CN101084913B - 麦冬皂苷d在制备调控血管内皮细胞信号转导基因药物中的应用 - Google Patents

麦冬皂苷d在制备调控血管内皮细胞信号转导基因药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明将信号转导基因芯片包括120条NFKB介导的信号转导基因,经运用基因芯片技术检测结果显示,H2O2可以上调NFKB介导的41条信号转导相关基因,而麦冬皂苷D可以下调47条基因,包括上述的37条基因,H2O2可以下调NFKB介导的信号转导相关的一条基因,而麦冬皂苷D则可上调该条基因,因而麦冬皂苷D能对抗H2O2对血管内皮细胞的损伤,从而达到保护血管内皮细胞形态及功能的完整性,这是防治心脑血管病症的重要环节。

Description

麦冬皂苷D在制备调控血管内皮细胞信号转导基因药物中的应用
一、技术领域
本发明涉及麦冬皂苷D在制药中的新用途,具体地说是涉及麦冬皂苷D在制备调控血管内皮细胞周期基因药物中的应用,属中药技术领域。
二、背景技术
1.麦冬通过保护血管内皮细胞来完成养阴行血之功效
麦冬为临床滋养阴液的常用之品,是养阴生津的代表药物之一。麦冬,百合科植物麦冬Ophiogon japonicus(Thumb.)Ker-Gawl.的干燥块根。主要含多种糖甙:麦门冬皂苷B、D,23,24二羟基罗斯考皂,麦冬甙元-3-O-a-L-吡喃鼠李糖基(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖甙,甲基麦冬黄烷酮A、B,麦冬黄烷酮A、B,6-醛基异麦冬黄烷酮A、B,麦冬甙元,丙三醇以及β-谷甾醇、豆甾醇。另含挥发油,从中分得长叶烯、α-广藿香烯、β-广藿香烯、香附子烯、愈创奥烯、α-律草烯、樟脑、芳樟醇等成分。麦冬始载于《神农本草经》,味甘、微苦,性微寒,归肺、胃、心经。具有养阴生津、润肺清心的功效。
前期研究发现养阴代表中药麦冬的药物血清胚层有效部位群/组分/成分,具有不同程度的保护血管内皮细胞的作用,其中正丁醇部位的药效作用更为显著,以标准品麦冬皂苷D为对照进行高效液相分析发现,其中含有麦冬皂苷D成分。
2.麦冬皂苷D的研究进展
沿阶草属麦冬主产于四川绵阳,三台和浙江慈溪,萧山等地。杭麦冬与川麦冬的总皂苷的含量差异与栽培年限相关,杭麦冬生长周期为2~3年,川麦冬的栽培期为1年。不同产地麦冬的单体成分麦冬皂苷B、D含量也有较大差别,杭麦冬主含麦冬皂苷B、含少量皂苷D;而川麦冬主含麦冬皂苷D、含少量皂苷B。
研究发现麦冬皂苷D可显著抑制静脉血栓模型大鼠早期外周血中性粒细胞活化、粘附;减轻血栓重量;降低血清sICAM-1含量;其副作用低;麦冬皂苷D还可下调大鼠静脉血栓部位TF蛋白表达,并抑制MAPKp38和JNK磷酸化,提示麦冬皂苷D可通过影响上述信号通路,降低炎症反应,抑制血栓形成。另麦冬皂苷有显著性的抗炎作用,鲁斯可皂苷元和麦冬皂苷D为其中的两种活性成分。
同种不同产地样品中麦冬皂苷D的含量有较大差别,浙江产麦冬含量较低,四川产麦冬含量较高。对浙江产麦冬、四川产麦冬不同批次样品测定,发现麦冬皂苷D的含量差别较大,且同一产地浙江产麦冬中麦冬皂苷D的含量相差更大。生长年限对麦冬皂苷D的含量有一定的影响,年限长,含量略有增加。因此麦冬皂苷D含量的高低仅仅可作为川麦冬质量指标,而不适合作为浙麦冬质量的指标。
由于皂苷为一类极性较大,结构复杂的化合物,它无紫外吸收,无专一显色剂,再加上麦冬皂苷测定经常受糖的干扰,若采用紫外检测末端吸收法,则灵敏度低,且有干扰峰,无法使用。因此,我们采用比色法测定麦冬总皂苷含量为0.2855%,利用HPLC-ELSD法测定麦冬皂苷D的含量为0.03229%。为进一步获取其内在成分的信息,我们进行了ESI-TOF-MS测试,以ESI正离子为麦冬皂苷主要电离方式,乙腈-水梯度洗脱,205nm为检测波长提取紫外色谱图,确定35.52min为麦冬皂苷D,其裂解方式为先脱去与岩藻糖(1→2)连接的鼠李糖及(1→3)连接的木糖,后脱去岩藻糖。采用两种测试方法全面综合分析麦冬皂苷D。
3.麦冬皂苷D的提取分离
取5~10目麦冬药粉,加10倍量70%乙醇,热回流提取3次,每次2h。合并提取液,减压浓缩至无醇味。然后,将其溶于1000mL水中,用3倍量乙酸乙酯振摇提取3次,得到乙酸乙酯提取物和水层。将水层继续用3倍量正丁醇振摇提取3次,得到正丁醇提取物和水层,合并正丁醇液,用0.1mol/L NaOH振摇提取2次,弃去0.1mol/L NaOH。将正丁醇提取物进行大孔树脂柱洗脱,依次用水、10%乙醇、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇和乙醇梯度洗脱,分别得到相应的洗脱物。60%乙醇洗脱物经硅胶柱色谱,水饱和正丁醇洗脱,得到麦冬皂苷D。
三、发明内容
本发明的目的在于提供麦冬皂苷D在制药中的新用途,具体地说是提供麦冬皂苷D在制备调控血管内皮细胞信号转导基因药物中的应用。
保护血管内皮细胞是防治心脑血管病症的重要环节
血管内皮细胞(vascular endothelial cell,简称VEC)能合成多种血管活性物质,对血管的舒缩功能与血液的流动性有着不可替代的调节作用。血管内皮并非单纯的衬里,它有着活跃的生理功能。如对凝血和抗凝;纤溶抗纤溶;血小板聚集和抗聚集;白细胞粘附和抗粘附;血管舒缩以及平滑肌细胞间的调控(促增殖和抗增殖)都处于动态平衡状态,一旦受到损伤则失去平衡,有的学者称之为内皮功能障碍(Endothelial dysfunction),是促进形成早期动脉粥样硬化的始动因素,也是目前研究的热点。VEC生理功能的动态平衡是维持血行正常的重要条件。因此,当VEC受到损伤时,不仅自身的生理功能被破坏,而且还会激活多种凝血和促凝因子,致使血液成分改变和粘度增高,导致血液速度减慢或出现旋涡,从而易于产生血瘀。VEC可因诸多因素受损,主要包括自由基、炎症介质、内毒素等。这些致病因素作用于VEC,可直接加速其凋亡而引起功能失衡,最终引起促栓作用形成微血栓而引发、加重心脑血管疾病。可见,VEC损伤心脑血管疾病中占有非常重要的地位。所以改善和保护血管内皮细胞形态及功能的完整性,是预防和治疗心脑血管疾病的重要着眼点。
本发明运用基因芯片技术,将人NFkB信号转导基因芯片包括120条NFkB介导的信号转导通路基因。即编码Rel,NFkB,and IkB家族、NFkB应答基因、胞外激活配体与受体的基因、传导信号的激酶与转录因子、可能与病毒复制、自身免疫疾病、炎症反应、肿瘤发生与凋亡调节有关的NFkB介导的信号转导基因。检测结果显示H2O2可以上调NFkB介导的41条信号转导通路相关基因,而麦冬皂苷D可以下调47条基因,包括上述的37条基因。H2O2可以下调NFkB介导的信号转导通路相关的一条基因NALP12,而麦冬皂苷D则可上调该通路相关的一条基因TBK1,从而达到保护血管内皮细胞形态及功能的完整性。
四、具体实施方式
实施例:麦冬皂苷D调控血管细胞信号转导基因的研究
从中药麦冬提取分离的有效成分麦冬皂苷D对人脐静脉血管内皮细胞有抗H2O2所致凋亡的作用。本发明运用基因芯片技术,针对血管内皮细胞信号转导相关基因,发现了麦冬皂苷D所调控的血管内皮细胞基因表达谱。
1材料与方法
1.1主要试剂:RPMI-1640培养基(GIBCO,USA)(每升含20%小牛血清、L-谷氨酰胺0.33mg、青霉素100u、链霉素100u、pH-7.4);消化剂为0.25%胰蛋白酶(MERCK,USA);四川绵阳产麦冬,购自南京市药材公司,经南京中医药大学中药鉴定教研室鉴定为Ophiopogon japonicus.(L.f.)Ker-Gawl.的块根。
RNA抽提试剂:
Figure G07124566820070725D000031
试剂(Invitrogen life technologies),氯仿,异丙醇,75%乙醇(以DEPC处理的水配制),无RNA酶的水,无RNA酶的糖原(Invitrogen life technologies)。
RNA质量检测试剂:TE:10mM Tris-HCl pH 8,1mM EDTA,0.4M MOPS,pH 7.0,0.1M乙酸钠,0.01M EDTA,甲醛,甲醛上样染液(ambion),溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB),琼脂糖。
cRNA标记与合成试剂:TrueLabeling-AMPTM线性RNA扩增试剂盒(cDNA合成:G1:TrueLabeling引物,RI:RNA酶抑制剂,G2:cDNA合成酶混合液,G3:5X cDNA合成缓冲液,H2O:除RNA酶的H2O。RNA线性扩增以及cRNA合成:G4:2.5X RNA扩增缓冲液,G5:扩增酶类混合液)。Biotin-16-dUTP(Roche Cat.No.1-093-070),SuperArray ArrayGrade cRNA纯化试剂盒。
芯片杂交试剂:Oligo
Figure G07124566820070725D000041
芯片Human NFkB Signaling PathwayMicroarray:OHS-025(美国SuperArray公司提供)。,20X SSC:(900ml H2O中溶解175.3g的NaCl和88.2g的二水柠檬酸钠,用1M的HCl调节pH到7.0,加水至1L),20%SDS:(1L H2O中溶解200g十二烷基磺酸钠)。
化学发光检测试剂:化学发光检测试剂盒Chemiluminescent DetectionKit(SuperArray Bioscience,Catalog Number D-01),GEA封闭液Q,5X缓冲液F,AP,缓冲液G,CDP-Star化学发光底物。
1.2麦冬皂苷D的提取分离:取5~10目麦冬药粉,加10倍量70%乙醇,热回流提取3次,每次2h。合并提取液,减压浓缩至无醇味。然后,将其溶于1000mL水中,用3倍量乙酸乙酯振摇提取3次,得到乙酸乙酯提取物和水层。将水层继续用3倍量正丁醇振摇提取3次,得到正丁醇提取物和水层,合并正丁醇液,用0.1mol/L NaOH振摇提取2次,弃去0.1mol/L NaOH。将正丁醇提取物进行大孔树脂柱洗脱,依次用水、10%乙醇、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇和乙醇梯度洗脱,分别得到相应的洗脱物。60%乙醇洗脱物经硅胶柱色谱,水饱和正丁醇洗脱,得到麦冬皂苷D。
1.3药物分组:分为对照组、造模组(100umolH2O2)和麦冬皂苷D组(100umolH2O2+1.29ug/ml麦冬皂苷D)。
1.4血管内皮细胞的培养:无菌条件下取胎龄为37~40wk的新生儿脐带(长约30~50cm),排尽残血,剪去钳夹部分,投入灭菌保存液(0.14mol/L NaCl、4mmol/L KCl、15mol/L Hepse、11mmol/L葡萄糖、pH7.3)中,4℃保存。然后用D-Hanks液(pH 7.3~7.4)反复灌洗脐静脉,直至将余血冲洗干净。向静脉内注入0.25%的胰蛋白酶5~10ml,在37℃下孵育10min。收集脐静脉腔内的消化液,此后迅速注入适量(5ml)含20%小牛血清的培养液以终止酶消化作用并收集入刻度离心管中。收集细胞的全过程应在两分钟内完成。室温下1000rpm,离心10分钟,倒尽上清液,吸取1ml培养液于离心管中,吹打成悬液,用0.4%台酚蓝染色少量细胞悬液。计数活细胞在95%以上,再加入20%RPMI-1640培养基,调整细胞浓度为5×107·L-1,将此浓度的原代HUVEC移入细胞培养瓶中进行培养。置于5%CO2培养箱内培养。第1个24h更换培养液的1/2,以后每隔24h换液1次。根据相差显微镜下细胞呈单层鹅卵石样排列、免疫细胞化学法染色细胞第VIII因子相关抗原呈阳性,确定培养细胞为内皮细胞。
1.5RNA抽提
a.匀浆:直接在3.5cm直径的培养盘中加入1ml TRIZOL试剂裂解细胞,裂解时用枪吸打几次。加入TRIZOL试剂的量取决于培养盘的面积(每10cm2加1ml)而不是培养细胞的数量。
b.两相分离:匀浆后样品于15到30℃孵育5分钟,以便核酸蛋白复合体完全解离。每1ml的TRIZOL试剂匀浆的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12,000×g离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层核上层的无色的水相。RNA全部被分配于水相中。水相的体积大约使匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
c.RNA沉淀:将水相转移到新离心管中。水相与异丙醇混合以沉淀其中的RNA,加入异丙醇的量为每个样品匀浆时加入1ml TRIZOL试剂的此时加0.5ml的异丙醇。混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃12,000×g离心10分钟。
d.RNA清洗:移去上清液,每1mlTRIZOL试剂匀浆的样品中加入至少1ml的75%乙醇,清洗RNA沉淀。振荡后,4℃7,500×g离心5分钟。
e.重新溶解RNA沉淀:去除乙醇溶液,空气中干燥RNA沉淀5-10分钟。溶解RNA时,先加入无RNA酶的水用枪反复吹打几次,然后55到60℃孵育10分钟。获得的RNA溶液保存于-70℃。
1.6RNA质量检测
a.紫外吸收测定法:取少量液体用TE稀释(一般1∶100稀释)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,可以测定RNA溶液浓度和纯度。用来稀释的TE不需要经过无RNA酶处理,因为RNA的微量降解不会明显影响分光光度计的读值。测量前需先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。浓度测定在A260下读值为1表示40μg RNA/ml。样品RNA浓度(μg/ml)计算公式为:A260X稀释倍数X 40μg/ml。RNA溶液的A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法,比值范围1.8到2.1。
b.变性琼脂糖凝胶电泳:制胶:1g琼脂糖溶于72ml水中,冷却至60℃,10ml的10X MOPS电泳缓冲液(0.4M MOPS,pH 7.0,0.1M乙酸钠,0.01MEDTA)和18ml的37%甲醛溶液(12.3M)。灌制凝胶板,预留加样孔至少可以加入25μl溶液。胶凝后取下梳子,将凝胶板放入电泳槽内,加足量的1X MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。取3μg RNA,加3倍体积的甲醛上样染液,加EB于甲醛上样染液中至终浓度为10μg/ml。加热至70℃孵育15分钟使样品变性。上样于胶孔中,5-6V/cm电压下电泳至溴酚兰指示剂进胶至少2-3cm。紫外透射光下观察并拍照。
1.7cRNA标记与合成
a.cDNA合成:先配制退火混合液:每个RNA样品均如下配制于一个灭菌的PCR管中:0.1-3.0μg总RNA,1.0μg G1,加去RNA酶的H2O至总体积为10μl。用移液枪轻轻吸打几次混合均匀,稍微离心使液体聚集于管底。70℃水浴10min后立刻放于冰中。再配制cDNA合成混合液,在离心管中依次加入,按每张芯片4μl除RNA酶的H2O,4μl5X cDNA合成缓冲液(G3),1μl RNA酶抑制剂(RI),1μl cDNA合成酶混合液(G2),总体积10μl。
用移液枪轻轻吸打几次混合均匀,稍微离心使液体聚集于管底。置于冰上待用。cDNA合成反应:每10μl退火混合液中加入10μl的cDNA合成混合液。移液枪轻轻吸打几次混合均匀,稍微离心使液体聚集于管底。42℃水浴50分钟。短暂离心(约2秒)使液体聚集于管底。然后进行cRNA合成步骤或-20℃保存过夜。
b.cRNA合成,标记和扩增:先配制扩增混合液:试剂盒中所有管溶解后离心溶液至管底,置冰中待用。在离心管中依次加入扩增混合液:按每张芯片:16μl2.5X RNA扩增缓冲液(G4),2μl Biotin-16-UTP(Roche or ENZO),2μl扩增酶类混合液(G5),总体积为20μl。分别加入20μl扩增混合液。吸打混匀并离心至管底。37℃水浴4小时以上。
c.cRNA纯化:使用SuperArray ArrayGrade cRNA纯化试剂盒(货号:GA-012)。按步骤配制cRNA样品,将cRNA结合至纯化柱上,清洗纯化柱,再将cRNA从纯化柱中洗脱。
d.质量控制:取499μl的TE(pH 8.0)至比色管中,确认管壁无气泡。比色管放入紫外分光光度计,调零。在比色管中直接加入1μl cRNA,吸打混合均匀。读出其在230,260和280nm的吸光率。取出比色管,弃去液体,洗干净凉干。计算浓度:A260×40×500(稀释倍数)=样品浓度(μg/ml)。计算260/280和260/230比值以确定样品纯度。纯化的样品具有如下比值:RNA的260/280比值>2.0,RNA的260/230比值>2.0。
1.8芯片杂交
a.预杂交:加约5ml去离子水于杂交管中预湿芯片膜,拧紧管盖倒放5分钟。60℃预热GEAhyb杂交液(GEAhyb Hybridization Solution)多次颠倒试剂瓶以彻底溶解瓶中组分。去除杂交管中的水,加入2ml预热的GEAhyb杂交液,转动管子。确定管盖拧紧。将杂交管放在杂交炉中,旋紧盖子。加热后检测杂交管盖是否仍然密封。以转速5-10rpm 60℃预杂交1到两小时。
b.杂交:配制样品杂交液:加入4到20μg用TrueLabeling-AMP试剂盒制备的生物素标记的cRNA样品至0.75ml预热的GEAhyb杂交液中,混合均匀放于60℃。弃去杂交管中的预杂交液,加入含有标记的cRNA的样品杂交液。于60℃保持5到10rpm旋转杂交过夜。
c.洗膜:每张芯片需配制5ml的洗液1和5ml的洗液2。洗液1:2X SSC,1%SDS(混合10ml 20X SSC,5ml 20%SDS,和85ml ddH2O)。洗液2:0.1XSSC,0.5%SDS(混合0.5ml 20X SSC,2.5ml 20%SDS和97ml ddH2O)。洗液1和洗液2使用前均需要预热至60℃。加入5ml洗液1至杂交管中,简单转动几下,放回杂交炉中。60℃20到30rpm转动洗膜15分钟。弃去洗液。加入5ml洗液2至杂交管中,简单转动几下,放回杂交炉中。60℃20到30rpm转动下,洗膜15分钟。立刻弃去洗液,盖上杂交管盖以保持膜湿润,冷却至室温。
1.9化学发光检测
a.膜封闭:最后一次洗膜后,弃去洗液,立刻加入1.5ml GEAb封闭液Q,在杂交仪中30到40rpm孵育40分钟。
b.加入链亲和素偶联的碱性磷酸酶(AP):配制1X缓冲液F:用水将5X缓冲液F稀释5倍。(每杂交管准备18ml的1X缓冲液F)。配制结合混合液:AP∶1X缓冲液F(1∶7,500)混合。(每杂交管配制2ml结合缓冲液)。弃去杂交管中的GEA封闭液Q,加入2ml结合缓冲液,在杂交仪中轻轻摇动孵育10分钟。
c.洗膜:洗膜4次:加入4ml的1×缓冲液F温和振荡5分钟,弃去1×缓冲液F。加入3ml缓冲液G温和震荡分钟;倒掉,再用3ml缓冲液G重复洗一次。
d.检测:加入1.0ml CDP-Star化学发光底物至杂交管中,室温孵育2分钟。取出膜,放在一张滤纸上以去除多余的CDP-Star溶液,然后用干净的塑料膜两面包住,驱除气泡,用X-射线胶片曝光。
2.0图象采集和数据分析
a.图象和数据采集:X-射线胶片曝光后,将胶片上的图象用扫描仪扫描并转换为灰度TIFF格式的图片文件保存。运行ScanAlyze软件,将灰度TIFF格式图片的点阵转化为数字型数据,将此原始数据储存为Microsoft Excel文件。
b.数据分析:使用芯片配套软件GEArray Analyzer对原始数据进行去背景计算以及比较运算。每张芯片都点有负对照(PUC18DNA和空白)以及管家基因,包括β-actin,GAPDH,Cyclophilin A和核糖体蛋白L13a。原始数据将首先被减掉背景最小值,继而用管家基因来进行校正,校正后的数据用来进行样品间基因转录的相对丰度分析。
2.结果
NFkB信号通路芯片可检测以下基因表达:
NF-kappaB通路活化基因:
配体与受体基因:CARD10,IL1B,IL8,MYD88,TLR1,TLR2,TLR3,TLR4,TLR6,TLR8,TNF,TNFRSF10A,TNFRSF10B。膜分子基因:CARD11,CARD14,IRAK1,IRAK2。激酶基因:CHUK,IKBKB,IKBKG,IRAK1,IRAK2,MAP2K3,MAP2K4,MAP2K6,MAP3K14,MAP3K7,MAPK14。I-kappaB激酶/NF-kappaB串联基因:EDARADD,IKBKG,IRAK2,STAT1,TLR8。NF-kappaB胞浆隐蔽或释放基因:BCL3,IL10,NALP12,NFKBIA,TNFRSF7,TNFSF14。转录因子基因:IKBKB,IKBKG,IRAK1,NFKB1,NFKBIA,RELA,STAT1,TNF。炎症应答基因:IL1B,IL8,IRAK2,MYD88,NFKB1,TLR1,TLR2,TLR3,TLR4,TLR6,TLR8,TNF。
I-kappaB/NF-kappaB串联正调控基因:
配体与受体基因:F2R,GPR89,HTR2B,LTBR,SLC20A1,TICAM2,TNFRSF1A,TNFRSF5,TNFSF10,TNFSF6,TRIF。膜分子基因:EDG2,GJA1,HMOX1,RHOA,VAPA。激酶基因:IKBKE,MAP3K3,MAP3K7IP2,PLK2,RIPK1,RIPK2,TBK1。其它基因:APOL3,BCL10,BIRC2,CARD4,CASP1,CASP8,CFLAR,CTL2,CXXC5,ECM1,FADD,HNLF,LITAF,MALT1,PPM1A,PPP5C,REL,RFP2,RHOC,TRADD,TRAF5,TRAF6。
NF-kappaB通路相关因子基因:
胞外分子基因:BF,CSF2,CSF3,IFNA1,IFNB1,IFNG,IL1A,IL6。配体与受体基因:AGT,C3,CCL2,ICAM1,IL1R1,LTA,MAP3K7IP1,RAF1,TLR10,TLR7,TLR9。激酶基因:AKT1,CCL2,MAP3K1,MAPK3,MAPK8,RAF1。转录因子基因:ATF1,ATF2,EGR1,ELK1,FOS,JUN,NFKB2,RELB,TNFAIP3。炎症应答基因:C3,CCL2,FOS,IL1A,IL1R1,TLR10,TLR7,TLR9。
三组NFkB信号转导芯片经过分析比较,不同组间基因上、下调有显著差异:造模与对照组相比较有42条基因有显著差异,其中41条基因显示H2O2对其有显著的上调作用:
Figure G07124566820070725D000101
Figure G07124566820070725D000111
Figure G07124566820070725D000121
麦冬组与模型组相比较有47条基因有显著差异,其中46条基因显示麦冬皂苷D可对抗H2O2的上调作用,对其有显著的下调作用:
Figure G07124566820070725D000131
Figure G07124566820070725D000141
Figure G07124566820070725D000151
3.讨论
人NFkB信号通路基因芯片包括120条NFkB介导的信号转导通路基因。即编码Rel,NFkB,and IkB家族、NFkB应答基因、胞外激活配体与受体的基因、传导信号的激酶与转录因子、可能与病毒复制、自身免疫疾病、炎症反应、肿瘤发生与凋亡调节有关的NFkB介导的信号转导基因。
检测结果显示H2O2可以上调NFkB介导的信号转导通路相关基因,包括:AKT1、APOL3、BCL3、BF、BIRC2、CARD10、CTL2、ECM1、EGR1、FADD、GPR89、HNLF、IFNG、IKBKB、IKBKG、IL1R1、IL6、JUN、LTBR、MAP2K3、MAP2K4、MAP2K6、MAP3K14、MAP3K7、MAP3K7IP1、MAPK3、MYD88、NFKB1、PPP5C、RAF1、RELA、RELB、RFP2、RIPK2、TLR8、TNFAIP3、TNFRSF10A、TNFRSF10B、TNFRSF1A、TRADD、TRIF、而麦冬皂苷D可以下调上述除ECM1、RELA、RELB、TNFRSF1A四条基因以外的其它基因,并下调其它基因,包括CSF3、F2R、HTR2B、IFNA1、IFNG、LITAF、MAP3K7IP2、NFKBIA、PLK2、TLR1。
H2O2可以下调NFkB介导的信号转导通路相关的一条基因NALP12,而麦冬皂苷D则可上调该通路相关的一条基因TBK1。
可见H2O2损伤HUVEC及麦冬皂苷D的保护作用是与NFkB信号通路的调控密切相关。

Claims (1)

1.麦冬皂苷D在制备调控血管内皮细胞信号转导基因药物中的应用,其中,麦冬皂苷D可对抗H2O2的作用,下调NFkB介导的信号转导通路相关基因:AKT1、APOL3、BCL3、BF、BIRC2、CARD10、CTL2、EGR1、FADD、GPR89、HNLF、IFNG、IKBKB、IKBKG、IL1R1、IL6、JUN、LTBR、MAP2K3、MAP2K4、MAP2K6、MAP3K14、MAP3K7、MAP3K7IP1、MAPK3、MYD88、NFKB1、PPP5C、RAF1、RFP2、RIPK2、TLR8、TNFAIP3、TNFRSF10A、TNFRSF10B、TRADD、TRIF,并下调其它H2O2未调控的基因:CSF3、F2R、HTR2B、IFNA1、IFNG、LITAF、MAP3K7IP2、NFKBIA、PLK2、TLR1;H2O2可以下调NFkB介导的信号转导通路相关的一条基因NALP12,而麦冬皂苷D可上调NFkB介导的信号转导通路相关的基因TBK1。
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范俊等.麦冬不同提取部位对过氧化氢所致血管内皮细胞损伤的保护作用.中国药理学与毒理学杂志第21卷 第2期.2007,第21卷(第2期),参见第132页左栏第6行至右栏第22行.
范俊等.麦冬不同提取部位对过氧化氢所致血管内皮细胞损伤的保护作用.中国药理学与毒理学杂志第21卷 第2期.2007,第21卷(第2期),参见第132页左栏第6行至右栏第22行. *

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