CN101129394A - 秦皮甲素预防和/或治疗心脑血管疾病的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了秦皮甲素的预防和/或治疗和晚期糖基化终产物相关疾病以及心脑血管疾病的药物中应用,尤其是在制备预防和治疗动脉粥样硬化的药物中应用。本发明的秦皮甲素具有晚期糖基化终产物裂解作用;具有清除超氧阴离子自由基、保护机体细胞免受自由基损伤的药理作用;能对抗实验性高脂血症,抑制动脉粥样硬化的形成。秦皮甲素为常用中药中提取的单体化合物,具有毒性低、提取工艺简单等优点;其原材料资源广阔,具有很好的应用与开发前景,是一种比较理想的新型的治疗心脑血管疾病的中药。
Description
技术领域
本发明涉及秦皮甲素的预防和/或治疗和晚期糖基化终产物相关疾病以及心脑血管疾病的药物中应用,尤其是在制备预防和治疗动脉粥样硬化的药物中应用。
技术背景
众所周知,心脑血管疾病是全球死亡率最高的疾病,动脉粥样硬化是许多心脑血管病的主要病理基础和主要病因,其发生过程涉及血液和血管壁的众多细胞及其分泌的细胞因子,是动脉壁细胞、细胞外基质、血液成分(单核细胞、血小板及低密度脂蛋白)、局部血流动力学、环境及遗传等诸多因素相互作用引起动脉机械性狭窄的病理过程,是一种复杂的、多因素疾病,其发病的分子和细胞机制至今还不太明确。
蛋白质在转录后经非酶糖化/氧化修饰可形成棕色、带有荧光活性的聚合物,被称为晚期糖基化终产物(advanced glycosylation endproducts,AGEs)。蛋白糖化反应在正常机体缓慢进行,随着年龄的增长逐渐积累,但在持续高血糖、氧化应激、肾功能障碍等病理状态下,由于排泄和代谢障碍,循环中AGEs瀦留,在血管壁动脉粥样硬化病变部位可见AGEs的沉积。AGEs不仅可通过与其他蛋白质发生交联,直接影响细胞和组织功能;而且与其特异受体的结合,通过信号转导机制导致疾病的发生和发展,在动脉粥样硬化、糖尿病并发症、老年性疾病、终末期肾脏病的发生发展中起重要的作用。
机体内AGEs含量随着年龄增长而升高,组织中AGEs的过度蓄积将引起各种组织的病理改变。有多种阻止AGEs累积与形成的治疗方法,降糖药、氨基胍类化合物、ALT946、吡哆胺(pyridoxamine)可以在不同途径阻滞AGEs形成[2],而AGEs裂解剂可以裂解已经形成的AGEs交联结构。实验表明AGEs抑制剂以及AGEs交联结构裂解剂,可以从不同的阶段阻断AGEs的形成,特别是AGEs裂解剂能够逆转或软化由AGEs造成的组织、器官以及血管的硬化,因而有希望成为一类新型治疗药物,用于治疗糖尿病和衰老过程中由于AGEs引发的各种并发症,尤其是动脉粥样硬化。
抗动脉粥样硬化药物是国际制药业争夺的制高点之一。目前,尚无理想的品种上市。针对动脉粥样硬化的病理生理学特征,临床上常用的药物类型包括:调血脂药、抗氧化药、抗血小板药、钙拮抗剂、抗血栓形成药等,这些药物与治疗途径均不能从根本上解决动脉粥样硬化。
秦皮为常用的中药,系木犀科植物白蜡树Fraxinus chinensis Roxb等五种植物的干燥枝皮或树干皮,是我国一味常用中药,始载于汉代的药学专著《神农本草经》,历代本草均有记载。秦皮具有清热燥湿、收涩、明目之功效,常用于治疗热痢、泄泻、赤白带下、目赤肿痛、目生翳膜等症。现代药理研究表明,秦皮具有抗炎镇痛、降低尿血酸、抗凝、止咳祛痰平喘以及抗肿瘤作用,主要用于治疗肠炎、痢疾、白带、慢性气管炎、结膜炎,用于治疗痛风效果甚佳。正品秦皮中主要成分为香豆素类(秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素、宿柱白蜡苷、6,7-二甲氧基香豆素等),此外还有芬类、皂苷和鞣质等,其中秦皮甲素、秦皮乙素是治疗气管炎和菌痢疾患的有效成份。迄今为止,我们没有看到秦皮甲素对动脉粥样硬化的研究报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种新的AGEs抑制剂、AGEs裂解剂以及AGEs受体拮抗剂——秦皮甲素。
本发明提供了秦皮甲素在制备预防和/或治疗和晚期糖基化终产物相关疾病的药物中应用。
所述的晚期糖基化终产物相关疾病包括糖尿病并发症、老年性疾病、终末期肾脏病。
本发明提供了秦皮甲素在制备预防和/或治疗心脑血管疾病的药物中应用。
所述的心脑血管疾病包括高血脂症、动脉粥样硬化。
为解决本发明的技术问题,本发明采用如下的技术方案。本发明通过3个不同的药物作用靶点建立AGEs抑制剂、AGEs裂解剂以及AGEs受体拮抗剂药物筛选模型,通过对4800个样品进行AGEs抑制剂和裂解剂的筛选,发现秦皮甲素具有较好的AGEs抑制作用(半数抑制浓度为2ng/ml)和裂解作用(半数抑制浓度<1ng/ml)。
本发明的发明人还对秦皮甲素的体内抗动脉粥样硬化活性进行了进一步评价,证实秦皮甲素有治疗动脉粥样硬化的作用。整体动物药效评价实验结果表明,秦皮甲素低剂量组、秦皮甲素高剂量组与高胆固醇模型组、静脉注射AGEs高胆固醇模型组比较,可显著降低血清中的CHO、LDL-C、TG的含量,显著升高血清中HDL-C/CHO含量和SOD活力,显著降低高脂血症大鼠的MDA含量,抑制大鼠动脉粥样硬化斑块的形成。AGEs断裂剂——秦皮甲素能对抗实验性高脂血症,抑制大鼠动脉粥样硬化的形成,具有预防和治疗动脉粥样硬化形成的作用。
本发明还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合,制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量%。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药,给药途径可为肠道或非肠道,如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等;固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等;半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂,可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂,包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等;湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等;粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等;崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等;润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片,例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片,或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂,可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合,将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸,再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂,可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等;pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等;渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂,还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外,如需要,也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的,增强治疗效果,本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度,患者或动物的个体情况,给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲,本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/Kg体重,优选为0.1-100mg/Kg体重,更优选为1-60mg/Kg体重,最优选为2-30mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药,这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用,或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时,应根据实际情况调整它的剂量。
本发明的优点:
秦皮甲素为常用中药中提取的单体化合物,具有毒性低、提取工艺简单等优点;
其原材料资源广阔,具有很好的应用与开发前景。
本发明的秦皮甲素具有晚期糖基化终产物抑制作用和裂解作用。
具有清除超氧阴离子自由基、保护机体细胞免受自由基损伤的作用。
能够预防和治疗动脉粥样硬化的形成和发展。
附图说明
缩写:
CHO:血清总胆固醇;
LDL-C:低密度脂蛋白胆固醇;
HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇;
TG:甘油三脂;
SOD:超氧化物歧化酶;
MDA:丙二醛;
control:空白对照组;
model:高脂血症模型组;
AGE model:AGEs模型组;
QP10mg/kg:秦皮低剂量组(10mg/kg);
QP50mg/kg:秦皮高剂量组(50mg/kg);
Tatin3.5mg/kg:辛伐他汀(0.35mg/kg)阳性对照组。
图1秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清总胆固醇含量的影响。
图2为秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量的影响。
图3为秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清甘油三脂含量的影响。
图4为秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量的影响。
图5为秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清SOD活力的影响。
图6为秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清MDA含量的影响。
图7为秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠主动脉病变的影响。
具体实施方式
以下将通过实施例进一步描述本发明,但这些实施例仅是说明本发明,而不应理解为对本发明范围的任何限制。
药理实验
实施例1:根据牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)与乙二醛(Glyoxyl)共同孵育而生成AGEs,将样品与BSA、Glyoxyl一起温孵,以氨基胍(AGN)为阳性药,通过AGEs的荧光值变化来判断样品对AGEs的抑制作用。通过对4800个样品进行AGEs抑制剂和裂解剂的筛选,发现秦皮甲素具有较好的AGEs抑制作用(半数抑制浓度为2ng/ml)和裂解作用(半数抑制浓度<1ng/ml)。
实施例2:秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠的降低血脂作用。
雄性SD大鼠,随机分为
空白对照组(给予普通饲料喂养)即control,
高脂血症模型组即model、
AGEs模型组即AGE model、
秦皮低剂量组(10mg/kg)即QP10mg/kg、
秦皮高剂量组(50mg/kg)即QP50mg/kg、
辛伐他汀(0.35mg/kg)阳性对照组即Tatin3.5mg/kg。
给予大鼠高脂饲料喂养90天,同时每日上午灌服受试药物;下午灌服胆酸钠(300mg/kg)和丙基硫氧嘧啶(150mg/kg);AGEs模型组、秦皮低剂量组、秦皮高剂量组每周静脉注射AGEs(5mg/kg)。给药12周时测定血清总胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三脂(TG)。
结果表明:高脂血症模型组与空白对照组相比血清中的CHO、LDL-C、TG明显升高,而HDL-C明显降低;AGEs模型组与空白对照组相比血清中的CHO、LDL-C、TG明显升高,但对HDL-C无显著性差异;秦皮高、低剂量组可明显降低AGEs模型组、高脂血症模型组血清中的CHO、LDL-C、TG含量,明显升高血清中的HDL-C含量。结果表明,秦皮甲素可显著降低实验性高脂血症动物血清中CHO、LDL-C、TG含量,升高HDL-C含量,说明秦皮甲素具有降低血脂的作用。具体见图1、2、3和4。
实施例3:秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)的作用。
给药方案和实施例2完全相同,给药12周时取血,检测血清SOD。
结果表明,AGEs模型组、高脂血症模型组与空白对照组比较血清中SOD活力明显降低;秦皮甲素给药组可明显升高SOD活力。
结果表明,秦皮甲素(10mg/kg)、秦皮甲素(50mg/kg)组可显著升高高脂血症大鼠的SOD活力;说明秦皮甲素对高脂血症大鼠氧化与抗氧化平衡起着重要作用,并能清除超氧阴离子自由基。具体见图5。
实施例4:秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠血清丙二醛(MDA)含量的作用。
给药方案和实施例2完全相同,给药12周时取血,检测MDA。
结果表明,AGEs模型组、高脂血症模型组与空白对照组比较血清中MDA含量明显升高;秦皮甲素给药组可显著降低MDA含量。
结果表明,秦皮甲素(10mg/kg)、秦皮甲素(50mg/kg)组可显著降低高脂血症大鼠的MDA含量;说明秦皮甲素具有保护高脂血症大鼠机体细胞受自由基损伤的作用。具体见图6。
实施例5:秦皮甲素对实验性动脉粥样硬化大鼠抑制动脉粥样硬化斑块形成的作用。
给药方案和实施例2完全相同,给药12周时用常规病理切片法观察主动脉动脉粥样硬化斑块的形成。
结果表明:空白对照组内皮细胞正常,无平滑肌细胞增殖,无斑块形成;而高脂血症模型组、AGEs模型组内皮细胞肿胀、脱落,平滑肌细胞明显增殖,管壁外层有脂质沉积,有炎症细胞浸润,有斑块形成;秦皮低剂量组、秦皮高剂量组内皮细胞完整、无明显肿胀、脱落情况减轻,严滑肌细胞增殖不明显,有少量炎症细胞浸润,无斑块形成,阳性药辛伐他汀组大部分内皮细胞正常,有部分内膜、内皮细胞脱落,平滑肌细胞略有增殖不明显,无斑块形成。
结果表明,秦皮甲素具有对抗和抑制动脉粥样硬化斑块形成的作用。具体见图7。
毒理实验
实验例6:秦皮甲素的体外细胞毒性作用。
体外培养小鼠来源的成纤维细胞NIH/3T3细胞株,加入1、0.1、0.01、0.001、0.0001mM浓度的秦皮甲素,24小时后观察细胞形态学,并用MTT法检测其细胞毒性。
结果显示:加入秦皮甲素作用24小时后,对细胞形态学无明显改变;MTT比色法结果显示,秦皮甲素对NIH/3T3细胞生长增殖无显著性抑制和杀伤作用,说明秦皮甲素含量在1mM和1mM以下无体外细胞毒作用。
实施例7:秦皮甲素的小鼠体内急性毒性作用。
取健康昆明种小白鼠,雌雄各半,体重22±1g。禁食12h,正常饮水,每只鼠每次灌胃0.2ml/10g体重,间隔6h,其中含秦皮甲素(5g/Kg),分两次给药,相当动物有效剂量的用量的200倍(未测出LD50)。
用药后动物未出现明显的中毒症状及死亡情况,连续观察一周,动物全部存活,活动自如,毛发光滑,饮食正常,呼吸、鼻、眼、口腔无异常分泌物,体重增加。一周后解剖动物,肉眼及显微镜观察重要脏器,未出现明显的病理学改变。急性毒性实验结果证实,秦皮甲素无急性毒性作用,在最大灌胃量内,未测出明显的LD50。
Claims (5)
1.秦皮甲素在制备预防和/或治疗和晚期糖基化终产物相关疾病的药物中应用。
2.根据权利要求1的应用,其特征在于,所述的晚期糖基化终产物相关疾病包括糖尿病并发症、老年性疾病、终末期肾脏病。
3.秦皮甲素在制备预防和/或治疗心脑血管疾病的药物中应用。
4.根据权利要求1的应用,其特征在于,所述的心脑血管疾病包括高血脂症、动脉粥样硬化。
5.一种药物组合物,其特征在于,含有药物有效剂量的秦皮甲素及药用载体。
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