CN101095746B - 一种治疗感冒的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗感冒的药物组合物，它是含有以黄芪10-50份、升麻2-15份、自术2-24份、广藿香2-20份、板蓝根5-40份、苍术2-20份、鱼腥草5-50份原生药材或炮制品或提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。本发明还提供了该药物组合物的制备方法，方法简单，易操作。本发明药物组合物具有解热、抗炎、祛痰、止咳、提高免疫功能、抗病毒作用，治疗气虚风热型感冒疗效显著，还可预防SARS，为临床用药提供了一种新的选择。

Description

一种治疗感冒的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种治疗感冒的药物组合物，具体地说，它是由中药材为原料制备而得的药剂，属于医药领域。

背景技术

气虚风热感冒属于成人病毒性上呼吸道感染(中医理论中风寒、风热、虚、实感冒均属于病毒性感冒，气虚风热感冒是病毒性感冒的一种)，全年均可发病，以冬、春季节更为多见，属于临床多发病、常见病。我国每年有75％的人至少患一次感冒，即每年有10亿人至少需用一次感冒药物(包括气虚者)，可见发病的广泛性。但目前治疗感冒所用的西药基本上是对症治疗，主要有抗菌药物、抗组胺药物、解热镇痛药、镇咳药、拟肾上腺素药，市场上的抗感冒西药多是以上几类药物的复方制剂，一般为解热镇痛加抗组胺药，或解热镇痛加止咳药、粘膜血管收缩剂等，如康泰克缓释胶囊、白加黑抗感冒片、必克胶囊、圣济感冒灵、丽珠感乐片等，能缓解一些感冒症状。

传统中医药治疗风热感冒，采用清凉退热、清热解毒的方式，如银翘解毒丸(片)、羚翘解毒丸、桑菊感冒片、板兰根冲剂、抗病毒冲剂等等。如发热较重、咽喉肿痛明显，可以配服双黄连口服液(冲剂)、清热解毒口服液。在中医临床应用中，传统的治疗方法无论针对风寒感冒还是风热感冒均采用发散风寒、风热的方法，不会使用补益药，如黄芪等，因为此时使用补益药可能“闭门留寇”。因此，针对气虚风热型感冒，目前尚无有效的治疗方法。另外，朱丹溪玉屏风散是主要用于预防感冒的经典方，组方为防风、黄芪、白术，三者重量配比为1∶2∶2，主要功效为：益气固表止汗，主治表虚自汗。方中黄芪内可大补脾肺之气，外可固表止汗，为君药；白术健脾益气，助黄芪以加强固表之力，为臣药；黄芪、白术合用，使气旺表实，则汗不外泄，邪亦不易内侵。佐以防风走表而祛风邪，合黄芪、白术则扶正为主，兼以祛邪。玉屏风散配伍特点在于：以补气固表为主，配伍小量祛风解表之品，使补中寓散。其中黄芪得防风，则固表而不留邪；防风得黄芪，则祛邪而不伤正，两者相畏而相使。对于表虚自汗，或体虚易于感冒者，用之有益气固表，扶正祛邪之功。【出自《方剂学》P118～119，上海科学技术出版社1995年6月第1版、2001年7月第9次印刷】。目前尚未见集补气益卫祛邪，清热解毒为一体的中药复方制剂治疗气虚风热型感冒。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种同时具有补气益卫祛邪，清热解毒功效的治疗感冒的药物组合物。本发明还提供该药物组合物的制备方法和用途。

本发明提供了一种治疗感冒的药物组合物，它是含有下述重量配比的原料制备而成的药剂：

黄芪10-50份、升麻2-15份、白术2-24份、广藿香2-20份、板蓝根5-40份、苍术2-20份、鱼腥草5-50份。

进一步优选，它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

黄芪10-50份、升麻2-15份、白术2-24份、广藿香2-20份、板蓝根5-40份、苍术2-20份、鱼腥草5-50份。

再进一步优选，它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

黄芪30份、升麻6份、白术10份、广藿香10份、板蓝根15份、苍术10份、鱼腥草15份。

本发明治疗感冒的药物组合物，它是含有以黄芪、升麻、白术、广藿香、板蓝根、苍术、鱼腥草原生药材或炮制品或提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

其中，所述的药剂是口服制剂。进一步地，所述的口服制剂是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

本发明治疗感冒的药物组合物，每单位制剂含有黄芪甲苷含量C₄₁H₆₈O₁₄不得少于2.4mg。其中每单位制剂为颗粒剂每6.5g、胶囊剂每粒、片剂每片、丸剂每10g；口服液每10ml。具体地，本发明所述每单位制剂含有黄芪甲苷的含量是指颗粒剂每6.5g含有黄芪甲苷不少于2.4mg；胶囊剂每粒含有黄芪甲苷不得少于0.8mg；片剂每片含有黄芪甲苷不得少于0.6mg；丸剂每10g含有黄芪甲苷不得少于2.4mg；口服液每10ml含有黄芪甲苷不得少于2.4mg。

本发明还提供了该药物组合物的制备方法，它包括如下步骤：

a、称取下述重量配比的原料：黄芪10-50份、升麻2-15份、白术2-24份、广藿香2-20份、板蓝根5-40份、苍术2-20份、鱼腥草5-50份；

b、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草蒸馏提取挥发油，将挥发油用环糊精包合得包合物；水液、药渣备用；

c、取原料黄芪、升麻、板蓝根与步骤b所得药渣水煎、得药液；与步骤b所得水液合并、浓缩，得清膏；

d、将步骤c所得清膏喷雾干燥，得浸膏粉，与步骤b所得包合物混合，得混合物；

e、取步骤d所得混合物，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

本发明还提供了该药物组合物在制备治疗气虚风热型感冒的药物中的用途；以及该药物组合物在制备预防SARS的药物中的用途。SARS是一种传染性非典型肺炎，是传染性强的呼吸系统疾病，世界卫生组织将传染性非典型肺炎称为严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndromes)，简称SARS。

本发明药物原料组方基于中医药理论，其中，黄芪，性味甘温，长于补脾肺之气，益卫固表，为古今治疗肺卫气虚、中土不健的要药。对此，历代医药家论述颇多，如：《医学启源》言其：“补肺气，实皮毛……善治脾胃虚弱”；《本草汇言》言其：“补肺健脾，实卫敛汗，驱风运毒之药也。”；《本草求真》言其：“入肺补气，入表实卫，为补气诸药之最，是以有耆之称。”；《本草正义》言其：“补益中土，温养脾胃，凡中气不振，脾土虚弱，清气下陷者最宜；其皮直达人之肤表肌肉，固护卫阳，充实表分，是其专长。”；本发明原料组方中黄芪即以此专长，用以针对患者肺卫不固，脾土虚弱，以扶正补气。升麻性味辛、苦而寒，具有疏散风热，解表退热，清热解毒等功效，常用以治疗感冒、温热病及咽喉肿痛诸种病证。故《神农本草经》称其：“主解百毒，辟温疫、瘴气邪气。”；《名医别录》称其：“(主)时气毒疬，头痛寒热，风肿诸毒，喉痛，口疮。”；《医学启源》谓其：“能走手阳明、太阳，能解肌肉间热，此手足产阳明伤风之药也。”；《滇南本草》渭其：“表小儿痘疹，解疮毒，咽喉肿，喘咳音哑，肺热，止齿痛，乳蛾，痄腮。”；《本草正》谓其：“其性质颇与柴胡相近……能发散阳明肌腠之风邪，透表发汗，其力颇大，唯表邪之郁遏者宜之。”本发明药物原料组方藉升麻疏风热，解热毒、利咽喉之功，以外驱邪气，内泻热毒。本发明原料组方中黄芪与升麻相伍，乃师朱丹溪玉屏风散立法组方之意。对于气虚外感之体，柯琴认为：“治风者，不患无以驱之，而患无以御之；不畏风之不去，而畏风之复来。”对此，采用益气解表，正邪兼顾之法，黄芪与防风同用，“防风能制黄芪，黄芪得防风其功愈大，乃相畏而相使也。”(李东垣语)。因彼为气虚外感风寒，故用辛温之防风，此为气虚外感风热，故选用升麻，药虽不同，而理无二致。黄芪、升麻两药同用，升麻可使邪气易出，于正气不伤；黄芪可御邪气之复来，于邪气亦无碍，故同为君药。

广藿香，性味与功用同于藿香，为辛而微温之品，功能祛风解表，化湿和中。如《本草再新》谓其：“解表散邪，利湿除风。”；《药品化义》谓其：“其气芳香，善行胃气，以此调中……有醒脾开胃之功。辛能通利九窍，若瘴岚时疫用之，不使外邪内侵，有主持正气之功。”；因其“芳香而不嫌其猛烈，温煦而不偏天燥热，能祛除阴霾湿邪，而助脾胃正气，为湿困脾阳，怠倦无力，饮食不甘，舌苔浊腻者最捷之药”(引自《本草正义》)。苍术，性味辛温，功能燥湿健脾，发汗解表，早在金元时期，李东垣便称其为“除湿发汗之要药”。《本草正》认为：“其性温散，故能发汗宽中，调胃进食”；《本草正义》认为：“苍术，气味雄厚，较白术愈猛，能彻上彻下，燥湿而宣化痰饮，芳香辟秽，胜四时不正之气，故时疫之病多用之。”广藿香与苍术性用相近，在祛风解表，化湿和中方面，相须为用。本发明原料组方中广藿香与苍术相须为用，主要用以辅助升麻，增强祛风解表之力，且与原料升麻、鱼腥草、板蓝根共同组成辛凉之剂，既不冰伏邪气，又无温燥助热之偏，对于脾气不健，水湿内停而见痰多，或苔腻之人，又可健运脾气，化湿和中，并利于黄芪之益气固表。故以广藿香、苍术二药为臣。

板蓝根，性味苦寒，长于清热解毒，清泄肺胃，利咽消肿，外感风热及温热病多个阶段均较常用。故宋初的《日华子本草》便称其“治天行热毒。”当代《临床中药学》称其：“与大青叶相似，以清热解毒为主要功效，其凉血消斑之力虽不及大青叶，但尤长于清解热毒而利咽喉，消肿痛；既入气分清热泻火，又入血分以清热凉血，与相应药物配任，可广泛用于温热病各个阶段及外感风热表证。”鱼腥草，性味辛寒，亦为长于清热解毒，清泄肺热之品，虽主要用以治疗肺痛，对于肺热咳嗽，风热感冒及温热病亦颇为常用。故《常用中草药手册》称其：“消炎解毒，利尿消肿。治上呼吸道感染，肺脓疡……。”板蓝根、鱼腥草在本发明组方中的意义有二：一是与辛散之升麻、广藿香，苍术组成辛凉解表之剂，用以外散风热之邪；二是针对风热入里郁阻肺胃门户成毒，引起咽喉红肿疼痛，咳嗽、咯痰黄稠、身热及较甚等症，用以清热解毒，清肺利咽。白术，性味甘、苦而温，功能补气，健脾，燥温，为治疗气虚湿滞之要药。故《本草通玄》称赞本品为“补脾胃之药，更无出其右者。”本发明原料组方使用白术，助黄芪增强药物补气之力。正如《中医治法与方剂》所说：“卫气是由水谷化生，欲补卫气，当先健脾，故用白术健脾气，俾脾运健则营卫生化之源不乏，生化之源不乏则卫气充矣！……黄芪有益卫固表之功，可固表卫之虚，可补卫气之损，与白术同用，有相辅相成之妙。”故板蓝根、鱼腥草、白术三药均辅助君药、臣药，为佐使药。

本发明药物组合物由黄芪、升麻、苍术、广藿香、白术、鱼腥草、板蓝根七味药组成，补气益卫与发散风热并重，辛温发散与苦寒清泄合方，宜于治疗气虚风热型感冒，患者患病后气虚体虚免疫下降，通过补气益卫(增强免疫)而逼邪外出，既没有以往使用补益药会产生的“闭门留寇”，同时又清热解毒(抗病毒)达到治疗气虚型风热感冒的目的。组合物原料中黄芪、升麻同为君药，广藿香、苍术为臣药，白术、板蓝根、鱼腥草为佐使药，君臣佐使、药味的用法、用量、针对的具体适应症与玉屏风散完全不同，是集补气益卫祛邪，清热解毒为一体的中药复方制剂。

本发明药物组合物依据中医理论的治法治则和临床需要，采用益气解表、清热解毒兼化湿去浊的治疗法则治疗风热感冒。根据药理药效试验表明本发明药物具有解热、抗炎、祛痰、止咳、提高免疫功能、抗病毒等作用，尤其治疗气虚风热型感冒效果明显，同时预防SARS也有一定效果。本发明药物组合物质量稳定、安全、可控，疗效显著，为临床治疗风热型感冒提供了一种新的选择。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想的前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换和变更，如在本发明组合物的基础上，还可以根据临床具体病症加减部分药味、加减药味用量来适应临床需求，如感冒兼有咽喉疼痛者加红姑娘，兼有咳嗽者加桔梗。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明要求保护的范围。

具体实施方式

实施例1本发明口服液的制备

A、黄芪510g、升麻102g、白术102g、苍术510g、广藿香1020g、鱼腥草765g、板蓝根2040g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过；

D、药液与提挥发油后的水提液合并，加入增溶剂吐温-80适量；

E、加入挥发油搅匀，即得口服液。

实施例2本发明颗粒剂的制备

A、黄芪1530g、升麻306g、白术510g、苍术510g、广藿香765g、鱼腥草765g、板蓝根765g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，即得1000g颗粒。

实施例3本发明片剂的制备

A、黄芪2550g、升麻102g、白术306g、苍术102g、广藿香816g、鱼腥草255g、板蓝根765g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，压片，即得。

实施例4本发明丸剂的制备

A、黄芪2040g、升麻765g、白术714g、苍术1020g、广藿香204g、鱼腥草510g、板蓝根255g；

B、取以上七味，按丸剂制备方法制成丸剂。

在本发明组合物的基础上，还可以根据临床具体病症加减部分药味、加减药味用量来适应临床需求。如感冒兼有咽喉疼痛者加红姑娘，兼有咳嗽者加桔梗。

实施例5本发明胶囊剂的制备

A、黄芪510g、升麻102g、白术102g、苍术510g、广藿香1020g、鱼腥草765g、板蓝根2040g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，装入胶囊，即得。

实施例6本发明颗粒剂的制备

A、黄芪765g、升麻306g、白术255g、苍术510g、广藿香765g、鱼腥草510g、板蓝根765g、红姑娘510g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根、红姑娘药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，即得1000g颗粒。

实施例7本发明颗粒剂的制备

A、黄芪1530g、升麻204g、白术510g、苍术255g、广藿香510g、鱼腥草510g、板蓝根765g、桔梗510g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根、桔梗药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，即得1000g颗粒。

实施例8本发明颗粒剂的制备

A、黄芪1020g、升麻204g、白术204g、苍术204g、广藿香510g、鱼腥草204g、板蓝根510g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提取挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，即得1000g颗粒。

实施例9本发明胶囊剂的制备

A、黄芪500g、升麻150g、白术240g、苍术200g、广藿香400g、鱼腥草400g、板蓝根500g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提取挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，装入胶囊，即得。

实施例10本发明颗粒剂的制备

A、黄芪1530g、升麻306g、白术510g、苍术510g、广藿香765g、鱼腥草510g、板蓝根765g；

B、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草，加水提取挥发油，挥发油包合备用；

C、黄芪、升麻、板蓝根药材和白术等提挥发油后的药渣加水煎煮，滤过，药液与提取挥发油后的水提液合并，除杂、浓缩、干燥、制粒，即得1000g颗粒。

实施例11本发明组合物黄芪甲苷的测定

1.仪器与试药

1.1Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪，500-ELSD蒸发光散射检测器，SAGE色谱工作站，AE-240电子天平，SK250H超声波清洗机器(功率250W，频率50kHz)。

1.2黄芪甲苷对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号为0781-2002101)、乙腈为色谱纯、水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

1.3本发明颗粒剂(由实施例10制备)样品批号为：030801、030802、030803。

2.方法和结果

2.1对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

2.2ELSD条件的优化(以信噪比S/N为指标)：

a.色谱条件：色谱柱为色谱柱为Shim-pack VP-ODS(150×4.6mm，5μm)；乙腈-水(32∶68)为流动相；流速为1.0ml/分钟；柱温为35℃。

b.对照品溶液的浓度：0.09mg/ml

载气流量为2.9SLPM/分钟时，信噪比为8.0，最低检测限为0.63μg。

2.3液相色谱条件

Shim-pack C18-ODS(4.6×150mm，5μm)色谱柱，乙腈-水(32∶68)为流动相。

2.4本发明颗粒剂溶液的制备取供试品(批号：030801)适量，研细，精密称取5g，加入甲醇100ml，超声处理45分钟，滤过，用甲醇50ml分次洗涤滤纸和容器，合并滤液与洗液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇强烈振摇提取4次(30、30、20、20ml)，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

2.5阴性试验

按本发明颗粒剂制备方法，去组方中黄芪，制成缺黄芪的阴性样品，按本发明颗粒剂溶液的制备方法制成阴性供试品溶液。取对照品、供试品及阴性供试品溶液，在同一条件下测定，结果阴性样品在黄芪甲苷峰处无干扰。表明正文的含量测定方法具有较好的专属性。

2.6黄芪甲苷含量测定及含量限度确定

取三批产品(批号：030801，030802，030803)，按含量测定方法测定，结果见表1：

表1本发明颗粒剂中黄芪甲苷含量测定结果

由表1可见，三批产品黄芪甲苷含量平均值为0.46mg/g，每袋装6.5g，暂定颗粒剂每6.5g含黄芪甲苷不得少于2.4mg。

通过对颗粒剂的质量控制，可限定其它同类口服制剂，如胶囊剂每粒含有黄芪甲苷不得少于0.8mg；片剂每片含有黄芪甲苷不得少于0.6mg；丸剂每10g含有黄芪甲苷不得少于2.4mg；口服液每10ml含有黄芪甲苷不得少于2.4mg。

以下通过药效试验说明本发明的有益效果。

试验例1药效试验

1.1药物

本发明颗粒剂实验用其浸膏(按照实施例10取原料制备而得)：，1g浸膏相当于原生药3g，由四川省中医药研究院提供，批号20030806。

注射用环磷酰胺：(1995)泸卫药准字第012034号。规格：200mg×5瓶，上海华联制药有限公司生产，批号010109。

甘露聚糖肽片(多抗甲素片)：国药准字×F20000525。规格5mg×48片/盒，成都利尔药业有限公司生产，批号021002。

阿司匹林片：苏卫药准字(1996)第391011号。规格25mg×100片/瓶，江苏盐城制药有限公司生产，批号20010401。

病毒唑：苏卫药准字(1990)第347005号。规格100mg/ml，江苏省江阴制药厂生产，批号970418。

青霉素G：规格80万单位/瓶，哈尔滨制药总厂生产，批号B0202004。

注射用更昔洛韦：湖北科益药业股份有限公司提供，批号020802。

1.2实验动物及病毒株、菌株、细胞株

Km(昆明种)小鼠，一级合格，川实动质第2002-33号，由四川省中药研究所实验动物中心提供。

SD大鼠，一级合格，川实动质第2002-32号，由四川省中药研究所实验动物中心提供。

BalB/C纯种小鼠，由成都中医药大学动物中心提供。

C57BL/6J纯种小鼠，由成都中医药大学动物中心提供。

豚鼠，一级合格，川实动管第98-2号，中国医学科学院输血研究所实验动物室提供。

日本大耳白色家兔，一级合格，川实动管第98-3号，中国医学科学院输血研究所实验动物室提供。

家鸽，由四川省中药研究所实验动物中心提供。

流感病毒A3株，呼吸道合胞病毒(RSV，12Lg TCIDso)，由中国医学科学院病毒所提供。

SARS-COV-P5冠状病毒分离株，SARS-COV-P11冠状病毒分离株，由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒资源中心分离鉴定。

非洲率猴肾传代细胞(VERO E6细胞)，由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。

Hep2细胞，由中国医学科学院病毒所提供。

L929细胞，由四川大学生命科学院提供。

菌株，金黄色葡萄球菌ATCC 6538，金黄色葡萄球菌临床株，肺炎双球菌临床株，乙型链球菌ATCC 19615，乙型链球菌临床株，流感嗜血杆菌CMCC 58528均由四川省防疫站提供。

1.3主要仪器

日本岛津UV-730自动生化测定仪。日本岛津EB-3200D精密电子天平(精密度0.01g)。上海精天电子仪器有限公司JA1003A型电子天平(精度1mg)。大鼠足容积测定仪。上海手术器械厂80-2离心沉淀器。THER MO 3111二氧化碳培养箱。BIORAD 680酶标仪。体温计等。

1.4主要试剂

二甲苯：500ml/瓶，分析纯，成都化学试剂厂出品，批号20021120。

伊文思蓝：10g/瓶，Fluka进口分装，上海化学试剂采购供应站经销，批号98-11-02。

丙酮：500ml/瓶，分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号20030110。

硫化钠：500g/瓶，化学纯，成都化学试剂厂，批号980923。

吸附百日咳、白喉、破伤风联合疫苗：5ml/安瓿，10支/盒，卫制(82)蓉(4)01号，由成都生物制品研究所提供，批号20020403。

乙醚：500ml/瓶，分析纯，天津市博迪化工有限公司出品，批号20020208。

2，4-二硝基氯苯(DNCB)：25g/瓶，化学纯，上海化学试剂一厂，批号890901。

磷酸二氢钠(NaH2PO4.2H2O)：500g/瓶，分析纯，汕头市光华化学厂，批号20010811。

磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)：500g/瓶，分析纯，汕头市光华化学厂，批号20010820。

0.9％氯化钠注射液：500ml/瓶，川卫药准字(1996)第012141号，四川科伦大药厂，批号021020-14。

RPMI Medium 1640：10×1L，Gibco公司。

标准胎牛血清(Standard FBS)：50ml，由HyClone公司提供。

精致小牛血清(Defined BCS)：100ml，由HyClone公司提供。

HEPES：干粉，由HyClone公司提供。

四甲基偶氮唑盐(MTT)：1g，由sigma公司提供。

十二烷基硫酸钠(SDS)：C12H2504SNa，100g，中国医学科学院生物医学工程研究所。

刀豆蛋白(ConA)：1g，由sigma公司提供。

脂多糖(LPS)：1g，由sigma公司提供。

L-谷氨酰胺(L-Glutamine，liquid)：液体200Mm(29.2mg/ml)，0.85％NaCl，由HyClone公司提供。

青霉素，链霉素(Pen-Strep)：液体，10000单位青霉素(Base/ml)和10000μg链霉素(Base/ml)溶解于0.85％NaCl，-20℃保存，由HyClone公司提供。

2方法与结果

2.1抗病原微生物作用

2.1.1体外抑菌作用

(1)目的：选用与上呼吸道感染有关的细菌菌株进行体外抑菌试验。

(2)方法：受试药物配制：用电子天平以加重法精确称取浸膏2.00g，加无菌蒸馏水29.3ml溶解(定容为31.25ml)，浓度为64mg(384mg原生药)/ml，100℃煮沸5分钟杀死杂菌。实验时取0.5ml用无菌肉汤(肺炎双球菌和乙型链球菌用血清肉汤)作对倍稀释，使浓度系列为32、16、8、4、2、1、0.5、0.25mg/ml。

对照药的稀释：青霉素G加8.0ml蒸馏水溶解，浓度为10万单位/ml，取0.3ml加2.7ml蒸馏水稀释，浓度为1万单位/ml，取0.3ml加2.7ml蒸馏水稀释，浓度为1000单位/ml，取0.3ml加2.7ml蒸馏水稀释，浓度为100单位/ml，取1.0ml加6.8ml肉汤稀释，浓度为12.8单位/ml，然后取0.5ml用无菌肉汤作对倍稀释，浓度系列为6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025单位/ml。作为金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌和乙型链球菌抗菌活性测定时的阳性药对照。

试验菌液的制备：

试验菌按营养需求接种于普通琼脂平板或血平板，37℃培养18小时，刮取少量菌苔乳化于肉汤，比浊校正其浓度，再做10万倍稀释，使终浓度相当于104cfu/ml肉汤(肺炎双球菌和乙型链球菌用血清肉汤)。

试验方法：

MIC测定采用试管液体二倍稀释法。试验菌液每管加量0.5ml，混匀后放37℃培养，次日观察结果。加菌后，试验药及阳性对照药均相当于再稀释1倍，与菌液肉汤对照比较，抑制细菌生长的最低浓度即为MIC。

MBC测定采用平板活菌计数法。即先测出MIC，再依次将未见细菌生长的各管培养物分别吸取0.1ml按营养需求接种于平板，37℃再培养18~24小时，平板上菌落数＜5个的最低药物浓度即为最小杀菌浓度。

对照实验：同时做菌液肉汤对照和试验药空白对照。

(3)结果：(单位：mg/ml或u/ml)见下表(表2)

2.1.2体外抑制流感病毒A3株对鸡红细胞的凝集活性

(1)目的：中药治疗病毒性感冒，其抗病毒作用是一个重要环节。故选用与感冒有关的病毒菌株进行体外抗病毒试验。

(2)方法：受试药物配制：以加重法精确称取本发明颗粒剂浸膏2.00g，加无菌蒸馏水使成浓度为750mg原生药/ml的溶液，沸水浴煮沸10分钟杀死杂菌。实验时取0.5ml用无菌蒸馏水作对倍稀释，使浓度系列为375、187、93、47mg原生药/ml。

病毒株及细胞株：流感病毒A3株，呼吸道合胞病毒(RSV，12LgTCIDso)，Hep2细胞由中国医学科学院病毒所提供。

体外抗流感病毒：取增殖活化的流感病毒，作鸡红细胞血凝试验，滴定其血凝效价为1∶1280。取流感病毒0.2ml，与不同浓度的芪香益气解毒浸膏溶液0.2ml相作用1小时。再作鸡红细胞血凝试验，滴定流感病毒的血凝效价。

抗呼吸道合胞病毒：采用组织细胞半数感染量(TCIDso)的方法，根据药物对细胞病变的抑制效果，以确定本发明颗粒剂浸膏对RSV的抗病毒效果。

确定本发明颗粒剂浸膏对Hep2细胞的最低毒性浓度：在96孔细胞培养板的Hep-2单层细胞中，分别加入不同浓度的本发明颗粒剂浸膏药液，置37℃，5％C02培养箱中96h，观察细胞病变，测定其对Hep-2单层细胞的最低无毒浓度。

本发明颗粒剂浸膏对RSV病毒致Hep2细胞病变的抑制试验：在96孔Hep2单层细胞板上，加入RSV，吸附2小时后，再加入不同浓度的中药。放37℃，96小时后观察结果。

(3)结果：由表3可见，本发明颗粒剂浸膏在体外抗流感病毒A₃株的有效浓度为93mg原生药/ml，在此浓度可以抑制流感病毒A₃株对鸡红细胞的凝集活性。由表4可见，芪香益气解毒浸膏在体外对呼吸道合胞病毒无作用。

表3本发明颗粒剂体外对流感病毒A₃的药效

注：-，无红细胞凝集；+，25％细胞凝集；++，50％细胞凝集；+++，75％细胞凝集；++++，100％细胞凝集。

表4本发明颗粒剂体外对RSV的药效

注：-，无细胞病变；+，25％细胞病变；++，50％细胞病变；+++，75％细胞病变；++++，100细胞病变

2.1.3体外预防和抑制SARS冠状病毒作用

(1)目的：检测本发明颗粒剂体外预防、抑制SARS冠状病毒的效果，本实验在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒资源中心实验室完成。

(2)方法：

预备试验：

①本发明颗粒剂对VERO E6细胞的毒性测定

VERO E6细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃、5％CO₂培养24小时，加入验证药物，验证药物本发明颗粒剂药液倍比稀释为6000ug/ml-187.5ug/ml，阳性对照药物更昔洛韦倍比稀释为6000ug/ml-187.5ug/ml，每浓度接种3孔，每孔100ul，同时设正常细胞对照，37℃5％CO₂孵箱培养6天，每天在倒置显微镜下观察细胞形态变化(CPE)，以25％以下形态变化为“+”，26％-50％形态变化为“++”，51％-75％形态变化为“+++”，76％-100％形态变化为″++++″，用Reed-Muench法，计算药物半数中毒浓度(TD50)和最大无毒浓度(TD0)。

②在VERO E6细胞培养内SARS-COV-P5、SARS-COV-P11分离鉴定SARS-COV-P5、SARS-COV-P11(SARS病人急性期5号、11号血清分离)：VERO E6细胞以每毫升40万浓度接种试管，37℃5％CO₂培养24小时，弃掉培养液，每管加入SARS病人血清0.2ml，37℃转鼓培养5小时后，加入维持液1ml，同时设正常细胞对照，37℃转鼓培养5-7天。细胞出现CPE变化后，采用PCR的方法检测冠状病毒，5号、11号标本PCR呈阳性，确定为SARS冠状病毒分离株。用终末稀释法纯化病毒2次，RT-PCR检测，SARS病毒S基因测序仍为阳性，经中和试验、免疫荧光测定双份SARS病人血清，IgM阳性，IgG4倍升高，确定为冠状病毒分离株。采用病毒CPE法测定其效价。

③在VERO E6细胞培养内对SARS-COV-P5和SARS-COV-P11冠状病毒毒株的毒力测定

病毒CPE法：VERO E6细胞以每毫升40万浓度接种96孔培养板，37℃5％CO₂培养24小时，去掉培养液，分别将2株SARS病毒稀释，稀释成10-1-10-8，8个浓度，每浓度4孔，每孔100ul，设正常细胞对照，37℃5％CO₂培养5-7天，每24小时在倒置显微镜下观察记录细胞形态变化(CPE)：以25％以下“+”，26％-50％形态变化为“++”，51％-75％形态变化为“+++”，76％-100％形态变化为″++++″，用Reed-Muench法，计算病毒半数感染浓度TCID50。

正式试验

①本发明颗粒剂在VERO E6细胞培养内对SARS-COV-P5，SARS-COV-P11冠状病毒的预防作用。

VERO E6细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃5％CO₂孵箱培养24小时，细胞培养至单层，弃掉培养液，加入不同浓度的本发明颗粒剂药液，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)2倍稀释7浓度即750ug/ml-5.9ug/ml，阳性对照药物更昔洛韦为2倍稀释9个浓度即3000ug/ml-5.9ug/ml，将稀释的药液分别加入细胞孔内，每浓度3孔，置37℃5％CO2吸附24小时后，弃掉药液，分别加入100TCID50的2株SARS-冠状病毒液，每细胞孔100ul，同时设正常细胞对照和病毒对照，置37℃5％CO₂培养箱培养5-7天，逐日在倒置显微镜下观察病毒CPE，以病毒对照出现+++-++++时结束试验，用Reed-Muench法，计算药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)判断药效，试验重复三次。

②本发明颗粒剂在VERO E6细胞培养内对SARS-CO-P5、SARS-COV-P11冠状病毒的抑制作用。

VERO E6细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃5％CO₂孵箱培养24小时，细胞培养至单层，弃掉培养液，加入100TCID50的2株冠状病毒液，同时设正常细胞对照和病毒对照，置37℃5％CO₂吸附2小时后，弃掉病毒液，加入不同浓度的本发明颗粒剂药液，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)2倍稀释7浓度即750ug/ml-5.9ug/ml，阳性对照药物更昔洛韦为2倍稀释9个浓度即3000ug/ml-5.9ug/ml，将稀释好的药液分别加入细胞孔内，每浓度3孔，同时设正常细胞对照和病毒对照，置37℃5％CO2培养箱培养5-7天，逐日在倒置显微镜下观察病毒CPE，以病毒对照出现+++-++++时结束试验，用Reed-Muench法，计算药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)判断药效，试验重复三次。

(3)结果：

预备试验结果：

本发明颗粒剂对VERO E6细胞的毒性作用：本发明颗粒剂和阳性对照药物注射用更昔洛韦在VERO E6细胞培养内，采用细胞形态变化(CPE)法，计算药物最大无毒浓度(TD0)和半数中毒浓度(TD50)，以下试验结果为三次试验结果的均值。

①本发明颗粒剂对VERO E6细胞的毒性试验结果

验证药物：

本发明颗粒剂：最大无毒浓度(TD0)为750±0ug/ml，半数中毒浓度(TD50)为1500±0ug/ml。

阳性药物对照：

注射用更昔洛韦：最大无毒浓度(TD0)为3000±0ug/ml，半数中毒浓度(TD50)为6000±0ug/ml。

②在VERO E6细胞培养内对SARS-COV-P5和SARS-COV-P11冠状病毒毒株毒力测定结果

病毒CPE法：

SARS-COV-P5冠状病毒分离株：半数感染量(TCID50)为10-7

SARS-COV-P11冠状病毒分离株：半数感染量(TCID50)为10-7

正式试验结果：

①本发明颗粒剂在VERO E6细胞培养内对SARS-COV-P5冠状病毒的预防作用(以下试验数据为三次试验结果的均值)

验证药物：

本发明颗粒剂：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为187.5±0ug/ml，最小有效浓度(MIC)为94±0μg/ml，治疗指数(TI)为8。

阳性对照药物：

注射用更昔洛韦：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)46.8±0ug/ml，最小有效浓度(MIC)为23.44±0ug/ml，治疗指数(TI)128。

本发明颗粒剂在VERO E6细胞培养内对SARS-COV-P11冠状病毒的预防作用(以下试验数据为三次试验结果的均值)

验证药物：

本发明颗粒剂：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为187.5±0ug/ml，最小有效浓度(MIC)为94±0ug/ml，治疗指数(TI)为8。

阳性药物对照：

注射用更昔洛韦：CPE法，药物半数有效浓度(1C50)为46.81+0ug/ml+0，最小有效浓度(MIC)为23.44±0ug/ml1，治疗指数(TI)为128。

②本发明颗粒剂在VERO E6细胞培养内对SARS-COV-P5冠状病毒的抑制作用(以下试验数据为三次试验结果的均值)

验证药物：

本发明颗粒剂：对SARS-COV-P5冠状病毒无抑制作用。

阳性对照药物：

注射用更昔洛韦：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为93.6±0ug/ml，最小有效浓度(MIC)为46.8±0ug/ml，治疗指数(TI)为64。

本发明颗粒剂在VERO E6细胞培养内对SARS-COV-P11冠状病毒的抑制作用(以下试验数据为三次试验结果的均值)

验证药物：

本发明颗粒剂：对SARS-COV-P11冠状病毒无抑制作用。

阳性对照药物：注射用更昔洛韦：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为93.6±0ug/ml，最小有效浓度(MIC)为46.8±0ug/ml，治疗指数(TI)为64。

结论：本发明颗粒剂，在VERO E6细胞培养箱内，采用病毒CPE法，经在2株SARS-冠状病毒进行验证，实验结果表明本发明颗粒剂对SARS-冠状病毒有预防效果但抑制效果不明显。

2.2抗炎作用

病毒性感冒在发病过程中往往伴有炎症反应，大多数治疗病毒性感冒的中药都有一定的抑制炎症反应的作用。

2.2.1对小鼠二甲苯耳肿胀的影响

(1)目的：给小鼠耳壳涂抹一定浓度的二甲苯可引起诱发小鼠耳壳急性炎性水肿。该模型可观察本发明颗粒剂对炎症早期的对抗作用。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~22g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(阿司匹林)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药(对照组给蒸馏水)，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，阿司匹林浓度为2g/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，每日1次，连续3天。末次给药后1h，将二甲苯0.03ml/只均匀涂抹于小鼠右耳正反两面致炎(对照组除外)，20分钟后处死动物，沿耳廓基线剪下两耳，以两耳片重量之差作为肿胀度(mg)，并计算各组肿胀抑制率(％)。结果用t检验比较各组间肿胀度差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表5可见，本发明颗粒剂所试剂量范围内对二甲苯致小鼠急性耳肿胀有显著抑制作用，且有一定量效差异趋势，表明本发明颗粒剂对二甲苯引起的急性炎症有对抗作用。

表5本发明颗粒剂对二甲苯诱发小鼠急性耳肿胀的影响

与对照组比较(t检验或t’检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.2.2对蛋清诱发大鼠足爪肿胀的影响

(1)目的：新鲜鸡蛋清给大鼠脚趾皮下注射，引起组织胺、5-HT等炎症介质释放，导致局部毛细血管通透性亢进、渗出和水肿，鼠爪承红、热、肿、痛等早期急性炎症表现。通过测量致炎前后大鼠足周长的变化来观察本发明颗粒剂的抗炎作用。

(2)方法：SD大鼠50只，雄性，体重100-140g，按体重随机分成5组，每组10只。设阴性对照(溶剂对照)和阳性对照组(扑炎痛片)，受试药物3个剂量组(6、12、24g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的3.25、7.5、15倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为60、120、240g原生药/dl，阿司匹林浓度为2g/dl，灌胃容积1ml/100g体重(对照组给等容积蒸馏水)，每日1次，连续5天。用特制软尺测量大鼠右后足跖周长，末次给药后30min给该侧足跖腱膜下注射新鲜蛋清0.05ml致炎，分别于致炎后0.5、1、2、4、6h测量该侧足跖周长。以试验前后足跖周长之差作为肿胀度，按下式计算大鼠足肿胀率。计算各组肿胀率(％)，并作t检验，比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表6可见，本发明颗粒剂高剂量组给药后2-4小时足肿胀率有降低趋势，但统计差异不显著(p＞0.05)。

2.2.3对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响

(1)目的：选择醋酸作致炎因子，局部刺激小鼠腹腔毛细血管通透性增加。静脉注入伊文思蓝，该染料可从亢进的毛细血管内向血管外渗出，染料渗出量的多少可作为判断本发明颗粒剂是否能抑制炎症早期毛细血管通透性亢进的指标。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~21g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(醋酸地塞米松片)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，醋酸地塞米松片浓度为45mg/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，每日1次，连续5天。末次给药后1小时经小鼠尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水0.1ml/10g体重，并立即腹腔注射0.7％的醋酸生理盐水溶液0.2ml/只，20min后断颈处死，剪开腹腔，用5ml生理盐水反复冲洗腹腔，收集全部腹腔内液体于刻度试管中，3000rpm离心10min，取上清液在590nm处测定吸光度(A值)。结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表7可见，本发明颗粒剂30g原生药/kg的吸光度值显著低于对照组，表明本发明颗粒剂能对抗炎症引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加。

表7本发明颗粒剂对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响

组别	动物数(只)	剂量(g/kg×d)	吸光度值(A，±S)	抑制率(％)
					对照组	10	-	0.500±0.097	-
本发明颗粒剂	10	7.5×5	0.418±0.090*	16.4
					本发明颗粒剂	10	15×5	0.431±0.118*	13.8
本发明颗粒剂	10	30×5	0.398±0.103**	20.4
					地塞米松	10	4.5mg/kg×5	0.198±0.043***	60.4

与对照组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.3解热作用

病毒性感冒在发病时往往伴有发热，故而解热作用应是在中药治疗病毒性感冒的研究过程中不可或缺的一项药效学内容。

2.3.1对菌苗致家兔发热的影响

(1)目的：发热反应多系多种致热因子作用于机体，产生和释放内热源，继而引起丘脑下部前列腺素的合成和释放，并进一步影响体温调节中枢，使调定点提高，体温也相应升高。本实验选用吸附性白、百、破三联疫苗作为致热源制备实验性动物发热模型。

(2)方法：体重1.5-2.5kg的家兔，雌雄兼用。于实验前3日每日测体温1次，实验当日测体温2次，剔除体温波动在0.3℃以上的家兔，以5次体温的平均值为基础体温。从耳缘静脉注射吸附性白、百、破三联疫苗(0.5ml/kg)，1h后测家兔体温，选体温升高超过0.5℃的合格家兔30只随机分为5组，设正常对照和阳性对照组(阿司匹林)，受试药物3个剂量组(3、6、12g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的2.5、5、10倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药(对照组给蒸馏水)，受试药物3个浓度分别为30、60、120g原生药/dl，阿司匹林浓度为1.5g/dl，灌胃容积为1ml/100g体重，实验前禁食12h，实验当日分别给予受试药物大、中、小剂量，阳性对照组给予阿司匹林150mg/kg；空白对照组给予等体积生理盐水，药后1、2、3、4、5、6h测家兔的体温，结果用t检验两两对比。

(3)结果：由表8可见，本发明颗粒剂6、12g原生药/kg组与对照组比较，在给药后2、3h其发热程度显著降低(P＜0.05、P＜0.01)，本发明颗粒剂3g原生药/kg但作用不明显(P＞0.05)。表明本发明颗粒剂对菌苗致家兔发热有较好的对抗作用，并存在一定的量效关系。

2.3.2对酵母致大鼠发热的影响

(1)目的：酵母混悬液皮下注射于大鼠，先引起动物全身体温下降，一段时间后动物体温明显升高，并持续较长时间，局部有明显炎症，动物全身表现与临床伴内脏或皮肤有明显炎症的里热证类似。该模型可观察本发明颗粒剂的解热功效。

(2)方法：体重200-250g的SD大鼠，雌雄兼用。于实验前3日每日测体温1次，实验当日测体温2次，剔除体温波动在0.3℃以上的大鼠，以5次体温的平均值为基础体温。合格大鼠45只随机分为5组，设正常对照和阳性对照组(阿司匹林)，受试药物3个剂量组(6、12、24g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的3.25、7.5、15倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药(对照组给蒸馏水)，受试药物3个浓度分别为60、120、240g原生药/dl，阿司匹林浓度为1.5g/dl，灌胃容积为1ml/100g体重，实验前禁食12h，实验当日分别给予受试药物大、中、小剂量，阳性对照组给予阿司匹林150mg/kg；空白对照组给予等体积生理盐水，同时每只大鼠从背部皮下注射20％的酵母浓悬液1ml/100g，于药后1、2、4、6、8、10h测家兔的体温，结果用t检验两两对比。

(3)结果：由表9可见，本发明颗粒剂6、12、24g原生药/kg组与对照组比较，其发热程度显著降低(P＜0.05或0.01)。表明本发明颗粒剂对酵母致大鼠发热有较好的对抗作用，并存在一定的量效关系。

2.4免疫调节作用

中医认为流行性感冒为疫疠之邪。中药抗流感病毒的基本原理在于扶正祛邪或驱邪扶正，通过阻断病毒繁殖过程的吸附、穿入、复制、成熟中的某一环节而直接抑制病毒，并通过提高机体的免疫功能，促进机体的特异性和非特异性免疫功能而间接抑制病毒。

2.4.1对小鼠溶血素抗体生成的影响

(1)目的：鸡红细胞免疫小鼠可使其淋巴细胞产生特异性抗体，并释放到外周血。分出致敏动物的血清，与鸡红细胞一起孵育，在补体参与下，可产生溶血现象。通过测定致敏动物血清中溶血素的含量反映本发明颗粒剂对体液免疫的影响。

(2)方法：昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重18~22g，按体重随机分成6组，每组10只。设正常对照和2个阳性对照组(环磷酰胺、多抗甲素)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，多抗甲素浓度为100mg/dl，环磷酰胺浓度为200mg/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，除环磷酰胺外各组每日1次，连续7天，环磷酰胺组则为2日1次，共3天。于给药当天各鼠腹腔注射5％鸡红细胞悬液0.2ml免疫，7天后于眼眶静脉丛取血20μl，置1ml生理盐水中，加入4％鸡红细胞悬液0.5ml，10％豚鼠血清0.5ml，于37℃水中保温30min，冰浴中止反应，离心，取上清液1ml加入3ml都氏液中，于540nm处比色，读取光密度值，结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表10可见，本发明颗粒剂所试剂量范围内对小鼠溶血素抗体生成有显著的促进作用，且有一定量效差异趋势，表明本发明颗粒剂对体液免疫有一定的提高作用。

表10本发明颗粒剂对小鼠溶血素抗体生成的影响

与对照组比较(t检验或t’检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.4.2对小鼠炭粒吞噬功能的影响

(1)目的：当静脉注射特定大小的惰性炭粒后，可被机体的网状内皮系统(RES)细胞迅速吞噬而从血流中廓清。因此，可以借助测定血流中炭粒的消失速度来反映本发明颗粒剂影响机体RES吞噬异物的能力。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~21g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(人参皂甙)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，人参皂甙浓度为2g/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，每日1次，连续7天，末次给药后1h各鼠尾静脉注射印度墨汁0.1ml/10g体重，分别于30s及6min用吸管从眼眶后静脉丛取血20μl，立即加入2ml 0.1％碳酸钠溶液中，于675nm比色，按公式计算吞噬指数K及吞噬系数α，并作t检验，比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

$K=\frac{\lg A_1-\lg A_2}{T_2-T_1}$ $\mathrm{\α}=\frac{W^3\√K}{\mathrm{WLS}}$

表11本发明颗粒剂对小鼠炭粒吞噬功能的影响

与对照组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01.

(3)结果：由表11可见本发明颗粒剂30g原生药/kg可显著增强小鼠RES吞噬功能，K值及α值均见明显增高。

2.4.3对肿瘤坏死因子(TNF)产生的的影响

(1)目的：TNF是启动抗菌炎症反应的关键细胞因子，通过刺激血管内皮细胞表达粘附分子，使之易粘附于白细胞，刺激单核-吞噬细胞和其他细胞分泌趋化性细胞因子，引起白细胞在炎症部位的聚集。通过测定本发明颗粒剂是否能促进TNF的产生探讨其抗炎症的作用机制。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~21g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(人参皂甙)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，人参皂甙浓度为2g/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，每日1次，连续10天，末次给药后1h，小鼠断颈处死。

TNF-α样品的制备：小鼠颈椎脱颈处死，75％乙醇浸泡5分钟，用预冷的D-Hank’s液5ml注射入小鼠腹腔，轻揉数十次，充分洗出腹腔细胞，2000rpm离心10分钟，用RPMI-1640培养液洗涤两次，用含5％小牛血清的RPMI-1640调细胞数至2×10⁶/ml加入24孔细胞培养板中贴壁2小时。弃上清，洗涤细胞，去除非粘附性细胞。加入10μg/ml的LPS和含10％小牛血清的RPMI-1640培养液，在37℃，5％CO2潮湿大气中温育12小时；收集上清液，-20℃保存，即为TNF-α待测样品。

TNF-α样品的检测：取隔天传代生长良好的L929细胞，用0.25％胰酶于室温消化5-10min，用RMPI-1640洗涤细胞两次，并调整细胞浓度为3.5×10⁵个细胞/ml。接种L929细胞悬液于96孔细胞培养板上，100μl/孔，于37℃、5％CO2饱和湿度培养3h。将待测样品按1/4、1/8、1/32倍比稀释，取100μl加入96孔板中并加入10μlAMD(终浓度：0.75mg/L)，每个稀释度做3复孔，同时设阴性对照(1640培养液)。于37℃、5％CO2饱和湿度培养18h，加入5mg/ml MTT 10μl，同条件下培养4h，弃上清.每孔加入0.1ml 10％SDS终止反应，室温震荡10min，酶标仪测A_570nm值。以细胞死亡率作为TNF的活性指标。结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表12可见，本发明颗粒剂对肿瘤坏死因子的产生具有抑制作用。

表12本发明颗粒剂对肿瘤坏死因子产生的影响

与对照组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.4.4对白介素-1、2诱生的影响

(1)目的：IL-1能协同亚适剂量有丝分裂原激活胸腺细胞和T细胞；促进胸腺细胞和T细胞增殖，表达IL-2受体，分泌细胞因子。在免疫应答早期，IL-1作为快速提呈细胞(APC)产生的第二信号，参与辅助APC激活Th细胞。IL-1能促进前体细胞B等细胞的增殖和分化。

IL-2能诱导T淋巴细胞增殖和分化，增强NK细胞的细胞毒活性，刺激CTL的增殖与分化并杀灭微生物，尤其是胞内寄生物。

通过检测本发明颗粒剂对IL-1、IL-2的诱生作用可判断该药物的免疫调节作用。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~21g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(人参皂甙)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，人参皂甙浓度为2g/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，每日1次，连续10天，末次给药后1h，小鼠断颈处死。

IL-1样品的制备：小鼠颈椎脱颈处死，75％乙醇浸泡5分钟，用预冷的D-Hank’s液5ml注射入小鼠腹腔，轻揉数十次，充分洗出腹腔细胞，2000rpm离心10分钟，用RPMI-1640培养液洗涤两次，用含5％小牛血清的RPMI-1640调细胞数至2×10⁶/ml加入24孔细胞培养板中贴壁2小时。弃上清，洗涤细胞，去除非粘附性细胞。加入10μg/ml的LPS和含10％小牛血清的RPMI-1640培养液，在37℃，5％CO2潮湿大气中温育48小时；收集上清液，-20℃保存，即为IL-1待测样品。

IL-1样品的检测：以C₅₇BL/6J纯种小鼠胸腺细胞作为检测IL-1的靶细胞。颈椎脱臼处死小鼠，无菌取胸腺，用灭菌玻璃注射器芯挤压过200目钢丝网，2000rpm离心10分钟，洗涤两次，台盼蓝染色，计活细胞数，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液调至1×10⁶/ml，将细胞悬液加入96孔细胞培养板，每孔100μl(1×10⁵个细胞)。每个样品设4个复孔。每孔加入亚剂量有丝分裂原ConA至终浓度为2μg/ml。每孔总容量为200μl。在37℃，5％CO2潮湿大气中培养48小时。用MTT比色法于570nm处比色，读取光密度值，结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

IL-2样品的制备：实验小鼠颈椎脱臼处死，75％乙醇浸泡5分钟，无菌取脾，用RPMI-1640培养液洗涤，在200目钢丝网上剪碎，用灭菌玻璃注射芯轻磨、过滤，分别制成脾细胞悬液，0.83％Tris-NH₄Cl破坏红细胞，冰浴静置10分钟，2000rpm离心10分钟，用RPMI-1640培养液洗涤细胞两次，经台盼蓝染色测定细胞活率大于95％。再以含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液制成1×10⁷/ml脾淋巴细胞悬液，加ConA5μg/ml，培养于24孔细胞培养板，在5％CO2潮湿大气中37℃温育24小时；离心收集上清液，-20℃保存，即为IL-2待测样品。

IL-2检测细胞的制备：BalB/C小鼠颈椎脱臼处死，75％乙醇浸泡5分钟，无菌取脾，用RPMI-1640培养液洗涤，在200目钢丝网上剪碎，用灭菌玻璃注射芯轻磨、过滤，制成脾细胞悬液，0.83％Tris-NH₄Cl破坏红细胞，冰浴静置10分钟，2000rpm离心10分钟，用RPMI-1640培养液洗涤细胞两次，经台盼蓝染色测定细胞活率大于95％。再以含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液制成5×10⁶/ml脾淋巴细胞悬液，加ConA2.5μg/ml，置25ml的细胞培养瓶中温育96小时。细胞用10mg/mlα-甲基甘露糖甙(α-mm)的Hank’s液洗两次，含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液洗一次，调节细胞浓度为1×10⁶/ml，作为测定IL-2的反应靶细胞。

IL-2样品的检测：取-20℃保存的各组IL-2上清液，用ConA活化的小鼠脾淋巴细胞测定其IL-2水平。即在96孔细胞培养板中，每孔加反应细胞0.1ml(1×105个)和等量的稀释后IL-2上清液，每样均设4个复孔。每孔加100mg/ml的α-甲基甘露糖甙20μl。在37℃，5％CO2潮湿大气中温育48h。用MTT比色法于570nm处比色，读取光密度值，结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表13可见，本发明颗粒剂各剂量组IL-1的吸光度值显著高于对照组(P＜0.01)，对IL-2的诱生具有明显的量效关系，表明本发明颗粒剂具有较好的免疫调节作用。

表13本发明颗粒剂对白介素-1、2产生的影响

与对照组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.4.5对小鼠血清中干扰素-г的影响

(1)目的：INF-г能显著增加抗原递呈细胞表达MHC-II类抗原，增强抗原递呈细胞与T细胞的相互作用，进而增强T细胞辅助抗体产生和辅助细胞毒T细胞产生的能力。通过测定小鼠血清中干扰素-г的浓度判断本发明颗粒剂的免疫调节作用。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~21g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(多抗甲素)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，多抗甲素浓度为0.1g/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，每日1次，连续10天，末次给药后1h，小鼠断颈处死。摘除眼球取血，离心，取血清备用，血清中INF-г的含量按试剂盒说明书进行。

(3)结果：由表14可见，本发明颗粒剂15、30g原生药/kg的INF-г浓度显著高于对照组，具有良好的量效关系。表明本发明颗粒剂能促进小鼠血清中干扰素-г的产生。

表14本发明颗粒剂对干扰素产生的影响

与模型组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.5祛痰作用

病毒性感冒往往伴有较严重的上呼吸道症状，研究其的祛痰作用应是其治疗病毒性感冒的药效学研究的内容之一。

2.5.1对小鼠气道酚红排泄试验的影响

(1)目的：利用酚红部分地从气道排泄的特点，在祛痰药的作用下，随着支气管分泌的增加，由呼吸道粘膜排出的酚红也增多，用分光光度计测出酚红的排泄量，从而得知药物的祛痰作用。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~21g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(氯化铵)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，氯化铵浓度为10g/dl，灌胃容积为0.1ml/10g体重，每日1次，连续6天。实验前饥饿12h，末次药后30min各鼠腹腔注射0.25％酚红0.2ml/10g体重，30min用湿布堵住小鼠口鼻，令其窒息而死。固定处死地小鼠，分离出气管，并在气管下穿一根线。然后用1ml注射器抽取5％NaHCO₃溶液0.5ml，从喉头刺入气管约0.3cm，用线结扎，固定针头，共冲洗3次，将3次冲洗液收集于小试管中，离心，取上清液于546nm比色。结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表15可见，本发明颗粒剂30g/kg的OD值明显高于对照组(P＜0.05)，表明本发明颗粒剂对小鼠气道酚红排泄有明显促进作用。

表15本发明颗粒剂对小鼠气道酚红排泄试验的影响

与对照组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.5.2对鸽子在体气管纤毛运动的影响

(1)目的：气管内膜表面有一层柱状纤毛上皮，呼吸道的净化作用主要通过此柱状上皮粘膜表面的纤毛持续协调的波浪式运动，使覆盖于粘膜表面的粘液定向运动。利用气管纤毛运动带动墨汁的速度来测定药物的祛痰作用。

(2)方法：家鸽50只，雌雄各半，体重250~300g，按体重随机分成5组，每组10只。设阴性对照(溶剂对照)和阳性对照组(醋酸地塞米松片)，受试药物3个剂量组(6、12、24g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的3.25、7.5、15倍)，氯化铵为1g/kg，采用灌胃给药，每日1次，连续7天。末次给药后1h，在暗室内，将家鸽经部拉直于水平面平行，剥离气管，是气管尽量地暴露。然后从靠心脏端将5号针头插入气管，使针尖靠近气管内壁推入0.02ml中华墨汁，在冷光源下，观察1min内墨汁向前运动的距离。结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表16可见，本发明颗粒剂所试3个剂量组中12、24g原生药/kg剂量组与对照组比较，其墨汁运动距离明显延长(统计学差异显著，P＜0.05或0.01)，且呈一定的量效关系。表明本发明颗粒剂能有效促进鸽子气管纤毛的运动。

表16本发明颗粒剂对鸽子在体气管纤毛运动的影响

与对照组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.6止咳作用

病毒性感冒在发病过程中往往伴有咳嗽，故而止咳作用应是在中药治疗病毒性感冒的研究过程中的一项药效学内容。

2.6.1对浓氨水致咳小鼠的影响

(1)目的：小鼠吸入刺激性化学药物的气雾后，刺激呼吸道感受器，反射地引起咳嗽。凡能抑制咳嗽中枢或降低呼吸道感受器敏感性地药物，均有止咳作用。

(2)方法：昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18~21g，按体重随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(磷酸可待因片)，受试药物3个剂量组(7.5、15、30g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的4.69、9.38、18.75倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药，受试药物3个浓度分别为75、150、300g原生药/dl，磷酸可待因浓度为0.3g/dl，灌胃容积0.1ml/10g体重(对照组给等容积蒸馏水)，每日1次，连续5天。末次给药后1h，把小鼠放入500ml的密闭瓶内(每次1只)，用超声雾化器将浓氨水恒压匀速喷入20s，记录致咳潜伏期(s)(从刺激开始至出现咳嗽的时间)和2min内咳嗽次数，计算各组小鼠致咳潜伏期和咳嗽次数的均数及标准差，并作t检验，比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表17可见，本发明颗粒剂所试30g原生药/kg剂量组与对照组比较，能明显减少小鼠咳嗽次数(P＜0.05)。表明本发明颗粒剂对浓氨水引起的小鼠咳嗽具有一定的抑制作用。

表17本发明颗粒剂对浓氨水致咳小鼠的影响

与模型组比较(t检验或t’检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

2.6.2对枸橼酸致豚鼠咳嗽的影响

(1)目的：用枸橼酸溶液喷雾，刺激豚鼠呼吸道粘膜感受器，反射地引起咳嗽。该模型可观察本品对抗化学性刺激引起的咳嗽的对抗作用。

(2)方法：试验前，将体重200-300g的豚鼠放入3L的密闭瓶内，用超声波雾化器以1ml/min雾化17.5％枸橼酸1min，记录豚鼠在5min内的咳嗽次数。咳嗽次数＜10次/min或＞30次/min者弃之。选取合格豚鼠50只，按体重和性别随机分成5组，每组10只。设正常对照和阳性对照组(吗啡)，受试药物3个剂量组(6、12、24g原生药/kg，分别相当于临床每日推荐剂量的3.25、7.5、15倍)。采用等容积不等浓度药液灌胃给药(对照组给蒸馏水)，受试药物3个浓度分别为60、120、240g原生药/dl，吗啡浓度为0.03g/dl，灌胃容积为1ml/100g体重，每日1次，连续5天，末次给药1h，喷入17.5％枸橼酸溶液1min，记录豚鼠在5min内咳嗽的潜伏期和次数均数及标准差。结果用t检验比较各组间差异显著性，检验水准α＝0.05。

(3)结果：由表18可见，本发明颗粒剂所试24g原生药/kg剂量组与对照组比较，其咳嗽次数显著降低(P＜0.05)。表明表明本发明颗粒剂对枸橼酸致豚鼠咳嗽有一定的对抗作用。

表18本发明颗粒剂对枸橼酸致豚鼠咳嗽的影响

与对照组比较(t检验)：*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01。

3试验结论

3.1本发明颗粒剂浸膏体外对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、乙型链球菌、流感嗜血杆菌均有一定的抑制作用。在体外还可以抑制流感病毒A3株对鸡红细胞的凝集活性。本发明颗粒剂在VERO E6细胞内对SARS-COV-P5冠状病毒和SARS-COV-P11冠状病毒的预防作用IC₅₀为187.5ug/ml，MI为94ug/ml，治疗指数TI为8，表明有一定预防作用。

3.2本发明颗粒剂灌胃给药对二甲苯致小鼠急性耳肿胀、醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性亢进均有显著对抗作用，对蛋清足肿胀作用不明显，表明本品对炎症初期具有肯定的抗炎作用。

3.3本发明颗粒剂对菌苗致家兔及酵母致大鼠的发热都具有明显抑制作用，具有肯定的解热作用。

3.4本发明颗粒剂能促进小鼠溶血素抗体的生成、增强小鼠炭粒吞噬功能、可促进白介素-1、2和干扰素-r的的诱生。

3.5本发明颗粒剂对小鼠气道酚红的排泄、对鸽子在体气管纤毛的运动有明显促进作用，具有显著的怯痰作用。

3.6本发明颗粒剂对浓氨水致小鼠及枸橼酸致豚鼠的咳嗽均具有明显抑制作用，具有一定的止咳作用。

以上结果表明，本发明颗粒剂具有解热抗炎、祛痰、止咳、提高免疫功能以及抗病毒及细菌等多方面与病毒性感冒治疗有关的药理作用。

综上，本发明药物组合物依据中医理论的治法治则和临床需要，采用益气解表、清热解毒兼化湿去浊的治疗法则治疗风热感冒，尤其治疗气虚风热型感冒效果明显，同时预防SARS也有一定效果。本发明药物组合物质量稳定、安全、可控，疗效显著，为临床治疗风热型感冒提供了一种新的选择。

Claims (9)

1.一种治疗感冒的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

黄芪10-50份、升麻2-15份、白术2-24份、广藿香2-20份、板蓝根5-40份、苍术2-20份、鱼腥草5-50份。

2.根据权利要求1所述的治疗感冒的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

黄芪30份、升麻6份、白术10份、广藿香10份、板蓝根15份、苍术10份、鱼腥草15份。

3.根据权利要求1或2所述的治疗感冒的药物组合物，其特征在于：它是以黄芪、升麻、白术、广藿香、板蓝根、苍术、鱼腥草原生药材或炮制品或提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的药剂。

4.根据权利要求3所述的治疗感冒的药物组合物，其特征在于：所述的药剂是口服制剂。

5.根据权利要求1所述的治疗感冒的药物组合物，其特征在于：所述药剂每单位制剂含有黄芪甲苷含量C₄₁H₆₈O₁₄不得少于2.4mg。

6.一种制备权利要求1所述的治疗感冒的药物组合物的方法，它是由如下步骤完成：

a、称取下述重量配比的原料：黄芪10-50份、升麻2-15份、白术2-24份、广藿香2-20份、板蓝根5-40份、苍术2-20份、鱼腥草5-50份；

b、取白术、广藿香、苍术、鱼腥草蒸馏提取挥发油，将挥发油用环糊精包合得包合物；水液、药渣备用；

c、取原料黄芪、升麻、板蓝根与步骤b所得药渣水煎、得药液；与步骤b所得水液合并、浓缩，得清膏；

d、将步骤c所得清膏喷雾干燥，得浸膏粉，与步骤b所得包合物混合，得混合物；

e、取步骤d所得混合物，加入药学上可接受的辅料制备而成的药剂。

7.权利要求1所述的药物组合物在制备治疗气虚风热型感冒、病毒性上呼吸道感染的药物中的用途。

8.权利要求1所述的药物组合物在制备预防SARS的药物中的用途。

9.权利要求1所述的药物组合物在制备具有解热、抗炎、祛痰、止咳、提高免疫功能、抗病毒作用的药物中的用途。