CN101153864A - 一种检测愈伤灵胶囊有效成分含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测愈伤灵胶囊有效成分含量的方法，本发明所提供的，包括如下步骤：1)对照品溶液的制备2)供试品溶液的制备3)绘制标准曲线4)测定愈伤灵胶囊有效成分含量。本发明通过大量实验筛选了愈伤灵胶囊中的有效成分，并筛选了从愈伤灵胶囊成药中提取岩白菜素的方法并经过技术处理使其适合高效液相色谱检测，并建立了色谱检测的条件。本发明方法可以切实有效的检测愈伤灵胶囊有效成分的含量，能有效控制产品的质量，保证产品的疗效，可以广泛应用于药厂的生产控制中。
Description
技术领域
本发明涉及传统中药的现代化的质量控制方法，特别是涉及一种检测愈伤灵胶囊有效成分含量的方法。
背景技术
愈伤灵胶囊是一种传统中药制剂，具有活血散瘀，消肿止痛的功效；用于治疗跌打挫伤，筋骨瘀血肿痛，亦可用于骨折的辅助治疗。目前，该产品国内有十几家企业生产，生产厂家都采用传统的标准控制产品质量，只进行定性分析，不进行定量分析。由于中成药的质量和中药材的质量关联性非常强，而疗效取决主要有效成分的含量。中成药的生产过程中经过很多工艺(烘、炒、粉碎等)，无法控制生产过程中药材中的有效成分是否丢失，因此合格的中药材未必能成产出合格有效的产品。但是，现有的通用标准只对成品进行定性分析，无法控制成品的有效成份含量，无法保证疗效。因此，寻找具有可操作性且灵敏度可靠的方法控制愈伤灵胶囊的主要有效成份是保证产品质量和疗效的有效手段。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简单、灵敏度可靠、检出限合理的检测愈伤灵胶囊有效成分含量的方法。
本发明所提供的检测愈伤灵胶囊有效成分含量的方法，包括如下步骤：
1)对照品溶液的制备
精密称取岩白菜素用色谱流动相溶解，摇匀，即得对照品溶液；
2)供试品溶液的制备
取待测愈伤灵胶囊样品用色谱流动相溶解、过滤，收集滤液即得供试品溶液；
3)绘制标准曲线
精密称取对照品溶液，配制为不同浓度的标准溶液，进行高效液相色谱法测定，记录峰面积，以标准浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
4)测定愈伤灵胶囊有效成分含量
取供试品溶液进行高效液相色谱法测定，记录峰面积，根据标准曲线换算得到愈伤灵胶囊有效成分的含量。
其中，进行高效液相色谱法测定所用的色谱柱为Hypersil ODS，以十八烷基键合硅胶为填充剂，理论板数按岩白菜素峰计算不低于4000。所述色谱流动相为甲醇-水混合溶剂，甲醇与水的体积比为1∶3-1∶4，优选为22∶78。
本发明通过大量实验筛选了愈伤灵胶囊中的有效成分，并筛选了从愈伤灵胶囊成药中提取岩白菜素的方法并经过技术处理使其适合高效液相色谱检测，并建立了色谱检测的条件。本发明方法可以切实有效的检测愈伤灵胶囊有效成分的含量，能有效控制产品的质量，保证产品的疗效，可以广泛应用于药厂的生产控制中。
具体实施方式
实施例1、测定愈伤灵胶囊有效成分含量
1)仪器与试剂
日本岛津LC-10AT VP液相色谱仪；Class VP5.03色谱工作站；超声波清洗器KQ-250BKUN昆山市超声仪器厂；岩白菜素对照品批号：(0703-200020)，购于中国药品生物制品检定所；乙腈和甲醇均为HPLC级。
2)色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS，4.6×200mm(sn US41E08619)，以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(22∶78)为流动相；流速：0.9ml/min；检测波长为275nm，理论板数按岩白菜素峰计算应不低于4000。
3)溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取岩白菜素对照品10mg，放置于10ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
供试品溶液的制备：取愈伤灵胶囊粉末10g，研细，利用甲醇-水(体积比为22∶78)约80ml溶解，超声30min，定容至100ml，摇匀，过0.45um滤膜，收集滤液即得供试品溶液。
4)建立标准曲线
精密称取对照品溶液，配制成1000、500、250、125、62.5μg/ml的标准溶液，分别精密吸取对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定，记录峰面积，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：y＝3540.8x+4604.7，r2＝0.9995，表明275nm条件下检测，岩白菜素在62.5～1000μg/ml之间含量和峰面积具有良好的线性。结果见表1。
表1岩白菜素测定线性关系实验结果
| 浓度(μg/ml) | 1000 | 500 | 250 | 125 | 62.5 |
| 峰面积 | 3533868 | 1802361 | 871321 | 484394 | 191362 |
5)测定愈伤灵胶囊有效成分含量
精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定，记录峰面积，根据标准曲线计算岩白菜素的含量，连续测定5次，结果如表2。上述方法测得供试品溶液含量不低于180μg/ml，可认为产品合格。
表2愈伤灵胶囊岩白菜素测定重复性实验的结果
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均 | RSD(％) |
| 含量(μg/ml) | 190.49 | 192.85 | 190.55 | 190.67 | 188.70 | 190.65 | 0.77 |
以上数据表示方法的重现性很好。
实施例2、本发明检测方法的准确性试验
一、愈伤灵胶囊的处方：
三七 180g 红花 120g 黄瓜子(炒) 120g
土鳖虫60g 当归 90g 自然铜(煅) 30g
冰片 12g 续断 60g 落新妇 50.4g
制成 2408粒
所需的中药材均购自河北安国中药材市场。
二、生产工艺：(工艺中除特殊说明，均为常规操作)
1)按照处方量精确秤取三七、红花、当归、续断、落新妇五味药材混合粉碎粗粉，加70％乙醇回流，第一次加乙醇6倍量，提取2小时，第二、第三次加乙醇3倍量，各提取2小时，静置，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.20-1.28(55℃-60℃)的清膏，80℃真空干燥，粉碎至细粉。
2)将黄瓜籽(炒)、自然铜(煅)、土鳖虫粉碎至细粉，冰片研细。
3)上述的所有细粉均需过100目细筛。
4)将以上所得药粉混匀，装胶囊即可。
三、主要有效成分筛选
按照下表3要求变化处方中的单一成分，其他组分不变；减少的量用药用淀粉补充；按照上述工艺生产，各组药分开备用。
取健康的昆明种一级小白鼠270只(购于辽宁医学院试验动物中心)，体重18～22g，随机分为27组，每组10只，雌雄各半。
取各组药，倒出药粉，按照0.75g/kg体重称量各种药粉，用适量水混匀，给小鼠灌胃，每日1次，连续3d。末次给药后1h，给小白鼠腹腔内注射0.6％的醋酸溶液，剂量为0.2ml/只，观察小白鼠产生的“歪扭”反应，记录注射后20min内小鼠的扭体次数。结果如下表3：
表3愈伤灵胶囊单一组分变化与小鼠扭体次数表
| 变化成分 | 变化量 | 扭体次数(次/20分钟) |
| 落新妇 | 0 | 21.3±5.6 |
| -20％ | 26.1±4.3 | |
| -40％ | 33.7±6.4 | |
| 红花 | 0 | 21.4±3.9 |
| -20％ | 22.1±3.2 | |
| -40％ | 23.4±4.4 | |
| 三七 | 0 | 21.7±5.9 |
| -20％ | 22.6±4.2 | |
| -40％ | 23.9±3.4 | |
| 冰片 | 0 | 21.9±4.9 |
| -20％ | 22.8±7.2 | |
| -40％ | 23.6±5.4 | |
| 黄瓜子(炒) | 0 | 21.7±4.3 |
| -20％ | 22.8±6.2 | |
| -40％ | 23.4±8.4 | |
| 土鳖虫 | 0 | 22.1±3.6 |
| -20％ | 22.8±7.2 | |
| -40％ | 22.6±5.4 | |
| 当归 | 0 | 21.8±5.1 |
| -20％ | 23.6±5.4 | |
| -40％ | 24.6±4.3 | |
| 自然铜(煅) | 0 | 21.8±5.9 |
| -20％ | 22.1±4.2 | |
| -40％ | 23.6±4.1 | |
| 续断 | 0 | 22.0±3.8 |
| -20％ | 22.5±7.2 | |
| -40％ | 23.1±6.4 |
上表数据显示，愈伤灵胶囊疗效对落新妇的变化最为敏感，因此要保证愈伤灵胶囊的疗效和质量，监控落新妇的含量最为便捷有效。岩白菜素为落新妇的特征性成分，选择岩白菜素含量来表征愈伤灵胶囊的有效成分是可行的。
四、本发明检测方法的准确性试验
按照实施例1的检测方法测定几组不同来源的愈伤灵胶囊，同时观察疗效(每组10只小鼠)结果如下表4：
表4不同愈伤灵胶囊疗效结果表
| 样品 | 样品来源 | 岩白菜素含量(供试品溶液含量：μg/ml) | 疗效(小鼠扭体次数：次/20分钟) |
| 1 | 锦州奥鸿药业有限责任公司生产(批号：20050301) | 134 | 27.5±7.1 |
| 2 | 锦州奥鸿药业有限责任公司生产(批号：20060503) | 161 | 23.1±5.6 |
| 3 | 锦州奥鸿药业有限责任公司生产(批号：20070302) | 184 | 21.3±3.4 |
| 4 | 锦州奥鸿药业有限责任公司生产(批号：20070805) | 197 | 21.1±4.1 |
上述结果可以看出，随着岩白菜素含量的变化，样品的疗效出现明显差别，含量越高，疗效越好；其中样品3和样品4含量都在180μg/ml以上，但二者的疗效没有明显差别，因此，选用监控岩白菜素含量的方法来控制愈伤灵胶囊的疗效是可行的，将控制指标定为180μg/ml以上也是科学的。
Claims (5)
1.一种检测愈伤灵胶囊有效成分含量的方法，包括如下步骤：
1)对照品溶液的制备
精密称取岩白菜素用色谱流动相溶解，摇匀，即得对照品溶液；
2)供试品溶液的制备
取待测愈伤灵胶囊样品用色谱流动相溶解、过滤，收集滤液即得供试品溶液；
3)绘制标准曲线
精密称取对照品溶液，配制为不同浓度的标准溶液，进行高效液相色谱法测定，记录峰面积，以标准浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
4)测定愈伤灵胶囊有效成分含量
取供试品溶液进行高效液相色谱法测定，记录峰面积，根据标准曲线换算得到愈伤灵胶囊有效成分的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：进行高效液相色谱法测定所用的色谱柱为Hypersil ODS，以十八烷基键合硅胶为填充剂，理论板数按岩白菜素计算不低于4000。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述色谱流动相为甲醇-水混合溶剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：甲醇与水的体积比为1∶3-1∶4。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：甲醇与水的体积比为22∶78。
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