CN101152576A - 防治阿尔茨海默病的药物 - Google Patents

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Abstract

一种防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于：以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗Aβ单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗Aβ单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品。本发明将能够抑制Aβ单体聚合和能促进Aβ聚合物解聚的抗Aβ单链抗体基因，通过外周和脑内转染，在体内产生抗Aβ单链抗体，使scFv在体内长期表达，从而有效清除阿尔茨海默病脑内的Aβ，避免了抗Aβ免疫治疗所引起的中枢神经系统炎症反应和微血管出血的副作用，并避免了抗Aβ药物的反复给药，可减少治疗成本。本发明提供了一个安全有效和长期发挥作用的阿尔茨海默病治疗新技术，具有广阔的临床应用前景。

Description

防治阿尔茨海默病的药物
(一)、技术领域
本发明涉及一种生物医学领域，特别是一种防治阿尔茨海默病的药物。
(二)、背景技术
阿尔茨海默病的其英文词是Alzheimer’s disease，通常缩写简称为AD。AD是以痴呆为特征的进行性神经系统退行性疾病，是当前危害老年人群健康和生命的重要疾病。目前全球有AD患者约2430万人，每年新发病例460万，预计到2040年全球将共有AD患者8100万。AD已成为当前人口死亡的第7-8位原因，65岁以上人群死亡的第4-5位原因。AD给家庭和社会带来的经济负担，在所有疾病中排位三，仅次于心脏病和癌症。我国面临着严峻的人口老龄化形势，是世界上老年人口最多的国家。到2020年，我国将有AD患者430万-650万，每年新发病例200万-300万；到2050年，我国将有AD患者800万-1200万，每年新发病例450万-600万。在未来50年中，AD将成为我国一个非常沉重的经济和社会负担。
目前还没有能够预防AD发生、延缓或阻止AD病情进展的方法和药物。在AD的临床治疗方面，迄今为止仅有几个药物被美国食品与药品管理局批准用于轻度和中度AD的治疗，但这些药物都是神经递质调节药物，仅能暂时改善部分患者的认知功能，不能延缓或阻止病情进展。
Aβ是被认为是AD的致病物质，降低脑内Aβ水平是防治AD的一个重要策略。免疫治疗是近年来在此方面所取得的一个重要进展。研究表明，主动免疫(接种Aβ疫苗)和被动免疫(直接注射抗Aβ抗体)治疗，均能有效清除AD小鼠和病人脑内的Aβ，减轻Aβ相关病理改变，并改善认知能力。因此抗Aβ免疫治疗被认为是最有希望成为首个有效清除患者脑内Aβ的AD治疗新方法。但是，免疫治疗存在一些严重副作用，包括引起中枢神经系统炎症反应和微血管出血。这些副作用都和抗Aβ抗体的Fc段介导的免疫炎症反应有关。
(三)、发明内容
本发明的目的就是提供一种防治阿尔茨海默病的药物，它所携带的scFv基因，可以在人体内长期产生，能够持续不断地能除脑内Aβ，同时避免了中枢神经系统炎症反应和微血管出血的副作用。
本发明的目的是通过这样的技术方案实现的，它是以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗Aβ单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗Aβ单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品；其中，所述的抗Aβ单链抗体基因的核苷酸序列为：
  1 atggcccagg tgcagctcgt gcagtctggg gctgaggtga agaagcctgg ggcctcagtg
 61 aaggtttcct gcaaggcttc tggatacacc ttcactagct atgctatgca ttgggtgcgc
121 caggcccccg gacaaaggct tgagtggatg ggatggatca acgctggcaa tggtaacaca
181 aaatattcac agaagttcca gggcagagtc accattacca gggacacatc cgcgagcaca
241 gcctacatgg agctgagcag cctgaggtct gaagacacgg ccgtgtatta ctgtgcaaga
301 agtcgtagga attggggcca aggtaccctg gtcaccgtgt cgagaggtgg aggcggttca
361 ggcggaggtg gctctggcgg tggcggatcg tctgagctga ctcaggaccc tgctgtgtct
421 gtggccttgg gacagacagt caggatcaca tgccaaggag acagcctcag aagctattat
481 gcaagctggt accagcagaa gccaggacag gcccctgtac ttgtcatcta tggtaaaaac
541 aaccggccct cagggatccc agaccgattc tctggctcca gctcaggaaa cacagcttcc
601 ttgaccatca ctggggctca ggcggaagat gaggctgact attactgtaa ctcccgggac
661 agcagtggta accatgtggt attcggcgga gggaccaagc tgaccgtcct aggt。
在本发明中，重组病毒可以是重组腺相关病毒，可以是慢病毒，也可以是腺病毒，还可以是逆病毒。分泌信号肽核苷酸序列可以是：atggactggacctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactcc，可以是：gagcccacag cctcttcttg aggatcctgg agcaggtggc atgccactcc gactgga，也可以是：tacaggctcc gaggagccct ccggtcaggat ggatgacagc cttcgccttatggacc，当然，它还可以是任何能够使所表达蛋白分泌到细胞外的核苷酸序列。
在说明本发明的制备方法之前，现将相关的符号作如下的解释：
1、scFv：它是人源性抗Aβ单链抗体，其英文词是Single chain antibody，通常缩写成scFv。
2、pGEX-6P-scFv：它是包含scFv基因的质粒(名称为pGEX-6P)，用于表达生成scFv蛋白。
3、AAV：它是腺相关病毒，其英文词时Adeno-associated virus，通常缩写成AAV。
4、pSNAV1：它是编码AAV基因的质粒，用于产生AAV。
5、pSNAV1-scFv：它是含有scFv基因的AAV质粒，用于产生含有scFv基因的AAV。
6、BHK-21细胞：它是一种细胞，用于生产AAV。
7、G418：它是一种抗生素，用于选择含pSNAV1-scFv质粒的细胞。
8、AAV rep基因：它是编码AAV rep的基因，rep是replicate的缩写，在病毒的复制、基因的表达调控及整合中起重要作用。
9、AAV cap基因：它是编码AAV cap的基因，cap是capsid的缩写，在病毒包装中有重要作用。
10、辅助病毒rHSV1/repcap：它是一种含有AAV rep基因和cap基因的辅助病毒，pSNAV1需要在辅助病毒rHSV1/repcap的帮助下，才可以产生AAV。
11、rAAV病毒颗粒：它是重组腺相关病毒，其英文词为recombinedadeno-associated virus。在本专利中指由pSNAV1编码的AAV。
12、AAV-scFv：它是指含有scFv基因的AAV。
现以重组病毒为：AAV、信号肽序列为：atggactgga cctggaggat cctcttcttggtggcagcag ccacaggagc ccactcc为例，来说明本发明的制备方法及使用方法：
本发明的制备方法是：首先采用多聚酶链式反应(PCR)方法从pGEX-6P-scFv质粒中克隆出scFv基因，并引入分泌信号肽和酶切位点，然后酶切连入AAV质粒pSNAV1中，构成pSNAV1-scFv质粒。所述的信号肽序列为：atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactcc。将所得质粒进行转化、扩增。提取质粒，进行DNA单向测序鉴定。将pSNAV1-scFv质粒导入BHK-21细胞，G418选择pSNAV1-scFv质粒载体细胞。加入含AAV rep和cap基因的辅助病毒rHSV1/repcap，感染pSNAV1-scFv载体细胞，进行病毒的复制和包装。搜集培养上清，离心。加入聚乙二醇和NaCl，孵育，离心，搜集rAAV病毒颗粒沉淀。PBS重悬，氯仿抽提。搜集上清，离子交换柱层析纯化浓缩AAV病毒颗粒。SDS凝胶电泳印染法鉴定AAV-scFv病毒纯度，DNA斑点杂交法确定病毒滴度。分装后低温保存。
本发明的使用方法是：将所述AAV-scFv病毒制品，用注射器注入脑组织、侧脑室或者肌肉组织中，AAV-scFv病毒感染组织细胞，并将所携带的scFv基因带入细胞内。scFv基因在细胞内表达，产生scFv，并释放到细胞外，与Aβ结合而发挥清除脑内Aβ的治疗作用。
scFv具有Aβ结合能力，能够抑制Aβ单体的聚合，并促进Aβ原纤维的解聚。scFv不含Fc段，可避免与其相关的副作用。通过用于基因转染的重组病毒，将scFv基因在外周和脑内转染，使scFv基因在细胞中表达、释放，从而达到清除脑内Aβ，治疗AD的目的。
由于采用了上述技术方案，本发明具有如下的优点：
1.避免了抗Aβ免疫治疗所引起的中枢神经系统炎症反应和微血管出血的副作用。
2.通过基因转染技术，使scFv在体内长期表达，避免了抗Aβ药物的反复给药，可减少治疗成本。本发明提供了一个安全有效和长期发挥作用的AD治疗新技术，具有广阔的临床应用前景。
(四)、附图说明
本发明的附图说明如下：
图1是将Aβ42单体单独，或与scFv-GST或GST共同孵育后的Aβ42纤维的荧光强度的比较示意图；
图2是将Aβ42纤维单独，或与scFv-GST或GST共同孵育后的Aβ42纤维的荧光强度的比较示意图；
图3是表明AAV-scFv海马转染对Aβ的清除作用的照片。
(五)、具体实施方式
下面结合实施例及实验例对本发明作进一步说明：
本发明是以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗Aβ单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗Aβ单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品；其中，所述的抗Aβ单链抗体基因的核苷酸序列为：
  1 atggcccagg tgcagctcgt gcagtctggg gctgaggtga agaagcctgg ggcctcagtg
 61 aaggtttcct gcaaggcttc tggatacacc ttcactagct atgctatgca ttgggtgcgc
121 caggcccccg gacaaaggct tgagtggatg ggatggatca acgctggcaa tggtaacaca
181 aaatattcac agaagttcca gggcagagtc accattacca gggacacatc cgcgagcaca
241 gcctacatgg agctgagcag cctgaggtct gaagacacgg ccgtgtatta ctgtgcaaga
301 agtcgtagga attggggcca aggtaccctg gtcaccgtgt cgagaggtgg aggcggttca
361 ggcggaggtg gctctggcgg tggcggatcg tctgagctga ctcaggaccc tgctgtgtct
421 gtggccttgg gacagacagt caggatcaca tgccaaggag acagcctcag aagctattat
481 gcaagctggt accagcagaa gccaggacag gcccctgtac ttgtcatcta tggtaaaaac
541 aaccggccct cagggatccc agaccgattc tctggctcca gctcaggaaa cacagcttcc
601 ttgaccatca ctggggctca ggcggaagat gaggctgact attactgtaa ctcccgggac
661 agcagtggta accatgtggt attcggcgga gggaccaagc tgaccgtcct aggt。
在本发明中，重组病毒可以是重组腺相关病毒，可以是慢病毒，也可以是腺病毒，还可以是逆病毒。分泌信号肽核苷酸序列可以是：atggactggacctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactcc，可以是：gagcccacag cctcttcttg aggatcctgg agcaggtggc atgccactcc gactgga，也可以是：tacaggctcc gaggagccct ccggtcaggat ggatgacagc cttcgccttatggacc，当然，它还可以是其它任何具有相同作用和功能的分泌信号肽核苷酸序列。
现以重组病毒为：AAV、信号肽序列为：atggactgga cctggaggat cctcttcttggtggcagcag ccacaggagc ccactcc为例，来说明本发明的制备方法及使用方法：
本发明的制备方法是：首先采用多聚酶链式反应(PCR)方法从pGEX-6P-scFv质粒中克隆出scFv基因，并引入分泌信号肽和酶切位点，然后酶切连入AAV质粒pSNAV1中，构成pSNAV1-scFv质粒。所述的信号肽序列为：atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactcc。将所得质粒进行转化、扩增。提取质粒，进行DNA单向测序鉴定。将pSNAV1-scFv质粒导入BHK-21细胞，G418选择pSNAV1-scFv质粒载体细胞。加入含AAV rep和cap基因的辅助病毒rHSV1/repcap，感染pSNAV1-scFv载体细胞，进行病毒的复制和包装。搜集培养上清，离心。加入聚乙二醇和NaCl，孵育，离心，搜集rAAV病毒颗粒沉淀。PBS重悬，氯仿抽提。搜集上清，离子交换柱层析纯化浓缩AAV病毒颗粒。SDS凝胶电泳印染法鉴定AAV-scFv病毒纯度，DNA斑点杂交法确定病毒滴度。分装后低温保存。
本发明的使用方法是：将所述AAV-scFv病毒制品，用注射器注入脑组织、侧脑室或者肌肉组织中，AAV-scFv病毒感染组织细胞，并将所携带的scFv基因带入细胞内。scFv基因在细胞内表达，产生scFv，并释放到细胞外，与Aβ结合而发挥清除脑内Aβ的治疗作用。
scFv具有Aβ结合能力，能够抑制Aβ单体的聚合，并促进Aβ原纤维的解聚。scFv不含Fc段，可避免与其相关的副作用。通过用于基因转染的重组病毒，将scFv基因在外周和脑内转染，使scFv基因在细胞中表达、释放，从而达到清除脑内Aβ，治疗AD的目的。
结合上述方法制备出来的AAV-scFv病毒，做出如下的实验例：
1、scFv对Aβ42单体聚合的抑制作用
为检测scFv对Aβ聚合的影响，将30μgAβ42和等摩尔scFv混合，终浓度为25μM。37℃孵育7天。结果显示，Aβ42与scFv-GST按等摩尔浓度混合孵育后，其Thioflavine T荧光强度明显低于Aβ42单独孵育组和Aβ42与GST蛋白共同孵育组的荧光强度，如图1所示，图1中：Aβ是指Aβ42单体单独孵育组，Aβ+scFv是指Aβ42单体与scFv-GST蛋白共同孵育组，Aβ+GST是指Aβ42单体与GST蛋白共同孵育组，GST是指GST蛋白单独孵育组。从图1中可知，本试验中的阳性对照Aβ42单独孵育组和Aβ42与GST蛋白共同孵育组的荧光强度无显著区别，表明在Aβ42与scFv-GST共同孵育组中Aβ42聚合物荧光强度的下降是scFv与Aβ42相互作用的结果，而不是GST蛋白与Aβ42相互作用的结果，它表明scFv具有抑制Aβ单体聚合的作用。
2、scFv对Aβ42聚合物的解聚作用
为检测scFv对Aβ原纤维解聚的影响，首先将30μgAβ42溶于DMEM至25μM，37℃孵育4天。将预先孵育的Aβ和scFv或GST蛋白等量混合，37℃孵育3天。结果显示，在Aβ42聚合物中加入等摩尔浓度的scFv-GST作用3天，如图2所示，图中Aβ是指Aβ42纤维单独孵育组，Aβ+scFv是指Aβ42纤维与scFv-GST蛋白共同孵育组，Aβ+GST是指Aβ42纤维与GST蛋白共同孵育组，GST是指GST蛋白单独孵育组。从图2可知，ThioflavineT荧光强度明显低于Aβ42单独孵育组和Aβ42+GST蛋白共同孵育组，Aβ42单独孵育组和Aβ42+GST蛋白共同孵育组之间的Thioflavine T荧光强度无显著差别，它表明scFv具有促进Aβ聚合物解聚的作用。
3、海马注射AAV-scFv对Aβ的清除作用
本发明采用9月龄Mo/Hu APPswe PS1dE9 AD小鼠。该小鼠为双重转基因小鼠，载有人早老素蛋白-1 DeltaE9突变体和人APP瑞典突变体(APPSwe，KM 593/594 NL)嵌合基因。
小鼠麻醉后，在左侧海马注入2μl AAV-scFv病毒(3×1012particles/ml)，右侧海马注入2μl生理盐水。对照组在左侧海马注入2μl AAV-EGFP(3×1012particles/ml)，右侧海马注入2μl生理盐水。1月后取脑组织进行分析，并分别拍摄出如图3所示的照片，图3中：A是对照组总体Aβ斑染色(免疫组织化学染色)；B是对照组Aβ致密斑染色(Thioflavine S染色)；C是AAV-scFv海马注射组总体Aβ斑染色(免疫组织化学染色)；D是AAV-scFv海马注射组Aβ致密斑染色(Thioflavine S染色)。由图3可以显示出：在对照组中，注射侧的免疫组化反应性Aβ斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率与对照侧比较无显著差异，见图3A。注射侧的Thioflavin S染色Aβ斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率与对照侧比较也无显著差异，见图3C。在AAV-scFv海马注射组中，与对照侧比较，AAV-scFv注射侧的免疫组化反应性Aβ斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率均低于对照侧，见图3B；AAV-scFv注射侧的Thioflavin S染色Aβ斑的数量、平均大小和所占海马总面积的百分率也低于对照侧，见图3D。
采用注射侧与对照侧的比值来进行AAV-scFv海马注射组和对照组的组间比较。AAV-scFv注射组的免疫组化反应性Aβ斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率均显著低于对照组，详见表1；AAV-scFv注射组的Thioflavin S染色Aβ斑的数量和所占海马总面积的百分率低于对照侧，而平均大小的差异无统计学意义，详见表2。这些结果表明AAV-scFv海马注射具有降低脑内Aβ的作用。
表1  AAV-scFv/AAV-EGFP注射侧和对照侧免疫组化反应性Aβ斑的数量比率、平均大小比率和所占海马总面积的百分比比率的组间比较(平均值±标准误)
分组   斑块数量比率 斑块平均大小比率 斑块所占面积比率
对照组AAV-scFv注射组P值   1.05±0.080.65±0.05＜0.001 0.99±0.040.75±0.04＜0.001 0.94±0.100.54±0.05＜0.001
表2 AAV-scFv/AAV-EGFP注射侧和对照侧Thioflavine S染色Aβ斑的数量比率、平均大小比率和所占海马总面积的百分比比率的组间比较(平均值±标准误)
分组   斑块数量比率   斑块平均大小比率   斑块所占面积比率
对照组AAV-scFv注射组P值   1.04±0.040.75±0.03＜0.001   1.01±0.061.07±0.070.555   1.09±0.090.82±0.060.017
4、AAV-scFv侧脑室注射对脑内Aβ的清除作用
治疗组在左侧侧脑室中注入10μl AAV-scFv(3×1012particles/ml)，对照组在左侧侧脑室注入10μl AAV-EGFP(3×1012particles/ml)。3月后取脑测定Aβ水平。结果表明，侧脑室注射组的总Aβ水平和非可溶性Aβ水平低于对照组，可溶性Aβ水平高于对照组，详见表3。这些结果表明侧脑室注射AAV-scFv具有溶解脑内非可溶性Aβ，清除脑内Aβ的作用。
表3 AAV-scFv侧脑室转染后脑内总体Aβ水平的组间比较(平均值±标准误)
分组 总Aβ(pmols/g) 可溶性Aβ(pmols/g)   非可溶性Aβ(pmols/g)
对照组AAV-scFv侧脑室注射组P值 5955±3484022±3420.003 831±1071184±780.043   5124±2692831±331＜0.001
5、AAV-scFv肌肉注射对脑内Aβ的清除作用
治疗组在左侧大腿股四头肌多点注射10μl AAV-scFv(3×1012particles/ml)，对照组在左侧大腿股四头肌多点注射10μl AAV-EGFP(3×1012particles/ml)。3月后取脑组织进行分析。结果表明，肌肉注射组的脑内总体Aβ和非可溶性Aβ水平均低于对照组，可溶性Aβ水平高于对照组(表4)。这些结果表明肌肉注射AAV-scFv具有溶解脑内非可溶性Aβ，清除脑内Aβ的作用。
表4 AAV-scFv肌肉转染后脑内总体Aβ水平的组间比较(平均值±标准误)
分组 总Aβ(pmols/g)   可溶性Aβ(pmols/g)   非可溶性Aβ(pmols/g)
对照组AAV-scFv肌肉注射组   5955±3484489±211   831±107931±98   5124±2693547±213
P值   0.012   0.549   0.002
6、scFv不激活脑内小胶质细胞和T淋巴细胞，也不引起脑内微血管出血。
采用CD68作为激活的小胶质细胞的标志物，采用CD3作为T淋巴细胞的标志物，对脑组织进行分析。结果表明，在海马、侧脑室和肌肉注射AAV-scFv后脑内均未见明显的小胶质细胞激活和T淋巴细胞浸润。肌肉注射AAV-scFv和侧脑室注射AAV-scFv后脑内微血管出血点与对照组(1.87±0.14)无明显差别(p＝0.059，p＝0.075)。这些结果表明scFv不引起脑内的炎症反应，也不引起微血管出血。
核苷酸序列表的计算机可读形式的序列表电子文件
<110>王延江
<120>防治阿尔茨海默病的药物
<130>无
<140>无
<141>无
<160>4
<170>PatentIn Version 2.1
<210>1
<211>714
<212>DNA
<213>人工序列
<400>1
atggcccagg tgcagctcgt gcagtctggg gctgaggtga agaagcctgg ggcctcagtg 60
aaggtttcct gcaaggcttc tggatacacc ttcactagct atgctatgca ttgggtgcgc 120
caggcccccg gacaaaggct tgagtggatg ggatggatca acgctggcaa tggtaacaca 180
aaatattcac agaagttcca gggcagagtc accattacca gggacacatc cgcgagcaca 240
gcctacatgg agctgagcag cctgaggtct gaagacacgg ccgtgtatta ctgtgcaaga 300
agtcgtagga attggggcca aggtaccctg gtcaccgtgt cgagaggtgg aggcggttca 360
ggcggaggtg gctctggcgg tggcggatcg tctgagctga ctcaggaccc tgctgtgtct 420
gtggccttgg gacagacagt caggatcaca tgccaaggag acagcctcag aagctattat 480
gcaagctggt accagcagaa gccaggacag gcccctgtac ttgtcatcta tggtaaaaac 540
aaccggccct cagggatccc agaccgattc tctggctcca gctcaggaaa cacagcttcc 600
ttgaccatca ctggggctca ggcggaagat gaggctgact attactgtaa ctcccgggac 660
agcagtggta accatgtggt attcggcgga gggaccaagc tgaccgtcct aggt       714
<210>2
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactcc  57
<210>3
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<400>3
gagcccacag cctcttcttg aggatcctgg agcaggtggc atgccactcc gactgga  57
<210>4
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<400>4
tacaggctcc gaggagccct ccggtcaggat ggatgacagc cttcgcctt atggacc  57

Claims (8)

1.一种防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于：以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗Aβ单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗Aβ单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品；其中，所述的抗Aβ单链抗体基因的核苷酸序列为：
1   atggcccagg tgcagctcgt gcagtctggg gctgaggtga agaagcctgg ggcctcagtg
61  aaggtttcct gcaaggcttc tggatacacc ttcactagct atgctatgca ttgggtgcgc
121 caggcccccg gacaaaggct tgagtggatg ggatggatca acgctggcaa tggtaacaca
181 aaatattcac agaagttcca gggcagagtc accattacca gggacacatc cgcgagcaca
241 gcctacatgg agctgagcag cctgaggtct gaagacacgg ccgtgtatta ctgtgcaaga
301 agtcgtagga attggggcca aggtaccctg gtcaccgtgt cgagaggtgg aggcggttca
361 ggcggaggtg gctctggcgg tggcggatcg tctgagctga ctcaggaccc tgctgtgtct
421 gtggccttgg gacagacagt caggatcaca tgccaaggag acagcctcag aagctattat
481 gcaagctggt accagcagaa gccaggacag gcccctgtac ttgtcatcta tggtaaaaac
541 aaccggccct cagggatccc agaccgattc tctggctcca gctcaggaaa cacagcttcc
601 ttgaccatca ctggggctca ggcggaagat gaggctgact attactgtaa ctcccgggac
661 agcagtggta accatgtggt attcggcgga gggaccaagc tgaccgtcct aggt。
2.如权利要求1所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于：所述的分泌信号肽核苷酸序列为：atggactgga cctggaggat cctcttcttggtggcagcag ccacaggagc ccactcc。
3.如权利要求1所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的分泌信号肽核苷酸序列为：gagcccacag cctcttcttg aggatcctgg agcaggtggcatgccactcc gactgga。
4.如权利要求1所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的分泌信号肽核苷酸序列为：tacaggctcc gaggagccct ccggtcaggatggatgacagc cttcgcctt atggacc。
5.权利要求1、2、3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于：所述的重组病毒是重组腺相关病毒。
6.权利要求1、2、3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于：所述的重组病毒是慢病毒。
7.权利要求1、2、3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于：所述的重组病毒是腺病毒。
8.权利要求1、2、3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于：所述的重组病毒是逆病毒。
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