最适PH值5.5。
以上述鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244为活性成分的生物菌剂也属于本发明的保护范围。在需要的时候，该菌剂中还可包含菌剂制备中常用的载体和辅料。
实验证明，本发明的植物病原真菌拮抗菌为鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)BEB3 CGMCC No.2244，对香蕉枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、橡胶棒孢霉落叶病菌、芒果炭疽病菌、竹子镰刀菌等病原真菌都有很强的抑菌作用，可以对这些病原菌引起的真菌病害起到防治作用。
本发明的植物病原真菌拮抗菌为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3CGMCC No.2244，分离自健康的香蕉植株体，是一株香蕉内生细菌，实验证明该菌株接种香蕉后能够在香蕉植株内部稳定存在。实验结果还证明该菌株能够有效抑制香蕉枯萎病菌和香蕉炭疽病菌的生长，表明该菌株能够有效防治香蕉枯萎病菌和香蕉炭疽病菌，有望为香蕉枯萎病菌、香蕉炭疽病菌的防治提供了一条环保、简单、有效的途径。本发明的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCCNo.2244是一株具有良好的生防应用前景的菌株。
附图说明
图1为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244和香蕉炭疽病菌的对峙培养试验结果；图中1为大肠杆菌，2为香蕉炭疽病菌，3为BEB3菌株。
图2为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌液对香蕉炭疽病菌的抑菌作用；图中左图为香蕉炭疽病菌在BEB3平板上的生长情况；右图为对照组香蕉炭疽菌。
图3为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244产铁载体实验；图中，左图为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCCNo.2244在铁载体培养基上产生的水解圈，箭头指的是产生的水解圈，右图为对照没有水解圈。
具体实施方式
下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。
实施例1、植物病原真菌拮抗菌的筛选及其鉴定
1、植物病原真菌拮抗菌的筛选
本菌株是从我国海南乐东县健康香蕉植株内部分离到的，具体方法为：称取健康香蕉植株组织1g，表面消毒后，放入有10mL无菌水的灭菌研钵中，加入少许灭菌的石英砂研磨均匀，静置15min。取1mL稀释至10-3、10-4、10-5浓度梯度，从各浓度梯度悬浮液中取0.1mL，用无菌涂布棒涂于NA培养基(配方为：每升含有蛋白胨5g，酵母浸膏1g，牛肉膏3g，琼脂粉10g，蔗糖10g，pH 7.0～7.2)平板上，以最后1次洗过样品的无菌水为对照。28℃倒置培养，连续观察7天，挑取菌落形态不同的菌株，再次划线纯化保存备用。在倒好的PDA平板中央接入新鲜的香蕉炭疽病菌(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号ACCC No.31247)菌块，在另一侧划线接种筛选纯化后的菌株，对峙培养，同时另一侧接种大肠杆菌为对照，筛选抑菌作用最强(抑菌活性最强)的菌株，结果得到一株对香蕉枯萎病菌具有很强拮抗作用的菌株，将该菌株命名为BEB3，BEB3对香蕉炭疽病菌拮抗作用结果如图1所示，图1中，1为大肠杆菌，2为香蕉炭疽病菌，3为BEB3。
2、BEB3菌株的种属鉴定
采用常规生理生化及16s DNA对BEB3菌株进行鉴定，确认该菌株应属于鲍曼不动杆菌。该菌株的基本生物学特性见表1。
表1.BEB3菌株的基本生物学特性
  菌体大小   0.8～1.5×1.8～2.5μm   pH值范围   4～10
  菌落颜色   白色   最适pH值   5.5
  菌落形状   湿润、光滑、稍突起   葡萄糖   +
  革兰氏   G   蔗糖   +
  鞭毛   极生   乳糖   +
  荚膜   有   D-果糖   +
  芽孢   无   甘露糖   +
  抗酸性   阳性   鼠李糖   +
  接触酶反应   阳性   D-木糖   +
  需氧性测定   好氧   甜醇   -
  VP试验   阴性   甘露醇   +
  淀粉水解   阴性   苹果酸   +
  硝酸盐还原   阳性   尿素   +
  精氨酸双水解酶   阳性   硝酸钾   -
  明胶液化   阴性   草酸铵   +
  葡萄糖氧化发酵   阳性   氯化铵   +
  温度生长范围   10℃～60℃   干洛素   -
  最适温度   33℃   牛肉膏   +
  蛋白胨   +
注：+表示能够利用该炭源(或氮源)，-表示不能利用
显微观察结果表明BEB3菌体大小约0.8～1.5×1.8～2.5μm之间，革兰氏染色阴性，无芽孢，极生鞭毛，能运动。在NA培养基上初期为白色，4天后变为淡黄色，菌落突起，粘稠，湿润，边缘锯齿状。生化试验结果表明，BEB3能氧化葡萄糖产酸，具有运动性，好氧，V-P反应阴性，接触酶反应呈阳性，能还原硝酸盐，能在含1％-7％氯化钠的NA培养液中生长，依据《常见细菌鉴定手册》，BEB3菌株以上生理生化特征均与鲍曼不动杆菌相同，将其命名为鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)BEB3。该鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3菌株，已于2007年11月02日保藏于中国微生物菌种保藏管委理员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区大屯路)，保藏号为CGMCC No.2244。
以鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244的基因组DNA为模板，以细菌16S rDNA序列通用引物作为引物，PCR扩增出约为0.7kb左右的产物片段，测序结果表明序列长度为731个碱基，具有序列表中序列1的核苷酸序列；将该序列与鲍曼不动杆菌属的其他菌株进行blast对比，结果表明鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3的16S rDNA序列与Acinetobacter baumanniistrain 29108CMCC(B)(AY738399.2)16S rDNA序列的同源性为100％。
3、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244最适培养条件的确认
1)鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244生长最适培养基的确定
分别将100μL的菌株BEB3(OD600＝0.5，OD600为紫外可见分光光度计测波长为600时的OD值)分别接种在PDB(每1000mL含有马铃薯200g，葡萄糖20g，pH7.0)、NB(每1000mL含有蛋白胨5g，酵母浸膏1g，牛肉膏3g，蔗糖10g，pH 7.0～7.2)、LB(每1000mL含有胰蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母提取物5g，pH 7.0)、玉米粉(每1000mL含有玉米粉30g)、胡萝卜(每1000mL含有新鲜胡萝卜200g)、King B2(每1000mL含有蛋白胨20g，甘油10ml，K2HPO4 1.5g，MgSO4.7H2O 1.5g)液体培养基中，摇床(28℃、180r/min)培养24h，用紫外可见分光光度计测波长为600时的OD值，结果如表2所示，结果表明各种培养基所获菌液OD600值差别不大，用King B2培养基培养所获得的菌液OD600值最大，为2.758，表明该培养基为其生长最适培养基。
表2.BEB3菌株在不同培养基条件下的生长状况
  培养基   胡萝卜   NB   LB
  OD600值   2.421±0.121   2.532±0.063   2.487±0.085
  培养基   玉米粉   King B2   PDB
  OD600值   2.469±0.114   2.758±0.049   2.511±0.073
2)鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌株生长最适温度的确定
按照步骤1)所述的方法，将15份100μL OD600值为0.5的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌液分别接种于15个装有200mlNB液体培养基的500mL三角瓶中，在不同温度(10～60℃，具体取值如表3所示)条件下180rpm恒温培养24小时后测量其OD600值。结果如表3所示，结果表明在28～33℃培养时，所获菌液OD600值为2.587～2.758，表明该菌株培养温度28～33℃为宜，最适温度为33℃，OD600值为2.758。
表3.BEB3菌株在不同温度条件培养时生长状况
  温度   10℃   15℃   20℃   24℃   26℃
  OD600值   0.395±0.028   1.687±0.065   2.013±0.078   2.355±0.096   2.412±0.127
  温度   28℃   30℃   33℃   36℃   39℃
  OD600值   2.587±0.089   2.633±0.067   2.758±0.119   2.461±0.213   2.221±0.079
  温度   42℃   45℃   50℃   55℃   60℃
  OD600值   1.845±0.056   1.516±0.168   1.065±0.097   0.595±0.132   0
3)鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244生长最适pH值的确定
按照步骤1)所述的方法，将14份100μL OD600值为0.5的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌液分别接种于14个装有200mLNA液体培养基的500mL三角瓶中，分别将培养液调节至起始pH值(3～11，如表4所示)条件下，180rpm 28℃培养24小时后用分光光度计测量其OD600值。结果如表4所示，结果表明在培养基pH值5.5～6.5培养时，菌液OD600值为2.531～2.758，表明该菌株培养PH值以5.5～6.5为宜，最适pH值为5.5，OD600值达2.758。
表4.BEB3菌株在不同pH值时生长状况
  pH值   3   4   5   5.5   6
  OD600值   0   0.937±0.045   1.875±0.065   2.758±0.087   2.587±0.092
  pH值   6.5   7   7.5   8   8.5
  OD600值   2.531±0.132   2.451±0.067   2.221±0.012   2.017±0.069   1.516±0.189
  pH值   9   9.5   10   11
  OD600值   1.489±0.084   1.368±0.062   0.735±0.019   0
注：OD600值是接种BEB3菌体接种后，28℃、180rpm、不同PH条件下培养24小时后所测数据
实施例2、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244产铁载体检测
有些微生物能够产生一种特殊的能与铁结合的有机化合物，称为铁载体。它的主要基团是异羟肟酸的衍生物或者是儿茶酚，能牢固地与3价铁结合，溶解3价铁并将铁转运入细胞。
通过下述实验检测本发明鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3CGMCC No.2244产铁载体能力
1、铁载体培养基平板的制备(配置过程中所用的容器和用具都要经过6N的HCl溶液浸泡，双蒸水淋洗)：
1)首先制备10×MM9培养基(配方为：磷酸二氢钾3g，氯化钠5g，氯化铵10g，双蒸水1000ml)，121℃，20min高压灭菌。
2)取10mmol/L十六烷基三甲基溴化铵(HDTMA)溶液6ml加入100ml容量瓶内并用双蒸水稀释至50ml；
3)再取1.5ml 1mmol/L FeCl3溶液与7.5ml 2mmol/L刃天青(CAS)溶液混匀后，沿玻棒缓慢加入至步骤2)所述装有十六烷基三甲基溴化铵(HDTMA)溶液的容量瓶中；
4)称取4.307g无水双二甲胺溶解于约30ml双蒸水中，再小心加入6.25ml 12mmol/L HCl，即得pH 5.6缓冲液。将此溶液转入步骤3)所述的容量瓶中，并用双蒸水定容至100ml。
5)在步骤4)得到的溶液中加入步骤1)制备的10×MM9 100ml、NaOH 6.0g、PIPEs 30.24g、琼脂20g以及双蒸水750ml，调pH至7.4-7.8。高压蒸汽灭菌20min，冷却至50℃。
6)在一个无菌三角瓶中加入下列经过过滤除菌的试剂：10％去铁的水解酪蛋白30ml、20％葡萄糖10ml、1mol/L MgCl2 1ml以及0.1mol/L CaCl2 1ml，混匀后，缓慢加入100ml步骤5)得到的溶液，混匀后倒平板，即得铁载体培养基平板。
2、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244产铁载体检测
将直径为5mm的灭菌滤纸放入铁载体培养基平板中，在滤纸接种鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌株，放入28℃的培养箱中倒置培养5天，如果细菌能够产生铁载体，则能利用培养基中的铁离子，产生水解圈。以枯草芽孢杆菌(购买自中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCCNo.1.762)为对照，结果如图3所示。结果表明，该鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)BEB3 CGMCC No.2244培养5天后，接种有鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌体的滤纸片(图3中左)周围产生一个半透明的水解圈，表明该鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌株能产生铁载体，而对照菌株则没有水解圈产生，图3中左为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244在铁载体培养基上产生的水解圈(箭头示)；图3中右为对照没有水解圈。
实施例3、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244对病原真菌的拮抗作用效果实验
分别取用NB培养基培养好的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3CGMCC No.2244菌液(28℃，摇床培养24小时，OD600值约为2.5)2mL倒入冷却至45℃左右的15mL PDA培养基中，轻轻摇动使鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)BEB3菌液与培养基充分混匀，倒入直径为9cm的培养皿中，冷却制成平板，分别将直径5mm的供试病原菌菌块(香蕉枯萎病菌(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号ACCC No.31272)、香蕉炭疽病菌(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号ACCC No.31247)、水稻稻瘟病菌(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号ACCC No.30320)、橡胶棒孢霉落叶病菌(购买自中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCC No.3.10072)、芒果炭疽病菌(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号ACCCNo.31219)、竹子镰刀菌(购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号ACCCNo.31353)接入上述制备的平板中央(每个平板接一种菌)，置28℃下暗培养(处理组)，以加入2mL无菌水的培养基培养的菌块为对照，每处理3次重复，培养至对照病原菌长满皿后测量病原菌生长距离，计算平均抑菌效果。抑制率(％)＝[(对照组病原菌生长直径-处理组病原菌生长直径)/(对照组病原菌生长直径-接种菌饼直径)]×100％。结果该菌株对香蕉炭疽病菌的抑制率为87.1％(香蕉炭疽病菌抑制试验结果照片如图2所示，图2中左为香蕉炭疽病菌在BEB3平板上的生长情况；右为对照组香蕉炭疽菌)，对其余几种病原菌的抑制率在53.7～85.5％之间，表明该菌株对多种病原真菌具有很强的拮抗活性(结果见表5)。
表5.鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3对各种病原真菌的抑菌率
  病原菌   抑菌率(％)   病原菌   抑菌率(％)
  香蕉枯萎病菌   70.2±2.9   橡胶棒孢霉落叶病菌   65.4±1.5
  香蕉炭疽病菌   87.1±6.1   芒果炭疽病菌   85.3±1.7
  水稻稻瘟病菌   85.5±1.2   竹子镰刀菌   53.7±0.9
实施例3、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244的内生性测定
1、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244的氯霉素和链霉素耐性的获得
将鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244接种至含有10μg/mL氯霉素与10μg/mL链霉素的NB培养液中，摇菌培养约48小时至菌液变浑，取少量培养的菌液接种至含有20μg/mL氯霉素与20μg/mL链霉素的NA培养液中，摇菌培养约48小时至菌液变浑。按此方法逐步增加氯霉素和链霉素的浓度进行培养，最终获得能在含有100μg/mL氯霉素与链霉素的NB培养液中正常生长的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244菌体，按照实施例1中的方法确认该菌体的生物学特性以及抑菌活性与鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)BEB3 CGMCC No.2244相当后4℃保存备用。
2、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244内生性测定
将获得的耐氯霉素与链霉素的BEB3菌体(28℃、180rpm，NB培养液培养至OD600值约0.5)通过针刺接种于苗期的香蕉叶片内，分别于第3、5、7、9、15、20、25、30天对接种植株取样(距接种部位约3～5cm处)表面消毒后研磨均匀取100μL的研磨液涂布于分别含有100μg/mL的氯霉素与100μg/mL链霉素的NA培养基平板上，28℃下培养5天，以接种了无菌水的香蕉苗为对照。结果在各个时间段所取样品制备研磨液后，涂布有接种了步骤1获得的氯霉素与链霉素耐性的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3菌体的香蕉苗样品的研磨液的平板上均获得了和接种时一样的单一白色菌落，经检测其拮抗活性以及产铁载体能力与初始菌株鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3一致，经按照实施例1中的方法确认该菌体的生物学特性以及抑菌活性，表明该菌落为鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)BEB3的氯霉素与链霉素耐性菌体，而涂布有接种了无菌水的抗性平板上没有菌体生长，表明该菌株能够在香蕉植株内部稳定存在并正常繁殖。
序列表
Figure S2008101012706D00111

Claims (6)

1.菌鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244。
2.鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244在防治植物病害中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述植物病害为香蕉枯萎病菌和/或香蕉炭疽病菌和/或水稻稻瘟病菌和/或橡胶棒孢霉落叶病菌和/或芒果炭疽病菌和/或竹子镰刀病菌引起的植物病害。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述植物病害为香蕉枯萎病菌和/或香蕉炭疽病菌引起的香蕉病害。
5.鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244在抑制利用铁元素营养的植物病原菌中的应用。
6.以鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)BEB3 CGMCC No.2244为活性成分的生物菌剂。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102250789A (zh) * 2011-05-31 2011-11-23 黑龙江大学 一株高效降解甲氧咪草烟的鲍曼不动杆菌
CN107410217A (zh) * 2017-05-16 2017-12-01 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 木薯单爪螨实验种群的饲养装置及方法
CN111642338A (zh) * 2020-05-26 2020-09-11 广东省农业科学院果树研究所 一种利用接种丛枝菌根真菌促进香蕉苗生长的方法
CN114208784A (zh) * 2022-01-21 2022-03-22 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一种基于两种波长光源交替引诱椰心叶甲成虫的方法
CN115725465A (zh) * 2022-11-21 2023-03-03 东北农业大学 一株增加水稻产量的菌株及其应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102732461B (zh) * 2012-06-14 2014-03-26 辽宁大学 一种富集鲍曼不动杆菌的培养基
RU2711922C1 (ru) * 2019-06-21 2020-01-23 Федеральное бюджетное учреждение науки "Тюменский научно-исследовательский институт краевой инфекционной патологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Мультирезистентный штамм бактерий Acinetobacter baumannii для стандартизации оценки эффективности разрабатываемых антимикробных препаратов и дезинфицирующих средств

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1168822C (zh) * 2002-09-17 2004-09-29 华东理工大学 不动杆菌及采用该菌种拆分制备手性环戊烯酮的方法
CN1266269C (zh) * 2004-06-04 2006-07-26 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 脱氮不动杆菌及其降解废水中氨氮的方法
CN100512651C (zh) * 2006-07-12 2009-07-15 南京大学 一种防治植物真菌病害的生防菌及其制备方法

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102250789A (zh) * 2011-05-31 2011-11-23 黑龙江大学 一株高效降解甲氧咪草烟的鲍曼不动杆菌
CN102250789B (zh) * 2011-05-31 2012-12-19 黑龙江大学 一株高效降解甲氧咪草烟的鲍曼不动杆菌
CN107410217A (zh) * 2017-05-16 2017-12-01 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 木薯单爪螨实验种群的饲养装置及方法
CN107410217B (zh) * 2017-05-16 2023-06-06 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 木薯单爪螨实验种群的饲养装置及方法
CN111642338A (zh) * 2020-05-26 2020-09-11 广东省农业科学院果树研究所 一种利用接种丛枝菌根真菌促进香蕉苗生长的方法
CN111642338B (zh) * 2020-05-26 2022-02-18 广东省农业科学院果树研究所 一种利用接种丛枝菌根真菌促进香蕉苗生长的方法
CN114208784A (zh) * 2022-01-21 2022-03-22 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一种基于两种波长光源交替引诱椰心叶甲成虫的方法
CN114208784B (zh) * 2022-01-21 2023-05-23 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一种基于两种波长光源交替引诱椰心叶甲成虫的方法
CN115725465A (zh) * 2022-11-21 2023-03-03 东北农业大学 一株增加水稻产量的菌株及其应用
CN115725465B (zh) * 2022-11-21 2023-04-18 东北农业大学 一株增加水稻产量的菌株及其应用

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