CN101209273B - 旋覆花总多糖的制备及其制药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及旋覆花植物总多糖制备方法,及其润肠、通便和排毒之用途。实验表明旋覆花总多糖能明显促进胃肠蠕动、减少食物在胃肠消化和吸收时间,加强毒素和粪便的排出。旋覆花植物总多糖可用于通便、排毒的用途。
Description
技术领域
本发明涉及旋覆花植物总多糖的制备方法,及其通便、排毒的用途。
技术背景
旋覆花(包括Inula japinica和Inula britannica)属菊科植物。具有消痰、下气、软坚和行水之功效。文献报道旋覆花含有倍半萜及其内酯、二萜、三萜和黄酮类成分(天然产物研究和开发,2005,17(6):804-807;黄泰康,常用中药成分与药理手册,p1608,1994)。已经发现,旋覆花(Inula japinica)水提物具有显著降血糖和降血脂作用(Biol.Pharm.Bull,2006,29(3):455-459),并申请发明专利(专利申请号200510069547.8)。
发明内容
本发明人采用水或含有机溶剂的水溶液提取旋覆花(包括Inulajapinica和Inula britannica)植物(包括花序、茎和叶)获得水提物,再经有机溶剂沉淀获得旋覆花总多糖。经研究发现旋覆花总多糖无毒,具有明显润肠、通便、排毒的功效。在上述发现的基础上完成了本发明。
因此,在第一方面,本发明涉及制备旋覆花总多糖的方法,包括如下步骤:(a)含水溶剂提取旋复花植物材料,获得旋复花的水提取物,(b)将所得提取物用有机溶剂沉淀。
在一个优选实施方案中,所述旋复花植物材料是旋复花植物的地上部分,优选花序。
在具体实施方案中,步骤(a)所述含水溶剂是水或者含有有机溶 剂的水溶液,其中有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。在另一个具体实施方案中,步骤(b)中沉淀旋覆花总多糖的有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它们的任何组合。
在一些实施方案中,在用含水溶剂提取旋复花植物材料之前用有机溶剂如乙醇如95%的乙醇提取该旋复花植物材料。不限于理论,先用有机溶剂提取可以去除旋覆花植物中脂溶性成分。
在另一实施方案中,本发明的方法还包括将步骤(b)的产物透析、离心和浓缩干燥。
在一个具体实施方案中,本发明的方法包括:将旋覆花植物材料粉碎,用五倍重量以上的水浸泡1-2小时,常压煎煮0.5-2小时,过滤,滤液用有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它们的任何组合)沉淀24-48小时后离心,沉淀用2-10倍重量水溶解、离心,上清液透析,透析时间大于48小时(例如48-72小时),透析后离心,上清液浓缩干燥获得旋覆花总多糖。
另一方面,本发明还涉及可通过本发明上述方法获得的旋覆花总多糖。
另一方面,本发明还涉及旋复花总多糖,其特征在于:所述总多糖具有附图1或2的特征。
另一方面,本发明还涉及用于润便、治疗便秘、排毒和/或减肥的组合物,其含有本发明的旋复花总多糖,任选地,还含有食用或药用载体或赋形剂。优选地,所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
另一方面,本发明还涉及本发明的旋复花总多糖或者含有旋复花总多糖的组合物在制备用于润便、治疗便秘、排毒和/或减肥的产品中的用途。其中优选的是,所述产品是药物、保健品、食品、或者饮料。
本发明旋覆花植物总多糖具有润肠、通便和排毒之用途。实验表明,旋覆花总多糖能明显促进胃肠蠕动、减少食物在胃肠消化和吸收时间,加强毒素和粪便的排出,减少毒素吸收。旋覆花植物总多糖可 用于通便、排毒的用途。
附图说明
图1为实施例2制备的旋复花总多糖DEAE-纤维素柱层析图,见实施例3。
-●-曲线表示收集的洗脱液用苯酚-硫酸法显色后,在490nm波长处检测含有糖的吸收峰;
-○-曲线表示收集的洗脱液在280nm波长处检测的吸收峰。
其中A处代表用水进行洗脱得到的吸收峰;
B1和B2代表用0.25mol/L碳酸氢钠进行洗脱得到的吸收峰;
C代表用0.50mol/L碳酸氢钠进行洗脱得到的吸收峰;
D代表用0.10mol/L氢氧化钠进行洗脱得到的吸收峰。
图2为图1的局部放大图。
具体实施方案
根据本发明,术语“总多糖”是指寡糖,多糖,及糖复合物。
根据本发明,术语“糖复合物”是指含有糖成分的复合分子,如糖和肽链共价结合形成的糖蛋白、蛋白聚糖和肽聚糖,糖与脂类共价结合形成的糖脂和脂多糖等。
根据本发明,术语“产品”包括功能性食品,保健品或药品。
本发明旋覆花总多糖通常可以在采用含水溶剂的水溶液提取旋覆(复)花(包括Inula japinica和Inula britannica)植物(包括花序、茎和叶)获得水提物后,再经有机溶剂沉淀获得。
旋覆花水提物可通过如下方法获得。
典型地,制备旋复花的水提取物的方法包括:获得旋复花植物材料;用含水溶剂提取旋复花植物材料,获得旋复花的水提取物。
可通过煎煮法、浸渍法、渗漉法、或水蒸气蒸馏法等提取(或者浸出)旋复花植物材料。
在一个具体实施方案中,用含水溶剂提取旋复花植物材料包括: (1)在适当条件下用含水溶剂浸泡旋复花植物材料;(2)分离液相和固相;(3)任选地,重复步骤(1)和(2)一次或多次(例如重复1-数次、1-5次、1-2次、2-5次、3次、4次);(4)任选地,合并液相;和(5)任选地,将由步骤(2)或者步骤(4)得到的液相浓缩。
在步骤(1)中,所述适当条件可通过试验确定。温度通常为大约0-100℃,例如大约0-80℃,优选大约0-60℃,例如大约4-50℃,如大约15-40℃、大约20-30℃,方便的是大约室温,也可以是大约60-100℃。压力通常为大约0.1个大气压-5个大气压,例如大约0.5个大气压-3个大气压,例如大约1个大气压,方便的是大约常压。浸泡时间通常是至少大约1小时,长至例如10天,例如大约6小时-5天,大约12-96小时,例如大约24、48、72小时,或者其中的任何时间,优选不短于24小时。旋复花植物材料与含水溶剂的重量体积比通常为大约1∶1到大约1∶100(千克/升),例如大约1∶1到大约1∶50、大约1∶2到大约1∶40,优选大约1∶5到大约1∶20,更优选大约1∶5到大约1∶15(千克/升)。优选在浸泡时搅拌,例如多次搅拌或者连续搅拌。
步骤(2)中的分离可通过本领域已知的任何方法来实现,包括但不限于,过滤、离心、自然沉降等。
步骤(5)的浓缩可通过本领域已知的任何方法来实现。这种浓缩没有特别的限制,前提是不破坏活性成分。例如,该浓缩可以是减压浓缩。温度可以在大约0℃到大约80℃,例如大约室温到大约80℃,优选不超过大约60℃,例如大约0℃到大约60℃,例如大约50-60℃,如大约55℃。步骤(5)的浓缩也可以是冷冻干燥。
一种常见的浓缩方法是蒸发,例如常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发等。
浓缩之后可以进行干燥,例如,常压干燥、减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。干燥不是必需的步骤,但在某些实施方案中是优选的。
在有些实施方案中,浓缩步骤也可以省略。例如,可以直接使用 浸出液进行后续步骤(沉淀等)。
在本发明方法中,所述旋复花植物可以是Inula japinica或者Inula britannica或者它们的组合。
在本发明方法中,所述旋复花植物材料可以是旋复花植物全株或其任何部分,例如其器官、组织、或细胞,包括花、果实、种子、茎、叶、根,优选是旋复花植物的地上部分,例如花序。旋复花植物材料可以是药材,也可以是生药。旋复花植物材料可以是组织培养物、细胞培养物。旋复花植物可以是天然的或者转基因的。旋复花植物材料可以是干燥的或者新鲜的。
在本发明的提取方法中,所述旋复花植物材料可以是经过预先处理的。这些处理包括物理处理、化学处理、生物处理等。例如,旋复花植物材料可以预先进行简单洗涤、粉碎。在一个实施方案中,在用含水溶剂提取旋复花植物材料之前可以预先用有机溶剂提取(例如简单地提取)。有机溶剂包括但不限于:石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合等,如乙醇如95%的乙醇。
在本发明中,所述“含水溶剂”是任何含水的溶剂,它可以是水或者含有有机溶剂的水溶液;其中有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。水可以是例如蒸馏水、离子交换水、或者自来水。含水溶剂还可以是添加适当其它物质的提取用水。其它物质可以是例如有机溶剂、缓冲剂等。优选地,所述含水溶剂是水或者含有有机溶剂的水溶液。含水溶剂中水的含量(体积比)可以是例如至少大约5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或者更高,优选至少大约10%,更优选至少大约20%、50%或者更多。
在一个具体实施方案中,本发明旋复(覆)花植物水提取物的制备方法是将旋复(覆)花植物的地上部分在常温、常压下,用水或含有机溶剂的水溶液浸提获得旋复(覆)花提取浸膏。生药旋复(覆)花与浸泡用水或含有机溶剂的水溶液的重量体积比推荐为1∶5-15 (千克/升)。浸泡时间推荐大于24小时,浸泡温度推荐0℃-60℃。所用有机溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丙酮及正丁醇。浓缩可以是将萃取液减压浓缩,温度推荐等于或低于60℃进行。
在另一个具体实施方案中,本发明旋复(覆)花植物水提取物的制备方法是将旋覆花植物材料粉碎,用五倍重量以上的水浸泡1-2小时,常压煎煮0.5-2小时,过滤,获得滤液用于沉淀总多糖。
获得旋覆花水提物后,再经有机溶剂沉淀获得总多糖。沉淀旋覆花总多糖的有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它们的任何组合。一个例子是使用有机溶剂(例如95%乙醇或者无水乙醇),使得终浓度为例如60%-95%,例如70%-90%,例如80%或者85%(例如80%或者85%乙醇)。沉淀时间为例如至少12小时,例如至少24小时,例如12-48小时。沉淀的条件可以通过常规实验来确定,以获得总多糖为准。
本发明的旋覆花总多糖制备方法还包括将步骤(b)的产物透析、离心和浓缩干燥。例如,将(b)的沉淀用2-10倍重量水溶解、离心,上清液透析,透析时间通常大于48小时(例如48-72小时),透析后离心,上清液浓缩干燥获得旋覆花总多糖。
在一个具体实施方案中,本发明的旋覆花总多糖制备方法包括:将旋覆花植物材料粉碎,用五倍重量以上的水浸泡1-2小时,常压煎煮0.5-2小时,过滤,滤液用有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它们的任何组合)沉淀24-48小时后离心,沉淀用2-10倍重量水溶解、离心,上清液透析,透析时间大于48小时(例如48-72小时),透析后离心,上清液浓缩干燥获得旋覆花总多糖。
所得总多糖可以进一步配制成目的组合物,如药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
在另一方面,本发明涉及含有本发明旋复花水总多糖的组合物。 优选地,该组合物还含有可食用或者药用赋形剂或者载体。
在具体实施方案中,所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
将本发明旋复花总多糖配制成目的组合物的方法是本领域已知的。根据不同的需要,本发明所属领域技术人员可以选择适当的添加物、配制方法、剂型、单位剂量等。
当本发明组合物是药物组合物时,可以含有适当的药用赋形剂、载体或者稀释剂。可以采用制药领域公知的技术进行制剂。
本发明药物组合物可以采用多种剂型,这往往取决于给药途径。例如,本发明旋复花总多糖可用于制备治疗糖尿病和高血脂的药品,包括口服药和肠胃外给药用的制剂,如注射剂。
本发明药物组合物可以通过多种途径给药,例如口服、肠胃外给药等。给药方案和剂量取决于多种因素,如给药途径、患者健康状况等,并且可由医生确定。剂量范围可以由本领域技术人员通过常规实验确定。
本发明药物组合物可以用于润便、治疗便秘、排毒和/或减肥。
另一方面,本发明还涉及旋复花植物材料或者其提取物(优选总多糖)或者含有这种提取物的组合物在制备用于润便、治疗便秘、排毒和/或减肥的产品中的用途。其中优选的是,所述产品是药物、保健品、食品、或者饮料。
另一方面,本发明涉及一种润便、治疗便秘、排毒和/或减肥的方法,包括向患者给予旋复花植物材料或者其提取物(优选总多糖)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品。
“患者”包括任何动物,优选哺乳动物,特别是宠物、饲养动物。在一个优选实施方案这,患者是人。本发明的旋复花植物材料或者其提取物(优选总多糖)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品的用途不仅包括治疗,也包括预防例如预防便秘。
实施例
下面的实施例用于进一步说明本发明,但其不意味着对本发明有任何限制。
实施例1
旋覆花1公斤用10升水室温浸泡48小时,过滤。残渣再用5升水继续浸泡24小时,过滤,合并滤液,60℃减压浓缩至2-4升。然后用95%的乙醇沉淀,乙醇终浓度为80%,醇沉24小时。离心,沉淀用2.5升水溶解,离心,无离子水透析48-72小时。60℃减压浓缩后冷冻干燥,即获得旋覆花总多糖7.33克(得率0.733%)。
实施例2
旋覆花1公斤,加入10升95%乙醇室温浸泡72小时,过滤,残渣再用6升95%乙醇继续浸泡48小时,过滤。残渣自然凉干或50℃烘干后,用10升水室温浸泡48小时,过滤。残渣再用5升水继续浸泡24小时,过滤。合并滤液,60℃减压浓缩至2-4升。然后用95%的乙醇沉淀,乙醇终浓度为80%,醇沉24小时。离心,沉淀用2.5升水溶解,离心,无离子水透析48-72小时。60℃减压浓缩后冷冻干燥,即获得旋覆花总多糖5.51克(得率0.551%)。
实施例3
称取实施例2制备的旋覆花总多糖1克,用10毫升水溶解,上DEAE-纤维素柱(4.5×32cm,050815),依次采用水、0.1M NaHCO3、0.25M NaHCO3、0.5M NaHCO3和0.1MNaOH洗脱液进行洗脱,流速为10ml/min,同时采用苯酚-硫酸法和280nm紫外吸收法检测多糖。收集洗脱峰,用蒸馏水透析,分别在60℃减压浓缩,冷冻干燥。柱层析图谱见附图1和2。
实施例4
昆明小鼠30只,雌雄各半,22±2克,禁食12小时(不禁水)后随机分成3组,分别灌胃给予含有5%炭末的生理盐水、旋覆花总多糖(实施例2制备的)(200mg/kg)和阳性药溴吡啶斯的明(40mg/kg)。给药30分钟时脱臼处死小鼠,打开腹腔,将自胃贲门至直肠末端完整摘出。剪开肠系膜,不加牵引平铺于加有生理盐水的玻璃板上,测胃肠道全长,同时记录前沿到贲门的距离,然后计算炭末推进率。结果见表1。实验结果表明旋覆花总多糖显著促进小鼠胃肠蠕动,加强粪便排出。
表1旋覆花总多糖对小鼠胃肠推进功能的影响
注:与生理盐水组相比,*P<0.05,n=10.
实施例5
昆明小鼠30只,雌雄各半,22±2克,禁食12小时(不禁水)后随机分成3组,分别灌胃给予含有5%炭末的生理盐水、旋覆花总多糖(实施例2制备的)(200mg/kg)和阳性药溴吡啶斯的明(40mg/kg)。每只小鼠置于铺有滤纸的塑料盒中,观察小鼠出现黑便的时间、形状,记录给药6小时内每只小鼠排便次数。结果见表2。实验表明旋覆花总多糖能促进排便,加快体内废毒物排泄,减少毒素吸收。
表2旋覆花总多糖对小鼠排便时间和次数的影响
注:与生理盐水组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,n=10.
Claims (3)
1.旋覆花总多糖或者包含旋覆花总多糖的组合物或者用含水溶剂提取旋覆花植物材料得到的提取物在制备用于润肠、通便、润便、治疗便秘、排毒和/或减肥的产品中的用途,其中,所述旋覆花总多糖或提取物是通过如下步骤的方法制备的:
旋覆花1公斤,加入10升95%乙醇室温浸泡72小时,过滤,残渣再用6升95%乙醇继续浸泡48小时,过滤;残渣自然凉干或50℃烘干后,用10升水室温浸泡48小时,过滤;残渣再用5升水继续浸泡24小时,过滤;合并滤液,60℃减压浓缩至2-4升;然后用95%的乙醇沉淀,乙醇终浓度为80%,醇沉24小时;离心,沉淀用2.5升水溶解,离心,无离子水透析48-72小时;60℃减压浓缩后冷冻干燥。
2.权利要求1所述的用途,其中所述总多糖具有附图1或2的特征。
3.权利要求1所述的用途,其中所述的组合物还含有食用或药用载体或赋形剂。
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