CN101219224A - 一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，它涉及一种微泡超声造影剂的制备方法。本发明解决了微泡造影剂的不稳定和微泡被修饰后声学特性消失的问题。本发明的微胶囊包覆的微泡超声造影剂按如下方法进行制备：吸附，静置或离心，洗涤，再吸附，静置或离心，洗涤；即得到微胶囊包覆的微泡超声造影剂。本发明工艺简单，反应条件温和，易操作，重现性好，适用范围广，环境友好，适用于多种超声造影剂的表面修饰，便于实施。

Description

一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种微泡超声造影剂的制备方法。

背景技术

微泡超声造影技术是通过将具有较大副作用的药物(如抗癌药)置于微泡内，在靶器官局部释放可达到保护药物、延缓药物释放、减少给药次数、减小剂量和增加疗效的目的。目前临床上应用的天然高分子微泡超声造影剂多来源于蛋白类如白蛋白，不仅价格昂贵，而且粒径分布不均一、体内抗压性差、声衰减明显、持续时间较短；聚酯类合成高分子微泡造影剂虽然显影效果好，但囊壁较硬，需要较高的声学输出，以致在微囊破裂的同时可能产生生物学效应，如体外实验可观察到细胞溶解，体内试验则引起微泡所在器官出血，进入心室内的微泡可产生溶血，造成毛细血管破裂、局部渗出、出血或黏膜瘀血等。同时，这些超声造影剂本身并无靶向性，经静脉注射后，其在体内是随机分布的，会有大量的造影剂不流经超声波辐照部位。靶向微泡超声造影剂作为一种能携带药物穿过内皮层进入靶组织的非创性载体，可增加靶组织的药物浓度。另外，将药物包裹入微泡内部的方法还可以保持药物原有的代谢性质和分布，避免受到外部剧烈环境的破坏，降低外源性药物的免疫反应。而且对作用的超声波没有特定的要求，一般采用低能量和低频率的超声波，超声波本身不会给正常机体造成任何不良影响，超声微泡造影剂进行的药用的范围没有特定的限制。

微泡超声造影剂(包括天然高分子微泡超声造影剂和靶向微泡超声造影剂)的一致性特征是其脆弱性，另外一个问题是微泡的衰退，包括气体自然地弥散和血液的溶解，以及超声空化作用导致的破坏。目前微泡超声造影剂(UCA)进入体内后的稳定性直接影响造影成像的质量及稳定时间，也是影响造影图像量化分析的主要围素之一。与胶状体、乳剂及水溶液的UCA相比，包膜微气泡UCA的稳定性是最难于控制的，其稳定性主要取决于膜参数，另外包膜后超声声场和气泡的相互作用也可能会加快UCA气泡的声学特性消失，所以微泡造影剂被修饰后声学特性消失。

发明内容

本发明为了解决目前微泡造影剂的不稳定和微泡被修饰后声学特性消失的问题，而提供一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法。

本发明的微胶囊包覆的微泡超声造影剂按如下方法进行制备：将表面带有负电荷的微泡加入到浓度为0.001～1000mg/mL、体积为微泡体积1～100倍、带正电荷的生物活性材料溶液吸附0.5～100min，静置或离心，并将上层微泡用生理盐水或pH值为7.0～8.0的PBS缓冲溶液洗涤，然后加入到浓度为0.001～1000mg/mL、体积为微泡体积1～100倍、带负电荷的生物活性材料溶液中吸附0.5～100min，静置或离心，再将上层微泡用生理盐水或pH值为7.0～8.0的PBS缓冲溶液洗涤；即得到微胶囊包覆的微泡超声造影剂。

本发明利用静电力对微泡进行包覆，包覆后的微泡仍具有好的声学特性和造影效果，本发明还可以利用共价键、氢键等作用力对微泡超声造影剂进行包覆。本发明制备的微胶囊包覆的微泡超声造影剂性质稳定，可以修饰多层、多种物质，修饰后的微泡不易破损，仍然有很好的造影效果。

本发明的方法具有以下的优点：

(1)组装方法简单、灵活。可以通过改变聚电解质的组分以及组装层数等实现微泡超声造影剂声学特性的可设计化，根据不同的诊断或治疗需要制备适合的造影剂，在分子水平上控制包裹物质的组成和结构，不但提高了微泡稳定性还维持了微泡的声学性能。

(2)本发明可以选择具有生物相容性或者生物活性的材料对微泡进行修饰，材料选择范围广泛，可以是天然或合成的聚电解质、基因、生物活性因子、抗体、药物、蛋白质和多糖等。可以通过控制组装层数，大大提高药物的装载量而不改变其生物活性，改善了一般粘附法导致的药物或基因与微泡结合不牢固的缺点。

(3)由于微泡外壳聚电解质的保护作用，有效地阻止和降低了腔内气体的弥散，维持了超声造影剂微泡良好的声学性能。

(4)选择具有活性官能团的聚电解质或者生物活性物质对微泡进行组装，可以在微泡外壳方便的连接上抗体等靶向物质，制备成靶向性超声造影剂。

(5)可以在微泡的外壳包裹诊断和治疗性药物或基因，待微泡到达靶位后，在诊断超声的作用下使微泡破裂，释放其包裹的药物或基因，达到诊断或治疗的目的。

(6)本发明反应条件温和，重现性好，环境友好(基于水相技术，无溶剂毒性)，对微泡的体型结构没有特殊的要求，便于实施。

附图说明

图1为经过包覆的微泡造影剂的结构示意图；图2为是在ST68-PFC微泡表面组装上FITC标记的聚赖氨酸后的激光共聚焦显微镜照片的FITC模式图；图3为是在ST68-PFC微泡表面组装上FITC标记的聚赖氨酸后的激光共聚焦显微镜照片的透射模式图；图4是在ST68-PFC微泡表面组装上FITC标记的聚赖氨酸后的荧光发射光谱图；图5是微泡表面Zeta电位随聚电解质组装层数变化图；图6是本发明超声造影剂肝脏造影计算机定量分析图；图7是在SonoVue微泡表面上组装上FITC标记的聚赖氨酸后的荧光显微镜照片。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式的微胶囊包覆的微泡超声造影剂按如下方法进行制备：将表面带有负电荷的微泡加入到浓度为0.001～1000mg/mL、体积为微泡体积1～100倍、带正电荷的生物活性材料溶液吸附0.5～100min，静置或离心，并将上层微泡用生理盐水或pH值为7.0～8.0的PBS缓冲溶液洗涤，然后加入到浓度为0.001～1000mg/mL、体积为微泡体积1～100倍、带负电荷的生物活性材料溶液中吸附0.5～100min，静置或离心，再将上层微泡用生理盐水或pH值为7.0～8.0的PBS缓冲溶液洗涤；即得到微胶囊包覆的微泡超声造影剂。

本实施方式的微胶囊包覆的微泡超声造影剂表面可以重复吸附包覆带正电荷的生物活性材料和带负电荷的生物活性材料，重复次数由需要包覆的层数决定。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中的微泡是基于表面活性剂的造影剂微泡，或者是用蛋白、高分子材料、脂质或糖类包膜的造影剂微泡。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中的带正电荷的生物活性材料为聚电解质、药物、生物活性因子、DNA序列、靶向配体中的一种或几种的组合。其它与具体实施方式一相同。

本实施方式中带正电荷的生物活性材料为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：聚电解质为阴离子聚电解质、阳离子聚电解质、两性聚电解质中的一种或几种。其它与具体实施方式三相同。

本实施方式中聚电解质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：阴离子聚电解质为聚苯乙烯磺酸、聚苯乙烯磺酸钠、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸、聚丙烯酸钠、聚谷氨酸、海藻酸钠、透明质酸、葡聚糖、硫酸葡聚糖、磺化葡聚糖、硫酸软骨素、肝素、硫酸肝素、肝磷脂、尿激酶、链激酶、白蛋白中的一种或几种的混合物。其它与具体实施方式四相同。

本实施方式中阴离子聚电解质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：阳离子聚电解质为聚乙烯亚胺、壳聚糖、多聚赖氨酸、季胺烷基醚化阳离子聚乙烯醇、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚烯丙基氯化铵、质子化的聚乙烯亚胺、聚乙烯基亚胺盐酸盐、聚2-羟基-3-甲基丙烯酸酯基三甲基氯化铵、聚丙烯酰胺、聚烯丙基胺盐酸盐、聚乙烯亚胺、聚丙烯基氨、多熔素、明胶、胶原、鱼精蛋白中的一种或几种的混合物。其它与具体实施方式四相同。

本实施方式中阳离子聚电解质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：两性聚电解质是指具有两性电荷的性质的各种蛋白、生长因子和分化诱导因子。其它与具体实施方式四相同。

这些蛋白、生长因子和分化诱导因子可以通过调节pH值来得到不同的带电性质：等电点下带正电，等电点上带负电。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：药物为抗凝血的药物(白蛋白、肝素、磺化葡聚糖、尿激酶、聚苯乙烯磺酸钠或华法林钠)、抗血小板粘附的药物(阿司匹林和/或前列腺素)、抗感染的药物(氨苄青霉素、头孢霉素、磺胺嘧啶或硫酸链霉素)、抗内膜增长的药物(地塞米松磷酸钠)、抗肿瘤的药物(柔红霉素、阿霉素、卡铂或喜树碱)、抗血栓药物和溶栓剂(r-tPA、链激酶、尿激酶)中的一种或几种的混合物。其它与具体实施方式三相同。

本实施方式中药物为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：生物活性因子为细胞粘附因子、细胞生长因子或细胞分化因子。其它与具体实施方式三相同。

本实施方式中生物活性因子为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：靶向配体为用于联合心肌、膜、结缔、肿瘤和血块的蛋白质、肽、糖、维生素、类固醇、激素遗传物质中的一种或几种的组合。其它与具体实施方式三相同。

本实施方式中心肌、膜、结缔、肿瘤和血块作为靶向受体；蛋白质、肽、糖、维生素、类固醇、激素和遗传物质作为靶向配体。

本实施方式中靶向配体为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式十的不同点是：蛋白质为抗体、抗体片断、受体分子、受体连接分子、糖蛋白、外源凝集素中的一种或几种的组合。其它与具体实施方式十相同。

本实施方式中蛋白质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式十的不同点是：肽为寡肽、多肽或拟肽。其它与具体实施方式十相同。

具体实施方式十三本实施方式与具体实施方式十的不同点是：遗传物质为核苷、核苷酸或多核苷酸。其它与具体实施方式十相同。

具体实施方式十四：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中的带负电荷的生物活性材料为聚电解质、药物、生物活性因子、DNA序列、靶向配体中的一种或几种的组合。其它与具体实施方式一相同。

本实施方式中带负电荷的生物活性材料为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式十五：本实施方式与具体实施方式十四的不同点是：聚电解质为阴离子聚电解质、阳离子聚电解质、两性聚电解质中的一种或几种的组合。其它与具体实施方式十四相同。

本实施方式中聚电解质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式十六：本实施方式与具体实施方式十五的不同点是：阴离子聚电解质为聚苯乙烯磺酸、聚苯乙烯磺酸钠、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酸、聚丙烯酸钠、聚谷氨酸、海藻酸钠、透明质酸、葡聚糖、硫酸葡聚糖、磺化葡聚糖、硫酸软骨素、肝素、硫酸肝素、肝磷脂、尿激酶、链激酶、白蛋白中的一种或几种的混合物。其它与具体实施方式十五相同。

本实施方式中阴离子聚电解质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式十七：本实施方式与具体实施方式十五的不同点是：阳离子聚电解质为聚乙烯亚胺、壳聚糖、多聚赖氨酸、季胺烷基醚化阳离子聚乙烯醇、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚烯丙基氯化铵、质子化的聚乙烯亚胺、聚乙烯基亚胺盐酸盐、聚2-羟基-3-甲基丙烯酸酯基三甲基氯化铵、聚丙烯酰胺、聚烯丙基胺盐酸盐、聚乙烯亚胺、聚丙烯基氨、多熔素、明胶、胶原、鱼精蛋白中的一种或几种的混合物。其它与具体实施方式十五相同。

本实施方式中阳离子聚电解质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式十八：本实施方式与具体实施方式十五的不同点是：两性聚电解质是指具有两性电荷的性质的各种蛋白、生长因子和分化诱导因子。其它与具体实施方式十五相同。

这些蛋白、生长因子和分化诱导因子可以通过调节pH值来得到不同的带电性质：等电点下带正电，等电点上带负电。

具体实施方式十九：本实施方式与具体实施方式十四的不同点是：药物为抗凝血的药物(白蛋白、肝素、磺化葡聚糖、尿激酶、聚苯乙烯磺酸钠或华法林钠)、抗血小板粘附的药物(阿司匹林和/或前列腺素)、抗感染的药物(氨苄青霉素、头孢霉素、磺胺嘧啶或硫酸链霉素)、抗内膜增长的药物(地塞米松磷酸钠)、抗肿瘤的药物(柔红霉素、阿霉素、卡铂或喜树碱)、抗血栓药物和溶栓剂(r-tPA、链激酶、尿激酶)中的一种或几种的混合物。其它与具体实施方式十四相同。

本实施方式中药物为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式二十：本实施方式与具体实施方式十四的不同点是：生物活性因子为细胞粘附因子、细胞生长因子或细胞分化因子。其它与具体实施方式十四相同。

本实施方式中生物活性因子为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式二十一：本实施方式与具体实施方式十四的不同点是：靶向配体为用于联合心肌、膜、结缔、肿瘤和血块的蛋白质、肽、糖、维生素、类固醇、激素遗传物质中的一种或几种的组合。其它与具体实施方式十四相同。

本实施方式中心肌、膜、结缔、肿瘤和血块作为靶向受体；蛋白质、肽、糖、维生素、类固醇、激素和遗传物质作为靶向配体。

本实施方式中靶向配体为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式二十二：本实施方式与具体实施方式二十一的不同点是：蛋白质为抗体、抗体片断、受体分子、受体连接分子、糖蛋白、外源凝集素中的一种或几种的组合。其它与具体实施方式二十一相同。

本实施方式中蛋白质为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。

具体实施方式二十三：本实施方式与具体实施方式二十一的不同点是：肽为寡肽、多肽或拟肽。其它与具体实施方式二十一相同。

具体实施方式二十四：本实施方式与具体实施方式二十一的不同点是：遗传物质为核苷、核苷酸或多核苷酸。其它与具体实施方式二十一相同。

具体实施方式二十五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：重复操作直至达到需要的层数后，将制备好的微泡放入体积相等的PBS缓冲液中、在4℃的条件下保存。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式二十六：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一冲的洗涤是将微泡放入pH值为7.0～8.0的PBS缓冲溶液中，轻微振摇后静置，再取上层微泡。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式二十七：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中离心转速为100～2000r/min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式二十八：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中离心转速为1000r/min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式二十九：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将表面带有负电荷的微泡加入到浓度为0.01～100mg/mL、体积为微泡体积1～50倍、带正电荷的生物活性材料溶液吸附1～50min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将表面带有负电荷的微泡加入到浓度为0.1～10mg/mL、体积为微泡体积2～20倍、带正电荷的生物活性材料溶液吸附2～20min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十一：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将表面带有负电荷的微泡加入到浓度为0.5～5mg/mL、体积为微泡体积5～15倍、带正电荷的生物活性材料溶液吸附5～15min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将表面带有负电荷的微泡加入到浓度为1mg/mL、体积为微泡体积10倍、带正电荷的生物活性材料溶液吸附10min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中然后加入到浓度为0.01～100mg/mL、体积为微泡体积1～50倍、带负电荷的生物活性材料溶液吸附1～50min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十四：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中然后加入到浓度为0.1～10mg/mL、体积为微泡体积2～20倍、带负电荷的生物活性材料溶液吸附2～20min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中然后加入到浓度为0.5～5mg/mL、体积为微泡体积5～15倍、带负电荷的生物活性材料溶液吸附5～15min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十六：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中然后加入到浓度为1mg/mL、体积为微泡体积10倍、带负荷的生物活性材料溶液吸附10min。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十七：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将上层微泡用pH值为7.2～7.6的PBS缓冲溶液洗涤。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十八：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将上层微泡用pH值为7.4的PBS缓冲溶液洗涤。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式三十九：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：重复吸附包覆的操作3～5次。其它与具体实施方式一相同。

具体实施方式四十：本实施方式微胶囊包覆的微泡超声造影剂按如下方法进行制备：将表面带有负电荷的ST68-PFC微泡(属于基于表面活性剂的造影剂微泡)，加入到浓度为1mg/mL、体积为微泡体积10倍、带正电荷的FITC标记的聚赖氨酸溶液吸附8min，静置使其分层，并将上层微泡用pH值为7.4的PBS缓冲溶液洗涤，再加入到将浓度为1mg/mL、体积为微泡体积10倍、带负电荷的海藻酸钠溶液加入到，吸附8min，静置或离心使其分层，再将上层微泡用pH值为7.4的PBS缓冲溶液洗涤；即得到微胶囊包覆的微泡超声造影剂。

本实施方式制备的微泡超声造影剂的激光共聚焦显微镜照片(图2和图3)表明聚电解质能有效地组装到微泡的表面。从照片上可以看出，微泡呈球形，具有较好的分散性，没有观察到明显的聚集。较强的绿色荧光仅能从微泡的外壁观测到，表明FITC标记的聚赖氨酸仅吸附在外壳上而没有进入微泡内部。同时，微泡外壁均匀的荧光光环表明制得的微泡造影剂表面组分均匀，均匀的泡壁对微泡的稳定有一定的作用。

同时，包裹FITC标记的聚赖氨酸的超声造影剂微泡的荧光发射光谱也进一步说明聚电解质组装到了微泡表面。微泡在520nm处出现了明显的谱峰(图4)，而且发射波长较溶液状态下的FITC标记的聚赖氨酸也没有发生变化，说明采用层层自组组装的方法可以将聚电解质等包裹在微泡造影剂的外壳上。聚电解质包裹到微泡上之后，可以增加其稳定性。另外聚电解质包裹微泡造影剂具有很好的化学活性，很容易对其进行化学改性，使其表面带上各种功能性基团(如羟基、羧基、氨基、酰胺基和硫键等)，还可以根据特定的对象选择合适的生物分子进行修饰。

对本实施方式制得的微泡超声造影剂进行所需层数的聚电解质组装。Zeta电位结果表明，未进行包裹的ST68-PFC微泡表面带有负电荷(≈-40mV)，当在其表面吸附上带有不同电荷的聚电解质后，微泡表面电位也随之发生交替变化。当在微泡的表面上沉积吸附上第一层PLL后，微泡表面电位发生急剧增大(≈60mV)。吸附上第一层Alg之后，微泡表面又带上负电荷(≈-40mV)。交替吸附上带有不同电荷的聚电解质，微泡表面的电位也发生交替的变化(图5)。

将新西兰大白兔常规麻醉后，经兔耳缘静脉匀速推注本实施方式制备的造影剂(0.04mL/kg)，使用PHILIPS iu22超声仪，以脉冲反向谐波模式，L9-3探头，MI 0.07进行回波成像。高频探头显示大白兔肝脏、大血管等组织和脏器，用超声仪内部工作站存储动静态造影资料，并经计算机转为数字信号，定量分析造影前后血流及组织回声情况。结果：大白兔肝脏等实质脏器及血流信号明显增多、增强(图6)，而且安全性好，整个造影过程，大白兔生命征平稳。说明经过层层自组装修饰的造影剂在赋予更多功能的同时并没有减弱其造影效果。

具体实施方式四十一：本实施方式微胶囊包覆的微泡超声造影剂按如下方法进行制备：将表面带有负电荷的SonoVue微泡加入到浓度为1mg/mL、体积为微泡体积20倍、带正电荷的FITC标记的聚赖氨酸溶液吸附10min，静置使其分层，并将上层微泡用生理盐水洗涤，再加入到将浓度为1mg/mL、体积为微泡体积10倍、带负电荷的海藻酸钠溶液加入到，吸附8min，静置或离心使其分层，再将上层微泡用pH值为7.4的PBS缓冲溶液洗涤；即得到微胶囊包覆的微泡超声造影剂。

本实施方式的SonoVue微泡为意大利博莱科公司的产品，属于脂质包膜的造影剂微泡。

SonoVue微泡表面带有负电荷，通过静电吸引作用将聚赖氨酸组装到微泡表面之后，Zeta电位测量显示微泡带有明显的正电荷，荧光显微镜照片(图7)表明聚电解质能有效地组装微泡的表面，组装海藻酸钠后，Zeta电位测量显示微泡带有明显的负电荷。从照片上可以看出，组装聚电解质之后的微泡仍然具有较好的分散性，仅能从微泡外壁观测到较强的荧光，表明FITC标记的聚赖氨酸仅吸附在微泡外壳上而没有进入微泡内部。

Claims (10)

1.一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于微胶囊包覆的微泡超声造影剂按如下方法进行制备：将表面带有负电荷的微泡加入到浓度为0.001～1000mg/mL、体积为微泡体积1～100倍、带正电荷的生物活性材料溶液吸附0.5～100min，静置或离心，并将上层微泡用生理盐水或pH值为7.0～8.0的PBS缓冲溶液洗涤，然后加入到浓度为0.001～1000mg/mL、体积为微泡体积1～100倍、带负电荷的生物活性材料溶液中吸附0.5～100min，静置或离心，再将上层微泡用生理盐水或pH值为7.0～8.0的PBS缓冲溶液洗涤；即得到微胶囊包覆的微泡超声造影剂。

2.根据权利要求1所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于微泡是基于表面活性剂的造影剂微泡，或者是用蛋白、高分子材料、脂质或糖类包膜的造影剂微泡。

3.根据权利要求1所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于带正电荷的生物活性材料为聚电解质、药物、生物活性因子、DNA序列、靶向配体中的一种或几种的组合。

4.根据权利要求3所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于药物为抗凝血的药物、抗血小板粘附的药物、抗感染的药物、抗内膜增长的药物、抗肿瘤的药物、抗血栓药物、溶栓剂中的一种或几种的组合。

5.根据权利要求3所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于生物活性因子为细胞粘附因子、细胞生长因子或细胞分化因子。

6.根据权利要求3所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于靶向配体为用于联合心肌、膜、结缔、肿瘤和血块的蛋白质、肽、糖、维生素、类固醇、激素、遗传物质中的一种或几种的组合。

7.根据权利要求3所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于聚电解质为阴离子聚电解质、阳离子聚电解质高分子两性聚电解质中的一种或几种的组合。

8.根据权利要求1所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于的带负电荷的生物活性材料为聚电解质、药物、生物活性因子、DNA序列、靶向配体中的一种或几种的组合。

9.根据权利要求1所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于再加入浓度为1mg/mL、体积为微泡体积10倍、带负荷的生物活性材料溶液吸附10min。

10.根据权利要求1所述的一种微胶囊包覆的微泡超声造影剂的制备方法，其特征在于在微胶囊包覆的微泡超声造影剂表面重复吸附包覆带正电荷的生物活性材料和带负电荷的生物活性材料。

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