CN101089192A - 枸橼酸盐琼脂培养基 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种枸橼酸盐琼脂培养基，是以枸橼酸钠、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、溴麝香草酚蓝、小牛血清、琼脂为主要成分，用以鉴别细菌能否利用枸橼酸盐。枸橼酸钠是培养基中碳的唯一来源，而磷酸二氢铵是培养基中氮的唯一来源；能利用枸橼酸钠为碳源的细菌在培养基上能生长，并且分解枸橼酸盐最后产生碳酸盐，使培养基变为碱性，此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色；硫酸镁能破坏标本中存在的四环素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用；氯化钠用于调整渗透压；磷酸二氢钾用于调节pH；试验阳性对照菌在该固体培养基中增菌繁殖迅速，并且产碱使培养基变色。本发明具有以下优点：(1)所需接种量小，少量细菌即可出现产碱变色；(2)指示剂变色快速明显，24小时即可观察结果；(3)不易出现假阳性，仅限能利用枸橼酸钠的细菌能生长、变色；(4)不易出现假阴性，硫酸镁能破坏标本中存在的四环素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用；(5)试验阳性对照菌在该固体培养基中增菌繁殖迅速，并且产碱使培养基变色。

Description

枸橼酸盐琼脂培养基

技术领域  本发明涉及一种枸橼酸盐琼脂培养基，其主要成分是枸橼酸钠、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、溴麝香草酚蓝、小牛血清、琼脂，经一定的工艺制成。用以鉴别细菌能否利用枸橼酸盐。利用生化反应试验鉴别细菌的种类，其关键在于准确、快速、简便。由于不同细菌具有其各自的独特酶系统，因而在代谢过程中所产生的分解和合成的代谢产物也不同，这些分解或合成的代谢产物又各具有不同的生化特点，再利用其不同生化特点在相应的培养条件下所产生的生化反应，来进行细菌种类的鉴别，这是目前微生物实验室最常用的手段。由于目前培养条件及指示剂的应用范围所限，生化反应试验中观察细菌对有机酸盐及铵盐利用的鉴别培养基存在所需接种量大、培养时间长、指示剂变色不明显、易出现假阳性或假阴性等问题。枸橼酸盐琼脂培养基是观察细菌对有机酸盐及铵盐利用的一综合性培养基，用以鉴别细菌能否利用枸橼酸盐，从而进一步判断细菌的种类及生化特点。随着生物研究的进展，国内外对细菌鉴别的研究也在不断的发展中。生物工作者一直希望能有一种能克服上述不足的鉴别培养基----枸橼酸盐琼脂培养基。

背景技术  本发明的目的在于提供一种能克服已有鉴别培养基不足的枸橼酸盐琼脂培养基。与其它同类培养基相比具备下列特点：所需接种量小，少量细菌即可出现产碱变色；指示剂变色快速明显，24小时即可观察结果；不易出现假阳性，仅限能利用枸橼酸钠的细菌能生长、变色；不易出现假阴性，能破坏标本中存在的抑菌物质，使细菌生长不受抑制；试验阳性对照菌在该固体培养基中增菌繁殖迅速，并且产碱使培养基变色。

发明内容  本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种枸橼酸盐琼脂培养基。

本发明选择的配方如下(组分及其重量百分比％)：枸橼酸钠(0.3-0.7)、氯化钠(0.3-0.7)、硫酸镁(0.01-0.03)、磷酸二氢钾(0.08-0.12)、磷酸二氢铵(0.08-0.12)、溴麝香草酚蓝(0.8-1.2)、小牛血清(2.5-3.0)、琼脂(1.5-2.5)、蒸馏水加至100。

枸橼酸钠是培养基中碳的唯一来源，而磷酸二氢铵是培养基中氮的唯一来源。能利用枸橼酸钠为碳源的细菌在培养基上能生长，并且分解枸橼酸盐最后产生碳酸盐，使培养基变为碱性，此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。硫酸镁能破坏标本中存在的四环素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用；氯化钠用于调整渗透压；磷酸二氢钾用于调节pH。小牛血清、琼脂是培养基中的营养和支持成分；试验阳性对照菌在该固体培养基中增菌繁殖，并且产碱使培养基变色。

本发明产品的制备方法是：

1)、将枸橼酸钠、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、琼脂按比例加入蒸馏水中，再加热溶解，矫正pH至6.8，以绒布过滤；

2)、再加入溴麝香草酚蓝混匀，压力蒸汽灭菌1.05kg15分钟；

3)、无菌条件下，加入无菌小牛血清，分装试管，每管约2ml，趁热将含有培养基的灭菌试管倾斜一定角度，冷凝后制成斜面，待用。

本发明具有以下优点：(1)所需接种量小，少量细菌即可出现产碱变色；(2)指示剂变色快速明显，24小时即可观察结果；(3)不易出现假阳性，仅限能利用枸橼酸钠的细菌能生长、变色；(4)不易出现假阴性，硫酸镁能破坏标本中存在的四环素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用；(5)试验阳性对照菌在该固体培养基中增菌繁殖迅速，并且产碱使培养基变色。

具体实施方式  下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：

按照下表所列数据(重量百分比％)及其所述步骤进行配置：

配方一：

枸橼酸钠                   0.3-0.7

氯化钠                     0.3-0.7

硫酸镁                     0.01-0.03

1％溴麝香草酚蓝酒精溶液    0.8-1.2

磷酸二氢钾                 0.08-0.12

磷酸二氢铵                 0.08-0.12

小牛血清                   2.5-3.0

琼脂                       1.5-2.5

蒸馏水                     加至100

                                                         

配方二：

枸橼酸钠                   0.3-0.6

氯化钠                     0.3-0.6

硫酸镁                     0.01-0.02

1％溴麝香草酚蓝酒精溶液    0.8-1.1

磷酸二氢钾                 0.08-0.11

磷酸二氢铵                 0.08-0.11

琼脂                       1.5-2.2

小牛血清                   2.5-2.8

蒸馏水                     加至100

                                                         

配方三：

枸橼酸钠                   0.4-0.7

氯化钠                     0.4-0.7

硫酸镁                     0.02-0.03

1％溴麝香草酚蓝酒精溶液    0.9-1.2

磷酸二氢钾                 0.09-0.12

磷酸二氢铵                 0.09-0.12

小牛血清                   2.7-3.0

琼脂                       1.8-2.5

蒸馏水                     加至100

                                                       

配方四：

枸橼酸钠                   0.4-0.6

氯化钠                     0.4-0.6

硫酸镁                     0.01-0.03

1％溴麝香草酚蓝酒精溶液    0.9-1.1

磷酸二氢钾                 0.09-0.11

磷酸二氢铵                 0.09-0.11

琼脂                       1.8-2.2

小牛血清                   2.6-2.8

蒸馏水                     加至100

                                                            

Claims (2)

1、一种枸橼酸盐琼脂培养基，是以枸橼酸钠、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、溴麝香草酚蓝、琼脂为主要组分，其特征在于具有如下配方(组分及其重量百分比％)：枸橼酸钠(0.3-0.7)、氯化钠(0.3-0.7)、硫酸镁(0.01-0.03)、磷酸二氢钾(0.08-0.12)、磷酸二氢铵(0.08-0.12)、溴麝香草酚蓝(0.8-1.2)、小牛血清(2.5-3.0)、琼脂(1.5-2.5)、蒸馏水加至100。

2、一种权利要求1所述枸橼酸盐琼脂培养基的制备方法，其特征在于具有如下的步骤：

1)、将枸橼酸钠、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、琼脂按比例加入蒸馏水

中，再加热溶解，矫正pH至6.8，以绒布过滤；

2)、再加入溴麝香草酚蓝混匀，压力蒸汽灭菌1.05kg15分钟；

3)、无菌条件下，加入无菌小牛血清，分装试管，每管约2ml，趁热将含有培养基的灭菌试管倾斜一定角度，冷凝后制成斜面，待用。