CN101021534A - 幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒。包括有浓缩洗涤液、酶联试剂、显色剂A液、显色剂B液、终止液、置反应槽内的印迹薄膜，先将幽门螺杆菌的全菌体蛋白抗原用SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳，按分子量大小不同分开，再将其转移至硝酸纤维膜上，如果被检血清有相应抗体，应用酶联免疫反应，就会在抗原的相应位置出现显色区带，根据阳性区带的分子量不同即可判断幽门螺杆菌(H.pylori)感染类型。
Description
技术领域
本发明涉及一种幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒。
背景技术
幽门螺杆菌(H.pylori)是慢性胃炎、消化性溃疡和非溃疡性消化不良的重要致病因素，临床上可分为两种类型：I型，为高毒力幽门螺杆菌菌株，其致病力强，易引起胃部疾病；II型，为低毒力幽门螺杆菌菌株，其毒性较弱，感染后一般无临床症状。常规用胃镜活检查胃粘膜进行组织学或细菌培养的方法检查。这些检查常会给病人带来一定痛苦，而且费时费力，不能分型。而我们发明的幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒是无创伤性检查，并且可对HP准确分型。
发明内容
本发明的目的在于提供一种幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒，它根据大量国内、外研究成果，利用先进的分子生物学技术——免疫印迹研制出幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒，这种无创伤性的诊断检测方法，可以直接用肉眼观察血清学反应的全貌。与ELISA和速滤法血清学试验不同的是：这种方法能同时区分出各种幽门螺杆菌抗体，包括与细胞毒素相关蛋白和空泡细胞毒素有关的抗体，各种尿毒酶亚单位抗体。根据被检测者幽门螺杆菌抗体的不同，我们能判定幽门螺杆菌的类型并预测胃病的严重程度，以便更好地服务于临床治疗和科研。
为了达到上述目的，本发明由以下的技术方法来实现。
一种幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括有浓缩洗涤液、酶联试剂、显色剂A液、显色剂B液、终止液、置反应槽内的印迹薄膜，先将幽门螺杆菌的全菌体蛋白抗原用SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳，按分子量大小不同分开，再将其转移至硝酸纤维膜上，如果被检血清有相应抗体，应用酶联免疫反应，就会在抗原的相应位置出现显色区带，根据阳性区带的分子量不同即可判断幽门螺杆菌感染类型。
本发明有益效果在于：1、敏感性高，特异性强。本实验能同时检出全部的幽门螺杆菌抗体，其敏感性和特异性分别是98.4％和96％。2、操作简单、时间短。不需用特殊设备，用1/1000稀释的待验血清可直接在反应槽检测，2小时即可出结果。3、技术先进。利用免疫印迹技术对幽门螺杆菌感染进行血清学诊断，是目前比较先进的方法，探讨不同类型幽门螺杆菌与胃病的关系是目前国内外消化病专家研究的课题。
适应症：
各种胃、十二指肠疾病：包括胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃癌和胃
淋巴瘤等；非溃疡性消化不良；缺铁性贫血口服铁剂治疗效果不佳者；儿童
消化不良或不明原因的生长发育迟缓者。
具体实施方式
下面的实施例和制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。
实施例1
试剂盒组成(按40人份计)
浓缩洗涤液50ml、酶联试剂0.5ml、显色剂A液25ml、显色剂B液25ml、终止液25ml、印迹薄膜(置反应槽内)40条、标准带。
试剂盒的储存：置2-8℃冰箱中可保存一年，如置室温下(18℃-25℃)不能超过3个月，开封后保存半年。
测试步骤
准备工作：
1、实验用材料：蒸馏水若干；500-1000μl可调加样枪一支、10-50μl可调加样枪一支及相应的加样枪吸嘴若干(按实验人数而定)；500ml量杯一个；500ml量筒一个；摇床或温箱一台；废物桶一个。
2、待测标本：血清或全血
1)准备待测血清：取静脉血2ml置干燥试管待血液凝固后分离血清备用，4℃下可保存7天，需要保存7天或以上者冷冻-20℃以下保存，如发现血清浑浊、沉淀、发霉等应弃用。
2)手指采血即时检测。
3)两种采血方式不影响检测结果。
实验开始：
1、在量杯中将浓缩洗涤液用蒸馏水按1∶10比例稀释成洗涤应用液，然后每槽加入1000μl。手工或置摇床上摇动数秒，使洗涤应用液充分浸湿槽内的印迹膜条。(使用摇床，室温应保持在20℃以上，如室温低于20℃，会导致检测效果不能达到最佳水平，此时建议使用温箱。)
2、每槽加入待测血清或全血10μl，摇动混匀1分钟后，置入37℃温箱中孵育30分钟或直接放在摇床上的摇动30分钟。
3、取出/取下反应槽，弃去槽中液体，并在平铺的纸巾上将其置轻磕以拍干槽中剩余液体。每槽加入洗涤应用液1000μl，援动混匀1分钟，弃去槽中液体，并在平铺的纸巾上轻轻拍干。重复以上操作3-4次。
4、每槽加入洗涤应用液500μl，再加入酶联试剂10μl，摇动混匀1分钟后置入37℃温箱中孵育30分钟或直接床上摇动30分钟。
5、同(3)洗涤。
6、加入显色剂A液和显色剂B液各500μl，5-10分钟观察结果。
7、待阳性带显色清晰，即加终止液500μl，2分钟后弃去液体，用自来水冲洗后取出印迹膜，待干后对比《标准带》判断结果。
结果判断
将印迹膜上端起始线与标准带起始线对齐，将印迹膜上显色区带与标准带对照，即可判断相关抗体是否阳性。相关抗体阳性判定说明、临床意义及结果判断详见《标准带》背面说明。
本试剂盒仅用于体外诊断，置2-8℃冷藏，不宜冷冻。待测标本易用新鲜血清或全血，如当天不检测，应置4℃保存；超过七天以上，需置-20℃以下保存。如用手指采血应即时检测。检测时，洗涤应充分，最好在专用摇床上进行。如手工摇动洗涤，每次不应小于一分钟，连洗四次。否则背景较深，影响结果判断。判断结果时，应首先观察质控带是否出现，如未出现，请及时与厂家联系。本试剂盒标准带是用标准血清显色定位后，电脑模拟而成，一般不另备阳性血清对照。不同批号的标准带不能混用。本试剂盒的印迹膜上含有产毒株幽门螺杆菌的全部可溶性蛋白抗原，可反映幽门螺杆菌血清学反应的全貌。其中，幽门螺杆菌特异性抗体显色带除含有128、116、95、91、66和30KD外，还常出现110KD区带(与有关CagA)、87KD区带(与VacA有关)；幽门螺杆菌非特异性抗体显色带常出现54和50KD区带(与幽门螺杆菌鞭毛有关)。本试剂盒为定性产品。结果判断，一是靠同标准带比较；二是靠观察带型，在带型相同的情况下，与标准带相差小于0.5mm可以定为阳性。关于稀释浓缩洗涤液，建议第一次使用时整瓶稀释，按需要取适量稀释后的洗涤液，其余放入2-8℃冰箱中储存以备下次使用。关于显色剂A，建议使用前先轻摇几下。该溶液为过饱和液体，瓶中沉淀物不影响检测结果。为避免影响检测结果，强烈建议在吸/加不同液体时更换加样枪吸嘴。
Claims (7)
1、一种幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括有浓缩洗涤液、酶联试剂、显色剂A液、显色剂B液、终止液、置反应槽内的印迹薄膜，先将幽门螺杆菌的全菌体蛋白抗原用SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳，按分子量大小不同分开，再将其转移至硝酸纤维膜上，如果被检血清有相应抗体，应用酶联免疫反应，就会在抗原的相应位置出现显色区带，根据阳性区带的分子量不同即可判断幽门螺杆菌(H.pylori)感染类型。
2、根据权利要求1所述的幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒，其特征在于：免疫印迹试剂盒测试步骤包括：
准备工作：
1、实验用材料：蒸馏水若干；500-1000μl可调加样枪一支、10-50μl可调加样枪一支及相应的加样枪吸嘴若干(按实验人数而定)；500ml量杯一个；500ml量筒一个；摇床或温箱一台；废物桶一个
2、待测标本：血清或全血
1)准备待测血清：取静脉血2ml置干燥试管待血液凝固后分离血清备用，4℃下可保存7天，需要保存7天或以上者冷冻-20℃以下保存，如发现血清浑浊、沉淀、发霉等应弃用
2)手指采血即时检测
3)两种采血方式不影响检测结果
实验开始：
1、在量杯中将浓缩洗涤液用蒸馏水按1∶10比例稀释成洗涤应用液，然后每槽加入1000μl，手工或置摇床上摇动数秒，使洗涤应用液充分浸湿槽内的印迹膜条，使用摇床，室温应保持在20℃以上，如室温低于20℃，会导致检测效果不能达到最佳水平，此时建议使用温箱
2、每槽加入待测血清或全血10μl，摇动混匀1分钟后，置入37℃温箱中孵育30分钟或直接放在摇床上的摇动30分钟
3、取出/取下反应槽，弃去槽中液体，并在平铺的纸巾上将其置轻磕以拍干槽中剩余液体。每槽加入洗涤应用液1000μl，援动混匀1分钟，弃去槽中液体，并在平铺的纸巾上轻轻拍干。重复以上操作3-4次
4、每槽加入洗涤应用液500μl，再加入酶联试剂10μl，摇动混匀1分钟后置入37℃温箱中孵育30分钟或直接床上摇动30分钟
5、同(3)洗涤
6、加入显色剂A液和显色剂B液各500μl，5-10分钟观察结果
7、待阳性带显色清晰，即加终止液500μl，2分钟后弃去液体，用自来水冲洗后取出印迹膜，待干后对比《标准带》判断结果
结果判断
将印迹膜上端起始线与标准带起始线对齐，将印迹膜上显色区带与标准带对照，即可判断相关抗体是否阳性，相关抗体阳性判定说明、临床意义及结果判断详见《标准带》背面说明。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CN 200710064182 CN101021534A (zh) | 2007-03-05 | 2007-03-05 | 幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒 |
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| CN 200710064182 CN101021534A (zh) | 2007-03-05 | 2007-03-05 | 幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒 |
Publications (1)
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| CN 200710064182 Pending CN101021534A (zh) | 2007-03-05 | 2007-03-05 | 幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101021534A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102798721A (zh) * | 2012-05-28 | 2012-11-28 | 上虞常春生物技术有限公司 | 一种食物过敏原检测试剂盒及检测方法 |
| CN102967705A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-03-13 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒 |
| CN104569389A (zh) * | 2012-11-26 | 2015-04-29 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒 |
| CN105353122A (zh) * | 2015-11-05 | 2016-02-24 | 厦门敖依生物科技有限公司 | 干燥综合征特异自身抗体免疫印迹试剂盒 |
-
2007
- 2007-03-05 CN CN 200710064182 patent/CN101021534A/zh active Pending
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| CN102967705A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-03-13 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒 |
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| CN105353122A (zh) * | 2015-11-05 | 2016-02-24 | 厦门敖依生物科技有限公司 | 干燥综合征特异自身抗体免疫印迹试剂盒 |
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