CN101186706B

CN101186706B - 一种peg系凝胶纳米颗粒的制备方法

Info

Publication number: CN101186706B
Application number: CN2007101501801A
Authority: CN
Inventors: 王征; 高钊; 杨季; 蔡铮
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2007-11-15
Filing date: 2007-11-15
Publication date: 2010-08-25
Anticipated expiration: 2027-11-15
Also published as: CN101186706A

Abstract

本发明提供一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其中所述的方法包括以下步骤：第一步，将可交联的PEG系大分子单体和光引发剂溶解到水不溶性有机溶剂中，从而形成第一溶液；第二步，将高分子稳定剂溶解到去离子水中，从而形成第二溶液；第三步，在机械搅拌下将第一溶液滴加到第二溶液中，从而形成初步的混悬液；第四步，将所得到的混悬液在冰浴下用超声波仪超声5-10分钟，从而得到白色的预乳液；第五步，将超声后乳液中的乳滴进行辐射固化，从而得到凝胶纳米颗粒的悬浮液；第六步，分离。本发明提供一种纳米尺寸的凝胶纳米颗粒的制备方法，该凝胶纳米颗粒适用于提高难溶性药物的溶出速率和溶出量。

Description

一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法

技术领域

本发明涉及一种凝胶纳米颗粒及其制备方法，进一步涉及一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法。

背景技术

近年来，随着高通量药物筛选法的广泛应用，越来越多的药物候选体被发现是难溶性的。然而，由于其极低的水溶性，高达40％的具有显著活性的药物候选体而未能进行剂型的进一步研究。此外，药物的低水溶性常常与其体内吸收差和生物利用度低有关。在口服给药中，胃肠道的生理状况较复杂，药物吸收的速度和程度受到诸多因素的影响，尤其当药物溶解度较小时，常常吸收不完全，生物利用度低，严重影响了药物的临床疗效和对疾病的治疗。而静脉注射时，难溶性药物产生的沉淀能使血管堵塞，可引起像呼吸衰竭一样严重的副作用。不仅如此，药物沉淀的形成还能造成注射部位药物浓度过高，从而引起局部毒性和降低药物的生物利用度。

为了增加药物溶出量，进而提高生物利用度，人们已开发出多种制剂技术来改善此问题，这些技术包括：通过固体分散技术抑制结晶而形成无定形颗粒；通过提高润湿性来降低扩散层，例如，通过加入表面活性剂；以及降低药物颗粒尺寸来增加界面表面积，等等。用亲水性的聚合物稳定剂包敷药物颗粒来增强润湿化和溶剂化可以进一步提高溶解度。所有这些策略的同时应用对药物在介质中达到高溶解度是非常有利的。

聚合物体系容易粉碎给药。不幸的是，在这样形成的载药聚合物体系中，药物与材料之间的作用力较弱，并且线性的聚合物链段无法防止药物分子成核和结晶生长，因此，这种给药体系是热力学不稳定的，而且容易发生老化。一旦在药物制备、贮藏和给药期间发生重结晶，那么药物的生物利用度就会极大地降低。此外，当将这种PEG系给药体系制成片剂或填充入胶囊时，由于其无法崩解或形成药物富集表面层，因此，药物的溶出速率和溶解度通常也会降低。这样，开发解决此类问题的新型给药系统是非常有必要的。

纳米胶颗粒可通过乳液聚合法，阴离子共聚法，相邻聚合物链段交联法和反相乳液聚合法等四种方法制备。其中最常用的方法是乳液聚合法，乳液聚合可以在表面活性剂存在(普通的乳液聚合)和不存在的条件下发生，这种方法广泛用于聚丙烯酰胺微胶的制备。对制备药物载体而言，自乳化聚合法是一种具有优势的方法，由于不含有表面活性剂，合成的微胶或纳米胶中含有较少的可能引发毒性反应的物质，更适合于应用与人体。这种纳米胶可以在水中在通过紫外光照射其前体的胶束形成，不但具有胶束的优点，还具有较好的稳定性，适合与难溶性的药物的给药。

发明内容

本发明的目的是提供一种纳米尺寸的凝胶纳米颗粒的制备方法，该凝胶纳米颗粒适用于提高难溶性药物的溶出速率和溶出量。

一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

第一步，将可交联的PEG系大分子单体和生物相容性紫外光或可见光引发剂溶解到二氯甲烷或氯仿卤代烃类水不溶性有机溶剂中，光引发剂的用量以重量百分比计为可交联的PEG系大分子单体总重量的0.1％-5％，从而形成第一溶液；

第二步，将高分子稳定剂溶解到去离子水中，高分子稳定剂的浓度以重量计为1％-8％，从而形成第二溶液；

第三步，在机械搅拌下将第一溶液滴加到第二溶液中，从而形成初步的混悬液，油水比为：1∶7-1∶3；

第四步，将所得到的混悬液在冰浴下用超声波仪超声5-10分钟，从而得到白色的预乳液；

第五步，将超声后乳液中的乳滴进行辐射固化，辐射强度2-5mW/cm³，紫外灯辐射固化时间为30-60分钟，从而得到凝胶纳米颗粒的悬浮液；

第六步，分离。

可以采用任何可用的方法将第一溶液与第二溶液混合来形成预乳液。例如，可以直接在机械搅拌条件下将第一溶液倒入第二溶液中，然后在一定条件下实施超声处理，从而形成乳白色的预乳液。作为优选方案，可以在机械搅拌条件下将第一溶液滴加到第二溶液中，形成混悬液，然后迅速在冰浴下进行探针超声处理，从而形成预乳液。

本发明采用采用紫外光辐射法或可见光辐射法等光交联法进行辐射固化。光交联反应相对于其他的聚合方法具有以下优点：空间和温度上对聚合的可控性，室温下或生理条件下快速固化(几秒至几分钟)，且产热量最小；并且一些光交联的系统可在体内进行，克服在体内聚合的若干限制，如需要在范围较窄的温度和pH下，无有毒材料(大多数单体和有机溶剂)，在细胞和组织间温和聚合(低光强度，短暂的引发时间，生理温度和低有机溶剂量)；而且由于初始材料是液态故可不需外科手术即可植入体内复杂的结构间，随即交联生成所需的形状，并能与周围组织紧密结合。在一个示例性的方法中，使用紫外灯在冰浴条件下照射预乳液，从而使含有PEG系大分子单体和光引发剂的乳滴发生固化而形成纳米颗粒的悬浮液。根据本发明的PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，有利的是，将纳米颗粒的悬浮液以及纳米颗粒中的有机溶剂的浓度降到最低水平。例如，根据本发明的凝胶纳米颗粒可以基本上不含有有机溶剂(即，含有低于5ppm的有机溶剂)。这是因为含有的有机溶剂的量越低，残留溶剂毒性越小。除去溶剂的方法包括自然挥发法和真空挥发法。

在本发明中，“可交联的PEG系大分子单体”是PEG末端具有(甲基)丙烯酸酐的PEG大分子单体。这种大分子单体由于末端具有双键而具有可交联的特性。因此，当对这种大分子单体施加光化(紫外光或可见光)辐射时，在光引发剂的参与条件下，大分子单体的双键发生自由基聚合而形成三维网络。聚乙二醇(PEG)是一种两亲性聚合物，即可溶于水，又可溶于大多数有机溶剂，具有无毒，生物相容性好，免疫原性低等特点，可被肾排出体外，在体内不会蓄积，作为表面修饰材料，聚乙二醇在体循环中的优点还有能防止与血液接触时血小板在材料表面的沉积，有效延长被修饰材料的半衰期，提高药物生物利用度，因此被广泛应用于药物辅料，各种药物载体(如纳米粒，胶束等)的表面修饰等。除此之外，由于其优良的性能，聚乙二醇常被用于难溶性药物的固体分散载体，主要起到润湿药物和抑制药物重结晶的作用。因此，PEG可作为可交联的PEG系大分子单体的主链。由于PEG末端具有自由的羟基，因此其末端可以被官能化而形成末端具有双键的PEG衍生物。这些聚乙二醇衍生物除了具备聚乙二醇的优良性能外，还有潜力在乳液中发生光交联聚合形成具有亲水性表面的凝胶纳米颗粒(聚乙二醇在纳米粒表面)。关于形成可交联的PEG系大分子单体的方法，可参见文献“KimB.S.等，Synthesis and characterization of novel degradablephotocrosslinked poly(ether-anhydride)networks.J Polym Sci：Part A：Polym Chem 2000；38：1277-1282”。

上述的PEG系大分子单体可以选自以下PEG主链末端具有可聚合双键的PEG衍生物单体中的至少一种：(甲基)丙烯酸酐化的PEG400、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG600、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG1000、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG2000、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG4000、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG6000。

上述的水不溶性有机溶剂选自卤代烃中的二氯甲烷和氯仿。

上述高分子稳定剂是指在乳液聚合中可以吸附在乳滴的表面而防止或抑制纳米尺寸的乳滴发生团聚或聚集的生物相容性的高分子聚合物。高分子稳定剂包括天然高分子稳定剂和合成高分子稳定剂。天然高分子稳定剂包括明胶、阿拉伯胶、西黄耆胶、卵磷脂、大豆磷脂等。合成高分子稳定剂包括聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、poloxamer188、182、407、908等。

作为优选，在上述第一步中，可将疏水性增粘剂加入到第一溶液中，以调节第一溶液的粘度，疏水性增粘剂可以选自硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、棕榈酸、胆固醇中的任何一种或多种。

作为优选，在上述第一步中，可将具有(甲基)丙烯酸酐官能团的疏水性物质加入到第一溶液中，以调节凝胶纳米颗粒的亲水性和疏水性。具有(甲基)丙烯酸酐官能团的疏水性物质可以选自以下物质中的至少一种：硬脂酸单(甲基)丙烯酸酐、(甲基)丙烯酸酐化癸二酸、(甲基)丙烯酸酐化1，6-二(对羧基苯氧基)己烷、(甲基)丙烯酸酐化1，3-二(对羧基苯氧基)丙烷。

上述高分子稳定剂的浓度以重量计通常为1％-8％，更优选为2％-5％。当高分子稳定剂的浓度低于1％时，没有足够的稳定剂分子聚集在乳滴周围，因此无法充分发挥高分子稳定剂的作用。当高分子稳定剂的浓度高于8％时，形成的乳液粘度很高，无法得到稳定的乳液。

上述的光引发剂包括生物相容性的紫外光引发剂和可见光引发剂。在适当波长的激发下，光引发剂或引发体系可通过光化学反应产生自由基或阳离子等来引发单体发生聚合反应。光引发剂可以是单个的有机分子，也可由几种化合物组成的光引发体系，它们通过对特定波长光的吸收而激发生成活性引发物质，选择体内聚合光引发剂时须考虑到它的生物相容性，溶解性，稳定性和细胞毒性等。在本发明的技术方案中，可用的生物相容性光引发剂包括2，2-二甲氧基-二苯基苯乙酮(DMPA)或樟脑醌-乙基-4-N，N-二甲基胺安息香酸对(CQ+4EDMAB)，前者用于紫外光交联，后者可在可见光下引发反应。其它可用的光引发剂在文献“周刚，陈建山，奚海，吴宇雄，紫外光固化光引发剂，精细化工中间体，2003，33(2)，6-8)中有所描述，其包括：安息香双甲醚，1-羟基环己基苯酮、2-甲基-1-(4-甲硫基苯基)-2-吗啉基-1-丙酮、2，2-二甲基-a-羟基苯乙酮，1-羟基环己基苯酮(184)、2-羟基-甲基苯基丙烷-1-酮，2-异丙基硫杂蒽酮，(2，4，6-三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦等。光引发剂的用量以重量百分比计通常为可聚合的大分子单体总重量的0.1％-5％，更优选为0.5％-2％。当光引发剂的用量低于0.1％时，引发剂的量不足以引发光聚合反应。当光引发剂的用量超过5％时，引发剂的量过多而有可能造成毒性残留。

关于本发明中可用的水不溶性有机溶剂，可以举出二氯甲烷、氯仿等；优选二氯甲烷。这是因为与氯仿相比，二氯甲烷对本发明的PEG系大分子单体具有更好的溶解性。顺便提及，本发明的PEG系大分子单体在水和有机溶剂中均具有溶解性，如果采用对大分子单体溶解性更优良的二氯甲烷，可以在乳液聚合法制备本发明的凝胶纳米颗粒过程中防止大分子单体泄漏到水中而降低凝胶纳米颗粒的产率。

上述“高分子稳定剂”是指在乳液聚合中可以吸附在乳滴的表面而防止或抑制纳米尺寸的乳滴发生团聚或聚集的生物相容性的高分子聚合物。高分子稳定剂包括天然高分子稳定剂和合成高分子稳定剂。天然高分子稳定剂包括明胶、阿拉伯胶、西黄耆胶、卵磷脂、大豆磷脂等。合成高分子稳定剂包括聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、poloxamer188、182、407、908等。本发明优选的高分子稳定剂是聚乙烯醇。在本发明的技术方案中，高分子稳定剂的浓度以重量计通常为1％-8％，更优选为2％-5％。当高分子稳定剂的浓度低于1％时，没有足够的稳定剂分子聚集在乳滴周围，因此无法充分发挥高分子稳定剂的作用。当高分子稳定剂的浓度高于8％时，形成的乳液粘度很高，无法得到稳定的乳液。

可以采用任何已知的技术将所得到的凝胶纳米颗粒进行分离。可以采用任何已知的技术将所得到的凝胶纳米颗粒进行分离。例如，可以采用超滤技术或离心技术将所得的凝胶纳米颗粒进行分离。在一个实施方案中，可以采用得自美国Beckman Coulter公司的Avanti J-20XPI离心机在4℃下将凝胶纳米颗粒进行分离。优选的是，离心速度为18000rpm到30000rpm，离心时间为20分钟到40分钟。在离心过程中，优选的是，对所得的凝胶纳米颗粒进行多次离心和洗涤，以充分除去过量的高分子稳定剂和未反应的单体。但是洗涤的次数不能过多，以2次到4次为宜。过多的洗涤次数会降低凝胶纳米颗粒的产率。

根据本发明的PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，将所得的凝胶纳米颗粒重分散在少量的去离子水中进行冷冻干燥。冷冻干燥技术是指在真空环境中，将已冻结物品中的冰态的水分不经过融化而直接由固态变为气态的升华的技术。采用冷冻干燥技术可以保持本发明的凝胶纳米颗粒的固有形态，并且可以充分除去凝胶纳米颗粒中的水分，以延长凝胶纳米颗粒的贮存寿命。在一个实施方案中，采用北京博医康试验仪器有限公司生产的FD-1冷冻干燥机将凝胶纳米颗粒冷冻干燥48小时。在冷冻干燥过程中，优选的是，在冷冻干燥之前在纳米颗粒悬浮液中加入冷冻干燥剂，以得到流动性优良的纳米颗粒粉末。可以采用任何在医药技术领域中的使用的冷冻干燥剂，可用的冷冻干燥剂包括甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、葡萄糖、甘油、山梨醇、可溶性淀粉、明胶、抗坏血酸、谷氨酸钠、L-半胱氨酸盐酸盐、脱脂奶粉以及它们的混合物等，优选为：甘露醇。冷冻干燥剂的用量以重量计可以为干态凝胶纳米颗粒重量的1w％-10w％，优选为4w％-7w％。

本发明中采用失重法测定PEG系凝胶纳米粒的体外降解行为，一定量PEG系凝胶纳米粒置于透析袋(截留分子量为12000D)中，放入磷酸盐缓冲液中(pH＝7.4)，37℃恒温水浴振荡，振荡频率为100次/分钟，间隔一定时间取出样品，冷冻干燥，再次称重，以累积失重率对降解时间作降解曲线。图5是具有代表性的PEG系凝胶纳米粒的降解趋势，从图中可以看出凝胶纳米粒具有较快的降解速度，因而很少发生降解产物的体内蓄积，若用于做药物载体，亦能提高包载药物的溶出速率。加入疏水性增粘剂或疏水性可光交联单体可以调节其降解速率，例如本发明的一个实施方案中加入疏水性添加剂硬脂酸，可以调节凝胶纳米粒的降解速率，将降解时间延长4-5倍。

多种方法可以测定所得PEG系凝胶纳米颗粒的粒径以及粒径分布，这些方法包括激光散射法(其包括静态光散射法和动态光散射法)和激光衍射法。在实施例2中，采用可得自美国布鲁克海文仪器公司的BI-90Plus激光粒度仪测定凝胶纳米颗粒的粒度以及粒度分布；将凝胶纳米粒的混悬液简单超声以获得均一的分散液，然后用激光粒度仪在室温下垂直(90°)扫描三次，仪器自动计算平均值和多分散系数(PI)。

本发明相对于现有技术，具有如下优点：

(1)本发明所述方法得到的产物PEG系凝胶纳米颗粒，除了具有小尺寸效应、良好的润湿性外，更重要的是可将难溶性药物以无定型状态分散在其中的三维网络结构中，有效地起到增溶药物和稳定药物存在状态的作用，可望作为新型难溶性药物的载体。

(2)本发明所述方法得到的产物PEG系凝胶纳米颗粒具有独特的性质，即它们具有水凝胶和纳米粒的双重特点，除了具有一般纳米粒的小尺寸效应外，还可以被良好溶剂(如水等)膨胀。本发明所述方法得到的产物PEG系凝胶纳米颗粒是内部交联的胶体粒子，可以吸收超过自身多倍的溶剂，呈现从聚合物溶液到实体球的一系列性质。因此，与一般的纳米粒相比，这种膨胀性的胶体系统不但与组织亲和性好，还可以实现包括零级(摄取水后)和脉冲式释药(遇到特定的环境条件，如pH值，温度变化，离子强度等)。但是它们与水凝胶又有所不同，主要体现在黏度较低，表面积大，对外界条件反应灵敏等。这些性质使它们在发展特定的药物载体中发挥着有趣和广泛的应用，特别是口服给药应用中。

附图说明

图1中(A)是本发明实施例1的扫描电镜照片；(B)是本发明实施例2的透射电镜照片；该PEG系凝胶纳米颗粒具有球形和椭圆形的形态，粒径大部分分布在200nm-600nm。

图2是本发明实施例2的PEG系凝胶纳米颗粒的代表性的粒径分布DLS图；

图3是根据本发明实施例5的PEG系载药凝胶纳米颗粒的透射电镜照片；

图4是根据本发明实施例7的具有核-壳结构的PEG系载药凝胶纳米颗粒的透射电镜照片；

图5是根据本发明实施例1，2，5制备有代表性的三种PEG系凝胶纳米颗粒的体外降解曲线。

具体实施方式

实施例1：PEG400系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG400系大分子单体和引发剂DMPA(1％w/w，基于PEG系大分子单体)加入10ml 氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于2.5％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射60分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得凝胶纳米粒。

实施例2：PEG4000系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG4000系大分子单体和引发剂DMPA(1％w/w，基于大分子单体)加入10ml二氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于2.5％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射60分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得凝胶纳米粒。

实施例3：PEG4000系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG4000系大分子单体和引发剂DMPA(1％w/w，基于大分子单体)加入10ml二氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于4％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射60分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得凝胶纳米粒。

实施例4：PEG4000系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG4000系大分子单体和引发剂DMPA(1％w/w，基于大分子单体)加入10ml二氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于4％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射30分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得凝胶纳米粒。

实施例5：PEG4000系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG4000系大分子单体、100mg硬脂酸和引发剂DMPA(1％w/w，基于大分子单体)加入10ml二氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于2.5％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射60分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得凝胶纳米粒。

实施例6：PEG4000系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG4000系大分子单体、100mg硬脂酸单(甲基)丙烯酸酐和引发剂DMPA(1％w/w，基于大分子单体)加入10ml二氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于2.5％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射60分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得具有核-壳结构的凝胶纳米粒。

实施例7：PEG4000系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG4000系大分子单体、100mg硬脂酸单(甲基)丙烯酸酐和引发剂DMPA(3％w/w，基于大分子单体)加入10ml二氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于2.5％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射60分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得具有核-壳结构的凝胶纳米粒。

实施例8：PEG400系凝胶纳米颗粒的制备

将500mg PEG400系大分子单体、100mg硬脂酸单(甲基)丙烯酸酐和引发剂DMPA(1％w/w，基于大分子单体)加入10ml二氯甲烷中，超声充分溶解，机械搅拌下(800r/min)立即滴加上述溶液于2.5％的PVA溶液中。滴加完，继续搅拌2分钟，然后在250W下冰浴超声10分钟，转到紫外灯下进行辐射60分钟后，关掉紫外灯，继续搅拌(300r/min)2小时，以除去二氯甲烷，得纳米粒混悬液。将所得纳米粒混悬液先于1000r/min下低速离心10分钟，再20000r/min高速离心30分钟，沉淀用蒸馏水洗涤3次。将所得到的沉淀超声分散在蒸馏水中，加入甘露醇，冷冻干燥48小时得具有核-壳结构的凝胶纳米粒。

不应认为本发明局限于本文所述的具体实例，而应理解为本发明覆盖在所附权利要求书中完整地列出的本发明的所有方面。对本发明所属领域的技术人员而言，在阅览本发明后，本发明可适用的各种修改、等同方法、以及各种结构都是显而易见的。

Claims

1.一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

第六步，分离。

2.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的PEG系大分子单体选自以下PEG主链末端具有可聚合双键的PEG衍生物单体中的至少一种：

末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG400、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG600、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG1000、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG2000、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG4000、末端(甲基)丙烯酸酐化的PEG6000。

3.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的光引发剂包括紫外光引发剂2，2-二甲氧基-二苯基苯乙酮或可见光引发剂樟脑醌-乙基-4-N，N-二甲基胺安息香酸对。

4.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述光引发剂的用量以重量百分比计为可交联的PEG系大分子单体总重量的0.5％-2％。

5.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的水不溶性有机溶剂选自卤代烃中的二氯甲烷和氯仿。

6.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，在第二步中，所述高分子稳定剂的浓度以重量计为2％-5％。

7.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的高分子稳定剂为：

天然高分子稳定剂明胶、阿拉伯胶、西黄耆胶、卵磷脂、大豆磷脂中的一种或多种；或者

合成高分子稳定剂聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、泊咯沙姆188、182、407、908中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，在所述第一步中，可将疏水性增粘剂加入到第一溶液中，以调节第一溶液的粘度，疏水性增粘剂选自硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、棕榈酸、胆固醇中的任何一种或多种。

9.根据权利要求1所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，在所述第一步中，可将具有(甲基)丙烯酸酐官能团的疏水性物质加入到第一溶液中，以调节凝胶纳米颗粒的亲水性和疏水性。

10.根据权利要求9所述一种PEG系凝胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述具有(甲基)丙烯酸酐官能团的疏水性物质选自以下物质中的至少一种：硬脂酸单(甲基)丙烯酸酐、(甲基)丙烯酸酐化癸二酸、(甲基)丙烯酸酐化1，6-二(对羧基苯氧基)己烷、(甲基)丙烯酸酐化1，3-二(对羧基苯氧基)丙烷。