CN101213446A - 残留农药的提取方法和提取试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及牲畜肉脂肪成分中的残留农药的提取方法和用于其的提取试剂盒。本发明残留农药的提取方法包含如下工序:(1)在水存在下,在脂肪凝固的状态下将牲畜肉脂肪成分均化后,分离脂肪的工序;(2)用脱水剂对进行了上述处理的脂肪进行处理的工序;(3)将经过脱水处理的脂肪溶解在脂溶性溶剂中后,向亲水性溶剂中转溶农药,然后浓缩该亲水性溶剂溶液,获得残留农药测定用检测液的工序。此外,本发明的试剂盒是用于该方法的试剂盒。根据本发明的方法和试剂盒,具有能实现操作的简便化和降低有机酸等夹杂物提取量的效果。
Description
技术领域
本发明涉及残留农药的提取方法和提取试剂盒。更详细地说,涉及能简便单且有效地提取牲畜肉脂肪成分中的残留农药的方法、和用于其的提取试剂盒。
背景技术
迄今为止,为了提高农产物的生产性而使用各种农药。近年来,越来越关心食物中的残留物质,对食物中残留物质的测定也重视起来。与之对应,在日本,设定了关于食品(农产品、牲畜肉等)中残存的残留物质的标准(例如,食安发第0124001号厚生劳动省医药食品局食品安全部长通知附件“作为食品中残留农药、饲料添加物或动物用医药品成分的物质的试验法”、对食品卫生法等部分进行改正的法律(参照平成15年法律第55号,平成15年5月30日公布))。
然而,现有方法的目标是测定少数残留物质,不适于多数残留物质的测定。作为农药,使用非常多种多样的药物,为了使测定简单化和迅速,一次测定多种农药的方法的重要性提高。
尤其是在牲畜肉脂肪成分中残留农药的测定中,目前的提取方法提取步骤繁杂,花费时间、成本、工序(约40个工序),需要有更简单的方法和试剂盒。更详细地说,首先,在提取脂肪后,从脂肪分离出农药,为了从分离的农药中除去夹杂物,必须使用GPC等高价机器,或通过固相提取柱进行清除,操作性显著差。
如上所述,在现有残留农药的测定方法中,从牲畜肉脂肪成分提取残留农药的工序非常长且烦杂,需要时间,存在测定上的问题。
因此,本发明人对简易的残留农药提取方法进行了研究,发现能简便且有效地提取残留农药。
更具体地说,着眼于动物脂肪在低温下凝固且由于比重小而浮在水上。具体地说,发现在脂肪成分多的组织中加入冷水,在脂肪凝固的状态下,具体地说,在冰冷下均化后,进行离心分离,获取凝固在离心管上部的脂肪组织,从而能显著减少脂肪中的夹杂物。
经过这样处理的脂肪成分由于含有水分,因此脂肪难以在脂溶性溶剂中溶解,因而在使用脱水剂除去水分后,将脂肪溶解在脂溶性溶剂中,从脂溶性溶剂向亲水性溶剂中转溶农药,进一步将该亲水性溶剂溶液浓缩干固,溶解在疏水性溶剂-亲水性溶剂的混合溶剂中,由此能简便地制备夹杂物少的残留农药测定用检测液。
本发明基于该发现,提供一种从牲畜肉脂肪成分简单且有效地提取残留农药的方法和用于其的提取试剂盒。
发明内容
为了解决上述课题而进行的本发明是包含下述工序的提取牲畜肉脂肪成分中的残留农药的方法,
(1)在水存在下,在脂肪凝固的状态下将牲畜肉脂肪成分均化后,分离脂肪的工序;
(2)用脱水剂对进行了上述处理的脂肪进行处理的工序;
(3)将经过脱水处理的脂肪溶解在脂溶性溶剂中后,向亲水性溶剂中转溶农药,然后浓缩该亲水性溶剂溶液,得到残留农药测定用检测液的工序。
作为上述脱水剂,优选使用选自硅藻土、分子筛、硅胶、无水硫酸钠、无水硫酸镁和高吸水性树脂中的1种或2种以上,特别优选使用硅藻土。
此外,在上述(3)的工序中,优选将亲水性溶剂溶液浓缩干固后,再溶解在溶剂中,然后将该溶液用固相吸附剂处理,作为该固相吸附剂,优选使用选自硅酸镁类吸附剂、离子交换体、硅胶、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种以上,特别优选使用硅酸镁类吸附剂。
此外,本发明的试剂盒是用于上述提取方法的试剂盒,其是至少含有脱水剂和固相吸附剂的牲畜肉脂肪成分中残留农药的提取试剂盒。作为上述脱水剂,优选使用选自硅藻土、分子筛、硅胶、无水硫酸钠、无水硫酸镁和高吸水性树脂中的1种或2种以上,作为固相吸附剂,优选使用选自硅酸镁类吸附剂、离子交换体、硅胶、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种以上。
具体实施方式
本发明的方法是包含上述工序的残留农药的提取方法。
在本发明的方法中,首先,在水存在下,在脂肪凝固的状态下将牲畜肉脂肪试样均化。动物脂肪在低温下凝固,因此如果在该状态下均化,则可在不对脂肪产生影响的条件下使试样中的夹杂物向水相转移,能降低夹杂物含量。
更具体地说,相对于牲畜肉脂肪成分试样,添加0.5~3重量倍,优选0.8~2.0重量倍,更优选2.0重量倍左右的冷水,然后在冰冷却下均化。要说明的是,只要是脂肪能维持凝固状态的温度,就不限定于冰冷却下,一般优选0~15℃左右的范围。
对均化时间没有特别限定,通常进行1~5分钟左右,优选进行2~3分钟左右。
在均化结束后,进行离心分离,静置,形成脂肪成分凝固在离心管边缘的状态,因此,在排除水(水切り)后,得到脂肪。
接着该得到的脂肪进入脱水工序。在本发明的方法中,在下面的工序要将脂肪溶解在脂溶性溶剂中,此时如果脂肪含有水分,则无法有效地进行脂肪的溶解和农药的提取,因此如上所述,将脂肪脱水,降低含水量。
作为脱水剂,惯用的脱水剂均可以使用,可以列举例如硅藻土、分子筛、硅胶、无水硫酸钠、无水硫酸镁、高吸水性树脂等,优选使用硅藻土。这些脱水剂还可以并用2种以上。
该脱水剂的使用量可以根据脂肪中的水分含量、脱水剂的脱水能力等进行适当调整,通常,相对于脂肪为0.5~3倍量(重量比)左右,优选为1~1.5倍量(重量比)左右。
接着将上述脱水的脂肪溶解在脂溶性溶剂中。
本说明书中所谓的脂溶性溶剂是指能溶解脂肪的溶剂,作为该脂溶性溶剂,只要是能溶解脂肪的溶剂,均可使用,但在本发明的方法中,由于在下面的工序要将脂溶性溶剂溶液中的农药转溶至亲水性溶剂中,因此优选能与亲水性溶剂分层的溶剂。作为这种脂溶性溶剂,可以例示例如正己烷、环己烷、硬脂酸丁酯等。
作为脂溶性溶剂的使用量,只要是能溶解脂肪的量即可,通常,相对于1g脂肪,使用10~100ml左右、优选20~50ml左右、更优选30~40ml左右。
要说明的是,脂肪在脂溶性溶剂中的溶解也可以在上述脱水剂存在的状态下进行。
溶解在该脂溶性溶剂中的脂肪接着与亲水性溶剂混合,将农药转溶至亲水性溶剂中。
作为在该工序中使用的亲水性溶剂,是能与脂溶性溶剂分层的溶剂,例如,在使用正己烷作为脂溶性溶剂的情况下,可以列举乙腈、甲醇、二甲基亚砜(DMSO)。此外,同样,在作为脂溶性溶剂使用环己烷和硬脂酸丁酯的情况下,作为亲水性溶剂,也可以使用乙腈、甲醇、DMSO等。
上述亲水性溶剂的使用量只要是能从溶解在脂溶性溶剂中的脂肪转溶农药的量,就没有特别限定,通常,以与脂溶性溶剂基本等量的溶剂量进行。
接着将转溶了农药的亲水性溶剂溶液浓缩,根据情况干固后,再溶解在适当的溶剂中,制成残留农药测定用检测液。
作为上述再溶解溶剂,只要是溶解农药,不会对农药的仪器分析造成妨害的溶剂,就可以使用任意的溶剂,通常使用疏水性溶剂-亲水性溶剂的混合溶剂,如果考虑溶剂的毒性、沸点、熔点、价格等,则优选使用正己烷-丙酮混合溶剂。要说明的是,对疏水性溶剂-亲水性溶剂的混合比没有特别的限定,通常使用等量的混合溶剂。
在该溶解工序后,使用GC/MS等常用的仪器分析方法,进行残留农药的分析、定量。
要说明的是,优选根据需要将上述转溶了农药的亲水性溶剂溶液、或将其浓缩干固再溶解在溶剂中得到的溶液用固相吸附剂处理,除去夹杂物。
作为固相吸附剂,可以根据夹杂物的极性使用例如硅酸镁类吸附剂(例如硅酸镁载体(Florisil)、含活性炭的合成硅酸镁载体等)、离子交换体、硅胶、氧化铝、反相柱担体等。这些固相吸附剂可以并用2种以上。
固相吸附剂的使用量可以根据溶液中所含夹杂物的量进行适当调整,通常,相对于溶液量,使用10~50(w/v)%左右,优选使用20~35(w/v)%左右。
通过该操作,能显著降低溶液中色素等夹杂物的含量,因此在仪器分析时,能使样品的前处理工序简化或在测定时减少噪音。
另外,固相吸附剂与溶液的分离可以通过过滤、离心分离等常用方法进行。
根据本发明的方法,能减少除去有机酸或其它夹杂物的工作量,可以节约时间(以提取+测定时间计,从约9H到约2H)、费用、工序数(从约40个工序减少至约23个工序)地获得没有噪音的测定数据。由此,在牲畜肉脂肪成分的残留农药测定中,与现有方法相比,能简便地在短时间得到噪音少的数据。
另外,本发明的方法和试剂盒并不限于牲畜肉脂肪成分中残留农药的提取,还可以在例如黄油、奶酪等固体乳制品中残留农药的提取中使用。
本发明牲畜肉脂肪成分中残留农药的提取试剂盒是在上述提取方法中使用的试剂盒,至少含有脱水剂和固相吸附剂。
作为上述脱水剂和固相吸附剂,可以列举上述例示的物质。
此外,在本发明的试剂盒中,作为其它构成要素,可以含有上述脂溶性溶剂、亲水性溶剂、残留农药测定用溶剂等。
作为残留农药测定用溶剂,优选疏水性溶剂-亲水性溶剂的混合溶剂,更优选使用正己烷-丙酮混合溶剂。
作为本发明试剂盒的使用方法,只要根据上述本发明的提取方法使用即可。
作为本发明对象的牲畜肉脂肪成分,只要是需要测定残留农药的牲畜肉类,就没有特别的限定,可以列举例如猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉、兔肉等。
作为提取对象的农药,只要是在农业领域中使用的农药就没有限定。特别适合于脂溶性农药。
产业实用性
根据本发明的方法,由于在水的存在下,在牲畜肉脂肪成分凝固的状态下将其均匀化,因此可在不对脂肪成分产生影响的条件下除去试样中的夹杂物,无需柱纯化等复杂工序就可制备出残留农药测定用检测液。因此,根据本发明的方法,具有能使提取操作显著简化的特别效果。
实施例
以下,基于比较例和实施例对本发明进行更详细的说明,但本发明并不限于这些实施例。另外,在各例中,括号中的数字表示工序的步骤数。
比较例1(现有方法)
由猪腿肉(块)取出200g脂肪成分多的部位(1),用绞肉机切碎(2)。在匀化器杯(ホモジナイザ一カツプ)中称量取出20g(3),添加20ml水(4),在10000转下均化3分钟(5)。再添加丙酮·正己烷混合液(1∶2)100ml,再在10000转下均化3分钟(6)。将匀化物转移至离心管(7),在2500转下离心5分钟(8)。将上清取至分液漏斗中(9)后,将残留物转移至匀化器杯中(10),添加50ml正己烷(11),在10000转下均化3分钟(12)。将匀化物转移至离心管(13),在2500转下离心5分钟(14)。将上清加入已经加入了先前的上清的分液漏斗中(15),添加50g无水硫酸钠(16),振荡脱水5分钟(17)。过滤溶液,将滤液取至300ml的梨型烧瓶中(18)。在35℃的温度条件下减压浓缩(19)。在要干固前停止减压浓缩,在氮气气流下干固,得到脂肪(20)。称量1g脂肪(21),溶解在丙酮·环己烷混合液(1∶4)中(22),定容为10ml得到提取液(23)。将提取液转移至离心管(24),在3000转下离心5分钟(25),将所得上清中的5ml注入以丙酮·环己烷混合液(1∶4)稳定化(26)的GPC柱(27),用丙酮·环己烷混合液(1∶4)进行洗脱(28),取含有农药的流份(29)。将所取的洗脱液在35℃的温度条件下减压浓缩(30)。在要干固前停止减压浓缩,在氮气气流中干固(31),然后将残留物溶解在丙酮·正己烷混合液(1∶1)2ml中(32)。加入以丙酮·正己烷混合液(1∶1)进了调节(33)的PSA固相提取柱(3ml,500mg)中(34),通入丙酮·正己烷混合液(1∶1)18ml,分取洗脱液(35)。在35℃的温度条件下减压浓缩(36),在要干固前停止减压浓缩,在氮气气流下干固(37),然后将残留物溶解在1ml丙酮·正己烷混合液(1∶1)中(38),转移至试样瓶中(39),供于GC/MS分析(40)。
实施例1(本发明方法)
由猪腿肉(块)取出200g脂肪成分多的部位(1),用绞肉机切碎(2)。在匀化器杯中称量取出20g(3),添加30ml冷水(4),在冰冷却下,在10000转下均化3分钟(5)。将匀化物转移至离心管(6),在4℃,5000xg下离心10分钟(7)。从离心管的边缘除水的同时取出在离心管上部凝固的脂肪(8)。称量1g脂肪(9),加入1g硅藻土(10),然后加入40ml正己烷溶解脂肪(11),转移至分液漏斗(12)。加入40ml乙腈(13),振荡15分钟(14),取出乙腈层(15),在35℃下减压干固(16)。溶解在正己烷·丙酮混合液(4∶1)1ml中(17),转移至1.5ml离心管(Eppendorf tube)(18),加入0.3g硅酸镁载体(19),搅拌(20)。在4℃、10000转下离心5分钟(21)。将上清取至试样瓶(22),供于GC/MS分析(23)。
上述现有方法和本发明方法的工序数以及实施方法所需时间(提取+测定时间)如下:
现有方法 40个工序 540分钟
本发明方法 23个工序 120分钟
实施例2
在上述现有方法和本发明方法中,进行在1g脂肪成分中添加0.2μg各种农药时的回收试验。在表1中示出其试验结果(回收率:%)。另外,在表中的农药中,进口食用肉中必须检查的农药是p,p-DDT、狄氏剂和七氯3种。
由下表1的结果可知,本发明的方法回收率高,认为根据本发明的方法,能有效地提取各种残留农药。
表1在1g脂肪中,添加相当于0.2μg量农药时的回收率
脂溶性农药
Claims (8)
1.提取牲畜肉脂肪成分中的残留农药的方法,其包含下述工序:
(1)在水存在下,在脂肪凝固的状态下将牲畜肉脂肪成分均化后,分离脂肪的工序;
(2)用脱水剂对进行了上述处理的脂肪进行处理的工序;
(3)将经过脱水处理的脂肪溶解在脂溶性溶剂中后,向亲水性溶剂中转溶农药,然后浓缩该亲水性溶剂溶液,得到残留农药测定用检测液的工序。
2.权利要求1所述的提取方法,其特征在于,上述脱水剂是选自硅藻土、分子筛、硅胶、无水硫酸钠、无水硫酸镁和高吸水性树脂中的1种或2种以上。
3.权利要求1或2所述的提取方法,其特征在于,在权利要求1所述方法的(3)的工序中,包含将亲水性溶剂溶液浓缩干固后,再溶解在溶剂中,然后将该溶液用固相吸附剂处理的工序。
4.权利要求3所述的提取方法,其特征在于,固相吸附剂是选自硅酸镁类吸附剂、离子交换体、硅胶、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种以上。
5.权利要求4所述的提取方法,其特征在于,硅酸镁类吸附剂是硅酸镁载体或含活性炭的硅酸镁载体。
6.牲畜肉脂肪成分中的残留农药的提取试剂盒,其特征在于至少含有脱水剂和固相吸附剂。
7.权利要求6所述的提取试剂盒,其中,脱水剂是选自硅藻土、分子筛、硅胶、无水硫酸钠、无水硫酸镁和高吸水性树脂中的1种或2种以上。
8.权利要求6或7所述的提取试剂盒,其特征在于,固相吸附剂是选自硅酸镁类吸附剂、离子交换体、硅胶、氧化铝和反相柱担体中的1种或2种以上。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
AD01 | Patent right deemed abandoned |
Effective date of abandoning: 20080702 |
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C20 | Patent right or utility model deemed to be abandoned or is abandoned |