CN101073564B - 一种含l-谷氨酰胺的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种治疗癌症的药物组合物及其制备方法。该组合物主要由L-谷氨酰胺或其类似物和斑蝥素或其衍生物或其类似物、蟾酥、苦参碱、绞股蓝、通关藤中的一种或几种制成，也可由L-谷氨酰胺或其类似物和斑蝥素或其衍生物或类似物、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷或通关藤提取物的一种或几种制成，可以与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。该药物组合物可用于肝癌、胃癌、食道癌、直肠癌、淋巴肿瘤及生殖系统恶性肿瘤等多种癌症的治疗，协同增效，副作用小，产生了意想不到的效果，具有广阔的应用前景。

Description

一种含L-谷氨酰胺的药物组合物

1、技术领域

本发明涉及一种主要由L-谷氨酰胺或其类似物和斑蝥素或其衍生物或其类似物、蟾酥、苦参碱、绞股蓝、通关藤中的一种或几种组成的药物组合物及其制备方法，属于医药技术领域。

2、背景技术

肿瘤，尤其是恶性肿瘤(癌症)，是一类严重威胁人类生命和健康的疾病，死亡率极高。根据统计资料报道，我国每年新发现的癌症病人约100万左右，在全球癌症每年夺去大约600万人的生命，并把1000万人置于死亡的边缘。随着人类生存环境的日益恶化，癌症的发生率呈逐年上升趋势。世界卫生组织预测21世纪癌症将成为人类的“第一杀手”。目前，现代医学对癌症的治疗，主要是手术治疗配合放疗、化疗。手术虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝癌细胞的再生与繁殖，而这正是日后癌症复发和转移的根源；放疗、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝脏、肾脏、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以接受进一步治疗。中医中药治疗癌症有悠久的历史，其最重要的优势在于中药不良副作用通常较少或较轻微。不仅如此，还有许多抗肿瘤中药可以与化学合成药联用并显著减轻化学合成药的不良副作用。经过数十年的基础与临床研究，中医学在肿瘤治疗方面已经积累了相当丰富的知识和经验。已证实中医药治疗癌症具有抗癌抑瘤，提高机体免疫功能，降低放化疗毒副反应，调节机体阴阳平衡，提高带癌生存率及生存质量的突出作用，特别是对癌症手术后的康复，以及对放化疗的增效减毒方面有良好的作用，深受患者的欢迎。

L-谷氨酰胺是一种重要的营养物质，是体液内最丰富的氨基酸之一，占体内游离氨基酸库的61％，它是维持人体生理功能最重要的氨基酸。除参与蛋白质合成外，L-谷氨酰胺又能作为氮源参与核酸、氨基糖和氨基酸等的合成。医学研究表明，L-谷氨酰胺缺乏将引发起多种疾病，L-谷氨酰胺补充则对机体各种机能都有广泛而重要的影响。常用于治疗胃及十二指肠溃疡、胃炎及胃酸过多，也用于改善脑功能，可大量用于治疗运动员的运动综合症和高强度劳动或运动后的疲劳恢复，重建免疫系统，有利于治疗和支持肝脏功能，减少癌症治疗中的放疗和化疗的副作用等。但L-谷氨酰胺不稳定，其溶液既不耐热，又不耐贮存。与L-谷氨酰胺相比，L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-甘氨酰-L-谷氨酰胺较稳定，在细胞内水解产生L-谷氨酰胺，因此在大部分细胞系统中可以象L-谷氨酰胺同样有效地被利用。

斑蝥(Canthari)为芫菁科昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerala Pallas或黄黑小斑蝥Mylabris cichoriiLinnaeus的干燥全虫。主产于辽宁、河南、广西、安徽、江苏、湖南、贵州等地区，是一种重要的昆虫类药物。现代药学研究表明其主要药用成分是斑蝥素。临床上，斑蝥素在治疗癌症和一些疑难杂症方面显示出其独特的疗效，但因其毒性对心肾器官有实质性损伤，使斑蝥素在应用上受到很大限制。目前，随着人们对斑蝥素的深入研究，相继合成了多种斑蝥素衍生物，这些化合物较斑蝥素毒性大大降低，并且药理作用更加明确。现斑蝥素各衍生物均已收入国家化学原料药标准，去甲斑蝥素收载入化学药品地标升国标1册24页，斑蝥酸钠收载入化学药品地标升国标1册239页，甲基斑蝥胺收载入化学药品地标升国标6册47页。现代药理和临床研究均表明斑蝥素或其衍生物或类似物具有较强的抗肿瘤作用，且对机体没有明显的免疫抑制作用。斑蝥素或其衍生物或类似物结构式如下：

R＝CH₃，为斑蝥素                           R＝OH，为羟基斑蝥胺                      斑蝥酸钠

R＝H，为去甲斑蝥素                             R＝CH₃，为甲基斑蝥胺

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufobufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider等的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥而成的固体物，是重要的中药材。味甘、辛，性温，有毒，入心、胃经，有解毒、消肿、止痛、开窍、醒神之功效。其化学成分复杂，主要有效成分为蟾蜍毒素类、蟾毒配基类以及吲哚类总生物碱等。现代药理研究表明，其有抗癌、提高免疫功能、强心、升压、抗菌抗炎、止痛、兴奋呼吸等作用。现代临床将其用于癌症和白血病的治疗，效果显著。

苦参碱是从豆科槐属植物苦豆子(Sophora alopecuroides L.)果实或地上部分提取的一种生物碱。药理试验表明，苦参碱有明显的抗癌作用及诱导细胞分化的作用。大量的研究结果表明，苦参碱的抗肿瘤作用是多环节、多途径的，包括抗肿瘤增殖，诱导肿瘤细胞发生分化和凋亡，阻止肿瘤浸润和远处转移，抑制肿瘤新生血管形成，抑制肿瘤细胞与内皮细胞间的黏附，减轻致肿瘤炎症和抑制肿瘤耐药性，减低化疗不良作用，增强肿瘤宿主免疫功能，肿瘤预防性化疗等多个方面。苦参碱已有国家标准，见《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》第1册91页，目前已有苦参碱氯化钠注射液、苦参碱葡萄糖注射液、苦参碱注射液、注射用苦参碱等上市。其结构式如下：

苦参碱结构式

绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphylium(Thunb.)Mak.的干燥全草，又名七叶胆等。味苦、微甘，性寒；具有清热解毒，益气养阴，延缓衰老的功效。近年来，国内外研究发现，绞股蓝具有抗肿瘤作用，其抗肿瘤作用的有效化学成份主要为绞股蓝总苷。绞股蓝总苷能促进T、B淋巴细胞增殖和提高T淋巴细胞阳性率及白细胞介素-2生成，增强免疫机能；干扰细胞周期，抑制肿瘤生长；抑制有关代谢酶的活性，抗诱变。绞股蓝总苷已有国家标准，见《新药转正标准》第4册31页。

通关藤为萝藤科植物通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.的干燥藤茎，又名乌骨藤、大骨藤等。味苦，性微寒；具有清热解毒，化痰软坚的功效。药理试验表明通关藤有抗癌作用，其抗癌的主要有效成分为总酚酸，能干扰癌细胞核糖核酸及DNA的合成，阻止癌细胞分裂、繁殖，对多种恶性肿瘤均有良好疗效。

目前，利用L-谷氨酰胺或其类似物和斑蝥素或其衍生物或其类似物、蟾酥、苦参碱、绞股蓝、通关藤中的一种或多种相互作用，配伍组方，制备用于抗肿瘤方面的药物，尚未见报道。

3、发明内容

为了满足临床需要，更好的治疗肿瘤和提高肿瘤患者的生存质量，本发明提供了一种含有L-谷氨酰胺或其类似物的药物组合物及其制备方法，主要由L-谷氨酰胺或其类似物和至少一种用于抗肿瘤的药物制成，抗肿瘤的药物选自斑蝥素或其衍生物或其类似物、蟾酥、苦参碱、绞股蓝、通关藤中的一种或几种，既能显著抑制肿瘤生长，又能增强放化疗疗效，降低毒副反应，提高带瘤生存率及生存质量，产生了意想不到的效果。

上述药物组合物由下列重量份的原料药制成：L-谷氨酰胺或其类似物100～75000份，抗肿瘤的药物根据药物不同而不同，斑蝥素或其衍生物或其类似物0.02～5000份、蟾酥1～50份、苦参碱15～400份、绞股蓝400～10000份、通关藤400～10000份。

上述药物组合物原料药的重量份数优选为：L-谷氨酰胺或其类似物250～30000份，抗肿瘤的药物根据药物不同而不同，斑蝥素或其衍生物或其类似物0.05～2000份、蟾酥4～16份、苦参碱40～160份、绞股蓝1000～5000份、通关藤1000～5000份。

上述药物组合物原料药的重量份数进一步优选为：L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份，抗肿瘤的药物根据药物不同而不同，斑蝥素或其衍生物或其类似物0.1～1000份、蟾酥8份、苦参碱80份、绞股蓝2000份、通关藤2000份。

上述药物组合物原料药的组成及重量份数特别优选为：L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、斑蝥素或其衍生物或其类似物0.1～1000份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、蟾酥8份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、苦参碱80份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、绞股蓝2000份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、通关藤2000份。

上述药物组合物中的蟾酥、绞股蓝、通关藤可以用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，蟾酥、绞股蓝、通关藤的单提物或混提物再与L-谷氨酰胺或其类似物或再加上斑蝥素或其衍生物或其类似物或者苦参碱以及药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。其中，蟾酥提取物中的主要有效成分为吲哚类总生物碱、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基，绞股蓝提取物的主要有效成分为绞股蓝总苷，通关藤提取物的主要有效成分为通关藤总酚酸，总提取物中主要有效成分总的含量不低于10％。

本发明药物组合物中的蟾酥可以用适宜的溶剂经过提取加工得到蟾酥提取物，提取溶剂优选水或乙醇，蟾酥的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

本发明提供了一种优选的蟾酥提取工艺，具体如下：

取蟾酥，粉碎成细粉，加适量的水研磨成糊状，再加20倍量乙醇，搅匀，浸泡，冷藏过夜，次日滤过，滤液回收乙醇至无醇味，再加10倍量水搅匀，冷藏，静置24小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的蟾酥提取物的得率为5.0～6.0％，其中吲哚类总生物碱的含量不低于10％，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量不低于30％。

蟾酥除采用上述方法提取外，还可通过以下方法提取制备，但不仅限于下述方法：

方法一：取蟾酥，粉碎成细粉，加适量的水研磨成糊状，再加15倍量90％乙醇，搅匀，浸泡1小时后，回流提取二次，第一次提取2小时，第二次加10倍量90％乙醇回流1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加10倍量的水，搅拌，冷藏静置24小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.08～1.15，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的蟾酥提取物的得率为6.0～7.0％，其中吲哚类总生物碱的含量不低于4％，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量不低于20％。

方法二：取蟾酥，粉碎成细粉置渗漉器皿中，加80％乙醇10倍量浸泡过夜，次日添加乙醇渗漉至无色，再用75％的乙醇渗漉至无色，合并渗漉液，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.10～1.20，放冷，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的蟾酥提取物的得率为6.5～7.5％，其中吲哚类总生物碱的含量不低于2％，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量不低于10％。

本发明药物组合物中的绞股蓝可以用适宜的溶剂经过提取加工得到绞股蓝提取物，提取溶剂优选水或乙醇，绞股蓝的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

本发明提供了一种优选的绞股蓝提取工艺，具体如下：

取绞股蓝药材，加75％的乙醇回流提取二次，每次加醇10倍量，提取2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水使成每1ml相当于2g生药量的溶液，搅匀，冷藏，静置过夜，滤过，滤液加1.5倍量水饱和的正丁醇液萃取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，水浴蒸干后用适量的水溶解，加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2倍柱体积的水冲柱，再用3倍柱体积的10％～30％乙醇冲柱除杂，再用3倍柱体积的60％～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08～1.10的浓缩液，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的绞股蓝提取物的得率为2％～3％，绞股蓝总苷的含量不低于80％。

绞股蓝除采用上述方法提取外，还可通过以下方法提取制备，但不仅限于下述方法：

方法一：取绞股蓝药材，加80％乙醇回流提取二次，每次加醇10倍量，提取2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水适量，搅匀，放冷，静置过夜，滤过，滤液加1倍量水饱和的正丁醇液萃取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，水浴蒸干后用适量的水溶解，通过已处理好的中型氧化铝柱上，先用2倍柱体积的水冲柱，弃去水液，再用3倍柱体积的20％乙醇冲柱除杂，再用3倍柱体积的70％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.09～1.10，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制得的绞股蓝提取物的得率为3～4％，绞股蓝总苷的含量不低于70％。

方法二：取绞股蓝药材，加80％乙醇回流提取二次，每次3小时，第一次加醇10倍量，第二次加醇8倍量，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水适量，搅匀，放置过夜，滤过，滤液加2倍量水饱和的正丁醇液萃取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥，即得。

通过本工艺通过本工艺制得的绞股蓝提取物得率为4～5.5％，绞股蓝总苷的含量不低于60％。

本发明药物组合物中的通关藤可以用适宜的溶剂经过提取加工得到通关藤提取物，提取溶剂优选水或乙醇，通关藤的提取方法可以为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

本发明提供了一种优选的通关藤提取工艺，具体如下：

取通关藤药材，加水煎煮三次，第一次提取1.5小时，加水10倍量，第二、三次提取1小时，加水8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加85％乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，再加乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置48小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.09～1.12，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的通关藤提取物的得率为0.5～2％，通关藤总酚酸的含量不低于30％。

通关藤除采用上述方法提取外，还可通过以下方法提取制备，但不仅限于下述方法：

方法一：取通关藤药材，加水煎煮三次，第一次提取1.5小时，加水10倍量，第二、三次提取1小时，加水8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加70％乙醇10倍量，搅匀，冷藏放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加80％乙醇8倍量，搅匀，冷藏放置48小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.12，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的通关藤提取物得率为2～3.5％，通关藤总酚酸的含量不低于25％。

方法二：取通关藤药材，加水煎煮二次，每次2小时，加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.08～1.11，加乙醇至含醇量为75％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.09～1.12，喷雾干燥，即得。

通过本工艺制备的通关藤提取物得率为4～6％，通关藤总酚酸的含量不低于15％。

本发明药物组合物还可以由L-谷氨酰胺或其类似物和斑蝥素或其衍生物或类似物、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷或通关藤提取物的一种或几种直接投料制成，按照提取物相对于药材的得率计算，其重量份数为：L-谷氨酰胺或其类似物100～75000份，抗肿瘤的药物根据药物不同而不同，斑蝥素或其衍生物或其类似物0.02～5000份、蟾酥提取物0.1～5份、苦参碱15～400份、绞股蓝总苷5～300份、通关藤提取物2～200份。

上述药物组合物，其原料药的重量份数优选为：L-谷氨酰胺或其类似物250～30000份，抗肿瘤的药物根据药物不同而不同，斑蝥素或其衍生物或其类似物0.05～2000份、蟾酥提取物0.2～1份、苦参碱40～160份、绞股蓝总苷20～120份、通关藤提取物5～100份。

上述药物组合物，其原料药的重量份数进一步优选为：L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份，抗肿瘤的药物根据药物不同而不同，斑蝥素或其衍生物或其类似物0.1～1000份、蟾酥提取物0.4～0.5份、苦参碱80份、绞股蓝总40～60份、通关藤提取物10～40份。

上述药物组合物原料药的组成及重量份数特别优选为：L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、斑蝥素或其衍生物或其类似物0.1～1000份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、蟾酥提取物0.4～0.5份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、苦参碱80份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、绞股蓝总苷40～60份，或L-谷氨酰胺或其类似物500～15000份、通关藤提取物10～40份。

所述的斑蝥素衍生物或其类似物为去甲斑蝥素、斑蝥酸钠、甲基斑蝥胺、羟基斑蝥胺，优选为去甲斑蝥素，优选份数为10份。绞股蓝总苷已有国家标准，也有多家厂家生产上市，可直接市购投料。

上述药物组合物中蟾酥提取物中吲哚类生物碱的含量不低于2％，最好不低于10％，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量不低于10％，最好不低于30％；绞股蓝总苷中总苷的含量不低于60％，最好不低于80％；通关藤提取物中总酚酸的含量不低于15％，最好不低于30％。

以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间的重量配比不变。以上组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片。

以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。

本发明药物组合物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。

本发明药物组合物既能直接杀伤肿瘤细胞，又能增强免疫机能，干扰细胞周期，抑制肿瘤生长，抑制有关代谢酶的活性，抗诱变。可以用于治疗肝癌、胃癌、食道癌、直肠癌、淋巴肿瘤及生殖系统恶性肿瘤等多种肿瘤的治疗。

本发明药物组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物的优选的剂型是注射剂或口服制剂。

本发明药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

本发明药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。

本发明药物组合物具有以下优点：

(1)提供了一种新的用于抗肿瘤的药物组合物及其制备方法，满足了临床急需；

(2)对L-谷氨酰胺或其类似物和斑蝥素或其衍生物或其类似物、蟾酥或其提取物、苦参碱、绞股蓝或绞股蓝总苷、通关藤或通关藤提取物中的任一一种的配伍组方进行了药理研究，发现了组合物具有明显的抗肿瘤作用和放疗、化疗增效作用，对S₁₈₀肉瘤的抑瘤率超过了50％，对腹水癌U₁₄小鼠生命延长率40％，对化疗的抑瘤增效率超过35％，对放疗的抑瘤增效率超过35％，表明本发明组合物能显著提高抗肿瘤效果，疗效显著(p＜0.05)，其结果是本技术领域的普通技术人员所意想不到的；

(3)本发明可以以原料或提取物投料，制备工艺简单，不同批次药品间质量差异小，药品质量均匀稳定；

(4)进行的稳定性实验表明本发明药物组合物注射液各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全；

(5)斑蝥素或其衍生物或其类似物、蟾酥或其提取物、苦参碱能杀伤肿瘤细胞，绞股蓝或绞股蓝总苷、通关藤或通关藤提取物能提高免疫力，也能干扰细胞周期，抑制肿瘤生长，增强免疫机能，L-谷氨酰胺或其类似物有很好的营养作用，能提高免疫力，减小毒副作用、缓和药性，合并用药疗效确切，且减小了用药剂量，具有广泛的应用前景。

以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。下列实验例中：L-谷氨酰胺或其类似物和去甲斑蝥素的药物组合物简称LQ组合物，L-谷氨酰胺或其类似物和蟾酥提取物的药物组合物简称LC组合物，L-谷氨酰胺或其类似物和苦参碱的药物组合物简称LK组合物，L-谷氨酰胺或其类似物和绞股蓝总苷的药物组合物简称LG组合物，L-谷氨酰胺或其类似物和通关藤提取物的药物组合物简称LT组合物。实验例中所用的蟾酥提取物取自实施例1，绞股蓝总苷市购，通关藤提取物取自实施例3。

实验例1  本发明药物组合物对S ₁₈₀ 实体瘤生长的影响

供试品：

空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

L-谷氨酰胺组：N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液(哈尔滨三联药业有限公司)，规格100ml:20g；

去甲斑蝥素组：去甲斑蝥酸钠注射液(南通精华制药有限公司)，规格2ml:10mg；

蟾酥提取物组：蟾酥注射液，自制，2ml:蟾酥提取物0.44mg(相当于原药材8mg)；

苦参碱组：苦参碱注射液(广州白云山明兴制药有限公司)，规格5ml:50mg；

绞股蓝总苷组：绞股蓝总苷注射液，自制，2ml:绞股蓝总苷50mg；

通关藤提取物注射液：自制，2ml:通关藤提取物19mg(相当于原药材2g)；

LQ组合物组：LQ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方1)；

LC组合物组：LC组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方2)；

LK组合物组：LK组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方3)；

LJ组合物组：LJ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方4)；

LT组合物组：LT组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方5)。

受试动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，220只，随机分为22组。

瘤种：S₁₈₀瘤液。

实验方法：取ICR小鼠，左前肢腋下皮下接种S₁₈₀肉瘤细胞悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.2ml/只)。接种次日，小鼠随机分组，称量体重，按表1腹腔注射给药，每日1次，连续10天。末次给药后24h处死小鼠，称量体重，并剥离皮下瘤块，称取瘤体重量，计算肿瘤抑制率【抑瘤率＝(对照组平均瘤重-试验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％】。

实验结果：见表1。

(1)与空白对照组相比，L-谷氨酰胺组能明显抑制肿瘤生长(p＜0.05)，去甲斑蝥素组、蟾酥提取物组、苦参碱组、绞股蓝总苷组、通关藤提取物组均能显著抑制肿瘤生长(p＜0.01)，LQ、LC、LK、LJ、LT各组合物的各剂量组均能极显著抑制肿瘤生长(p＜0.001)。

(2)与L-谷氨酰胺组相比，LQ、LC、LK、LJ、LT各组合物的各剂量组均能够显著抑制肿瘤的生长(p＜0.01)。

(3)与去甲斑蝥素组相比，LQ组合物各剂量组均能明显抑制肿瘤生长(p＜0.05)；与蟾酥提取物组相比，LC组合物各剂量组均能明显抑制肿瘤生长(p＜0.05)；与苦参碱组相比，LK组合物各剂量组均能明显抑制肿瘤生长(p＜0.05)；与绞股蓝总苷组相比，LJ组合物各剂量组均能明显抑制肿瘤生长(p＜0.05)；与通关藤提取物组相比，LT组合物各剂量组均能明显抑制肿瘤生长(p＜0.05)。

表1  本发明药物组合物对S₁₈₀实体瘤生长的影响(X±SD)

注：^*p＜0.05、^**p＜0.01、^***p＜0.001，与空白对照组相比；^Δp＜0.01，与L-谷氨酰胺组相比；^#p＜0.05，与去甲斑蝥素组相比；^$p＜0.05，与蟾酥提取物组相比；^％p＜0.05，与苦参碱组比；^p＜0.05，与绞股蓝总苷组相比；^&p＜0.05，与通关藤提取物组相比。

结论：各给药组均具有明显的抑制S₁₈₀肿瘤生长的作用(p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001)，与单用L-谷氨酰胺、去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物相比，LQ、LC、LK、LJ、LT各组合物的抗肿瘤作用明显增强，说明各抗肿瘤药物与L-谷氨酰胺合用，治中有补，补中有治，协同增效，效果显著。

实验例2  本发明药物组合物对腹水癌U ₁₄ 小鼠生命延长率的影响

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

L-谷氨酰胺组：N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液(哈尔滨三联药业有限公司)，规格100ml:20g；

去甲斑蝥素组：去甲斑蝥酸钠注射液(南通精华制药有限公司)，规格2ml:10mg；

蟾酥提取物组：蟾酥注射液，自制，2ml:蟾酥提取物0.44mg(相当于原药材8mg)；

苦参碱组：苦参碱注射液(广州白云山明兴制药有限公司)，规格5ml:50mg；

绞股蓝总苷组：绞股蓝总苷注射液，自制，2ml:绞股蓝总苷50mg；

通关藤提取物注射液：自制，2ml:通关藤提取物19mg(相当于原药材2g)；

LQ组合物组：LQ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方1)；

LC组合物组：LC组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方2)；

LK组合物组：LK组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方3)；

LJ组合物组：LJ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方4)；

LT组合物组：LT组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方5)。

受试动物：健康小鼠，220只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为22组，每组10只。

瘤株：小鼠腹水癌U₁₄

试验方法：小鼠腹腔接种腹水癌U₁₄瘤株菌悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.5ml/只)。接种次日，小鼠随机分组，称量体重，按表2腹腔注射给药，每日1次，连续10天。此后观察小鼠的死亡时间，结果用平均存活天数和生命延长率表示【生命延长率＝(试验组平均生存天数-对照组平均生存天数)/对照组平均生存天数×100％】。

表2  本发明药物组合物对腹水癌U₁₄小鼠生命延长率的影响(x±s，n＝10)

注：^*p＜0.05、^**p＜0.01、^***p＜0.001，与空白对照组相比；^#p＜0.01，与L-谷氨酰胺组相比；^ap＜0.01，与去甲斑蝥素组相比；^bp＜0.01，与蟾酥提取物组相比；^cp＜0.01，与苦参碱组相比；^dp＜0.01，与绞股蓝总苷组相比；^ep＜0.01，与通关藤提取物组相比。

实验结果：见表2。

(1)与空白对照组相比，L-谷氨酰胺组能明显延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.05)，去甲斑蝥素组、蟾酥提取物组、苦参碱组、绞股蓝总苷组、通关藤提取物组均能显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.01)，LQ、LC、LK、LJ、LT各组合物的各剂量组均能极显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.001)。

(2)与L-谷氨酰胺组相比，LQ、LC、LK、LJ、LT各组合物的各剂量组均能显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.01)。

(3)与去甲斑蝥素组相比，LQ组合物各剂量组均能显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.01)；与蟾酥提取物组相比，LC组合物各剂量组均能显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.01)；与苦参碱组相比，LK组合物各剂量组均能显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.01)；与绞股蓝总苷组相比，LJ组合物各剂量组均能显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.01)；与通关藤提取物组相比，LT组合物各剂量组均能显著延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.01)。

结论：各给药组均能明显的延长腹水癌U₁₄小鼠生存天数(p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001)，与单用L-谷氨酰胺、去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物相比，LQ、LC、LK、LJ、LT各组合物对腹水癌U₁₄小鼠的生命延长率显著增强，说明各抗肿瘤药物与L-谷氨酰胺合用，协同增效，抗癌效果更加显著。

实验例3  本发明药物组合物对化疗的增效作用和减毒的作用

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

CTX对照组：环磷酰胺注射液，自制；

CTX+L-谷氨酰胺组：N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液(哈尔滨三联药业有限公司)，规格100ml:20g；

CTX+去甲斑蝥素组：去甲斑蝥酸钠注射液(南通精华制药有限公司)，规格2ml:10mg；

CTX+蟾酥提取物组：蟾酥注射液，自制，2ml:蟾酥提取物0.44mg(相当于原药材8mg)；

CTX+苦参碱组：苦参碱注射液(广州白云山明兴制药有限公司)，规格5ml:50mg；

CTX+绞股蓝总苷组：绞股蓝总苷注射液，自制，2ml:绞股蓝总苷50mg；

CTX+通关藤提取物注射液：自制，2ml:通关藤提取物19mg(相当于原药材2g)；

CTX+LQ组合物组：LQ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方1)；

CTX+LC组合物组：LC组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方2)；

CTX+LK组合物组：LK组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方3)；

CTX+LJ组合物组：LJ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方4)；

CTX+LT组合物组：LT组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方5)。

受试动物：健康小鼠，230只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为23组，每组10只。

瘤株：小鼠肝癌H₂₂。

实验方法：每只小鼠左前肢腋下皮下接种H₂₂瘤株细胞悬液(悬液浓度0.3g/ml，接种量0.01ml/g)。接种次日，小鼠随机分为23个组，称量体重，按表3腹腔注射给药，给药剂量见表3，隔日1次，连续10天。每天称量体重，观察荷瘤鼠体重变化，末次给药后24h眼眶采血，计数外周白细胞(WBC)数目；随即处死，剥离皮下瘤块，称取瘤体重量，计算抑瘤率及增效率【增效率＝(放疗组平均瘤重-放疗与KJ组合物注射液联合治疗组平均瘤重)/放疗组平均瘤重×100％】；解剖分离胸腺、脾脏及靶器官，称重并计算脏器指数。结果见表3。

表3  本发明药物组合物对化疗的增效和减毒的作用(X±SD)

注：^*p＜0.05、^**p＜0.01、^***p＜0.001，与空白对照组相比；^#p＜0.05、^##＜0.01，与CTX对照组相比；^ap＜0.05、^aap＜0.01，与CTX+L-谷氨酰胺组相比；^bp＜0.05、^bbp＜0.01与CTX+去甲斑蝥素组相比；^cp＜0.05、^ccp＜0.01，与CTX+蟾酥提取物组相比；^dp＜0.05、^ddp＜0.01，与CTX+苦参碱组相比；^ep＜0.05、^eep＜0.01，与CTX+绞股蓝总苷组相比；^fp＜0.05、^ffp＜0.01，与CTX+通关藤提取物组相比。

实验结果：见表3。

(1)对化疗的增效作用：与空白对照组相比，低剂量环磷酰胺单独用药对小鼠肝癌H₂₂有明显的抑制作用(p＜0.05)；环磷酰胺与L-谷氨酰胺、去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物联合用药对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)；环磷酰胺与LQ、LC、LK、LJ、LT各三个不同剂量的各组合物联合用药对小鼠肝癌H₂₂有极显著的抑制作用(p＜0.001)；与环磷酰胺组相比，环磷酰胺与去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物联合用药对小鼠肝癌H₂₂有明显的抑制作用(p＜0.05)，环磷酰胺与LQ、LC、LK、LJ、LT各三个不同剂量的各组合物联合用药对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)。与CTX+L-谷氨酰胺组相比，CTX+LQ、CTX+LC、CTX+LK、CTX+LJ、CTX+LT各剂量组对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)；与CTX+去甲斑蝥素组相比，CTX+LQ各剂量组对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)；与CTX+蟾酥提取物组相比，CTX+LC各剂量组对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)；与CTX+苦参碱组相比，CTX+LK各剂量组对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)；与CTX+绞股蓝总苷组相比，CTX+LJ各剂量组对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)；与CTX+通关藤提取物组相比，CTX+LT各剂量组对小鼠肝癌H₂₂有显著的抑制作用(p＜0.01)。

(2)对化疗的减毒作用：与空白对照组相比较，环磷酰胺单独用药时，小鼠的外周白细胞数、脾指数均极显著降低(p＜0.01)。与环磷酰胺组相比较，环磷酰胺与L-谷氨酰胺、去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物联合用药可以明显抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.05)，环磷酰胺与LQ、LC、LK、LJ、LT各三个不同剂量的各组合物联合用药可以显著抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.01)。与CTX+L-谷氨酰胺组相比，CTX+LQ、CTX+LC、CTX+LK、CTX+LJ、CTX+LT各剂量组可以明显抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.05)；与CTX+去甲斑蝥素组相比，CTX+LQ各剂量组可以明显抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.05)；与CTX+蟾酥提取物组相比，CTX+LC各剂量组可以明显抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.05)；与CTX+苦参碱组相比，CTX+LK各剂量组可以明显抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.05)；与CTX+绞股蓝总苷组相比，CTX+LJ各剂量组可以明显抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.05)；与CTX+通关藤提取物组相比，CTX+LT各剂量组可以明显抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低(p＜0.05)。

结论：L-谷氨酰胺、去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物与环磷酰胺联合用药可增强化疗疗效，LQ、LC、LK、LJ、LT各剂量组与环磷酰胺联合用药化疗疗效增强更加显著，提示L-谷氨酰胺与去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物中的一种或多种联合用药再配合环磷酰胺，具有增强化疗疗效的作用，且可抑制小鼠外周白细胞数、脾指数的降低，降低化疗副作用，显示了组合物配合化疗治疗癌症的优势。

实验例4  本发明药物组合物对放疗的增效作用

供试品：空白对照组：0.9％生理盐水注射液，自制；

⁶⁰Co照射组：⁶⁰Co照射；

⁶⁰Co+L-谷氨酰胺组：N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液(哈尔滨三联药业有限公司)，规格100ml:20g；

⁶⁰Co+去甲斑蝥素组：去甲斑蝥酸钠注射液(南通精华制药有限公司)，规格2ml:10mg；

⁶⁰Co+蟾酥提取物组：蟾酥注射液，自制，2ml:蟾酥提取物0.44mg(相当于原药材8mg)；

⁶⁰Co+苦参碱组：苦参碱注射液(广州白云山明兴制药有限公司)，规格5ml:50mg.

⁶⁰Co+绞股蓝总苷组：绞股蓝总苷注射液，自制，2ml:绞股蓝总苷50mg；

⁶⁰Co+通关藤提取物注射液：自制，2ml:通关藤提取物19mg(相当于原药材2g)；

⁶⁰Co+LQ组合物组：LQ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方1)；

⁶⁰Co+LC组合物组：LC组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方2)；

⁶⁰Co+LK组合物组：LK组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方3)；

⁶⁰Co+LJ组合物组：LJ组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方4)；

⁶⁰Co+LT组合物组：LT组合物注射液高、中、低三个剂量组，自制(制备方法参见实施例5处方5)。

受试动物：ICR种小鼠，体重18～22g，雄性，230只，随机分为23组，每组10只。

瘤种：S₁₈₀瘤液。

实验方法：取ICR小鼠230只，均皮下接种S₁₈₀瘤液(2×10⁷/ml)0.2ml/只，次日随机分为23组，称量体重。除空白对照组外，其余各组均在接种后第3、第6天用⁶⁰Co全身照射，照射剂量为0.05Gy/min。给药组次日灌胃给药，给药剂量见表4，共10天，停药次日称体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率和增效率。结果见表4。

实验结果：见表4。

(1)与空白对照组相比，⁶⁰Co照射与L-谷氨酰胺、去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物联合治疗对小鼠S₁₈₀瘤有明显的抑制作用(p＜0.05)；⁶⁰Co照射与LQ、LC、LK、LJ、LT各三个不同剂量的各组合物联合治疗小鼠S₁₈₀瘤，其抑制肿瘤生长作用显著(p＜0.01)。

(2)与⁶⁰Co照射组相比，⁶⁰Co与LQ、LC、LK、LJ、LT各三个不同剂量的各组合物联合用药对小鼠S₁₈₀瘤生长的抑制作用明显提高(p＜0.05)。

(3)与⁶⁰Co+L-谷氨酰胺组相比，⁶⁰Co+LQ、⁶⁰Co+LC、⁶⁰Co+LK、⁶⁰Co+LJ、⁶⁰Co+LT各剂量组对小鼠S₁₈₀瘤生长的抑制作用明显提高(p＜0.05)。

(4)与⁶⁰Co+去甲斑蝥素组相比，⁶⁰Co+LQ各剂量组对小鼠S₁₈₀瘤生长的抑制作用明显提高(p＜0.05)。

(5)与⁶⁰Co+蟾酥提取物组相比，⁶⁰Co+LC各剂量组对小鼠S₁₈₀瘤生长的抑制作用明显提高(p＜0.05)。

(6)与⁶⁰Co+苦参碱组相比，⁶⁰Co+LK各剂量组对小鼠S₁₈₀瘤生长的抑制作用明显提高(p＜0.05)。

(7)与⁶⁰Co+绞股蓝总苷组相比，⁶⁰Co+LJ各剂量组对小鼠S₁₈₀瘤生长的抑制作用明显提高(p＜0.05)。

(8)与⁶⁰Co+通关藤提取物组相比，⁶⁰Co+LT各剂量组对小鼠S₁₈₀瘤生长的抑制作用明显提高(p＜0.05)。

表4 本发明药物组合物对放疗的增效作用(X±SD)

注：^*p＜0.05、^**p＜0.01，与空白对照组相比；^#p＜0.05，与⁶⁰Co照射组相比；^ap＜0.05，与⁶⁰Co+L-谷氨酰胺组相比；^bp＜0.05，与⁶⁰Co+去甲斑蝥素组相比；^cp＜0.05，与⁶⁰Co+蟾酥提取物组相比；^dp＜0.05，与⁶⁰Co+苦参碱组相比；^ep＜0.05，与⁶⁰Co+绞股蓝总苷组相比；^fp＜0.05，与⁶⁰Co+通关藤提取物组相比。

结论：各给药组与放疗⁶⁰Co照射合用都有明显的放疗增效作用。其中，⁶⁰Co+LQ、⁶⁰Co+LC、⁶⁰Co+LK、⁶⁰Co+LJ、⁶⁰Co+LT各剂量组的作用都明显强于⁶⁰Co照射与L-谷氨酰胺、去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物各单味药联合治疗的效果。表明，L-谷氨酰胺与去甲斑蝥酸钠、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物配伍应用联合放疗⁶⁰Co照射有很好的放疗增效作用。

实验例5  本发明药物组合物注射液稳定性实验

供试品：

LQ组合物组：LQ组合物注射液，自制(制备方法和处方参见实施例5处方1)；

LC组合物组：LC组合物注射液，自制(制备方法和处方参见实施例5处方2)；

LK组合物组：LK组合物注射液，自制(制备方法和处方参见实施例5处方3)；

LJ组合物组：LJ组合物注射液，自制(制备方法和处方参见实施例5处方4)；

LT组合物组：LT组合物注射液，自制(制备方法和处方参见实施例5处方5)。

考察项目：性状、PH值、澄明度、有关物质、有效成分的含量；

长期稳定性实验方法及结果：将本品各组合物置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明本发明药物组合物注射液长期放置基本稳定。

4、具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例4～11中的实验例中所用的蟾酥提取物取自实施例1，绞股蓝总苷市购，通关藤提取物取自实施例3。

实施例1蟾酥提取物的制备以及含量测定

蟾酥提取物的制备

取蟾酥，粉碎成细粉，加适量的水研磨成糊状，再加20倍量乙醇，搅匀，浸泡，冷藏过夜，次日滤过，滤液回收乙醇至无醇味，再加10倍量水搅匀，冷藏，静置24小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥，即得。

蟾酥提取物的鉴别

取蟾酥提取物0.1g，加入乙醇10ml，加热回流30分钟，滤过，滤液置10ml量瓶中，加乙醇至刻度，作为供试品溶液。另取蟾酥对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取脂蟾毒配基对照品及华蟾酥毒基对照品，加乙醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，以环己烷-三氯甲烷-丙酮(4∶3∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至半点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个绿色及一个红色斑点。

蟾酥提取物吲哚类总生物碱成分的含量测定

对照品溶液的制备  精密称取置五氧化二磷干燥器中真空干燥24小时的5-羟色胺对照品约2.0mg，置50ml量瓶中，加水使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含5-羟色胺0.040mg)。

标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0ml，分别置10ml量瓶中，各加水至5.0ml，精密加入15％对二甲氨基苯甲醛盐酸(2→3)溶液至刻度，摇匀，室温(20℃以上)放置30分钟，照分光光度法试验，以相应的试剂为空白，在555nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法精密吸取本品0.5mg，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5.0ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中吲哚类总生物碱的含量，计算，即得。

蟾酥提取物中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.5％磷酸二氢钾溶液-乙腈(50∶50)(用磷酸调pH值为3.2)为流动相；检测波长为296nm柱温40℃。理论板数按华蟾酥毒基峰、脂蟾毒配基峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的华蟾酥毒基对照品、脂蟾毒配基对照品各10mg，分别置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取5ml，各置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含华蟾酥毒基、脂蟾毒配基各50μl)。

供试品溶液的制备  取本品2mg，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

测定法  分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

对通过本工艺制得的三批蟾酥提取物进行含量测定，结果见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的蟾酥提取物得率为5.0％～6.0％，吲哚类总生物碱含量不低于10％，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量不低于30％。

表5  三批蟾酥提取物的含量测定结果和得率

实施例2  绞股蓝总苷的制备以及含量测定

绞股蓝总苷的制备

取绞股蓝药材，加75％的乙醇回流提取二次，每次加醇10倍量，提取2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水使成每1ml相当于2g生药量的溶液，搅匀，冷藏，静置过夜，滤过，滤液加1.5倍量水饱和的正丁醇液萃取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，水浴蒸干后用适量的水溶解，加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2倍柱体积的水冲柱，再用3倍柱体积的10％～30％乙醇冲柱除杂，再用3倍柱体积的60％～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.08～1.10的浓缩液，喷雾干燥，即得。

绞股蓝总苷的鉴别

取绞股蓝总苷0.5g，加甲醇溶解，制成每1ml含10mg的溶液，作为供试品溶溶液。另取绞股蓝皂苷-A对照品，加甲醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。薄层色谱法实验，吸取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，展距12cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点及荧光斑点。

绞股蓝总苷含量测定

对照品溶液的制备  精密称取在60℃减压干燥3小时的绞股蓝皂苷-A对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。

供试品溶液的制备  精密称取绞股蓝总苷50mg，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。

测定法  精密吸取对照品溶液及供试品溶液各100μl，分别置15ml具塞试管中，精密加入新配制的含5％香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)的混合液2ml，摇匀，密塞，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸10ml，摇匀，以试剂作空白，分光光度法，在555±5nm波长处测定吸收度，计算，即得。

对通过本工艺制得的三批绞股蓝总苷进行含量测定，结果见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的绞股蓝总苷得率为2％～3％，绞股蓝总苷的含量不低于80％。

表6  绞股蓝总苷的含量测定结果和得率

实施例3  通关藤提取物的制备以及含量测定

通关藤提取物的制备

取通关藤药材，加水煎煮三次，第一次提取1.5小时，加水10倍量，第二、三次提取1小时，加水8倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加85％乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，再加乙醇8倍量，搅匀，在4℃放置48小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.09～1.12，喷雾干燥，即得。

通关藤提取物的鉴别

取通关藤提取物50mg，加水20ml使溶解，加浓氨试液1ml，用氯仿振摇洗涤2次，每次20ml，弃去氯仿层，水层再用正丁醇振摇洗涤2次，每次15ml，弃去正丁醇层，取水层浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，放置，取上清液作为供试品溶液。另取通关藤对照药材2g，加水50ml，浸泡放置24小时，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，同法制成对照药材溶液。薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(15∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

通关藤提取物的含量测定

对照品溶液的制备  取绿原酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品50mg，加乙醇25ml，摇匀，取2ml，加乙醇至25ml，摇匀，即得。

测定法  精密吸取供试品溶液、对照品溶液、乙醇各2ml，分别置25ml具塞刻度试管中，加无水乙醇至5ml，再分别精密加入0.3％十二烷基硫酸钠溶液2ml、0.5％铁氰化钾-1％三氯化铁(1∶1)混合溶液2ml，摇匀，暗处放置5分钟，加0.1mol/L盐酸溶液至25ml，摇匀，暗处放置20分钟，以上述乙醇管为空白，分光光度法，分别在764nm的波长处测定吸收度，计算，即得。

对通过本工艺制得的三批通关藤提取物进行含量测定，结果见下表。由结果可以看出，通过本工艺制备的通关藤提取物得率为0.5～2％，通关藤总酚酸的含量不低于30％。

表7  通关藤提取物的含量测定结果和得率

实施例4  本发明药物组合物粉针剂的制备

1、处方：

LQ组合物处方1

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺        15kg

去甲斑蝥素                      10g

氢氧化钠                        5g

无菌注射用水                    加至60000ml

共制备                          1000支

LC组合物处方2

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺        15kg

蟾酥提取物                      0.44g(相当于原药材8g)

无菌注射用水                    加至60000ml

共制备                          1000支

LK组合物处方3

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺        15kg    

苦参碱                          80g

无菌注射用水                    加至60000ml

共制备                          1000支

LJ组合物处方4

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺        15kg

绞股蓝总苷                      50g

聚山梨酯80                      100g

无菌注射用水                    加至60000ml

共制备                          1000支

LT组合物处方5

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺        15kg

通关藤提取物                    19g(相当于原药材2kg)

聚山梨酯80                      100g

无菌注射用水                    加至60000ml

共制备                          1000支

2、具体步骤：

1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)取配液量70％的无菌注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全(如不需要添加，则省略此步骤)，再加入处方量的N(2)-L-丙氨酰-和蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物，搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量。处方1先将去甲斑蝥素、氢氧化钠用适量的注射用水溶解，再加入L-谷氨酰胺搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量。

4)加入配液量0.05％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.22um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-50℃6小时，低温真空干燥-50℃～0℃60小时，然后升温至25℃真空干燥6小时。

9)冻干结束，压塞，轧盖。

10)成品全检，包装入库。

实施例5  本发明药物组合物水针剂的制备

1、处方：

LQ组合物处方1

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    5kg

去甲斑蝥素                  3.33g

氢氧化钠                    2g

注射用水                    加至20000ml

共制备                      1000支

LC组合物处方2

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    5kg

蟾酥提取物                  0.15g(相当于原药材2.67g)

注射用水                    加至20000ml

共制备                      1000支

LK组合物处方3

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    5kg

苦参碱                      26.67g

注射用水                    加至20000ml

共制备                      1000支

LJ组合物处方4

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺     5kg

绞股蓝总苷                   16.67g

聚山梨酯80                   100g

注射用水                     加至20000ml

共制备                       1000支

LT组合物处方5

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺     5kg

通关藤提取物                 6.33g(相当于原药材666.67g)

聚山梨酯80                   100g

注射用水                     加至20000ml

共制备                       1000支

2、具体步骤：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量70％的无菌注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全(如不需要添加，则省略此步骤)，再加入处方量的N(2)-L-丙氨酰-和蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物，搅拌溶解完全，补加注射用水至全量。处方1先将去甲斑蝥素、氢氧化钠用适量的注射用水溶解，再加入L-谷氨酰胺搅拌溶解完全，补加注射用水至全量。

3)加入配液量0.05％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

5)经0.45um的微孔滤膜精滤。

6)检查溶液的澄明度，半成品化验。

7)将溶液熔封于玻璃安瓿中。

8)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。

9)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例6  本发明药物组合物氯化钠输液的制备

1、处方：

LQ组合物处方1

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

去甲斑蝥素                  10g

氢氧化钠                    5g

氯化钠                      900g

注射用水                    加至100000ml

共制备                      1000瓶

LC组合物处方2

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺     15kg

蟾酥提取物                   0.44g(相当于原药材8g)

氯化钠                       900g

注射用水                     加至100000ml

共制备                       1000瓶

LK组合物处方3

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺     15kg

苦参碱                       80g

氯化钠                       900g

注射用水                     加至100000ml

共制备                       1000瓶

LJ组合物处方4

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺     15kg

绞股蓝总苷                   50g

聚山梨酯80                   100g

氯化钠                       900g

注射用水                     加至100000ml

共制备                       1000瓶

LT组合物处方5

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺     15kg

通关藤提取物                 19g(相当于原药材2kg)

聚山梨酯80                   100g

氯化钠                       900g

注射用水                     加至100000ml

共制备                       1000瓶

2、具体步骤：

1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量70％的无菌注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全(如不需要添加，则省略此步骤)，再加入处方量的N(2)-L-丙氨酰-和蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物，搅拌溶解完全，然后加入氯化钠搅拌溶解，补加注射用水至全量。处方1先将去甲斑蝥素、氢氧化钠用适量的注射用水溶解，再加入L-谷氨酰胺搅拌溶解完全，然后加入氯化钠搅拌溶解，补加注射用水至全量。

3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

5)经0.45um的微孔滤膜精滤。

6)检查溶液的澄明度，半成品化验。

7)灌装于100ml的输液瓶中。

8)115℃热压灭菌30分钟。

9)灯检，成品全检，包装入库。

实施例7  本发明药物组合物葡萄糖输液的制备

1、处方：

LQ组合物处方1

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

去甲斑蝥素                  10g

氢氧化钠                    5g    

葡萄糖                      5000g

注射用水                    加至100000ml

共制备                      1000瓶

LC组合物处方2

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

蟾酥提取物                  0.44g(相当于原药材8g)

葡萄糖                      5000g

注射用水                    加至100000ml

共制备                      1000瓶

LK组合物处方3

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

苦参碱                      80g

葡萄糖                      5000g  

注射用水                    加至100000ml

共制备                      1000瓶

LJ组合物处方4

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

绞股蓝总苷                  50g

聚山梨酯80                  100g

葡萄糖                      5000g

注射用水                    加至100000ml

共制备                      1000瓶

LT组合物处方5

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

通关藤提取物                19g(相当于原药材2kg)

聚山梨酯80                  100g

葡萄糖                      5000g

注射用水                    加至100000ml

共制备                      1000瓶

2、具体步骤：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量70％的无菌注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，(如不需要添加，则省略此步骤)，再加入处方量的N(2)-L-丙氨酰-和蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物，搅拌溶解完全，然后加入葡萄糖搅拌溶解，补加注射用水至全量。处方1先将去甲斑蝥素、氢氧化钠用适量的注射用水溶解，再加入L-谷氨酰胺搅拌溶解完全，然后加入葡萄糖搅拌溶解，补加注射用水至全量。

3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

5)经0.45um的微孔滤膜精滤。

6)检查溶液的澄明度，半成品化验。

7)灌装于100ml的输液瓶中。

8)115℃热压灭菌30分钟。

9)灯检，成品全检，包装入库。

实施例8  本发明药物组合物片剂的制备

1、处方：

LQ组合物处方1

L-谷氨酰胺            0.25kg

去甲斑蝥素            5g

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

微粉硅胶              15.0g

羧甲预胶化淀粉钠      25.0g

共制备                1000片

LC组合物处方2

L-谷氨酰胺            0.25kg

蟾酥提取物            0.22g(相当于原药材4g)

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

微粉硅胶              15.0g

羧甲预胶化淀粉钠      25.0g

共制备                1000片

LK组合物处方3

L-谷氨酰胺            0.25kg

苦参碱                40g

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

微粉硅胶              15.0g

羧甲预胶化淀粉钠      25.0g

共制备                1000片

LJ组合物处方4

L-谷氨酰胺            0.25kg

绞股蓝总苷            25g

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

微粉硅胶              15.0g

羧甲预胶化淀粉钠      25.0g

共制备                1000片

LT组合物处方5

L-谷氨酰胺            0.25kg

通关藤提取物          9.5g(相当于原药材1kg)

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

微粉硅胶              15.0g

羧甲预胶化淀粉钠      25.0g

共制备                1000片

2、具体步骤：

1)将去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将L-谷氨酰胺和去甲斑蝥素/蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁、微粉硅胶和羧甲预胶化淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的片重压片。

10)成品全检，包装入库。

实施例9  本发明药物组合物胶囊剂的制备

1、处方：

LQ组合物处方1

L-谷氨酰胺            0.25kg

去甲斑蝥素            5g

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

共制备                1000粒

LC组合物处方2

L-谷氨酰胺            0.25kg

蟾酥提取物            0.22g(相当于原药材4g)

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

共制备                1000粒

LK组合物处方3

L-谷氨酰胺            0.25kg

苦参碱                40g

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

共制备                1000粒

LJ组合物处方4

L-谷氨酰胺            0.25kg

绞股蓝总苷            25g

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

共制备                1000粒

LT组合物处方5

L-谷氨酰胺            0.25kg

通关藤提取物          9.5g(相当于原药材1kg)

预胶化淀粉            120.0g

微晶纤维素            60.0g

2％HPMC水溶液         适量

硬脂酸镁              8.0g

共制备                1000粒

2、具体步骤：

1)将去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将L-谷氨酰胺和去甲斑蝥素/蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的装量装入胶囊。

10)成品全检，包装入库。

实施例10  本发明药物组合物颗粒剂的制备

1、处方：

LQ组合物处方1

L-谷氨酰胺            0.5kg

去甲斑蝥素            10g

糖粉                  2000.0g

固体香精              20g

甜蜜素                50g

2％HPMC50％醇溶液     适量

共制备                1000包

LC组合物处方2

L-谷氨酰胺            0.5kg

蟾酥提取物            0.44g(相当于原药材8g)

糖粉                  2000.0g

固体香精              20g

甜蜜素                50g

2％HPMC50％乙醇溶液   适量

共制备                1000包

LK组合物处方3

L-谷氨酰胺            0.5kg

苦参碱                80g

糖粉                  2000.0g

固体香精              25g

甜蜜素                50g

2％HPMC50％醇溶液     适量

共制备                1000包

LJ组合物处方4

L-谷氨酰胺            0.5kg

绞股蓝总苷            50g

糖粉                  2000.0g

固体香精              20g

甜蜜素                50g

2％HPMC50％乙醇溶液   适量

共制备                1000包

LT组合物处方5

L-谷氨酰胺            0.5kg

通关藤提取物          19g(相当于原药材2kg)

糖粉                  2000.0g

固体香精              20g

甜蜜素                50g

2％HPMC50％醇溶液     适量

共制备                1000包

2、具体步骤：

1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将去甲斑蝥素、蟾酥提取物、苦参碱、绞股蓝总苷、通关藤提取物粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将L-谷氨酰胺和去甲斑蝥素/蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物与糖粉、甜蜜素、固体香精以等量递加的方法混合均匀，加2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

4)过20目筛制颗粒。

5)颗粒在60℃的条件下烘干。

6)干颗粒过18目筛整粒。

7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。

8)包装，成品全检，包装入库。

实施例11  本发明药物组合物合剂制备

1、处方：

LQ组合物处方1

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

去甲斑蝥素                  10g

氢氧化钠                    5g

苯甲酸钠                    15g

甜菊甙                      100g

水                          加至75000ml

共制备                      3000支

LC组合物处方2

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

蟾酥提取物                  0.44g(相当于原药材8g)

苯甲酸钠                    15g

甜菊甙                      100g

水                          加至75000ml

共制备                      3000支

LK组合物处方3

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

苦参碱                      80g

苯甲酸钠                    15g

甜菊甙                      100g

水                          加至75000ml

共制备                      3000支

LJ组合物处方4

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

绞股蓝总苷                  50g

苯甲酸钠                    15g

甜菊甙                      100g

水                          加至75000ml

共制备                      3000支

LT组合物处方5

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺    15kg

通关藤提取物                19g(相当于原药材2kg)

苯甲酸钠                    15g

甜菊甙                      100g

水                          加至75000ml

共制备                      3000支

2、具体步骤：

1)将氢氧化钠加适量的水溶解(如不需要添加，则省略此步骤)N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺和去甲斑蝥素/蟾酥提取物/苦参碱/绞股蓝总苷/通关藤提取物加水适量，加热搅拌溶解完全。

2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。

3)合并上述溶液，补加水至全量。

4)过0.8um的微孔滤膜过滤。

5)半成品化验。

6)灌装。

7)成品全检，包装入库。

Claims (4)

1.一种治疗癌症的药物组合物，其特征在于，该药物组合物主要由L-谷氨酰胺和抗肿瘤的斑蝥素或其衍生物或其类似物组成，所述的斑蝥素衍生物或其类似物为去甲斑蝥素、斑蝥酸钠、甲基斑蝥胺、羟基斑蝥胺，所述的L-谷氨酰胺重量份数为100～75000份，斑蝥素或其衍生物或其类似物重量份数为0.02～5000份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，L-谷氨酰胺重量份数为250～30000份，斑蝥素或其衍生物或其类似物重量份数为0.05～2000份。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，L-谷氨酰胺重量份数为500～15000份，斑蝥素或其衍生物或其类似物重量份数为0.1～1000份。

4.如权利要求1～3任一项所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，该药物组合物与药学上可接受的辅料混合制成任何一种药学上可接受的剂型。