CN101107261A - 咪唑并吡啶衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及式(I)所表示的新颖的咪唑并[4，5－b]吡啶衍生物化合物和该化合物的药学上可接受的盐。本发明还涉及用于制备上述化合物的方法。本发明进一步涉及含有上述化合物的医药组合物。上述化合物具有对癌细胞的增殖抑制活性，而且，该作用与对正常细胞产生增殖抑制活性不同。因此，作为新颖的抗癌剂是有用的。

Description

咪唑并吡啶衍生物

技术领域

本发明主张2005年1月20日申请的日本专利申请专利号为2005-012685号的优先权。该专利申请的内容由于在本说明书中引用而完全被援用。

本发明涉及新颖的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物化合物和该化合物的药学上可接受的盐。本发明还涉及用于制备上述化合物的方法。本发明进一步涉及可利用作为抗癌剂的含有上述化合物的医药组合物。

背景技术

多种药剂被使用作抗癌剂，但是都仍存在着适用范围或副作用等许多问题，因此期望开发新的药剂。Hocek等(Collect.Czech.Chem.Commun.，第66卷，第438-499页(2001))合成了6-芳基嘌呤核苷衍生物，对各种癌细胞株，该衍生物显示出具有细胞增殖抑制活性。另外，本发明者们合成了嘌呤环的6位上具有各种杂环作为取代基的嘌呤核苷衍生物，对它们的抗癌作用进行了分析(特开2005-232079号公报(申请号2004-43377号、2004年2月19日申请：在本申请优先日时未公开))。

为了使药剂作为抗癌剂是有用的，非常期望具有对癌细胞具有增殖抑制、机能抑制等作用，并且对正常细胞没有这种活性或这种活性很弱的性质。

本发明说明书中引用的文献的公开内容由于引用而完全被援用到本发明的说明书中。

专利文献1：特开2005-232079号公报(申请号2004-43377号、2004年2月19日申请)

非专利文献：M.Hocek，等人，Collect.Czech.Chem.Commun.，第66卷，第483-499页(2001)

发明内容

发明要解决的问题

本发明提供新颖的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物，7位上具有杂环作为取代基的3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物和5-氨基-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物。本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物为下式(I)表示的化合物或该化合物的药学上可接受的盐，

[其中，式中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁴为氢原子或氨基；而且

R⁵为氢原子或羟基]。

本发明还提供用于制备本发明的式(I)的化合物或该化合物的药学上可接受的盐的方法。该方法包括在氨、氨甲醇、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、盐酸、三氟乙酸、氟化四丁铵、三溴化硼、或氢/钯催化剂下，处理式(II)所示的化合物，

[其中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁴为氢原子或氨基；

R⁶为氢原子或R⁹O基；

R⁷、R⁸和R⁹分别相同或不同，为羟基的保护基，选自乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基和叔丁基二甲基甲硅烷基]。

本发明进一步提供在制备本发明的式(I)化合物时的中间体。该中间体为式(II)所表示的化合物，

[其中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁴为氢原子或氨基；

R⁶为氢原子或R⁹O基；

R⁷、R⁸和R⁹分别相同或不同，为羟基的保护基，选自乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基和叔丁基二甲基甲硅烷基]。

同时，本发明提供含有本发明的式(I)化合物的医药组合物。本发明提供可利用作抗癌剂的式(I)化合物。

解决课题的方法

本发明者们为了解决上述问题，深入研究努力的结果是成功地合成式(I)表示的新颖的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物化合物，发现该化合物对癌细胞具有细胞增殖抑制活性。另外，本发明者们发现该癌细胞增殖抑制作用与对正常细胞的细胞增殖抑制活性不同。即意味着式(I)所表示的新颖的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物化合物具有对癌细胞具有增殖抑制作用，并且，对正常细胞具有更弱的细胞增殖抑制作用这种有望作为抗癌剂的性质。因此，结论是该化合物作为抗癌剂是有用的，从而完成本发明。

本发明提供新颖的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物，7位上具有杂环作为取代基的3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物和5-氨基-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物。本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物为下式(I)表示的化合物和药学上可接受的盐。

[其中，式中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁴为氢原子或氨基；而且

R⁵为氢原子或羟基]。

优选在上述式(I)所表示的本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物中，A为硫原子。另外，优选在上述式(I)表示的本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物中，R¹、R²和R³任意一个为氢原子、优选任意两个为氢原子，更优选三个都是氢原子。更优选本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物在上述的式(I)中，是A为硫原子，且R¹、R²和R³中任意一个氢原子、优选任意两个是氢原子、更优选三个都是氢原子表示的化合物。

在本说明书中，在式(I)所表示的化合物中，有时表示R⁴为氢原子的化合物，即咪唑并[4，5-b]吡啶环的7位具有杂环作为取代基的3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物的式(Ia)。另外，在式(I)所表示的化合物中，有时表示咪唑并[4，5-b]吡啶环的5位的R⁴为氨基的化合物，即7位具有杂环作为取代基的5-氨基-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物的式(Ib)。

在本发明的一个实施方式中，本发明的式(I)化合物是选自7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶；5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶；和其药学上可接受的盐中的化合物。

在本发明中，还提供了用于合成本发明的式(I)化合物或该化合物的药学上可接受的盐的方法。

在本发明的一个实施方式中，本发明的式(Ia)所表示的、7位具有杂环作为取代基的3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物可以通过以下的反应式(流程图I)所示的合成路线合成：

[反应式中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁵为氢原子或羟基；

R⁶为氢原子或R⁹O基；

R⁷、R⁸和R⁹分别相同或不同，为羟基的保护基，为乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基或叔丁基二甲基甲硅烷基等]。

式(IIIa)的化合物(2-氨基-3-硝基-4-氯吡啶)为公知的化合物，可以使用本领域技术人员公知的工艺合成(例如参照Rec.Trav.Chim.，88，p.1263-1274(1963))。

在流程图I中，由式(IIIa)合成式(IVa)的化合物，第一阶段的反应是2-氨基-3-硝基-4-氯吡啶和含有2-噻嗯基或2-呋喃基的化合物的偶联反应(coupling reaction)。第二阶段的由式(IVa)合成式(Va)的化合物的反应是将吡啶环的3位的硝基还原并转换成氨基的反应。第三阶段的由式(Va)合成式(VIIa)的化合物的反应是通过式(Va)的化合物与原甲酸烷基酯反应形成咪唑并[4，5-b]吡啶环的闭环反应。第四阶段的由式(VIIa)合成式(IIa)的化合物的反应是咪唑并[4，5-b]吡啶环的3位和核糖的1位进行偶联反应。其中第一阶段至第四阶段的反应也可以使用本领域技术人员公知的合成法的任意一种。

在流程图I中，由式(IIa)合成式(Ia)的化合物的第五阶段的反应是核糖的羟基的脱保护反应。核糖的羟基的脱保护也可以通过氨、氨甲醇、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、盐酸、三氟乙酸、氟化四丁铵、三溴化硼、或氢/钯催化剂等处理来进行。在羟基的保护基为乙酰基、异丁酰基、苯酰基或对甲苯酰基等时，也可以通过氨、氨甲醇、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠或乙醇钠等酸或碱进行水解而脱保护。另外，羟基的保护基为苄基时，也可以通过采用氢/钯催化剂等的催化还原或三溴化硼处理进行脱保护，保护基为三苯甲基或二甲氧基三苯甲基等时，也可以通过三氟乙酸、盐酸等处理进行脱保护。另外，在核糖的羟基的保护基为叔丁基二甲基甲硅烷基时，还可以通过氟化四丁铵、氢氧化钠、氢氧化钾等处理进行脱保护。优选在该反应中，核糖的羟基的保护基为乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基等，而且通过氨甲醇处理来进行脱保护。更优选在该反应中，核糖的羟基的保护基为对甲苯酰基，而且通过氨甲醇处理来进行脱保护。

在本发明的其他的实施方式中，本发明的式(Ib)所表示的7位具有杂环作为取代基的5-氨基-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物通过以下的反应式(流程图II)的合成线路进行合成。

[反应式中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁵为氢原子或羟基；

R⁶为氢原子或R⁹O基；

R⁷、R⁸和R⁹分别相同或不同，为羟基的保护基，为乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基或叔丁基二甲基甲硅烷基等；并且

R¹⁰为氨基的保护基，为乙酰基、异丁酰基、苯酰基、苯氧基乙酰基、乙氧羰基、叔丁氧羰基或苄氧羰基等]。

在流程图II中，由式(IIIb)合成式(IVb)的化合物的第一阶段的反应是2-氨基-3-硝基-4-氯-6-保护氨基吡啶和含有2-噻嗯基或2-呋喃的化合物的偶联反应。第二阶段的由式(IVb)合成式(Vb)的化合物的反应是将吡啶环的3位的硝基还原并转换成氨基的反应。第三阶段的由式(Vb)合成式(VIb)的化合物的反应是通过式(Vb)的化合物与原甲酸烷基酯反应形成咪唑并[4，5-b]吡啶环的闭环反应。第四阶段的由式(VIb)合成式(VIIb)的化合物的反应是通过将咪唑并[4，5-b]吡啶环的5位的保护氨基的脱保护，转换成氨基的反应。第五阶段的由式(VIIb)合成式(IIb)的化合物的反应是咪唑并[4，5-b]吡啶环的3位和核糖的1位进行的偶联的反应。其中第一阶段至第五阶段的反应也可以使用本领域技术人员公知的合成法的任意一种。

在流程图II中，由式(IIb)合成式(Ib)的化合物的第六阶段的反应是核糖的羟基的脱保护的反应。核糖的羟基的脱保护是通过氨、氨甲醇、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、盐酸、三氟乙酸、氟化四丁铵、三溴化硼、或氢/钯催化剂等处理来进行。对于羟基的保护基和将该保护基脱保护的试剂的组合，也可以选择与上述流程图I中的核糖羟基的脱保护反应中相同的组合。核糖羟基的脱保护反应的优选组合是核糖羟基的保护基是乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基等，并且通过在氨甲醇中处理进行脱保护。更优选的该反应中的核糖的羟基的保护基是对甲苯酰基，并且在氨甲醇中处理进行脱保护。

本发明进一步提供在制备本发明的式(I)的化合物时的中间体。该中间体是式(II)所表示的化合物：

[其中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁴为氢原子或氨基；

R⁶为氢原子或R⁹O基；

R⁷、R⁸和R⁹分别相同或不同，为羟基的保护基，为乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基或叔丁基二甲基甲硅烷基等]。优选在上述式(II)中所表示的本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物中，A是硫原子。另外，优选在上述式(II)所表示的本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物中，R¹、R²和R³任意一个为氢原子、优选任意两个为氢原子、更优选三个都是氢原子。更优选本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物是在上述的式(II)中，A为硫原子并且R¹、R²和R³任意一个为氢原子、优选任意两个为氢原子、更优选三个都为氢原子所表示的化合物。

在本发明的说明书中，在式(II)所表示的化合物中，尤其是R⁴为氢原子的化合物表示为式(IIa)，R⁴为氨基的化合物表示为式(IIb)。

在本发明的说明书中，所谓本发明的化合物的药学上可接受的盐，可以是该技术领域中作为无害性盐的已知的任意盐，特别包括酸加成盐。合适的酸加成盐通过用例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，或乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、葡糖醛酸或半乳糖醛酸等糖醛酸，乳酸、柠檬酸或葡糖酸或酒石酸等α-羟基酸，天冬氨酸或谷氨酸等氨基酸，苯甲酸或肉桂酸等芳香族酸，对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸或苯磺酸等磺酸，或类似这些酸等的有机酸等处理本发明的化合物而形成的。盐的制备可以根据该技术领域中已知的任意合适的方法来进行。

本发明的式(I)所表示的化合物具有癌细胞增殖抑制活性。本发明的式(I)化合物的癌细胞增殖抑制活性与对正常细胞的增殖抑制活性不同。即，该化合物对正常细胞比对癌细胞具有更低的增殖抑制活性。这意味着通过使用适当浓度的该化合物，不会抑制正常细胞的增殖，而可以仅仅抑制癌细胞的增殖。

本发明的式(I)所表示的化合物的细胞增殖抑制活性可以通过例如本领域技术人员公知的MTT检验(例如，参照生化学辞典第3版、第220页、株式会社东京化学同人、2000年等)进行评价。简单地，MTT检验是一种利用通过淡黄色物质MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物)进入活细胞中并通过线粒体内存在的还原酶，分裂为深蓝色甲

，但是死细胞中不能使MTT分裂现象，定量活细胞数的方法。活细胞数量的定量通过测定生成的甲

的吸光度来进行。在MTT检验中使用的指示剂中，除了使用MTT以外，在该技术领域中还使用了WST-1或ァラマ一蓝等。对于本发明的化合物，在进行MTT检验时，也可以使用这些变换的方法。

可以在评价本发明的式(I)所表示的化合物的细胞增殖抑制活性中使用的癌细胞并没有被限制，但包含培养人纤维肉瘤细胞(fibrosarcoma)、培养人急性淋巴细胞白血病细胞CCRF-CEM、培养人大肠腺癌细胞SW480、培养人肺泡上皮癌细胞A549、培养人胰腺癌细胞PANC-1、培养人膀胱移行上皮癌细胞T24、培养人乳癌细胞MCF-7、培养人肝癌细胞HuH7等培养癌细胞。最佳是使用培养人纤维肉瘤细胞株HT-1080。可以在评价本发明的化合物的细胞增殖抑制活性中使用的正常细胞没有被限制，但包含人胎儿肺纤维胚细胞(正常二倍体成纤维细胞)、人末梢血淋巴细胞等细胞。最佳是使用人胎儿肺纤维胚细胞株WI-38。

评价本发明的式(I)的化合物的细胞增殖抑制活性例如可以通过以下进行。分别对系列稀释的被检化合物进行MTT检验。在使用MTT作为指示剂时，测定570nm的吸光度。通过下式，对被检化合物的各浓度计算其％抑制活性(％Inhitition)：

[数学式1]

％抑制活性=100×[1-(Abs_样品-Abs_背景)/(Abs_阴性对照-Abs_背景)]

Abs_样品：添加被检化合物时的吸光度

Abs_背景：不包含细胞和被检化合物时的吸光度

Abs_阴性对照：不包含被检化合物时的吸光度。

由所得的对被检化合物浓度的％抑制活性的数据，作成浓度-抑制曲线，由该曲线计算出50％抑制细胞增殖的各被检化合物的浓度作为IC₅₀。

本发明的式(I)化合物的癌细胞增殖抑制活性与对正常细胞的增殖抑制活性不同。对于癌细胞增殖抑制的本发明的式(I)化合物的IC₅₀值比对于正常细胞的IC₅₀值具有更小的值。优选地，对于癌细胞增殖抑制的本发明的式(I)化合物的IC₅₀值与对正常胞的IC₅₀值相比为2/3或更小，更优选为1/2或更小，进一步优选为1/3或更小，进一步优选为1/4或更小，更进一步优选为1/5或更小，最优选为1/10或更小。因此，该化合物作为抗癌剂是有用的。因而本发明提供含有本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的医药组合物。

在优选的方式中，本发明的医药组合物是用于治疗癌的医药组合物，即抗癌剂。在本发明的说明书中用于治疗癌的医药组合物是指用于癌的治愈处理、缓解处理和预防处理的医药组合物。在癌的治愈处理、缓解处理和预防处理中，包括使癌细胞死亡、抑制癌细胞增殖、防止癌转移、防止癌的复发或防止癌变。在本说明书中，术语“癌”表示包括细胞的过度增殖病态的任一种恶性疾病，“癌”、“肿瘤”、“赘生物”的词汇持有互换性、可以互换使用。

由本发明的医药组合物治疗的癌包括以下：肺癌；乳癌；黑色素瘤；肉瘤；纤维肉瘤；前列腺癌；头部和颈部癌；原发灶不明癌；淋巴肿瘤；白血病；肾脏癌；消化管癌例如食道癌、胃癌、肠癌、结肠癌、肛门部的癌和直肠癌等；脑肿瘤；神经胶质瘤；神经胚细胞瘤；星状细胞瘤；髓胚细胞瘤；室管膜细胞瘤；网膜胚细胞瘤；鼻咽癌；基底细胞癌；胰脏癌；胆管癌；卡波济氏肉瘤；胸腺瘤；睾丸癌；子宫癌；阴道癌；子宫颈癌；卵巢癌；肝癌；子宫内膜癌；血管上皮细胞癌；何杰金氏淋巴瘤；非何杰金氏淋巴瘤；B细胞型急性淋巴胚细胞白血病/淋巴瘤；T细胞型急性淋巴胚细胞白血病/淋巴瘤；末梢性T细胞型白血病；成人性T细胞型白血病/T细胞型淋巴瘤；NK细胞瘤；大粒淋巴细胞白血病；朗格尔汉斯细胞组织细胞增生症；骨髓瘤形成；急性骨髓性白血病；急性前骨髓细胞白血病；急性骨髓单核细胞白血病；急性单核细胞白血病；骨髓异形性综合征；和慢性骨髓增生性障碍；但并不限制为这些。

本发明的医药组合物还可以含有药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体在本质上或给药量方面，在化学上是惰性和无害的，对本发明的医药组合物的生物活性没有影响。

本发明的医药组合物用于包括舌下的经口给药，含有淀粉或乳糖样的赋形剂，以配方成片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒剂、糖锭、溶液剂、乳剂、混悬液剂或酏剂的形式。本发明的医药组合物可以配方成缓释放或肠溶性、或速释(适时释放)性。本发明的医药组合物还可以包含着色料、增香剂、崩解剂、造粒粘合剂、润滑剂等。这些经口给药用的医药组合物的制备可以使用在该技术领域技术人员公知的技术容易地进行。

本发明的医药组合物可以配方成用于非经口给药例如静脉内、动脉内、肌肉内或皮下注射或输注给药的溶液剂或混悬液剂的形式。以溶液剂或混悬液剂的形式配方的本发明的医药组合物还可以配方成在使用时在灭菌水等中溶解·悬浮使用的冻干剂的形式。用于注射或输注的溶液剂或混悬液剂最适宜在无菌的水溶液中制备，用于注射或输注的溶液剂或混悬液剂在无尘、无菌下制备，然后通过缓冲剂、盐溶液或葡萄糖等其他物质制备使其形成和血液等渗。另外，用于注射或输注的溶液剂或混悬液剂制备成与血液几乎相等的pH。在无菌条件下的适当的非经口制剂的制备可以根据本领域技术人员已知的标准的制剂技术容易地完成。

本发明的医药组合物除了这些之外，还可以配方成溶液剂、混悬溶液剂、洗剂、乳剂、软膏剂、凝胶、湿敷布剂(湿布剤)、气雾剂、散剂(散布剤)、喷雾剂、栓剂或阴道栓等形式。对于这些形式的制剂，对在该技术领域中技术人员是已知的。

另外，本发明也涉及使用本发明的化合物或医药组合物进行癌治疗的方法。在本发明说明书中，所谓癌的治疗，包括治愈处理、缓解处理和预防处理。本发明的化合物或医药组合物的给药可以单剂量或分开给药。对人患者的经口和非经口给药时，本发明的化合物的每日用量水平通常为1～100mg/kg体重、优选2.5～20mg/kg体重。然而，本发明的化合物或医药组合物的用量根据各个患者的年龄、体重、健康状况、疾病的轻重度、患者对本发明的化合物的应答等各种原因而变化。上述用量为平均情况的用量，也可以是以更高或更低的用量给药的情况，根据这种用量给药也仍然在本发明的范围内。对于本发明的化合物或医药组合物的合适用量，医师可以根据上述或其他原因决定。

发明效果

本发明的咪唑并[4，5-b]吡啶衍生物具有很高的癌细胞增殖抑制活性，另外，对正常细胞的细胞增殖抑制活性很低。因此，本发明的化合物作为新的抗癌剂是有用的。

实施例

以下，根据实施例具体地说明本发明，但是这些实施例并没有限定本发明的技术范围。本领域技术人员根据本发明说明书的记载可以对本发明进行修饰·变换，这些都包含在本发明的技术范围内。

实施例1：7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b] 吡啶的合成

(1-1)2-氨基-3-硝基-4-(2-噻嗯基)吡啶的合成

在1.74g(10mmol)的2-氨基-3-硝基-4-氯吡啶(根据Rec.Trav.Chim.，88，1263-1274(1963)记载的合成法合成)和350mg(0.50mmol)的二氯双(三苯基膦)钯(II)的DMF(50ml)溶液中，在氮气氛围气下，加入3.82ml(12mmol)2-(三丁基甲锡烷基(トリブヂルスタニル))噻吩，在100℃下搅拌4小时。然后，将溶液倒入水中(250ml)，用乙酸乙酯(250ml)萃取三次。有机层用硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂。所得残渣通过硅胶柱色谱用二氯甲烷∶乙酸乙酯(100∶0至49∶1)洗脱，得到2.07g(Rf0.30/二氯甲烷∶乙酸乙酯＝19∶1)的2-氨基-3-硝基-4-(2-噻嗯基)吡啶，产率为93％。

¹H NMR(CDCl₃)；δ 8.17(d，J＝5.1Hz，1H)，7.45(dd，J＝5.0和1.1Hz，1H)，7.12(dd，J＝3.6和1.1Hz，1H)，7.07(dd，J＝5.0和3.6Hz，1H)，6.77(d，J＝5.1Hz，1H)，5.66(bs，2H)。

(1-2)2，3-二氨基-4-(2-噻嗯基)吡啶的合成

在2.06g(9.3mmol)的2-氨基-3-硝基-4-(2-噻嗯基)吡啶和10％的466mg钯-炭的乙醇(130ml)-乙酸乙酯(65ml)溶液中，于0℃下加入1M硼氢化钠水溶液，该混合液在0℃下搅拌1小时。然后，倒入到5％的氯化铵水溶液(43ml)中。该混合液经硅藻土(セラィト)过滤，在滤液中加入500ml的水。用乙酸乙酯(250ml)萃取3次。该溶液用硫酸钠干燥后，在减压下除去溶剂。该残渣用柱色谱(二氯甲烷∶乙醇＝19∶1至93∶7)纯化，得到1.46g的2，3-二氨基-4-(2-噻嗯基)吡啶(Rf 0.24/二氯甲烷∶乙醇＝9∶1)，产率为82％。

¹H NMR(CDCl₃)；δ7.64(d，J＝5.1Hz，1H)，7.40(dd，J＝5.1和1.1Hz，1H)，7.23(dd，J＝3.5和1.1Hz，1H)，7.14(dd，J＝5.1和3.5Hz，1H)，6.74(d，J＝5.1Hz，1H)，4.26(bs，2H)，3.72(bs，2H)。

(1-3)7-(2-噻嗯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的合成

在1.46g(7.61mmol)的2，3-二氨基-4-(2-噻嗯基)吡啶和原甲酸乙酯(40.5ml)中加入35wt％的盐酸(1.47ml)，该溶液在室温下搅拌3天，过滤。在乙醚中洗净残渣，得到1.74g(96％)7-(2-噻嗯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶。

¹H NMR(DMSO-d₆)；δ 8.77(s，1H)，8.42(d，J＝5.4Hz，1H)，8.25(dd，J＝3.6和1.2Hz，1H)，7.88(dd，J＝5.1和1.2Hz，1H)，7.66(d，J＝5.4，1H)，7.31(dd，J＝5.1和3.6Hz，1H)。

(1-4)7-(2-噻嗯基)-3-[3，5-二-O-(对-甲苯酰基)-2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖 基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的合成

在951mg(4.0mmol)的7-(2-噻嗯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的乙腈(40ml)溶液中加入320mg的氢化钠(60％油性混悬液)，该溶液在室温下搅拌过夜。在该溶液中加入836mg的2-脱氧-3，5-二-O-(对-甲苯酰基)-α-D-赤型戊呋喃糖基氯化物(ェリスロペントラノシルクロリド)，搅拌90分钟。将该溶液倒入水(250ml)中，用乙酸乙酯(200ml)萃取三次。有机层用硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂。用硅胶柱色谱(二氯甲烷∶乙醇＝100∶0至99∶1)对残渣进行纯化，得到1.33g(Rf 0.38/二氯甲烷∶乙醇＝49∶1)的7-(2-噻嗯基)-3-[3，5-二-O--(对-甲苯酰基)-2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶，产率为60％。

¹H NMR(CDCl₃)；δ8.32(d，J＝5.3Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.16(dd，J＝3.8和1.2Hz，1H)，7.93(m，4H)，7.50(dd，J＝5.1和1.2Hz，1H)，7.47(d，J＝5.3Hz，1H)，7.22(m，5H)，6.68(dd，J＝8.6和5.8Hz，1H)，5.82(m，1H)，4.69(m，3H)，3.18(ddd，J＝14.2，8.6和6.4Hz，1H)，2.86(ddd，J＝14.2，5.8和2.0Hz，1H)，2.43(s，3H)，2.37(s，3H)。

(1-5)7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶 的合成

在1.33g(2.40mmol)的7-(2-噻嗯基)-3-[3，5-二-O--(对-甲苯酰基)-2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶中，于0℃下加入120ml的氨甲醇，然后，在室温下搅拌2天。在减压下除去溶剂，用硅胶柱色谱(二氯甲烷∶乙醇＝97∶3至93∶7)对残渣进行纯化，得到717mg的7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶，产率为94％。

¹H NMR(DMSO-d₆)；δ8.74(s，1H)，8.33(d，J＝5.1Hz，1H)，8.28(dd，J＝3.6和1.1Hz，1H)，7.82(dd，J＝5.1和1.1Hz，1H)，7.64(d，J＝5.1Hz，1H)，7.26(dd，J＝5.1和3.6Hz，1H)，6.25(dd，J＝7.3和6.4Hz，1H)，5.34(bd，J＝4.1Hz，1H)，5.11(bt，J＝5.4Hz，1H)，4.44(m，1H)，3.89(m，1H)，3.58(m，2H)，2.78(ddd，J＝13.0，7.3和5.9Hz，1H)，2.24(ddd，J＝13.0，6.4和3.0Hz，1H)。

UVλ_max；25mM磷酸钠缓冲液pH＝6.8中，311nmε＝2.04×10⁴。

实施例2：5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑 并[4，5-b]吡啶的合成

(2-1)2-氨基-3-硝基-4-(2-噻嗯基)-6-乙氧羰基氨基吡啶的合成

在溶解了1.30g(5.0mmol)的2-氨基-3-硝基-4-氯-6-乙氧羰基氨基吡啶和175mg(0.25mmol)二氯双(三苯基膦)钯(II)的DMF溶液(30ml)中，在氩气氛围气下，加入1.91ml(6.0mmol)的2-(三丁基甲锡烷基)噻吩，在100℃下搅拌2小时。将该混合液倒入100ml水中，用乙酸乙酯(8100ml)萃取三次。有机层用硫酸钠干燥，用硅胶柱色谱(二氯甲烷∶乙酸乙酯＝100∶0至99∶1)对目标物纯化，得到1.96g(Rf0.52/二氯甲烷∶乙酸乙酯＝19∶1)的2-氨基-3-硝基-4-(2-噻嗯基)-6-乙氧羰基氨基吡啶，产率为85％。

¹H NMR(DMSO-d₆)；δ10.33(bs，1H)，7.70(m，1H)，7.24(s，1H)，7.10(m，2H)，7.02(bs，2H)，4.13(q，J＝7.0Hz，2H)，1.22(t，J＝7.0Hz，3H)。

(2-2)2，3-二氨基-4-(2-噻嗯基)-6-乙氧羰基氨基吡啶的合成

在1.57g(5.1mmol)2-氨基-3-硝基-4-(2-噻嗯基)-6-乙氧羰基氨基吡啶和10％溶解了255mg钯-炭的乙醇(77ml)-乙酸乙酯(38ml)的混合溶液中，于0℃下加入1M硼氢化钠水溶液(15.3ml)。该混合液在0℃下搅拌1小时，然后，在该溶液中加入5％的氯化铵水溶液(23.4ml)，用硅藻土过滤。硅藻土用204ml水洗净，使滤液和该洗净液混合，在减压下除去乙醇和乙酸乙酯后，用乙酸乙酯(150ml)萃取3次。该溶液用硫酸钠干燥后，在减压下除去溶剂。用硅胶柱色谱(二氯甲烷∶乙酸乙酯＝7∶3至1∶1)对目标物纯化，得到1.28g的2，3-二氨基-4-(2-噻嗯基)-6-乙氧羰基氨基吡啶(Rf 0.39/二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，产率为90％。

¹H NMR(DMSO-d₆)；δ9.07(bs，1H)，7.60(dd，J＝5.1和1.1Hz，1H)，7.34(dd，J＝3.7和1.1Hz，1H)，7.16(dd，J＝5.1和3.7Hz，1H)，6.96(s，1H)，5.59(bs，2H)，4.38(bs，2H)，4.04(q，J＝7.0Hz，2H)，1.18(t，J＝7.0Hz，3H)。

(2-3)7-(2-噻嗯基)-5-乙氧羰基氨基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的合成

在1.28g(4.61mmol)2，3-二氨基-4-(2-噻嗯基)-6-乙氧羰基氨基吡啶和原甲酸乙酯(24.6ml)中，加入35wt％的盐酸(892μl)，在室温下搅拌3天。过滤该溶液。在乙醚中洗净产物，得到1.36g的7-(2-噻嗯基)-5-乙氧羰基氨基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶，产率为91％。

¹H NMR(DMSO-d₆)；δ10.25(bs，1H)，8.69(bs，1H)，8.20(dd，J＝3.8和1.1Hz，1H)，8.12(s，1H)，7.81(dd，J＝5.1和1.1Hz，1H)，7.28(dd，J＝5.1和3.8Hz，1H)，4.17(q，J＝7.2Hz，2H)，1.26(t，J＝7.2Hz，3H)。

(2-4)5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的合成

在1.21g(3.72mmol)7-(2-噻嗯基)-5-乙氧羰基氨基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的乙醇(130ml)溶液中，加入7.29g的氢氧化钾，加热回流4小时。在该溶液中加入氯化铵水溶液(7.65g/26ml)，然后，在减压下除去溶剂。通过硅胶柱色谱(二氯甲烷∶乙醇＝9∶1至7∶3)分离产物，得到870mg产量的5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶。

¹H NMR(DMSO-d₆)；δ12.35(bs，1H)，8.19(dd，J＝3.6和0.9Hz，1H)，7.95(s，1H)，7.67(dd，J＝5.1和0.9Hz，1H)，7.20(dd，J＝5.1和3.6Hz，1H)，6.64(s，1H)，5.86(bs，1H)。

(2-5)5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-[3 5-二-O-(对-甲苯酰基)-2-脱氧-1-β-D-呋 喃核糖基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的合成

在465mg(2.15mmol)的5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶的乙腈溶液(22ml)中，加入86mg氢化钠(60％油性混悬液)，在室温下搅拌6小时。在该混合液中加入836mg的2-脱氧-3，5-二-O-(对-甲苯酰基)-α-D-赤型戊呋喃糖基氯化物，在室温下搅拌1小时。将该溶液倒入100ml水中，用二氯甲烷(100ml)萃取三次。用硫酸钠干燥该溶液，然后，除去溶剂。产物用硅胶色谱柱(二氯甲烷∶乙酸乙酯＝19∶1至37∶3)分离，得到1.05g的5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-[3，5-二-O-(对-甲苯酰基)-2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(Rf0.37/二氯甲烷∶乙酸乙酯＝9∶1)，产率为86％。

¹H NMR(CDCl₃)；δ8.10(dd，J＝3.6和1.1Hz，1H)，7.94(m，5H)，7.44(dd，J＝5.1和1.1Hz，1H)，7.23(m，4H)，7.16(dd，J＝5.1和3.6Hz，1H)，6.50(dd，J＝8.4和5.7Hz，1H)，5.82(m，1H)，4.85(dd，J＝13.2和6.2Hz，1H)，4.64(m，2H)，4.53(bs，2H)，3.26(ddd，J＝14.1，8.4和5.9Hz，1H)，2.68(ddd，J＝14.1，5.7和1.9Hz，1H)，2.40(s，3H)，2.37(s，3H)。

(2-6)5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并 [4，5-b]吡啶的合成

在1.05g(1.85mmol)的5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-[3，5-二-O-(对-甲苯酰基)-2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶中，加入92ml的氨甲醇，在室温下搅拌2小时。然后，减压下除去溶剂，用硅胶柱色谱(二氯甲烷∶乙醇＝19∶1至9∶1)对产物进行纯化，得到555mg的5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶，产率为90％。

¹HNMR(DMSO-d₆)；δ 8.24(s，1H)，8.19(dd，J＝3.5和1.1Hz，1H)，7.70(dd，J＝5.0和1.1Hz，1H)，7.21(dd，J＝5.0和3.5Hz，1H)，6.70(s，1H)，6.33(dd，J＝8.1和6.1Hz，1H)，6.03(bs，2H)，5.28(bd，J＝3.2Hz，1H)，5.07(bt，J＝5.4Hz，1H)，4.38(m，1H)，3.84(m，1H)，3.55(m，2H)，2.64(ddd，J＝13.1，6.1和5.7Hz，1H)，2.24(ddd，J＝13.1，5.9和3.0Hz，1H)。

UV λ_max；25mM磷酸钠缓冲液pH＝6.8中，307nmε＝2.11×10⁴，247nmε＝1.44×10³，222nmε＝1.70×10⁴。

实施例3：细胞增殖抑制活性试验

为了研究两种被检化合物7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(本实施例中的化合物IA)和5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-1-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(本实施例中的化合物IB)的细胞增殖抑制效果，而对培养人纤维肉瘤细胞(fibrosarcoma)HT-1080和人胎儿肺纤维胚细胞(正常的二倍体纤维胚细胞(normal diploidfibroblast)WI-38进行MTT检验。在96孔微板(IWAKI)上分别以90μl/孔接种1×10⁴细胞/ml的细胞。在37℃下培养3-4小时后，溶解在PBS-5％DMSO中，添加10μl调制成不同浓度的被检化合物溶液，在37℃下培养72小时。在这些溶液的各个孔中，分别添加25μl的MTT的PBS溶液(5mg/ml)，再在37℃下培养2小时。在各个孔中分别加入100μl的50％DMF-20％SDS溶液。继续在37℃下培养16小时后，使用微量板读板仪，测定570nm的吸光度，通过下式，计算％抑制活性(％Inhibition)。

[数学式2]

％抑制活性＝100×[1-(Abs_样品-Abs_背景)/(Abs_阴性对照-Abs_背景)

Abs_样品：添加被检化合物时的吸光度

Abs_背景：不包含细胞和被检化合物时的吸光度

Abs_阴性对照：不包含被检化合物时的吸光度

由浓度-抑制曲线计算出50％抑制细胞增殖的各被检化合物的浓度(IC₅₀μM)。

IC₅₀值与标准偏差一起如以下的表1所示。

[表1]

表1

化合物	IC50μM
			HT-1080细胞	WI-38细胞
	化合物IA	62±6			290±130
化合物IB			34±6	330±40

如表1所示，对培养人纤维肉瘤细胞(Fibrosarcoma)HT-1080，化合物IA的IC₅₀为62μM，化合物IB的IC₅0为34μM。另一方面，对于正常细胞中的人胎儿肺纤维胚细胞(normal diploid fibroblast)WI-38，对于任一种化合物，IC₅₀都为300μM左右。因此，显示了化合物IB对于癌细胞，比对正常细胞具有约10倍高的增殖抑制活性，另一方面，化合物IA对于癌细胞，比对正常细胞具有约5倍高的增殖抑制活性。从而，这些化合物的癌细胞增殖抑制活性与对正常细胞的细胞增殖抑制活性不同。

Claims (6)

1.式(I)所示的化合物，或该化合物的药学上可接受的盐，

其中，式中的A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄的烷基；

R⁴为氢原子或氨基；而且

R⁵为氢原子或羟基。

2.权利要求1所述的化合物，或该化合物的药学上可接受的盐，其中该化合物为7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶或

5-氨基-7-(2-噻嗯基)-3-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶。

3.合成权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐的方法，该方法包括在氨、氨甲醇、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠、盐酸、三氟乙酸、氟化四丁铵、三溴化硼、或氢/钯催化剂下，处理式(II)所示的化合物，

其中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁴为氢原子或氨基；

R⁶为氢原子或R⁹O基；

R⁷、R⁸和R⁹分别相同或不同，为羟基的保护基，选自乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基和叔丁基二甲基甲硅烷基。

4.式(II)所示的化合物，

其中，A为氧原子或硫原子；

R¹、R²和R³分别独立地为氢原子或C₁-C₄烷基；

R⁴为氢原子或氨基；

R⁶为氢原子或R⁹O基；

R⁷、R⁸和R⁹分别相同或不同，为羟基的保护基，选自乙酰基、异丁酰基、苯酰基、对甲苯酰基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基和叔丁基二甲基甲硅烷基。

5.医药组合物，含有权利要求1或2所述的化合物。

6.权利要求5所述的医药组合物，用作抗癌剂。