CN101098699A

CN101098699A - 用作酸泵拮抗剂的色满衍生物

Info

Publication number: CN101098699A
Application number: CNA2005800463074A
Authority: CN
Inventors: 甚野圆香; 下川博久; 山岸龙也
Original assignee: SmithKline Beecham Ltd
Current assignee: RaQualia Pharma Inc
Priority date: 2004-12-17
Filing date: 2005-12-07
Publication date: 2008-01-02
Also published as: CR9184A; ZA200705090B

Abstract

本发明涉及式(I)的化合物，或其可药用的盐，其中：R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸A和B各自如这里所述，和包含该类化合物的组合物以及治疗方法和用途，包括该类化合物用于治疗由酸泵拮抗活性介导的情况的用途，所述情况非限制性地如胃肠疾病、胃食管疾病、胃食管返流疾病(GERD)、消化性溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、NSAID-诱导的溃疡、胃炎、幽门螺旋杆菌感染、消化不良、机能性消化不良、佐-埃二氏综合征、非侵蚀性返流疾病(NERD)、内脏痛、烧心、恶心、食管炎、吞咽困难、唾液分泌过多、气道病症或哮喘。

Description

用作酸泵拮抗剂的色满衍生物

本发明的背景技术

本发明涉及色满衍生物。这些化合物具有选择性酸泵抑制活性。本发明还涉及包含上述用于治疗由酸泵调节活性；特别是酸泵抑制活性介导的疾病情况的衍生物的药物组合物、治疗方法和应用。

已经明确确定了质子泵抑制剂(PPIs)是经历酸催化的化学重排的前体药物，所述重排使其通过与其半胱氨酸(Cystein)残基共价结合来抑制H⁺/K⁺-ATP酶(Sachs，G.等人，消化性疾病和科学(DigestiveDiseases and Sciences)，1995，40，3S-23S；Sachs等人，Annu RevPharmacol Toxicol，1995，35，277-305.)。但是，与PPIs不同，酸泵拮抗剂通过H⁺/K⁺-ATP酶的可逆的钾竞争性抑制而抑制了酸分泌。SCH28080是一种可逆的抑制剂并且已经对其进行了广泛的研究。其它一些较新的活性剂(revaprazan、soraprazan、AZD-0865和CS-526)已经进入了确证其功效的人类临床试验(Pope，A.；Parsons，M.，药理学科学中的趋势(Trends in Pharmacological Sciences)，1993，14，323-5；Vaki1，N.，营养药理学和治疗学(Alimentary Pharmacologyand Therapeutics)，2004，19，1041-1049)。发现酸泵拮抗剂通常可用于治疗许多疾病，包括胃肠疾病、胃食管疾病、胃食管返流疾病(GERD)、消化性溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、非甾体抗炎药(NSAID)-诱导的溃疡、胃炎、幽门螺旋杆菌感染、消化不良、功能性消化不良、佐-埃二氏综合征、非侵蚀性返流疾病(NERD)、内脏痛、烧心、恶心、食管炎、吞咽困难、唾液分泌过多、气道病症或哮喘(在下文被称为“APA病”，Kiljander，Toni O，American Journal of Medicine，2003，115(增刊3A)，65S-71S.)。

WO99/55706和WO04/046144公开了据报道是酸泵拮抗剂的化合物。其涉及某些具有咪唑并[1，2-a]吡啶结构的化合物。

需要提供是良好药物候选物并满足对于疾病的治疗而言，PPIs仍未满足的需要的新酸泵拮抗剂。优选的化合物特别是应当有效与酸泵结合，同时几乎对其它受体没有亲合力并且表现出作为胃中胃酸分泌抑制剂的功能活性。其应当在胃肠道中被良好吸收、稳定代谢并具有有利的药动学性质。其应当是无毒的。此外，理想的药物候选物将以稳定、不吸湿和易于制备的物理形式存在。

本发明的概述

在本发明中，已经发现具有色满部分的一类新化合物表现出酸泵抑制活性和作为药物候选物的有利性质，并且因此可用于治疗由酸泵抑制活性介导的疾病情况如APA病。

本发明提供了下式的化合物(I)：

或其可药用的盐，其中：

-A-B-表示-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；

R¹表示未被取代或者被1至2个独立地选自羟基、在体内可以被转化成羟基的部分和C₁-C₆烷氧基的取代基取代的C₁-C₆烷基；

R²表示C₁-C₆烷基；

R³表示C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基或C₃-C₇环烷基C₁-C₆烷基；

R⁴表示未被取代或者被1至3个独立地选自卤素原子、羟基、在体内被转化成羟基的部分和C₁-C₆烷氧基的取代基取代的C₁-C₆烷基；和

R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地表示氢原子、卤素原子或C₁-C₆烷基。

本发明还提供了一种包含各自如这里所述的式(I)的化合物或其可药用的盐和用于所述化合物的可药用载体的药物组合物。

本发明还提供了一种包含各自如这里所述的式(I)的化合物或其可药用的盐，并且还包含其它药理学活性剂的药物组合物。

本发明还提供了一种治疗哺乳动物个体由酸泵调节活性介导的情况的方法，其包括给需要该类治疗的哺乳动物使用治疗有效量各自如这里所述的式(I)的化合物或其可药用的盐。

由酸泵调节活性介导的情况的实例非限制性地包括APA病。

此外，本发明还提供了各自如这里所述的式(I)的化合物或其可药用的盐用于制备治疗由酸泵抑制活性介导的情况的药物的应用。

本发明还优选地提供了各自如这里所述的式(I)的化合物或其可药用的盐用于制备治疗选自APA病的药物的应用。

本发明的化合物表现出良好的酸泵抑制活性、较低的毒性、良好的吸收性、良好的分布、良好的溶解性、对除酸泵外的蛋白的结合性低、药物-药物相互作用性低、和良好的代谢稳定性。

本发明的一些立体异构体可能表现出更好的光毒性性质。

本发明的详细描述

在本发明的化合物中：

在R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸是C₁-C₆烷基的情况中，这种C₁-C₆烷基可以是具有1至6个碳原子的直链或支链基团，并且其实例非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲-丁基和叔-丁基、戊基、1-乙基丙基和己基。在这些基团仲，优选C₁-C₄烷基；更优选C₁-C₂烷基；对于R¹、R²、R³、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸而言，优选甲基；对于R⁴而言，优选甲基和乙基。

在R³是C₃-C₇环烷基的情况中，其表示具有3至7个碳原子的环烷基，并且其实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。在这些基团中，优选C₃-C₅环烷基；更优选环丙基。

在R³是C₃-C₇环烷基C₁-C₆烷基的情况中，其表示被所述C₃-C₇环烷基取代的所述的C₁-C₆烷基，并且其实例非限制性地包括环丙基甲基、环丙基乙基、环丙基丙基、环丙基丁基、环丙基戊基、环丙基己基、环丁基甲基、环丁基乙基、环戊基甲基、环己基甲基和环庚基甲基。在这些基团中，优选C₃-C₅环烷基C₁-C₄烷基；优选C₃-C₅环烷基C₁-C₂烷基；更优选环丙基甲基。

在R¹和R⁴的取代基是C₁-C₆烷氧基的情况中，其表示被所述C₁--C₆烷基取代的氧原子，并且其实例非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲-丁氧基和叔-丁氧基、戊氧基和己氧基。在这些基团中，优选C₁-C₄烷氧基；优选C₁-C₂烷氧基；更优选甲氧基。

在R⁵、R⁶、R⁷和R⁸是卤素原子的情况中，其可以是氟、氯、溴或碘原子。在这些基团中，优选氟原子和氯原子。

其中“可以在体内被转化成羟基的部分”指在体内例如可通过水解和/或酶，例如酯酶被转化成羟基的部分。所述部分的实例非限制性地包括在体内可以容易地被水解的酯和醚基团。该类部分是本领域技术人员已知的并且如在“前体药物的设计(Design of Prodrugs)”，H.Bundgaard(Elsevier，1985)中所述的那样，其被称为‘前体部分(pro-moieties)’。优选的在体内被转化成羟基的部分是例如C₁-C₆烷基羰氧基和C₁-C₆烷基羰氧基甲氧基。

在-A-B-是-O-CH₂-或-S-CH₂-的情况中，-A-相当于-O-或-S-和-B-相当于-CH₂-。

在-A-B-是-CH₂-O-或-CH₂-S-的情况中，-A-相当于-CH₂-和-B-相当于-O-或-S-。

这里所用的术语“处理”和“治疗”指的是治愈、减轻和预防性处理，包括逆转、缓解该类术语所应用的病症或情况或该类病症或情况的一种或多种症状、抑制其进程、或预防所述病症或情况或该类病症或情况的一种或多种症状。

本发明优选类型的化合物是这些其中：

(a)-A-B-是-O-CH₂-或-CH₂-O-；

(b)R¹是C₁-C₄烷基；

(c)R¹是C₁-C₂烷基；

(d)R¹是甲基；

(e)R²是C₁-C₂烷基；

(f)R²是甲基；

(g)R³是C₁-C₄烷基；

(h)R³是C₁-C₂烷基；

(i)R³是甲基；

(j)R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₂-C₄烷基；

(k)R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₂烷基；

(l)R⁴是未被取代或者被羟基取代的C₁-C₂烷基；

(m)R⁴是甲基、乙基或2-羟基乙基；

(n)R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₂烷基；

(o)R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地是氢原子、氟原子、氯原子、或甲基；

(p)R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地是氢原子或甲基

(q)R⁵是氢原子、氟原子或甲基；

(r)R⁶是氢原子；

(s)R⁷是氢原子或氟原子；和

(t)R⁸是氢原子；

的各自如这里所述的式(I)的化合物或其可药用的盐。

在这些类型的化合物中，还优选(a)至(t)的任何组合。

本发明优选的化合物是这些其中：

(A)-A-B-是-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；R¹是未被取代或者被1至2个独立地选自羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R²是C₁-C₄烷基；R³是C₁-C₄烷基、C₃-C₇环烷基或C₃-C₇环烷基C₁-C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1至3个独立地选自卤素原子、羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；和R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₆烷基；

(B)-A-B-是-O-CH₂-、或-CH₂-O-；R¹、R²和R³独立地是C₁--C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₄烷基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(C)-A-B-是-O-CH₂-、或-CH₂-O-；R¹、R²和R³独立地是C₁-C₂烷基；R⁴是未被取代或者被羟基取代的C₁-C₂烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子或C₁-C₂烷基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(D)-A-B-是-O-CH₂-、或-CH₂-O-；R¹是未被取代或者被1至2个独立地选自羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R²是C₁-C₄烷基；R³是C₁-C₄烷基、C₃-C₇环烷基或C₃-C₇环烷基C₁-C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1至3个独立地选自卤素原子、羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₄烷基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(E)-A-B-是-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；R¹和R²独立地是C₁-C₄烷基；R³是C₁-C₄烷基、C₃-C₇环烷基或C₃-C₇环烷基C₁-C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1至3个独立地选自卤素原子、羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₄烷基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(F)-A-B-是-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；R¹和R²各自是甲基；R³是C₁-C₄烷基、C₃-C₇环烷基或C₃-C₇环烷基C₁-C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1至3个独立地选自卤素原子、羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₄烷基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(G)-A-B-是-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；R¹和R²各自是甲基；R³是C₁-C₄烷基、C₃-C₇环烷基或C₃-C₇环烷基C₁-C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1至3个独立地选自卤素原子、羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₂烷基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(H)-A-B-是-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；R¹和R²各自是甲基；R³是C₁-C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子、卤素原子或甲基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(I)-A-B-是-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；R¹和R²各自是甲基；R³是C₁-C₂烷基；R⁴是未被取代或者被羟基取代的C₁-C₂烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子或甲基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(J)-A-B-是-O-CH₂-、或-CH₂-O-；R¹、R²和R³独立地是C₁-C₄烷基；R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₄烷氧基的取代基取代的C₁-C₄烷基；和R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₄烷基；

(K)-A-B-是-CH₂-O-；R¹、R²和R³独立地是甲基；R⁴是未被取代或者被羟基取代的C₁-C₂烷基；R⁵和R⁷独立地是氢原子或甲基；和R⁶和R⁸各自是氢原子；

(L)-A-B-是-O-CH₂-、或-CH₂-O-；R¹、R²和R³独立地是C₁-C₆烷基；R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₆烷氧基的取代基取代的C₁-C₆烷基；R⁵是氢原子、氟原子或C₁-C₆烷基；R⁷是氢原子、卤素原子或C₁-C₆烷基；R⁶和R⁸独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₆烷基；

(M)A-B-是-O-CH₂-、或-CH₂-O-；R¹、R²和R³独立地是C₁-C₆烷基；R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₆烷氧基的取代基取代的C₁-C₆烷基；R⁵是氢原子、氟原子或C₁-C₆烷基；R⁷是氢原子或卤素原子；和R⁶和R⁸独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₆烷基

的各自如这里所述的式(I)的化合物或其可药用的盐。

包含一个或多个不对称碳原子的式(I)的化合物可以以两种或多种异构体的形式存在。

在本发明的范围中包括式(I)化合物所有的立体异构体和几何异构体，包括表现出一种以上类型异构现象的化合物以及其一种或多种的混合物。还包括其中所述反荷离子是光学活性的酸加成盐，例如，D-乳酸盐或L-赖氨酸、或外消旋物、DL-酒石酸盐或DL-精氨酸。

本发明的一个实施方案提供了选自：

(-)-8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-8-[(7-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-8-[(7-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-[(7-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-8-[(5，7-二氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-[(5，7-二氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-[(5，7-二氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-8-[(5-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-[(5-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-8-[(5-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-[(5-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-8-[(6-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-[(6-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-8-[(8-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-8-[(8-氟-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(7-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(+)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(7-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

(-)-N，N，2，3-四甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；和

(+)-N，N，2，3-四甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺；

的化合物或其可药用的盐。

在色满环上的碳原子与氮原子结合的情况中，式(I)化合物优选的立体异构体就该手性中心而言为R型。

式(I)化合物可药用的盐包括其酸加成盐(包括其二盐)。

适宜的酸加成盐是由形成无毒盐的酸形成的。其实例包括醋酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己烷氨基磺酸盐(cyclamate)、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、gluceptate、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、蔗糖盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟醋酸盐和xinofoate。

对于适宜盐的综述而言，见“药用盐手册：性质，选择，和应用(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，andUse)”，Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。式(I)化合物可药用的盐可以容易地通过将式(I)化合物的溶液与视情况而定的所需的酸或碱混合到一起来进行制备。所述盐从溶液中沉淀出来并通过过滤对其进行收集或者可以通过将溶剂蒸发来对其进行回收。盐的离子化程度可以在完全电离至几乎不电离之间进行变化。

本发明化合物可药用的盐既包括未被溶剂化的形式又包括溶剂化形式。这里所用的术语“溶剂化物”描述了一种包含本发明化合物和一种或多种可药用的溶剂分子，例如乙醇的分子络合物。当所述溶剂是水时，使用术语‘水合物’。

本发明可药用的盐包括其中结晶的溶剂被同位素取代的水合物和溶剂化物，例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

本发明的范围中包括络合物如包合物、其中与上述溶剂化物相反，以化学计量或非化学计量数量存在药物和主体的药物-主体包合络合物。还包括包含两种或多种有机和/或无机组分(其可以以化学计量或非化学计量数量存在)的药物络合物。所得的络合物可以被电离、部分电离、或未被电离。对于该类络合物的综述而言，见 J Pharm Sci，64(8)，1269-1288，Haleblian(August 1975)。

式(I)的化合物可以存在一种或多种晶型。在本发明的范围中还包括这些多晶型物(包括其混合物)。

本发明包括其中一个或多个原子被具有相同原子序数但是原子质量或质量数与在自然中通常所发现的原子质量或质量数不同的原子代替的式(I)化合物可药用的所有同位素标记的化合物。

适于被包含在本发明化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，如²H和³H、碳的同位素，如¹¹C、¹³C和¹⁴C、氯的同位素，如³⁶Cl、氟的同位素，如¹⁸F、碘的同位素，如¹²³I和¹²⁵I、氮的同位素，如¹³N和¹⁵N、氧的同位素，如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O，磷的同位素，如³²P、和硫的同位素，如³⁵S。

某些同位素标记的式(I)的化合物，例如这些混有放射性同位素的化合物可用于药物和/或底物组织分布研究。由于易于混入和易于探测，放射性同位素氚，即³H和碳-14，即¹⁴C对于这一目的而言特别有用。

用重同位素如氘，即²H进行取代可以通过更高的代谢稳定性而产生一些治疗优点，例如，增加体内半衰期或降低所需剂量，并且因此在一些情况中可能是优选的。

用发射正电子的同位素如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N进行的取代可用于对底物受体占据进行检查的正电子发射体层摄影术(Positron EmissionTopography)(PET)研究。

同位素标记的式(I)的化合物通常可以用本领域技术人员已知的常规技术进行制备或者可以通过用同位素标记的试剂代替之前所用的未进行标记的试剂，用与所附实施例和所述这些制备方式相似的方式来进行制备。

所有式(I)的化合物可以用下面所述一般方法中所述的操作或者用实施例部分和制备部分中所述的特定方法或者用其常规变型来进行制备。除这里所用的任何新型中间体外，本发明还包括任何一种或多种这些用于制备式(I)化合物的方法。

一般合成

本发明的化合物可以用各种众所周知的制备这种类型化合物的方法来进行制备，例如可以如下面方法A中所示的那样来进行制备。

除非说明，否则在下面方法中的R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸，A和B的定义如上所述。在下面一般合成中的所有起始材料都可以通过商业途径获得或者可以用本领域技术人员已知的常规方法来进行制备，如可以用WO99/55706和WO 02/20523中所述的方法来进行制备，其公开内容在这里被引入作为参考。

方法A

其说明了式(I)化合物的制备。

在反应流程图A中，R^a是一种羧基-保护基团；R^1a是上面所定义的R¹或者其中羟基被羟基-保护基团保护起来的R¹；和X是一种离去基团。

这里所用的术语“羧基-保护基团”表示一种能通过各种方法被裂解从而得到羧基的保护基团，如例如，C₁-C₆烷基、卤代C₁-C₆烷基或芳基C₁-C₆烷基。在这些基团中，优选C₁-C₆烷基和芳基C₁-C₆烷基。

这里所用的术语“羟基-保护基团”表示一种能通过各种方法如氢解、水解、电解或光解被裂解从而得到羟基的保护基团并且在T.W.Greene等人(John Wiley&Sons，1999)所编辑的“有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)”中对该类羟基-保护基团进行了描述。该类基团如例如C₁-C₄烷氧基羰基、C₁-C₄烷基羰基、三-C₁-C₄烷基甲硅烷基或三-C₁-C₄烷基芳基甲硅烷基，和C₁-C₄烷氧基-C₁-C₄烷基。适宜的羟基-保护基团包括乙酰基和叔-丁基二甲基甲硅烷基。

这里所用的术语“离去基团”表示能被亲核基团，如羟基、胺或碳阴离子取代的基团并且该类离去基团的实例包括卤素原子、烷基磺酰基和苯基磺酰基。在这些基团中，优选溴、氯原子、甲磺酰基、三氟甲基磺酰基和4-甲基苯基磺酰基。

步骤A1

在这一步中，式(IV)的化合物是通过用式(II)的化合物(其是通过商业途径获得的或者可以用WO99/55706和WO02/020523中所述的方法来进行制备)对式(III)的化合物(其是通过商业途径获得的或者可以用如WO00/078751中所述的方法来进行制备)进行亲核取代来进行制备的。

该反应通常并且优选地是在存在溶剂的情况下进行的。对所用溶剂的性质没有特别限制，只要其对该反应或其所用的试剂没有不利影响并且可以溶解这些试剂，至少能在一定程度上溶解这些试剂即可。适宜溶剂的实例包括：醚类，如四氢呋喃(THF)、乙二醇二甲醚和二烷；酰胺类，如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)和N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)；腈类，如乙腈；和酮类，如丙酮；醇类，如2-甲基-2-丙醇、1-丁醇、1-丙醇、2-丙醇、乙醇和甲醇；和亚砜，如二甲基亚砜(DMSO)。在这些溶剂中，优选酰胺类、酮类和醇类。更优选丙酮。

该反应可以在使用或不使用碱的情况下进行。同样，对所用碱的性质没有特别限制，并且在这种类型的反应中常用的任何碱在这里都可以被平等地使用。该类碱的实例包括：碱金属醇化物，如甲醇钠、乙醇钠和叔-丁醇钾；碱金属碳酸盐，如碳酸锂、碳酸钠、碳酸铯、和碳酸钾；碱金属碳酸氢盐，如碳酸氢钠和碳酸氢钾；和有机胺，如三乙胺、三丙基胺、三丁基胺、二环己胺、N，N-二异丙基乙基胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)和1，5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)。在这些碱中，优选碳酸钾。

该反应可以在使用或不使用碘化物的情况下进行。该类碘化物的实例包括：碘化钠、碘化钾和碘化铯。在这些碘化物中，优选碘化钠和碘化钾。

该反应可以在很宽的温度范围内进行，并且精确的反应温度对于本发明而言并不关键。优选的反应温度取决于诸如溶剂和起始材料的性质之类的因素。但是，该反应通常是方便地在约0℃至约250℃的温度下进行的。该反应所需的时间也可以在很宽的范围内进行变化，其取决于许多因素，尤其是反应温度和所用起始材料以及溶剂的性质。但是，如果该反应在上面所概述的优选条件下进行的话，则大约5分钟至约72小时的时间通常就足够了。

步骤A2

在这一步中，所需的式(I)的化合物是通过将如步骤A1中所述的那样制得的式(IV)的化合物水解(A2a1)，然后将其与式(IV)的化合物进行的缩合反应(A2a2)或者用式(V)的化合物对式(IV)的化合物进行取代反应(A2b)来进行制备的。

(A2a1)水解

该反应通常并且优选地是在存在溶剂的情况下进行的。对所用溶剂的性质没有特别限制，只要其对该反应及其所用试剂没有不利影响并且可以溶解这些试剂，至少在一定程度上溶解这些试剂即可。适宜溶剂的实例包括：醚，如四氢呋喃和二烷；酰胺类，如N，N-二甲基甲酰胺；醇类，如乙醇和甲醇；和水。在这些溶剂中，优选甲醇、四氢呋喃和水。

该反应是在存在碱的情况下进行的。同样，对所用碱的性质没有特别限制，并且在这种类型的反应中常用的任何碱在这里都可以被平等地使用。该类碱的实例包括：碱金属氢氧化物，如氢氧化锂、氢氧化钠和氢氧化钾。在这些碱中，优选氢氧化钠。

该反应可以在很宽的温度范围内进行，并且精确的反应温度对于本发明而言并不关键。优选的反应温度取决于诸如溶剂和起始材料的性质之类的因素。但是，该反应通常是方便地在约0℃至约100℃的温度下进行的。该反应所需的时间也可以在很宽的范围内进行变化，其取决于许多因素，尤其是反应温度和所用起始材料以及溶剂的性质。但是，如果该反应在上面所概述的优选条件下进行的话，则大约5分钟至约12小时的时间通常就足够了。

(A2a2)缩合反应

该反应通常并且优选地是在存在溶剂的情况下进行的。对所用溶剂的性质没有特别限制，只要其对该反应或其所用的试剂没有不利影响并且可以溶解这些试剂，至少能在一定程度上溶解这些试剂即可。适宜溶剂的实例包括：卤化烃类，如二氯甲烷、氯仿、和1，2-二氯乙烷；醚类，如四氢呋喃和二烷；酰胺类，如N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺；和腈类，如乙腈。在这些溶剂中，优选卤化烃类和酰胺类；更优选二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺。

该反应是在存在缩合剂的情况下进行的。同样，对所用缩合剂的性质没有特别限制，并且在这种类型的反应中常用的任何缩合剂在这里都可以被平等地使用。该类缩合剂的实例包括：偶氮基二羧酸二-低级烷基酯-三苯基膦，如二乙基偶氮基二甲酸酯-三苯基膦；2-卤代-1-低级烷基吡啶卤化物，如2-氯-1-甲基(methy)吡啶碘化物和2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸盐(BEP)；二芳基磷酰基叠氮化物，如二苯基磷酰基叠氮化物(DPPA)；氯甲酸酯类，如氯甲酸乙酯和氯甲酸异丁酯；偶磷基氰化物(phosphorocyanidates)，如二乙基偶磷基氰化物(phosphorocyanidates)(DEPC)；咪唑衍生物，如N，N′-羰基二咪唑(CDI)；碳二亚胺衍生物，如N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)；iminium盐，如2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)和四甲基氟甲酰铵(formamidinium)六氟磷酸盐(TFFH)；和盐，如苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸盐(BOP)和溴-三-吡咯烷子基-磷六氟磷酸盐(PyBrop)。在这些缩合剂中，优选EDCI。

对于这一步而言，可以使用试剂如4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(DMAP)和N-羟基苯并三唑(HOBt)。在这些试剂中，优选HOBt。

该反应可以在使用或不使用碱的情况下进行。同样，对所用碱的性质没有特别限制，并且在这种类型的反应中常用的任何碱在这里都可以被平等地使用。该类碱的实例包括：胺类，如N-甲基吗啉、三乙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基哌啶和吡啶。在这些碱中，优选三乙胺和N-甲基吗啉。

该反应可以在很宽的温度范围内进行，并且精确的反应温度对于本发明而言并不关键。优选的反应温度取决于诸如溶剂和起始材料的性质之类的因素。但是，该反应通常是方便地在约0℃至约80℃的温度下进行的。该反应所需的时间也可以在很宽的范围内进行变化，其取决于许多因素，尤其是反应温度和所用起始材料以及溶剂的性质。但是，如果该反应在上面所概述的优选条件下进行的话，则大约5分钟至约24小时的时间通常就足够了。

(A2b)取代反应

该反应可以通过将所述反应物在纯氨基化合物或者惰性溶剂中在标准条件下加热来进行。对所用溶剂的性质没有特别限制，只要其对该反应或其所用的试剂没有不利影响并且可以溶解这些试剂，至少能在一定程度上溶解这些试剂即可。适宜溶剂的实例包括：醚类，如乙二醇二甲醚、四氢呋喃和二烷；酰胺类，如N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺；腈类，如乙腈；和醇类如2-甲基-2-丙醇、1-丁醇、1-丙醇、2-丙醇、乙醇和甲醇。在这些溶剂中，优选醚类和醇类。更优选四氢呋喃。

该反应可以在使用或不使用催化剂的情况下进行。同样，对所用催化剂的性质没有特别限制，并且在这种类型的反应中常用的任何催化剂在这里都可以被平等地使用。该类催化剂的实例包括：氰化钠或氰化钾。在这些催化剂中，优选氰化钠。

该反应可以在很宽的温度范围内进行，并且精确的反应温度对于本发明而言并不关键。优选的反应温度取决于诸如溶剂和起始材料的性质之类的因素。但是，该反应通常是方便地在约40℃至约200℃的温度下进行的。该反应所需的时间也可以在很宽的范围内进行变化，其取决于许多因素，尤其是反应温度和所用起始材料以及溶剂的性质。但是，如果该反应在上面所概述的优选条件下进行的话，则大约30分钟至约24小时的时间通常就足够了。

羟基-保护基团的引入

在R¹具有羟基的情况中，如果需要的话，该反应可以在对其羟基进行保护后，在其羟基对该反应产生影响前来完成。

可以在适宜的步骤引入羟基-保护基团。

T.W.Greene等人，有机合成中的保护基团，369-453，(1999)对这种反应进行了详细描述，其公开内容在这里被引入作为参考。下面对涉及保护基团叔-丁基二甲基甲硅烷基的典型反应进行了举例说明。

例如，当所述的羟基-保护基团是“叔-丁基二甲基甲硅烷基”时，这一步是通过与所需的羟基保护基团卤化物在惰性溶剂中在存在碱的情况下进行反应来进行的。

适宜溶剂的实例包括：卤化烃类，如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳和1，2-二氯乙烷；醚类，如乙醚、异丙醚、四氢呋喃和二烷；芳族烃类，如苯、甲苯和硝基苯；酰胺类，如甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺和六甲基磷酸三酰胺；或其混合溶剂。在这些溶剂中，优选四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺。

可用于上面反应的羟基-保护基团卤化物的实例包括氯化三甲基甲硅烷、氯化三乙基甲硅烷、氯化叔-丁基二甲基甲硅烷、溴化叔-丁基二甲基甲硅烷，优选乙酰氯。

碱的实例包括碱金属氢氧化物如氢氧化锂、氢氧化钠和氢氧化钾、碱金属碳酸盐如碳酸锂、碳酸钠和碳酸钾、和有机胺如三乙胺、三丁基胺、N-甲基吗啉、吡啶、咪唑、4-二甲基氨基吡啶、甲基吡啶、卢剔啶、可力丁、DBN和DBU。在这些碱中，优选三乙胺、咪唑、或吡啶。在使用液体形式的有机胺时，当以大大过量的数量使用时，其也可作为溶剂。

虽然反应温度随着起始化合物、所述卤化物和溶剂性质的不同而不同，但是其范围通常为0℃至80℃(优选地为0至30℃)。虽然反应时间随着反应温度等的不同而不同，但是其范围为10分钟至2天(优选地为30分钟至1天)。

去保护步骤

在R^1a具有被保护的羟基的情况中，在进行去保护反应后，得到羟基。T.W.Greene等人，有机合成中的保护基团，369-453，(1999)对这种反应进行了详细描述，其公开内容在这被引入作为参考。在下面对涉及保护基团叔-丁基二甲基甲硅烷基的典型反应进行了举例说明。

羟基的去保护是用酸，如醋酸、氟化氢、氟化氢-吡啶复合体、或氟化物离子，如氟化四丁基铵(TBAF)来进行的。

该去保护反应通常并且优选地是在存在溶剂的情况下进行的。对所用溶剂的性质没有特别限制，只要其对该反应或其所用的试剂没有不利影响并且可以溶解这些试剂，至少能在一定程度上溶解这些试剂即可。适宜溶剂的实例包括：醇，如甲醇、乙醇或其混合溶剂。

该去保护反应可以在很宽的温度范围内进行，并且精确的反应温度对于本发明而言并不关键。优选的反应温度取决于诸如溶剂和起始材料的性质之类的因素。但是，该反应通常是方便地在约0℃至约100℃的温度下进行的。该反应所需的时间也可以在很宽的范围内进行变化，其取决于许多因素，尤其是反应温度和所用起始材料以及溶剂的性质。但是，如果该反应在上面所概述的优选条件下进行的话，则大约10分钟至约24小时的时间通常就足够了。

可以将式(I)的化合物和上述制备方法中的中间体分离出来并用常规方法，如蒸馏、重结晶、或色谱纯化对其进行纯化。

用于药学应用的本发明的化合物可以以结晶或无定形产物的形式进行给药。其例如可以通过诸如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥、或蒸发干燥之类的方法以固体塞、粉末或薄膜的形式来获得。对于这种目的而言，可以使用微波或射频干燥。

用于对各对映异构体进行制备/分离的常规技术包括由适宜的光学纯的前体进行的手性合成或用例如手性高压液相色谱(HPLC)对外消旋物(或者盐或衍生物的外消旋物)进行拆分。

或者，对外消旋物(或外消旋前体)进行光学拆分的方法可适宜地选自常规方法，例如，选择结晶(preferential crystallization)、或对由式(I)化合物的碱性部分和适宜的光学活性酸如酒石酸之间形成的非对映异构的盐进行拆分。

用于药学应用的本发明的化合物可以以结晶或无定形的形式进行给药。其例如可以通过诸如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥、或蒸发干燥之类的方法以固体塞、粉末或薄膜的形式来获得。对于这种目的而言，可以使用微波或射频干燥。

其可以被单独给药或者与一种或多种本发明的其它化合物或者与一种或多种其它药物(或者其任何组合)一起联合给药。其通常是以具有一种或多种可药用载体或赋形剂的药物组合物或制剂的形式进行给药的。这里所用的术语“载体”或“赋形剂”描述的是除本发明化合物外的任何成分。载体或赋形剂的选择在很大程度上取决于诸如特定的给药方式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响、和剂型的性质之类的因素。

适用于本发明化合物的传递的药物组合物以及其制备方法对于本领域技术人员而言是显而易见的。在例如‘Remington’sPharmaceutical Sciences’第19版(Mack Publishing Company，1995)中可以找到该类组合物以及其制备方法。

口服给药

本发明的化合物可以被口服给药。口服给药可能涉及吞咽，从而使得所述化合物进入胃肠道，或者可以使用颊或舌下给药，化合物可以经由这些给药直接由口腔进入到血流中。

适用于口服给药的制剂包括固体制剂如，例如，片剂、包含微粒、液体、或粉末的胶囊、锭剂(包括填充液体的锭剂)、咀嚼物(chews)、多微粒和毫微微粒、凝胶、固体溶液、脂质体、薄膜(包括粘膜粘附性的)、卵状小体(ovules)、喷雾和液体制剂。

液体制剂包括例如混悬液、溶液、糖浆和酏剂。该类制剂可以被用作软胶囊或硬胶囊中的填充剂并且通常包含载体，例如，水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素、或适宜的油，和一种或多种乳化剂和/或混悬剂。液体制剂还可以通过将固体，例如得自小药囊的固体重组来进行制备。

本发明的化合物还可被用于快速溶解、快速崩解剂型如 Expert Opinion in Therapeutic Patents， 11(6)，981-986，Liang和Chen(2001)所述的这些剂型中。

对于片剂剂型而言，根据其剂量，所述药物可以占该剂型的约1重量％至约80重量％，更典型地为该剂型的约5重量％至约60重量％。除药物外，这些片剂通常还包含崩解剂。崩解剂的实例包括羟乙酸淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、低级烷基取代的羟丙基纤维素、淀粉、预胶化淀粉和藻酸钠。崩解剂通常占所述剂型的约1重量％至约25重量％，优选地为其约5重量％至约20重量％。

通常用粘合剂来赋予片剂制剂内聚性。适宜的粘合剂微晶纤维素、明胶、糖类、聚乙二醇、天然和合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、预胶化淀粉、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。片剂还可以包含稀释剂，如乳糖(单水合物，喷雾干燥的单水合物，无水物等)、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纤维素、淀粉和二碱式磷酸钙二水合物。

片剂还可任选地包含表面活性剂，如月桂基硫酸钠和多乙氧基醚，和助流剂如二氧化硅和滑石粉。当存在时，表面活性剂可以为片剂的约0.2重量％至约5重量％，并且助流剂可以为片剂的约0.2重量％至约1重量％。

片剂通常还包含润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酰富马酸钠、以及硬脂酸镁与月桂基硫酸钠的混合物。润滑剂通常为片剂的约0.25重量％至约10重量％，优选地为片剂的约0.5重量％至约3重量％。

其它可能的成分包括抗氧剂、着色剂、矫味剂、防腐剂和掩味剂。

实例性片剂包含高至约80％的药物、约10重量％至约90重量％的粘合剂、约0重量％至约85重量％的稀释剂、约2重量％至约10重量％的崩解剂、和约0.25重量％至约10重量％的润滑剂。

可以直接对片剂混合物进行压缩或者可以用辊轴机(roller)对其进行压缩来形成片剂。或者，在压片前，可以用湿法制粒、干法制粒或熔融制粒、熔融冻凝(melt congealed)、或挤出对片剂掺合物或者掺合物的一部分进行制粒。最终的制剂可以包含一层或多层并且可以对其进行包衣或不进行包衣；甚至可以用胶囊对其进行包封。

在“药物剂型：片剂，第1卷(Pharmaceutical DosageForms：Tablets，vol.1)”，H.Lieberman和L.Lachman，Marcel Dekker，N.Y.，N.Y.，1980(ISBN 0-8247-6918-x)中对片剂制剂进行了讨论。

用于口服给药的固体制剂可以被制备为立即释放和/或释放被改变的形式。释放被改变的制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和按程序设计释放。

在US专利6,106,864中对用于本发明目的的进行了改变的适宜制剂进行了描述。在Verma等人， Pharmaceutical Technology On-line，25(2)，1-14(2001)中可以找到其它适宜释放技术如高能分散(highenergy dispersion)和渗透及包衣颗粒的详述。在WO00/35298中描述了用口香糖来获得控制。

胃肠外给药

本发明的化合物还可以被直接给药于血流、肌肉、或内部器官中。用于胃肠外给药的适宜方法包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内和皮下给药。用于胃肠外给药的适宜装置包括针(包括显微针)注射器、无针注射器和输液技术。

胃肠外制剂典型地是可包含赋形剂如盐类、碳水化合物和缓冲剂(优选地缓冲至约3至约9的pH)的水溶液，但是，对于一些应用而言，其可更适宜地被制备为无菌的非水溶液或者用于与适宜的基质，如无菌无热源的水联合进行使用的干燥形式。

在无菌条件下例如通过例如冷冻干燥进行的胃肠外制剂的制备可以容易地用本领域技术人员众所周知的标准药用技术来完成。

可以通过使用适宜的制剂技术，如混入增加溶解度的物质来增加所用式(I)化合物在胃肠外制剂中的溶解度。

用于胃肠外给药的制剂可以被制备为立即释放或释放被改变的形式。释放被改变的制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和按程序设计释放。因此，本发明的化合物可以被制备为固体、半固体、或用于以提供活性化合物被改变的释放的植入储库形式进行给药的触变性液体。该类制剂的实例包括药物涂布的移植片固定模和PGLA微球。

局部给药

本发明的化合物还可以被局部给药于皮肤或粘膜，即，被皮肤或经皮给药。用于这种目的的典型制剂包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、霜、软膏、扑粉、敷料(dressings)、泡沫、薄膜、皮肤贴剂、糯米纸囊剂、植入物、海棉状物、纤维制品、绷带和微乳。还可以使用脂质体。典型的载体包括醇、水、矿物油、液体石蜡、白凡士林、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可以混入渗透增强剂-见，例如，J Pharm Sci，88(10)，955-958，Finnin和Morgan(1999年10月)。

其它局部给药手段包括通过电穿孔、离子电渗疗法、超声透入疗法、超声促渗和显微针或无针(例如Powderject^TM，Bioject^TM等)注射进行的传递。

用于局部给药的制剂可以被制备为立即释放或释放被改变的形式。释放被改变的制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和按程序设计释放。

吸入/鼻内给药

本发明的化合物还可以通过吸入被鼻内给药，典型地以得自干粉吸入器的干粉(以混合物例如具有乳糖的干掺合物形式单独或者以混合组分颗粒，如混有磷脂，如磷脂酰胆碱的混合组分颗粒的形式)形式或者得自使用或不使用推进剂，如1，1，1，2-四氟乙烷或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷的加压容器、泵、喷雾器、雾化器(优选用于产生一种细雾的使用electrohydrodynamics的雾化器)、或喷雾器的气雾剂喷雾形式进行给药。对于鼻内应用而言，所述粉末可以包含生物粘附剂，例如，壳聚糖或环糊精。

所述加压容器、泵、喷雾器、雾化器、或喷雾器包含本发明化合物的溶液或混悬液，所述溶液或混悬液包含例如乙醇、含水乙醇、或适宜的用于进行分散、溶解、或延长活性剂释放的其它物质、作为溶剂的推进剂和任选的表面活性剂，如脱水山梨醇三油酸酯、油酸、或低聚乳酸(oligolactic acid)。

在用于干粉或混悬液制剂中之前，将所述药品微粉化成适于通过吸入进行传递的尺寸(通常低于5微米)。所述微粉化可以用任何适宜的粉碎方法如螺旋汽流粉碎(spiral jet milling)、流化床汽流粉碎(jet milling)、用于形成毫微粒的超临界流体处理、高压匀化、或喷雾干燥来完成。

用于吸入器或吹入器中的胶囊(例如由明胶或HPMC制得的)、泡状物(blisters)和药筒可以被制备为包含本发明化合物、适宜的粉末基质如乳糖或淀粉和改性剂如1-亮氨酸、甘露醇、或硬脂酸镁的粉末混合物。所述乳糖可以是无水的或者为单水合物形式，优选地为单水合物形式。其它适宜的赋形剂包括葡聚糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。

用于产生一种细雾的使用电流体力学(electrohydrodynamics)的雾化器中的适宜溶液制剂在每次开动时可以包含约1μg至约20mg本发明的化合物并且其开动体积可以在约1μl至约100μl之间进行变化。典型的制剂可包含式(I)的化合物、丙二醇、无菌水、乙醇和氯化钠。可用于代替丙二醇的供选择的溶剂包括甘油和聚乙二醇。

可以向本发明用于吸入/鼻内给药的这些制剂中加入适宜的矫味剂如薄荷脑和左薄荷脑、或甜味剂，如糖精或糖精钠。可以用例如聚(DL-乳酸-共乙醇酸(PGLA)将用于吸入/鼻内给药的制剂制备为立即释放或释放被改变的形式。释放被改变的制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和按程序设计释放。

在干粉吸入器和气雾剂的情况中，可以用传递计量数量的阀来测定剂量单位。本发明的单位典型地被安排成给予包含约1至约100μg式(I)化合物的计量剂量或“一喷(puff)”。总日剂量通常为约50μg至约20mg，其可以以单剂量形式进行给药，或者通常在一天中被分成多个剂量进行给药。

直肠/阴道内给药

本发明的化合物可以被直肠或阴道内给药，例如以栓剂、阴道栓、或灌肠剂的形式进行给药。可可豆脂是传统的栓剂基质，但是根据情况，也可以使用各种其它选择。

用于直肠/阴道给药的制剂可以被制备为立即释放或释放被改变的形式。释放被改变的制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和按程序设计释放。

眼睛/耳朵给药

本发明的化合物还可以被直接给药于眼睛或耳朵，通常以位于pH进行了调节的等渗的无菌盐水中被微粉化的混悬液或溶液的小滴的形式进行给药。适用于眼睛和耳朵给药的其它制剂包括软膏、可生物降解(例如可吸附的胶状海棉状物、胶原)和不可生物降解的(例如硅酮)植入物、糯米纸囊剂、镜片和微粒或囊状系统，如niosomes或脂质体。可以与防腐剂如苯扎氯铵一起混入聚合物如交联聚丙烯酸、聚乙烯醇、透明质酸、纤维素性聚合物，例如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、或甲基纤维素、或杂多糖聚合物例如gelan gum。该类制剂还可以用离子电渗疗法来进行传递。

用于眼睛/耳朵给药的制剂可以被制备为立即释放或释放被改变的形式。释放被改变的制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控释、靶向释放和按程序设计释放。

其它技术

可以将本发明的化合物与可溶的大分子实体，如环糊精以及其适宜的衍生物或包含聚乙二醇的聚合物联合，以对于在上述任何给药方式中的应用而言，改善其溶解度、溶出速率、掩味、改善其生物利用度和/或稳定性。

例如，发现药物-环糊精络合物通常可用于大多数剂型和给药途径。可以使用包合和未包合络合物。作为直接与药物络合的一种供替代的选择，可以用环糊精作为辅助添加剂，即载体、稀释剂、或增溶剂。对于这些目的而言，最常用的是α-、 β-和γ-环糊精，在WO91/11172、WO94/02518和WO98/55148中可以找到其实例。

各部分的试剂盒(KIT-OF-PARTS)

因为希望使用活性化合物的联合，例如为了治疗特定疾病或情况而使用化合物的联合，在本发明的范围内，可以方便地将两种或多种药物组合物(其中至少一种包含本发明的化合物)以适用于将所述组合物共同给药的试剂盒的形式进行联合。

因此，本发明的试剂盒包含两种或多种独立的药物组合物(其中至少一种包含本发明式(I)的化合物)和用于独立保留所述组合物的手段，例如容器、分开的瓶、或分开的箔包装(divided foil packet)。该类试剂盒的一个实例是用于对片剂、胶囊等进行包装的常见泡状物包装。

本发明的试剂盒特别适用于将不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型进行给药、用于将所述独立组合物以不同的时间间隔进行给药、或者用于将独立组合物彼此逐步增高剂量(titrating)。为了有助于患者的顺从性，该试剂盒通常包含用于给药的指导并且其可以与所谓的记忆辅助物(memory aid)一起被提供。

剂量

对于给人类患者进行的给药而言，本发明化合物的总日剂量通常为约0.05mg至约500mg，当然，其将取决于给药方式，其优选地为约0.1mg至约400mg并且更优选地为约0.5mg至约300mg。例如，口服给药可能需要约1mg至约300mg的总日剂量，而静脉内给药仅需要约0.5mg至约100mg。该总日剂量可以以单剂量或分割剂量的形式进行给药。

这些剂量是以体重为约65kg至约70kg的人类个体平均体重为基础的。主治医师能容易地确定对于体重在该范围之外的个体，如婴儿和老年人而言的剂量。

组合

如上面所讨论的那样，本发明的化合物表现出酸泵抑制活性。本发明的酸泵拮抗剂可用于与另一种药理学活性化合物或者与两种或多种其它药理学活性化合物进行联合，特别是联合用于治疗胃食管返流疾病。例如，可以将上面所定义的酸泵拮抗剂，特别是式(I)的化合物或其可药用的盐同时、相继或独立地与一种或多种选自下面物质的活性剂一起进行给药：

(i)组胺H₂受体拮抗剂，例如雷尼替丁、拉夫替丁、尼扎替丁、西米替丁、法莫替丁和罗沙替丁；

(ii)质子泵抑制剂，例如奥美拉唑、艾美拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑、替那拉唑、ilaprazole和兰索拉唑；

(iii)口服抗酸剂混合物，例如Maalox^、Aludrox^和Gaviscon^；

(iv)粘膜保护剂，例如聚普瑞锌、依卡倍特钠(ecabet sodium)、雷巴米特、替普瑞酮、西曲酸酯、硫糖铝、chloropylline-copper和普劳诺托；

(v)抗胃酸药(anti-gastric agent)，例如抗胃泌素(Anti-gastrin)疫苗、伊曲谷胺和Z-360；

(vi)5-HT₃拮抗剂，例如多拉司琼、帕诺洛司琼、阿洛司琼、阿扎司琼、雷莫司琼、米氮平、格拉司琼、托烷司琼、E-3620、昂丹司琼和吲地司琼；

(vii)5-HT₄激动剂，例如替加色罗、莫沙必利、西尼必利和oxtriptane；

(viii)轻泻药，例如Trifyba^、Fybogel^、Konsyl^、Isogel^、Regulan^、Celevac^和Normacol^；

(ix)GABA_B激动剂，例如巴氯芬和AZD-3355；

(x)GABA_B拮抗剂，例如GAS-360和SGS-742；

(xi)钙通道阻滞剂，例如阿雷地平、拉西地平、falodipine、阿折地平、克林地平、洛美利嗪、地尔硫卓、加洛帕米、依福地平、尼索地平、氨氯地平、乐卡地平、贝凡洛尔、尼卡地平、依拉地平、贝尼地平、维拉帕米、尼群地平、巴尼地平、普罗帕酮、马尼地平、苄普地尔、硝苯地平、尼伐地平、尼莫地平和法舒地尔；

(xii)多巴胺拮抗剂，例如甲氧氯普胺、多潘立酮和左舒必利；

(xiii)速激肽(NK)拮抗剂，特别是NK-3、NK-2和NK-1拮抗剂，例如奈帕坦特、沙瑞度坦、他奈坦、(αR，9R)-7-[3，5-二(三氟甲基)苄基]-8，9，10，11-四氢-9-甲基-5-(4-甲基苯基)-7H-[1，4]diazocino[2，1-g][1，7]naphthridine-6-13-二酮(TAK-637)、5-[[(2R，3S)-2-[(1R)-1-[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙氧基-3-(4-氟苯基)-4-吗啉基]甲基]-1，2-二氢-3H-1，2，4-三唑-3-酮(MK-869)、拉奈匹坦、达匹坦和3-[[2-甲氧基-5-(tri氟甲氧基)苯基]甲基氨基]-2-苯基-哌啶(2S，3S)；

(xiv)幽门螺旋杆菌感染剂，例如clarithromicyn、罗红霉素、罗他霉素、氟红霉素、泰利霉素、阿莫西林、氨苄西林、替莫西林、巴氨西林、阿扑西林、舒他西林、哌拉西林、利南西林(lenampicillin)、四环素、甲硝唑、bithmuth citrate和bithmuth subsalicylate；

(xv)一氧化氮合酶抑制剂，例如GW-274150、tilarginine、P54、胍基乙基二硫化物(guanidioethyldisulfide)和硝基氟吡洛芬；

(xvi)vanilloid受体1拮抗剂，例如AMG-517和GW-705498；

(xvii)毒蕈碱受体拮抗剂，例如trospium、solifenacin、托特罗定、tiotropium、cimetropium、oxitropium、异丙托铵、tiquizium、dalifenacin和imidafenacin；

(xviii)钙调节蛋白拮抗剂，例如角鲨胺和DY-9760；

(xix)钾通道激动剂，例如吡那地尔、替索洛尔、尼可地尔、NS-8和瑞替加滨；

(xx)β-1激动剂，例如多巴酚丁胺、地诺帕明、扎模特罗、地诺帕明、多卡巴胺和扎莫特罗；

(xxi)p-2激动剂，例如沙丁胺醇；叔丁喘宁、arformoterol、美卢君、马布特罗、利托君、非诺特罗、克仑特罗、福莫特罗、丙卡特罗、妥洛特罗、吡布特罗、班布特罗、妥洛特罗、多培沙明和左沙丁胺醇；

(xxii)β激动剂，例如异丙肾上腺素和叔丁喘宁；

(xxiii)α2激动剂，例如可乐定、美托咪定、洛非西定、莫索尼定、替扎尼定、胍法辛、胍那苄、他利克索和右旋美托咪定；

(xxiv)endthelin A拮抗剂，例如bonsetan、阿曲生坦、ambrisentan、clazosentan、sitaxsentan、fandosentan和达卢生坦；

(xxv)阿片样物质μ激动剂，例如吗啡、芬太尼和洛派丁胺；

(xxvi)阿片样物质μ拮抗剂，例如纳洛酮、丁丙诺啡和alvimopan；

(xxvii)胃动素激动剂，例如红霉素、mitemcinal、SLV-305和atilmotin；

(xxviii)ghrelin激动剂，例如卡普瑞林和TZP-101；

(xxix)AchE释放刺激剂，例如Z-338和KW-5092；

(xxx)CCK-B拮抗剂，例如伊曲谷胺、YF-476和S-0509；

(xxxi)胰高血糖素拮抗剂，例如NN-2501和A-770077；

(xxxii)哌拉西林、仑氨西林、四环素、甲硝唑、bithmuth citrate和bithmuth subsalicylate；

(xxxiii)胰高血糖素样肽1(GLP-1)拮抗剂，例如PNU-126814；

(xxxiv)低电导率钙-激活的钾通道3(SK-3)拮抗剂，例如蜂毒明肽、dequalinium、阿曲库铵、泮库溴铵和筒箭毒碱。

生物学活性评估方法：

用下面的操作来测定本发明化合物的酸泵抑制活性和其它生物学活性。所用符号具有其常用含义：mL(毫升)，μL(微升)，Kg(千克)，g(克)，mg(毫克)，μg(微克)，pmol(微微摩尔)，mmol(毫摩尔)，M(摩尔质量(m³/mol))，mM(毫摩尔质量)，μM(微摩尔质量)，quant.(定量收率)，nm(纳米)，分钟(分钟)Cat#(目录号)。

得自新鲜猪胃的胃囊(gastric vesicles)制剂

用于猪胃的H⁺/K⁺-ATP酶抑制试验的猪胃囊是由新鲜猪胃的粘膜通过用严密配合的(tight-fitted)聚四氟乙烯(Teflone)匀浆器在0.25M蔗糖中在4℃下进行匀化来进行制备的。通过在20,000g下离心30分钟来取出粗品小丸。然后，将上清液在100,000g下离心30分钟。将所得的小丸重新混悬于0.25M蔗糖中，然后将其在132,000g下进行90分钟密度梯度离心。由包含7％Ficoll^TMPM400(Amersham Biosciences)的0.25M蔗糖层上的接触面收集胃囊。这种操作是在冷室中进行的。

Ion-leaky猪胃H+/K+-ATP酶抑制

Ion-leaky猪胃H⁺/K⁺-ATP酶抑制是根据Biochemical

Pharmacology，1988， 37，2231-2236所述方法的变型来进行测量的。

将分离出来的囊冷冻干燥，然后将其保持在低温冷冻器中直至进行使用。对于酶试验而言，将冷冻的囊用3mM包含40mM Bis-tris的MgSO₄(在37℃下pH为6.4)重组。

通过将5mM KCl，3mM Na₂ATP，3mM MgSO₄和1.0μg重组囊在具有或不具有试验化合物的情况下在最终的60μl反应混合物(40mM Bis-tris，pH 6.4)中在37℃下培养30分钟来进行酶反应。通过加入10％的十二烷基硫酸钠(SDS)来终止酶反应。通过用1份位于15mM水合醋酸锌中的35mM的钼酸铵四水合物和4份10％抗坏血酸(pH5.0)的混合物进行培养从而产生钼磷酸盐(其在750nm下具有吸光度)来探测由ATP释放的无机磷酸盐。所有实施例的化合物都表现出有效的抑制活性。

对于下面实施例的化合物而言，其抑制活性的IC₅₀值结果如表1所示。

表1.

实施例序号	IC₅₀(μM)
实施例序号	IC₅₀(μM)	1-1	0.085
1-2	0.0619	1-1	0.085
1-2	0.0619	1-3	0.0278
2-1	0.0497	1-3	0.0278
2-1	0.0497	2-2	0.0811
2-3	0.064	2-2	0.0811
2-3	0.064	3-1	0.103
3-2	0.125	3-1	0.103
3-2	0.125	3-3	0.0676
4-1	0.0871	3-3	0.0676

4-2	0.273
4-2	0.273	4-3	0.112
5-1	0.0947	4-3	0.112
5-1	0.0947	5-2	0.0862
5-3	0.093	5-2	0.0862
5-3	0.093	6-1	0.0139
6-2	0.0409	6-1	0.0139
6-2	0.0409	6-3	0.0157
7-1	0.0266	6-3	0.0157
7-1	0.0266	7-2	0.0205
7-3	0.0559	7-2	0.0205
7-3	0.0559	8-1	0.02
8-2	0.023	8-1	0.02
8-2	0.023	8-3	0.049
9-1	0.05	8-3	0.049
9-1	0.05	9-2	0.0159
9-3	0.0532	9-2	0.0159
9-3	0.0532	10-1	0.0751
10-2	0.0511	10-1	0.0751
10-2	0.0511	10-3	0.091
11-1	0.0486	10-3	0.091
11-1	0.0486	11-2	0.0538
11-3	0.101	11-2	0.0538
11-3	0.101	12-1	0.0208
12-2	0.197	12-1	0.0208
12-2	0.197	12-3	0.0811
13-1	0.25	12-3	0.0811
13-1	0.25	13-2	1.1
13-3	0.17	13-2	1.1

14-1	0.294
14-1	0.294	14-2	0.12
14-3	0.17	14-2	0.12
14-3	0.17	15-1	0.0409
15-2	0.23	15-1	0.0409
15-2	0.23	15-3	0.37
16-1	0.331	15-3	0.37
16-1	0.331	16-2	0.1
16-3	0.18	16-2	0.1
16-3	0.18	17-1	0.064
17-2	0.043	17-1	0.064
17-2	0.043	17-3	0.091
18-1	0.35	17-3	0.091
18-1	0.35	18-2	0.3
18-3	0.24	18-2	0.3
18-3	0.24	19-1	0.39
19-2	0.6	19-1	0.39
19-2	0.6	19-3	0.5

Ion-tight猪胃H+/K+-ATP酶抑制

Ion-tight猪胃H⁺/K⁺-ATP酶抑制是根据BiochemicalPharmacology，1988， 37，2231-2236所述方法的变型来进行的。

将分离出来的囊保持在低温冷冻器中直至进行使用。对于酶试验而言，将这些囊用3mM包含5mM Tris的MgSO₄(在37℃下pH为7.4)进行稀释。

通过将150mM KCl，3mM Na₂ATP，3mM MgSO₄，15μM缬氨霉素和3.0μg囊在具有或不具有试验化合物的情况下在最终的60μl反应混合物(5mM Tris，pH 7.4)中在37℃下培养30分钟来进行酶反应。通过加入10％SDS来终止酶反应。通过用1份位于15mM水合醋酸锌中的35mM的钼酸铵四水合物和4份10％抗坏血酸(pH5.0)的混合物进行培养从而产生钼磷酸盐(其在750nm下具有吸光度)来探测由ATP释放的无机磷酸盐。

犬科动物肾Na⁺/K⁺-ATP酶抑制

将粉状的犬科动物肾Na⁺/K⁺-ATP酶(Sigma)用3mM包含40mM Tris的MgSO₄(在37℃下的pH为7.4)重组。通过将100mM NaCl，2mM KCl，3mM Na₂ATP，3mM MgSO₄和12μg酶在具有或不具有试验化合物的情况下在最终的60μl反应混合物(40mM Tris，pH7.4)中在37℃下培养30分钟来进行酶反应。通过加入10％SDS来终止酶反应。通过用1份位于15mM水合醋酸锌中的35mM的钼酸铵四水合物和4份10％抗坏血酸(pH5.0)的混合物进行培养从而产生钼磷酸盐(其在750nm下具有吸光度)来探测由ATP释放的无机磷酸盐。

对胃腔灌注大鼠体内胃酸分泌的抑制

根据Watanabe等人[Watanabe K等人，J.Physiol.(Paris)2000；94：111-116]的方法来测量胃腔灌注大鼠的胃酸分泌。

在实验前，将8周大的雄性Sprague-Dawley大鼠禁食18小时，使其自由进水，将其用尿烷麻醉(1.4g/kg，i.p.)并切开其气管。在腹部中间坐一个切口，将两个聚乙烯套管插入到贲门窦中并用盐水(37℃，pH 5.0)以1ml/min的速率对胃进行灌注。以5分钟的时间间隔通过用0.02M NaOH滴定至pH5.0来测定灌注液中的酸产量。在进行30分钟的基础胃酸分泌测定后，通过连续静脉内输入五肽胃泌素(16μg/kg/h)来刺激胃酸分泌。在所刺激的胃酸分泌达到平台期后，将试验化合物通过静脉内推注或十二指肠内给药进行给药。在给药后，对其胃酸分泌进行监测。

就化合物对给药后0小时至1.5或3.5小时的总胃酸分泌的抑制或给药后的最大抑制来对其活性进行评估。

实施例5-3的化合物表现出良好的抑制活性。

对海登海因小胃(Heidenhain pouch)狗胃酸分泌的抑制

使用体重为7-15kg的具有海登海因小胃的雄性Beagle犬[Heidenhain R：Arch Ges Physiol.1879； 19：148-167]。在实验前，使动物从手术恢复至少3周。将动物保持在12小时光-暗节律中，使其单独居住。其每天一次地在11:00 a.m接受标准食物并自由进水，在实验前，将其禁食一夜(可自由进水)。在实验期间，通过每隔15分钟进行的重力引流(gravity drainage)来收集胃液样品。通过滴定至pH 7.0的终点来测量胃液的酸度。通过连续静脉内输入组胺(80μg/kg/h)来刺激胃酸分泌。在开始组胺输入后90分钟，进行实验化合物的口服或静脉内推注给药。在给药后，对胃酸分泌进行监测。用相对于相应对照值的最大抑制来对活性进行评估。

人多非利特结合

制备人ether a-go-go相关基因(HERG)转染的HEK293S细胞并使其进行内部(in-house)生长。将表达HERG产物的HEK-293细胞的细胞糊混悬于10倍体积的包含1mM MgCl₂，10mM KCl的50mM Tris缓冲液中(在25℃下，用2M HCl调至pH7.5)中。将这些细胞用Polytron匀浆器进行匀化(在最大功率下匀化20秒)并将其在4℃下在48,000g下离心20分钟。用相同的方式将该小丸重新混悬，再匀化和离心一次。弃去所得的上清液并将最终的小丸重新混悬(10-倍体积50mM的Tris缓冲液)并将其在最大功率下匀化20秒。将该膜匀浆等分并存在-80℃下直至使用。用Protein Assay Rapid试剂盒(wako)和Spectra max板式读数器(Wallac)，用这些等分试样来测定蛋白浓度。所有的操作、储备溶液和装备都一直被保存在冰上。对于饱和实验而言，这些实验是以200μl的总体积来进行的。分别通过将36μl[³H]-多非利特和160μl膜匀浆(20-30μg蛋白/孔)在室温下在不存在或存在10μM多非利特的情况下以终浓度(4μl)培养60分钟来测定对于总结合或非特异性结合而言的饱和。通过用玻璃纤维滤纸用Skatron细胞捕获器迅速真空过滤，然后用50mM Tris缓冲液(pH 7.4，25℃)洗涤两次来结束所有的培养。用Packard LS计数器，通过液体闪烁技术来对受体-结合的放射活性进行定量。

对于竞争实验而言，将药物在96孔聚丙烯板中以半对数(semi-log)形式进行稀释，将其进行4-点稀释。所有的稀释都是首先用DMSO进行的，然后被转移到包含1mM MgCl₂，10mM KCl的50mMTris缓冲液(pH7.4，25℃)中从而使得DMSO的终浓度等于1％。将化合物一式三份地分散到实验板中(4μl)。在6个孔中分别以基质和10μM多非利特(终浓度)形式建立总结合和非特异性结合孔。在5.6x终浓度下对放射配体进行制备并将这种溶液加入到各孔中(36μl)。通过加入YSi聚-L-赖氨酸SPA小珠(50μl，1mg/孔)和膜(110μl，20μg/孔)来开始该实验。将其在室温下继续培养60分钟。将这些板在室温下再培养3小时以使小珠沉积。通过用Wallac MicroBeta板式计数器进行计数来对受体-结合的放射活性进行定量。

Caco-2渗透性

Caco-2渗透性是根据Shiyin Yee，Pharmaceutical Research，763(1997)所述的方法来进行测量的。

使Caco-2细胞在滤器支撑物(Falcon HTS多孔插入系统)上生长14天。从顶端(apical)和底外侧(basolateral)隔室中除去培养基并将该单层用预热的0.3ml顶端缓冲液和1.0ml底外侧缓冲液在37℃下在振动器水浴中以50圈/分钟的频率预培养0.5小时。所述顶端缓冲剂由Hanks平衡盐溶液、25mMD-葡萄糖单水合物、20mM 2-吗啉代乙磺酸(morpholinoethanesulphonic acid)(MES)生物学缓冲液(Biological Buffer)、1.25mM CaCl₂和0.5mM MgCl₂(pH6.5)所组成。所述底外侧缓冲剂由Hanks平衡盐溶液、25mM D-葡萄糖单水合物、20mM 2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)生物学缓冲液、1.25mM CaCl₂和0.5mM MgCl₂(pH 7.4)所组成。在该预培养结束时，除去培养基并向顶端隔室中加入位于缓冲液中的试验化合物溶液(10μM)。在1小时时，将这些内插物移动到包含新鲜的底外侧缓冲液的孔中。通过LC/MS分析来测量所述缓冲液中的药物浓度。

通量率(F，质量/时间)是由接收器侧上底物的累积表观斜率来进行计算的，表观渗透系数(P_app)是由下面的方程来进行计算的。

P_app(cm/sec)＝(F*VD)/(SA*MD)

其中SA是运输工具(transport)的表面积(0.3cm²)，VD是供体体积(0.3ml)，MD是在t＝0时供体侧药物的总量。所有的数据都表示2个内插物的均值。通过荧光黄转运(Lucifer Yellow transport)来测定单层完整性。

人肝微粒体中的半衰期(HLM)

将实验化合物(1μM)与3.3mM MgCl₂和0.78mg/mL HLM(HL101)在100mM磷酸钾缓冲液(pH7.4)中一起在37℃下在96-深孔板中进行培养。将这些反应混合物分成两组--非-P450和P450组。仅向P450组的反应混合物中加入NADPH。在第0、10、30和60分钟的时间点收集P450组样品的等分试样，其中0分钟的时间点表示当向P450组的反应混合物中加入NADPH时的时间。在-10和60分钟的时间点收集非-P450组样品的等分试样。将所收集的等分试样用包含内标的乙腈溶液进行萃取。在离心下(2000rpm，15分钟)使沉淀出来的蛋白下旋。用LC/MS/MS系统来测量上清液中的化合物浓度。

通过用化合物/内标峰面积比的自然对数对时间作图来获得半衰期值。通过这点进行的最佳拟合线的斜率得到了代谢速率(k)。用下面的方程将其转化成半衰期值：

半衰期＝1n 2/k

五个主要CYPs(fDDI)的体外药物-药物相互作用

CYP1A2将实验化合物(3μM)与重组CYP1A2(Baculosomelot#21198 Invitrogen，50pmol P450/ml)一起在100mM磷酸K⁺缓冲液(pH7.4)和10μM作为底物的Vivid blue 1A2探针(Invitrogen)一起在30℃下培养5分钟。通过加入温热的NADPH-重建系统A的溶液(其由0.50mM NADP和10mM MgCl₂、6.2mM DL-异柠檬酸和0.5U/ml异柠檬酸脱氢酶(ICD)所组成)来开始该反应。将这些板在30℃下放置在板式读数器中并每隔1.5分钟进行读数，在每次读数之间振摇10秒，进行15个周期。继发/发射波长分别为408/465nm。

CYP2C9 将实验化合物(3μM)与重组CYP2C9(Baculosomelot#20967 Invitrogen，50pmol P450/ml)一起在100mM磷酸K⁺缓冲液(pH7.4)和30μM作为底物的MFC探针(Gentest)一起在37℃下培养5分钟。通过加入温热的NADPH-重建系统A的溶液来开始该反应。将这些板在37℃下放置在板式读数器中并每隔2.0分钟进行读数，在每次读数之间振摇10秒，进行15个周期。继发/发射波长分别为408/535nm。

CYP2C19 将实验化合物(3μM)与重组CYP2C19(Baculosomelot#20795 Invitrogen，5pmol P450/ml)一起在100mM磷酸K⁺缓冲液(pH 7.4)和10μM作为底物的Vivid blue 2C19探针(Invitrogen)一起在37℃下培养5分钟。通过加入温热的NADPH-重建系统A的溶液来开始该反应。将这些板在37℃下放置在板式读数器中并每隔1.5分钟进行读数，在每次读数之间振摇10秒，进行15个周期。继发/发射波长分别为408/465nm。

CYP2D6将实验化合物(3μM)与重组CYP2D6(Baculosomelot#21248 Invitrogen，20pmol P450/ml)一起在100mM磷酸K⁺缓冲液(pH 7.4)和1μM3-[2-(N，N-二乙基-N-甲基铵)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)探针(Gentest)一起在37℃下培养5分钟。通过加入温热的NADPH-重建系统B(其由0.03mMNADP和10mM MgCl₂、6.2mM DL-异柠檬酸和0.5U/ml ICD所组成)的溶液来开始该反应。将这些板在37℃下放置在板式读数器中并每隔2.0分钟进行读数，在每次读数之间振摇10秒，进行15个周期。继发/发射波长分别为400/465nm。

CYP3A4将实验化合物(3μM)与重组CYP 3A4(Baculosomelot#20814 Invitrogen，5pmol P450/ml)一起在100mM磷酸K⁺缓冲液(pH 7.4)和10μM作为底物的Vivid Red探针(Invitrogen)一起在30℃下培养5分钟。通过加入温热的NADPH-重建系统A的溶液来开始该反应。将这些板在30℃下放置在板式读数器中并用最小的时间间隔进行读数，在每次读数之间振摇10秒，进行15个周期。继发/发射波长分别为530/595nm。

药物-药物相互作用是通过由线性区域的斜率(时间vs荧光单位)计算的代谢物形成速率或者通过由下式计算的测试化合物抑制百分比来评估的。

抑制％＝{(v_o-v_i)/v_o)*100，其中v_o是对照反应(无实验化合物)的速率和v_i是存在试验化合物情况下的反应速率。

I_HERG实验

制备人ether a-go-go related基因(HERG)转染的HEK293细胞并使其进行内部(in-house)生长。在其它地方可以找到对HEK细胞中这种通道进行稳定转染的方法(Z.Zhou等人，1998，Biophysicaljournal，74，230-241)。在实验当天，从培养物烧瓶中收获这些细胞并将其以位于标准外部溶液(其组成如下所述)中的细胞混悬液的形式存储在23℃的房间气氛中。在收获后第0.5-5小时对这些细胞进行研究。

用全细胞方式的标准膜片箝技术对HERG电流进行研究。在实验期间，用具有下面组成的标准内部溶液使这些细胞过融合(superfused)：(mM)NaCl，130；KCl，4；CaCl₂，2；MgCl₂，1；葡萄糖，10；HEPES，5；用NaOH调至pH 7.4。当用下组成的标准内部溶液进行填充时，用膜片箝放大器和3MOhm的电阻的膜片移液管(patch pipettes)来进行全细胞记录：(mM)；KCl，130；MgATP，5；MgCl₂，1；HEPES，10；HGTA5，用KOH调至pH 7.2。仅可用这些具有低于10 MOhm的接近电阻(access resistances)和高于1GOhm的封闭电阻(seal resistances)的细胞进行进一步实验。在没有任何漏电减除(leak subtraction)的情况下，系列电阻补偿(Series resistance compensation)适用于高至80％的最大值。在达到全细胞构型并且用吸移溶液将细胞透析足够的时间(＞5分钟)后，使所述膜从-80mV至+30mV的保持电位去极化1000ms，然后通过递减电压变速(descending voltage ramp)(速率为0.5mV msec^-1)使其恢复保持电位。每隔4秒，连续给这些细胞应用这种去极化和变速(ramp)(0.25Hz)。测量在变速期间-40mV周围继发的峰电流的振幅。当在外部溶液中获得所引起的该振幅变化最小的稳定电流相应时，在对单细胞多次给药的情况下，将试验化合物应用10-20分钟。还使这些细胞接触多非利特--的高剂量(5μM)，从而对不敏感的内生电流进行评估。

所有的实验都是在23+/-1℃下进行的。在计算机上联机记录所引起的膜电流，在500-1000Hz(Bessel-3dB)下过滤和在1-2KHz下取样。在最高浓度下，将检查试验化合物在外部溶液中引起的渗透性和pH变化。

计算对照条件和存在药物情况下十个这种峰电流值的算术平均值。通过用下面的公式将电流值标准化来获得各实验中I_N的降低百分比：I_N＝(I_C-I_D)/(I_C-I_dof)×100，其中I_C是对照条件下的平均电流值，I_D是存在试验化合物情况下的平均电流值和I_dof是在应用多非利特情况中的平均电流值。进行独立实验并将得自各实验的算术平均值的汇集数据作为该研究的结果。

在大鼠体内的生物利用度

使用成年Sprague-Dawley种大鼠。在实验前一至两天，通过在麻醉情况下对大鼠右侧颈静脉进行套管插入术来对所有的大鼠进行处理。该套管被外置在其颈的颈背(nape)处。在静脉内或口服给予试验化合物后，以高至24小时的时间间隔从大鼠的颈静脉取血样(0.2-0.3mL)。将这些样品冷冻直至进行分析。通过计算口服或静脉内给药后的血浆浓度曲线下面积(AUC)间的商来对生物利用度进行评估。

在狗体内的生物利用度

使用成年比格犬(Beagle dogs)。在静脉内或口服给予试验化合物后，以高至24小时从其头静脉取血样(0.2-0.5mL)。将这些样品冷冻直至进行分析。通过计算口服或静脉内给药后的血浆浓度曲线下面积(AUC)间的商来对生物利用度进行评估。

血浆蛋白结合

用使用96-孔板型设备的平衡透析法来测量实验化合物(1μM)的蛋白血浆结合。将Spectra-Por(再生纤维素膜，分子量筛截(molecular weight cut-off)为12,000-14,000，22mm×120mm)在蒸馏水种浸泡一夜，然后将其在30％乙醇中浸泡20分钟，最后，将其在透析缓冲液(Dulbecco’s磷酸盐缓冲盐溶液，pH7.4)中浸泡15分钟。使用人、Sprague-Dawley大鼠、和比格犬的冷冻血浆。装配所述透析装备并向各孔的一侧中加入150μL化合物加强的血浆和向各孔的另一侧中加入150μL透析缓冲液。在将其在37℃下在150r.p.m下培养4小时后，对血浆和缓冲液的等分试样进行取样。用300μL包含用于透析的内标标准品的乙腈对血浆和缓冲液中的化合物进行萃取。用LC/MS/MS分析来测定化合物的浓度。

用下面的方程来计算未被结合的化合物的分数：

fu＝1-{([血浆]_eq-[buffer]_eq)/([血浆]_eq)}

其中[血浆]_eq和[缓冲液]_eq分别是血浆和缓冲液中的化合物浓度。

水溶解度

用下面的方法来测定在基质(a)-(c)中的水溶解度：

将包含高于0.5mg化合物和0.5mL各介质的Whatmanmini-UniPrep室(Clifton，NJ，USA)在室温下振摇一夜(大约8小时)。在透析前，将所有的样品都用0.45μm聚偏二氟乙烯(PVDF)膜过滤到Whatman mini-UniPrep活塞中。用HPLC对滤液进行评估。

<介质>(a)pH 1.2的不含酶的模拟胃液(SGN)：将2.0g NaCl溶解于7.0mL 10M HCl中并向其中加入足够的水使其至1000mL；(b)pH6.5的磷酸盐缓冲盐水(PBS)：将6.35g KH₂PO₄、2.84g Na₂HPO₄和5.50gNaCl溶解于足够的水中至1000mL，将其pH调节至6.5；(c)将3.94mg牛磺胆酸钠(NaTC)和1.06mg1-棕榈酰基-2-油酰基-L-磷脂酰胆碱(POPC)加入到1mL PBS(pH6.5)中。

用在人肝细胞中的代谢稳定性来测定肝清除率

将试验化合物(1μM)与得自人的肝细胞一起以0.5×10⁶个细胞/ml的目标细胞密度和50μL的总体积在37℃下在95％空气/5％CO₂中静止培养。在各时间点，通过加入冰冷的乙腈(ACN)来终止培养。将样品的等分试样与10％包含用于LC/MS/MS分析的内标的ACN混合到一起。在将这些样品进行10分钟声处理后，将这些样品在2,000rpm下离心15分钟，然后将上清液转移到用于进行分析的其它板中。用LC/MS/MS系统来测量上清液中的化合物浓度。

通过用化合物/内标峰面积比例的普通对数对时间作图来获得试验化合物的消失速率。由通过这些点进行最佳拟和获得的直线的斜率得到了代谢速率(k_e)。如方程1所述的那样，这种值乘以一种包括考虑干细胞构成(hepatocellularity)、肝脏和体重的值，从而得到一种以ml/min/kg为单位的固有清除率值(CL_int)。用如方程2所示的平行的管模型(parallel tube model)由这种固有清除率值来预测肝清除率(CL_h)。用这种预测的清除率除以肝血流(Q_h)，得到提取率(E_h)(方程3)。

方程1：k_ex(g肝脏/kg体重)x(ml培养/培养中的细胞数)x(细胞/g肝脏)

方程2：CL_h＝Q_hx{1-exp(-CL_int/Q_h)}

方程3：E_h＝CL_h/Q_h

其中，“g肝脏重量/kg体重”是21，“细胞/g肝脏”是1.2×10⁸，“ml培养/培养中的细胞数”是2.0×10^-6，和Q_h是20ml/min/kg。

假定肝代谢是药物消除的主要途径，则可以用方程4来计算口服给药后的系统暴露(systemic exposure)(AUC_po)。

方程4 AUC_po＝ Dose x(1-E_h)/CL_h

用于对化合物光毒性可能进行分析的方法：

严格根据OECD Guidelines for the Testing of Chemicals432(2002)中所述的方法来测量其光毒可能。分别用氯丙嗪(CPZ)和正十二烷基硫酸钠(SDS)作为阳性和阴性对照。

将Balb/3T3，克隆31细胞(ATCC，CCL-163)以1×104个细胞/孔的密度接种到96-孔板(Nunc，167008)中。将细胞在标准条件(37℃，95％空气和5％CO2的潮湿气氛)下在培养基-DMHM(GIBCO；cat#11885-084)中培养24小时。在培养后，弃去培养基-DMEM并将这些细胞用150μl Earle’s平衡盐溶液(EBSS；Sigma，Cat#E3024)仔细进行洗涤，然后向其中加入100μl试验化合物在EBSS中的溶液或溶剂对照(包含1％二甲基亚砜或1％乙醇的EBSS)。这些板都是一式两份地进行制备的。将所有的板都在标准条件下在黑暗中培养60分钟。用所述一式两份地制备的板中的一块来测定细胞毒性(-Irr)并将其在室温下在黑暗中放置50分钟。为了测定光细胞毒性(photocytotoxicity)(+Irr)，使另一块板暴露于日光模拟器(UVA辐射：1.7mW/cm2；SOL500，Dr.Honle UV Technology，Germany)，暴露50分钟(UVA剂量＝5焦耳/cm2)。然后，将两块板中的溶液弃去并立即用150μl EBSS小心对其进行洗涤。将这些细胞再与150μl/孔DMED介质一起培养18-22小时。

在培养后，弃去培养基，将细胞用150μl EBSS仔细洗涤，然后立即将其与100μl/孔50μg/ml中性红(NR)盐酸(3-氨基-7-二甲基氨基-2-甲基吩嗪，Kanto Chemical Co.，Inc.，Japan)一起在不含血清的DMEM中在标准条件下培养3小时。在中性红混入到细胞溶酶体中后，弃去NR-DMED培养基并将细胞用150μl EBSS仔细进行洗涤。向板的各孔中精确加入150μl乙醇/醋酸/水(50∶1∶49)并通过在室温下轻轻振摇来进行10分钟萃取。然后，在540nm下，用分光光度计(Plate-reader，POLARstar OPTIMA；BMG Labtechnologies，德国)来测量该NR萃取物的吸光度(OD)。OECD提供的软件“3T3 NRUPhototox”.(2.0版，Federal Institute for Risk Assessment，德国)，用OD值来计算平均光电效应(mean photo effect)(MPE)。用对照(CPZ和SDS)的结果作为该试验的质量保证。

MPE值＜0.1被评估为“无-光毒性”；MPE值≥0.1并＜0.15被评估为“可能有光毒性”和MPE值≥0.15被评估为“光毒性”。

实施例

下面的实施例仅仅是用来进一步进行说明，其并不是要对所公开的本发明进行限制。除非在下面的实施例中特别说明，否则一般性的实验条件如下：所有的操作都是在室温或环境温度，即18-25℃下进行的；溶剂的蒸发是用旋转蒸发器在减压下用高至60℃的浴温进行的；用薄层色谱(TLC)对反应进行监测并且所给出的反应时间仅仅是为了进行说明；所给出的熔点(mp)是未矫正的(多晶型可能导致不同的熔点)；用至少一种下面的技术来保证所分离出来的所有化合物的结构和纯度：TLC(Merck硅胶60 F₂₅₄预涂的TLC板或Merck NH₂凝胶(一种胺涂布的硅胶)F_254s预涂的TLC板)、质谱、核磁共振(NMR)、红外吸收光谱(IR)或微量分析。给出收率仅仅是为了进行说明。闪柱色谱是用Biotage KP-SIL(40-63μm)、Biotage KP-NH(胺涂布的硅胶)(40-75μM)或Wako硅胶300HG(40-60μM)进行的。制备TLC是用Merck硅胶60 F₂₅₄预涂的TLC板(厚度为0.5或1.0mm)进行的。所有的质谱数据都是用ZMD^TM或ZQ^TM(Waters)和质谱仪以低分辨率质谱数据(ESI)的形式获得的。除非说明，否则NMR数据是在270MHz(JEOL JNM-LA270光谱仪)或300MHz(JEOL JNM-LA300光谱仪)下用氘化氯仿(99.8％)或二甲基亚砜(99.9％)作为溶剂，相对于作为内标的四甲基硅烷(TMS)以每百万的分数(ppm)为单位进行测定的；所用的常规缩写为：s ＝单峰，d＝双峰，m ＝多重峰，dd＝双重双峰，br.s＝宽单峰等。IR光谱是用傅里叶变换红外光谱(Shimazu FTIR-8300)进行测量的。旋光度是用JASCO DOP-370和P-1020数字偏振计(DigitalPolarimeter)(Japan Spectroscopic CO，Ltd.)进行测量的。

实施例1

8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(实施例1-1)

步骤1：8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a] 吡啶-6-甲酸异丙酯

在室温下，向8-氨基-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸异丙酯(8.00g，32.3mmol，WO 02/20523)、碘化钠(2.42g，16.2mmol)和碳酸钾(15.6g，113mmol)在丙酮(100mL)中的混悬液中加入4-氯色满(10.9g，64.6mmol，WO00/78751)在丙酮(20mL)中的溶液并将该反应混合物在回流温度下搅拌24小时。将该反应混合物用水淬熄并用二氯甲烷进行萃取(80mL×2)。将所合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并将其真空浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(用正-己烷∶乙酸乙酯＝7∶1作为洗脱剂)，得到白色固体形式的标题化合物(6.37g，52％)。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ：8.06-8.03(m，1H)，7.34-7.28(m，1H)，7.24-7.17(m，1H)，6.93-6.83(m，2H)，6.79(s，1H)，5.44(d，J＝6.61Hz，1H)，5.38-5.23(m，1H)，4.89-4.79(m，1H)，4.34-4.25(m，2H)，2.43(s，3H)，2.37(s，3H)，2.29-2.20(m，2H)，1.41(d，J＝5.87Hz，6H)ppm。

MS：380(M+H)⁺。

步骤2：8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并 [1，2-a]吡啶-6-甲酸盐酸盐

将8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸异丙酯(2.00g，5.27mmol，步骤1)、甲醇(100mL)、和2M氢氧化钠溶液(14.2mL)的混合物在60℃下搅拌5小时。将该反应混合物冷却并向该混合物中加入水(50mL)。通过加入2M盐酸而将其pH调节至pH＝3。将该混合物用二氯甲烷∶醇＝10∶1(50mL×2)和乙酸乙酯(30mL)进行萃取。将所合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将其真空蒸发，得到白色固体形式的标题化合物(1.70g，86％)。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.33(s，1H)，7.28-7.20(m，3H)，7.05-6.94(m，1H)，6.92-6.84(m，2H)，5.10-4.99(m，1H)，4.36-4.20(m，2H)，2.51(s，3H)，2.41(s，3H)，2.17-2.00(m，2H)ppm。(-CO₂H和HCl盐未观察到)

MS：338(M+H)⁺，336(M-H)^-

步骤3：8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺

在0℃下，向进行着搅拌的8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸盐酸盐(1.00g，2.68mmol，步骤2)和盐酸二甲胺(362mg，4.44mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(852mg，4.44mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(HOBt)(680mg，4.44mmol)和三乙胺(1.64mL)。在将其在室温下搅拌一夜后，将该反应混合物用水淬熄(50mL)。将该混合物用二氯甲烷萃取(50mL×2)并将所合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将其真空蒸发。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化，用乙酸乙酯进行洗脱，得到白色固体形式的标题化合物(992mg，92％)。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ7.44(d，J＝1.32Hz，1H)，7.34-7.14(m，2H)，6.91-6.84(m，2H)，6.21(s，1H)，5.48(d，J＝6.59Hz，1H)，4.78-4.72(m，1H)，4.34-4.22(m，2H)，3.11(s，6H)，2.36(s，6H)，2.32-2.11(m，2H)ppm。

MS：365(M+H)⁺。

级分-1(400mg)和级分-2(418mg)是通过如下的HPLC由外消旋的8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(992mg)制得的。

拆分条件

柱：CHIRALPAK^AD-H(20mmI.D.x250mm，DAICEL)

流动相：正-己烷/乙醇/二乙胺(80/20/0.1)

流速：18.9mL/min

(-)-8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并 [1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-1)(实施例1-2)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²⁴＝-13.0°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：8分钟

(+)-8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并 [1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-2)(实施例1-3)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²³＝+13.4°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：11分钟

实施例2

8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(实施例2-1)

用与制备8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(实施例1的步骤3)的方式相同的方式，由8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸盐酸盐(1.10g，2.94mmol)和2-(甲基氨基)乙醇(367mg，4.89mmol)以86％(1.11g)的收率制得标题化合物。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ：7.52(s，1H)，7.31-7.17(m，2H)，6.91-6.84(m，2H)，6.25(s，1H)，5.51(d，J＝6.97，1H)，4.79-4.73(m，1H)，4.30-4.26(m，2H)，4.01-3.82(m，2H)，3.79-3.60(m，2H)，3.14(s，3H)，2.36(s，6H)，2.29-2.17(m，2H)ppm。(-OH未观察到)

MS：395(M+H)⁺。

级分-1(511mg)和级分-2(532mg)是用如下的HPLC由外消旋的8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(1.11g)制得的。

拆分条件

柱：CHIRALPAK^AD-H(20mm I.D.x 250mm，DAICEL)

流动相：正-己烷/乙醇/二乙胺(85/15/0.1)

流速：18.9mL/min

(-)-8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3- 三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-1)(实施例2-2)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²³＝-13.6°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：10分钟

(+)-8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3- 三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-2)(实施例2-3)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²³＝+15.0°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：13分钟

实施例3

8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并 [1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(实施例3-1)

步骤1：4-氯-3，4-二氢-1H-异色烯

将亚硫酰氯(14.3mL，196mmol)在乙醚(20mL)中的溶液加入到3，4-二氢-1H-异色烯-4-醇(5.89g，39.2mmol，WO04/024081)和吡啶(1.0mL)在乙醚(100mL)中的混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。在将该混合物真空蒸发后，将残余物倾倒到冰里并将该混合物用乙醚进行萃取(50mL×2)。将所合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并将其真空浓缩，得到黄色油状物形式的标题化合物(6.55g，99％)。

¹H NMR(270MHz，CDCl₃)δ：7.60-7.40(m，1H)，7.40-7.20(m，2H)，7.10-6.90(m，1H)，5.18-5.08(m，1H)，4.95-4.72(m，2H)，4.35-4.10(m，2H)ppm。

步骤2：8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基味唑并 [1，2-a]吡啶-6-甲酸异丙酯

在70℃下，向8-氨基-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸异丙酯(6.40g，25.9mmol，WO02/20523)、碘化钠(1.95g，13.0mol)和碳酸钾(7.16g，51.8mmol)在2-丙醇(50mL)中的混悬液中滴加4-氯-3，4-二氢-1H-异色烯(4.37g，25.9mmol，步骤1)在2-丙醇(3.0mL)中的溶液并将该反应混合物在70℃下搅拌过夜。向该混合物中加入4-氯-3，4-二氢-1H-异色烯(2.19g，13.0mmol)在2-丙醇(1.0mL)中的溶液并将该反应混合物在70℃下搅拌2 4小时。在将其冷却至室温后，将该混合物真空蒸发。将残余物用水进行处理并用二氯甲烷(50mL×2)进行萃取。将所合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并将其真空浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(用正-己烷∶乙酸乙酯＝7∶1至3∶1作为洗脱剂)，得到黄色固体形式的标题化合物(2.04g，21％)。

¹H NMR(270MHz，CDCl₃)δ：8.04(s，1H)，7.49-7.41(m，1H)，7.32-7.16(m，2H)，7.07-7.00(m，1H)，6.80(s，1H)，5.47(d，J＝9.40Hz，1H)，5.36-5.21(m，1H)，4.96-4.70(m，3H)，4.17-3.97(m，2H)，2.42(s，3H)，2.36(s，3H)，1.40(d，J＝6.61Hz，6H)ppm。

MS：380(M+H)⁺。

步骤3：8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并 [1，2-a]吡啶-6-甲酸盐酸盐

标题化合物是用与8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸盐酸盐(实施例1的步骤2)的制备方式相似的方式由8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸异丙酯(2.04g，5.38mmol，步骤2)以定量的收率(2.05g)制得的。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ：8.19(s，1H)，7.42-7.08(m，4H)，6.97(br.s，1H)，6.15-5.89(m，1H)，5.04-4.89(m，1H)，4.89-4.57(m，2H)，4.06-3.89(m，2H)，2.43(s，3H)，2.31(s，3H)ppm。(-CO₂H和HCl未观察到)

步骤4：8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺

标题化合物是用与8-(3，4-二氢-2H-色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(实施例1的步骤3)的制备方式相似的方式由8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸盐酸盐(80mg，0.22mmol，步骤3)和盐酸二甲胺(65mg，0.36mmol)以59％的收率(46mg)制得的。

¹H NMR(270MHz，DMSO-d₆)δ：7.61(s，1H)，7.43-7.03(m，4H)，6.40(s，1H)，5.69(d，J＝9.99Hz，1H)，5.07-4.88(m，1H)，4.88-4.61(m，2H)，4.09-3.83(m，2H)，2.98(s，6H)，2.34(s，3H)，2.24(s，3H)ppm。

MS：365(M+H)⁺。

级分-1(6.4mg)和级分-2(9.3mg)是用如下的HPLC由外消旋的8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(21mg)制得的。

拆分条件

柱：CHIRALPAK^AD-H(20mm I.D.x250mm，DAICEL)

流动相：正-己烷/乙醇/二乙胺(85/15/0.1)

流速：18.9mL/min

(-)-8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-1)(实施例3-2)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²⁴＝-19.4°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：14分钟

(+)-8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N，N，2，3-四甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-2)(实施例3-3)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²⁴＝+20.4°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：19分钟

实施例4

8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(实施例4-1)

将8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸异丙酯(270mg，0.71mmol，实施例3的步骤2)、2-(甲基氨基)乙醇(530mg，7.1mmol)和氰化钠(2.0mg，0.04mmol)的混合物在四氢呋喃(2.0mL)中回流1 4小时。在将其冷却至室温后，将溶剂真空蒸发。将残余物用NH凝胶柱色谱进行纯化(用二氯甲烷至二氯甲烷∶甲醇＝40∶1作为洗脱剂)，得到白色固体形式的标题化合物(100mg，37％)。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ：7.55-7.49(m，1H)，7.44(d，J＝6.60Hz，1H)，7.34-7.16(m，3H)，7.04(d，J＝ 6.60Hz，1H)，6.28(br.s，1H)，5.65-5.42(m，1H)，4.94-4.69(m，3H)，4.10-4.01(m，2H)，3.97-3.82(m，2H)，3.80-3.61(m，2H)，3.14(s，3H)，2.36(s，6H)ppm。

MS：395(M+H)⁺。

级分-1(22mg)和级分-2(20mg)是用如下HPLC由外消旋的8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(63mg)制得的。

拆分条件

柱：CHIRALPAK^AD-H(20mm I.D.x 250mm，DAICEL)

流动相：正-己烷/乙醇/二乙胺(80/20/0.1)

流速：18.9mL/min

(-)-8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-1)(实施例 4-2)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²³＝-39.8°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：11分钟

(+)-8-(3，4-二氢-1H-异色烯-4-基氨基)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-2)(实施例 4-3)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²⁴＝+40.8°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：12分钟

实施例5

N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4- 基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(实施例5-1)

步骤1：4-氯-5-甲基色满

将亚硫酰氯(6.0mL，83mmol)在乙醚(6mL)中的溶液加入到5-甲基色满-4-醇(2.7g，17mmol，Tetrahedron Asym，1997，8，3059.)和吡啶(0.4mL)在乙醚(30mL)中的混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌8小时。在将该混合物真空蒸发后，将残余物倾倒到冰里并将该混合物用乙酸乙酯(50mL×2)进行萃取。将所合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并将其真空浓缩，得到黄色油状物形式的标题化合物(3.2g，定量的收率)。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ：7.21-7.04(m，1H)，6.86-6.62(m，2H)，5.36-5.17(m，1H)，4.59-4.43(m，1H)，4.43-4.30(m，1H)，2.41(s，3H)，2.57-2.24(m，2H)ppm。

步骤2：2，3-二甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基] 咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸甲酯

将4-氯-5-甲基色满(3.2g，16mmol，步骤1)、8-氨基-2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸甲酯(2.4g，11mmol，WO02/020523)、碘化钠(0.83g，5.5mol)和碳酸钾(5.3g，38mmol)在丙酮(100mL)中的混合物在回流下搅拌2天。在将其冷却至室温后，将该混合物用水淬熄(50mL)并用二氯甲烷进行萃取(100mL×2)。将所合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并将其真空浓缩。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(正-己烷∶乙酸乙酯＝5∶1作为洗脱剂)，得到白色固体形式的标题化合物(3.0g，74％)。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ：8.09(s，1H)，7.18-7.06(m，1H)，6.83-6.68(m，3H)，5.36-5.25(m，1H)，4.79-4.68(m，1H)，4.32-4.17(m，2H)，3.96(s，3H)，2.41(s，3H)，2.36(s，3H)，2.22(s，3H)，2.48-1.98(m，2H)ppm。

MS：366(M+H)⁺。

步骤3：2，3-二甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基] 咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸

向2，3-二甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸甲酯(3.0g，8.2mmol，步骤2)在甲醇(30mL)-四氢呋喃(15mL)中的溶液中加入2M氢氧化钠溶液(12mL)并将该反应混合物在50℃下搅拌2小时。在将其冷却至室温后，将该混合物真空蒸发。将残余物用水(10ml)进行处理并通过加入2M盐酸将其pH调节至pH＝6。通过过滤收集沉淀并用水(5mL)、丙酮(5mL)对其进行洗涤，干燥，得到白色固体形式的标题化合物(3.6g，定量的收率)。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.08(s，1H)，7.21-7.03(m，1H)，6.83-6.64(m，3H)，5.56(d，J＝7.34Hz，1H)，4.86-4.73(m，1H)，4.31-4.01(m，2H)，2.39(s，3H)，2.25(s，3H)，2.14(s，3H)，2.45-1.86(m，2H)ppm。(-CO₂H没有观察到)

MS：352(M+H)⁺。

步骤4：N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢 -2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺

在0℃下，向进行着搅拌的2，3-二甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酸(2.7g，7.7mmol，步骤3)和2-(甲基氨基)乙醇(1.1g，15mmol)在二氯甲烷(16mL)中的混合物中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(2.9g，15mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(HOBt)(2.1g，15mmol)并将该反应混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用饱和碳酸氢钠(30mL)淬熄。将该混合物用二氯甲烷(50mL×2)进行萃取并将所合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将其真空蒸发。将残余物用硅胶柱色谱进行纯化(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1作为洗脱剂)，得到白色固体形式的标题化合物(2.0g，63％)。

¹H NMR(270MHz，CDCl₃)δ：7.52(s，1H)，7.17-7.06(m，1H)，6.82-6.65(m，2H)，6.30(s，1H)，5.38(d，J＝5.93Hz，1H)，4.73-4.59(m，1H)，4.34-4.15(m，2H)，4.03-3.84(m，2H)，3.84-3.62(m，2H)，3.18(s，3H)，2.36(s，3H)，2.35(s，3H)，2.22(s，3H)，2.30-1.96(m，2H)ppm。(-OH未观察到)

MS：409(M+H)⁺。

IR(KBr)v_max：3443，1616，1557，1407，1254，1095，1056，783，748cm^-1。

级分-1(72mg)和级分-2(70mg)是用如下HPLC由外消旋的N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H-色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(180mg)制得的。

拆分条件

柱：CHIRALPAK^OD-H(20mm I.D.x 250mm，DAICEL)

流动相：正-己烷/乙醇/二乙胺(90/10/0.1)

流速：18.9mL/min

(-)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H- 色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-1)(实施例 5-2)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²⁴＝-6.2°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：11分钟

用单晶X-射线分析测得实施例5-2的化合物的绝对构型为(S)-型。

(+)-N-(2-羟基乙基)-N，2，3-三甲基-8-[(5-甲基-3，4-二氢-2H- 色烯-4-基)氨基]咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲酰胺(级分-2)(实施例5-3)

NMR：光谱数据与该外消旋产物的这些光谱数据相同

旋光度：[α]_D ²⁴＝+5.8°(c＝1.00，甲醇)

保留时间：13分钟

用单晶X-射线分析测得实施例5-3的化合物的绝对构型为(R)-型。

下面的实施例6至19是根据实施例1的步骤1-3中所述的操作来进行制备的。

¹H-NMR是用CDCl₃进行测量的。

所有的公开物(非限制性地包括本申请中所列举的所发行的专利、专利申请、和杂志文章)在这里都被各自全部引入作为参考。

虽然在上面已经参考所公开的实施方案对本发明进行了描述，但是本领域技术人员将容易地意识到所详细描述的具体实施方案仅仅是对本发明进行的说明。应当清楚的是，可以在不脱离本发明精神的情况下对其进行各种修改。

Claims

1.式(I)的化合物：

或其可药用的盐，其中：

-A-B-表示-O-CH₂-、-S-CH₂-、-CH₂-O-或-CH₂-S-；

R²表示C₁-C₆烷基；

2.如权利要求1所述的化合物或可药用的盐，其中

A-B-是-O-CH₂-、或-CH₂-O-；

R¹、R²和R³独立地是C₁-C₆烷基；

R⁴是未被取代或者被1个选自羟基和C₁-C₆烷氧基的取代基取代的C₁-C₆烷基；

R⁵是氢原子、氟原子或C₁-C₆烷基；

R⁷是氢原子、卤素原子或C₁-C₆烷基；和

R⁶和R⁸独立地是氢原子、卤素原子或C₁-C₆烷基。

3.如权利要求1所述的化合物或可药用的盐，其中

-A-B-是-CH₂-O-；

R¹、R²和R³各自是甲基；

R⁴是未被取代或者被羟基取代的C₁-C₂烷基；

R⁵和R⁷独立地是氢原子或甲基；和

R⁶和R⁸各自是氢原子。

4.如权利要求1所述的化合物，其选自：

或其可药用的盐。

5.一种包含如权利要求1至4中任意一项所述的化合物或其可药用的盐和可药用的载体的药物组合物。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其还包含其它药理学活性剂。

7.一种治疗包括人在内的哺乳动物个体酸泵抑制活性介导的情况的方法，其包括给需要该类治疗的哺乳动物使用治疗有效量如权利要求1至4中任意一项所述的化合物或其可药用的盐。

8.如权利要求7所述的方法，其中所说的情况是胃肠疾病、胃食管疾病、胃食管返流疾病(GERD)、消化性溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、NSAID-诱导的溃疡、胃炎、幽门螺旋杆菌感染、消化不良、功能性消化不良、佐-埃二氏综合征、非侵蚀性返流疾病(NERD)、内脏痛、烧心、恶心、食管炎、吞咽困难、唾液分泌过多、气道病症或哮喘。

9.如权利要求1至4中任意一项所定义的式(I)的化合物或其可药用的盐用于制备治疗由酸泵抑制活性介导的情况的药物的用途。

10.如权利要求9所述的应用，其中所述的情况是胃肠疾病、胃食管疾病、胃食管返流疾病(GERD)、消化性溃疡、胃溃疡、十二指肠溃疡、NSAID-诱导的溃疡、胃炎、幽门螺旋杆菌感染、消化不良、功能性消化不良、佐-埃二氏综合征、非侵蚀性返流疾病(NERD)、内脏痛、烧心、恶心、食管炎、吞咽困难、唾液分泌过多、气道病症或哮喘。