CN101096371A - 两种大环内酯类新化合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了两种大环内酯类新化合物及其制备方法,具有如下图所示的分子结构,其产生菌分类命名为冰城链霉菌(Streptomyces bingchengsis sp.nov)。本发明的两种新化合物的制备方法包括种子培养和液体发酵,发酵液经过滤后大孔吸附树脂吸附,洗脱,再经硅胶柱层析可得化合物。本发明的新化合物具有强的杀螨活性,同样可用以控制其他会损害植物的昆虫。
Description
技术领域
本发明属于抗生素领域,具体涉及两种大环内酯类抗生素及其制备方法。经结构鉴定,这两种新化合物的结构分别具有全新的结构式,分别命名为新化合物1和新化合物2。
背景技术
本发明的化合物具有强的杀螨活性,能杀灭,例如寄生在果树、蔬菜和花上的四爪螨属、全爪螨属和锈螨属的成螨和卵。它们对于寄生于动物身上的硬蜱科、皮刺螨科和疥螨科也有活性。它们还能杀灭:外寄生物,如寄生于动物和鸟,尤其是家畜和家禽身上的狂蝇属、绿蝇属、皮蝇属、胃蝇属,虱和蚤;家庭昆虫,如蟑螂和家蝇;以及农业和园艺地里的各种有害昆虫,如蚜虫和鳞翅目幼虫。它们也能有效杀灭土壤中的蝼属。它们也能有效杀灭以下种类的昆虫:鞘翅目,同翅目,异翅目,双翅目,缨翅目,直翅目,虱目,蚤目,食毛目,缨尾目,等翅目,膜翅目等。
本发明的化合物同样可用以控制其他会损害植物的昆虫,尤其通过吃植物而使之损害的昆虫。这些化合物可用以保护观赏植物和生产性植物,尤其棉花(如杀灭烟芽夜蛾),以及蔬菜作物(如杀灭马铃薯甲虫和桃蚜)和水稻作物(如杀灭二化螟和稻虱)。
发明内容
本发明的目的是提供二种大环内酯类抗生素,它具有新的分子结构,而且对螨虫和其他损害植物的昆虫具有很高的抑制活性。
本发明的另一个目的是提供二种大环内酯抗生素的制备方法。
本发明的技术方案如下:
二种大环内酯抗生素,命名分别为新化合物1和新化合物2,它们的分子结构如下:
R1 R2
新化合物1 CH3 OH
新化合物2 CH2CH3 OH
该抗生素的制备方法,包括下列步骤:
1.发酵
(1)发酵菌种:发酵菌种的分类命名为冰城链霉菌(Streptomyces bingchengsis sp.nov),于2006年06月12日保藏于“中国生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,其保藏登记号为:CGMCC NO.1734。
(2)斜面培养:采用高氏一号培养基(可溶性淀粉20g,KNO3 1g,K2HPO4 0.5g,MgSO4·7H2O0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,琼脂20g,蒸馏水1000ml,pH值7.2~7.4)于1×105Pa下灭菌30min,接菌后在28~32℃下培养4d;
(3)种子培养培养基(葡萄糖5~10g,可溶性淀粉5~10g,牛肉膏5~10g,蛋白胨10~18g,氯化钠5~8g,蒸馏水1000ml,pH值7.2),用250ml的三角瓶每瓶分装100ml,然后用1ml无菌水将斜面的冰城链霉菌孢子洗下并制成孢子悬浮液,使其浓度为1×106~1×107个/ml。每瓶加1ml孢子悬浮液,置于摇床上28~32℃培养24~36h;
(4)发酵采用液体摇瓶发酵,培养基(小米10~30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒,加入葡萄糖15~30g,碳酸钙2~15g,氯化钠5~12g,蛋白胨5~15g,pH值7.2~7.4)于1×105Pa下灭菌30min,分装于250ml三角瓶,每瓶20~100ml。接种量10%(V/V),摇床转速150~240r/min,28~32℃振荡培养4~5d。
2发酵液处理
(1)发酵液经100~200目筛网过滤后,用95%甲醇浸提;
(2)将得到的浸提物进行溶剂萃取,硅胶柱层析和RP-18大孔树脂吸附后,得到二种无色的粉末状化合物。
附图说明
图1化合物1的质谱图
图2化合物1的1H NMR图
图3化合物1的13C NMR图
图4化合物1的C90 NMR图
图5化合物1的C135 NMR图
图6化合物1的H-H NMR图
图7化合物1的C-H NMR图
图8化合物2的质谱图
图9化合物2的1H NMR图
图10化合物2的13C NMR图
图11化合物2的C90 NMR图
图12化合物2的C135 NMR图
图13化合物2的H-H NMR图谱
图14化合物2的C-H NMR图谱
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明作详细说明。
实施例1:化合物制备
1发酵
(1)种子培养培养基(葡萄糖8g,可溶性淀粉8g,牛肉膏6g,蛋白胨15g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml,pH值7.2),用250ml的三角瓶每瓶分装100ml,然后用1ml无菌水将斜面的冰城链霉菌孢子洗下并制成孢子悬浮液,使其浓度为1×106~1×107个/ml,每瓶加1ml孢子悬浮液,置于摇床上30±1℃培养24h;
(2)发酵采用液体摇瓶发酵,培养基(小米10g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒,加入葡萄糖15g,碳酸钙2g,氯化钠5g,蛋白胨5g,pH值7.2)于1×105Pa下灭菌30min,分装于250ml三角瓶,每瓶50ml。接种量10%(V/V),摇床转速210r/min,30±1℃振荡培养4d。
2化合物的分离
50L发酵液经200目筛网过滤,并且用水清洗发酵液,发酵液和清洗用的水全都弃掉,用30升甲醇浸提过滤后得到的滤渣,通过减压蒸馏的方法最后将甲醇溶液浓缩到大约2升,再将浓缩液用相同体积的EtOAc浸提3次,将得到的EtOAc相减压蒸馏会产生25g油状物质。
将所得油状物上硅胶柱(粒径200~300目)进行层析,分别用石油醚∶丙酮=9∶1-3∶1两种洗脱液进行洗脱,得到了五个组分,将组分二上RP-18硅胶柱进行层析,用甲醇∶水=80∶20-93∶7二种洗脱液进行洗脱,会得到化合物1(18mg)和化合物2(50mg)。
3结构鉴定
新化合物1
物态:白色粉末
元素分析:C72.94%,H8.24%,O18.82%;
分子量:509.2273;
分子式:C31H42O6;
新化合物2
物态:白色粉末;
元素分析:C73.43%,H8.22%,O18.35%;
分子量:523.2273;
分子式:C32H43O6;
新化合物1和新化合物2的1H NMR(CDCl3,400 MHz)and 13C-NMR(CDCl3,100MHz)的数据见表1。
表1新化合物1和新化合物2的1H-and 13C NMR数据
Proton | Carbon | |||
Number | (1) | (2) | (1) | (2) |
1 | 169.0s* | 168.9s | ||
2 | 123.9s | 124.0s | ||
3 | 7.39s | 7.41s | 132.1d | 132.2d |
4 | 123.5s | 123.6s | ||
5 | 156.3s | 156.6s | ||
6 | 6.70s | 6.72s | 114.4d | 114.5d |
7 | 140.8s | 140.9s | ||
8 | 136.0s | 136.4s | ||
9 | 5.82d(11.0) | 5.81d(11.0) | 131.8d | 131.6d |
10 | 6.25dd(14.9,11.0) | 6.25dd(15.0,11.0) | 123.9d | 124.0d |
11 | 5.43dd(14.9,8.8) | 5.44dd(15.0,9.0) | 143.2d | 142.9d |
12 | 2.53m | 2.52m | 35.6d | 35.6d |
13 | 2.25m | 2.25m | 48.7t | 48.6t |
1.86br t(12.4) | 1.85br t(12.5) | |||
14 | 135.6s | 135.7s | ||
15 | 4.91br d(9.8) | 4.92br d(9.8) | 121.6d | 121.6d |
16 | 2.34m | 2.35m | 33.8t | 33.8t |
2.25m | 2.24m | |||
17 | 3.71m | 3.72m | 67.6d | 67.6d |
18 | 2.04m | 2.04m | 36.7t | 36.8t |
0.87m | 0.88m | |||
19 | 5.50m | 5.46m | 68.8d | 68.7d |
20 | 2.01m | 2.03m | 41.2t | 41.4t |
1.44br t(12.0) | 1.44br t(12.0) | |||
21 | 97.8s | 97.6s | ||
22 | 1.67m | 1.67m | 35.7t | 35.7t |
1.55m | 1.55m | |||
23 | 1.55m | 1.54m | 27.8t | 27.9t |
24 | 1.25m | 1.35m | 36.6d | 34.4d |
25 | 3.30m | 3.09m | 71.3d | 76.0d |
26 | 2.22s | 2.21s | 15.4q | 15.5q |
27 | 4.56d(10.0) | 4.54d(10.0) | 61.5t | 61.5t |
4.53d(10.0) | 4.51d(10.0) | |||
28 | 1.06d(6.6) | 1.05d(6.6) | 20.9q | 21.0q |
29 | 1.65br s | 1.65br s | 16.1q | 16.1q |
30 | 0.85d(6.4) | 0.83d(6.4) | 17.9q | 17.8q |
31 | 1.15d(6.2) | 1.70m | 19.4q | 25.8t |
1.36m | ||||
32 | 1.00t(7.5) | 10.1q |
*By DEPT sequence
4抗菌活性测定
对植物有致命性的螨类的触杀作用:OP-敏感的棉红蜘蛛。
在试验开始前16小时,用一片长满了棉红蜘蛛的叶片放在菜豆植株上,使菜豆植株感染上红蜘蛛后,再将叶子移走,在侵染的植株上就会出现有各种龄期和虫态的红蜘蛛,于是用含有试验化合物0.4ppm或1.6ppm的溶液喷雾至有药液滴下为止。室温的温度大约是25摄氏度。
七天后,在立体显微镜下统计活动期(成虫和若虫)和卵的为分率。新化合物1和2在0.4ppm时能使红蜘蛛全部杀死。
Claims (3)
2、根据权利要求1所述抗生素的制备方法,其特征在于包括下列步骤:
(1)发酵菌株:发酵菌种的分类命名为冰城链霉菌(Streptomyces bingchengsis sp.nov),于2006年06月12日保藏于“中国生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,其保藏登记号为:CGMCC NO.1734。
(2)斜面培养:采用高氏一号培养基(可溶性淀粉20g,KNO3 1g,K2HPO4 0.5g,MgSO4·7H2O0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,琼脂20g,蒸馏水1000ml,pH值7.2~7.4)于1×105Pa下灭菌30min,接菌后在28~32℃下培养4d;
(3)种子培养:培养基(葡萄糖5~10g,可溶性淀粉5~10g,牛肉膏5~10g,蛋白胨10~18g,氯化钠5~8g,蒸馏水1000ml,pH值7.2),用250ml的三角瓶每瓶分装100ml,然后用1ml无菌水将斜面的冰城链霉菌孢子洗下并制成孢子悬浮液,使其浓度为1×106~1×107个/ml,每瓶加1ml孢子悬浮液,置于摇床上28~32℃培养24~36h;
(4)发酵:采用液体摇瓶发酵,培养基(小米10~30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒,加入葡萄糖15~30g,碳酸钙2~15g,氯化钠5~12g,蛋白胨5~15g,pH值7.2~7.4)于1×105Pa下灭菌30min,分装于250ml三角瓶,每瓶20~100ml;接种量10%(V/V),摇床转速150~240r/min,28~32℃振荡培养4~5d;
(5)发酵液处理:50L发酵液经200目筛网过滤,并且用水清洗发酵液,发酵液和清洗用的水全都弃掉,用30升甲醇浸提过滤后得到的滤渣,通过减压蒸馏的方法最后将甲醇溶液浓缩到大约2升,再将浓缩液用相同体积的EtOAc浸提3次,将得到的EtOAc相减压蒸馏会产生25g油状物质。
将所得油状物上硅胶柱(粒径200~300目)进行层析,分别用石油醚∶丙酮=9∶1-3∶1两种洗脱液进行洗脱,得到了五个组分,将组分二上RP-18硅胶柱进行层析,用甲醇∶水=80∶20-93∶7二种洗脱液进行洗脱,会得到化合物1(18mg)和化合物2(50mg)。得到权利要求1的化合物的纯品。
3、根据权利要求1所述抗生素用于农业病虫害防治技术领域的用途。
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CNA2006100102458A CN101096371A (zh) | 2006-06-30 | 2006-06-30 | 两种大环内酯类新化合物及其制备方法 |
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---|---|---|---|---|
CN102088848A (zh) * | 2008-05-09 | 2011-06-08 | 安纳特医药股份有限公司 | 6,11-双环类的9-羟基衍生物的抗菌活性 |
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2006
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN102088848A (zh) * | 2008-05-09 | 2011-06-08 | 安纳特医药股份有限公司 | 6,11-双环类的9-羟基衍生物的抗菌活性 |
CN102088848B (zh) * | 2008-05-09 | 2014-07-30 | 安纳特医药股份有限公司 | 6,11-双环类的9-羟基衍生物的抗菌活性 |
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