CN101018864A - 细胞增殖相关多肽及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明揭示了参与或与植物中细胞增殖、衰老、分化、发育及应激应答相关的蛋白质及编码这种蛋白质的核酸。本发明还揭示了此类蛋白质的应用。

Description

细胞增殖相关多肽及其应用

相关申请的交叉参考

本申请基于申请日为2002年12月26日的美国临时申请系列号60/436,565并要求其优先权，该申请全文引入本文作参考。

技术领域

本发明一般涉及转基因植物。更具体地，本发明涉及细胞增殖相关多肽，编码该多肽的核酸分子及其应用。

CD-R提供的序列表

本申请的序列表以在CD-R上的1.5MB文件(3份)递交，没有提交纸件。每一CD-R以不褪色墨水标注了申请人、发明名称、文件名(1392-10-19 PCT.ST25.txt))、创建日期(2003年12月23日)，计算机系统(IBM-PC/MS-DOS/MS-Windows)，和文档号(1392-10-19 PCT)。所递交的在CD-R上的序列表引入本文作参考。

缩写表

2，4-D - 2，4-二氯苯氧基乙酸

53BP1 - p53-结合蛋白

ABA - 脱落酸

ABC - ATP-结合盒

ADPGlc - ADP-葡萄糖

AMV - 苜蓿花叶病毒

AOBP - 抗坏血酸氧化酶结合蛋白

AOS - 活性氧

APC - 腺瘤性息肉病(adenomatous Polyposis Coli)

APP - 淀粉样前体蛋白

BAP - 苄氨基嘌呤

bp - 碱基对

BiP - 人免疫球蛋白重链结合蛋白

BR - 油菜素类固醇

BRCT - BRCA1 C-末端

BRI1 - 油菜素类固醇不敏感1(Brassinosteroid-insensitive

1)

bZIP - 碱性亮氨酸拉链区

CalS - 愈伤葡萄糖合酶

CaM - 钙调蛋白

CaMV - 花椰菜花叶病毒

cDNA - 互补DNA

CDK - 细胞周期蛋白依赖性激酶

CNS - 中枢神经系统

CPO - 粪卟啉原III氧化酶

CRT - 钙网蛋白

DHFR - 二氢叶酸还原酶

EDTA - 乙二胺四乙酸

eIF3 - 真核起始因子3

eIF4E - 真核起始因子4E

ELISAs - 酶联免疫吸附测定

EMCV - 脑心肌炎病毒

EPSP - 5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯

EPSPS - 5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸酯合酶

ER - 内质网

ESTs - 表达的序列标签

FPD - 功能蛋白结构域

FTZ-F1 - fushitarazu因子1

GA - 赤霉素

GUS - β-葡糖醛酸糖苷酶

HD - 组蛋白脱乙酰基酶

HLH - 螺旋-环-螺旋

HR - 高敏感性应答

HSPs - 热激蛋白

IAA - 吲哚乙酸

INCENP - 内着丝粒蛋白(inner centromere protein)

JA - 茉莉酮酸

kb - 千碱基(s)

KCBP - 驱动蛋白样钙调蛋白结合蛋白

KNOX - 打结样同源框( knotted-like homeobo x)

LR - 局部抗性

MCMV - 玉米褪绿斑驳病毒

MDMV - 玉米矮缩花叶病毒

MIP - 主要内在蛋白(Major Intrinsic Protein)

MRP - 多药抗药性相关蛋白

MT - 微管

NPTII - 新霉素磷酸转移酶II

OsDAD1 - 水稻抗凋亡死亡防御物1(O.sativa Defender

Against Apoptotic Death 1)

Pcps - 吡咯烷酮羧基肽酶

PGA - 3-磷酸甘油酸

P-gp - P-糖蛋白

PH - 普列克底物蛋白同源性

PMI - 磷酸甘露糖异构酶

PI4P5K - 磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶

PP2A - 2A型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶

PPDK - 丙酮酸正磷酸二激酶

PR - 发病相关

pRB - 成视网膜细胞瘤蛋白

PTGS - 转录后基因沉默

R0 - 亲代转化体

RAB - 对脱落酸应答

RB - 成视网膜细胞瘤

RNAi - RNA干扰

RUBISCO - 核酮糖1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶

RuBP - 核酮糖1，5-二磷酸

SA - 水杨酸

SAR - 全身获得性抗性

SDS - 十二烷基硫酸钠

SITIP - 盐刺激诱导的液泡膜内在蛋白

SSC - 标准柠檬酸盐水(1×SSC为0.15M NaCl，

0.015M 柠檬酸钠，pH7.0)

PCR - 聚合酶链反应

SSS - 可溶淀粉合酶

TDP - 转录因子E2F/二聚化配偶体

TEV - 烟草蚀刻病毒

Tm - 热熔点

TMRI - Torrey Mesa Research Institute

TMV - 烟草花叶病毒

UBPs - 遍在蛋白特异性蛋白酶

氨基酸缩写及相应的mRNA密码子

氨基酸 三字母 单字母 mRNA密码子

丙氨酸 Ala A GCA GCC GCG GCU

精氨酸 Arg R AGA AGG CGA CGC CGG CGU

天冬酰胺 Asn N AAC AAU

天冬氨酸 Asp D GAC GAU

半胱氨酸 Cys C UGC UGU

谷氨酸 Glu E GAA GAG

谷氨酰胺 Gln Q CAA CAG

甘氨酸 Gly G GGA GGC GGG GGU

组氨酸 His H CAC CAU

异亮氨酸 Ile I AUA AUC AUU

亮氨酸 Leu L UUA UUG CUA CUC CUG CUU

赖氨酸 Lys K AAA AAG

甲硫氨酸 Met M AUG

脯氨酸 Pro P CCA CCC CCG CCU

苯丙氨酸 Phe F UUC UUU

丝氨酸 Ser S ACG AGU UCA UCC UCG UCU

苏氨酸 Thr T ACA ACC ACG ACU

色氨酸 Trp W UGG

酪氨酸 Tyr Y UAC UAU

缬氨酸 Val V GUA GUC GUG GUU

背景技术

作为人类主要原材料，单子叶植物如水稻、玉米和小麦已经针对较高产量及疾病、害虫和多种环境刺激抗性加以遗传工程化。例如，从植物生长至开花期的过渡时间是植物发育的重要步骤，通过影响营养生长与生殖生长之间的平衡决定了大多数农作物的数量和质量。因此，在遗传工程化的谷物中开花时间的控制在农业生产中是重要的。对在单子叶植物如水稻中与细胞周期进展、发育和刺激应答相关的蛋白质和分子相互作用的了解可以导致在农业生产中的重要应用。可以利用这些相互作用的调节以在植物发育或生长中产生变化，导致谷物产量增加，另外可用于增加对环境刺激条件的耐受性。

相似地，植物器官(例如根或茎)的发育及植物应答刺激和保护其自身免于昆虫和病原体侵害的能力也是遗传工程的重要目标。编码参与植物应答病原体的蛋白质的基因对农业生产也很重要，因为这些基因的发现可以对农作物进行遗传操纵以获得具有增强或降低的疾病抗性的植物。

因此，需要鉴别参与植物生长(包括细胞周期和衰老)、植物发育及植物对刺激应答的蛋白质。对这种蛋白质的相互作用的了解使得可以生产增强的食物农作物。

概述

这个概述列举了本发明的一些实施方案，在一些情况中列举了这些实施方案的变化和改变。这个概述仅是例证了许多的实施方案和变化的实施方案。同样也只是例证了给出的实施方案的一或多个代表性特征。这种实施方案可典型地具有或不具有所述特征，另外那些特征也可以用于无论在这个概述中是否列出的本发明的其它实施方案。为避免过分重复，这个概述未列举或提示这些特征的所有可能组合。

本发明提供了编码这种参与控制和调节植物成熟和发育包括增殖、衰老、疾病抗性、刺激抗性和分化的蛋白质的蛋白质及核酸分子。本发明提供了包含至少一种所述蛋白质的组合物，以及使用所述蛋白质影响植物成熟、发育和应答刺激的方法。

本发明提供了编码细胞增殖相关多肽的一种分离的核酸分子，其中所述多肽在酵母双重杂交体分析中与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1(SEQ ID NO：194)，Os018989-4003(SEQ ID NO：2)，OsE2F2(SEQ ID NO：10)，OsS49462(SEQ ID NO：206)，OsCYCOS2(SEQ ID NO：210)，OsMADS45(SEQ ID NO：202)，OsRAP1B(SEQ ID NO：244)，OsMADS6(SEQ ID NO：236)，OsFDRMADS8(SEQ ID NO：228)，OsMADS3(SEQ ID NO：232)，OsMADS5(SEQ ID NO：234)，OsMADS15(SEQ ID NO：240)，OsHOS59(SEQ ID NO：258)，OsGF14-c(SEQ ID NO：278)，OsDAD1(SEQ ID NO：292)，Os006819-2510(SEQ ID NO：296)，OsCRTC(SEQ ID NO：300)，OsSGT1(SEQ ID NO：310)，OsERP(SEQ IDNO：312)，OsCHIB1(SEQ ID NO：318)，OsCS(SEQ ID NO：322)，OsPP2A-2(SEQ ID NO：330)，及OsCAA90866(SEQ ID NO：336)。在一个实施方案中，分离的核酸分子衍生自水稻(Oryza sativa)。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含选自SEQ ID NO：1-191中编号为奇数号的一个核酸序列。

本发明提供了关于细胞增殖相关蛋白质与由本发明所述分离的核酸分子编码的多肽之间相互作用的描述。在一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：1-7中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：194。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：9和11之一的核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：1和13之一的核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：10。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：15-21中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：206。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：15、17、23-53中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：210。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：55，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：202。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：57，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：244。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：59，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：236。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：61，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：232。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：63，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：234。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：65，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：240。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：67-79中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：258。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：81，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：260。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：83-97中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：278。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：89和99之一的核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：286。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：101-105中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：296。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：107，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：300。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含一个核酸序列SEQ ID NO：109，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：304。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：111-123中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：310。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：125-147中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：312。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：151-157中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：318。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：159-175中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：322。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：177-175中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：330。在又一个实施方案中，分离的核酸分子包含SEQ ID NO：177、187-191中编号为奇数的一种核酸序列，蛋白质包含氨基酸序列SEQ ID NO：336。

本发明还提供了编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子，其中所述核酸分子选自如下一组：

(a)编码包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的一种氨基酸序列的多肽的一种核酸分子；

(b)包含SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列的一种核酸分子；

(c)具有与(a)或(b)的核酸分子的核酸序列至少90％相同的核酸序列的一种核酸分子；

(d)在选自如下一组的杂交条件下与(a)或(b)杂交的一种核酸分子：

(i)在50℃，7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM乙二胺四乙酸(EDTA)；最后在50℃在2X标准柠檬酸盐水(SSC)，0.1％SDS中洗涤；

(ii)在50℃，7％SDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA；最后在50℃在1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

(iii)在50℃，7％SDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA；最后在50℃在0.5×SSC，0.1％SDS中洗涤；

(iv)在50℃，7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mMEDTA；最后在50℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

(v)在50℃，7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mMEDTA；最后在65℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

(e)包含与(a)完全互补的核酸序列的一种核酸分子；及

(f)包含与(a)完全反向互补的核酸序列的一种核酸分子。

本发明还提供了由所述分离的核酸分子编码的分离的细胞增殖相关多肽，或其功能性片段、结构域或特征部分。

本发明还提供了一种生产所述多肽的方法，所述方法包括如下步骤：

(a)将包含表达盒的细胞在合适的生长条件下生长，所述表达盒包含所述核酸分子；及

(b)从该细胞中分离所述多肽。

本发明还提供了包含本发明分离的核酸分子的一种转基因植物细胞。在一个实施方案中，植物选自玉米(玉蜀黍(Zea mays))、芸苔属、苜蓿(紫苜蓿(Medicago sativa))、水稻(稻亚属(Oryza sativa ssp.))、黑麦(黑麦(Secale cereale))、高粱(两色蜀黍(Sorghum bicolor)、蜀黍(Soeghum vulgare))、珍珠粟(御谷(Pennisetum glaucum))、粟米(稷(Panicum miliaceum))、谷子(谷子(Setaria italica))、穇子(穇子(Eleusinecoracana))、向日葵(向日葵(Helianthus annuus))、红花(红花(Carthamustinctorius))、小麦(普通小麦(Triticum aestivum))、大豆(大豆(Glycinemax))、烟草(烟草(Nicotiana tabacum))、马铃薯(马铃薯(Solanumtuberosum))、花生(落花生(Arachis hypogaea))、棉花，甘薯(甘薯(Ipomoeabatatus))、木薯(Manihot esculenta)、咖啡(咖啡属)、椰子(椰子(Cocosnucifera))、凤梨(凤梨(Ananas comosus))、柑桔树(柑桔属)、可可(可可树(Theobroma cacao))、茶(茶(Camellia sinensis))、香蕉(芭蕉属)，鳄梨(Persea ultilane)、无花果(无花果(Ficus casica))、番石榴(番石榴(Psidium guajava))、芒果(芒果(ManTIFera indica))、橄榄(油橄榄(Oleaeuropaea))、番木瓜(番木瓜(Carica papaya))、腰果(腰果(Anacardiumoccidentale))、澳洲坚果(全缘叶澳洲坚果(Macadamia integrifolia))、杏仁(扁桃(Prunus amygdalus))、甜菜(甜菜(Beta vulgaris))、甘蔗(甘蔗属(Saccharum spp.))、燕麦、浮萍(浮萍属(Lemna))、大麦、蔬菜、观赏植物及针叶树。在另一个实施方案中，植物是水稻(稻亚属)。在一个实施方案中，浮萍选自浮萍属、紫萍属(Spirodela)、芜萍属(Woffia)和Wofiella属。在一个实施方案中，蔬菜选自番茄、莴苣、瓜尔豆(guar)、角豆、胡芦巴、大豆、四季豆、豇豆、绿豆、利马豆、蚕豆、小扁豆、鹰嘴豆、青豆、利马豆、豌豆及香瓜属(Cucumis)成员。在一个实施方案中，观赏植物选自凤仙花属(impatiens)、秋海棠属(Begonia)、天竺葵属(Pelargonium)、堇菜属(Viola)、仙客来属(Cyclamen)、马鞭草属(Verbena)、长春花属(Vinca)、万寿菊属(Tagetes)、报春花属(Primula)、非洲紫罗兰属(Saint Paulia)、藿香蓟属(Agertum)、苋属(Amaranthus)、金鱼草属(Antihirrhinum)、耧斗菜属(Aquilegia)、瓜叶菊属(Cineraria)、三叶草属(Clover)、秋英属(Cosmo)、豇豆属(Cowpea)、大丽花属(Dahlia)、曼陀罗属(Datura)、翠雀属(Delphinium)、扶郎花属(Gerbera)、唐菖蒲属(Gladiolus)、大岩桐属(Gloxinia)、朱顶红属(Hippeastrum)、松叶菊属(Mesembryanthemum)、Salpiglossos及百日草属(Zinnia)、杜鹃花属(azalea)、八仙花属(hydrangea)、木槿属(hibiscus)、蔷薇属(rose)、郁金香属(tulip)、水仙属(daffodil)、矮牵牛属(petunia)、石竹属(carnation)、大戟属(poinsettia)和菊属(chrysanthemum)。在一个实施方案中，针叶树选自火炬松(loblolly pine)、沼泽松(slash pine)、美国黄松(ponderosa pine)、黑松(lodgepole pine)、辐射松(Monterey pine)、道格拉斯冷杉(Douglas-fir)、西部铁杉(Western hemlock)、锡特卡云杉(Sitka spruce)、红杉(redwood)、银枞(silver fir)、香脂冷杉(balsam fir)、西部红柏(western red cedar)及阿拉斯加黄柏(alaska yellow cedar)。

在另一个实施方案中，转基因植物是选自如下一组的植物：金合欢属、小茴香(aneth)、朝鲜蓟、芝麻菜、黑莓、canola、芫荽、克莱门氏小柑橘(clementines)、宽叶莴苣(escarole)、桉树、茴香、葡萄柚、哈蜜瓜、豆薯、猕猴桃、柠檬、酸橙、蘑菇、坚果、黄秋葵、柑桔、欧芹、柿子、车前草、石榴、白杨、辐射松(radiata pine)、菊苣(radicchio)、南方松(Southern pine)、枫香(sweetgum)、柑橘树、黑小麦、藤本植物、山药(yams)、苹果、梨、温柏、樱桃、杏、甜瓜、大麻、荞麦、葡萄、树莓、藜(chenopodium)、蓝莓、油桃、桃、李子、草莓、西瓜、茄子、胡椒、花椰菜、芸苔、椰菜、甘蓝、ultilan sprouts、洋葱、胡萝卜、韭菜、甜菜、蚕豆、芹菜、萝卜、南瓜(pumpkin)、菊苣(endive)、葫芦、大蒜、四季豆(snapbean)、菠菜、南瓜(squash)、芜箐、ultilane及绿皮西葫芦(zucchini)。

本发明还提供了一种分离的细胞增殖相关多肽，其中所述多肽在酵母双杂交分析中与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1(SEQ IDNO：194)，Os018989-4003(SEQ ID NO：2)，OsE2F2(SEQ ID NO：10)，OsS49462(SEQ ID NO：206)，OsCYCOS2(SEQ ID NO：210)，OsMADS45(SEQ ID NO：202)，OsRAP1B(SEQ ID NO：244)，OsMADS6(SEQ ID NO：236)，OsFDRMADS8(SEQ ID NO：228)，OsMADS3(SEQ ID NO：232)，OsMADS5(SEQ ID NO：234)，OsMADS15(SEQ ID NO：240)，OsHOS59(SEQ ID NO：258)，OsGF14-c(SEQ ID NO：278)，OsDAD1(SEQ ID NO：292)，Os006819-2510(SEQ ID NO：296)，OsCRTC(SEQ ID NO：300)，OsSGT1(SEQ ID NO：310)，OsERP(SEQ ID NO：312)，OsCHIB1(SEQ IDNO：318)，OsCS(SEQ ID NO：322)，OsPP2A-2(SEQ ID NO：330)及OsCAA90866(SEQ ID NO：336)。在一个实施方案中，分离的增殖相关多肽选自(a)包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的一个氨基酸序列的多肽及(b)包含与(a)的多肽有至少80％相似性的氨基酸序列的多肽，相似性使用GAP的GCG Wisconsin Package SEQWEB_应用软件和默认GAP分析参数进行分析。在另一个实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的一种氨基酸序列。

本发明还提供了包含编码本发明的细胞增殖相关多肽的核酸分子的一种表达盒。在一个实施方案中，编码细胞增殖相关多肽的核酸分子包含选自SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一个核酸序列。在一个实施方案中，表达盒进一步包含可操纵地与核酸分子连接的一个调节元件。在一个实施方案中，调节元件包含启动子。在一个实施方案中，启动子是植物启动子。在另一个实施方案中，启动子是组成型启动子。在另一个实施方案中，启动子是组织特异性或细胞类型特异性启动子。在一个实施方案中，组织特异性或细胞类型特异性启动子指导表达盒在选自表皮、根、维管组织、分生组织、形成层、皮层、木髓、叶、花、种子及其组合的位置表达。

本发明还提供了包含所述表达盒的一种转基因植物细胞。在一个实施方案中，表达盒包含一种分离的核酸分子，该核酸分子包含SEQ IDNO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列。

本发明还提供了包含所述表达盒的转基因植物，以及所述转基因植物的转基因种子和子代。

本发明还提供了一种调节植物细胞增殖的方法，包括将包含编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子的一个表达盒导入植物细胞中，其中所述多肽在酵母双杂交分析中与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1(SEQ ID NO：194)，Os018989-4003(SEQ ID NO：2)，OsE2F2(SEQID NO：10)，OsS49462(SEQ ID NO：206)，OsCYCOS2(SEQ ID NO：210)，OsMADS45(SEQ ID NO：202)，OsRAP1B(SEQ ID NO：244)，OsMADS6(SEQ ID NO：236)，OsFDRMADS8(SEQ ID NO：228)，OsMADS3(SEQ IDNO：232)，OsMADS5(SEQ ID NO：234)，OsMADS15(SEQ ID NO：240)，OsHOS59(SEQ ID NO：258)，OsGF14-c(SEQ ID NO：278)，OsDAD1(SEQID NO：292)，Os006819-2510(SEQ ID NO：296)，OsCRTC(SEQ ID NO：300)，OsSGT1(SEQ ID NO：310)，OsERP(SEQ ID NO：312)，OsCHIB1(SEQ ID NO：318)，OsCS(SEQ ID NO：322)，OsPP2A-2(SEQ ID NO：330)及OsCAA90866(SEQ ID NO：336)。在本发明方法的一个实施方案中，多肽在细胞中的表达导致细胞增殖的速度或程度增强。在另一个实施方案中，多肽在细胞中的表达导致细胞增殖的速度或程度降低。

在本发明方法的另一个实施方案中，分离的核酸分子包含选自SEQID NO：1-339中编号为奇数的一种核酸序列。在另一个实施方案中，分离的核酸分子包含选自SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列。

因此，本发明的一个目的是提供可用于增强农业重要植物的方法和组合物。这个目的全部或部分通过本发明实现。

本发明的一个目的已如上述，本领域技术人员在学习了本发明的如下描述和非限制性实施例之后将明了其它目的和优势。

附图简述

图1A-1C是本发明的多种非限制性细胞增殖相关蛋白之间相互作用的示意图。图1A和1B分别代表图1C的左和右半部分。箭头标明DNA结合结构域融合的蛋白质(粗线框或椭圆形)与激活结构域融合的蛋白质之间的相互作用方向。虚线框标明先前公布的相互作用。椭圆形而不是线框标明与DNA结合结构域融合的蛋白质不与其它蛋白质相互作用。圆形箭头标明自身相互作用。虚线标明蛋白质之间的氨基酸相似性。图中列出的蛋白质可以如下分类：细胞周期(19758，20257，20235，20462，20551，20815，21003，21044，22824，23 136，23274，23297，23367，23390，23394，23484，23829，23878，24091，24092，24617，25692，25701，26210，26317，26539，26542，26603，26644，29882，29941，29946，29956，29958，29959，29965，29966，31086及31182)；发育(20466，20533，20534，20559，20689，20699，20910及31146)；生物刺激(20568和29050)；及非生物刺激(20466，20554，20818，22892及23169)。

图2是本发明的多种非限制性细胞增殖相关蛋白质之间相互作用的示意图。箭头标明DNA结合结构域融合的蛋白质(粗线框或椭圆形)与激活结构域融合的蛋白质之间的相互作用方向。虚线框标明先前公布的相互作用。椭圆形而不是线框标明与DNA结合结构域融合的蛋白质不与其它蛋白质相互作用。圆形箭头标明自身相互作用。虚线标明蛋白质之间的氨基酸相似性。图中列出的蛋白质除了下述蛋白质之外可分类为参与发育：19653，20072(非生物刺激)，20618(细胞周期)，23495，27335，28517，29089，29971(细胞周期)，及31165。可划分在多个范畴中的蛋白质包括20135(发育和非生物刺激)及29882(发育和细胞周期)。

图3A-3E示出本发明的多种非限制性细胞增殖相关蛋白质之间的相似性。

图3A-3D是示出本发明的多种非限制性细胞增殖相关蛋白质的氨基酸序列对比的示意图。

图3E是示出图3A-3D中示出的氨基酸序列对比的蛋白质的系统树的示意图。

图4是本发明的多种非限制性细胞增殖相关蛋白质之间相互作用的示意图。箭头标明DNA结合结构域融合的蛋白质(粗线框或椭圆形)与激活结构域融合的蛋白质之间的相互作用方向。虚线框标明先前公布的相互作用。椭圆形而不是线框标明与DNA结合结构域融合的蛋白质不与其它蛋白质相互作用。圆形箭头标明自身相互作用。虚线标明蛋白质之间的氨基酸相似性。图中列出的蛋白质可如下分类：生物刺激(20251)；非生物刺激(12464，19902，22844，22874，23059及23426)；及叶绿体(19842，22832，22840，22844，22858，22874，23059，23061，23426及30846)。

图5是本发明的多种非限制性细胞增殖相关蛋白质之间相互作用的示意图。箭头标明DNA结合结构域融合的蛋白质(粗线框或椭圆形)与激活结构域融合的蛋白质之间的相互作用方向。虚线框标明先前公布的相互作用。椭圆形而不是线框标明与DNA结合结构域融合的蛋白质不与其它蛋白质相互作用。圆形箭头标明自身相互作用。虚线标明蛋白质之间的氨基酸相似性。图中列出的蛋白质可如下分类：发育(谷氨酰氨肽酶)；生物刺激(19651，20899及22823)；非生物刺激(20775，29077，29098，29086及29113)。

图6是本发明的多种非限制性细胞增殖相关蛋白质之间相互作用的示意图。箭头标明DNA结合结构域融合的蛋白质(粗线框或椭圆形)与激活结构域融合的蛋白质之间的相互作用方向。虚线框标明先前公布的相互作用。椭圆形而不是线框标明与DNA结合结构域融合的蛋白质不与其它蛋白质相互作用。圆形箭头标明自身相互作用。虚线标明蛋白质之间的氨基酸相似性。图中列出的蛋白质可如下分类：生物刺激(ORF020300-2233.2，23268，011994-D16及OsPP2-A)及非生物刺激(23225，OsCAA90866及3209-OS208938)。

序列表简述

SEQ ID NO：1-340表示下文揭示的双杂交分析中应用的水稻(Oryzasativa)多肽的核酸和氨基酸序列。就这些SEQ ID NO而言，奇数号序列是核酸序列，偶数号序列是从前一个SEQ ID NO：核酸序列推导的氨基酸序列。例如，SEQ ID NO：2是从SEQ ID NO：1核酸序列推导的氨基酸序列，SEQ ID NO：4是从SEQ ID NO：3核酸序列推导的氨基酸序列，SEQID NO：6是从SEQ ID NO：5核酸序列推导的氨基酸序列等等。SEQ IDNO的进一步描述如下表：

SEQ IDNO.	PN号	描述
			1，2	21044	假设蛋白018989-4003，与小麦属(Triticum sp.)DP蛋白类似
3，4	26539	新蛋白PN26539(AC087544)，可能为DP
			5，6	29946	新蛋白PN29946，与拟南芥(A.thaliana)驱动蛋白样蛋白类似(GENBANK_登录号BAB11329.1；e＝0.0)
7，8	30852	新蛋白PN30852

9，10	21003	水稻(O.sativa)E2F2同系物(GENBANK_登录号AB041726；BAB20933)
			11，12	22824	新蛋白PN22824，肌球蛋白重链
13，14	31182	新蛋白PN31183，拟南芥DP样蛋白(GENBANK_登录号CAC15483.1；9e-55)
			15，16	23484	新蛋白PN23484，重酶解肌球蛋白
17，18	29942	新蛋白PN29942，片段，锌指蛋白
			19，20	29957	新蛋白PN29957，片段，未知
21，22	30848	新蛋白PN30848，片段，RNA结合蛋白
			23，24	30899	假设蛋白000221-3976，片段，类似于OsHP82(GENBANK_登录号P33126；e＝0.0)
25，26	29970	推定CorA-样Mg2+转运蛋白
			27，28	20815	假设蛋白PN20815，类似于拟南芥肌球蛋白重链，片段
29，30	23274	新蛋白PN23274，类似于含有拟南芥ARM重复的蛋白
			31，32	23390	新蛋白PN23390，推定的驱动蛋白样钙调蛋白结合蛋白，片段
33，34	26688	新蛋白PN26688，未知
			35，36	29882	新蛋白PN29882，片段，肌球蛋白重链
37，38	29956	新蛋白PN29956，片段，核基质组分
			39，40	29958	新蛋白PN29958，片段，着丝粒同系物
41，42	29961	新蛋白PN29961，片段，类似于拟南芥未知蛋白(GENBANK_登录号BAB02349)
			43，44	29965	新蛋白PN29965，片段，类似于拟南芥驱动蛋白(着丝粒蛋白)样重链样蛋白(GENBANK_登录号BAB03114)
45，46	29966	新蛋白PN29966，片段，肌球蛋白重链
			47，48	29967	新蛋白PN29967，片段，未知
49，50	29968	新蛋白PN29968，类似于拟南芥未知蛋白(GENBANK_登录号BAB01990)
			51，52	29969	新蛋白PN29969，类似于拟南芥未知蛋白(GENBANK_登录号BAB01990)
53，54	30854	新蛋白PN30854，未知

55，56	23495	新蛋白PN23495
			57，58	22834	新蛋白PN22834，类似于Oshox6，片段
59，60	29949	新蛋白PN29949推定的MADS蛋白
			61，62	31165	新蛋白PN31165
63，64	20072	假设蛋白000564-1102
			65，66	29971	新蛋白PN29971，片段，类似于拟南芥着丝粒蛋白(GENBANK_登录号NP_191066)
67，68	23169	假设蛋白000221-3976，片段，类似于OsHP82(GENBANK_登录号P33126；e＝0.0)
			69，70	23251	新蛋白PN23251
71，72	23388	新蛋白PN23388
			73，74	23829	新蛋白PN23829推定的S-腺苷基-L-高半胱氨酸水解酶(GENBANK_登录号P32112；e＝0.0)
75，76	23830	新蛋白PN23830，类似于拟南芥推定的PHD-指蛋白(GENBANK_登录号NP_566742.1；2e-73)
			77，78	24092	新蛋白PN24092，类似于水稻推定的肌球蛋白
79，80	30858	新蛋白PN30858
			81，82	21036	假设蛋白003181-3684
83，84	22858	新蛋白22858，片段，类似于拟南芥(Arabidopsis)GTP环化水解酶II(GENBANK_登录号BAB09512.1；e＝0)
			85，86	22874	新蛋白22874，片段，类似于拟南芥推定的磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶(GENBANK_登录号NP_187603.1；4e-18)
87，88	22866	新蛋白PN22866，片段，类似于拟南芥液泡ATP合酶亚基C(V-ATPase C亚基；液泡蛋白泵C亚基)(GENBANK_登录号Q9SDS7；e-152)
			89，90	23022	新蛋白PN23022，片段，类似于大麦(H.Vulgare)质膜H+-ATPase(GENBANK_登录号CAC50884；e＝0.0)

91，92	23061	假设蛋白OsContig3864，类似于大麦光合系统I反应中心亚基II，叶绿体前体(GENEANK_登录号P36213；6e-87)
			93，94	29982	新蛋白PN29982
95，96	30846	新蛋白PN30846
			97，98	30974	新蛋白PN30974
99，100	23053	新蛋白23053，片段，类似于拟南芥推定的Na+-依赖性无机磷酸盐共转运蛋白(GENBANK_登录号NP_181341.1；e-105)
			101，102	23226	新蛋白PN23226，愈伤葡萄糖合酶
103，104	23485	新蛋白PN23485，类似于大麦(Hordeum vulgare)粪卟啉原III氧化酶，叶绿体前体(GENBANK_登录号Q42840；e-169)
			105，106	29037	新蛋白PN29037
107，108	29950	新蛋白PN29950
			109，110	20551	假设蛋白003118-3674类似于番茄(Lycopersiconesculentum)钙调蛋白
111，112	24060	L-天冬氨酸酶样蛋白样
			113，114	23914	RNA结合结构域蛋白
115，116	23221	富脯氨酸蛋白
			117，118	24061	生长素诱导蛋白样
119，120	23949	HSP70样
			121，122	29042	原纤蛋白样
123，124	28982	Archain delta COP样
			125，126	29984	新蛋白PN29950
127，128	30844	新蛋白PN30844
			129，130	30868	NAD(P)结合结构域蛋白
131，132	24292	γ衔接蛋白样
			133，134	29983	新蛋白PN29983
135，136	30845	果胶脂酶样
			137，138	31085	受体样蛋白激酶样
139，140	20674	丙酮酸正磷酸酯二激酶样
			141，142	30870	Isp-4样

143，144	29997	黄嘌呤脱氢酶样
			145，146	30843	遍在蛋白特异性蛋白酶样
147，148	30857	新蛋白PN30857
			149，150	20115	环状锌指蛋白
151，152	22823	新蛋白PN22823，类似于ABC转运蛋白(GENBANK_登录号T02187，AB043999.1，NP_171753；e＝0)
			153，154	22154	新蛋白PN22154，类似于拟南芥谷氨酰氨基肽酶(GENBANK_登录号AL035525；e＝0)
155，156	29041	新蛋白PN29041，片段，类似于拟南芥推定的ATPase(GENBANK_登录号AAG52137；e-17)
			157，158	22020	新蛋白PN22020，片段，类似于拟南芥推定的蛋白(GENBANK_登录号NP_197783；3e-34)
159，160	22825	新蛋白PN22825，片段
			161，162	29076	新蛋白PN29076，片段
163，164	29077	新蛋白PN29077，片段，类似于拟南芥DNA-损伤诱导蛋白DDI1样(GENBANK_登录号BAB02792；5e-94)
			165，166	29084	新蛋白PN29084，片段，类似于大豆(Glycine max)钙依赖性蛋白激酶(GENBANK_登录号A43713，2e-79)
167，168	29115	新蛋白PN29115，片段，类似于拟南芥6，7-二甲基-8-Ribityllumazine合酶前体(GENBANK_登录号AAK93590，6e-37)
			169，170	29116	新蛋白PN29116，片段
171，172	29117	新蛋白PN29117
			173，174	29118	新蛋白PN29118，片段
175，176	29119	新蛋白PN29119，片段
			177，178	21639	假设蛋白ORF020300-2233.2，推定的PP2A调节亚基，类似于OsCAA90866(AAD39930；5e-92)(GENBANK_登录号CAA90866；5e-53)

179，180	23268	新蛋白23268，类似于磷酸核糖基邻氨基苯甲酸转移酶，叶绿体前体，片段(GENBANK_登录号AAB02913.1；5e-95)
			181，182	26645	新蛋白PN26645，推定的蛋白二硫化物异构酶相关蛋白前体(GENBANK_登录号BAB09470.1；e-28)
183，184	24162	新蛋白PN24162，孔道蛋白样电压依赖性阴离子通道蛋白(GENBANK_登录号NP_201551；3e-86)
			185，186	20618	假设蛋白011994-D16，类似于玉米(Z.mays)DnaJ蛋白(GENBANK_登录号T01643；e＝0)
187，188	23045	新蛋白PN23045
			189，190	23225	新蛋白PN23225，类似于小麦(Tritticum aestivum)起始因子(iso)4f p82亚基(GENBANK_登录号AAA74724；e＝0)
191，192	29883	新蛋白PN29883，片段
			193，194	19758	水稻E2F 同系物(GENBANK_登录号AB041725；BAB20932)
195，196	23367	水稻驱动蛋白样蛋白(GENBANK_登录号AC068924；AAG13527.1)
			197，198	26317	水稻推定的肌球蛋白重链(GENBANK_登录号AC091123；AAK72891)
199，200	20910	水稻MADS 盒蛋白MADS14(GENBANK_登录号AF058697，AAF19047)
			201，202	20231	水稻MADS 盒蛋白MADS45(GENBANK_登录号U31994，AAB50180)
203，204	19695	水稻小GTP 结合蛋白RACDP(GENBANK_登录号AF218381；AAF28764)
			205，206	20325	水稻细胞周期蛋白OsS49462，片段(X82035)
207，208	25358	假设蛋白(GENBANK_登录号AAK39589)

209，210	20257	水稻细胞周期蛋白OsCYCOS2(GENBANK_登录号X82036)
			211，212	23363	水稻假设蛋白13324791
213，214	26210	水稻推定的CCAAT置换蛋白
			215，216	23297	水稻推定的肌球蛋白重链
217，218	23416	叶绿体ATPase I亚基
			219，220	23136	假设蛋白BAA85200类似于突触融合蛋白相关蛋白AtVam3p
221，222	25381	蛋白13357265推定的CorA-样Mg2+转运蛋白
			223，224	20847	水稻OS008339 MADS盒转录因子，片段(GENBANK_登录号AJ293816)
225，226	19766	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS6(GENBANK_登录号AF139664，AAF66997)
			227，228	20698	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS8(GENBANK_登录号AF141965，AAD38369)
229，230	19788	水稻MADS 盒蛋白MADS1(GENBANK_登录号AF204063，AAG35652)
			231，232	20700	水稻MADS 盒蛋白MADS3(GENBANK_登录号L37528，AAA99964)
233，234	20770	水稻MADS 盒蛋白MADS5(GENBANK_登录号U78890，AAB71434)
			235，236	20233	水稻MADS盒 蛋白MADS6(GENBANK_登录号U78782，AAB64250)
237，238	20668	水稻MADS盒蛋白MADS13(GENBANK_登录号AF151693，AAF13594)
			239，240	20842	水稻MADS盒蛋白MADS15(GENBANK_登录号AF058698，AAF19048)
241，242	20912	水稻MADS盒蛋白MADS18(GENBANK_登录号AF091458，AAF04972)
			243，244	20232	水稻AP1-样MADS盒蛋白RAP1B(GENBANK_登录号AB041020，BAA94342)
245，246	20837	水稻MADS盒样蛋白(GENBANK_登录号AB003322，BAA81880)

247，248	21116	水稻MADS 盒蛋白MADS7(GENBANK_登录号U78891，AAC49816)
			249，250	20778	水稻MADS 盒蛋白MADS8(GENBANK_登录号U78892，AAC49817)
251，252	20914	水稻MADS 盒转录因子MADS17(GENBANK_登录号AF109153，AAF21900)
			253，254	19877	水稻谷醇溶蛋白(GENBANK_登录号AF156714，AAF73991)
255，256	28517	水稻假设蛋白BAB56078(AP003106，BAB56078)
			257，258	20559	水稻同源框蛋白HOS59，片段(GENBANK_登录号BAB55659.1)
259，260	22896	水稻假设蛋白，类似于GTPase激活蛋白(GENBANK_登录号AF111710；AAD27557)
			261，262	25701	水稻推定的肌球蛋白(GENBANK_登录号AC078840；AAG13633)
263，264	23253	水稻推定的同源域蛋白OsAAK00972(GENBANK_登录号AC079736；AAK00972.1)
			265，266	23832	水稻推定的真核翻译起始因子3大亚基(GENBANK_登录号AP002487；BAB07943.1)
267，268	20689	水稻可能的Myb因子(GENBANK_登录号T03830)
			269，270	20466	水稻bZIP 转录因子(GENBANK_登录号AB051294；BAB72061.1)
271，272	19697	水稻推定的转录因子X1(GENBANK_登录号AF101045；AAF21887)
			273，274	20080	假设蛋白005792-3529类似于水稻受体激酶(GENBANK_登录号AAK18840.1；8e-07)
275，276	20534	假设蛋白018049-3655，片段，水稻推定的同源域转录因子，3′-部分(GENBANK_登录号AC092697；AAL58126.1)
			277，278	12464	水稻14-3-3 蛋白同系物GF14-c(GENBANK_登录号U65957)

279，280	22844	水稻3-Phosphoshikimate 1-羧基乙烯基转移酶(EPSP合酶)(GENBANK_登录号AB052962；BAB61062.1)
			281，282	22832	水稻果糖二磷酸醛缩酶，叶绿体前体(GENBANK_登录号Q40677)
283，284	23426	水稻叶绿体核酮糖二磷酸羧化酶，大链(GENBANK_登录号D00207；P12089)
			285，286	19842	水稻核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶活性酶(Activase)，大同种型A1(GENBANK_登录号AB034698，BAA97583)
287，288	23059	OsContig4331，水稻推定的33kDa光合系统II的氧进化蛋白(GENBANK_登录号BAB64069)
			289，290	22840	水稻光合系统II 10kDa多肽(GENBANK_登录号U86018；T04177)
291，292	20251	水稻抗凋亡死亡防御物1(O.sativa Defender AgainstApoptotic Death 1)(GENBANK_登录号D89727；BAA24104)
			293，294	19902	β-苹果青霉素EXPB2(GENBANK_登录号U95968；AAB61710)
295，296	20462	假设蛋白006819-2510，类似于来自萱草(Hemerocallis)杂交栽培种的衰老相关蛋白5(GENBANK_登录号AAC34855.1；e-97)
			297，298	24059	水稻组蛋白脱乙酰基酶HD1(GENBANK_登录号AF332875；AAK01712.1)
299，300	20544	水稻钙网蛋白前体(GENBANK_登录号AB021259；BAA88900)
			301，302	22883	水稻低温诱导蛋白5(GENBANK_登录号AB011368；BAA24979.1)
303，304	23878	水稻推定的肌球蛋白(GENBANK_登录号AC090120；AAL31066.1)
			305，306	20554	水稻脱水素(DEHYDRIN)RAB 16B(GENBANK_登录号P22911)

307，308	19701	可溶淀粉合酶(GENBANK_登录号AF165890；AAD49850)
			309，310	20285	OsSGT1(GENBANK_登录号gi|6581058)
311，312	20696	激发物(Elicitor)响应蛋白(GENBANK_登录号gi|11358958)
			313，314	24063	RAS GTPase(GENBANK_登录号gi|730510)
315，316	20621	Shaggy激酶(GENBANK_登录号gi|13677093)
			317，318	19651	水稻几丁质酶，III类(GENBANK_登录号AF296279；AAG02504)
319，320	20899	水稻过氧化氢酶A同工酶(GENBANK_登录号D29966；BAA06232)
			321，322	19707	水稻纤维素合酶催化亚基，RSW1-样(GENBANK_登录号AF030052；AAC39333)
323，324	29086	水稻salT基因产物(GENBANK_登录号AF001395；AAB53810.1)
			325，326	29098	水稻水通道蛋白(Aquaporin)(GENBANK_登录号AF062393)
327，328	29113	水稻DNAJ同系物(GENBANK_登录号BAB70509.1)
			329，330	20254	水稻丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A-2，催化亚基(GENBANK_登录号AF134552，AAD22116)
331，332	23266	水稻推定的富脯氨酸蛋白AAK63900(GENBANK_登录号AC084884)
			333，334	24775	水稻谷蛋白CAA33838(GENBANK_登录号X15833)
335，336	20311	水稻冷却诱导蛋白CAA90866(GENBANK_登录号Z54153，CAA90866)
			337，338	20215	水稻推定的14-3-3蛋白(GENBANK_登录号AAK38492)
339，340	23186	水稻推定的吡咯烷酮羧基肽酶(GENBANK_登录号AAG46136)

341，342	25962	推定的蛋白激酶(GENBANK_登录号：AC082645.，AK18843)
			343，344	27024	稻(rice)假设蛋白(GENBANK_登录号AP000615，BAA85416)
345，346	20775	稻Hsp70(GENBANK_登录号X67711，CAA47948)

SEQ ID NO：347是衍生自图3A-3D所述序列对比的共有序列。

SEQ ID NO：348是克隆PN20278的氨基酸序列，如图3A-3D所示。

SEQ ID NO：349是克隆PN29949b的氨基酸序列，如图3A-3D所示。

详细描述

本发明参考所附实施例将得以更充分描述，其中示出了本发明的代表性实施方案。然而，本发明可以不同的形式实施，不应受限于所述实施方案。当然，提供这些实施方案以便本发明更彻底和完全，并将本发明的范围充分传达给本领域技术人员。

本文引用的所有专利(包括公布的专利应用)和出版物(包括GENBANK_序列参考)，在此均以其全文并入参考。这些专利和出版物与本发明之间的任何矛盾均应有利于本发明而解决。

I.总则

功能基因组学的目标是鉴别控制生物体表型表达的基因，功能基因组学应用多种方法学包括但非限于生物信息学、基因表达研究、基因和基因产物相互作用、遗传学、生物化学和分子遗传学方法。例如，生物信息学通过在氨基酸或核苷酸水平在具有高度相似性(同源性)的异源生物体中鉴别基因可指派给定基因的功能。基因在mRNA或多肽水平的表达研究可以通过将基因的表达与环境应答、发育过程或遗传(突变)或分子遗传(基因过表达或低表达)混乱相连接而指派功能。基因在mRNA水平的表达可以单独(例如通过Northern分析)或与其它基因一起(例如通过微阵列分析)而确定，而基因在多肽水平的表达可以单独(例如通过天然或变性的多肽凝胶或免疫印迹分析)或者与其它基因一起(例如通过蛋白质组学分析)而确定。对多肽/多肽及多肽/DNA相互作用的了解可通过鉴别多肽和核酸序列在同一生物学过程中的作用而指派功能。遗传学通过论证基因中DNA损伤(突变)对生物体具有可计量的作用而指派基因功能，所述作用包括但非限于对其发育、激素生物合成及应答、生长及生长习性(植物结构(architecture))、mRNA表达模式、多肽表达模式、抗病能力、非生物刺激(例如干旱条件)耐受性、获得营养的能力、光合作用效力、改变的初级和次级代谢及多种植物器官的组成。生物化学可通过论证由所述基因编码的多肽典型地当单独或与其它多肽组合在异源生物体中表达时，具有某些酶活性而指派功能。分子遗传学可通过基因在天然植物或异源生物体中过表达或低表达，并观测如遗传学功能指派中所述可计量的作用而指派功能。在功能基因组学中，任何或所有这些方法通常同时加以利用，以在交叉任何许多生物体表型中指派基因功能。

本领域技术人员意识到这些不同方法学均可提供关于特定基因功能迹象的数据，这种迹象随着渐增的用于功能指派的数据量而更强，在一个实施方案中来自一种方法学，在另一个实施方案中来自两种方法学，在又一个实施方案中来自两种以上的方法学。另外，本领域技术人员意识到不同的方法学提供的基因功能指派的迹象强度不同。典型地但不总是生物化学、遗传学或分子遗传学的数据被认为强于生物信息学或基因表达迹象的数据。最后，本领域技术人员意识到针对不同的基因，来自单一方法学的单一数据与由这些不同基因的功能指派的每个独特数据提供的迹象强度方面可以不同。

农作物性状功能基因组学的目的是鉴别感兴趣的农作物性状基因，例如能在农作物中赋予有益的农艺学性状的基因。这种农艺学性状包括但非限于增强的产量，无论是质量还是数量；增强的营养获得和代谢效力；增强的或改变的植物组织用于食物、饲料、纤维或加工的营养成分；增强的农业或工业加工效用；增强的植物疾病抗性；增强的不利环境条件(非生物刺激)耐受性，所述不利环境条件包括但非限于干旱、过度寒冷、过热或过度土壤盐分或极端的酸或碱性；植物结构或发育改变，包括发育时间改变。通过转基因或非转基因方式对这种鉴别的性状基因的揭示可从本质上改良农作物的农业效益。

谷类是这个星球上人类和动物消耗的最重要的农作物。在水稻、玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦及其它农业重要的单子叶植物中观测到基因组同线性(synteny)(在大染色体节段内基因序列的保守)，这便于基于单一谷类基因的序列从不同的谷类中作图和分离直向同源基因。水稻在谷类颗粒中具有最小的基因组(大约420Mb)，最近已经是公布的和秘密的基因组和EST测序成果的主要焦点，见Goff等，2002所述。

II.定义

除非特别指出，本文所用所有技术和科学术语均具有适合本发明的本领域技术人员通常已知的同样含义。为阐明本说明书，以下给出了一些定义。

根据为时甚久的专利法规惯例，当这个说明书包括权利要求书中应用术语“一个(种)”时，是指“一或多个(种)”。

如本文所用术语“大约”当针对质量、重量、时间、体积、浓度或百分比提及时，是指涵盖与指定量有±20％或±10％的变化，在另一个实施例中是指±5％，在另一个实施例中是指±1％，在再一个实施例中是指±0.1％的变化，这种变化适于实践本发明。除非特别指出，应理解本说明书和权利要求书中应用的表示成分、反应条件等量的所有数字在一切情况下均由术语“大约”修饰。因此，除非相反地指出，否则本说明书和所附权利要求书中的数字参数是近似值，可以根据本发明获得的希望性质而变化。

如本文所用术语“氨基酸”和“氨基酸残基”可互换应用，是指任何20个天然存在的氨基酸及其类似物、衍生物和同类物；具有变化的侧链的氨基酸类似物；及前述任何物质的所有立体异构体。因此术语“氨基酸”是指包含这样的所有分子，无论天然的还是合成的，其包括氨基功能性和酸功能性并且能包括在天然存在的氨基酸的聚合物中。

氨基酸是基于多肽在其肽键经化学消化(水解)而形成的。本文所述的氨基酸残基在一个实施方案中是L异构体形式。然而，D异构体形式的残基可以取代任何L氨基酸残基，只要多肽保留希望的功能性性质即可。NH₂是指在多肽的氨基末端存在的游离的氨基。COOH是指在多肽的羧基末端存在的游离羧基。遵守标准多肽命名法，上文以表格形式示出了氨基酸残基的缩写。

注意本文以化学式表示的所有氨基酸残基序列从左至右均是常规的氨基末端至羧基末端方向。另外，短语“氨基酸”和“氨基酸残基”泛指包括修饰的和不寻常的氨基酸。

另外，注意在氨基酸残基序列起始或末端处的破折号(—)表示肽与一或多个氨基酸残基的另一个序列结合或者与氨基末端基团如NH₂或乙酰基共价结合或者与羧基末端基团如COOH共价结合。

如本文所用术语“与---相关”和“可操纵地连接”是指两个核酸序列物理或功能性相关联。例如，如果启动子或调节性DNA序列与编码RNA或多肽的一个DNA序列是可操纵地连接的或者处于调节子DNA序列影响编码或结构DNA序列的表达水平的情况下，则称这两个序列是相关联的。

如本文所用术语“嵌合体”是指一种多肽，其包含衍生自不同多肽的或者在非天然存在的位置彼此相关的结构域或其它特征部分。

如本文所用术语“嵌合构建体”是指一种重组核酸分子，其中启动子或调节性核酸序列可操纵地连接或者与编码mRNA或者被表达为多肽的核酸序列相关，由此调节性核酸序列能调节相关核酸序列的转录或表达。嵌合构建体的调节性核酸序列本质上与相关核酸序列非正常地可操纵地连接。

如本文所用术语“辅因子”是指在酶催化的反应中需要的一种天然反应物，如有机分子或金属离子。辅因子可以是例如NAD(P)、核黄素(包括FAD和FMN)、叶酸、蝶呤钼(molybdopterin)、硫胺素、生物素、硫辛酸、泛酸及辅酶A、S-腺苷甲硫氨酸、吡哆醛磷酸、泛醌及甲基萘醌类。在一个实施方案中，辅因子可以再生和重新使用。

如本文所用术语“编码序列”和“开放读框(ORF)”可互换应用，是指转录为RNA如mRNA、rRNA、tRNA、snRNA、有义RNA或反义RNA的核酸序列。在一个实施方案中，RNA然后在体内或体外翻译以产生多肽。

如本文所用术语“互补”是指这样的两个核苷酸序列，其包含在反向平行的核苷酸序列中的互补碱基之间形成氢键的基础上能彼此配对的反向平行的核苷酸序列。如本领域所已知，两个互补链的核酸序列当从5’至3’方向观察时是彼此反向互补的。

如本领域所已知，在给定的条件下彼此杂交的两个序列非必需具有100％完全互补。如本文所用术语“完全互补”和“100％互补”是指序列在Watson-Crick碱基配对中互补区是100％的序列，即在互补区内无错配发生。然而，对克隆入克隆载体的重组分子(例如cDNA)而言这些分子的某一些在5’或3’端可具有克隆事件所致的非互补的突出端是常有的事。在这种情况中，应理解100％或完全互补的区域排除仅是由于克隆事件所致或便于克隆而加入(典型在末端)重组分子的任何序列。这种序列事例如多接头序列，具有限制酶识别位点的接头，等等。

如本文当就多肽或氨基酸序列而言时所用术语“结构域”和“特征部分”是指具有特殊生物学功能的氨基酸序列的一个亚序列。具有特殊生物学功能的结构域和特征部分包括但非限于配体结合、核酸结合、催化活性、底物结合及多肽-多肽相互作用结构域。相似地，当就核酸序列而言时本文所用术语“结构域”或“特征部分”是指编码多肽的结构域或特征部分的核酸序列的亚序列。

如本文所用术语“酶活性”是指酶催化底物转化为产物的能力。酶的底物可包含酶的天然底物，但也可包含天然底物的类似物，其也可以由酶转化为产物或产物类似物。酶的活性是例如通过在一定时间之后确定反应产物的量而测定，或者通过在一定时间之后确定反应混合物中剩余的底物的量而测定。酶的活性也可以通过在一定时间之后确定反应混合物中剩余的未使用的反应辅因子的量的测定，或者通过在一定时间后确定反应混合物中使用的辅因子的量而测定。酶的活性也可以通过在一定时间后确定反应混合物中剩余的无能量或能量富集的分子(例如ATP，磷酸烯醇丙酮酸，乙酰磷酸或磷酸肌酸)的供体的量而测定，或者通过在一定时间后反应混合物中使用的无能量或能量富集的分子(例如ADP，丙酮酸，乙酸或肌酸)的供体的量而测定。

如本文所用术语“表达盒”是指能指导一特殊的核苷酸序列在一合适的宿主细胞中表达的核酸分子，包含可操纵地与感兴趣的核苷酸序列连接的启动子，所述感兴趣的核苷酸序列可操纵地与终止信号连接。其还典型地包含核苷酸序列正确翻译所需的序列。编码区通常编码感兴趣的多肽，但也能以有义或反义方向编码感兴趣的功能性RNA，例如反义RNA或未翻译的RNA。包含感兴趣的核苷酸序列的表达盒可以是嵌合的，是指其至少一个组分与至少一个其它组分是异源的。表达盒也可以是天然存在的，但已经以重组形式获得用于异源表达。然而，典型地，表达盒与宿主是异源的，即表达盒的特殊DNA序列在宿主细胞中不是天然存在的，是通过转化导入宿主细胞中或者宿主细胞的祖先中。表达盒中核苷酸序列的表达可以在组成型启动子或可诱导启动子的控制下，只在宿主细胞暴露于一些特殊的外部刺激时才起始转录。在多细胞生物体如植物的情况中，启动子也可以特异于特殊组织、器官或发育阶段。

如本文所用术语“片段”是指包含另一个序列亚组(subset)的序列。当就核酸或氨基酸序列而言应用时，术语“片段”和“亚序列”可互换。核酸序列的片段可以是少于在另一个核酸序列中发现的任何数目的核苷酸，因此包括但非限于外显子或内含子序列，启动子，增强子，复制起点，5’或3’非翻译区，编码区及多肽结合结构域。应理解片段或亚序列也可以包含少于全部的核酸序列，例如外显子或内含子、启动子、增强子等的一部分。相似地，氨基酸序列的片段或亚序列可以是少于天然存在的多肽中发现的任何数目的残基，因此包括但非限于结构域、特征部分、重复等。同样相似地，应理解氨基酸序列的片段或亚序列不需要包含结构域、特征部分、重复等的全部氨基酸序列。片段也可以是“功能片段”，其中该片段保留感兴趣的核酸序列或氨基酸序列的特异性生物学功能。例如，转录因子的功能片段可包括但非限于DNA结合结构域，反式激活结构域，或这两者。相似地，受体酪氨酸激酶的功能片段包括但非限于配体结合结构域，激酶结构域，ATP结合结构域及其组合。

如本文所用术语“基因”是指编码RNA的核酸，例如核酸序列包括但非限于编码多肽的结构基因。靶基因可以是衍生自细胞的基因，内源基因，转基因，或外源基因如病原体例如病毒的基因，其在感染后存在于细胞中。含有靶基因的细胞可衍生自或包含于任何生物体中，例如植物，动物，原生动物，病毒，细菌或真菌。术语“基因”还泛指与生物学功能相关的任何DNA片段。如此，术语“基因”涵盖了这样的序列，包括但非限于编码序列，启动子区域，转录调节序列，调节蛋白的特异性识别序列的非表达DNA片段，有助于基因表达的非表达DNA片段，经设计具有希望参数的DNA片段，或其组合。基因可以通过多种方法获得，包括从生物学样品中克隆，基于已知或推定的序列信息合成，及重组衍生自一或多个现有序列。

如本领域所已知，基因包含一个编码链和一个非编码链。如本文所用术语“编码链”和“有义链”可互换应用，是指具有与翻译的基因产物的mRNA相同核苷酸序列的核酸序列。如本领域所已知，当编码链和/或有义链用于DNA分子时，编码链/有义链包括胸苷残基而不是在相应的mRNA中发现的尿苷残基。另外，当用于DNA分子时，编码链/有义链还可包括在mRNA中未发现的额外元件，包括但非限于启动子，增强子和内含子。相似地，术语“模板链”和“反义链”可互换应用，是指与编码链/有义链互补的核酸序列。

如本文所用术语“互补”是指核酸通过传统的Watson-Crick或其它非传统类型的相互作用与另一个核酸序列可形成一或多个氢键。就本发明的核酸分子而言，核酸分子与其互补序列的结合自由能足以使得核酸的相关功能得以继续，在一个实施方案中是RNAi活性。例如，siRNA构建体的有义和反义链之间的互补程度可以与siRNA的反义链和靶核酸序列之间的互补程度相同或不同。当这些改变位于反义siRNA的3’末端和中间之间时，在siRNA双链的反义链中与靶序列少于100％的互补程度，包括点突变，不是非常耐受的，而接近反义siRNA链的5’末端的突变可呈现低度的RNAi活性(Elbashir et al.，2001)。本领域熟知核酸分子的结合自由能的确定方法。见例如Freier et al.，1986；Turner et al.，1987所述。

如本文所用短语“互补百分比”是指核酸分子中可与另一个核酸序列形成氢键(例如Watson-Crick碱基配对)的连续残基的百分比(例如10中之5，6，7，8，9，10为50％，60％，70％，80％，90％和100％互补)。术语“100％互补”，“完全互补”和“完美互补”是指核酸序列的所有连续碱基均可与另一个核酸序列中的相同数目的连续残基形成氢键。

术语“基因表达”通常是指细胞过程，通过这个过程生物学活性多肽从DNA序列中产生并在细胞中呈现生物学活性。如此，基因表达包含转录和翻译过程，但也包含可影响基因或基因产物生物学活性的转录后和翻译后过程。这些过程包括但非限于RNA合成，加工和转运，以及多肽合成，转运和多肽的翻译后修饰。另外，如本文所述影响细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的过程也可以影响基因表达。

术语“异源”，“重组”和“外源”当用于核酸序列(例如DNA序列)或基因时，是指源自与特定的宿主细胞是外源的来源的序列，如果源自同样的来源则是其原始形式的修饰形式。因此，宿主细胞中的异源基因包括与特定的宿主细胞是内源的但已经通过例如使用DNA改组(shuffling)或其它重组技术(例如将基因克隆如载体中)修饰的基因。这个术语还包括天然存在的DNA序列的非天然存在的多个拷贝。因此，该术语是指与细胞外源或异源的DNA片段，或者与细胞同源但位于不是该元件在宿主细胞内原始发现的位置或形式。相似地，当就多肽或氨基酸序列提及时，外源多肽或氨基酸序列是源自与特定的宿主细胞外源的来源的多肽或氨基酸序列，或者如果源自相同来源则是其原始形式的修饰形式。因此，外源DNA片段可以被表达以产生外源多肽。

“同源”核酸(或氨基酸)序列是与其被导入的宿主细胞天然相关的核酸(或氨基酸)序列。

如本文所用术语“宿主细胞”和“重组宿主细胞”可互换应用，是指其中可导入本发明的组合物(例如表达载体)的细胞(例如植物细胞)。另外，这个术语不仅是指其中最初导入表达构建体的特定植物细胞，而且还指这种细胞的子代或潜在子代。某些修饰由于突变或环境影响可在随后的世代中发生，因此这种子代事实上也许与亲代细胞不同，但仍包括在本文所用该术语的范围内。

短语“特异性杂交”是指当一个特定的核苷酸序列存在于复合混合物(例如总细胞)DNA或RNA中时，一个分子在严格条件下仅与该核苷酸序列结合，形成双链或杂交。短语“基本结合”是指探针核酸与靶核酸之间的互补杂交，并包含可通过降低杂交介质的严格性而调和的较少错配以完成靶核酸序列的检测。

如本文所用术语“抑制剂”是指一种化学物质，其失活或降低多肽、受体、信号转导多肽、结构基因产物或转运多肽的生物学活性，如生物合成和催化活性。术语“除草剂”(或除草化合物)是指在植物的任何发育阶段用于植物的抑制剂，从而除草剂抑制该植物的生长或杀死该植物。

“分离的”核酸分子或蛋白质，或其生物活性部分，是指当通过重组技术产生时基本没有其它细胞物质或培养基，或者当化学合成时基本没有化学前体或其它化合物。因此，术语“分离的核酸”是指基因组、cDNA或者合成来源多核苷酸或其组合，其(1)与其中天然发现“分离的核酸”的细胞不相关，或者(2)与其天然不连接的多核苷酸可操纵地连接。相似地，术语“分离的多肽”是指这样的多肽，在某些实施方案中从重组DNA或RNA中制备，或者是合成起源的，或者这些组合，其(1)与天然正常发现的蛋白质不相关，(2)分离自其中其正常发生的细胞，(3)分离自没有相同细胞来源的其它蛋白质，(4)由不同的物种细胞表达，或者(5)非天然存在。

在某些实施方案中，“分离的”核酸是没有天然位于源自核酸衍生自其中的生物体基因组DNA中核酸两侧(即位于核酸5’和3’末端的序列)的序列(例如蛋白质编码或调节序列)。例如，在多种实施方案中，分离的核酸分子可包含天然位于核酸衍生自其中的细胞基因组DNA中核酸分子两侧的少于大约5kb，4kb，3kb，2kb，1kb，0.5kb或0.1kb的核苷酸序列。基本没有细胞物质的蛋白质包括具有少于大约30％，20％，10％或5％(干重)污染蛋白质的蛋白质或多肽制品。当本发明的蛋白质或其生物活性部分是重组产生的时，培养基具有少于大约30％，20％，10％或5％(干重)的感兴趣的化合物的化学前体或非蛋白质。因此，术语“分离的”当用于分离的DNA分子或分离的多肽时，是指人工从其天然环境中分离的DNA分子或多肽，并因此不是天然产物。分离的DNA分子或多肽可以纯化形式存在，或者可以在非天然环境如在转基因宿主细胞中存在。

术语“分离的”当就“分离的细胞”而言时，是指细胞已经从其天然环境例如器官、组织或生物体中取出。

如本文所用术语“成熟多肽”是指从中已经除去转运肽、信号肽和/或前肽部分的多肽。

如本文所用术语“最小启动子”是指可支持任何转录的最小启动子，如TATA元件。最小启动子在没有上游或下游激活作用的情况中典型地具有大大降低的启动子活性。在存在合适的转录因子的情况中，最小启动子可发挥允许转录的功能。

如本文所用术语“修饰的酶活性”是指酶的活性不同于其在植物中天然存在的酶活性(即在没有直接或间接人工操纵酶活性的情况中天然存在的酶活性)。 在一个实施方案中，修饰的酶活性是通过非天然存在的酶展示的，其耐受抑制同类的天然存在的酶活性的抑制剂。

如本文所用术语“调节”是指增加、降低生物化学实体例如野生型或突变的核酸分子的任何或所有化学和生物学活性或性质或者其它改变。同样，术语“调节”可以指基因的表达水平或RNA分子或编码一或多种蛋白质或蛋白质亚基的等价RNA分子的表达水平的改变，或者一或多种蛋白质或蛋白质亚基的活性被正调节或负调节，由此表达、水平或活性高于或低于在没有调节物的情况中观测的表达、水平或活性。例如，术语“调节”可以意味着“抑制”或“阻抑”，但术语“调节”的应用非限于这种解释。

如本文所用术语“抑制”，“阻抑”，“负调节”及其合乎文法的变化可互换应用，是指一种活性，由此基因表达或编码一或多种基因产物的RNA的水平被降低至在没有本发明的核酸分子的情况下观测到的水平以下。在一个实施方案中，核酸分子(例如dsRNA，反义RNA或siRNA)的抑制导致靶RNA的稳态水平降低。在另一个实施方案中，核酸分子(例如dsRNA，反义RNA或siRNA)的抑制导致靶基因的表达水平低于在存在不能介导RNAi应答的失活的或弱化的分子的情况中观测到的水平。在另一个实施方案中，用本发明核酸分子(例如dsRNA，反义RNA或siRNA)对基因表达的抑制在存在核酸分子的情况中高于没有核酸分子的情况。在另一个实施方案中，基因表达的抑制与由该基因编码的mRNA的降解速度增强相关(例如通过RNAi介导的，通过siRNA，dsRNA或反义RNA)。

本文所用术语“调节”是指应答的正调节(即激活或刺激)和负调节(即抑制或阻抑)这两者。因此，术语“调节”当关于功能性质或生物学活性或过程(例如酶活性或受体结合)而提及时是指正调节(例如激活或刺激)，负调节(例如抑制或阻抑)或另外改变这种性质，活性或过程。在某些情况中，这种调节可以伴随一种特殊情况的发生，如激活信号转导途径，和/或仅在特殊的细胞类型中出现。

术语“调节物”是指能产生调节作用的多肽，核酸，大分子，复合物，分子，小分子，化合物，物种，等等(天然存在的或非天然存在的)，或者从生物学材料如细菌，植物，真菌或者动物细胞或组织中产生的提取物。调节物可以通过在分析中评价其作为功能性质，生物学活性或过程或这些组合的抑制剂或激活剂(直接或间接)的潜在活性(例如兴奋剂，部分拮抗剂，部分兴奋剂，反向兴奋剂，拮抗剂，抗微生物制剂，微生物感染或增殖的抑制剂，等等)。在这种分析中，可以一次筛选许多调节物。调节物的活性可以是已知，未知或部分已知的。

调节物可以是选择性或非选择性的。如本文所用术语“选择性”当关于调节物(例如抑制剂)而应用时是指一种可测定的或者另外的生物学相关差异，调节物与一种分子(例如感兴趣的基因)相互作用但与另一个相似但不同的分子(例如与感兴趣的基因相同的基因家族的成员)不相互作用。

必须理解不需要相互作用的程度完全不同。另一方面，术语选择性调节物不仅涵盖仅结合来自感兴趣的基因而非相关家族成员的mRNA转录物的那些分子。这个术语还包括特征在于与来自感兴趣的基因及来自相关家族成员(程度较低)的转录物相互作用的调节物。例如，选择性调节物包括这样的调节物，其可发现在调节物与来自感兴趣的基因的转录物及来自相关基因的转录物的结合中存在生物学相关差异(如序列相同性的程度)。

当鉴别一个选择性调节物时，调节物以与其结合另一种分子(例如与感兴趣的基因相关的基因的mRNA转录物)不同的(例如较强)方式结合一种分子(例如感兴趣的基因的mRNA转录物)。如本文所用，调节物显示出与其更强地结合的分子“选择性结合”或“优先结合”。

如本文所用术语“突变”具有其传统内涵，是指核酸或多肽序列中的遗传的，天然存在或导入的一个改变，并以本领域技术人员通常已知的含义应用。

如本文所用术语“天然”是指一个基因天然存在于未转化的植物细胞的基因组中。相似地，当关于多肽而应用时，“天然多肽”是由未转化的植物细胞基因组的天然基因编码的多肽。

如本文所用术语“天然存在”是指与人工产生的截然不同的在自然中发现的物体。例如，以其天然状态存在于生物体(包括病毒)中，未被在实验室中人工有意修饰或分离的多肽或核苷酸序列，是天然存在的。同样，多肽或核苷酸序列如果由重组分子编码或存在于其中，即使氨基酸序列或核酸序列与自然发现的氨基酸序列或核酸序列相同，也认为是“非天然存在的”。

如本文所用术语“核酸”和“核酸分子”是指任何脱氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)，寡核苷酸，通过聚合酶链反应(PCR)产生的片段，及通过任何连接，分裂，内切核酸酶作用，及外切核酸酶作用而产生的片段。核酸可以由天然存在的核苷酸(如脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸)单体，或者天然存在的核苷酸的类似物(例如天然存在的核苷酸的α-对映体形式)，或者这两者组成。修饰的核苷酸可在糖部分和/或嘧啶或嘌呤碱基部分中有修饰。糖修饰包括例如用卤素，烷基基团，胺和叠氮基团置换一或多个羟基基团，或者糖可以功能化为醚或酯。另外，全部的糖部分可以用空间和电子相似的结构置换，如氮糖(aza-sugar)和碳环糖类似物。碱基部分中的修饰例子包括烷基化嘌呤和嘧啶，酰化的嘌呤或嘧啶，或者其它熟知的杂环取代。核酸单体可以通过磷酸二酯键或这种键的类似物连接。磷酸二酯键的类似物包括硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)，二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)，phosphoroanilothioate，phosphoranilidate，氨基磷酸酯等等。术语“核酸”还包括所谓的“肽核酸”，其包含附于聚酰胺主链的天然存在的或修饰的核酸碱基。核酸可以是单链或双链的。

术语“可操纵地连接”当描述两个核酸区域之间的关系时，是指一种并列关系，其中所述区域处于这种关系使得可以指定的方式发挥功能。例如，“可操纵地连接”一个编码序列的一个控制序列以这种方式连接，由此编码序列的表达在与控制序列一致的条件下实现，如当合适的分子(例如诱导剂或聚合酶)与控制或调节序列结合时。因此，在一个实施方案中，短语“可操纵地连接”是指一个启动子与编码序列连接，由此编码序列的转录受该启动子的控制和调节。本领域熟知启动子与编码序列可操纵地连接的技术，感兴趣的编码序列相关的精确方向和位置尤其依赖于启动子的特异性性质。

因此，术语“可操纵地连接”可以指与核苷酸序列连接的启动子区域，由此该核苷酸序列的转录受这个启动子区域的控制和调节。相似地，称核苷酸序列在其可操纵地连接的启动子的“转录控制”下。本领域熟知将启动子区域与核苷酸序列可操纵地连接的技术。术语“可操纵地连接”也可以指与核苷酸序列连接的转录终止序列或其它核酸，由此该核苷酸序列的转录终止受所述转录终止序列的控制。另外，术语“可操纵地连接”可以指增强子，沉默子(silencer)或其它核酸调节序列，当与开放读框可操纵地连接时以正或负方式调节该开放读框的表达。

如本文所用，就两个核酸或多肽序列而言短语“相同性百分比”是指两或多个序列或亚序列当对比并排列最大相应程度时，在一个实施方案中具有60％，在另一个实施方案中有70％，在另一个实施方案中有80％，在另一个实施方案中有90％，在另一个实施方案中有95％，在另一个实施方案中有至少99％核苷酸或氨基酸残基相同性，使用如下序列对比算法之一或通过目测测定。在一个实施方案中，相同性百分比在序列的一个长度至少为大约50个残基的区域中存在，在另一个实施方案中，在至少大约100个残基的区域，在另一个实施方案中，相同性百分比在至少大约150个残基的区域存在。在另一个实施方案中，相同性百分比在全长序列存在。

为进行序列对比，典型地一个序列作为参考序列以与测试序列对比。当使用序列对比算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，如果需要则指定亚序列坐标，并指定序列算法程序参数。序列对比算法然后基于指定的程序参数计算测试序列与参考序列的序列相同性百分比。

可以进行序列最佳对比，例如通过Smith & Waterman，1981所述的局部同源算法(local homology algorithm)，通过Needleman & Wunsch，1970揭示的同源对比算法(homology alignment algorithm)，通过Pearson &Lipman，1988所揭示的查询相似性方法(search for similarity method)，通过这些算法的计算机执行程序(GCG Wisconsin Package的GAP，BESTFIT，FASTA，和TFASTA，得自Accelrys，Inc.，San Diego，California，UnitedStates of America)，或者通过目测进行。见Ausubel et al.，1988所述。

适于确定序列相同性和序列相似性百分比的算法的一个实例是由Altschul et al.，1990描述的BLAST算法。进行BLAST分析的软件可通过国立生物技术信息中心(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。这个算法包括首先鉴别高分值序列对(HSP)，通过鉴别查询序列中长度W的短语而鉴别，当其与数据库序列中同样长度的一个字对比时匹配或满足一些正值的阈值T。T是指相邻字的阈值。见Altschul et al.，1990所述。这些初始的相邻字采样(hit)作为种子开始搜索以发现含有其的较长HSP。然后只要对比值增加累积，就将字采样沿着序列的两个方向扩展。就核苷酸序列而言，累积值是使用参数M(一对匹配残基的奖赏值，总是＞0)和N(错配残基的惩罚值，总是＜0)计算的。就氨基酸序列而言，使用得分矩阵计算累积值。当累积的对比值低于达到的最大值有X时，字采样在每个方向的扩展被停止，由于一或多个负值残基对比的累积或者达到每个序列的末端导致累积值为0或0之下。BLAST算法参数W，T和X确定了对比的敏感性和速度。BLASTN程序(就核苷酸序列而言)以默认值使用，字长(W)为11，期望值(E)为10，分界值(cutoff)为100，M＝5，N＝4，双链对比。就氨基酸序列而言，BLASTP程序以默认值使用，字长(W)为3，期望值(E)为10，及BLOSUM62得分矩阵。见Henikoff &Henikoff，1992所述。

除了计算序列相同性百分比之外，BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计学分析(见例如Karlin & Altschul，1993所述)。BLAST算法提供的一种相似性测定方法是最小的总和概率(P(N))，这提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生的匹配的概率指征。例如，如果测试核酸序列与参考核酸序列的对比中最小总和概率在一个实施方案中小于大约0.1，在另一个实施方案中小于大约0.01，在另一个实施方案中低于大约0.001，则认为测试核酸序列与参考序列相似。

短语“充分杂交”是指探针核酸分子与靶核酸分子之间的互补杂交，并包含可通过降低杂交和/或洗涤介质的严格性调和的最小错配(例如多形性)以达到希望的杂交。

就核酸杂交实验如Southern和Northern印迹分析而提及的“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”是序列和环境双重依赖性的。较长的序列在较高的温度特异性杂交。关于核酸杂交的广泛指导见Tijssen，1993所述。通常地，针对特异的序列选择的高度严格杂交和洗涤条件是低于热熔点(T_m)大约5℃，在指定的离子强度和pH下进行。典型地，在“高度严格条件”下，探针将与其靶亚序列特异杂交，但与其它序列不杂交。相似地，针对特异的序列选择的中等严格杂交和洗涤条件是低于T_m大约5℃以上，在指定的离子强度和pH进行。中等严格条件例如包括在高度严格条件的杂交和洗涤，除了杂交和洗涤温度针对特异序列在一个实施方案中是低于T_m8℃，在另一个实施方案中低10℃，在另一个实施方案中低12℃，在另一个实施方案中低15℃，在指定离子强度和pH下进行。

T_m是这样的温度(在指定离子强度和pH)，在这个温度下50％的靶序列与完美匹配的探针杂交。选择的非常严格条件等于特殊探针的T_m。具有大约100个以上互补残基的互补核酸的Southern或Northern印迹分析的高度严格杂交条件例如是在42℃在具有1mg肝素的50％甲酰胺中杂交过夜。高度严格洗涤条件例如是在65℃在0.1×标准柠檬酸盐水(SSC)，0.1％(w/v)SDS中洗涤15分钟。高度严格洗涤条件另一个例子是在65℃在0.2×SSC缓冲液中洗涤15分钟(见Sambrook和Russell，2001针对SSC缓冲液及其它严格条件的描述)。通常在高度严格洗涤之前进行较低严格洗涤以除去背景探针信号。就大约100个以上核苷酸的双链体而言中等严格洗涤条件例如是在45℃在1×SSC中洗涤15分钟。就大约100个以上核苷酸的双链体而言中等严格洗涤条件另一个实例是在40℃在4-6×SSC中洗涤15分钟。就短探针而言(例如大约10-15个核苷酸)，严格条件典型包括盐浓度低于大约1M Na⁺离子，典型为大约0.01-1M Na⁺浓度(或其它盐)，pH7.0-8.3，温度典型为至少大约30℃。严格条件也可以通过添加去稳定剂如甲酰胺而达到。通常地，信号与噪音比率是在特殊的杂交分析中针对不相关探针观测的比率的两倍(或更高)，表明特异性杂交。

以下是可用于克隆与本发明的参考核苷酸序列基本相似的同源核苷酸序列的杂交和洗涤实例：在一个实例中探针核苷酸序列与靶核苷酸序列在50℃在7％十二烷基硫酸钠(NaDS)，0.5M NaPO₄，1mM乙二胺四乙酸(EDTA)中杂交，随后在50℃在2×SSC，0.1％NaDS中洗涤；在另一个实例中，探针与靶序列在50℃在7％NaDS，0.5M NaPO₄，1mMEDTA中杂交，随后在50℃在1×SSC，0.1％NaDS中洗涤；在另一个实例中，探针与靶序列在50℃在7％NaDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中杂交，随后在50℃在0.5×SSC，0.1％NaDS中洗涤；在又一个实施例中，探针与靶序列在50℃在7％NaDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中洗涤，随后在50℃在0.1×SSC，0.1％NaDS中洗涤；在另一个实施例中，探针与靶序列在50℃在7％NaDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中杂交，随后在65℃在0.1×SSC，0.1％NaDS中洗涤。在一个实施方案中，杂交条件包含在42℃在转管中杂交至少12小时。

术语“表型”是指细胞或生物体的全部物理，生物化学和生理学特性，例如具有任一种性状或任一组性状。同样，表型得自细胞或生物体内基因的表达，并且与潜在可观测的或可分析的性状相关。

如本文所用术语“多肽”，“蛋白质”和“肽”可互换应用，是指无论其大小或功能如何，20个蛋白质氨基酸或氨基酸类似物的聚合物。尽管“蛋白质”通常是指相对大的多肽，“肽”通常是指小多肽，但在本领域这些术语的用法有重叠和变化。如本文所用术语“多肽”除非特别指出是指肽，多肽和蛋白质。如本文所用术语“蛋白质”，“多肽”和“肽”当就基因产物而言时可互换应用。术语“多肽”涵盖了所有功能的蛋白质，包括酶。因此，多肽例如包括基因产物，天然存在的蛋白质，同源物，直向同源物(ortholog)，共生同源物(paralogs)，片段，及前述多肽的其它等价物，变体和类似物。

术语“多肽片段”或“片段”当就参考多肽而言时是指一种多肽，其中与参考多肽自身相比缺失氨基酸残基，但剩余的氨基酸序列通常与参考多肽中相应位置相同。这种缺失可发生在参考多肽的氨基末端或羧基末端，或者在这两端。片段长度典型地为至少5，6，8或10个氨基酸，至少为14个氨基酸，至少为20，30，40或50个氨基酸，至少75个氨基酸，或者至少100，150，200，300，500或更多个氨基酸长。片段可保留参考多肽的一或多种生物学活性。在某些实施方案中，片段可包含一个结构域或特征部分，及任选在该结构域或特征部分的一或两侧包含额外的氨基酸，额外氨基酸的数目可以是5，10，15，20，30，40，50或直至100或更多个残基。另外，片段可包括特殊区域的一个亚片段，该亚片段保留其衍生自其中的区域的功能。在另一个实施方案中，片段可具有免疫原性性质。

如本文所用术语“前多肽(pre-peptdie)”是指通常靶定于细胞器如叶绿体的多肽，并仍包含转运肽(transit peptide)。

如本文所用术语“引物”是指一个序列，其在一个实施方案中包含外显子或内含子区域的两或多个脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，在另一个实施方案中包含多于三个，在另一个实施方案中包含多于八个，在又一个实施方案中包含至少20个核苷酸。在一个实施方案中这种寡核苷酸长度在10-30个碱基之间。

术语“启动子”或“启动子区域”均是指基因内的一个核苷酸序列，其位于编码序列的5’末端并发挥指导编码序列转录的功能。启动子区域包含一个转录起始位点，并可另外包括一或多个转录调节元件。在一个实施方案中，本发明的方法应用RNA聚合酶III启动子。

“最小启动子”是具有使得基本水平转录发生所需的最小元件的核苷酸序列。同样，最小启动子不是完全的启动子，但可以是能指导报道构建体在实验系统中基本水平转录的启动子的亚序列。最小启动子包括但非限于CMV最小启动子，HSV-tk最小启动子，猿猴病毒40(SV40)最小启动子，人b-肌动蛋白最小启动子，人EF2最小启动子，腺病毒E1B最小启动子，及热激蛋白(hsp)70最小启动子。最小启动子通常用一或多个转录调节元件扩增以影响可操纵地连接的基因的转录。例如，细胞类型特异性或组织特异性转录调节元件可以加入最小启动子以产生重组启动子，指导可操纵地连接的核苷酸序列以细胞类型特异性或组织特异性方式转录。

不同的启动子具有转录调节元件的不同组合。基因是否在细胞中表达依赖于组成基因启动子的特殊转录调节元件及存在于细胞核内的不同转录因子的组合。同样，启动子根据其在体内或体外的功能活性通常被分为“组成型”，“组织特异性”，“细胞类型特异性”或“诱导型”几种类型。例如，组成型启动子是能指导基因在多种细胞类型中转录的启动子。组成型启动子例如包括编码某些组成型或“管家”功能的如下基因：次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)，二氢叶酸还原酶(DHFR；Scharfmannet al.，1991)，腺苷脱氨酶，磷酸甘油酸激酶(PGK)，丙酮酸激酶，磷酸甘油酸变位酶，β-肌动蛋白启动子(见例如Williams et al.，1993)，及本领域技术人员已知的其它组成型启动子。另一方面，“组织特异性”或“细胞类型特异性”启动子在一些组织和细胞类型中指导转录，但在其它组织和细胞中无活性。组织特异性启动子例子包括在下文更详细描述的启动子，以及本领域已知的其它组织特异性和细胞类型特异性启动子。

当就启动子而言提及的术语“连接”是指启动子元件的物理接近，由此它们一起发挥指导可操纵地连接的核苷酸序列的转录的功能。

如本文所用术语“转录调节序列”或“转录调节元件”均是指启动子区域内的核苷酸序列，可以应答调节转录因子。应答可以涵盖转录输出的降低或增加，并由转录因子与包含转录调节元件的DNA分子的结合而介导。在一个实施方案中，转录调节序列是一个转录终止序列，或者在本文称作转录终止信号。

术语“转录因子”一般是指一种蛋白质，其通过与转录调节元件和进行转录的细胞成分包括RNA聚合酶，转录相关因子(TAF)，染色质重塑蛋白(chromatin-remodeling protein)及影响基因转录的任何其它相关蛋白质相互作用而调节基因表达。

如本文所用术语“显著”是关于两或多个实体之间非随机关联的概率的统计学分析。为确定是否有“显著”关系，可以进行数据统计学处理以计算概率，以“p值表示”。那些p值降低至用户限定的分界(cutoff)点之下则认为是显著的。在一个实施例中，p值低于或等于0.05，在另一个实施例中低于0.01，在另一个实施例中低于0.005，在又一个实施例中低于0.001，认为是显著的。

术语“纯化的”是指一目标物种，其是主要存在的物种(即基于摩尔水平其比组合物中任何其它各个物种均更加丰富)。“纯化级分”是一种组合物，其中目标物种包含所有存在的物种的至少50％(基于摩尔水平)。在确定物种在溶液或分散系中的纯度中，物种溶解或分散于其中的溶剂或基质通常不包括在这种确定中；相反仅考虑溶解或分散的物种(包括感兴趣的物种之一)。通常，纯化的组合物具有包含占组合物中存在的所有物种大约80％以上的一个物种，优选大约85％，90％，95％，99％或更多以上。目标物种可以被纯化为基本同质性(homogeneity)(组合物中的污染物种通过常规检测方法不能检测到)，其中组合物基本上由单一物种组成。本领域技术人员可根据本文教导使用标准的蛋白质纯化技术纯化本发明的多肽。多肽的纯度可以通过本领域技术人员已知的许多方法确定，包括例如氨基末端氨基酸序列分析，凝胶电泳，及质谱分析。

“参考序列”是指用作序列对比基础的指定序列。参考序列可以是较大序列的一部分，例如全长核苷酸或氨基酸序列的一个片段，或者可包含一个完整的序列。通常地，当就核苷酸序列提及时，参考序列长度是至少200，300或400个核苷酸，通常是至少600个核苷酸长，及经常是至少800个核苷酸长。由于两个蛋白质均可(1)包含在两个蛋白质之间相似的一个序列(即完整蛋白质序列的一部分)，及(2)可进一步包含在两个蛋白质之间不同的一个序列，两个(或多个)蛋白质之间的序列对比典型地通过“对比窗”(见上述)对比两个蛋白质序列以鉴别和对比相似的序列局部区域。

术语“调节序列”是本说明书中应用的一个通称，是指影响其可操纵地连接的编码和非编码序列表达所需的多核苷酸序列，如起始信号，增强子，调节子，启动子及终止序列。调节序列例如Goeddel，1990所述，包括例如猿猴病毒40(SV40)的早期和晚期启动子，腺病毒或巨细胞病毒立即早期启动子，lac系统，trp系统，TAC或TRC系统，其表达由T7 RNA聚合酶指导的T7启动子，噬菌体λ的主要操纵子和启动子区域，fd包被蛋白的控制区域，3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子，酸性磷酸酶的启动子例如Pho5，酵母a-交配因子的启动子，杆状病毒系统的多面体启动子及已知控制原核或真核细胞或其病毒的基因表达的其它序列，及其不同组合。这种控制序列的性质和应用根据宿主生物体而可以不同。在原核生物中，这种调节序列一般包括启动子，核糖体结合位点，及转录终止序列。术语“调节序列”是指至少包括其存在可影响表达的成分，并还可包括其存在是有益的额外成分，例如前导序列及融合配偶体序列。

在某些实施方案中，多核苷酸序列的转录是在启动子序列(或其它调节序列)的控制下，其控制多核苷酸在指定的细胞类型中表达。还应理解多核苷酸可以在调节序列的控制下，调节序列与控制天然存在形式的多核苷酸表达的那些序列相同或不同。

术语“报道基因”是指包含编码可易于检测其存在或活性的蛋白质的核苷酸序列的核酸，包括但非限于荧光素酶，荧光蛋白(例如绿色荧光蛋白)，氯霉素乙酰转移酶，β-半乳糖苷酶，分泌的胎盘碱性磷酸酶，β-内酰胺酶，人生长激素，及其它分泌的酶报道基因。通常，报道基因编码不是由宿主细胞产生的多肽，其通过分析细胞而可检测，例如通过直接荧光测定，放射性同位素或分光光度分析细胞及典型地不需要杀死细胞进行信号分析。在某些情况中，报道基因编码一种酶，其使宿主细胞的荧光性质产生改变，这通过定性，定量或半定量功能或转录激活作用而可检测。酶例如包括酯酶，β-内酰胺酶，磷酸酶，过氧化物酶，蛋白酶(组织纤溶酶原激活物或尿激酶)及其功能可通过本领域技术人员已知的或在未来揭示的合适生色或生荧光的底物检测的其它酶。

如本文所用术语“测序”是指使用常规的人工或自动实验室技术确定DNA或蛋白质靶样品的核酸或氨基酸的有序的线性序列。

如本文所用术语“基本纯的”是指多核苷酸或多肽基本上没有其天然状态相关的序列和分子，及在分离程序中应用的那些分子。术语“基本没有”是指样品在一个实施方案中至少50％，在另一个实施方案中至少70％，在另一个实施方案中至少80％，及在又一个实施方案中90％没有其天然相关的材料和化合物。

如本文所用术语“靶细胞”是指一种细胞，希望向其中插入一个核酸序列或多肽，或者希望另外在未修饰的细胞中在已知标准的条件下实现修饰。导入靶细胞中的核酸序列可以是各种长度的。另外，核酸序列可以作为质粒或其它载体的成分或者作为裸序列进入靶细胞中。

如本文所用术语“转录”是指包括RNA聚合酶与基因相互作用指导基因的编码序列中存在的结构信息表达为RNA的细胞过程。所述过程包括但非限于如下步骤：(a)转录起始；(b)转录延伸；(c)转录剪接；(d)转录加帽化；(e)转录终止；(f)转录物聚腺苷酸化；(g)转录物的核输出；(h)转录物编辑；及(i)稳定转录物。

如本文所用术语“转录因子”是指细胞质或细胞核蛋白，其结合基因，或结合基因的RNA转录物，或结合与一种基因或RNA转录物的另一种蛋白质或依次结合基因或RNA转录物的另一种蛋白质结合的另一种蛋白质，从而调节基因的表达。这种调节可另外通过其它机制实现，如“基因转录因子”的实质属于以某些方式改变基因转录水平的因子。

术语“转染”是指核酸例如表达载体导入受体细胞中，在一些情况中包括核酸介导的基因转移。术语“转化”是指由于细胞吸收外源核酸所致细胞基因型被改变的一个过程。例如，转化的细胞可表达本发明一种重组形式的多肽，或者反义表达可从转移的基因发生以便天然存在形式的基因的表达被破坏。

术语“载体”是指能转运与其连接的另一种核酸的核酸。根据本发明可以使用的一种类型的载体是附加体，即能在染色体之外复制的核酸。其它载体包括能自主复制和表达其连接的核酸的那些载体。能指导其可操纵地连接的基因表达的载体在本文是指“表达载体”。通常，重组DNA技术中利用的表达载体通常是质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是载体最常使用的形式。然而，本发明包括其它形式的表达载体，其具有相同功能并随后为本领域所已知。

本文所用术语“表达载体”是指能指导特殊的核苷酸序列在合适的宿主细胞中表达的DNA序列，其包含与感兴趣的核苷酸序列可操纵地连接的启动子，所述核苷酸序列与转录终止序列可操纵地连接。其还典型地包含核苷酸序列正确翻译所需的序列。包含感兴趣的核苷酸序列的构建体可以是嵌合的。构建体还可以是天然存在的但已经以重组形式获得的用于异源表达的构建体。感兴趣的核苷酸序列，包括设计为实现核苷酸序列正确表达的任何额外的序列，均可以称为“表达盒”。

本文所用术语“异源基因”，“异源DNA序列”，“异源核苷酸序列”，“外源核酸分子”或“外源DNA片段”均是指源自与指定宿主细胞外源来源的序列，如果源自相同来源则是其原始形式的修饰形式。因此，宿主细胞中的异源基因包括是特殊的宿主细胞内源的但已经例如通过诱变或通过分离自天然转录调节序列修饰的基因。该术语还包括天然存在的核苷酸序列的非天然存在的多个拷贝。因此，该术语是指一种DNA片段，其是与细胞外源或异源的，或者与细胞同源但在宿主细胞核酸内正常未发现该元件的位置。

当两个核酸的每个序列在子代核酸中组合时，这两个核酸被“重组”。当这两个核酸均是重组底物时，这两个序列被“直接”重组。当使用一个中间物如交叉(cross over)寡核苷酸重组时，这两个序列被“间接重组”。就间接重组而言，只是序列之一是重组的实际底物，在一些情况中两者均不是重组底物。

如本文所用术语“调节元件”是指参与控制核苷酸序列表达的核苷酸序列。调节元件可包含与感兴趣的核苷酸序列可操纵地连接的一个启动子和终止信号。调节序列还包括增强子和沉默子。它们还典型地涵盖核苷酸序列正确翻译所需的序列。

如本文所用术语“显著增加”是指活性(例如酶活性)高于测定技术中内在误差幅度的增加，在一个实施方案中增加基本活性(例如存在抑制剂的情况中野生型酶的活性)的2倍或更高，在另一个实施方案中增加大约5倍或更高，在又一个实施方案中增加大约10倍或更高。

如本文所用术语“显著减少”及“显著降低”是指低于测定技术中内在的误差幅度的降低结果(例如酶反应产物的量)，在一个实施方案中降低基本活性(例如无抑制剂的情况中野生型酶的活性)的2倍或更多，在另一个实施方案中，降低大约5倍或更多，在又一个实施方案中降低大约10倍或更多。

如本文所用术语“特异性结合”及“免疫学交叉反应性”是指两个基本相似分子的一个指征。两个核酸序列或多肽基本相似的一个指征是由第一个核酸编码的多肽与由第二个核酸编码的多肽免疫学交叉反应或特异性结合。因此，例如两个多肽仅由于保守取代而有所不同时，则认为这两个肽典型地基本相似。

短语“与抗体特异性(或选择性)结合”或“与…特异性(或选择性免疫反应)”当就多肽或肽而言时，是指在存在异源多肽群及其它生物制剂的情况中，确定一种多肽存在的一个结合反应。因此，在指定的免疫分析条件下，指定的抗体与特定的多肽结合并且不以显著量与样品中存在的其它多肽结合。在这种条件下与抗体的特异性结合需要针对特定多肽有特异性选择的抗体。例如，可以选择具有由本发明的任何核酸序列编码的氨基酸序列的多肽的抗体，以获得与所述多肽特异性免疫反应而与除了多形性变体之外其它多肽不反应的抗体。可以使用多种免疫分析形式以选择与特定多肽特异性免疫反应的抗体。例如，通常使用固相ELISA免疫分析，Western印迹，或免疫组织化学技术选择与多肽特异性免疫反应的单克隆抗体。见Harlow & Lane，1988描述的可用于确定特异性免疫反应性的免疫分析形式和条件。典型地，一个特异性或选择性反应是背景信号或噪音的至少两倍，或者更典型地是背景的10-100倍以上。

如本文所用术语“亚序列”是指核酸或氨基酸序列，其分别包含较长的核酸或氨基酸(例如多肽)的一部分。

如本文所用术语“底物”是指在酶天然进行其功能的生物化学途径中由酶天然识别的并转化为产物的一种分子；或者是该分子的一种修饰形式，其在与天然存在的反应相似的酶反应中也由酶识别并由酶转化为产物。

如本文所用术语“合适的生长条件”是指适于某些希望的结果例如重组多肽的产生或核酸分子的表达的生长条件。

如本文所用术语“转化”是指将异源DNA导入植物细胞，植物组织或植物中的过程。应理解转化的植物细胞，植物组织或植物不仅涵盖了转化过程的终产物，还涵盖了其转基因子代。

如本文所用术语“转化”，“转基因”和“重组”是指一种宿主生物体如细菌或植物，其中已经导入了一种异源核酸分子。核酸分子可以稳定地整合入宿主的基因组中或者核酸分子也可以染色体外分子存在。这种染色体外分子可以是自主复制的。应理解转化的细胞，组织或植物不仅涵盖了转化过程的终产物，还涵盖了其转基因子代。“未转化的”，“未转基因的”或“未重组的”宿主是指野生型生物体，例如不含有异源核酸分子的细菌或植物。

如本文所用术语“存活力”是指植物的适应参数。分析植物的纯合性，表明该多肽是植物生长所必需的。

III.核酸及多肽

一方面，本发明提供了编码细胞增殖相关多肽的一种分离的核酸分子，其中所述多肽结合选自如下一组的蛋白质的片段：OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsERP，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2及OsCAA90866。在某些实施方案中，分离的核酸分子衍生自水稻(即Oryza sativa)。

如本文所用短语“细胞增殖相关多肽“是指一种蛋白质或多肽(注意这两个术语在本文可互换应用)，其参与细胞增殖，尤其是植物细胞增殖。这种多肽可参与细胞增殖的增加；相反，这种多肽可参与细胞增殖的消除或抑制。另外，多肽可以仅例如在细胞暴露于刺激(例如生物或非生物刺激)时才参与细胞增殖。另外，多肽可以仅在细胞分化或发育时才参与细胞增殖。本发明的“细胞增殖相关多肽”是通过这种多肽在细胞中表达水平的增加或降低以调节细胞增殖的速度的能力而鉴别的，无论是单独或者与一些其它刺激(例如存在生长因子，存在刺激)一起调节。

如本文所用术语“结合”是指细胞增殖相关多肽优先与指定的靶分子相互作用。在一些实施方案中，这种相互作用可以生物学读出(例如在酵母双杂交系统中阳性)。在一些实施方案中，这种相互作用是可以测定的(例如K_D为至少10^-5M)。

本文揭示的是水稻(O.sativa)-衍生的cDNA，其编码在酵母双杂交系统中与OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsERP，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2及OsCAA90866相互作用的植物蛋白。本发明的所有细胞增殖相关蛋白均是彼此相关的，有许多是可以相互作用的。图1-6是示出本发明不同的细胞增殖相关蛋白的相关性示意图。

在某些实施方案中，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含与编码本文揭示的细胞增殖相关多肽的核酸分子的核苷酸序列基本相似的核苷酸序列。

广义而言，如本文所用术语“基本相似”就核苷酸序列而言是指相应于参考核苷酸序列(即编码本发明的细胞增殖相关蛋白的核酸分子的核苷酸序列)的一个核苷酸序列，其中相应的序列编码具有与参考核苷酸序列编码的多肽基本相同的结构的多肽。在一些实施方案中，基本相似的核苷酸序列编码由参考核苷酸序列编码的多肽(即尽管核苷酸序列不同，但编码的蛋白质具有相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，“基本相似”是指与含有编码本发明的细胞增殖相关蛋白之一(例如实施例中描述的蛋白质)的核苷酸序列的参考序列相比具有至少50％序列相同性，或者至少60％，70％，80％或85％或者至少90％，95％或者至少96％，97％或99％序列相同性的核苷酸序列。

“基本相似”还指与编码BIOPATH蛋白和/或功能蛋白结构域(FPD)的核苷酸序列的区域有至少50％相同性，或者至少80％相同性，或者至少95％相同性，或者至少99％相同性的核苷酸序列，其中核苷酸序列对比使用本文所述的GAP分析进行。术语“基本相似”特别是指包括其中序列已经被修饰以在特定细胞中最佳表达的核苷酸序列。

包括与参考核苷酸序列“基本相似”的核苷酸序列的多核苷酸与包括参考核苷酸序列的多核苷酸杂交，在一个实施方案中在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM乙二胺四乙酸(EDTA)中杂交，在50℃在2X标准柠檬酸盐水(SSC)，0.1％SDS中洗涤，在另一个实施方案中在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中杂交，在50℃在1×SSC，0.1％SDS中洗涤，在另一个实施方案中在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中杂交，在50℃在0.5×SSC，0.1％SDS中洗涤，或者在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中洗涤，在50℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤，或者在又一个实施方案中在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中杂交，在65℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤。

术语“基本相似”当就蛋白质或多肽而言时，是指相应于参考蛋白质(即本发明的细胞增殖相关蛋白)的一种蛋白质或多肽，其中该蛋白质具有与参考蛋白基本相同的结构和功能，其中氨基酸序列中只存在不明显影响多肽功能的变化。当就蛋白质或氨基酸序列而言时，基本相似的与参考蛋白质或氨基酸序列之间的相同性百分比是至少30％，或者至少40％，50％，60％，70％，80％，85％或90％，或者至少95％，或者至少99％，在至少30％-至少99％范围内的每个数字也是本发明的一部分，使用GAP的GCG Wisconsin Package SEQWEB_应用程序，默认GAP分析参数，基于Needleman & Wunsch，1970的算法进行分析。

在一个实施方案中，多肽参与的功能如非生物刺激耐受，疾病抗性，增强的产量或营养性质或组分。在一个实施方案中，多肽参与抗旱性。

在一个实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的所示氨基酸序列，及具有保守氨基酸修饰的变体。术语“保守修饰的变体”是指可由具有简并密码子取代的核酸序列编码的多肽，其中一或多个选择的(或者所有)密码子的至少一个位置用混和的碱基和/或脱氧肌苷残基取代(Batzer et al.，1991；Ohtsuka et al.，1985；Rossolini et al.，1994)。另外，本领域技术人员确认编码序列中改变，添加或缺失一个氨基酸或少量氨基酸的核酸，肽，多肽或多肽序列的各个取代，缺失或添加是“保守修饰”，其中修饰导致一个氨基酸用一个化学相似的氨基酸取代。保守修饰的变体提供了与未修饰的多肽相似的生物学活性。本领域已知列出了功能相似的氨基酸的保守取代表。见Creighton，1984所述。

术语“保守修饰的变体”还是指具有与本发明的多肽的序列基本相似的氨基酸残基序列的肽，其中一或多个残基已经用功能相似的残基取代。保守取代例如包括用一个非极性(疏水性)残基如异亮氨酸，缬氨酸，亮氨酸或甲硫氨酸取代另一个；用一个极性(亲水性)残基取代另一个，如精氨酸和赖氨酸之间，谷氨酰胺和天冬酰胺之间，甘氨酸和丝氨酸之间；一个碱性残基如赖氨酸，精氨酸或组氨酸取代另一个；或者一个酸性残基如天冬氨酸或谷氨酸取代另一个。

氨基酸取代，如可用于修饰本文所述多肽的那些取代，通常基于氨基酸侧链取代物的相对相似性，例如其疏水性，亲水性，电荷，大小等等。对氨基酸侧链取代物的大小，形状和类型的分析示出精氨酸，赖氨酸和组氨酸全部是正电荷的残基；丙氨酸，甘氨酸和丝氨酸均是相似大小的；苯丙氨酸，色氨酸和酪氨酸均具有一般相似的形状。因此，基于这些理由，精氨酸，赖氨酸和组氨酸；丙氨酸，甘氨酸和丝氨酸；及苯丙氨酸，色氨酸和酪氨酸在本发明是生物学功能等价物。本领域技术人员已知其它生物学功能等价改变。

在产生生物学功能等价的氨基酸取代中，可以考虑到氨基酸的亲水性指数。每个氨基酸基于其疏水性和电荷特征指定了亲水性指数，这些是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)及精氨酸(-4.5)。

亲水性氨基酸指数在赋予蛋白质相互作用生物学功能方面的重要性是为本领域所熟知的(Kyte & Doolittle，1982，在此并入参考)。已知某些氨基酸可以取代具有相似亲水性指数或分值的其它氨基酸并仍保留相似的生物学活性。在基于亲水性指数产生改变中，氨基酸的取代包括亲水性指数在一个实施方案中在原值±2之内，在另一个实施方案中在原值±1之内，在又一个实施方案中在原值±0.5内的氨基酸。

本领域还已知相似氨基酸的取代可基于亲水性而有效产生。在此并入参考的美国专利No.4,554,101陈述了由其邻近氨基酸的亲水性控制的蛋白质的最佳局部平均亲水性与其免疫原性和抗原性相关，即与蛋白质的生物学性质相关。应理解一个氨基酸可取代具有相似亲水性值的另一个氨基酸并仍获得生物学等价的蛋白质。

如美国专利No.4,554,101所述，如下亲水性值已经指定给氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺 (+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。

在基于相似的亲水性值产生改变中，氨基酸的取代包括亲水性值在一个实施方案中在原值±2之内，在另一个实施方案中在原值±1之内，在又一个实施方案中在原值±0.5之内。

当讨论聚焦于从氨基酸改变中产生的功能等价多肽时，意识到这些改变可通过改变编码DNA而实现，还需要考虑的是遗传密码是简并的而且两或多个密码子可编码相同的氨基酸。

在一个实施方案中，多肽在植物的特定部位或组织中表达。在一个实施方案中，该部位或组织包括但非限于表皮，维管组织，分生组织，形成层，皮层，或木髓。在另一个实施方案中，该部位或组织是叶或叶鞘，根，花，及发育中的胚珠或种子。在另一个实施方案中，该部位或组织可以是例如表皮，根，维管组织，分生组织，形成层，皮层，木髓，叶或花。在再一个实施方案中，该部位或组织是种子。

本发明的多肽，其片段或其变体，可包含本发明多肽的任何数目的连续氨基酸残基，其中残基的数目选自从10至本发明全长多肽的残基数目之间的整数。在一个实施方案中，多肽的部分或片段是一种功能性多肽。本发明包括具有特异性活性的活性多肽，在一个实施方案中该特异性活性是天然(非合成的)内源多肽活性的至少20％，在另一个实施方案中为30％，在另一个实施方案中为40％，在另一个实施方案中为50％，在另一个实施方案中为60％，在另一个实施方案中为70％，在另一个实施方案中为80％，在另一个实施方案中为90％及在又一个实施方案中为95％。另外，底物特异性(k_cat/K_m)可以与天然的(非合成的)内源多肽基本相似。典型地，K_m在一个实施方案中是天然的内源多肽的至少为30％，在另一个实施方案中为40％，在另一个实施方案中为50％，在另一个实施方案中为至少60％，在另一个实施方案中为70％，在另一个实施方案中为80％，及在又一个实施方案中是天然的内源多肽的90％。分析和定量测定活性和底物特异性的方法为本领域技术人员所熟知。

本发明的分离的多肽当以免疫原呈递时可以激发与本发明的多肽特异性反应的抗体的产生。因此，本发明的多肽可用作免疫原以构建与本发明的多肽免疫反应的抗体以进行包括但非限于免疫分析或多肽纯化技术的目的。确定结合的免疫分析为本领域技术人员所熟知，包括但非限于酶联免疫吸附测定(ELISA)及竞争免疫测定。

IV.酵母双杂交系统

酵母双杂交系统是一种熟知的系统，其基于发现大多数真核转录激活子是模块(见例如Gyuris et al.，1993；Bartel & Fields，1997；Feys etal.，2001所述)。酵母双杂交系统使用：1)指导“饵(bait)”(一种已知的蛋白质，其通过与DNA结合结构域融合带给酵母DNA)合成的质粒；

2)具有饵的上游结合位点的一或多个报道基因(“报道子”)；及3)指导与激活结构域及其它有用部分(激活标记的蛋白质或“猎物(prey)”)融合的蛋白质的合成的质粒。

在下文所述的所有实施例中，使用自动化高通量酵母双杂交分析技术(由Myriad Genetics Inc.提供，Salt Lake City，Utah，United States ofAmerica)查询蛋白质与饵蛋白质的相互作用。简而言之，靶蛋白质(例如OsE2F1)在酵母中表达为与酵母Ga14p多肽的DNA激活结构域融合。编码靶蛋白质或这个蛋白质的片段的DNA通过PCR扩增自cDNA或者从可获得的克隆中制备。所得DNA片段通过在DNA结合结构域载体(例如pGBT9，pGBT.C，pAS2-1)中连接或重组而克隆，由此产生Ga14p与靶蛋白质序列之间的框内融合。所得构建体即靶基因构建体通过转化导入一个单倍体酵母株中。

然后使用一种筛选方案查询超过五百万个cDNA克隆的各种各样的肽基序的两个激活结构域文库的各个饵。所述文库衍生自RNA，所述RNA分离自正常条件下生长的水稻的叶，茎和根，加上来自暴露于多种刺激的植物组织(输入性状(input trait)文库)及来自不同接种期，愈伤组织及早期和晚期圆锥花序的植物组织(输出性状(output trait)文库)。为进行筛选，将激活结构域融合的文库(即克隆入激活结构域载体的水稻cDNA)通过转化导入相反交配型的单倍体酵母株中。携带激活结构域构建体的酵母株含有一或多个Ga14p-应答报道基因，其表达可以监测。一些酵母报道株的非限制性实例包括Y190，PJ69和CBY14a。

将携带靶基因构建体的酵母与携带激活结构域文库的酵母组合。这两个酵母株交配形成二倍体酵母并将其铺板于针对一或多个Ga14p-应答报道基因表达而选择的培养基上。因此，这两个杂交体蛋白(即靶“饵”蛋白与激活结构域“猎物”蛋白质)均在酵母表达株中表达，其中测试蛋白质之间的相互作用导致报道基因TRP1 and LEU2的转录，使得可以在没有色氨酸和亮氨酸的选择培养基上生长。选择在保温后产生的集落进一步鉴定。激活结构域质粒分离自在双杂交查询中获得的每个集落。这个构建体中插入体的序列通过序列分析而获得(例如Sanger’s双脱氧核苷酸链终止法；见Ausubel et al.，1988所述，包括直至2002的更新材料)。因此，得自这些查询的正相同性通过针对私有的和公众的(例如GENBANK_)核酸和蛋白质数据库的序列分析确定。

激活结构域融合与靶蛋白质的相互作用通过测试相互作用的特异性而证实。将激活结构域构建体与原始靶蛋白质构建体或者多种其它DNA结合结构域构建体一起共转化入酵母报道株中。在存在靶蛋白质但没有其它测试蛋白质的情况中报道基因的表达表明这种相互作用是真正的。

为进一步鉴定编码相互作用蛋白质的基因，将饵与猎物的核酸序列与Torrey Mesa Reaserch Institute(TMRI)’私有的GENECHIP_水稻基因组阵列(Affymetrix，Santa Clara，California，United States of America；见Zhu et al.，2001)的核酸序列进行对比。该水稻基因组阵列含有25聚体化(25-mer)寡核苷酸探针，该探针具有相应于在组成水稻基因组图的大约42,000个重叠群中发现的21,000个推定的开放读框3’末端的序列(见Goffet al.，2002)。使用16个不同的探针测定每个核酸的表达水平。探针的序列可在http://tmri.org/gene_exp_web/获得。计算的表达值基于观测的表达水平减去与每个探针相关的噪音背景而确定。实验包括评价不同植物组织包含种子，根，叶和茎，圆锥花序和花粉的差异基因表达。同样在暴露于如下条件的植物中测定基因表达：冷环境(即14℃)，渗透压(补加260mM甘露醇的生长培养基)，干旱(补加25％聚乙二醇8000的培养基)，盐(补加150mM NaCl的培养基)，脱落酸(ABA)可诱导的刺激(补加50μM ABA的培养基；见Chen et al.，2002所述)，真菌病原体稻瘟霉(Magnaporthe grisea)感染，及用植物激素(茉莉酮酸(JA；100μM)，赤霉素(GA3；50μM)，及脱落酸)和用除草剂苄氨基嘌呤(BAP；10μM)，2，4-二氯苯氧基乙酸(2，4-D；2mg/l)，和BL2(10μM))处理。

本发明的许多细胞增殖相关蛋白彼此相互作用。

V.核酸分子表达的控制和调节

A.总则

本发明的一方面提供了调节(即增加或降低)本发明的核酸分子和/或多肽在植物中的水平的组合物和方法。特别地，本发明的核酸分子和多肽在某些组织中是组成型，时间性，或空间性(例如在发育阶段)，和/或数量上表达的，这是非重组工程化植物的不典型特征。因此，本发明提供了在如改变上述特殊特征的这种实例应用中的用途。

本发明分离的核酸分子用于在重组工程化的细胞如细菌，酵母，昆虫，哺乳动物或植物细胞中表达本发明的多肽。表达细胞在非天然条件(例如数量，组合物，部位和/或时间)下可产生该多肽，因为这些细胞已经加以遗传改变以便如此。本领域技术人员已知表达编码本发明的多肽的核酸的众多表达系统。

另一方面，本发明的特色是由本发明的核酸编码的细胞增殖相关多肽。在某些实施方案中，细胞增殖相关多肽是分离的。

本发明进一步提供了修饰(即增加或降低)本发明多肽在植物或其一部分中的浓度或成分的方法。修饰可以通过增加或降低在植物中的浓度和/或成分(即本发明多肽的定量)而实现。所述方法包括将包含上述本发明的核酸分子的表达盒导入植物细胞中，以获得转化的植物细胞或组织，并培养转化的植物细胞或组织。核酸分子可以在组成型或诱导型启动子的调节下。所述方法可进一步包括足够时间地诱导或抑制序列的核酸分子在植物中的表达，以修饰在植物或植物一部分中的浓度和/或成分。

具有修饰的本发明核酸分子表达的植物或植物部分可以加以分析并选择，使用本领域技术人员已知的方法进行，所述方法包括但非限于Southern印迹，DNA测序，使用特异于核酸分子的引物并检测从中产生的扩增子的PCR分析。

通常，浓度或成分可以相对于天然对照植物，植物部分，或没有表达盒的细胞而言增加或降低，在一个实施方案中增加或降低5％，在另一个实施方案中为10％，在另一个实施方案中为20％，在另一个实施方案中为30％，在另一个实施方案中为40％，在另一个实施方案中为50％，在另一个实施方案中为60％，在另一个实施方案中为70％，在另一个实施方案中为80％，及在又一个实施方案中为90％。

B.核酸分子表达的调节

本发明的组合物包括植物核酸分子，由包含开放读框的核酸分子编码的多肽或一部分长度的多肽的氨基酸序列。这些序列可用于改变相应于开放读框的特殊基因的表达，通过降低或消除植物基因的表达或者通过过表达特殊的基因产物而进行。本发明的这个实施方案的方法包括用本发明的核酸分子稳定转化植物，所述核酸分子包括与能驱动开放读框(有义或反义)在植物细胞中表达的启动子可操纵地连接的开放读框。就包含编码具有全长多肽活性的部分长度的多肽的开放读框或其片段的核酸分子而言的“部分”或“片段”，是指一个序列，其在一个实施方案中有至少80个核苷酸，在另一个实施方案中有至少150个核苷酸，在又一个实施方案中有至少400个核苷酸。如果不用于表达，“部分”或“片段”在代表性的实施方案中是指相应于本发明的核酸分子的核苷酸序列的至少9，或12，或15，或至少20个连续核苷酸(例如探针和引物或其它寡核苷酸)。因此，为表达一个特殊的基因产物，所述方法包括将包含与开放读框可操纵地连接的启动子的表达盒导入植物，植物细胞或植物组织中，以产生一种转化的分化植物，转化的细胞，或转化的组织。转化的细胞或组织可以再生以提供一种转化的分化植物。转化的分化植物或其细胞可以在改变植物或其细胞中基因产物量的数量表达开放读框，该产物由所述开放读框编码。本发明还提供了通过本发明的方法制备的一种转化的植物，以及其子代和种子。

本发明进一步包括一个核苷酸序列，其与在严格条件下与本发明的核酸分子以及从这个核酸分子中转录的RNA分子杂交的一个序列(后文称作测试序列)互补。当杂交在严格条件下进行时，测试核酸分子或本发明的核酸分子可以在一个支持物上呈递：例如在膜上或在DNA芯片上。因此，变性的测试核酸分子或本发明的核酸分子首先与支持物结合，并且杂交在特定的时间和温度进行，在一个实施方案中，在55℃和70℃之间，在含有0.1％SDS的2×SSC中进行杂交，随后在同样温度但用SSC浓度降低的缓冲液中漂洗支持物。根据所需要的严格程度，这种浓度降低的缓冲液典型是含有0.1％SDS的1×SSC，含有0.1％SDS的0.5×SSC，或者含有0.1％SDS的0.1×SSC。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种转化的植物宿主细胞，或者通过培育获得的宿主细胞，其能过表达，低表达或剔除多肽编码基因和/或其基因产物。植物细胞用至少一种这样的表达载体转化，其中植物宿主细胞可用于再生植物组织或完整植物或其种子，其中导入序列的表达，包括过表达和低表达，可以在体外或in planta测定。

另一方面，本发明的特色是一种分离的细胞增殖相关多肽，其中该多肽与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsPN31085，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2，和OsCAA90866。在一些实施方案中，本发明的特色是一种分离的多肽，其包含或由与本发明分离的细胞增殖相关多肽的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列组成。

由于本发明的蛋白质在细胞增殖中起作用，因此在某些实施方案中，导入本发明的核酸分子的细胞与未导入所述核酸分子的细胞相比具有不同的细胞增殖速度。

另一方面，本发明的特色是一种调节植物细胞增殖的方法，包括将编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子导入植物细胞中，其中所述多肽与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsERP，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2和OsCAA90866，其中多肽由该细胞表达。

另一方面，本发明提供了一种调节植物细胞增殖的方法，包括将编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子导入植物细胞中，其中该多肽与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsERP，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2和OsCAA90866，其中由核酸分子编码的多肽在细胞中的表达降低。

如本发明所揭示，本文描述的所有细胞增殖相关蛋白在正常条件下，在不利条件下(例如当植物暴露于生物或非生物刺激时)或者当植物处于发育和分化阶段时均影响细胞增殖。因此，通过改变植物细胞中本发明的细胞增殖相关蛋白的量，可以调节植物细胞的增殖。

在一些情况中，本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达增加，仅此或应答一些刺激(例如应激或生长激素)将导致细胞提高其增殖速度。在其它情况中，本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达增加导致细胞降低其增殖速度。相似地，本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达降低可提高或降低细胞的增殖速度。相关的是如果本发明的细胞增殖相关蛋白的表达水平增加或降低，则细胞的增殖速度改变。

本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达水平的增加是相对简单的问题。例如，蛋白质的过表达可以通过用编码蛋白质的核酸分子转化细胞而实现，根据标准方法如上述那些方法进行。

本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达水平降低同样使用标准方法即可简单实现。例如，可以给予细胞与编码蛋白质的核酸分子的有义链(即mRNA链)互补的反义RNA或DNA寡核苷酸，以降低该蛋白质在细胞中的表达(见例如Agrawal，1993；美国专利No.5,929,226所述)。

调节本发明的核酸分子的表达可以例如通过如下方式之一而实现：

1.“有义”抑制

本发明的核苷酸序列表达的改变，在一个实施方案中表达降低，通过“有义”抑制而获得(参见例如Jorgensen et al.，1996所述)。在这种情况中，本发明核苷酸序列的全部或一部分包含在DNA分子中。该DNA分子可以与在包含靶基因的细胞(在一个实施方案中是植物细胞)中起作用的启动子可操纵地连接，并导入细胞中，其中该核苷酸序列是可表达的。核苷酸序列以“有义方向”插入DNA分子中，意味着该核苷酸序列的编码链可以被转录。在一个实施方案中，核苷酸序列是完全可翻译的并且核苷酸序列或其一部分中包含的所有遗传信息均翻译为多肽。在另一个实施方案中，核苷酸序列是部分可翻译的并且翻译成一个短肽。在一个实施方案中，这可以通过在核苷酸序列中插入至少一个不成熟的终止密码子而实现，这个密码子使得翻译停止。在另一个实施方案中，核苷酸序列被转录但无翻译产物产生。这通常通过除去由该核苷酸序列编码的多肽的起始密码子即ATG而实现。在另一个实施方案中，包含核苷酸序列或其一部分的DNA分子被稳定整合入植物细胞的基因组中。在另一个实施方案中，包含核苷酸序列或其一部分的DNA分子包含在一个染色体外复制的分子中。

在含有上述DNA分子之一的转基因植物中，可以降低相应于所述DNA分子中包含的核苷酸序列的核苷酸序列的表达。DNA分子中的核苷酸序列与表达被降低的核苷酸序列相比，在一个实施方案中至少70％相同，在另一个实施方案中至少80％相同，在另一个实施方案中至少90％相同，在另一个实施方案中至少95％相同，及在又一个实施方案中至少99％相同。

2.“反义”抑制

在另一个实施方案中，本发明的核苷酸序列表达的改变，例如表达降低，是通过“反义”抑制获得的。本发明的核苷酸序列的全部或一部分包含在一个DNA分子中。该DNA分子可以与在植物细胞中起作用的启动子可操纵地连接，并导入植物细胞中，其中核苷酸序列是可表达的。将核苷酸序列以“反义方向”插入DNA分子中，意味着核苷酸序列的反向互补链(有时也称为非编码链)可被转录。在一个实施方案中，包含核苷酸序列或其一部分的DNA分子稳定整合入植物细胞的基因组中。在另一个实施方案中，包含核苷酸序列或其一部分的DNA分子包含在染色体外复制的分子中。描述了这种方法的一些出版物加以引用以进一步例证(Green et al.，1986；van der Krol et al.，1991；Powell et al.，1989；Ecker& Davis，1986)。

在含有上述DNA分子之一的转基因植物中，可以降低相应于该DNA分子中包含的核苷酸序列的核苷酸序列的表达。该DNA分子中的核苷酸序列与表达被降低的核苷酸序列相比，在一个实施方案中至少70％相同，在另一个实施方案中至少80％相同，在另一个实施方案中至少90％相同，在另一个实施方案中至少95％相同，及在又一个实施方案中至少99％相同。

3.同源重组

在另一个实施方案中，相应于本发明的核苷酸序列的至少一个基因组拷贝在植物基因组中被修饰，通过例如Paszkowski et al.，1988所述同源重组技术进行。这个技术利用同源序列彼此识别及在各自的核酸分子之间交换核苷酸序列的能力，本领域称之为同源重组。同源重组可发生在细胞中核苷酸序列的染色体拷贝及通过转化导入细胞中的核苷酸序列的引入拷贝之间。因此在核苷酸序列的染色体拷贝中精确导入特异的修饰。在一个实施方案中，本发明的核苷酸序列的调节元件被修饰。这种调节元件通过使用本发明的核苷酸序列或其一部分作为探针筛选基因组文库而可易于获得。现有的调节元件由不同的调节元件置换，因此改变核苷酸序列的表达，或者调节元件被突变或缺失，因此消除了核苷酸序列的表达。在另一个实施方案中，核苷酸序列通过缺失一部分核苷酸序列或全部核苷酸序列，或者通过突变而修饰。本发明还提供了突变的多肽在植物细胞中的表达。已经揭示了破坏内源植物基因的这种技术的新进展(Kempin et al.，1997 and Miao & Lam，1995)。

在一个实施方案中，核苷酸序列的染色体拷贝中的突变通过用嵌合的寡核苷酸转化细胞而导入，所述嵌合的寡核苷酸由在末端具有两个发夹帽的双链体构象中的RNA和DNA残基的一个连续片段组成。所述寡核苷酸的另一个特点是例如在RNA残基存在2’-O-甲基化。设计RNA/DNA序列以与本发明核苷酸序列的染色体拷贝的序列排列对比，并含有希望的核苷酸改变。例如，这个技术在美国专利No.5,501,967和Zhuet al.，1999中进一步例证。

4.核酶

在另一个实施方案中，编码本发明多肽的RNA由特异于这种RNA的催化性RNA或核酶裂解。核酶在转基因植物中表达并导致植物细胞中编码本发明多肽的RNA的量降低，因此导致细胞中累积的多肽量降低。这种方法见美国专利No.4,987,071进一步例证。

5.显性负突变体

在另一个实施方案中，由本发明的核苷酸序列编码的多肽的活性被改变。这通过多肽的显性负突变体在转基因植物中的表达导致内源多肽的活性丧失而实现。

6.适体(Aptamers)

在另一个实施方案中，本发明多肽的活性通过在转基因植物中表达与多肽特异性结合的核酸配体(所谓的适体)而抑制。适体可以通过SELEX(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)方法获得。在SELEX方法中，将具有随机化序列的区域的单链核酸的候选混合物与多肽接触，并从候选混合物的剩余部分中分离出与靶亲和性增加的那些核酸。扩增分离的核酸以产生配体富集的混合物。在反复几次后，获得与多肽具有最佳亲和性的核酸，并用于在转基因植物中表达。这种方法在美国专利No.5,270,163中进一步例证。

7.锌指多肽

与本发明的核苷酸序列或其调节区域结合的锌指多肽也可以用于改变核苷酸序列的表达。在另一个实施方案中，核苷酸序列的转录被降低或增加。锌指多肽见例如Beerli et al.，1998，或WO95/19431，WO98/54311，或WO96/06166所揭示，这些文献均以全文并入参考。

8.dsRNA

本发明核苷酸序列表达的改变也可以通过双链RNA(dsRNA)干扰(RNAi)而获得，例如WO99/32619，WO99/53050或WO99/61631所述，这些文献均以全部并入参考。在一个实施方案中，本发明的核苷酸序列表达的改变，在一个实施方案中表达降低，是通过dsRNA干扰而获得的。本发明的核苷酸序列的全部，在一个实施方案中是一部分，均可包含在一个DNA分子中。这个DNA分子的大小在一个实施方案中是100-1000个核苷酸或更多；最佳大小通过经验确定。将相同的DNA分子的两个拷贝连接，由一个间隔DNA分子分隔，由此第一个和第二个拷贝方向相反。在一个实施方案中，DNA分子的第一个拷贝是反向互补体(也称作非编码链)及第二个拷贝是编码链；在另一个实施方案中，第一个拷贝是编码链，第二个拷贝是反向互补体。间隔DNA分子的大小在一个实施方案中是长度为200-10,000个核苷酸，在另一个实施方案中是400-5000个核苷酸，在又一个实施方案中是600-1500个核苷酸。所述间隔在一个实施方案中是一种随机的DNA，在另一个实施方案中是一种随机的DNA但与dsRNA干扰的靶生物体不同源，在又一个实施方案中是由靶生物体有效剪接的一个功能内含子。由间隔分隔的DNA分子的两个拷贝与在植物细胞中起作用的启动子可操纵地连接，并导入植物细胞中，其中核苷酸序列是可表达的。在一个实施方案中，包含核苷酸序列或其一部分的DNA分子稳定整合入植物细胞的基因组中。在另一个实施方案中，包含核苷酸序列或其一部分的DNA分子包含在一个染色体外复制的分子中。引用描述了这种方法的一些出版物以进一步例证(Waterhouse et al.，1998；Chuang & Meyerowitz，2000；Smith et al.，2000)。

在另一个非限制性实施例中，RNA干扰(RNAi)或转录后基因沉默(PTGS)可用于降低本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中的表达水平。如本文所用术语“RNA干扰”和“转录后基因沉默”可互换使用，是指通过小的干扰RNA(siRNA；见Fire et al.，1998所述)介导的基因表达的序列特异性调节，导致无效或亚效等位基因(hypomorphic)表型。因此，本文描述的是编码本发明细胞增殖相关蛋白的核苷酸序列，因此易于设计RNAi。事实上，编码RNAi分子的构建体已经揭示，其连续合成一种RNAi分子，导致延长对靶基因表达的抑制(Brummelkamp et al.，2002)。

在含有上述DNA分子之一的转基因植物中，相应于DNA分子中包含的核苷酸序列的核苷酸序列的表达在一个实施方案中被降低。DNA分子中的核苷酸序列与表达被降低的核苷酸序列相比，在一个实施方案中至少70％相同，在另一个实施方案中至少80％相同，在另一个实施方案中至少90％相同，在另一个实施方案中至少95％相同，及在又一个实施方案中至少99百分之相同。

9.DNA分子的插入(插入诱变)

在一个实施方案中，将DNA分子插入本发明核苷酸序列的染色体拷贝中或者插入其调节区域中。在一个实施方案中，这种DNA分子包含能在植物细胞中转座的转座因子，例如Ac/Ds，Em/Spm，突变子。或者，DNA分子包含农杆菌属T-DNA的T-DNA边界。DNA分子还可包含一个重组酶或整合酶识别位点，可用于从植物细胞染色体中除去部分DNA分子。本发明还涵盖了使用T-DNA，转座子，寡核苷酸的插入诱变方法或者本领域技术人员已知的其它方法。使用T-DNA和转座子进行插入诱变的方法见Winkler & Feldmann，1989及Martienssen，1998所述，在此以其全文并入参考。

10.缺失诱变

在另一个实施方案中，本发明核酸分子的突变是在细胞或植物中通过缺失一部分核苷酸序列或调节物序列而在序列的基因组拷贝中产生。缺失诱变的方法为本领域技术人员所已知。见例如Miao & Lam，1995所述。

在另一个实施方案中，缺失是随机在一大群植物中通过化学诱变或放射而产生，在本发明基因中有缺失的植物通过正向或反求遗传学(reverse genetics)分离。已知用快速中子或γ射线辐射导致植物缺失突变(Silverstone et al.，1998；Bruggemann et al.，1996；Redei & Koncz，1992)。本发明基因中的缺失突变可以在反求遗传学策略中使用PCR用混合的基因组DNA组如在线虫(C.elegans)中所示加以恢复(Liu et al.，1999)。正向遗传学(forward genetics)策略包括携带感兴趣性状的品系的诱变，随后筛选M2子代中该性状的存在与否。期望这些突变体是破坏本发明的基因的突变体。这可以通过Southern印迹或使用针对本发明的基因设计的具有这些突变体的基因组DNA的引物进行PCR进行评估。

11.植物细胞中的过表达

在另一个实施方案中，编码多肽的本发明的核苷酸序列被过表达。过表达本发明的核酸分子的核酸分子和表达盒实例如上述。本发明还涵盖了本领域技术人员已知的过表达核酸分子的方法。

在一个实施方案中，本发明的核苷酸序列的表达在植物的每个细胞中均是改变的。这可以例如通过同源重组或通过插入染色体中而获得。这还可以例如通过在能在植物的每个细胞中表达有义或反义RNA，锌指多肽，或核酶的启动子的控制下，表达有义或反义RNA，锌指多肽或核酶而获得。组成型，诱导型，组织特异性，细胞类型特异性，或发育调节的表达也在本发明的范围内，并导致本发明的核苷酸序列在植物细胞中组成型，诱导型，组织特异性，或发育调节性地改变表达。表达有义或反义RNA，锌指多肽或核酶的构建体，或者过表达本发明的核苷酸序列的构建体，可以根据本发明的教导如本文所述教导制备并转化入植物细胞中。

C.植物表达载体的构建

本发明进一步包括一种重组载体，其包含本发明的表达盒。本发明还包括包含本发明表达盒的植物细胞及包含这些植物细胞的植物。在一个实施方案中，植物是双子叶植物。在另一个实施方案中，植物是裸子植物。在另一个实施方案中，植物是单子叶植物。在一个实施方案中，单子叶植物是谷类。在一个实施方案中，谷类是例如玉米，小麦，大麦，燕麦，裸麦，黍，高粱，黑小麦，黑麦(secale)，单粒小麦，斯佩耳特小麦(spelt)，二粒小麦，埃塞俄比亚画眉草(teff)，买罗高粱(milo)，亚麻，gramma grass，摩擦禾(Tripsacum)或墨西哥类蜀黍。在另一个实施方案中，谷物是高粱。

在一个实施方案中，表达盒在植物中到处表达。在另一个实施方案中，表达盒在植物的特定部位或组织中表达。在一个实施方案中，所述部位或组织包括但非限于表皮，根，维管组织，分生组织，形成层，皮层，木髓，叶，花，及其组合。在另一个实施方案中，所述部位或组织是种子。

在一个实施方案中，表达盒参与的功能包括但非限于疾病抗性，产量，生物或非生物刺激抗性，营养性质，碳代谢，光合作用，信号转导，细胞生长，繁殖，疾病过程(例如病原体抗性)，基因调节，及分化。在一个实施方案中，所述多肽参与的功能如生物或非生物刺激耐受性，提高的产量或增殖，疾病抗性，或营养成分。

例如本发明的核酸分子在表达条件下可以导入宿主细胞中，由此宿主细胞转录并翻译该核酸分子以产生细胞增殖相关多肽。“在表达条件下”是指核酸分子定位于细胞中，由此其在该细胞中表达。例如，核酸分子在细胞中可位于活性的启动子的下游，由此该启动子将驱动由该核酸分子编码的多肽在细胞中表达。任何调节序列(例如启动子，增强子，诱导型启动子)均可与核酸分子连接；或者，核酸分子可包括其自身的调节序列，由此其将在细胞中表达(即转录和/或翻译)。

在本发明的核酸分子在表达条件下导入细胞之处，该核酸分子可以包括在表达盒中。因此，本发明进一步提供了包含表达盒的一种宿主细胞，该表达盒包含编码本发明细胞增殖相关多肽的核酸分子。这种表达盒除了编码本发明的细胞增殖相关多肽的核酸分子之外，还可包括至少一个调节序列(例如启动子和/或增强子)。

如此，计划在转基因植物中表达的编码序列可以在表达盒中首先装配，所述表达盒与在植物中可表达的合适启动子可操纵地连接。所述表达盒还可包含转基因表达需要的或选择的任何进一步的序列。这种序列包括但非限于转录终止子，增强表达的外来序列如内含子，至关重要的序列，及预期将基因产物定向于特异细胞器和细胞区室的序列。这些表达盒然后可易于转移至下述植物转化载体中。下文是关于典型的表达盒的不同成分的描述。

1.启动子

表达盒中使用的启动子的选择可以确定转基因在转基因植物中的空间和时间表达模式。选择的启动子可以在特异的细胞类型(如叶表皮细胞，叶肉细胞，根皮层细胞)或特异的组织或器官(例如根，叶，或花)中表达转基因，并且这种选择可以反映基因产物积聚的希望部位。或者，选择的启动子在多种诱导条件下可驱动基因的表达。启动子随其强度而变化，即其促进转录的能力。根据利用的宿主细胞系统，可以使用众多合适启动子的任一个，包括基因的天然启动子。如下是可用于表达盒中的启动子的非限制性实例。

在一个非限制性实例中，可以应用在新生植物的所有组织中指导基因表达的植物启动子片段。这种启动子在此是指“组成型”启动子，并且在大多数环境条件及发育或细胞分化阶段下是活性的。组成型启动子例如包括花椰菜花叶病毒(CaMV)35S转录起始区域，衍生自根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的T-DNA的1′-或2′-启动子，及本领域技术人员已知的多种植物基因的其它转录起始区域。这种基因包括例如AP2基因，来自拟南芥的ACT11(Huang et al.，1996)，来自拟南芥的Cat3(GENBANK_登录号U43147；Zhong et al.，1996)，编码来自甘蓝型油菜(Brassica napus)的硬脂酰-酰基载体蛋白去饱和酶的基因(GENBANK_登录号X74782；Solocombe et al.，1994)，来自玉米的GPc1(BENBANK_登录号X15596；Martinez et al.，1989)，及来自玉米的Gpc2(GENBANK_登录号U45855；Manjunath et al.，1997)。

或者，植物启动子可以指导本发明的核酸分子在特异的组织中表达，或者可以另外在更精确的环境或发育条件下指导表达。可影响诱导型启动子转录的环境条件例如包括缺氧情况，温度提高，或者存在光。这种启动子在本文是指“诱导型”，“细胞类型特异性”或“组织特异性”启动子。本领域技术人员可以认识到组织特异性启动子也可在除靶组织之外的组织中驱动可操纵地连接的序列的表达。因此，如本文所用组织特异性启动子是在靶组织中优先驱动表达的启动子，但也可导致在其它组织中有一些表达。

在发育控制下的启动子例如包括起始仅在(优先在)某些组织如果实，种子或花中转录的启动子。指导核酸在胚珠，花，或种子中表达的启动子在本发明中特别有用。如本文所用种子特异性或优先性启动子是指导在种子组织中特异性或优先性表达的启动子。这种启动子可以是例如胚珠特异性，胚特异性，胚乳特异性，珠被特异性，种皮特异性启动子，或其一些组合。例如包括来自胚珠特异性BEL1基因的启动子，如Reiser et al.，1995所述(GENBANK_登录号U39944)。种子特异性启动子的非限制性实例衍生自如下基因：来自玉米的MAC1(Sheridan et al.，1996)，来自玉米的Cat3(GENBANK_登录号L05934；Abler et al.，1993)，编码来自玉米的油质蛋白18kD的基因(GENBANK_登录号J05212；Lee et al.，1994)，来自拟南芥的vivparous-1(GENBANK_登录号U93215)，编码来自拟南芥的油质蛋白的基因(GENBANK_登录号Z17657)，来自拟南芥的Atmycl(Urao et al.，1996)，来自拟南芥的2s种子贮存蛋白基因家族(Conceicao et al.，1994)，编码来自甘蓝型油菜的油质蛋白20 kD的基因(GENBANK_登录号M63985)，来自甘蓝型油菜的napA(GENBANK_登录号J02798；Josefsson et al.，1987)，来自甘蓝型油菜的napin基因家族(Sjodahl et al.，1995)，编码来自甘蓝型油菜的2S贮存蛋白的基因(Dasgupta et al.，1993)，编码来自大豆的油质蛋白A的基因(GENBANK_登录号U09118)和油质蛋白B的基因(GENBANK_登录号U09119)，及编码来自大豆低分子量硫富集蛋白的基因(Choi et al.，1995)。

或者，可以鉴别提供具有希望的表达特性的启动子或者具有表达增强活性的启动子的特殊序列，这些或相似序列通过克隆或通过突变导入序列中。可以进一步预期这些序列可被诱变以增强转基因在特殊物种中表达。

另外，预期可以应用来自一个以上的启动子的启动子组合元件。例如，美国专利No.5,491,288揭示了将花椰菜花叶病毒(CaMV)启动子与组蛋白启动子组合。因此，来自本文揭示的启动子的元件可以与来自其它启动子的元件组合。

a.组成型表达：遍在蛋白启动子

遍在蛋白是已知在许多类型细胞中积聚的基因产物，并且其启动子已经从一些物种中克隆以用于转基因植物中(例如向日葵-Binet et al.，1991；玉米-Christensen et al.，1989；及拟南芥-Callis et al.，1990；Norriset al.，1993)。玉米遍在蛋白启动子已经在转基因单子叶植物系统中揭示，而且针对单子叶植物转化构建的其序列和载体在专利出版物EP0342926(授予 Lubrizol)中揭示，该文献在此并入参考。Taylor et al.，1993描述了包含玉米遍在蛋白启动子和第一个内含子的一种载体(pAHC25)，及其当通过微粒轰击导入时在许多单子叶植物的细胞悬浮液中具有高度活性。拟南芥遍在蛋白启动子适用于本发明的核苷酸序列。遍在蛋白启动子适于在转基因植物(单子叶植物和双子叶植物)中基因表达。合适的载体是pAHC25或者本文所揭示的任何转化载体的衍生物，通过导入合适的遍在蛋白启动子和/或内含子序列而修饰。

b.组成型表达：CaMV 35S启动子

质粒pCGN1761的构建在公布的专利申请EP0392225中揭示(实施例23)，该文献在此并入参考。pCGN1761含有“双”CaMV 35S启动子及在启动子和终止子之间有一个独特EcoRI位点的tml转录终止子，并具有一个pUC类型主链。构建pCGN1761的衍生物，其具有除了现有的EcoRI位点之外还包括NotI和XhoI位点的一个修饰的多接头。这个衍生物称为pCGN1761ENX。pCGN1761ENX用于在其多接头内克隆cDNA序列或编码序列(包括微生物ORF序列)，以在转基因植物中在35S启动子的控制下表达。这种构建的完整35S启动子-编码序列-tml终止子盒可以切割以转移至下述的转化载体，在启动子5’端通过HindIII，SphI，SalI和XbaI位点切割，在终止子3’端通过XbaI，BamHI和BglI切割。另外，双35S启动子片段可以通过在5’端用HindIII，SphI，SalI，XbaI或Pstl及在3’端用任何多接头限制位点(EcoRI，NotI或XhoI)切割以用另一个启动子置换。如果需要，在克隆位点周围可以通过导入可增强翻译的序列而产生修饰。当需要过表达时这是特别有用的。例如，pCGN1761ENX可以通过最佳化翻译起始位点而修饰，如美国专利No.5,639,949的实施例37所述，该文献在此并入参考。

c.组成型表达：肌动蛋白启动子

已知肌动蛋白的一些同种型在大多数类型的细胞中表达，因此肌动蛋白启动子可用作组成型启动子。特别地，已经克隆和鉴定了来自水稻ActI基因的启动子(McElroy et al.，1990)。发现启动子的一个1.3千碱基(kb)的片段含有在水稻原生质体中表达所需的所有调节元件。另外，已经构建了基于ActI启动子的众多表达载体以特异性用于单子叶植物中(McElroy et al.，1991)。这些掺入了ActI-内含子1，AdhI 5’侧翼序列(来自玉米醇脱氢酶基因)及AdhI-内含子1和来自CaMV 35S启动子的序列。示出最高表达的载体是35S与ActI内含子或ActI 5’侧翼序列与ActI内含子的融合体。(β-葡糖醛酸酶(GUS)报道基因的)起始ATG周围的序列的最佳化也增强表达。McElroy et al.，1991揭示的启动子表达盒可以易于针对基因表达而修饰，并特别适用于单子叶植物宿主中。例如，将含有启动子的片段从McElroy构建体中除去，并用于代替pCGN1761ENX中的双35S启动子，然后用于插入特异的基因序列。由此构建的融合基因然后可移至合适的转化载体中。在一个单独的报道中，还发现具有其第一个内含子的水稻ActI启动子在培养的大麦细胞中指导高度表达(Chibbar et al.，1993)。

d.诱导型表达：PR-1启动子

pCGN1761ENX中的双35S启动子可以用选择的任何启动子置换，导致合适的高表达水平。例如美国专利No.5,614,395中揭示的化学可调节的启动子之一，如烟草PR-1a启动子，可置换所述双35S启动子。或者，可以使用Lebel et al.，1998揭示的拟南芥PR-1启动子。选择的启动子可以通过限制酶从其来源中切离，或者可使用携带合适的末端限制位点的引物通过PCR扩增。就PCR扩增而言，在靶载体中扩增的启动子克隆后可对启动子再测序以检测扩增错误。化学/病原体可调节的烟草PR-1a启动子从质粒pCIB1004中切离(就构建而言，见并入参考的EP0332104的实施例21所述)，并移至质粒pCGN1761ENX(Uknes et al.，1992)。pCIB1004用NcoI切割，并将所得线性化片段的3’突出端通过用T4 DNA聚合酶处理而平端化。然后将该片段用HindIII切割，并将所得含有PR-1a启动子的片段经凝胶纯化并克隆入已经除去双35S启动子的pCGN1761ENX中。这是通过用XhoI切割并用T4聚合酶平端化，随后用HindIII切割，并分离pCIB1004启动子片段克隆入其中的较大的含有载体-终止子的片段而实现。这样产生了具有PR-1a启动子和tml终止子及具有独特EcoRI和NotI位点的间插多接头的pCGN1761ENX衍生物。选择的编码序列可以插入这个载体中，随后融合产物(即启动子-基因-终止子)可以移至任何选择的转化载体，包括本文揭示的那些载体。可以应用多种化学调节子诱导选择的编码序列在根据本发明转化的植物中表达，所述调节子包括苯并噻二唑(benzothiadiazole)，异烟酸，及美国专利No.5,523,311和5,614,395中揭示的水杨酸化合物。

e.诱导型表达：乙醇诱导型启动子

可由某些醇或酮如乙醇诱导的启动子也可以用于赋予本发明的编码序列诱导型表达。这种启动子是例如来自构巢曲霉(Aspergillus nidulans)的alcA基因(Caddick et al.，1998)。在构巢曲霉中，alcA基因编码醇脱氢酶I，其表达由AlcR转录因子在存在化学诱导剂的情况下调节。就本发明而言，包含与最小35S启动子融合的alcA基因启动子序列的质粒palcA:CAT中的CAT编码序列(Caddick et al.，1998)由本发明的编码序列置换，形成具有在alcA基因启动子控制下的编码序列的表达盒。这是使用本领域已知的方法进行的。

f.诱导型表达：糖皮质激素诱导型启动子

本发明还提供了使用基于类固醇激素的系统对本发明的核酸序列表达的诱导。例如，使用糖皮质激素介导的诱导系统(Aoyama & Chua，1997)，通过应用糖皮质激素诱导基因表达，例如合成的糖皮质激素如地塞米松(dexamethasone)，浓度范围在一个实施方案中是从0.1mM至1mM，在另一个实施方案中是从10mM至100mM。就本发明而言，将荧光素酶基因序列Aoyama & Chua用本发明的核酸序列置换，形成具有在与35S最小启动子融合的GAL4上游激活序列的6个拷贝的控制下的本发明核酸序列的表达盒。这是使用本领域已知的方法进行的。反式作用因子包含与疱疹病毒多肽VP16的反式激活结构域(Triezenberg et al.，1988)融合的GAL4 DNA-结合结构域(Keegan et al.，1986)，疱疹病毒多肽VP16的反式激活结构域与大鼠糖皮质激素受体的激素结合结构域(Picard etal.，1988)融合。融合多肽的表达由本领域已知的或本发明揭示的启动子控制。本发明还提供了包含表达盒的植物，所述表达盒包含与6x GAL4/最小启动子融合的本发明的核酸序列。因此，达到融合多肽的组织或器官特异性，导致诱导型核酸序列的组织或器官特异性被表达。

g.根部特异性表达

基因表达的另一种模式是根部表达。合适的根部启动子是玉米金属硫蛋白样(MTL)基因的启动子，如de Framond，1991及美国专利No.5,466,785所述，文献在此均并入参考。将这个MTL启动子移至合适的载体如pCGN1761ENX以插入选择的基因，随后将完整的启动子-基因-终止子盒移至感兴趣的转化载体。

h.创伤诱导型启动子

创伤诱导型启动子也可适于基因表达。已经揭示了许多这种启动子(例如Xu et al.，1993；Logemann et al.，1989；Rohrmeier & Lehle，1993；Firek et al.，1993；Warner et al.，1993所述)，所有启动子均适用于本发明。Logemann等描述了双子叶植物马铃薯wunI基因的5’上游序列。Xu等示出来自双子叶植物马铃薯(pin2)的创伤诱导型启动子在单子叶植物水稻中是活性的。另外，Rohrmeier & Lehle描述了玉米WipI cDNA的克隆，其是创伤诱导的并且使用标准技术可用于分离关联启动子。相似地，Firek等及Warner等揭示了来自单子叶植物芦笋(Asparagus officinalis)的一种创伤诱导的基因，其在局部创伤部位和病原体侵入部位表达。使用本领域熟知的克隆技术，这些启动子可移至合适的载体，与本发明的基因融合，并用于在植物创伤部位表达这些基因。

i.木髓优选表达

在此并入参考的PCT国际出版物WO93/07278描述了玉米trpA基因的分离，其优先在木髓细胞中表达。呈递了从转录起始处扩展直至-1726碱基对(bp)的基因序列和启动子。使用标准分子生物学技术，这个启动子或其一部分可以移至一个载体如pCGN1761，在此其可置换35S启动子并用于驱动外源基因以木髓优选的方式表达。事实上，含有木髓优选的启动子或其一部分的片段可移至任何载体并加以修饰以用于转基因植物。

j.叶特异性表达

编码磷酸烯醇羧化酶(PEPC)的玉米基因已经由Hudspeth & Grula，1989揭示。使用标准分子生物学技术，这个基因的启动子可用于驱动任何基因以叶特异性方式在转基因植物中表达。

k.花粉特异性表达

WO93/07278描述了在花粉细胞中表达的玉米钙依赖性蛋白激酶(CDPK)基因的分离。该基因序列和启动子从转录起始处扩展直至1400bp。使用标准分子生物学技术，这个启动子或其一部分可移至一个载体如pCGN1761，在此其可置换35S启动子并用于驱动本发明的核酸序列以花粉特异性方式表达。

2.转录终止子

有多种5’和3’转录调节序列适用于本发明。转录终止子负责转录的终止及正确的mRNA聚腺苷酸化。3′非翻译调节DNA序列在一个实施方案中包括大约50-1,000个，及在另一个实施方案中包括大约100-1,000个核苷酸碱基对，并含有植物转录和翻译终止序列。合适的转录终止子及已知在植物中起作用的那些终止子包括CaMV 35S终止子，tml终止子，胭脂氨酸合酶终止子，豌豆rbcS E9终止子，来自根瘤土壤杆菌的章鱼氨酸合酶基因的T7转录物的终止子，及来自马铃薯或番茄的蛋白酶抑制剂I或II基因的3’末端，尽管本领域技术人员已知的其它3’元件也可以应用。或者，可以使用γcoixin，油质蛋白3，或来自Coix属的其它终止子。

非限制性的3’元件包括来自根瘤土壤杆菌的胭脂氨酸合酶基因的那些元件(Bevan et al.，1983)，来自根瘤土壤杆菌的章鱼氨酸合酶基因的T7转录物的终止子，及来自马铃薯或番茄的蛋白酶抑制剂I或II基因的3’末端。

由于在转录起始位点和编码序列起始处之间的DNA序列(即非翻译前导序列，也称作5’非翻译区)可影响基因表达，因此也可以应用一个特殊的前导序列。非限制性前导序列期望包括预测指导可操纵地连接的基因最佳表达的序列，即包括可增加或保持mRNA稳定性并防止不适当的翻译起始的共有前导序列。根据本发明的揭示本领域技术人员已知这种序列的选择。衍生自在植物中高度表达的基因的序列在本发明中是有用的。

因此，有多种转录终止子适用于表达盒中。这些负责转录的终止和正确的mRNA聚腺苷酸化。适当的转录终止子是已知在植物起作用的那些终止子，包括CaMV 35S终止子，tml终止子，胭脂氨酸合酶终止子，及豌豆rbcS E9终止子。这些可用于单子叶植物和双子叶植物中。另外，可以使用基因的天然转录终止子。

3.增强或调节表达的其它序列

已经发现许多序列增强基因从转录单位内表达，这些序列可与本发明的基因联合以增加其在转基因植物中的表达。

已经发现在转基因植物中增强基因表达的其它序列包括内含子序列(例如来自Adh1，bronze1，actin1，actin2(PCT国际出版物No.WO00/760067)，或者蔗糖合酶内含子)，及病毒前导序列(例如来自烟草花叶病毒(TMV)，玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)，或苜蓿花叶病毒(AMV))。例如，已知许多衍生自病毒的非翻译前导序列增强可操纵地连接的核酸的表达。特别地，来自烟草花叶病毒(TMV)，玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)，和苜蓿花叶病毒(AMV)的前导序列示出有效增强表达(例如Gallie et al.，1987；Skuzeski et al.，1990所述)。本领域已知的其它前导序列包括但非限于细小核糖核酸病毒前导序列，例如脑心肌炎病毒(EMCV)前导序列(脑心肌炎5’非编码区；Elroy-Stein et al.，1989)；马铃薯Y病毒前导序列(例如烟草蚀刻病毒(TEV)前导序列和玉米矮缩花叶病毒(MDMV)前导序列)；人免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)前导序列(Macejak et al.，1991)；来自AMV的包被蛋白mRNA的非翻译前导序列(AMV RNA 4；Jobling &Gehrke，1987)；TMV前导序列(Gallie et al.，1989)；和玉米褪绿斑驳病毒前导序列(Lommel et al.，1991)。也见于Della-Cioppa et al.，1987所述。在需要之处可进一步包括调节元件如Adh内含子1(Callis et al.，1987)，蔗糖合酶内含子(Vasil et al.，1989)或TMVω元件(Gallie et al.，1989)。非限制性的增强子实例包括来自CaMV 35S启动子的元件，章鱼氨酸合酶基因(Ellis et al.，1987)，水稻肌动蛋白I基因，玉米醇脱氢酶基因(Calliset al.，1987)，玉米shrunken I基因(Vasil et al.，1989)，TMVω元件(Gallieet al.，1989)及来自非植物真核生物的启动子(例如酵母；Ma et al.，1988)。

还已知衍生自病毒的许多非翻译前导序列增强表达，这些在双子叶植物细胞中特别有效。特别地，来自烟草花叶病毒(TMV；“W-序列”)，玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)，及苜蓿花叶病毒(AMV)的前导序列已经示出有效增强表达(见例如Gallie et al.，1987；Skuzeski et al.，1990所述)。本领域已知的其它前导序列包括但非限于细小核糖核酸病毒前导序列，例如EMCV(脑心肌炎病毒)前导序列(5′非编码区；见Elroy-Stein et al.，1989所述)；马铃薯Y病毒前导序列，例如来自烟草蚀刻病毒(TEV；见Allison et al.，1986所述)；玉米矮缩花叶病毒(MDMV；见Kong & Steinbiss1998所述)；人免疫球蛋白重链结合多肽(BiP)前导序列(Macejak &Samow，1991)；来自苜蓿花叶病毒包被多肽mRNA的非翻译非前导序列(AMV；RNA 4；见Jobling & Gehrke，1987)；烟草花叶病毒(TMV)前导序列(Gallie et al.，1989)；及玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)前导序列(Lommelet al.，1991)。也见Della-Cioppa et al.，1987所述。

除了在本发明的靶表达盒的5’调节区域中掺入一或多个前述元件之外，也可掺入其它元件。这种元件包括但非限于最小启动子。最小启动子是指基本的启动子元件在没有上游或下游激活的情况中是失活的或者接近失活的。当没有反式激活子存在或当增强子或应答元件结合位点不存在时，这种启动子在植物中具有低背景活性。特别用于植物中靶基因的一个最小启动子是Bz1最小启动子，其得自玉米的bronze1基因。Bz1核心启动子通过在位于第-53至-58位的NheI位点切割得自“myc”突变体Bz1-荧光素酶构建体pBz1LucR98(Roth et al.，1991)。衍生的Bz1核心启动子片段因此从第-53位扩展至+227，并包括5’非翻译区中的Bz1内含子-1。对本发明也有用的是通过使用合成的TATA元件产生的一个最小启动子。TATA元件使得RNA聚合酶因子识别所述启动子，并赋予在无激活的情况中基本水平的基因表达(通常见Mukumoto et al.，1993；Green，2000所述)。

4.细胞内基因产物的靶定

已知靶定基因产物的多种机制存在于植物中，并且控制这些机制功能的序列已经在一定程度上鉴定。例如，基因产物靶定于叶绿体是由在多种多肽的氨基末端发现的信号序列控制的，该信号序列在叶绿体输入期间被裂解以产生成熟多肽(见例如Comai et al.，1988所述)。这些信号序列可以与异源基因产物融合以影响异源产物输入叶绿体(Van denBroeck et al.，1985)。编码合适的信号序列的DNA可以分离自编码如下多肽的cDNA的5’末端：核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶(RUBISCO)多肽，叶绿素a/b结合(CAB)多肽，5-烯醇-丙酮莽草酸-3-磷酸酯(5-enol-pyruvyl shikimate-3-phosphate，EPSP)合酶，GS2多肽及已知定位于叶绿体的许多其它多肽。也见于美国专利No.5,639,949的实施例37中题目为“叶绿体靶定表达”的章节，该文献在此并入参考。

其它基因产物可定位于其它细胞器如线粒体和过氧化物酶体(例如Unger et al.，1989)。编码这些产物的cDNA也可以加以操纵以实现异源基因产物靶定于这些细胞器官。这种序列例如是核编码的ATP酶及线粒体特异性天冬氨酸氨基转移酶同种型。靶定细胞多肽体已经由Rogers etal.，1985所揭示。

另外，序列已经被鉴定其控制基因产物靶定于其它细胞区室。氨基末端序列负责靶定于内质网(ER)，质外体，及糊粉细胞胞外分泌(Koehler& Ho，1990)。另外，氨基末端序列与羧基末端序列联合负责基因产物的液泡靶定(Shinshi et al.，1990)。

通过将上述适当的靶序列与感兴趣的转基因序列融合，可以将转基因产物定向于任何细胞器或细胞区室。例如叶绿体靶定，将来自RUBISCO基因，CAB基因，EPSP合酶基因或GS2基因的叶绿体信号序列在框内与转基因的氨基末端ATG融合。选择的信号序列可包括已知的切割位点，构建的融合体在切割所需的切割位点之后可考虑任何氨基酸。在一些情况中，这种需要可以通过在切割位点和转基因ATG之间加入少量氨基酸，或者置换转基因序列内的一些氨基酸而完成。通过体外转录的构建体的体外翻译，随后通过体外叶绿体吸收，可以测试就叶绿体输入而构建的融合体的叶绿体吸收效力，使用Bartlett et al.，1982和Wasmann et al.，1986揭示的技术进行。这些构建技术为本领域所熟知并同样可用于线粒体和过氧化物酶体。

上述细胞靶定机制不仅可与关联启动子联合应用，也可以与异源启动子联合应用以实现在启动子的转录调节下特异性细胞靶定目标，所述启动子具有与靶信号衍生自其中的启动子不同的表达模式。

D.植物转化载体的构建

1.导言

植物转化领域的技术人员已知用于植物转化的众多转化载体，本发明的基因可与这种载体联合应用。载体的选择依赖于选择的转化技术和转化的靶物种。就某些靶物种而言，可以应用不同的抗生素或除草剂选择标记。转化中常规使用的选择标记包括nptII基因，其赋予卡那霉素和相关抗生素抗性(Messing & Vieira，1982；Bevan et al.，1983)；bar基因，其赋予除草剂膦丝菌素抗性(White et al.，1990；Spencer et al.，1990)；hph基因，其赋予抗生素潮霉素抗性(Blochinger & Diggelmann，1984)；dhfr基因，其赋予氨甲喋呤抗性(Bourouis & Jarry，1983)；EPSP合酶基因，其赋予草甘膦(glyphosate)抗性(美国专利No.4,940,935和5,188,642)；及甘露糖-6-磷酸异构酶基因，其提供代谢甘露糖的能力(美国专利No.5,767,378和5,994,629)。

本发明的组合物包括植物核酸分子，及由包含开放读框的核酸分子编码的多肽或部分长度的多肽的氨基酸序列。这些序列可用于改变相应于开放读框的特殊基因的表达，通过降低或消除植物基因的表达或者通过过表达特殊的基因产物进行。本发明这个实施方案的方法包括用本发明的核酸分子稳定转化植物，本发明的核酸分子包括与能驱动开放读框(有义或反义)在植物细胞中表达的启动子可操纵地连接的开放读框。就包含编码具有全长多肽活性的部分长度多肽的开放读框或其片段的核酸分子而言的“部分”或“片段”是指一个序列，其在一个实施方案中有至少80个核苷酸，在另一个实施方案中有至少150个核苷酸，及在又一个实施方案中有至少400个核苷酸。如果不用于表达，“部分”或“片段”是指在代表性的实施方案中具有相应于本发明的核酸分子的核苷酸序列的至少9，或12，或15，或至少20个连续核苷酸(例如探针和引物或其它寡核苷酸)。因此，为表达一特殊的基因产物，所述方法包括在植物，植物细胞或植物组织中导入包含与开放读框可操纵地连接的启动子的一个表达盒，以产生一种转化的分化植物，转化的细胞，或转化的组织。转化的细胞或组织可以再生以提供一种转化的分化植物。转化的分化植物或其细胞可以改变植物或其细胞中基因产物数量的量表达开放读框，该产物由所述开放读框编码。本发明还提供了通过本发明揭示的方法制备的一种转化的植物以及其子代和种子。

本发明进一步包括在严格条件下与本发明的核酸分子杂交的一个序列(后文称作测试序列)互补的一个核苷酸序列，以及从所述核酸分子中转录的RNA分子。当在严格条件下杂交时，可以将测试序列或本发明核酸分子呈递于支持物上，例如膜或DNA芯片上。因此，变性的测试序列或本发明的核酸分子首先与支持物结合，并在特定的时间和温度进行杂交，在一个实施方案中在55℃-70℃，在含有0.1％SDS的2×SSC中杂交，随后在相同温度但用SSC浓度降低的缓冲液漂洗支持物。根据所需的严格程度，这种浓度降低的缓冲液典型地是含有0.1％SDS的1×SSC，含有0.1％SDS的0.5×SSC，或者含有0.1％SDS的0.1×SSC。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种转化的或者通过繁殖获得的植物宿主细胞，其能过表达，低表达或剔除了多肽编码基因和/或其基因产物。用至少一种这样的表达载体转化植物细胞，其中植物宿主细胞可用于再生植物组织或完整的植物或其种子，其中导入的序列的表达，包括过表达和低表达的作用可以在体外或in planta测定。

另一方面，本发明提供了一种分离的细胞增殖相关多肽，其中该多肽与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsPN31085，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2，和OsCAA90866。在一些实施方案中，本发明提供了一种分离的多肽，其包含或由与本发明的分离的细胞增殖相关多肽的氨基酸序列基本相似的氨基酸序列组成。

由于本发明的蛋白质在细胞增殖中起作用，因此在某些实施方案中，导入本发明的核酸分子的细胞与未导入本发明核酸分子的细胞相比具有不同的细胞增殖速度。

另一方面，本发明提供了一种调节植物细胞增殖的方法，包括在植物细胞中导入编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子，其中所述多肽与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsERP，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2，和OsCAA90866，其中多肽由细胞表达。

另一方面，本发明提供了一种调节植物细胞增殖的方法，包括在植物细胞中导入编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子，其中所述多肽结合选自如下一组的蛋白质的片段：OsE2F1，Os018989-4003，OsE2F2，OsS49462，OsCYCOS2，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS15，OsHOS59，OsGF14-c，OsDAD1，Os006819-2510，OsCRTC，OsSGT1，OsERP，OsCHIB1，OsCS，OsPP2A-2，和OsCAA90866，其中由核酸分子编码的多肽在细胞中的表达降低。

如本发明所揭示，本文所述的所有细胞增殖相关蛋白在正常条件下或在不利条件(例如当植物暴露于生物或非生物刺激时)下，或者当植物处于发育或分化阶段时均影响细胞增殖。因此，通过改变植物细胞中本发明的细胞增殖相关蛋白的量，可以调节植物细胞的增殖。

在一些情况中，本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达增加将单独或应答一些刺激(例如应激或生长激素)而导致细胞提高其增殖速度。在其它情况中，本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达增加导致细胞降低其增殖速度。相似地，本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中表达降低可增加或降低细胞增殖速度。相关的是如果本发明的细胞增殖相关蛋白的表达水平增加或降低，则细胞的增殖速度改变。

增加本发明的细胞增殖相关蛋白在细胞中的表达水平是一个相对简单的问题。例如，蛋白质的过表达可以使用标准方法如上述那些方法，通过用编码蛋白质的核酸分子转化细胞而实现。

一旦本发明的核酸序列已经克隆入表达系统中，则其被转化入植物细胞中。本发明的受体和靶表达盒可以许多本领域公认的方式导入植物细胞中。植物再生的方法也为本领域所熟知。例如，利用Ti质粒载体输送外源DNA，以及直接DNA吸收，脂质体，电穿孔，微注射和微粒轰击。另外，土壤杆菌(Agrobacterium)属的细菌可用于转化植物细胞。下文描述了转化双子叶植物和单子叶植物的代表性技术，以及代表性的质粒转化技术。

植物的转化可以用一个DNA分子或多个DNA分子(即共转化)进行，这两种技术均适用于本发明的表达盒。有许多转化载体用于植物转化，本发明的表达盒可与任何这种载体联合应用。载体的选择依赖于转化技术和进行转化的物种。

许多技术可利用并已知将核酸分子及包含该核酸分子的表达盒导入植物宿主细胞中的技术。这些技术包括但非限于用根瘤土壤杆菌或发根土壤杆菌(A.rhizogenes)作为转化剂用DNA转化，脂质体，PEG沉淀，电穿孔，DNA注射，直接DNA吸收，微粒轰击，粒子加速，等等(见例如EP0295959和EP0138341所述；也见于下文所述)。然而，除了植物细胞之外的细胞可以用本发明的表达盒转化。关于植物表达载体和报道基因，及土壤杆菌和土壤杆菌介导的基因转移的一般描述可见于Gruber et al.，1993所述，所述文献在本发明以其全文并入参考。

含有基因组或合成片段的表达载体可以导入原生质体或导入完整的组织或分离的细胞中。在一些实施方案中，表达载体被导入完整组织中。“植物组织”包括分化的和未分化的组织或完整植物，包括但非限于根，茎，芽，叶，花粉，种子，肿瘤组织，及多种形式的细胞和培养物如单细胞，原生质体，胚及愈伤组织。植物组织可以在植物或器官，组织或细胞培养物中。培养植物组织的一般方法由例如Maki et al.，1993和Phillips et al.1988提供。在一些实施方案中，表达载体被导入玉米或其它植物组织中，使用直接基因转移方法如微粒介导的输送，DNA注射，电穿孔等方法进行。在一些实施方案中，表达载体被导入植物组织中，使用Biolistic设备经微粒介导的输送方法进行(见例如Tomes et al.，1995所述)。本发明的载体不仅可用于表达结构基因，也可以用于外显子-俘获克隆或启动子-饵程序中以检测在多种组织中不同的基因表达(Lindsey etal.，1993；Auch & Reth，1990)。

在一些实施方案中，应用土壤杆菌属的Ti和Ri质粒的二元类型载体。Ti衍生的载体可用于转化许多高等植物，包括单子叶植物和双子叶植物，包括但非限于大豆，棉花，油菜，烟草，和水稻(Pacciotti et al.，1985：Bymeet al.，1987；Sukhapinda et al.，1987；Lorz et al.，1985；Potrykus，1985；Park et al.，1985：Hiei et al.，1994)。T-DNA转化植物细胞的应用已经广泛研究并详细描述(欧洲专利申请No.EP0120516；Hoekema，1985；Knaufet al.，1983；及An et al.，1985，每个文献在本发明均以全文并入参考)。为导入植物中，可以将本发明的核酸分子插入二元载体中，如实施例所述。

本领域技术人员可利用其它转化方法，如外源DNA构建体的直接吸收(见欧洲专利申请No.EP0295959)，电穿孔(Fromm et al.，1986)，或者用所述核酸构建体包被的金属粒子高速度弹道轰击植物细胞(Kline et al.，1987；美国专利No.4,945,050)。一旦转化，则可以使用本领域技术人员熟知的技术再生细胞。特别相关的是最近描述的将外源基因转化入商业重要的农作物中的方法，所述农作物如油菜种子(De Block et al.，1989)，向日葵(Everett et al.，1987)，大豆(McCabe et al.，1988；Hinchee et al.，1988；Chee et al.，1989；Christou et al.，1989；欧洲专利申请No.EP0301749)，水稻(Hiei et al.，1994)，和玉米(Gordon Kamm et al.，1990；Frommet al.，1990)。

当然，方法的选择依赖于靶定转化的植物类型，即单子叶植物或双子叶植物。转化植物细胞的合适方法包括但非限于微注射(Crossway etal.，1986)，电穿孔(Riggs et al.，1986)，土壤杆菌介导的转化(Hinchee et al.，1988)，直接基因转移(Paszkowski et al.，1984)，及使用得自Agracetus，Inc.(Madison，Wisconsin，United States of America)和BioRad(Hercules，California，United States of America)的设备进行弹道粒子加速。见例如美国专利No.4,945,050；McCabe et al.，1988；Weissinger et al.，1988；Sanfordet al.，1987(洋葱)；Christou et al.，1988(大豆)；McCabe et al.，1988(大豆)；Datta et al.，1990(水稻)；Klein et al.，1988(玉米)；Fromm et al.，1990(玉米)；Gordon-Kamm et al.，1990(玉米)；Svab et al.，1990(烟草叶绿体)；Koziel et al.，1993(玉米)；Shimamoto et al.，1989(水稻)；Christouet al.，1991(水稻)；欧洲专利申请EP0332581(果园草(orchardgrass)及其它早熟禾亚科(Pooideae))；Vasil et al.，1993(小麦)；Weeks et al.，1993(小麦)。在一个实施方案中，应用针对玉米的原生质体转化方法(见欧洲专利申请EP0292435；美国专利No.5,350,689所述)。

2.适于土壤杆菌转化的载体

含有包含本发明的表达盒的载体的根瘤土壤杆菌细胞在产生转化植物的方法中有用，其中所述载体包含Ti质粒。将植物细胞如上述用根瘤土壤杆菌感染以产生转化的植物细胞，然后从转化的植物细胞中再生植物。本领域技术人员已知许多用于进行本发明的土壤杆菌载体系统。

可利用使用根瘤土壤杆菌进行转化的许多载体。这些载体典型地携带至少一个T-DNA边界序列并包括载体如pBIN19(Bevan，1984)。下文描述了适于土壤杆菌转化的两种典型的载体的构建。

a.pCIB200和pCIB2001

二元载体pCIB200和pCIB2001用于构建重组载体以与土壤杆菌使用，并如以下方式构建。pTJS75kan是通过用NarI消化pTJS75(Schmidhauser & Helinski，1985)使得四环素抗性基因切离，随后插入来自携带NPTII序列的pUC4K的AccI片段(Messing & Vieira，1982：Bevanet al.，1983：McBride & Summerfelt，1990)而产生。将XhoI接头与PCIB7的EcoRV片段连接，PCIB7含有左侧和右侧T-DNA边界，一个植物可选择的nos/nptII嵌合基因及pUC多接头(Rothstein et al.，1987)，并将XhoI消化的片段克隆入SalI消化的pTJS75kan中以产生pCIB200(见EP0332104，实施例19)。pCIB200含有如下独特的多接头限制位点：EcoRI，SstI，KpnI，BglII，XbaI，和SalI。pCIB2001是pCIB200的衍生物，通过在多接头插入额外的限制位点而产生。pCIB2001的多接头中的独特的限制位点是EcoRI，SstI，KpnI，BglII，XbaI，SalI，MluI，BclI，AvrII，ApaI，HpaI和StuI。pCIB2001，除了含有这些独特的限制位点之外，还具有植物和细菌卡那霉素选择，进行土壤杆菌介导的转化的左侧和右侧T-DNA边界，RK2衍生的trfA在大肠杆菌(E.coli)及其它宿主之间活动化的功能，及也来自RK2的OriT和OriV功能。pCIB2001多接头适于克隆含有其自身调节信号的植物表达盒。

b.pCIB10及其潮霉素选择衍生物

二元载体pCIB10含有以在植物中进行选择的编码卡那霉素抗性的基因，T-DNA右侧和左侧边界序列，及掺入的来自广泛宿主范围的pRK252质粒的序列使得其在大肠杆菌和土壤杆菌中均复制。其构建由Rothstein et al.，1987揭示。可以构建pCIB10的多种衍生物，其掺入Gritz& Davies，1983揭示的潮霉素B磷酸转移酶基因。这些衍生物使得可以仅基于潮霉素(pCIB743)，或潮霉素和卡那霉素(pCIB715，pCIB717)而选择转基因植物细胞。

3.适于非土壤杆菌转化的载体

不使用根瘤土壤杆菌进行转化不需要选择的转化载体中的T-DNA序列，并因此除了上述含有T-DNA序列的载体之外还可利用缺乏这些序列的载体。不依赖于土壤杆菌的转化技术包括通过粒子轰击，原生质体吸收(例如聚乙二醇(PEG)和电穿孔)，及微注射进行转化。载体的选择主要依赖于转化的物种。下文揭示了适于非土壤杆菌转化的典型载体的构建。

a.pCIB3064

pCIB3064是适于直接基因转移技术组合除草剂BASTA_(草铵磷(glufosinate ammonium)或膦丝菌素)选择的pUC衍生载体。质粒pCIB246包含可操纵地与大肠杆菌β-葡糖醛酸酶(GUS)基因和CaMV35S转录终止子融合的CaMV 35S启动子，见PCT国际出版物WO93/07278所揭示。这个载体的35S启动子含有起始位点的两个ATG序列5’。这些位点是使用标准PCR技术突变的，由此除去ATG并产生限制位点SspI和PvuII。这些新的限制位点距离独特的SalI位点96和37bp，距离实际的起始位点101和42bp。pCIB246的所得衍生物称为pCIB3025。然后将GUS基因通过用SalI和SacI消化从pCIB3025中切离，进行末端平端化并再连接以产生质粒pCIB3060。质粒pJIT82得自JohnInnes Centre，Norwich，England，将含有来自绿色产色链球菌(Streptomycesviridochromogenes)的bar基因的400bp SmaI片段切离并插入pCIB3060的HpaI位点中(Thompson et al.，1987)。这样产生pCIB3064，其包含在CaMV 35S启动子控制下的bar基因及进行除草剂选择的终止子，氨苄青霉素抗性基因(以在大肠杆菌中选择)和具有独特位点SphI，PstI，HindIII和BamHI的一个多接头。这个载体适于克隆含有其自身调节信号的植物表达盒。

b.pSOG19和pSOG35

pSOG35是一种转化载体，其利用大肠杆菌二氢叶酸还原酶(DHFR)基因作为可选择标记以赋予氨甲喋呤抗性。使用PCR扩增35S启动子(-800bp)，来自玉米Adh1基因的内含子6(-550bp)，及来自pSOG10的18bp的GUS非翻译前导序列。编码大肠杆菌二氢叶酸还原酶II型基因的250-bp片段也通过PCR扩增，并将这两个PCR片段用来自pB1221(BDBiosciences Clontech，Palo Alto，California，United States of America)的SacI-PstI片段装配，pB1221含有pUC19载体主链和胭脂氨酸合酶终止子。这些片段的装配产生pSOG19，其含有与内含子6序列融合的35S启动子，GUS前导序列，DHFR基因，及胭脂氨酸合酶终止子。pSOG19中GUS前导序列用来自玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)的前导序列置换产生载体pSOG35。pSOG19和pSOG35携带氨苄青霉素抗性pUC基因并具有用于克隆外源物的HindIII，SphI，PstI和EcoRI位点。

4.转化方案的可选择标记

通常但非必需采取使用可选择的标记进行直接基因转移或土壤杆菌介导的转移的方法，所述可选择的标记可提供抗生素抗性(卡那霉素，潮霉素，或氨甲喋呤)或除草剂抗性(例如膦丝菌素)。然而，进行植物转化的可选择标记的选择对本发明不是关键的。

就某些植物物种而言，可利用不同的抗生素或除草剂选择标记。转化中常规使用的选择标记包括nptII基因，其赋予卡那霉素及相关抗生素抗性(Messing & Vierra，1982；Bevan et al.，1983)，bar基因，其赋予除草剂膦丝菌素抗性(White et al.，1990，Spencer et al.，1990)，hph基因，其赋予抗生素潮霉素抗性(Blochinger & Diggelmann，1984)，及dhfr基因，其赋予氨甲喋呤抗性(Bourouis & Jarry，1983)。

也可以使用导致阳性选择的选择标记，如磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因(见PCT国际出版物No.WO93/05163所述)。可用于阳性选择的其它基因在PCT国际出版物No.WO94/20627中描述，并编码木异构酶(xyloisomerase)和磷酸甘露糖异构酶，如甘露糖-6-磷酸异构酶和甘露糖-1-磷酸异构酶；磷酸甘露糖变位酶；甘露糖差向异构酶，如将碳水化合物转化为甘露糖或者将甘露糖转化为碳水化合物如葡萄糖或半乳糖的酶；磷酸酶，如甘露糖或木糖磷酸酶，甘露糖-6-磷酸酶和甘露糖-1-磷酸酶，及参与将甘露糖或其衍生物或前体转运至细胞中的通透酶。一种制剂典型地用于降低化合物对细胞的毒性，而且典型是葡萄糖衍生物，如甲基-3-O-葡萄糖或根皮苷。鉴别转化的细胞而不破坏或杀死群体中的未转化的细胞及非共同导入抗生素或除草剂抗性基因的细胞。如PCT国际出版物No.WO93/05163所述，除了消除了需要抗生素或除草剂抗性基因之外，还已经示出阳性选择方法通常远比传统的阴性选择方法更有效。

如上所述，用于直接基因转移技术组合除草剂BASTA_(或膦丝菌素)选择的一个载体是pCIB3064。这个载体基于质粒pCIB246，其包含与大肠杆菌β-葡糖醛酸酶(GUS)基因可操纵地连接的CaMV 35S启动子和CaMV 35S转录终止子，见PCT国际出版物No.WO93/07278所述。用于赋予膦丝菌素抗性的一个基因是来自绿色产色链球菌的基因(Thompsonet al.，1987)。这个载体适于克隆含有其自身调节信号的植物表达盒。

如上所述，一个额外的转化载体是pSOG35，其利用大肠杆菌二氢叶酸还原酶(DHFR)基因作为赋予氨甲喋呤抗性的一个可选择的标记。使用聚合酶链反应(PCR)扩增35S启动子(大约800碱基对(bp))，来自玉米Adh1的内含子6(大约550 bp)，及来自pSOG10的18bp的GUS非翻译前导序列。将编码大肠杆菌二氢叶酸还原酶II型基因的250bp片段也通过PCR扩增，并将这两个PCR片段用来自pBI221(BD Biosciences-Clontech，Palo Alto，California，United States of America)的SacI-PstI片段装配，其包含pUC19载体主链和胭脂氨酸合酶终止子。这些片段的装配产生pSOG19，其含有与内含子6序列融合的35S启动子，GUS前导序列，DHFR基因及胭脂氨酸合酶终止子。pSOG19中的GUS前导序列用来自玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)的前导序列置换产生载体pSOG35。pSOG19和pSOG35携带氨苄青霉素抗性的pUC衍生的基因，并具有用于克隆外源序列的HindIII，SphI，PstI和EcoRI位点。

二元主链载体pNOV2117含有两侧为右侧和左侧边界序列的T-DNA部分，并包括POSITECH^TM(Syngenta Corp.，Wilmington，Delaware，United States of America)植物可选择的标记及“候选基因”基因表达盒。POSITECH^TM植物可选择标记赋予甘露糖抗性，在此情况中由驱动PMI(磷酸甘露糖异构酶)基因表达的玉米遍在蛋白启动子后接花椰菜花叶病毒转录终止子组成。

5.适于叶绿体转化的载体

为在植物质体中表达本发明的核苷酸序列，使用质体转化载体pPH143(PCT国际出版物WO 97/32011，实施例36)。将核苷酸序列插入pPH143中，从而置换原卟啉原氧化酶(Protox)编码序列。然后这个载体用于质体转化并选择壮观霉素抗性转化体。或者，将核苷酸序列插入pPH143中以便其置换aadH基因。在这种情况中，选择对PROTOX抑制剂抗性的转化体。

6.质体的转化

在另一个实施方案中，本发明的核苷酸序列直接转化入质体基因组中。质体转化技术见美国专利No.5,451,513；5,545,817；和5,545,818；及PCT国际出版物No.WO95/16783；及McBride et al.，1994所述。叶绿体转化的基本技术包括将在可选择标记两侧的克隆的质体DNA区域与感兴趣的基因一起导入合适的靶组织中，例如使用biolistics或原生质体转化方法进行(例如氯化钙或PEG介导的转化)。称为靶序列的1-1.5千碱基(kb)的侧翼区域促进与质体基因组直向同源重组，由此使得原质体系的特异区域置换或修饰。最初，利用叶绿体16S rRNA和赋予壮观霉素和/或链霉素抗性的rps12基因中的点突变作为转化的可选择标记(Svabet al.，1990；Staub et al.，1992)。这样产生频率为大约1％靶叶片轰击的稳定同质转化体。这些标记之间克隆位点的存在使得可以产生质体靶定载体以导入外源基因(Staub et al.，1993)。转化频率的实际增加通过将隐性rRNA或r-蛋白抗生素抗性基因用显性可选择标记，编码壮观霉素-解毒酶氨基糖苷-3N-腺苷酰转移酶的细菌aadA置换而获得(Staub et al.，1993)。用于质体转化的其它可选择的标记为本领域所已知并涵盖在本发明范围内。典型地，在转化后需要大约15-20个细胞分裂周期以达到同质状态。

质体表达，其中基因是通过直向同源重组插入每个植物细胞中存在的圆形质体基因组的全部几千个拷贝中，利用核表达的基因的巨大拷贝数的优势使得表达水平可易于超过总可溶的植物蛋白的10％。在一个实施方案中，本发明的核苷酸序列插入质体靶定载体中并转化入希望的植物宿主的质体基因组中。获得与含有本发明的核苷酸序列的质体基因组同质的植物，并且在一个实施方案中该植物能高度表达所述核苷酸序列。

质体转化的一个实例如下。将烟草c.V.‘Xanthi nc’的种子在T琼脂培养基上以1”圆形排列在每个平板上萌生至7个，并在散播后12-14天，基本上如Svab & Maliga(1993)所述，用以来自质粒pPH143和pPH145的DNA包被的1μm钨粒子(M10，Biorad，Hercules，California，UnitedStates of America)轰击。轰击的秧苗在T培养基保温2天，之后切离叶片，并于含有500μg/ml壮观霉素二盐酸化物(Sigma，St.Louis，Missouri，United States of America)的RMOP培养基(Svab et al.，1990)的平板上，以远轴面向上放置在亮光处(350-500μmol photons/m²/s)。将在轰击后3-8周呈现为在变白的叶片下的抗性芽在相同的选择性培养基上亚克隆，使得形成愈伤组织，并将二级芽分离及亚克隆。独立的亚克隆中转化的质体基因组拷贝的完全分离(同质性)通过Southern印迹的标准技术(Sambrook & Russell，2001)评估。BamHI/EcoRI消化的总细胞DNA(Mettler，1987)在1％Tris-硼酸-EDTA(TBE)琼脂糖凝胶上分离，移至尼龙膜上(Amersham Biosciences，Piscataway，New Jersey，United Statesof America)并用³²P标记的相应于来自含有一部分rps7/12质体靶定序列的pC8的0.7kb BamHI/HindIII DNA片段的随机引物DNA序列探查。将同质芽在含有壮观霉素的MS/IBA培养基(McBride et al.，1994)上无菌生根并移至温室中。

7.双子叶植物的转化

双子叶植物的转化技术为本领域所熟知并包括基于土壤杆菌的技术及不需要土壤杆菌的技术。不需要土壤杆菌的技术包括外源遗传物质由原生质体或细胞的直接吸收。这可以通过PEG或电穿孔介导的吸收，粒子轰击介导的输送或微注射而实现。这些技术的实例见Paszkowski et al.，1984；Potrykus et al.，1985；Reich et al.，1986和Klein et al.，1987所揭示。在每种情况中，均使用本领域已知的标准技术将转化的细胞再生为完整植物。

土壤杆菌介导的转化由于其高效的转化及其针对许多不同物种的广泛效力而是转化双子叶植物的一种有效技术。土壤杆菌转化典型包括将携带感兴趣的外源DNA的二元载体(例如pCIB200或pCIB2001)移至一个适当的土壤杆菌菌株中，这可根据宿主土壤杆菌菌株一起停留的Ti质粒或染色体上携带的vir基因的补体而定(例如针对pCIB200和pCIB2001的菌株CIB542(Uknes et al.，1993))。重组二元载体移至土壤杆菌是通过三亲杂交(triparental mating)程序实现的，使用携带重组二元载体的大肠杆菌，携带质粒如pRK2013并能将重组的二元载体移至靶土壤杆菌菌株的辅助大肠杆菌菌株进行。或者，重组二元载体可以通过DNA转化移至土壤杆菌(H_fgen & Willmitzer，1988)。

通过重组土壤杆菌转化靶植物物种通常包括将土壤杆菌与来自植物的外植体根据本领域熟知的方案共培养。将转化的组织在携带存在于二元质粒T-DNA边界的抗生素或除草剂抗性标记的可选择的培养基上再生。

用基因转化植物细胞的另一种方案包括向植物组织和细胞推进无活性的或生物学活性的粒子。这种技术见均授予 Sanford等的美国专利No.4,945,050；5,036,006；和5,100,792所揭示。通常，这个程序包括在有效渗透细胞外表面并掺入其内部的条件下，向细胞推进无活性或生物学活性的粒子。当利用无活性的粒子时，载体可通过用含有希望基因的载体包被粒子而导入细胞中。或者，靶细胞可由载体环绕以便载体通过粒子的激发而载入细胞中。也可将生物活性粒子(例如均含有被导入的DNA的干酵母细胞，干细菌，或噬菌体)推进植物细胞组织中。

8.单子叶植物的转化

大多数单子叶植物的转化现在也已经常规进行。转化技术例如包括使用PEG或电穿孔将基因直接移至原生质体中，及通过粒子轰击入愈伤组织中。转化可以用单一DNA物种或多个DNA物种(即共转化)进行，这两种技术均适用于本发明。共转化可具有避免完整载体构建及产生具有感兴趣的基因未连锁的基因座和可选择标记的转基因植物的优势，使得在随后的世代中可以除去可选择的标记，这被认为是希望如此的。然而，使用共转化的缺点是单独的DNA物种被整合入基因组中的频率低于100％(Schocher et al.，1986)。

专利申请EP0292435，EP0392225，及WO93/07278描述了从玉米原种近交系的中制备愈伤组织和原生质体的技术，使用PEG或电穿孔转化原生质体及从转化的原生质体中再生玉米植物的技术。Gordon-Kamm et al.，1990和Fromm et al.，1990已经公布了使用粒子轰击转化A188衍生的玉米品系的技术。另外，WO93/07278和Koziel et al.，1993描述了通过粒子轰击转化玉米原种近交系的技术。这个技术利用从授粉后14-15天的玉米穗中切离的长度为1.5-2.5mm的不成熟的玉米胚及使用PDS-1000He Biolistic粒子输送设备(DuPont Biotechnology，Wilmington，Delaware，United States of America)进行轰击。

水稻的转化也可以利用原生质体或粒子轰击通过直接基因转移技术进行。原生质体介导的转化已经针对水稻的Japonica类型和Indica类型而揭示(Zhang et al.，1988；Shimamoto et al.，1989；Datta et al.，1990)。这两种类型也可以使用粒子轰击而常规转化(Christou et al.，1991)。另外，WO93/21335描述了通过电穿孔转化水稻的技术。Casas et al.，1993揭示了通过微粒轰击产生转基因高粱植物。

专利申请EP0332581描述了早熟禾亚科原生质体的产生，转化和再生的技术。这些技术可以转化果园草(Dactylis)和小麦。另外，Vasil et al.，1992也揭示了使用粒子轰击进入C型长期可再生的愈伤组织细胞中进行小麦转化，Vasil et al.，1993和Weeks et al.，1993也揭示了使用粒子轰击不成熟胚和不成熟胚衍生的愈伤组织进行转化。

然而，小麦转化的代表性技术包括通过粒子轰击不成熟胚而转化小麦，并包括在基因输送之前的高蔗糖或高麦芽糖步骤。在轰击之前，将胚(长度0.75-1mm)铺板于具有3％蔗糖(Murashige & Skoog，1962)和3mg/l 2，4-二氯苯氧基乙酸(2，4-D)的MS培养基上以诱导体细胞胚，这可以在黑暗处进行。在选择轰击当天，将胚从诱导培养基中取出并置于渗透剂(即具有希望浓度典型为15％的蔗糖或麦芽糖的诱导培养基)上。使得胚质壁分离2-3小时，然后轰击。尽管不是关键地，但典型地每个靶平板有20个胚。将合适的携带基因的质粒(如pCIB3064或pSG35)使用标准程序在微米大小的金粒上沉淀。将每个平板的胚用DuPontBIOLISTICS_氦设备发射，使用大约1000磅/平方英寸的爆发压(psi)，标准的80目屏(80 mesh screen)。在轰击后，将胚回置于黑暗处以回收大约24小时(仍在渗透剂上)。24小时后，将胚从渗透剂中取出并回置于诱导培养基上，在此放置大约1个月之后再生。大约1个月后，将具有发育中的胚形成愈伤组织的胚外植体移至再生培养基(MS+1mg/L NAA，5mg/L GA)，所述培养基另外含有适当的选择剂(在pCIB3064情况中为10mg/l BASTA_，在pSOG35情况中为2mg/l氨甲喋呤)。大约1个月后，将发育的芽移至较大的称为“GA7s”的无菌容器中，容器中含有一半强度的MS，2％蔗糖及相同浓度的选择剂。

也已经揭示了使用土壤杆菌进行单子叶植物的转化。见WO94/00977和美国专利No.5,591,616所揭示，这两个文献在此均并入参考。也见于并入参考的Negrotto et al.，2000所述。Zhao et al.，2000特别揭示了用土壤杆菌转化高粱。也见于美国专利No.6,369,298所述。

水稻(Oryza sativa)可用于再生转基因植物。可以使用多种水稻栽培品种(Hiei et al.，1994；Dong et al.，1996；Hiei et al.，1997)。同样，以下揭示的多种培养基组分可以在数量上改变或取代。起始胚胎发生应答和/或从成熟胚中建立培养物，通过在MS-CIM培养基(MS基础盐，4.3g/L；维生素B5(200×)，5ml/L；蔗糖，30g/L；脯氨酸，500mg/L；谷氨酰胺，500mg/L；酪蛋白水解物，300mg/L；2，4-D(1mg/ml)，2ml/L；用1N KOH将pH调节为5.8；植物凝胶(Phytagel)，3g/L)上培养而进行。将培养应答起始阶段的成熟胚或建立的培养系接种并与含有希望的载体构建体的根瘤土壤杆菌菌株LBA4404(土壤杆菌)共同培养。将土壤杆菌从甘油原种中在固体YPC培养基(加上100mg/L壮观霉素及任何其它适当的抗生素)上在28℃培养大约2天。将土壤杆菌再悬浮于液体MS-CIM培养基中。将土壤杆菌培养物稀释至OD₆₀₀为0.2-0.3并加入乙酰丁香酮(acetosyringone)至终浓度为200μM。加入乙酰丁香酮之后将该溶液与水稻培养物混和以诱导土壤杆菌将DNA移至植物细胞。为进行接种，将植物培养物浸于细菌悬浮液中。除去液体细菌悬浮液并将接种的培养物置于共培养培养基上，在22℃保温2天。然后将培养物移至具有替卡西林(ticarcillin，400mg/L)的MS-CIM培养基以抑制土壤杆菌的生长。对利用PMI可选择的标记基因的构建体(Reed et al.，2001)，7天后将培养物移至含有甘露糖作为糖源的选择培养基(MS加上2％甘露糖，300mg/L替卡西林)，在黑暗中培养3-4周。然后将抗性集落移至再生诱导培养基(无2，4-D，0.5mg/L IAA，1mg/L玉米素，200mg/L TIMENTIN_，2％甘露糖，和3％山梨糖醇的MS)并在黑暗中生长14天。然后将增殖的集落移至另一个再生诱导培养基，并移至光生长室中。将再生的芽移至具有GA7-1培养基(无激素和2％山梨糖醇的MS)的GA7容器中2周，然后当其足够大并具有足够的根时移至温室中。将植物移植在温室的土壤中(T₀世代)生长至成熟，收获T₁种子。

E.转化细胞的生长和筛选

然后将转基因植物细胞置于合适的选择性培养基中以选择转基因细胞，然后生长至愈伤组织。在生根培养基中生长，以从愈伤组织中生长芽并从芽中产生幼苗。将不同构建体正常地与一个标记连接以在植物细胞中选择。方便地，标记可以是杀生物剂(例如抗生素包括但非限于卡那霉素，G418，博来霉素，潮霉素，氯霉素，除草剂等等)抗性。设计所用特殊标记以使得可以选择转化的细胞(与缺失已经导入的DNA的细胞相比)。包括本发明的转录盒的DNA构建体的成分是从与宿主天然(内源)或异源(外源)的序列中制备的。如本文所用术语“异源”和“外源”序列是指在导入所述构建体的野生型宿主中未发现的序列，或者已经分离自宿主并掺入一个表达载体中的序列。在一个实施方案中异源构建体含有与转录起始区域衍生自其中的基因不是天然的至少一个区域。

为证实转化细胞和植物中存在转基因，可以进行多种分析。这种分析包括例如本领域技术人员熟知的“分子生物学”分析，如Southern和Northern印迹，原位杂交及基于核酸的扩增方法如PCR或RT-PCR；“生物化学”分析，例如通过免疫学方式(酶联免疫吸附测定(ELISA)和Western印迹)或通过酶功能检测蛋白质产物的存在；植物部分分析，如种子分析；及分析整个再生植物的表型，例如疾病或有害物抗性。

DNA可分离自细胞系或任何植物部分以通过本领域技术人员熟知的技术确定预先选择的核酸片段的存在。注意完整的序列不总是存在，大概是由于细胞中序列的重排或缺失所致。

通过本发明的方法导入的核酸片段的存在可以通过聚合酶链反应(PCR)确定。使用这种技术，扩增核酸的不连续片段并通过凝胶电泳检测。这种类型的分析使得可以确定预选的核酸片段是否存在于稳定的转化体中。预期使用PCR技术可以克隆与导入的预选DNA片段邻近的宿主基因组DNA的片段。

DNA整合入宿主基因组中及转化体的独立相同性的阳性证据可以使用Southern杂交技术确定。使用这种技术，可以鉴别导入宿主基因组中及宿主DNA序列两侧的特异DNA序列。因此，给定的转化体的Southern杂交模式作为转化体的鉴别特性。另外，可以通过Southern杂交以表明导入的预选DNA片段在高分子量的DNA中的存在：例如为证实导入的预选DNA片段已经整合入宿主基因组中。Southern杂交提供了也可以使用PCR获得的某些信息，例如预选DNA片段的存在，但也可以表明外源核酸分子整合入基因组中并可以鉴定每个转化体。

预期使用斑点(dot)或狭线(slot)印迹杂交技术(对Southern杂交技术加以修改的技术)，可以获得衍生自PCR的相同信息(例如存在预选的DNA片段)。

PCR和Southern杂交技术均可用于论证预选的DNA片段传递至子代。在大多数情况中，给定转化体的特征性Southern杂交模式在子代中将分离为一或多个孟德尔基因(Spencer et al.，1990；Laursen et al.，1994)，表明基因的稳定遗传。愈伤组织和亲代转化体(R₀)的非嵌合性质可以通过种系传递及相同的Southern印迹杂交模式和转化基因分离的愈伤组织，R₀植物和R₁子代中的转化DNA的强度而提示。

而某些DNA分子技术可以使用分离自植物任何部分的DNA进行，特异的RNA仅在特殊的细胞或组织类型中表达，因此必需从这些组织中制备RNA以进行分析。PCR技术也可用于检测和量化从导入的预选DNA分子中产生的RNA。在这个PCR应用中，首先必需使用酶如反转录酶将RNA反转录为互补DNA(cDNA)，然后通过应用常规的PCR技术以扩增所得cDNA。

在一些情况中，PCR技术不能表明RNA产物的完整性。关于RNA产物性质的进一步信息可通过Northern印迹获得。这个技术表明RNA物种的存在并额外给出了关于RNA完整性的信息。RNA物种的存在与否也可以使用本领域已知的斑点或狭线印迹Northern杂交技术而确定。这些技术是Northern印迹的修改技术，典型地表明仅存在或不存在RNA物种。

因此，Southern印迹和PCR可用于检测感兴趣的DNA分子的存在。表达可以通过特异性鉴别导入的预选DNA片段的蛋白质产物或者评测由其表达而导致的表型改变而评价。

特异蛋白质的产生和鉴别的分析可以利用蛋白质的物理-化学，结构，功能或其它性质。独特的物理-化学或结构性质使得可以通过电泳程序如通过天然或变性凝胶电泳或者等电聚焦，或者通过层析技术如离子交换或凝胶排阻层析分离并鉴别蛋白质。各个蛋白质的独特结构提供了使用本领域公认的技术如ELISA，利用特异的抗体检测各个蛋白质存在的机会。可利用组合方案以增加额外的信息，如Western印迹，其中抗体用于定位已经通过电泳技术分离并移至固体支持物的各个基因产物。可利用另外的技术证实感兴趣的产物的相同性，如通过氨基酸测序随后纯化而评价。尽管这些技术是最常用的，但也可以使用本领域技术人员已知的其它程序。

也可以使用分析程序通过蛋白质功能，尤其是酶催化包括特异性底物和产物的特异性化学反应的能力鉴别蛋白质的表达。这些反应可以随后通过物理或化学程序提供并量化底物的丧失或反应产物的产生。实例是与所分析的酶同样变化，并且是本领域针对许多不同的酶所已知的。

基因产物的表达也可以通过评价其表达的表型结果而确定。这些分析可采取多种形式，包括但非限于分析化学组合物，形态学或植物的生理学性质的改变。形态学改变可包括更高或更粗的茎干。植物或植物的一部分应答所加处理中的改变典型地在称为生物测定的严格控制条件下评价。

同样，蛋白质表达水平可以通过任何标准方法测定。例如，与本发明的细胞增殖相关蛋白特异性结合的抗体(单克隆或多克隆抗体)可以通过标准方法产生(见例如Ausubel et al.，1988，包括直至2002年的补充材料所述产生抗体的方法；Harlow & Lane，1988)。使用这种细胞增殖相关蛋白的特异性抗体，蛋白质水平可以通过任何免疫学方法测定，所述方法包括但非限于Western印迹，免疫沉淀，和ELISA。

测定蛋白质水平的另一种非限制性的方法是通过测定mRNA水平而进行。例如，总mRNA可分离自导入本发明的核酸分子(或者这种核酸分子的反义形式)的细胞或未处理的细胞。使用导入被处理的细胞的核酸分子作为探针进行的Northern印迹分析可表明与未处理的细胞相比，处理的细胞是否在不同水平(在mRNA水平和多肽水平)表达该核酸分子。

细胞增殖速度的改变(在未攻击的细胞和植物或者在用例如暴露于盐或病原体感染而攻击的细胞和植物中)可通过标准方法计数细胞而易于测定。例如，细胞可使用血细胞计数器或显微镜人工计数。愈伤组织生长和植物生长可通过重量和/或高度测定。各个细胞生长可通过任何标准细胞增殖测定而确定(例如³H掺入法)。

本发明进一步包括通过调节一种以上的本发明所述细胞增殖相关蛋白的表达而操纵细胞和植物增殖的方法。例如，第一种细胞增殖相关蛋白的表达水平增加加上第二种细胞增殖相关蛋白表达水平的降低可导致细胞(或包括这种细胞的植物)增殖速度与单独的第一种细胞增殖相关蛋白表达水平的增加或第二种细胞增殖相关蛋白表达水平的降低相比发生更大改变。本发明已经提供了许多细胞增殖相关蛋白及其彼此的相互关系。操纵本发明的一或多种细胞增殖相关蛋白的表达使得经遗传工程化的植物(即转基因植物)的发育在有利条件中，分化下或者在刺激下(例如生物或非生物刺激)具有更好的生长速度。

VI.植物，培育及种子产生

A.植物

宿主细胞是任何类型的细胞，包括但非限于细菌细胞，酵母细胞，植物细胞，昆虫细胞，哺乳动物细胞。许多这种细胞是可商购的，例如来自美国弗吉尼亚州马纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(AmericanType Culture Collection，Manassas，Virginia，United States of America)。

在某些实施方案中，细胞是植物细胞，其可以再生以形成转基因植物。因此，本发明提供了一种转化的(转基因)植物细胞，in planta或ex planta，包括转化的质体或其它细胞器(例如核，线粒体或叶绿体)。如本文所用，“转基因植物”是具有一或多种植物细胞的植物，所述植物细胞含有一个外源核酸分子(例如编码本发明细胞增殖相关多肽的核酸分子)。因此，转基因植物可包含一个核酸分子，该分子包含一个外源核酸序列(即衍生自不同植物物种的核酸序列)。或者或另外，转基因植物可包含一个核酸分子，该分子包含来自相同植物物种的一个核酸序列，其中核酸序列已经分离自该植物物种。在后者的实例中，核酸序列可以是与野生型序列相同或不同，并可以任选地包括与在天然存在的植物中发现的那些序列相同或不同的调节序列。

本发明可用于转化任何植物物种的细胞，包括但非限于来自玉米(Zeamays)，芸苔属(例如甘蓝型油菜(B.napus)，芜菁(B.rapa)，芥菜(B.juncea))，特别是用作籽油(seed oil)来源的那些芸苔物种，苜蓿(Medicagosativa)，水稻(Oryza sativa)，黑麦(Secale cereale)，高粱(两色蜀黍、蜀黍)，黍米(例如珍珠粟(Pennisetum glaucum))，粟米(Panicum miliaceum)，谷子(Setaria italica)，穇子(Eleusine coracana))，向日葵(Helianthus annuus)，红花(Carthamus tinctorius)，小麦(普通小麦(Triticum aestivum))，大豆(glycine max)，烟草(Nicotiana tabacum)，马铃薯(Solanum tuberosum)，花生(落花生(Arachis hypogaea))，棉花(海岛棉(Gossypium barbadense)，陆地棉(Gossypium hirsutum))，甘薯(Ipomoea batatus)，木薯(Manihotesculenta)，咖啡(咖啡属(Cofea spp.))，椰子(Cocos nucifera)，凤梨(Ananascomosus)，柑桔树(柑桔属(Citrus spp.))，可可(Theobroma cacao)，茶(Camellia sinensis)，香蕉(芭蕉属(Musa spp.))，鳄梨(Persea ultilane)，无花果(Ficus casica)，番石榴(Psidium guajava)，芒果(ManTIFera indica)，橄榄(油橄榄(Olea europaea))，番木瓜(Carica papaya)，腰果(Anacardiumoccidentale)，澳洲坚果(全缘叶澳洲坚果(Macadamia integrifolia))，杏仁(扁桃(Prunus amygdalus))，甜菜(Beta vulgaris)，甘蔗(甘蔗属)，燕麦，浮萍(浮萍属)，大麦，蔬菜，观赏植物，及针叶树。

浮萍(Lemna，见PCT国际出版物No.WO00/07210所述)包括浮萍科(Lemnaceae)的成员。已知有4个属34个物种的浮萍，如下所述：浮萍属(L.aequinoctialis，L.disperma，L.ecuadoriensis，L.gibba，日本青萍(L. japonica)，矮山麦冬(L.minor)，镰形青萍(L.miniscula)，L.obscura，稀脉萍(L. perpusilla)，L.tenera，品字萍(L.trisulca)，L.turionifera，L.valdiviana)；紫萍属(S.intermedia，S.polyrrhiza，S.punctata)；芜萍属(Wa.Angusta，Wa.Arrhiza，Wa.Australina，Wa.Borealis，Wa.Brasiliensis，Wa.Columbiana，Wa.Elongata，Wa.Globosa，Wa.Microscopica，Wa.Neglecta)及Wofiella属(W1.ultila，W1.ultilanen，W1.gladiata，W1.ultila，W1.lingulata，W1.repunda，W1.rotunda，和W1.neotropica)。浮萍科的任何其它的属或物种如果存在，则也包含在本发明范围内。在一个实施方案中，Lemna gibba用于本发明中，在其它实施方案中，应用矮山麦冬和镰形青萍。浮萍物种可使用Landolt，1986所述分类方案加以分类。

本发明范围内的蔬菜包括番茄(Lycopersicon esculentum)，莴苣(例如Lactuca sativa)，青豆(phaseolus vulgaris)，利马豆(Phaseolus limensis)，豌豆(香豌豆属(Lathyrus spp.))，及香瓜属的成员如黄瓜(C.sativus)，香瓜(C.cantalupensis)，及甜瓜(C.melo)。观赏植物包括杜鹃花(杜鹃属(Rhododendron spp.))，八仙花属(Macrophylla hydrangea)，芙蓉属(Hibiscus rosasanensis)，玫瑰(蔷薇属(Rosa spp.))，郁金香(郁金香属(Tulipa spp.))，水仙(水仙属(Narcissus spp.))，矮牵牛花(Petunia hybrida)，康乃馨(Dianthus caryophyllus)，一品红(Euphorbia pulcherrima)，和菊花。可用于实现本发明的针叶树包括例如松树，如火炬松(Pinus taeda)，沼泽松(Pinus elliotii)，美国黄松(Pinus ponderosa)，黑松(Pinus contorta)，和辐射松(Pinus radiata)，道格拉斯冷杉(Pseudotsuga menziesii)；西部铁杉(Tsuga ultilane)；锡特卡云杉(Picea glauca)；红杉(Sequoiasempervirens)；真冷杉(ture fir)如银枞(Abies amabilis)和香脂冷杉(Abiesbalsamea)；及雪松，如西部红柏(Thuja plicata)和阿拉斯加黄柏(Chamaecyparis nootkatensis)。

可用于本发明中的豆科植物包括豆和豌豆。代表性的豆包括瓜尔豆，角豆，胡芦巴，大豆，四季豆，豇豆，绿豆，利马豆，蚕豆，小扁豆，鹰嘴豆等等。豆包括但非限于落花生(例如花生)，蚕豆(Vicia)(例如小寇花(crown vetch)，毛苕子(hairy vetch)，赤豆(adzuki bean)，绿豆，和鹰嘴豆)，羽扇豆(Lupinus)(例如羽扇豆(lupine)，三叶草(trifolium))，菜豆(Phaseolus)(例如菜豆和利马豆)，豌豆(Pisum)(例如field bean)，草木犀属(Melilotus)(例如三叶草(clover))，苜蓿(Medicago)(例如苜蓿)，荷花(Lotus)(例如车轴草(trefoil))，小扁豆属(lens)(例如小扁豆(lentil))，及假木蓝(false indigo)。用于本发明方法中的非限制性草料和草坪草(turf grass)包括苜蓿，果园草，高羊茅(tall fescue)，多年生黑麦草(perennial ryegrass)，匍匐性本特草(creeping bent grass)，和小糠草。

本发明范围内的其它植物包括金合欢，小茴香，朝鲜蓟，芝麻菜，黑莓，canola，芫荽，克莱门氏小柑橘，宽叶莴苣，桉树，茴香，葡萄柚，哈蜜瓜，豆薯，猕猴桃，柠檬，酸橙，蘑菇，坚果，黄秋葵，柑桔，欧芹，柿子，车前草，石榴，白杨，辐射松，菊苣，南方松，枫香，柑橘树，黑小麦，藤本植物，山药，苹果，梨，温柏，樱桃，杏，甜瓜，大麻，荞麦，葡萄，树莓，藜，蓝莓，油桃，桃，李子，草莓，西瓜，茄子，胡椒，花椰菜，芸苔，例如椰菜，甘蓝，ultilan sprouts，洋葱，胡萝卜，韭菜，甜菜，蚕豆，芹菜，萝卜，南瓜，菊苣，葫芦，大蒜，四季豆，菠菜，南瓜，芜箐，ultilane，及绿皮西葫芦。

本发明范围内的观赏植物包括凤仙花属，秋海棠属，天竺葵属，堇菜属，仙客来属，马鞭草属，长春花属，万寿菊属，报春花属，非洲紫罗兰属，藿香蓟属(Agertum)，苋属，金鱼草属，耧斗菜属，瓜叶菊属，三叶草属，秋英属，豇豆属，大丽花属，曼陀罗属，翠雀属，扶郎花属，唐菖蒲属，大岩桐属，朱顶红属，松叶菊属，Salpiglossos和百日草属。

在某些实施方案中，本发明的转基因植物是农作物，特别是谷类植物。这种农作物和谷类包括但非限于玉米，苜蓿，向日葵，水稻，芸苔，canola，大豆，大麦，大豆，甜菜，棉花，红花，花生，高粱，小麦，黍及烟草。

本发明还提供了包含所述成分的植物。在一个实施方案中，植物的特征在于植物的表型或可测定的特性加以修饰，这种修饰可归因于表达盒所致。在一个实施方案中，修饰包括例如营养增加，营养吸收效力增加，内源化合物的产量或者异源化合物的产量增加。在另一个实施方案中，修饰包括对除草剂，非生物刺激或病原体抗性增加或降低。在另一个实施方案中，修饰包括对光，水，氮或微量元素的需求增加或减少。在另一个实施方案中，修饰包括富集必需氨基酸作为植物多肽级分的一部分。在另一个实施方案中，多肽级分可以是例如全部种子多肽，可溶多肽，不可溶多肽，可水提取的多肽，及脂质相关的多肽。在另一个实施方案中，修饰包括基因的过表达，低表达，反义调节，有义抑制，诱导型表达，诱导型抑制，或者诱导型调节。

B.培育

通过用本发明的核酸序列转化获得的植物可以是任何植物物种，包括单子叶植物和双子叶植物；然而，本发明方法中使用的植物在一个实施方案中选自上述农业重要的靶农作物。本发明基因的表达组合对产量和质量重要的其它特性可以通过培育掺入植物品系中。培育方法和技术为本领域所已知。见例如Welsh，1981；Wood，1983；Mayo，1987；Singh，1986；Wricke & Weber，1986所述。

工程化入上述转基因种子和植物中的遗传性质通过有性生殖或营养生长而传代，并因此可在子代植物中保持和繁殖。通常，保持和繁殖利用已知的农业学方法以符合特殊的目的，如耕种，播种，或收获。也可以应用专业处理如水培或温室技术。由于生长中的农作物易受昆虫或感染的攻击和伤害以及杂草的竞争，因此要采取措施以控制杂草，植物疾病，昆虫，线虫，及其它不利条件以改良产量。这些包括机械措施如土壤耕耘或除去杂草和感染的植物，以及应用农用化学制品如除草剂，杀真菌剂，杀配子剂，生长调节物，催熟剂和杀虫剂。

本发明的转基因植物和种子的有利遗传性质的应用可进一步在植物培育中产生，其针对具有改良性质的植物的发育，所述改良性状如耐受有害物、除草剂或者生物或非生物刺激，改良的营养价值，增加的产量或增殖，或者改良的结构使得倒伏或脱粒损失减少。多种培育步骤的特征在于熟知的人工干涉如选择杂交品系，指导亲代品系的授粉，或者选择适当的子代植物。

根据希望的性质可采取不同的培育措施。相关的技术为本领域所熟知，包括但非限于杂交，近交，回交培育，多线培育，变种混和，种间杂交，非整倍体技术等等。杂交技术也可包括通过机械、化学或生物化学方式不育化植物以产生雄性或雌性不育植物。雄性不育植物用不同品系的花粉交叉授粉保证了雄性不育但雌性能育植物的基因组一律获得两个亲代品系的性质。因此，本发明的转基因种子和植物可用于培育改良的植物品系，例如提高常规方法的效力如除草剂或杀虫剂处理的效力，或者由于其修饰的遗传性质而可以免除所述方法。或者可以获得具有改良的刺激耐受性的新农作物，由于其最佳化的遗传“装备”而产生与不能耐受相对不利发育条件(例如干旱)的产物相比品质更好的收获产物。

另外，本发明还提供了一种转基因植物，这种植物的种子，及这种植物的子代植物包括杂交系和近交系。在代表性的实施方案中，转基因植物是转基因的玉米，大豆，大麦，苜蓿，向日葵，canola，大豆，棉花，花生，高粱，烟草，甜菜，水稻，小麦，裸麦，草坪草，黍，甘蔗，番茄，或马铃薯.

本发明的转化的(转基因)植物包括一种植物，其基因组通过一个外源核酸分子而扩展，或者其中一个基因被破坏，例如导致由该基因编码的产物的功能丧失，降低或改变，这种植物与相应的野生型植物相比也可以具有增加的产量和/或产生品质更好的产物。本发明的核酸分子因此用于靶基因破坏，以及用作标记和探针。

本发明还提供了一种植物培育方法，例如制备杂交的可育的转基因植物。所述方法包括将包含本发明的特殊核酸分子的一种可育转基因植物自身杂交或者与第二种植物(例如没有所述特殊的核酸分子的植物)杂交，以制备包含所述特殊核酸分子的杂交可育的转基因植物的种子。然后将种子种植以获得杂交可育的转基因植物。该植物可以是单子叶植物或双子叶植物。在一个特殊的实施方案中，植物是一种谷类植物。

杂交可育的转基因植物可具有通过雌亲或雄亲遗传的特殊核酸分子。第二种植物可以是一种近交植物。杂交可育的转基因植物可以是杂交体。本发明还包括任何这些杂交可育的转基因植物的种子。

C.种子产生

本发明的一些实施方案还提供了包含表达盒的植物的种子和分离的产物，所述表达盒包含与本发明的分离核酸可操纵地连接的一个启动子序列。在一些实施方案中，分离的核酸分子选自如下一组：

a.编码包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的一种氨基酸序列的多肽的核酸分子；

b.包含SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列的核酸分子；

c.具有与(a)或(b)的核酸分子的核酸序列有至少90％相同的核酸序列的核酸分子；

d.在选自如下一组的杂交条件下与(a)或(b)杂交的核酸分子：

i.在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM乙二胺四乙酸(EDTA)中杂交，最后在50℃在2X标准柠檬酸盐水(SSC)，0.1％SDS中洗涤；

ii.在50℃在7％SDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中杂交，最后在50℃在1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

iii.在50℃在7％SDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA中杂交，最后在50℃在0.5×SSC，0.1％SDS中洗涤；

iv.在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mMEDTA中杂交，最后在50℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

v.在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mMEDTA在杂交，最后在65℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

e.包含与(a)完全互补的核酸序列的核酸分子；

f.包含与(a)完全反向互补的核酸序列的核酸分子。

在一个实施方案中，分离的产物包含酶，营养多肽，结构多肽，氨基酸，脂质，脂肪酸，多糖，糖，醇，生物碱，类胡萝卜素，propanoid，类固醇，色素，维生素，或植物激素。

本发明的实施方案还涉及通过表达含有选自如下一组的核苷酸序列的分离核酸而产生的分离产物：

(a)一个核苷酸序列，其在45℃在1M NaCl杂交条件下，继以在50℃在0.1M NaCl中的最后洗涤步骤下，与SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的序列中列出的一种核苷酸序列杂交，或其片段、结构域或其特征部分；

(b)编码一种多肽的一个核苷酸序列，所述多肽是SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的序列中列出的一种多肽的直向同源物或其片段、结构域、或特征部分；

(c)与(a)或(b)互补(例如完全互补)的核苷酸序列；及

(d)与本发明(a)或(b)反向互补(例如完全反向互补)的核苷酸序列。

在一个实施方案中，产物是在植物中产生的。在另一个实施方案中，产物是在细胞培养物中产生的。在另一个实施方案中，产物是在无细胞系统中产生的。在一个实施方案中，产物包含酶，营养多肽，结构多肽，氨基酸，脂质，脂肪酸，多糖，糖，醇，生物碱，类胡萝卜素，propanoid，类固醇，色素，维生素，或植物激素。在另一个实施方案中，产物是包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的氨基酸序列的多肽或其直向同源物。在一个实施方案中，多肽包含酶。

在种子生产中，种子的萌发性质和一致性是基本的产物特性。由于难以保持一种农作物没有其它农作物和杂草种子、控制种子产生病变及产生良好萌发的种子，已经由种子生产者揭示了相当广泛和充分说明的种子生产实践方法，所述种子生产者是纯种子的生长，检验和营销领域中富有经验者。因此，农场主购买符合特异性品质标准的经鉴定的种子而不使用从其自己的农作物收获的种子是常识性的。用作种子的繁殖材料通常用包含除草剂，杀昆虫剂，杀真菌剂，杀菌剂，杀线虫剂，杀软体动物剂，或其混合物的保护剂包膜处理。通常使用的保护剂包膜包含化合物如环己烯亚胺(captan)，萎锈灵(carboxin)，秋兰姆(thiram)(二硫四甲秋兰姆；TMTD_；得自R.T.Vanderbilt Company，Inc.，Norwalk，Connecticut，United States of America)，Methalaxyl(APRON XL_；得自Syngenta Corp.，Wilmington，Delaware，United States of America)，和甲基嘧啶磷(pirimiphos-methyl)(ACTELLIC_；得自Agriliance，LLC，St.Paul，Minnesota，United States of America)。如果需要，这些化合物另外与载体，表面活性剂和/或通常用于配制领域中的促进应用的佐剂一起配制，以提供抗细菌、真菌或动物有害物所致伤害的保护作用。保护剂包膜可以通过将繁殖材料用液体制剂浸渍或者通过用一种组合的湿或干制剂包被而应用。也可以使用其它的应用方法如在萌芽或结果阶段直接处理。

本发明通过参考如下详述的实施例将得以进一步描述。这些实施例只是例证了本发明，除非特别指出则无限制之意。

实施例

包括如下实施例以例证在本发明的模式。根据本发明的揭示及本领域一般技术水平，技术人员将意识到如下实施例只是举例说明，在不偏离本发明范围的前提下可对本发明加以各种改变，修饰和变化。

实施例I

植物生长通过两种方式完成：通过细胞生长和通过细胞分裂，这两种方式分别受到细胞周期的G1期和M期控制。细胞周期蛋白是在控制核细胞分裂周期中起活性作用的蛋白质，并调节细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)，该激酶是真核细胞中细胞周期进展所必需的。John et al.，2001教导所有的细胞周期蛋白均与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)的催化亚基，及两种蛋白质(即细胞周期蛋白和CDK)，连同CDK激活亚基一起相互作用，依次磷酸化丝氨酸或苏氨酸残基底物，从而控制细胞经由细胞周期的不同时期行进的一系列反应。

真核细胞具有多类细胞周期蛋白，每种均是细胞周期期间特异性调节步骤所需的。细胞周期蛋白-CDK酶复合物的活性和底物特异性是通过与CDK催化亚基相关的特异性细胞周期蛋白亚基确定的。因此，CDK与特异性细胞周期蛋白的相关是一个关键的调节机制，其使得细胞经由细胞周期的不同阶段而行进。细胞周期行进包括由于转录或蛋白酶解速度改变导致各个细胞周期蛋白丰度的改变，随之在细胞周期中CDK的底物改变。当细胞周期蛋白积聚增加CDK活性并起始导致DNA复制的活动时，这种积聚在终止G1期中特别重要。

细胞周期蛋白是CDK激活所必需的，认为其与特异性个体蛋白的结合提供了CDK的潜在底物(John et al.，2001)。因此，认为酵母双杂交方案是剖析细胞周期蛋白介导的细胞周期活动的一种有效方法。细胞周期蛋白和CDK复合物底物包括CDK抑制剂，激酶和磷酸酶，控制DNA复制的酶，有丝分裂期间染色体运动所必需的细胞骨架结构，及蛋白质降解的遍在蛋白依赖性途径的化合物，所有这些均参与细胞周期的关键步骤。高水平的CDK活性与高水平的蛋白酶解活性交替，这负责细胞周期蛋白和CDK抑制剂的转换。

真核细胞周期经由生长期和生殖期，后者包括染色体复制及其随后分配于子细胞。细胞周期蛋白是相当保守的，并因此在植物已经比较完全地鉴定。然而，细胞周期控制的基本机制和介导细胞周期行进的关键基因在真核细胞中是高度保守的(参见Potuschak & Doerner，2001；John etal.，2001所述)，调节在植物中细胞增殖的一些途径与在动物中不同，部分是由于植物是固着的并需要发育适应性以应答环境的改变(例如灵活的生长速度和模式以最佳利用其环境，细胞分裂和扩展是应答环境改变所必需的)。因此，调节植物中细胞增殖的途径很可能与在动物中不同。在高等植物中，细胞周期与受到复杂基因网络调节的发育期改变偶联。(CDK-细胞周期蛋白复合物及其参与细胞周期进展的作用参见John etal.，2001所述)。植物细胞周期蛋白及其与CDK和底物蛋白的相关是重要的并且作为关键的调节机制，控制应答影响植物生长和发育的许多环境和发育刺激的增殖。细胞周期蛋白-CDK复合物在调节植物细胞周期中的作用参见John et al.，2001和Potuschak & Doerner，2001所述。

这个实施例提供了新鉴定的与水稻(O.sativa)E2F同系物(OsE2F1)相互作用的水稻蛋白，通过酵母双杂交分析技术鉴别。一个发现的相互作用子(interactor)是与小麦属DP蛋白相似的水稻DP同系物。这个相互作用子称为假设蛋白018989-4003(Os018989-4003)并也用作酵母双杂交筛选中的饵。

在动物中，E2F转录因子家族的成员调节细胞周期行进所需的基因的表达，如编码一些调节蛋白及参与核苷酸和DNA合成的酶的基因。特别地，E2F/DP复合物是G1/S过渡的重要调节物(参见Trimarchi&Lees，2002所述)，在此关卡细胞或者起始S期或停滞细胞周期。E2F转录活性得自形成异源二聚体的E2F样(E2F-like)蛋白家族的协同作用。基于编码它们的基因序列同源和功能性质，在哺乳动物中已经鉴别了至少6个E2F(E2F1-E2F6)和两个DP(DP1和DP2)蛋白，作为以所有可能的组合存在的E2F复合物的成分。E2F亚组(E2F1，E2F2和E2F3，对E2F4和E2F5)彼此功能截然不同，并认为彼此作用相反以介导细胞周期调节物基因的激活或抑制，从而促进细胞增殖或细胞周期停滞和终末分化。另外，E2F活性是通过与其它细胞蛋白包括成视网膜细胞瘤(RB)蛋白家族的三个成员pRB，p107和p130的相互作用而调节的，其结合E2F并负调节期转录活性，及通过细胞周期蛋白与细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的间接结合而调节。在晚期G1至S期中，RB蛋白由G1-特异性CDK的磷酸化从RB蛋白中释放E2F异源二聚体，所得的“游离E2F”诱导参与细胞增殖的许多基因表达，包括细胞周期调节物和DNA合成所需的酶。各个E2F-DP复合物依赖于E2F亚基和与该复合物相关的蛋白质的相同性激发不同的转录应答。这些观测支持了酵母双杂交方案作为剖析E2F介导的细胞周期控制的方法。

许多编码E2F或DP同系物的cDNA已经分离自植物并鉴定，包括来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的三个E2F和两个DP蛋白(Magyar etal.，2000；参见Kosugi & Ohashi，2002所述)。植物E2F呈现高度的序列相似性，尽管它们与E2F-4和E2F-5略微相似，但与动物E2F蛋白无明显相似性。然而，渐增的迹象是植物E2F样基因与期哺乳动物同系物是功能等价的，并且植物中G1/S过渡至少部分是在与在动物中发现的那些相似的调节物的控制下，如D型细胞周期蛋白，Rb相关蛋白，及E2F和DP同系物。与动物E2F相似，植物E2F蛋白可结合动物E2F的共有结合位点，其DNA结合活性可以通过人和植物DP蛋白刺激。它们也可以结合人RB或植物RB样蛋白。然而，其性质包括反式激活，亚细胞定位及功能差别还未完全鉴定(Kosugi & Ohashi，2002)。一项研究表明与动物E2F不同，拟南芥E2F和DP主要不定位于核，但其核定位是通过与一些DP和/或其它蛋白相互作用而控制(Kosugi & Ohashi，2002)。基于这些发现，Kosugi & Ohashi，2002提示植物E2F和DP蛋白的功能主要是由通过与特异性配偶体蛋白相互作用介导的其核定位控制的，并且植物和动物之间E2F/RB途径调节中的不同可反映细胞周期调节中的差异。

在这个实施例中鉴别蛋白质相互作用包括水稻E2F和DP同系物的目的是阐明植物中E2F介导的细胞周期调节的机制。针对参与水稻中细胞周期调节的蛋白质进行遗传操纵或化合物处理以修饰其水平或活性，从而调节植物细胞周期。如本文所述，编码这些蛋白质的基因的鉴别使得可以遗传操纵农作物或者应用化合物以调节植物细胞周期并在植物发育或生长中实现农业上希望的改变。

结果

发现OsE2F1与四种新的水稻蛋白相互作用：两种DP样蛋白(Os018989-4003和OsPN26539)；一种驱动蛋白样蛋白(OsPN29946)，其在细胞周期的G1/S过渡期中发生的活动中具有推定的微管动力功能；及一种未知功能的蛋白质(OsPN30852)。

新的DP蛋白Os018989-4003(在酵母双杂交筛选中作为饵或猎物)与水稻E2F同系物OsE2F1(如上述)及与水稻E2F2同系物的两种剪接变体OsE2F2(在公开注解的)和OsE2F2(367)(在这个研究中鉴别的)相互作用。OsE2F2(367)变体还与另一种新的DP样蛋白OsPN31182相互作用。针对DP蛋白Os018989-4003鉴别的其它相互作用子包括水稻驱动蛋白样蛋白(OsAAG13527)；MADS盒(box)蛋白MADS14(OsMADS14)，其具有在花发育中的已知作用；推定的肌球蛋白重链(OsAAK72891)，其在细胞周期依赖性细胞骨架动态活动中很可能作为肌动蛋白的动力；及另一种肌球蛋白重链样蛋白，新的蛋白质OsPN22824。

这个实施例中相互作用的蛋白质列于下表1和2，随后是每个蛋白质的详细信息及关于相互作用意义的讨论。这个实施例中描述的一些相互作用的图表示于图1。这个实施例的蛋白质的核苷酸序列(从中可推导出氨基酸序列)在SEQ ID NO：1-11和193-199中编号为奇数的序列中提供。

鉴别的一些蛋白质代表先前未鉴定的新的水稻蛋白。基于其预期的生物学功能及猎物蛋白与水稻E2F同系物OsE2F1和DP同系物Os018989-4003的特异性相互作用的能力，相互作用蛋白很可能参与E2F介导的细胞周期的调节。

表1：针对OsE2F1(E2F同系物)鉴别的相互作用蛋白

表中给出了用作饵及发现作为猎物蛋白的蛋白质的克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称后的括号中示出。饵和猎物坐标(coordinates)是分别由查询中所用的饵片段及相互作用的猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsE2F1PN19758(SEQ 1D NO：194)	水稻E2F同系物(AB041725；BAB20932)	300-437&
				相互作用子

Os018989-4003*PN21044(SEQIDNO：2)	假设蛋白0189894003，与小麦属DP蛋白相似	100-250	9-179177-294(输出性状)
				OsPN26539(SEQ ID NO：4)	新蛋白质PN26539(AC087544)，可能是DP	100-250	2x 66-3462x 194-34682-253(输出性状)
OsPN29946(SEQ IDNO：6)	新蛋白质PN29946，与拟南芥驱动蛋白样蛋白相似(BAB11329.1；e＝0.0)	100-250	2x 173-470(输出性状)
				OsPN30852(SEQ IDNO：8)	新蛋白质PN30852	100-250	45-86(输出性状)

&自身激活克隆，即其在无猎物蛋白的情况中激活双杂交系统中的报道基因，并因此在查询中不使用

^*这个蛋白质在这个实施例中也用作饵(见表2)。

表2：针对Os018989-4003鉴别的相互作用蛋白

(假设蛋白018989-4003，与小麦属DP蛋白相似)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
Os018989-4003PN21044(SEQIDNO：2)	假设蛋白018989-4003，与小麦属DP蛋白相似
				相互作用子

OsE2F1PN19758(SEQ ID NO：194)	水稻E2F同系物(AB041725；BAB20932)	90-220	191-436(输出性状)95-276(输入性状)
				OsE2F2#PN21003(SEQ ID NO：10)	水稻E2F2同系物(AB041726；BAB20933)	90-220	90-358(输入性状)
OsAAG13527PN23367(SEQ ID NO：196)	水稻驱动蛋白样蛋白(AC068924；AAG13527.1)	90-220	668-859(输出性状)
				OsAAK72891PN26317(SEQ ID NO：198)	水稻推定的肌球蛋白重链(AC091123；AAK72891)	90-220	342-638322-549(输入性状)339-651(输出性状)
OsMADS14*PN20910(SEQ ID NO：200)	水稻MADS 盒蛋白MADS14(AF058697，AAF19047)	90-220	54-180(输出性状)
				OsPN22824&(SEQ ID NO：12)	新蛋白质PN22824，肌球蛋白重链	90-220	2x 393-494(输出性状)

#OsE2F2序列的一个剪接变体，OsE2F2(367)，用作饵；其相互作用示于下表3

^*针对OsMADS14鉴别的额外相互作用示于下表4

&针对PN22824鉴别的额外相互作用示于表5

表3：针对OsE2F2鉴别的相互作用蛋白

(E2F2同系物，另一种转录物，367)

基因名称

蛋白质名称(GENBANK_登录号)

饵坐标

猎物坐标(来源)

饵蛋白
				OsE2F2(367)PN21003(SEQ ID NO：10)	E2F2同系物，另一种转录物(367)(AB041726；BAB20933)	180-368
相互作用子
				Os018989-4003PN21044(SEQ ID NO：2)	假设蛋白018989-4003，与小麦属DP蛋白相似	1-368	69-294(输入性状)
OsPN31182(SEQ ID NO：14)	新的蛋白质PN31182，拟南芥DP样蛋白(CAC15483.1；9e-55)		124-32472-255156-334(输入性状)

表4：针对OsMADS14鉴别的额外相互作用

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白
OsMADS14PN20910(SEQ ID NO：200)	水稻MADS 盒蛋白MADS14(AF058697，AAF19047)	50-198	124-22382-197(输出性状)
				饵蛋白
OsMADS45PN20231	水稻MADS 盒蛋白MADS45

(1905929-OS000555)(SEQ ID NO：202)

(U31994，AAB50180)

表5：针对OsPN22824鉴别的额外相互作用

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白
OsPN22824(SEQ ID NO：12)	新蛋白PN22824	1-198	301-500(输入性状)
				饵蛋白
OsRACDPN19695(SEQ ID NO：204)	水稻小GTP结合蛋白RACDP(AF218381；AAF28764)

使用OsE2F1作为饵的双杂交系统

OsE2F1(GENBANK_登录号BAB20932；Kosugi&Ohashi，2002)是一种436个氨基酸的蛋白质，其是E2F转录因子家族的成员。其含有一个转录因子E2F/二聚体化配偶体(TDP)签名(氨基酸108-333)，通过氨基酸序列分析推定(3.1e^-35推定值)。E2F蛋白与称为DP蛋白的转录因子形成异源二聚体起作用(Wu et al.，1995)。这些转录复合物调节编码细胞周期行进所需的蛋白质的基因的转录。在这个实施例中在这些蛋白质的水稻直向同源物之间鉴别的那些与文献中论证的E2F转录因子与DP蛋白的相互作用是一致的。很可能Os018989-4003-OsE2F1相互作用代表水稻中细胞周期控制中的一个步骤。这个相互作用是针对Os018989-4003和OsE2F1均用作饵而鉴别的。

酵母双杂交筛选中使用的饵片段编码OsE2F1的第100-250位氨基酸。

发现OsE2F1与Os018989-4003相互作用，Os018989-4003是包括转录因子E2F/二聚化配偶体(TDP)签名(氨基酸100-294，3.2e^-17)存在的一个294个氨基酸的蛋白质。E2F转录因子与DP蛋白形成异源二聚体；所得E2F/DP转录复合物作为细胞周期行进所需的基因的转录激活物(Wu etal.，1995)。E2F/DP复合物的活性通过与成视网膜细胞瘤蛋白(pRB)家族如pRB，p107和p130的负调节物相关及与其它细胞蛋白包括细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)相关而正常调节。Wu et al.，1995还论证了不同E2F/DP复合物对pRB或p107的结合特异性是由E2F亚基介导的。在符合存在TDP签名的情况中，针对Genpept数据库的Os018989-4003的氨基酸序列的BLAST分析表明这个蛋白质与小麦属DP蛋白呈现62.5％相同性(GENBANK_登录号CAC19034，62.5％，e^-91)。这些分析因此表明Os018989-4003是水稻DP同系物。

Os018989-4003也在酵母双杂交筛选中也用作饵。其相互作用示于表2并在这个实施例稍后论述。

还发现OsE2F1与新的蛋白质OsPN26539相互作用。对猎物克隆OsPN26539的核苷酸序列进行的BLAST分析鉴别了潜在编码水稻染色体10克隆nbxb0046P18A上的新蛋白PN26539的基因(GENBANK_登录号26539)。对OsPN26539的346个氨基酸的序列进行的BLAST分析表明这个蛋白质与均来自拟南芥的推定的蛋白质(GENBANK_登录号NP_568116.1，61％相同性，2e^-103)，转录因子样蛋白(GENBANK_登录号T48364，56％相同性，6e^-96)，及DP样蛋白(GENBANK_登录号CAC15483，53％相同性，e^-55)相似。DP样蛋白是AtDPa，是由Magyar etal.，2000在拟南芥中鉴别的两种独特的DP相关蛋白质(AtDPa和AtDPb)之一。这些作者指出AtDPa和AtDPb在体外与通过相同组鉴别的拟南芥E2F相关蛋白AtE2Fa和AtE2Fb异源二聚化。他们还发现AtDPa和AtE2Fa基因以细胞周期依赖性方式转录，主要在活性分裂的细胞中产生，在早期S期细胞中具有最高的转录水平。因此新的蛋白质OsPN26539很可能是水稻DP转录因子。

也发现OsE2F1与新的蛋白质OsPN29946相互作用。对OsPN29946的614个氨基酸的序列进行BLAST分析表明这个蛋白质与来自拟南芥的驱动蛋白样蛋白相似(GENBANK_登录号BAB11329.1，70.9％相同性，e＝0.0)。驱动蛋白是分子动力器(motor)，是水解ATP并使用由此产生的能量以产生动力的分子。分子动力器参与不同的细胞功能如小泡和细胞器转运，细胞骨架动力学，形态发生，极性生长，细胞运动，纺锤体形成，染色体运动，核融合，及信号转导。已经鉴定了非植物分子动力器的三个家族(驱动蛋白，动力蛋白，和肌球蛋白)。驱动蛋白和动力蛋白使用微管，而肌球蛋白使用肌动蛋白丝作为轨道(track)以在细胞内转运材料。尽管关于植物分子动力器及其在细胞分裂、细胞扩展、胞质流动、细胞与细胞通讯、膜运输及形态发生中的作用了解还很少，但在拟南芥中已经鉴别了大量(大约40种)驱动蛋白和肌球蛋白动力器。认为钙通过钙结合蛋白钙调蛋白在调节植物中基于微管和肌动蛋白的动力器的功能中起作用(分子动力器参见Reddy，2001所述)。驱动蛋白样钙调蛋白(CaM)结合蛋白(KCBP)，这是只有植物才有的负极定向的(minusend-directed)微管动力蛋白，参与细胞分裂。在核包膜破坏期间及分裂后期，激活的KCBP通过微管滑行和集束促进汇聚的双极纺锤体形成，而KCBP活性在分裂中期和末期由Ca²⁺和CaM下调(Vos et al.，2000)。猎物蛋白OsPN29946是一种驱动蛋白样蛋白，很可能参与微管运动及其与OsE2F1相关，提示这种相互作用可代表控制细胞周期依赖性事件包括细胞骨架组织化的一个步骤。

还发现OsE2F1与新的蛋白质OsPN30852相互作用。对OsPN30852的86个氨基酸的序列进行BLAST分析表明这个蛋白质与来自拟南芥的未知蛋白质相似(GENBANK_登录号AAK48957.1，80％相同性，4e^-31)。植物中基因表达的分析表明这个基因由刺激及脱落酸和茉莉酮酸(JA)上调。

使用Os018989-4003作为饵的双杂交系统

与小麦属DP蛋白类似的假设蛋白质Os018989-4003在双杂交分析中用作饵。这个蛋白质在这个实施例中先前被描述为OsE2F1的相互作用子。筛选中所用的饵克隆编码Os018989-4003的第90-220位氨基酸。

发现编码Os18989-4003的第90-220位氨基酸的饵片段与OsE2F1相互作用(见上述)。Os018989-4003与OsE2F1的相互作用证实了在这个实施例中先前描述的反向饵与猎物作用中相同蛋白质之间的相互作用。

也发现Os18989-4003与OsE2F2相互作用。OsE2F2是一个具有393个氨基酸的蛋白质，其包括一个转录因子E2F/二聚化配偶体(TDP；第74-300位氨基酸)。BLAST分析表明这个蛋白质是E2F转录因子家族的一个成员水稻E2F同系物(GENBANK_登录号BAB20933，100％相同性，e＝0.0)。E2F转录因子家族成员本文已经描述。OsE2F2是从两个可变剪接的mRNA物种之一翻译的(在这个研究中鉴别)，与其它的E2F家族成员相似，其很可能调节在水稻中编码参与细胞周期行进的蛋白质的基因转录。

OsE2F2的剪接变体，OsE2F2(367)，具有一个367个氨基酸的序列，其包括一个推定的转录因子E2F/二聚化配偶体(TDP；第84-310位氨基酸，e^-39推定值)。对其氨基酸序列进行BLAST分析确定其是水稻E2F同系物(GENBANK_登录号BAB20933，100％相同性，e＝0.0)。OsE2F2(367)在这个研究中也用作饵，并发现其与如下的两种DP蛋白相互作用(这些相互作用示于表3)：

a)假设蛋白018989-4003(Os018989-4003，上述)，其与小麦属DP蛋白相似。OsE2F2(367)-Os018989-4003相互作用证实了称为018989-4003的相同DP蛋白质和OsE2F2之间的相互作用。

b)蛋白质PN31182(OsPN31182)，其与拟南芥DP样蛋白相似。OsPN31182是具有379个氨基酸的一种新蛋白质。BLAST分析表明OsPN31182的氨基酸序列与拟南芥推定蛋白质(最高匹配(top hit)，GENBANK_登录号NP_568116.1，70％相同性，5e^-108)及DP样蛋白(第三匹配(third hit)，GENBANK_登录号CAC15483.1，50％相同性，9e^-55)，及来自其它生物体的DP样蛋白的序列相似。OsPN31182因此是一种新的水稻DP蛋白。

DP蛋白与E2F转录因子异源二聚化以调节编码对细胞周期行进重要的蛋白质的基因的转录。这个观点与本发明鉴别的水稻E2F同系物OsE2F2(367)与DP样蛋白Os018989-4003和OsPN31182之间的相互作用一致。很可能这些相互作用参与水稻中细胞周期行进。

还发现Os18989-4003与OsAAG13527相互作用，OsAAG13527是一个具有859个氨基酸的蛋白质，经BLAST分析确定是水稻驱动蛋白样蛋白(GENBANK_登录号AAG13527.1，100％相同性，e＝0.0)。驱动蛋白是在不同的细胞事件期间与微管运动相关的分子动力器，并在本发明已经描述。

还发现Os18989-4003与推定的肌球蛋白重链蛋白OsAAK72891相互作用。对OsAAK72891氨基酸序列进行BLAST分析确定这个蛋白质是水稻推定的肌球蛋白重链(GENBANK_登录号AAK72891.1，100％相同性，e＝0.0)。

肌球蛋白家族成员在所有真核细胞中参与许多类型的细胞运动。肌球蛋白是细胞骨架蛋白，其具有分子动力器功能以在多种细胞活动中在与肌动蛋白丝的ATP依赖性相互作用中产生运动和机械力。肌球蛋白超家族基于其保守的ATP酶和肌动蛋白结合区被分为至少14类(称为I-XIV)，每个含有肌球蛋白的尾部结构域确认负责这些动力器的特异性亚细胞定位和功能(参见Reichelt et al.，1999所述)。分子动力器参与不同的细胞功能，如小泡和细胞器转运，细胞骨架动力学，形态发生，极性生长，细胞运动，纺锤体形成，染色体运动，核融合，及信号转导(分子动力器参见Reddy，2001所述)。动物和单细胞生物体中肌球蛋白在肌收缩、胞质分裂及膜相关功能如小泡转运和膜动力学中的作用已经确定，但关于植物中肌球蛋白及其它分子动力器及其在细胞分裂，细胞扩展，胞质流动，细胞与细胞之间通讯，膜运输及形态发生的了解还很少(Reddy，2001)。

认为高等植物中的肌球蛋白在与胞质流动相关的细胞器和小泡的胞内转运中及花粉管的尖端生长的细胞中参与作为动力器(参见Yokota etal.，1999b)。肌球蛋白重链沿着肌动蛋白丝的主动滑行提供了胞质流动的动力(即在植物细胞中观测到的胞质和悬浮的细胞器，膜系统及分子的恒定运动)，肌球蛋白活性是由钙通过钙结合蛋白钙调蛋白调节的(Yokota etal.，1999a；Yokota et al.，1999b)。尽管认为胞质流动促进细胞内及细胞与其环境之间的物质交换，但胞质流动的功能及其生物化学调节机制还未知。还已知一些细胞器的特异性运动和固着依赖于肌动蛋白丝并因此认为包括肌球蛋白，但这些机制还未论证(肌球蛋白在Buchanan et al.，2002，第221页论述)。另外，Reichelt et al.，1999揭示植物肌球蛋白VIII定位在细胞动力学后(post-cytokinetic)的细胞壁，提示这个蛋白质在胞质分裂，特别是在细胞板成熟和胞质肌动蛋白索在细胞间通讯的部位重建中的作用。基于现有对植物肌球蛋白的了解，水稻重链肌球蛋白OsAAK72891可以是细胞骨架成分，以细胞周期依赖性方式参与胞质流动活动。

还发现Os18989-4003与OsMADS14(GENBANK_登录号AF058697)相互作用，OsMADS14是一个具有246个氨基酸的蛋白质，其包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)。 Moon et al.报道了OsMADS14与玉米AP1同系物ZAP1同源，并将其分类为MADS盒基因的AP1/AGL9家族的SQUAMOSA样(SQUA)亚家族(subfamily)的成员，其控制发育中的花中分生组织和器官相同性的特化(Moon et al.，1999)。OsMADS14从花发育的早期至晚期表达，转录物在空稃，内稃/外稃，雄蕊，成熟花的心皮中可检测。 Moon et al.基于他们观测到异位表达OsMADS14的转基因植物呈现非常早期的开花和矮态，提示这个基因调节非常早期的花发育(Moon et al.，1999)。已知MADS盒蛋白调节异源二聚体或者包括其它MADS盒蛋白的三元复合物的转录，认为这些相互作用是通过MADS蛋白中存在的K盒发生的(Lim et al.，2000，Moon etal.，1999)。

因为已知MADS盒蛋白作为异源二聚体或三聚体介导多种植物发育过程，而且示出DP蛋白Os018989-4003参与调节细胞周期行进所需的基因，因此很可能MADS盒蛋白OsMADS14与Os018989-4003之间的相互作用代表新鉴别的相互作用，其调节与水稻中植物发育相关的基因转录。

还发现OsMADS 14与MADS盒蛋白OsMADS45(GENBANK_登录号AAB50180；见表4)相互作用。OsMADS45是一个249个氨基酸的蛋白质，其包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)和两个卷曲螺旋(第83-117位氨基酸和第152-176位氨基酸)；卷曲螺旋很可能是推定在第73-176位氨基酸之间的K盒的一部分。由Greco et al.，1997鉴别的OsMADS45基因编码与拟南芥AGL2和AGL4 MADS盒基因的产物高度同源的一种蛋白质。时间和空间RNA表达模式提示水稻OsMADS45及拟南芥AGL2和AGL4在花发育中起相似作用(Greco et al.，1997)，特别是在所有花器官的发育中通过作为分生组织相同性和器官相同性基因之间的中间物起作用(Savidge et al.，1995)。

将OsMADS45的核苷酸序列与TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库进行对比的BLAST分析鉴别了probeset OS014912_f_at(6e^-64期望值)与probeset OS000555_f_at(6e^-60)是最相近的匹配。基因分析表明这些基因在种子发育中早期表达。

还发现Os18989-4003与OsPN22824相互作用，OsPN22824是一个具有500个氨基酸的蛋白质片段。OsPN22824氨基酸序列的BLAST分析表明与Genpept数据库中的任何蛋白质均无高度相似性。最相似的氨基酸序列是未知功能的6个植物蛋白，最高匹配是拟南芥表达的蛋白质(GENBANK_登录号NP_564015.1，33％相同性，5e^-45)，及拟南芥肌球蛋白重链样(第七匹配，GENBANK_登录号BAA97502，29％相同性，e^-016)。与这些结果一致，Myriad’s数据库中最相似的蛋白质是人肌球蛋白，重链IIx/d，骨骼肌(MyHC-Iix/d；23％相同性，e＝0.004)。

还发现OsPN22824与水稻小GTP-结合蛋白RACDP(OsRACD；GENBANK_登录号AAF28764；见表5)相互作用。OsRACD是具有197个氨基酸的蛋白质，其包括一个ATP/GTP结合位点基序A(P-环，第13-20位氨基酸)和一个异戊二烯基结合位点(CAAX盒，第194-197位氨基酸)。通过SMART分析氨基酸序列鉴别了一个Rho(Ras同源)签名(第9-180位氨基酸，6e^-116)，而通过Pfam分析表明几乎相同的区域是Ras家族签名(第8-197位氨基酸，2.3e^-78)。这些推测表明OsRACD是Ras样小GTP酶的Rho亚家族的成员。GTP水解为GDP是许多胞内信号转导途径中的一个重要步骤，控制多种细胞过程如细胞生长和发育，编程性细胞死亡，脂质代谢，细胞结构，膜运输，和转录调节(Aznar & Lacal，2001)。对水稻OsRACD蛋白还未加以描述，然而，Rho亚家族的其它成员已经鉴定。Cdc42，Rac和Rho同种型调节肌动蛋白细胞骨架应答胞外信号的装配和解体(Tapon & Hall，1997)。植物小GTP酶Rac同系物是与疾病抗性相关的氧化爆发(oxidative burst)的成分(Ono et al.，2001；Dwyer et al.，1996)。OsRACD是一种水稻GTP酶，其很可能参与信号转导包括GTP水解，及其与肌球蛋白样蛋白OsPN22824的相关提示这种GTP酶活性发生在与肌动蛋白细胞骨架组织化作为植物发育和/或应答病原体入侵的一部分的相关活动期间。

小结

OsE2F1与四种新的水稻蛋白相互作用，其中两种是DP样蛋白(Os018989-4003和OsPN26539)。另外，DP猎物蛋白Os018989-4003与E2F2同系物剪接变体OsE2F2(367)相互作用，当其用作饵时与水稻OsE2F1和OsE2F2同系物相互作用。OsE2F2(367)还与另一种新的DP样蛋白OsPN31182相互作用。与水稻中E2F蛋白相互作用的这些新的DP蛋白的鉴别与植物中存在先前鉴别的E2F和DP同系物一致(参见Kosugi&Ohashi，2002)。植物E2F和DP蛋白呈现与动物E2F转录因子相似的结合活性，其与DP或其它E2F样蛋白形成异源二聚体复合物起作用(参见Trimarchi & Lees，2002；Magyar et al.，2000)。水稻E2F与这个实施例中鉴别的DP同系物之间的关联与E2F/DP转录因子的亚基组分一致，并进一步提供了植物E2F样基因与其哺乳动物同系物功能等价的迹象。很可能这些相互作用参与水稻中细胞周期行进。

动物E2F/DP转录因子在控制G1/S过渡中起关键作用，通过用转录设备整合细胞周期的重要调节物的活性而进行。认为植物中G1/S控制点至少部分受到与在动物中发现相似的分子的调节，如D型细胞周期蛋白，RB相关蛋白，及E2F样蛋白(参见Magyar et al.，2000)。先于S期的G1期是强烈的生物化学活性的一个时期，其中细胞扩展，大小增倍，并合成分子和结构，包括微管及其它细胞骨架结构，为细胞分裂作准备。G1的结束是控制细胞周期行进的一个重要关卡(checkpoint)，在此控制系统使周期停滞或者触发S期开始(植物细胞周期见Raven et al.，1999所述)。发现OsE2F1和DP蛋白Os018989-4003与一些细胞骨架结构蛋白相互作用，这个发现支持了水稻E2F/DP转录因子在控制细胞周期行进相关的控制活动中起作用的观点。这些相互作用子有两个是驱动蛋白样蛋白：新的水稻驱动蛋白样蛋白(OsPN29946，OsE2F1的相互作用子)和公开注解的水稻驱动蛋白样蛋白(OsAAG13527，Os01 8989-4003的相互作用子)。

与DP蛋白Os018989-4003相互作用的两种额外的细胞骨架成分是肌球蛋白重链蛋白：推定的肌球蛋白重链(OsAAK72891)和一种新的水稻肌球蛋白重链样蛋白(OsPN22824)。驱动蛋白和肌球蛋白是分子动力器，其使用微管(在驱动蛋白情况中)或肌动蛋白丝(在肌球蛋白情况中)作为细胞骨架轨道以在细胞内转运货物。分子动力器，包括驱动蛋白，肌球蛋白和动力蛋白，已经在非植物生物体中充分鉴定并参与多种细胞功能，如小泡和细胞器转运，细胞骨架动力学，形态发生，极性生长，细胞运动，纺锤体形成，染色体运动，核融合，及信号转导。相反，在植物中鉴别的许多驱动蛋白和肌球蛋白的作用在很大程度上还未知(分子动力器参见Reddy，2001所述)。一些研究提示高等植物中肌球蛋白重链参与与胞质流动相关的细胞器和小泡的细胞内转运(沿着肌动蛋白丝)和花粉管的顶端生长细胞(参见Yokota et al.，1999b所述)。一种非传统类别VIII植物肌球蛋白在胞质分裂期参与细胞板的成熟(Reichelt et al.，1999)。然而，仍未阐明细胞分裂，细胞扩展，胞质流动，细胞与细胞间通讯，膜运输及形态发生中植物动力器的功能和调节(Reddy，2001)。基于与动物和植物E2F蛋白的功能同源(已知其参与调节G1/S过渡期)，看起来水稻OsE2F1和DP蛋白Os018989-4003与在此鉴别的驱动蛋白样和肌球蛋白样猎物蛋白的相互作用代表了在G1/S过渡期细胞周期依赖性活动，包括细胞骨架组织化/功能化及可能发生的转录调节。

植物中的细胞周期调节物必须使得对细胞周期阶段的控制与那些影响植物生长和发育的有关环境和发育因素相关联。与这个观点一致，DP蛋白Os018989-4003与已知调节植物发育的蛋白质MADS盒蛋白MADS14(OsMADS14)相互作用，其又与MADS盒蛋白OsMADS45相互作用。MADS盒蛋白介导多种植物发育过程，而且与其它转录因子相似，其作为异源二聚体或三元复合物起作用(参见Riechmann & Meyerowitz，1997；Moon et al.，1999；Theissen et al.，2000所述)。就MADS盒蛋白鉴别的另外的相互作用在下文实施例IV中论述。MADS盒基因的产物彼此相互作用及与参与多种植物发育过程的遗传控制的其它基因产物相互作用，调节这个网络内不同基因/组基因之间的相互作用(激活，抑制)。同样，E2F样蛋白作为异源二聚体复合物调节转录，其活性通过与其它细胞蛋白相互作用调节(Trimarchi & Lees，2002；Kosugi&Ohashi，2002)。假设DP蛋白Os018989-4003参与调节细胞周期行进所需的基因，很可能DP蛋白Os018989-4003，可能与OsE2F1或OsE2F2形成异源二聚体和MADS盒蛋白OsMADS14之间的相互作用，在水稻中以细胞周期依赖性方式参与植物发育中重要的基因的转录调节，这些发育过程可在细胞周期的G1/S期发生。

就E2F1鉴别的第四种相互作用子是未知功能的一种蛋白质(OsPN30852)。然而，基于其与水稻E2F1的关联及基于后者在调节细胞周期行进中的作用，可能OsPN30852参与细胞周期调节。

发现与水稻E2F和DP同系物OsE2F1和Os018989-4003相互作用的水稻蛋白看起来参与细胞周期/植物发育的调节。这些相互作用子有一些是新鉴定的水稻蛋白，其与OsE2F1和Os018989-4003的相互作用代表先前未描述的水稻中E2F介导的细胞周期的转录调节的分子机制。

实施例II

这个实施例提供了通过酵母双杂交分析鉴别的与水稻细胞周期蛋白OsS49462和细胞周期蛋白OsCYCOS2相互作用的新鉴定的水稻蛋白。

如实施例I所述，细胞周期蛋白是激活细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)所需的调节蛋白。细胞周期蛋白分为两组：有丝分裂细胞周期蛋白，其包括A型和B型细胞周期蛋白(也分别称为S和M细胞周期蛋白)，这是在G2/M(有丝分裂)过渡期控制细胞周期必需的；及G1细胞周期蛋白，包括D型和E型细胞周期蛋白，这是在G1/S(起始)过渡期控制细胞周期所必需的。G2/M细胞周期蛋白在G2期间稳定积聚并被突然破坏，此时细胞退出有丝分裂(在M期结束时)。

B型细胞周期蛋白含有一个大的保守中心结构域，与激酶亚基相互作用的细胞周期蛋白盒，及一个称为有丝分裂破坏盒的结构域，其在有丝分裂晚期介导细胞周期蛋白降解。B型细胞周期蛋白在细胞周期的晚G2期和早M期特异性表达。它们在植物发育期间调节细胞周期从G2期行进至有丝分裂，Myb型转录因子可参与这个调节(参见Doonan et al.，1997所述)。水稻植物的B型细胞周期蛋白在G2期间稳定积聚，然后在有丝分裂期迅速降解(Umeda et al.，1999)。B型细胞周期蛋白OsS49462和OsCYCOS2在氨基酸水平呈现75.1％序列相同性，并且均由1.6kb的mRNA编码，如Sauter et al.，1995所报道。OsCYCOS2的表达是由深水水稻(Oryza sativa L.)节间(intermode)的居间分生组织中的植物激素赤霉素(GA)诱导的，并且OsCYCOS2诱导的时程与这两种细胞周期蛋白在调节G2/M期过渡中的作用一致(Sauter et al.，1995)。GA在这个植物亚种中促进快速节间生长，这种生长在G2/M过渡期通过细胞周期诱导所需的信号化活动而发生。因此，GA促进p34cdc2/CDC28-样组蛋白H1蛋白激酶的活性，这是已知调节有丝分裂的一种酶，而且这种蛋白激酶活性的增加是由OSCYCOS2介导的。细胞周期蛋白在居间分生组织及节间的伸长区中表达，但是GA诱导的转录水平增加仅受到分生组织的限制(Sauter et al.，1995)。

因此，OsS49462和OsCYCOS2是B型有丝分裂细胞周期蛋白，调节细胞周期从G2期行进至有丝分裂。在这个实施例中鉴别的蛋白质相互作用包括OsS49462和OsCYCOS2用于阐明植物中细胞周期调节的机制。参与水稻中细胞周期调节的蛋白质可作为进行遗传操纵或化合物处理的靶以修饰其水平或活性，从而调节植物细胞周期。编码这些蛋白质的基因的鉴别使得可以对农作物进行遗传操纵或应用化合物达到植物发育或生长中希望的农业学改变。

结果

发现细胞周期蛋白OsS49462与未知功能的水稻假设蛋白(OsPN25358)及与四种新的水稻蛋白相互作用：一种推定的RNA-结合蛋白(OsPN30848)及一种锌指蛋白(OsPN29942)，一种肌球蛋白样蛋白(OsPN23484)及一种未知的蛋白质(OsPN29957)。这些蛋白质有两种(OsPN23484和OsPN29942)还与第二种饵细胞周期蛋白OsCYCOS2相互作用。

发现细胞周期蛋白OsCYCOS2与7种已知的水稻蛋白和18种新的水稻蛋白相互作用。已知的相互作用子包括一种推定的CCAAT置换蛋白，其作为转录调节物的功能是细胞周期依赖性的(PN26210)；一种推定的肌球蛋白重链，这是可能作为分子动力器以在与细胞极性或胞质分裂相关的活动中运动肌动蛋白丝的一种细胞骨架蛋白(PN23297)；一种叶绿体ATP酶I亚基(PN23416)；一种突触融合蛋白相关蛋白(PN23136)；一种热激蛋白(PN23169)；一种cora样Mg转运蛋白(PN25381)及一种未知功能的假设蛋白(PN23363)。在一些新的相互作用子中鉴别了在细胞骨架功能中具有推定作用的一些蛋白质：四种推定的肌球蛋白重链蛋白(PN23484，PN20815，OsPN29882，和OsPN29966)；两种驱动蛋白样蛋白，其在细胞分裂期间具有推定的微管动力器功能(钙调蛋白结合蛋白OsPN23390和着丝粒/动粒蛋白OsPN29965)；一种血影蛋白样蛋白，其具有假设的肌动蛋白结合功能/核基质蛋白(OsPN29956)；一种推定的Mg转运蛋白(OsPN29970)，一种着丝粒同系物(PN29958)和一种锌指蛋白(PN29942)。其它新的相互作用子包括与拟南芥含有ARM重复的蛋白质相似的一种蛋白质，在细胞粘附和/或信号化中可能起作用(OsPN23274)；一种侣伴热激蛋白(PN30899)；及未知功能的六种蛋白质(OsPN29961，OsPN29969，OsPN26688，OsPN29967，OsPN29968，OsPN30854)，其中两种(OsPN23484和OsPN29942)还与细胞周期蛋白OsS49462饵相互作用。

这个实施例中的相互作用蛋白列于下表6和表7，随后是每个蛋白质的详细信息和相互作用意义的讨论。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO：15-53和209-221中提供。

一些鉴别的蛋白质代表先前未鉴定的水稻蛋白质。基于其推定的生物学功能及基于猎物蛋白与细胞周期蛋白OsS49462和细胞周期蛋白OsCYCOS2特异性相互作用的能力，相互作用蛋白很可能是参与细胞周期蛋白介导的调节细胞周期的蛋白质网络的一部分。

表6

针对OsS49462鉴别的相互作用蛋白(细胞周期蛋白OsS49462，片段)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质的克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标(coordinate，Coord)是分别由查询中所用的饵片段及相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsS49462 PN20325(6331703-OS002997)(SEQ ID NO：206)	水稻细胞周期蛋白OsS49462，片段(X82035)	1-24350-150100-243
				相互作用子
PN2535813786464(SEQ ID NO：208)	假设蛋白AAK39589	1-100	2x303-472(输出性状)
				OsPN23484新的(CONTIG1447_FASTA.CONTIG1)(SEQ ID NO：16)	新的蛋白质PN23484，重酶解肌球蛋白	1-100	111-194(输出性状)

OsPN29942新的(SEQ ID NO：18)	新的蛋白质PN29942，片段，锌指蛋白	1-100	11-182(输出性状)
				OsPN29957新的(SEQ ID NO：20)	新的蛋白质PN29957，片段，未知	1-100	2x51-28828-214(输出性状)
OsPN30848新的(SEQ ID NO：22)	新的蛋白质PN30848，片段，RNA结合蛋白	1-100	365-476(输入性状)

表7：针对OsCYCOS2鉴别的相互作用蛋白(水稻细胞周期蛋白 OsCYCOS2)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质的克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由查询中所用的饵片段及相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsCYCOS2PN20257(1694891-OS003088(SEQ ID NO：210)	水稻细胞周期蛋白OsCYCOS2(X82036)	1-150100-275140-350300-4201-420
				相互作用子

PN30899417154(SEQ ID NO：24)	假设蛋白000221-3976，与OsHP82相似，片段	50-233	4-228(输出性状)
				PN29970(SEQ ID NO：26)	推定的CorA样Mg2+转运蛋白	50-233	1-158(输出性状)
PN2336313324791(SEQ ID NO：212)	水稻假设蛋白13324791	50-233	50-148(输入性状)
				PN2621013702813(SEQ ID NO：214)	水稻推定的CCAAT置换蛋白	170-310	422-6462x364-613(输出性状)
15451591PN23297(SEQ ID NO：216)	水稻推定的肌球蛋白重链	50-233	980-1160(输入性状)
				PN2341611466783(SEQ ID NO：218)	叶绿体ATP酶I亚基	50-233	130-176(输入性状)
PN231365922624(SEQ ID NO：220)	假设蛋白BAA85200，与突触融合蛋白相关蛋白AtVam3p相似	50-233	66-191(输出性状)
				PN20815新的(3210-OS_ORF019753)(SEQ ID NO：28)	假设蛋白PN20815，与拟南芥肌球蛋白重链相似，片段	170-310	1-134(输出性状)

OsPN23274新的(CONTIG697.FASTA.CONTIG2/CONTIG697.FASTA.CONTIG1)(SEQ ID NO：30)	新的蛋白质PN23274，与拟南芥含有ARM重复的蛋白相似	50-233	6x79-210(输入性状)
				OsPN23390新的(SEQ ID NO：32)	新的蛋白质PN23390，推定的驱动蛋白样钙调蛋白结合蛋白，片段	50-233	595-845576-738(输出性状)
OsPN23484新的(CONTIG1447.FASTA.CONTIG1)(SEQ ID NO：16)	新的蛋白质PN23484，重酶解肌球蛋白	170-310	77-2332x64-21290-245(输出性状)
				OsPN26688新的(CONTIG3772.FASTA.CONTIG1)(SEQ ID NO：34)	新的蛋白质PN26688，未知	50-233	132-225(输入性状)
OsPN29882新的(SEQ ID NO：36)	新的蛋白质PN29882，片段，肌球蛋白重链	50-233	107-273(输出性状)
				OsPN29942新的(CONTIG3164.FASTA.CONTIG1)(SEQ ID NO：18)	新的蛋白质PN29942，片段，锌指蛋白	170-310	1-159(输出性状)

OsPN29956新的(SEQ ID NO：38)	新的蛋白质PN29956，片段，核基质组分	50-233	2x96-2352-373(输出性状)
				OsPN29958新的(SEQ ID NO：40)	新的蛋白质PN29958，片段，着丝粒同系物	50-233	3-304(输出性状)
OsPN29961新的(SEQ ID NO：42)	新的蛋白质PN29961，片段，与拟南芥未知蛋白BAB02349相似	50-233	10-215(输出性状)
				OsPN29965新的(SEQ ID NO：44)	新的蛋白质PN29965，片段，与拟南芥驱动蛋白(着丝粒蛋白)样重链蛋白BAB03114相似	50-233	12-124(输出性状)
OsPN29966新的(SEQ ID NO：46)	新的蛋白质PN29966，片段，肌球蛋白重链	50-233	8-216(输出性状)
				OsPN29967新的(SEQ ID NO：48)	新的蛋白质PN29967，片段，未知	50-233	3x16-174(输出性状)
OsPN29968新的(SEQ ID NO：50)	新的蛋白质PN29968，与拟南芥未知蛋白BAB01990相似	50-233	12-113(输出性状)
				OsPN29969新的(SEQ ID NO：52)	新的蛋白质PN29969，类似于拟南芥未知蛋白BAB01990	50-233	2x16-123(输出性状)

OsPN2538113357265(SEQ ID NO：222)	蛋白质13357265推定的CorA-样Mg2+转运蛋白	50-233	30-218(输出性状)
				OsPN30854新的(CONTIG962.FASTA.CONTIG1)(SEQ ID NO：54)	新的蛋白质PN30854，未知	170-310	100-169(输出性状)
OsPN30899新的(SEQ ID NO：24)	新的蛋白质PN30899，DNAJ	50-233	4-228(输出性状)

使用OsS49462作为饵的双杂交系统

饵OsS49462(GENBANK_登录号X82035；Sauter et al.，1995)是具有242个氨基酸的一种蛋白质，通过氨基酸序列分析确定其含有细胞周期蛋白，N-末端结构域(第1-105位氨基酸，7.1e^-49)和细胞周期蛋白C末端结构域(第107-227位氨基酸，e^-50)。与OsCYCOS2(在这个实施例中作为饵描述的)相似，OsS49462是一种水稻B型细胞周期蛋白。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OSS49462的核苷酸序列的BLAST分析鉴别了probeset OS002997.1_s_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的植物激素而特异性诱导的。

发现编码OsS49462(其含有细胞周期蛋白，N末端结构域)的第1-100位氨基酸的饵蛋白与假设蛋白AAK39589(PN25358)相互作用。编码PN25358的第303-472位氨基酸的两个猎物克隆从输出性状文库中挽回。氨基酸序列分析确定PN25358是具有472个氨基酸的一种蛋白质，其包括一个跨膜结构域(第403-419位氨基酸)。针对Genpept数据库进行的BLAST分析确定其与水稻未知蛋白(GENBANK_登录号AAK39589，e＝0)及与拟南芥推定的蛋白质(GENBANK_登录号NP_199010.1，64％相同性，7e^-161)相似。针对Myriad’s专有数据库对PN25358氨基酸序列进行BLAST分析发现与这个蛋白质无显著相似性。由于PN25358与OsS49462相互作用，因此其也许参与细胞周期调节。

还发现编码OsS49462的第1-100位氨基酸的饵蛋白与新的蛋白质OsPN23484相互作用。(编码OsPN23484的第111-194位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库中挽回)BLAST分析提示PN23484是一种重酶解肌球蛋白。新的蛋白质OsPN23484还与饵OsCYCOS2(在这个实施例下文描述)相互作用。这个观测确认了OsS49462-OsPN23484相互作用并提示OsPN23484在细胞周期蛋白调节中起主要作用，并因此控制细胞周期行进。

还发现编码OsS49462的第1-100位氨基酸的饵蛋白与新的蛋白质OsPN29942的片段相互作用(编码第11-182位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库中挽回)。OsPN29942是完整的氨基酸序列未知的一种蛋白质。对可获得的183个氨基酸进行分析鉴别了一个BTB/POZ结构域(第1-85位氨基酸)。这个结构域最初在锌指蛋白的N末端发现，并从果蝇至哺乳动物是进化保守的(Zollman，et al.，1994)。这个区域可影响锌指蛋白的DNA结合活性(Bradwell et al.，1994)。针对Genpept数据库的BLAST分析表明OsPN29942与来自拟南芥的未知蛋白具有62％相同性(GENBANK_登录号AAF00643，5e^-53)。

OsPN29942还与饵OsCYCOS2相互作用，如这个实施例后文所述。这个观测确认了OsS49462-OsPN29942相互作用并提示OsPN29942在细胞周期蛋白的调节中起主要作用，并因此控制细胞周期行进。

还发现编码OsS49462的第1-100位氨基酸的饵蛋白与OsPN29957相互作用。三个猎物克隆，编码OsPN29957的第51-288位氨基酸的两个克隆及编码第28-214位氨基酸的一个克隆，从输出性状文库中挽回。OsPN29957是其完整氨基酸序列还未知的一种蛋白质。基于可获得的328个氨基酸进行分析。针对Genpept数据库进行的BLAST分析表明OsPN29957与拟南芥未知蛋白具有69％相同性(GENBANK_登录号NP_175186，e^-22)。可利用的信息难以确定OsPN29957的功能。完整氨基酸序列的揭示很可能阐明这个蛋白质的生物学作用及其与OsS49462的相互作用。

还发现编码OsS49462的第1-100位氨基酸的饵蛋白与PN30848相互作用(编码OsPN30848的第365-476位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库中挽回)。OsPN30848是其完整氨基酸序列还未知的一种蛋白质。对可获得的497个氨基酸进行分析鉴别了两个推定的RNA结合区(第162-169位氨基酸和第243-250位氨基酸)。针对Genpept数据库进行的BLAST分析表明OsPN30848与两个拟南芥推定的RNA结合蛋白(GENBANK_登录号NP_190834，2e^-97和GENBANK_登录号AAK32943，e^-94)及另一个拟南芥蛋白具有50％相同性，所述另一个拟南芥蛋白与核仁蛋白相似(GENBANK_登录号AAB62861，46％相同性，5e^-89)。核仁蛋白对核糖体生物发生很重要并具有RNA结合活性。OsPN30848与核仁蛋白的相似性提示与OsPN30848相似的作用。OsPN30848与OsS49462的相互作用通过调节这种活性可改变细胞周期行进。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN30848的核苷酸序列的BLAST分析鉴别了probesetOS_ORF013388_at(e^-108期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

使用OsCYCOS2作为饵的双杂交系统

具有419个氨基酸的蛋白质OsCYCOS2(GENBANK_登录号X82036；Sauter et al.，1995)是一种G2/M型细胞周期蛋白。OsCYCOS2氨基酸序列分析鉴别了跨越第200-284氨基酸(2.7e.-²⁶)和第297-379位氨基酸(1.29e^-22)的两个细胞周期蛋白结构域。G2/M型细胞周期蛋白在植物发育期间调节细胞周期从G2行进至有丝分裂。这些蛋白质的作用在这个实施例的前文关于饵OsS49462已经加以论述。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsCYCOS2的核苷酸序列的BLAST分析鉴别了probeset OS003088.1_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在圆锥花序中特异性表达。

发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵与假设蛋白00221-3976的一个片段(PN30899)相互作用。编码PN30899的第4-228位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库中挽回。BLAST分析表明PN30899最可能是热激(侣伴)蛋白(水稻蛋白417154 HSP82)。已经描述了热激蛋白(HSP)在植物刺激应答中的一种主要作用，这些蛋白质中有一些仅基于序列同源而被称为HSP，其在植物中的功能还未在体外论证。一些HSP确实在整个发育时期表达。HSP作为分子侣伴蛋白，促进正确的蛋白质折叠并可具有与刺激应答不相关的作用。例如，HSP70蛋白是正常细胞功能所必需的。它们是ATP依赖性分子侣伴，可与许多不同的蛋白质相互作用，在蛋白质折叠，伸展，装配，及解体中起作用。这些主题在Buchanan et al.，2002中论述。已经提出海胆细胞中的热激蛋白HSP70当定位于中心体时在微管蛋白折叠中具有侣伴作用，当定位于纺锤体和星体纤维时在有丝分裂器的装配和解体中具有侣伴作用(Agueliet al.，2001)。

PN30899也与同源框蛋白HOS59，片段(OsHOS59；见实施例IV)相互作用。含有同源框结构域的大多数蛋白质已知是序列特异性DNA结合转录因子，其中一些在发育中具有重要作用。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN30899的核苷酸序列的BLAST分析鉴别了probeset OS000221_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵与推定的类Cor-A样Mg²⁺转运蛋白，PN29970相互作用。编码PN29970的第1-158位氨基酸的一个猎物克隆是从输出性状文库挽回的。组成型表达的CorA蛋白是细菌和古细菌(Archaea)的主要的镁离子(Mg²⁺)流入系统。CorA在这些生物体中普遍存在，形成转运蛋白的一个独特家族，通过基因组序列分析确定其包含至少22个成员，而且在酵母中具有6个更独特的成员(Kehres et al.，1998)。PN29970与CorA蛋白的相似性提示这个猎物蛋白在OsCYCOS2调节的细胞周期活动中可作为离子泵。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵与假设蛋白AAK18839(PN23363)(GENBANK_登录号AC082645)相互作用，这是其中没有已经明确鉴别的结构域、基序或签名的具有286个氨基酸的蛋白质。(编码PN23363的第50-148位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库挽回)。Genpept数据库的BLAST分析表明与水稻未知蛋白(GENBANK_登录号AAK18839，3e^-81)的相同性。针对TMRI’sGENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN23363核苷酸序列的BLAST分析鉴别了probeset OS_ORF005240_at(e^-175期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导。

发现编码OsCYCOS2第170-310位氨基酸的饵片段与推定的CCAAT置换蛋白PN26210相互作用。PN26210的三个猎物克隆，一个编码第422-646位氨基酸及两个编码第364-613位氨基酸，从输出性状文库中挽回。通过氨基酸序列分析表明PN26210是具有687个氨基酸的蛋白质，包括一个跨膜结构域(第621-367位氨基酸)。这个分析还预示了三个卷曲螺旋(第60-345位氨基酸，第381-445位氨基酸，及第489-643位氨基酸)，尽管它们具有低于阈值的预期显著性。卷曲螺旋在许多类型的蛋白质中参与蛋白质相互作用。还鉴别了亮氨酸拉链(第321-342位氨基酸)，已知其在转录因子中促进二聚体形成。另外，氨基酸序列的BLAST分析表明PN26210与水稻蛋白13702813相同。CCAAT置换蛋白(在文献中称为CDP，Cut或Cux)属于转录调节物的高度保守的家族(参见Nepveu，2001)。这些蛋白质具有多个DNA结合结构域，其包括一个Cut同源域及一个、两个或三个Cut重复。这些结构域的组合确定其独特的DNA结合活性，其在增殖期间提高及在终末分化期间降低。CCAAT基序是在许多真核基因的启动子中发现的，CCAAT置换蛋白通过与发育期间重要的基因的启动子直接结合而典型地作为转录抑制剂，但它们也可以作为转录激活物。发现CDP/Cut是启动子复合物HiNF-D的一个成分，确信其在细胞周期的G1/S过渡期促进组蛋白H4基因的转录诱导，并在人体中细胞周期晚期阶段减弱H4基因转录。认为CDP/Cut对转录的调节作用依赖于其相互作用的蛋白质而变化(Nepveu，如前)。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵与推定的肌球蛋白重链蛋白PN23297相互作用。(编码PN23297的第980-1160位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库中挽回)。PN23297(水稻蛋白15451591)是具有1601个氨基酸的蛋白质，其包括一个ATP/GTP结合位点基序A(P-环)(第267-274位氨基酸)。蛋白质序列分析清楚表明这个蛋白质是一些形式的肌球蛋白链，与来自拟南芥的许多肌球蛋白样蛋白和肌球蛋白重链蛋白包括肌球蛋白样蛋白(GENBANK_登录号NP_195046，e＝0.0)及肌球蛋白重链(GENBANK_登录号T05200，e＝0.0)相似。肌球蛋白是由于其在肌肉收缩中的作用而熟知的，这个蛋白质参与其它细胞活动。在植物中，例如肌球蛋白重链可参与在烟草和百合花粉管中发生的胞质流动(Yokota et al.，1999a；Yokota et al.，1999b)。Cruz et al.，1998提出了肌球蛋白装配对有丝分裂重要的证据。特别地，肌球蛋白II缺乏的酵母细胞在OsCYCOS2调节的G2/M过渡期经历细胞周期停滞。另外，Xiaet al.，1996表明拟南芥肌球蛋白重链是在细胞周期调节以及在细胞骨架功能及细胞极性建立中起作用的蛋白质之一。PN23297与肌球蛋白重链蛋白的相似性提示这个猎物蛋白是参与与细胞极性和胞质分裂相关的活动的一个细胞骨架成分。

推定的肌球蛋白重链PN23297也与番茄钙调蛋白(Os003118-3674)相似的假设蛋白003118-3674相互作用。Os003118-3674是具有148个氨基酸的蛋白质，具有两个EF-hand钙结合结构域(第22-34位和第93-105位氨基酸)。与Os003118-3674包括EF-hand钙结合结构域的观测结果一致，Genpept数据库的BLAST分析表明这个蛋白质与拟南芥推定的钙调蛋白(GENBANK_登录号NP_1764705，e^-57)具有72％相同性，尽管这个查询中最高值是拟南芥推定的丝氨酸/苏氨酸激酶(GENBANK_登录号NP_172695.1，76％相同性，7e^-60)。因此，这个钙调蛋白样蛋白可具有激酶活性。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比推定的肌球蛋白重链PN23297的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS005818_at(e^-6期望值)是最接近的匹配。该期望值对这个probeset而言太低，以至于不是PN23297基因表达的可靠指征。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与叶绿体ATP酶I亚基PN23415相互作用。编码PN23416的第130-176位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库挽回。这个蛋白质具有水稻ATP酶I亚基(GENBANK_登录号NP_039379；蛋白质11466783)。ATP酶是必需的细胞能量转换器(converter)，其从跨膜离子电化学电势差转换ATP水解的化学能。植物ATP酶存在于叶绿体，线粒体和液泡中。在叶绿体中，ATP酶产生ATP，可用作光合作用过程中的化学能。猎物蛋白PN23416是叶绿体ATP酶。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN23416的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS003787_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物刺激，除草剂，或应用的激素特异性诱导。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与假设蛋白BAA85200(即PN23136)相互作用，其与突触融合蛋白相关蛋白AtVam3p相似。编码PN23136的第66-191位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。PN23136是水稻蛋白5922624(BAA85200)并与AtVam3p相似。AtVam3p，是AtVAM3基因的产物，其是参与拟南芥中液泡装配的突触融合蛋白相关分子。这个蛋白质在多种组织中表达，包括根，叶，花序茎，花芽，及幼长角果(siliques)，AtVAM3转录物在分生组织区域中未分化的细胞中丰富(Sato，et al.，1997)。AtVam3p蛋白是t-SNARE膜蛋白之一，其介导在植物内膜系统的细胞器之间小泡内部蛋白质货物运输。AtVAM3p不仅定位于液泡膜，还定位于拟南芥细胞中前液泡(prevacuolar)区室，而且提示在高尔基后(post-Golgi)运输中也有作用(Sanderfoot et al.，1999)。PN23136与t-SNARE膜蛋白的相似性及其与OsCYCOS2的关联提示这个猎物蛋白可参与细胞周期期间与内膜系统相关的蛋白质运输。

还发现编码OsCYCOS2的第170-310位氨基酸的饵片段与假设蛋白PN20815的一个片段相互作用，其与拟南芥肌球蛋白重链片段相似。(编码PN20815的第1-134位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回)。PN20815是具有496个氨基酸的蛋白质。氨基酸序列分析确定在第61和62位氨基酸之间有一个可能的切割位点，尽管看起来没有N末端信号肽存在。其与拟南芥肌球蛋白重链(GENBANK_登录号AAL11549，4e^-114)的相似性提示PN20815也许是细胞骨架成分，并且因此可参与与细胞极性和胞质分裂相关的活动。肌球蛋白装配对有丝分裂而言是重要的。肌球蛋白在此关于相互作用蛋白PN23297已经论述。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质PN23274相互作用。编码OsPN23274的第79-210位氨基酸的6个猎物克隆，即包括PN23274中推定的亮氨酸拉链的一个区域，从输入性状文库挽回。针对公众数据库的BLAST分析表明具有680个氨基酸的蛋白质OsPN23274与拟南芥推定的含有臂(arm)重复的蛋白质(GENBANK_登录号NP_174228，e^-80)及与甘蓝型油菜推定的含有臂重复的蛋白质1(ARC1；GENBANK_登录号T08872，e^-56)相似。OsPN23274蛋白质序列分析表明其具有犰狳(armadillo)/斑珠蛋白ARM重复图谱(profile)(第346-386位氨基酸；1.8e^-09)。两个其它的ARM重复结构域经鉴别具有更低的预期显著性(第431-471位氨基酸，e＝1.2；及第507-548位氨基酸，e＝35)。ARM基序是大约50个氨基酸残基的串联重复序列，其出现在广泛的真核蛋白中(Peifer et al.，1994；Groves 1999；Hatzfeld，1999；Huber et al.，1997)。ARM重复首先在果蝇蛋白犰狳中鉴别，其参与片段极性和细胞粘附(Peifer et al.，1990)。ARM重复在哺乳动物Wnt途径蛋白β-连环蛋白(犰狳同系物)，斑珠蛋白，结肠腺瘤样息肉(Adenomatous Polyposis Coli，APC)肿瘤阻抑物蛋白(Huber et al.，supra)，及其它蛋白质中发现。犰狳家族成员中ARM重复介导代表信号化活动中步骤的多种蛋白质相互作用，导致细胞粘附，细胞骨架改变，和转录的控制(参见Hatzfeld，1999)。另外，蛋白质序列分析鉴别了在第316和531位氨基酸之间的一个SecD SecF结构域(Bolhuis et al.，1998)，尽管其具有较差的预期显著性(e＝9)。这个结构域是一些蛋白质分泌所必需的。还鉴别了一个亮氨酸拉链(第65-86位氨基酸)，这是已知促进蛋白质相互作用的一个结构域，特别在转录因子中。当认为β-连环蛋白已知参与转录调节时，预期亮氨酸拉链是感兴趣的。给出了其与ARM重复蛋白的相似性及其与OsCYCOS2的相互作用，猎物蛋白OsPN23274在与发生在G2/M过渡期的细胞骨架改变相关的细胞粘附中很可能起作用。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23274的核苷酸序列的BLAST分析鉴别了probeset OS017669_at(4e^-70期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，及不由广泛的植物刺激，除草剂或应用的植物激素特异性诱导。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质PN23390的片段相互作用，这是一种推定的驱动蛋白样钙调蛋白结合蛋白(OsPN23390)。编码OsPN23390的第595-845位和第576-738位氨基酸的两个猎物克隆从输出性状文库中挽回。驱动蛋白是分子动力器，是水解ATP并利用获得的能量产生动力的分子。分子动力器参与不同的细胞功能如小泡和细胞器转运，细胞骨架动力学，形态发生，极性生长，细胞运动，纺锤体形成，染色体运动，核融合，及信号转导。已经鉴定了非植物分子动力器的三个家族(驱动蛋白，动力蛋白，和肌球蛋白)。驱动蛋白和动力蛋白利用微管，而肌球蛋白利用肌动蛋白丝作为轨道以在细胞内运输原料。在拟南芥中已经鉴别了大量(大约40个)驱动蛋白和肌球蛋白动力器，但关于植物分子动力器及其在细胞分裂，细胞扩展，胞质流动，细胞与细胞之间通讯，膜运输，及形态发生中的作用了解的很少。认为钙通过钙结合蛋白钙调蛋白在调节植物中基于微管和肌动蛋白的动力器的功能中起关键作用(分子动力器参见Reddy，2001所述)。驱动蛋白样钙调蛋白(CaM)结合蛋白(KCBP)，一种在植物中独特的负极定向的微管动力器蛋白，其参与细胞分裂。在核被膜破坏及细胞分离后期，激活的KCBP通过微管滑行和集束而促进汇聚的双极纺锤体形成，KCBP活性在细胞分裂中期和末期由Ca²⁺和CaM负调节(Vos et al.，2000)。OsPN23390与OsCYCOS2的关联提示猎物蛋白在细胞周期蛋白介导的细胞分裂活动期间参与微管运动。钙调蛋白结合结构域的存在表明其活性是由钙调蛋白调节的。

还发现OsCYCOS2与新的蛋白质PN23484相互作用。查询中使用的饵片段编码OsCYCOS2的第170-310位氨基酸。四个猎物克隆，一个编码OsPN23484的第77-233位氨基酸，两个编码第64-212位氨基酸，及一个编码第90-245位氨基酸，从输出性状文库中挽回。如上所述，OsPN23484还与饵OsS49462相互作用。这个观测结果证实OsCYCOS2-OsPN23484相互作用，并提示OsPN29942在细胞周期蛋白调节中起主要作用并因此控制细胞周期行进。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质OsPN26688相互作用。编码OsPN26688的第132-255位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库挽回。OsPN26688是具有251个氨基酸的未知功能的一种新蛋白质。缺少关于OsPN26688的信息使得难以确定其功能及OsCYCOS2-OsPN26688相互作用的意义。然而，这个相互作用的揭示将OsPN26688与水稻中细胞周期的控制联系起来。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN26688的核苷酸序列的BLAST分析鉴别了probeset OS005073.1_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在一些不同组织类型中非特异性表达，并且不由广泛的植物刺激，除草剂和应用的激素特异性诱导。

还发现OsCYCOS2与新的蛋白质PN29882相互作用。这个蛋白质与肌球蛋白类似。查询中所用的饵片段编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸。编码OsPN29882的第107-273位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。

OsPN29882还与MADS盒样蛋白BAA8188(OsBAA81881；见实施例III)相互作用。由基因的大MADS盒家族成员编码的MADS盒转录因子参与植物、动物、酵母和真菌中的信号转导及发育控制。在植物中，它们是参与花和果实发育的基因的重要调节物。这将由OsCYCOS2控制的细胞周期与MADS盒蛋白控制的发育联系起来。

还发现OsPN29882与ser/thr激酶/钙调蛋白相互作用，ser/thr激酶/钙调蛋白也与PN23297相互作用(见上述)。ser/thr激酶/钙调蛋白可作为与OsCYCOS2的CDK复合物的一部分，以在有丝分裂期间激活肌球蛋白底物。

发现编码OsCYCOS2的第170-310位氨基酸的饵片段(包括细胞周期蛋白结构域的一个区域)与新的蛋白质PN29942的片段相互作用。这个蛋白质在这个实施例前文作为饵OsS49462的相互作用子加以了论述。编码OsPN29942的第1-159位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。这个区域跨越在OsPN29942中鉴别的推定的BTB/POZ结构域。

发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质OsPN29956的片段相互作用。OsPN29956是一种新的蛋白质，只有一部分序列已知。对可获得的374个氨基酸分析表明OsPN29956包括一个血影蛋白重复(第167-209位氨基酸)。与OsPN29956是具有血影蛋白重复的核蛋白的观测结果一致，BLAST分析表明OsPN29956与来自拟南芥的核基质组成蛋白1具有共有的氨基酸序列(35％相同性，GENBANK_登录号BAB10684，4e^-55).。因此，有迹象明显表明OsPN29956是一种核基质蛋白，OsCYCOS2与OsPN29956之间的相互作用可代表通过核活动的调节控制细胞周期中的一个步骤。

三个猎物克隆从输出性状文库挽回。其中两个编码OsPN29956的第96-235位氨基酸，一个编码第2-373位氨基酸。所有三个猎物克隆均包括OsPN29956中存在的血影蛋白重复。血影蛋白重复在参与细胞骨架结构的一些蛋白质中也发现，如在肌动蛋白结合蛋白中(Hartwig，1995)。血影蛋白超家族的肌动蛋白结合蛋白在所有动物及在植物细胞中广泛存在的蛋白。血影蛋白样表位主要定位于一些植物物种和不同细胞类型的质膜，但也定位于分泌小泡，在多种植物组织的核，及地心引力顶端生长的假根和characean algae原丝体中，在此发现其与内质网的肌动蛋白组织化聚集相关及与主动顶端生长相关(Braun，2001)。研究表明在高等植物细胞中存在基于血影蛋白的膜骨架，并表明了这些蛋白质与膜骨架的其它成分如肌动蛋白和钙调蛋白相互作用的能力(Bisikirska et al.，1997)。因此，OsPN29956可以是血影蛋白样细胞骨架蛋白，其在与细胞分裂相关的活动中结合肌动蛋白或钙调蛋白。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与蛋白质PN29958的一个片段相互作用。编码OsPN29958的第3-304位氨基酸一个猎物克隆从输出性状文库挽回。BLAST分析提示这是一种着丝粒同系物(e-10)，并且也与烟草NT3盐耐受蛋白同源(e-12)。BLAST结果提示了PN29958在着丝粒及在盐耐受中的作用。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与蛋白质PN29961相互作用，PN29961与拟南芥蛋白BAB02349相似。编码OsPN29961的第10-215位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与蛋白质OsPN29965相互作用。编码OsPN29965的第12-124位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。OsPN29965与拟南芥驱动蛋白(着丝粒蛋白)相似。在动物细胞中，胞质分裂在姐妹染色单体移动至纺锤极之后立即开始。着丝粒是染色体上纺锤体丝附着的区域以分离有丝分裂和减数分裂中复制的染色单体。动粒是纺锤体微管和染色体之间相互作用的主要位点；它们是与着丝粒DNA相关的蛋白质富集结构并在配对的着丝粒区域的相反侧在每个姐妹染色单体上形成。已经将不同蛋白质定位于动物动粒，包括动力蛋白和驱动蛋白，但植物动粒的蛋白质成分仍需阐明(Buchanan et al.，2002)。动粒相关的驱动蛋白样蛋白CENP-E在有丝分裂期间与动粒结合，并已经示出是哺乳动物细胞中染色体双导向(bioriented)纺锤体附着所必需的(McEwen et al.，2001)。与CENP-E相似，果蝇驱动蛋白样动力蛋白CENP-meta与脊椎动物CENP-E相似，是果蝇染色体的着丝粒/动粒区域的成分并且是保持中期染色体排列所需的(Yucel，2000)。动物细胞的内着丝粒蛋白(INCENP)通过促进姐妹染色单体内聚的分解和中心纺锤体的装配而参与染色体分离和胞质分裂(Kaitnaet al.，2000)。受Ca²⁺/钙调蛋白调节的驱动蛋白样钙调蛋白结合蛋白(KCBP)已经分离自双子叶植物(拟南芥)以及分离自单子叶植物(玉米)。这些动力蛋白含有一个高度保守的C末端区域，其包括动力(motor)结构域和钙调蛋白结合结构域，这提示KCBP在所有开花植物中普遍存在并高度保守(Abdel-Ghany et al.，2000)。植物KCBP在细胞分裂的不同时期定位于并参与建立有丝分裂微管(MT)阵列，Ca²⁺/钙调蛋白调节这些MT阵列的形成(Kao et al.，2000)。

OsPN29965与OsCYCOS2的关联提示猎物蛋白在细胞周期蛋白介导的细胞分裂期间参与微管移动。OsPN29965很可能代表植物中一种新的着丝粒-动粒相关蛋白。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质OsPN29966的片段相互作用。(编码OsPN29966的第8-216位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回)。PN29966与在这个实施例前文描述的其它肌球蛋白相似。其还与ser/thr激酶钙调蛋白相互作用(见上述)。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与蛋白质PN29967的片段相互作用。编码OsPN29967的第16-174位氨基酸的三个猎物片段从输出性状文库挽回。OsPN29967是一种新的蛋白质，只有一部分序列已知。分析可获得的176个氨基酸表明一个可切割的信号肽(第1-37位氨基酸)和一个亮氨酸拉链(第123-144位氨基酸)。亮氨酸拉链结构域支持了这样的观点，即这个蛋白质参与蛋白质-蛋白质之间的相互作用。针对Genpept数据库进行的BLAST分析确定OsPN29967与拟南芥未知蛋白呈现40％氨基酸序列相同性(GENBANK_登录号CAB10357，2e^-14)，除了编码这个蛋白质的基因的核苷酸序列之外无可利用的信息。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质OsPN29968相互作用，OsPN29968与未知的拟南芥蛋白BAB01990相似。编码OsPN29968的第12-113位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29968的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS006631.1_at(e^-95期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在种子中特异性表达。

编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质PN29969的片段相互作用，PN29969与拟南芥未知蛋白BAB01990相似。编码OsPN29969的第16-123位氨基酸的两个猎物克隆从输出性状文库挽回。OsPN29969是一种新的蛋白质，其完整氨基酸序列还未知。对可获得的123个氨基酸进行分析鉴别了一个原肌球蛋白签名(第75-91位氨基酸)，这提示OsPN29969也许是一个新的结构蛋白。原肌球蛋白是肌细胞和非肌细胞中存在的一个密切相关的蛋白质家族。在横纹肌中，原肌球蛋白介导肌钙蛋白复合物与肌动蛋白之间的相互作用，由此调节肌肉收缩，而这个蛋白质在平滑肌和非肌组织中的作用还不清楚(Smilie，1979；McLeod，1986)。基于OsPN29969与OsCYCOS2的相互作用，这个蛋白质很可能在G2/M过渡期参与介导肌动蛋白与其它蛋白质之间的相互作用。因此，OsCYCOS2与OsPN29969之间的相互作用可代表通过调节核基质而控制细胞周期中的一个步骤。

还发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与推定的Cor-A样Mg²⁺转运蛋白PN25381相互作用。编码OsPN25381的第30-218位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。这个蛋白质是水稻蛋白13357265。这个组成型表达的CorA蛋白是细菌和古细菌的主要镁离子(Mg²⁺)流入系统。CorA在这些生物体中普遍存在，形成一个独特的转运蛋白家族，基因组序列分析确定其包含至少22个成员，及在酵母中有6个更远缘的成员(Kehres et al.，1998)。PN25381与CorA蛋白的相似性提示这个猎物蛋白在OsCYCOS2调节的细胞周期活动中可作为离子泵。

发现编码OsCYCOS2的第170-310位氨基酸的饵片段与新的蛋白质PN30854相互作用。编码OsPN30854的第100-169位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。OsPN30854是具有169个氨基酸的蛋白质。针对Genpept数据库BLAST分析表明OsPN30854与拟南芥蛋白AT5g03660/F17C15_80(GENBANK_登录号AAL06894，9e^-42)具有67％相同性。PN30854与OsCYCOS2的相互作用提示其在细胞周期调节中起一些作用。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN30854的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS009560_r_at(2e^-16期望值)是最接近的匹配。这个probeset的期望值太低以至于不是OsPN30854的基因表达的可靠指征。

发现编码OsCYCOS2的第50-233位氨基酸的饵片段与新的蛋白质PN30899的片段相互作用，PN30899与拟南芥蛋白NP_199769相似。这个蛋白质与侣伴类型的DNAJ相似。本发明揭示了热激蛋白侣伴及其在细胞周期中的潜在作用。编码OsPN30899的第4-228位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。

小结

与蛋白激酶复合的M细胞周期蛋白使细胞在G2至M过渡期进行有丝分裂。M细胞周期蛋白在G2晚期中的合成使细胞准备向有丝分裂过渡，及有丝分裂CDK活性在G2至M过渡期的增加发起有丝分裂和胞质分裂。有丝分裂是双倍的染色体分开进入两个核的细胞周期阶段，胞质分裂是一个细胞分裂为两个细胞，这两个过程均利用细胞骨架结构实现。有丝分裂依赖于有丝分裂纺锤体，这是大部分微管的双极排列，但是也依赖于肌动蛋白及相关蛋白质，其与染色体及参与染色体运动的其它蛋白质相互作用。胞质分裂依赖于成膜体，成膜体是由肌动蛋白、肌球蛋白和微管组成的细胞器，其在重整核(reforming nuclei)之间在植物细胞的中心产生一个板并修整这个生长中的板使其分开形成新的细胞壁。肌动蛋白丝，微管和中间丝是包含真核细胞骨架的丝状蛋白质聚合物。辅助蛋白质是动力器和接合点，其连接、移动并修饰肌动蛋白和微管蛋白支架以在细胞分裂期间稳定细胞骨架，产生极性并移动染色体，通过结合降低聚合物浓度(即结合可溶的肌动蛋白的蛋白质)，并将细胞骨架与其它细胞成分如生物合成酶或信号酶连接。许多不同的辅助蛋白质介导细胞骨架的功能，通过与聚合物，包括动力蛋白肌球蛋白，动力蛋白和驱动蛋白相互作用，以及与交联(或成束)相同类型细胞骨架聚合物的其它蛋白质相互作用而进行。通过核苷三磷酸水解产生的能量增强的肌动蛋白和微管的动力行为和极性是在在细胞周期的不同阶段造成胞质和细胞器移动的原因。

有丝分裂从染色体开始浓缩及核膜解体使核基质与胞质分开而起始。当浓缩的染色体沿着细胞中心的平面排列时，细胞成为完全有能力进行有丝分裂的状态，每条染色体包含彼此附着的并通过微管连接在细胞相反端的两个染色单体(子链)。染色体分离然后开始切断姐妹染色单体之间的连接。着丝粒是染色体上纺锤体丝附着区域以分离复制的染色单体。动粒是纺锤体微管与染色体之间相互作用的主要位点，是附着于着丝粒DNA的蛋白质富集结构，并作为纺锤体微管的附着点，其使得染色体沿着板聚集并随后将姐妹染色单体断开至细胞相反极。已经将多种蛋白质定位于动物动粒，包括动力蛋白和驱动蛋白，但植物动粒的蛋白质成分仍要阐明。(植物细胞周期和细胞骨架结构如Buchanan et al.，2002所详述)。认为植物细胞中的细胞周期蛋白的浓度对在细胞骨架，染色体，纺锤体，核膜，及成膜体中介导CDK活性很重要(John et al.，2001)。

这个实施例中鉴别的OsCYCOS2与一些细胞骨架结构蛋白的相互作用与细胞周期蛋白在控制细胞分裂相关的活动中的作用一致。这些猎物蛋白中有5个蛋白-PN23484，PN23297，PN20815，OsPN29882，和OsPN29966-是推定的肌球蛋白重链蛋白。先前关于拟南芥肌球蛋白重链蛋白在细胞周期控制和细胞骨架功能中的作用的报道(Xia et al.，1996；Cruz et al.，1998)提示在此鉴别的推定的肌球蛋白猎物蛋白在有丝分裂建立细胞极性期间或在胞质分裂期间很可能作为肌动蛋白动力器。Cruz etal.观测到肌球蛋白是酵母细胞在G2/M过渡期中所需的支持了这样的观点，即OsCYCOS2与肌球蛋白重链蛋白的相互作用调节在这个过渡点的细胞周期。令人感兴趣的是PN23297，PN29882和PN29966还与ser/thr激酶/钙调蛋白样蛋白(Os003118-3674)相互作用。激酶调节CDK-细胞周期蛋白复合物的活性，而无所有这三种蛋白质--OsCYCOS2，推定的肌球蛋白重链PN23297(或其它肌球蛋白)，及激酶Os003118-3674--同时相互作用这样的迹象，可能是Os003118-3674具有激酶活性，增加了这个相互作用使一个信号活动传播的可能。

与OsCYCOS2相互作用的其它细胞骨架蛋白包括血影蛋白样蛋白，其具有推测的肌动蛋白结合功能核基质组分，及其与OsCYCOS2的相互作用可代表通过调节核活动而控制细胞周期的一个步骤(OsPN29956)。

具有动力器功能的额外的相互作用子是驱动蛋白样蛋白OsPN23390和OsPN29965。动物和植物中的驱动蛋白参与形成有丝分裂纺锤体(Buchanan et al.，2002；Vos et al.，2000)。由钙调蛋白调节的植物驱动蛋白样蛋白参与细胞分裂期间微管阵列形成(Kao et al.，2000)。基于这些报道及其与OsCYCOS2相互作用，我们推测猎物蛋白OsPN23390和OsPN29965在有丝分裂纺锤体形成期间作为微管动力蛋白。钙调蛋白调节的OsPN23390可参与微管阵列形成，而OsPN29965与着丝粒蛋白的相似性提示这个猎物蛋白是水稻染色体的着丝粒/动粒区域的一种新的驱动蛋白成分，具有在染色体排列中的推定作用。细胞周期蛋白与所有这些细胞骨架蛋白的相互作用代表了水稻中控制细胞分裂的一种新鉴别的机制。

OsCYCOS2还与PN23416相互作用，PN23416是与叶绿体ATP酶I亚基相似的一种蛋白质。细胞周期蛋白与微管和肌动蛋白动力蛋白的相互作用与存在ATP酶猎物蛋白一致。ATP酶水解ATP以提供动力蛋白使用能量，以产生有丝分裂期间与微管和肌动蛋白丝相关的动力和定向运动。

另一种猎物蛋白，OsPN23274，与拟南芥含有ARM重复的蛋白相似。ARM重复结构域与不同的结合配偶体的相互作用反映了含有ARM重复的蛋白质的不同功能。这些分子组合结构作用如附着(细胞接触)及细胞骨架相关蛋白质与信号作用，通过产生并转导信号而影响基因表达(Hatzfeld，1999)。OsPN23274与细胞周期蛋白的相互作用提示这个猎物蛋白很可能参与在从G2至M期的过渡期发生的细胞骨架改变相关的细胞附着，尽管在信号化中的作用可与这个功能结合。

OsCYCOS2的另一个相互作用子是PN26210，这是一种推定的CCAAT置换蛋白，具有转录调节物的作用。在复制期间，染色体DNA在染色质中保持组织化，染色质是主要由组蛋白组成的一种复合物。组蛋白基因表达(RNA)及蛋白质积聚在S期早期受到强烈刺激，使组蛋白细胞成分倍增以装配新复制的DNA。CCAAT置换蛋白(CDP)被认为是在G1/S过渡期具有组蛋白基因的转录激活物作用，及在人体较晚的细胞周期阶段具有组蛋白基因转录弱化物的作用(Nepveu，2001)。这些蛋白质的DNA结合活性对细胞周期的依赖性证实推定的CCAAT置换蛋白与细胞周期蛋白的相互作用。也许这种相互作用涉及一种机制，其中OsCYCOS2使PN26210隔离并防止其参与基因调节。也值得注意的是CDP的功能是通过翻译后修饰调节的(Nepveu，A.，如前)，特别地，CDP的DNA结合活性，及因此的转录活性通过cut重复或cut同源域的磷酸化抑制。假设细胞周期蛋白与细胞周期蛋白依赖性激酶相互作用，这让人推测OsCYCOS2-PN26210相互作用的功能可能是使得PN26210翻译后磷酸化，作为导致在G2/M期间组蛋白转录的负调节的程序的一部分。

还发现三种膜转运蛋白与OsCYCOS2相互作用。PN23136与t-SNARE膜蛋白相似，其是参与植物内膜系统的细胞器中蛋白质货物运输的一个蛋白质家族(Sanderfoot et al.，1999)。产生内膜系统的ER系统是一个动态网络，其组构在细胞周期期间改变。在有丝分裂期间，ER经历了一系列重排，导致纺锤体活性调节及通过控制局部钙浓度而装配细胞板(Buchanan et al.，2002)。PN23136与OsCYCOS2的相互作用表明了猎物蛋白在有丝分裂期间介导与ER内膜系统的动态行为相关的蛋白质运输中的作用。发现与OsCYCOS2相互作用的其它两种转运蛋白是推定的CorA样镁离子转运蛋白，其可具有跨膜泵作用以在胞质分裂期间调节膨压或传递溶质。

最后，OsCYCOS2与推定的热激猎物蛋白PN23169和PN30899相互作用。HSP作为分子侣伴，同时植物中这些蛋白质已经主要地与应激应答连接，一些与刺激不相关及其功能需要说明(Buchanan et al.，2002)。就针对OsCYCOS2鉴别的所有相互作用而言，我们推测PN30899和PN23169作为分子粘合剂以将相互作用的蛋白质结合在一起。这个猎物蛋白的另一个作用可以通过与动物热激蛋白功能同源而推导，其侣伴在微管蛋白折叠或有丝分裂结构装配/解体中的作用依赖于其分别在中心体或纺锤体丝上的定位(Agueli et al.，2001)。这些是与OsCYCOS2控制的细胞周期的时期相关的功能。

参与细胞周期调节的蛋白质可以是进行遗传操纵或用化合物处理的靶以修饰其水平或活性，从而调节植物细胞周期。编码水稻中这些蛋白质的基因的鉴别使得可以揭示控制植物生长特别是细胞增殖和分化的方法，以促进或延缓植物发育及促进再生。这种方法可包括为农作物应用化合物或对植物进行工程化，其中在足以更改或控制细胞分裂的条件下暂时调节与细胞周期调节相关的蛋白质的水平和/或活性。

这个实施例的结果的一个应用包括在存在一或多种环境条件包括温度、盐分、干旱或营养素增加或降低，或者暴露于疾病条件下更改植物生长。例如，在冬季下雨后仅可利用有限量的水的情况中，限制植物生长是必需的，由此水源在农作物的有价值部分已经生长之前不被耗竭。已经发现降低水分蒸发的化学制剂对随后的生长具有持续的不利副作用。相反，调节细胞周期的蛋白质的表达或活性的调节可以导致生长降低而无毒性副作用。已经提出了通过调节具有细胞周期蛋白相关激酶功能的蛋白质的水平和或催化活性以控制植物细胞生长的方法，以促进植物再生及谷类农作物的发育(见美国专利No.6,087,175)。

实施例III

这个实施例提供了与水稻MADS盒蛋白MADS45(OsMADS45)，AP1样MADS盒蛋白(OsRAP1B)，MADS盒蛋白MADS6(OsMADS6)，MADS盒蛋白FDRMADS8(OsFDRMADS8)，MADS盒蛋白MADS3(OsMADS3)，MADS盒蛋白MADS5(OsMADS5)和MADS盒蛋白MADS15(OsMADS15)相互作用的一个蛋白质网络。通过酵母双杂交分析鉴别这个网络的几乎所有蛋白质均是MADS盒转录因子。

由基因的大MADS盒家族成员编码的MADS盒转录因子，包括一个保守的序列特异性DNA结合/二聚化结构域，称作MADS盒。这些蛋白质在植物、动物、酵母和真菌中参与信号转导和发育控制。在被子植物中，许多MADS盒蛋白最初显示花特异性表达，并且是参与花和果实发育，特别是在分生组织和花器官相同性的确定中的基因的重要调节物。花发育在开花植物的不同物种如拟南芥和玉米中是保守的，这表明MADS盒基因是从古老的开花植物中进化的高度保守的过程的一部分(这些基因的进化和功能参见Ng & Yanofsky，2001；Theissen et al.，2000所述；特别是在水稻和玉米中，如Munster et al.，2001所述)。植物MADS盒基因被组织化进入一些系统发生独特的基因组群中--AGAMOUS(AG)，APETALA3(AP3)/PISTILLATA(PI)和APETALA1(AP1)/AG-LIKE(AGL)9-每组均含有在调节花发育的不同方面具有相似功能的基因，包括早期作用分生组织相同性基因，控制从营养期向再生发育和花分生组织发育过渡，晚期作用花器官相同性基因，及在这两个功能之间介导的基因(参见Purugganan et al.，1995；Theissen et al.，2000所述)。MADS盒基因彼此相互作用并与参与花发育的遗传控制的其它基因相互作用，及在这个网络内不同的基因/基因组群之间具有调节相互作用(激活，抑制)。除了花发育之外，一些MADS盒基因参与控制胚珠和种子发育，营养生长，根发育，果实发育和裂开，胚发生，或者共生诱导(Moon et al.，1999；Riechmann & Meyerowitz，1997；Theissen et al.，2000)。研究MADS盒转录因子及其以特异通路相互作用的蛋白质可因此在分子水平阐明这些生物学过程。

这种相互作用的生物学相关性通过已知这些蛋白质作为异源二聚体或包括其它MADS盒蛋白的三元复合物而调节转录的事实加以强调(Limet al.，2000)。已经报道这些相互作用通过K盒发生(Sung et al.，2001；Lim et al.，2000)，并且通过就在K结构域下游的区域增强。植物MADS盒蛋白由一个MADS盒结构域，一个I区域，一个K结构域，和一个C末端区域组成。K盒是植物MADS盒蛋白特有的一个结构域，使得蛋白质远离其动物和真菌相配物，这表明植物MADS盒因子可具有不同的相互作用标准(Davies et al.，1996)。K盒通常在MADS盒结构域的C末端被发现，认为其通过形成已知促进蛋白质相互作用的卷曲螺旋结构作为二聚化部分。蛋白质-蛋白质相互作用的高度潜力使得MADS盒蛋白适合作为双杂交分析的候选物。然而，尽管许多MADS盒蛋白已经分离自单子叶植物，包括玉米、高粱、兰花和水稻，但对MADS盒蛋白之间的相互作用研究的较少(Moon et al.，1999)。这个实施例中鉴别的蛋白质相互作用目的是阐明水稻中MADS盒蛋白调节的植物发育的分子机制。主要农作物如水稻中蛋白质相互作用包括MADS盒转录因子的鉴别和鉴定在农业学中具有重要应用。可利用关于谷类中控制花形态发生的复杂遗传系统的知识以产生经遗传工程化的植物，该植物特征是具有调节的发育表型，例如提前或延缓开花。

酵母双杂交研究(如上所述)可以鉴别主要由MADS盒转录因子组成的一个水稻蛋白网络，其作为异源二聚体相互作用，有一些代表先前未描述的相互作用。一些相互作用子是先前鉴别的蛋白质，包括MADS盒蛋白Os008339，OsFDRMADS6，OsMADS7，OsMADS8，OsMADS13，OsMADS14，OsMADS17，OsMADS18，OsBAA81880，及在这些相互作用研究中用作饵的相同蛋白质，OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS1，OsMADS3，OsMADS5，及OsMADS15。另一个相互作用子是种子贮存蛋白谷醇溶蛋白(OsRP5)。这个研究还鉴别了6种新的水稻蛋白：MADS盒蛋白OsPN29949(OsMADS6的相互作用子)；推定的转录调节物，OsPN23495(OsMADS45的相互作用子)；推定的hox蛋白，OsPN22834(OsRAP1B的相互作用子)；未知功能的蛋白质，OsPN31165(OsMADS3的相互作用子)；14-3-3样蛋白，Os000564-1102(OsMADS5的相互作用子)；及推定的着丝粒蛋白，OsPN29971(OsMADS15的相互作用子)。

为确定相互作用MADS盒蛋白的关系，对由相互作用克隆编码的区域进行氨基酸序列对比分析。从这些对比分析中，可以构建一个系统发生树。

实施例中的相互作用蛋白质列于表8-14，随后是每个蛋白质的详细信息及关于相互作用意义的讨论。相互作用的图表示于图2。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列如SEQ ID NO：55-66，199-202，和223-256所示。氨基酸序列对比分析示于图3A-3D，系统发生树示于图3E。

相互作用蛋白质子与饵蛋白OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS1，OsMADS3，OsMADS5，和OsMADS15相互作用的能力，及相互作用蛋白质的已知或预测的生物学功能，表明相互作用蛋白质参与水稻中花发育相关的基因的转录调节，除了谷醇溶蛋白之外在种子发育中具有推定的作用。这个实施例中鉴别的一些相互作用和蛋白质先前未加以描述并代表一种新的观测结果。

表8-14

在酵母双杂交筛选中针对饵蛋白OsMADS45，OsRAP1B，OsMADS6， OsFDRMADS8，OsMADS3，OsMADS5，和OsMADS15鉴别的相互作 用蛋白质

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由查询中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

表8

针对OsMADS45鉴别的相互作用蛋白质(MADS盒蛋白MADS45)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsMADS45PN20231(1905929-OS000555)(SEQ ID NO：202)	水稻MADS盒蛋白MADS45(U31994，AAB50180)	1-250*100-250*150-250*
				相互作用子
Os008339PN20847(AJ293816-OS0083339)(SEQ ID NO：224)	水稻OS008339 MADS盒转录因子，片段(AJ293816)	50-198	30-l78(输入性状)
				OsFDRMADS6PN19766(SEQ ID NO：226)	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS6(AF139664，AAF66997)	50-198	3x 115-24693-244(输出性状)
OsFDRMADS8PN20698(SEQ ID NO：228)	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS8(AF141965，AAD38369)	50-198	2x 104-23363-186(输出性状)

OsMADS1PN19788(11493806-OS015136)(SEQ ID NO：230)	水稻MADS 盒蛋白MADS1(AF204063，AAG35652)	50-198	3x 82-2412x 71-257(输出性状)
				OsMADS3PN20700(SEQ ID NO：232)	水稻MADS 盒蛋白MADS3(L37528，AAA99964)	50-198	48-177(输出性状)
OsMADS5PN20770(SEQ ID NO：234)	水稻MADS 盒蛋白MADS5(U78890，AAB71434)	50-198	113-225(输出性状)
				OsMADS6PN20233(SEQ ID NO：236)	水稻MADS 盒蛋白MADS6(U78782，AAB64250)	50-198	70-250(输出性状)
OsMADS13PN20668(SEQ ID NO：238)	水稻MADS 盒蛋白MADS13(AF151693，AAF13594)	50-198	2x 75-263(输出性状)
				OsMADS14PN20910(SEQ ID NO：200)	水稻MADS 盒蛋白MADS14(AF058697，AAF19047)	50-198	124-22382-197(输出性状)
OsMADS15PN20842(SEQ ID NO：240)	水稻MADS 盒蛋白MADS15(AF058698，AAF19048)	50-198	2x 92-237(输出性状)
				OsMADS18PN20912(SEQ ID NO：242	水稻MADS 盒蛋白MADS18(AF091458，AAF04972)	50-198	57-22482-154(输出性状)

OsPN23495(SEQ ID NO：56)	新的蛋白质PN23495	50-198	39-16512-198(输入性状)
				OsRAP1BPN20232(7592641-OS000556)(SEQ ID NO：244)	水稻AP1-样MADS 盒蛋白RAP1B(AB041020，BAA94342)	50-198	1-158(输出性状)

^*自身激活克隆，即其在没有猎物蛋白的情况中激活双杂交系统中报道基因，并因此未用于研究中。

表9

针对OsRAP1B鉴别的相互作用蛋白质

(水稻AP1-样MADS盒蛋白RAP1B)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsRAP1BPN20232(SEQ ID NO：244)	水稻AP1-样MADS 盒蛋白RAP1B(AB041020，BAA94342)
				相互作用子
Os008339PN20847(SEQ ID NO：224)	水稻OS008339 MADS盒转录因子，片段(AJ293816)	1-150	3x 32-162(输入性状)
				OsBAA8 1880PN20837(52957-OS011794)(SEQ ID NO：246)	水稻MADS 盒样蛋白质(AB003322，BAA81880)	125-235	2-16824-203(输出性状)

OsFDRMADS6PN19766(SEQ ID NO：226)	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS6(AF139664，AAF66997)	1-247	1-186(输出性状)
				100-247	100-246(输出性状)
		OsFDRMADS8PN20698(SEQ ID NO：228)	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS8(AF141965，AAD38369)			100-247	4x 69-233(输入性状)94-230(输出性状)
1-247	53-233(输出性状)
				OsMADS1PN19788(SEQ ID NO：230)	水稻MADS 盒蛋白MADS1(AF204063，AAG35652)	1-247	4x 100-231(输入性状)95-257(输出性状)
100-247	2x 95-257(输入性状)
		65-200	4x 74-172(输入性状)
125-235	73-239(输出性状)
		OsMADS5PN20770(SEQ ID NO：234)	水稻MADS 盒蛋白MADS5(U78890，AAB71434)			30-180	106-225(输入性状)121-225(输出性状)
1-247	2x 109-225(输出性状)

		125-235	2x 108-225(输出性状)
				OsMADS6PN20233(SEQ ID NO：236)	水稻MADS 盒蛋白MADS6(U78782，AAB64250)	1-247	116-250(输出性状)
OsMADS7PN21116(SEQ ID NO：248)	水稻MADS 盒蛋白MADS7(U78891，AAC49816)	1-247	5x 1-250(输出性状)
				OsMADS8PN20778(SEQ ID NO：250)	水稻MADS 盒蛋白MADS8(U78892，AAC49817)	1-247	6x 107-248(输出性状)75-248(输入性状)
30-180	109-24874-183(输出性状)
		100-247	127-248(输出性状)
125-235	2x 79-248(输出性状)
		OsMADS17PN20914(SEQ ID NO：252)	水稻MADS 盒转录因子MADS17(AF109153，AAF21900)			1-247	106-249(输入性状)
OsMADS45PN20231(SEQ ID NO：202)	水稻水稻MADS 盒蛋白MADS45(U31994，AAB50180)			1-247	96-249(输入性状)3x 75-249(输出性状)

		30-180	61-248(输出性状)
				125-235	4x 98-2493x 69-249(输出性状)
		OsPN22834(SEQ ID NO：58)	新的蛋白质PN22834，与Oshox6相似，片段			1-247	2x 112-278(输入性状)

表10

针对OsMADS6鉴别的相互作用蛋白质

(水稻MADS盒蛋白MADS6)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsMADS6PN20233(SEQ ID NO：236)	水稻MADS 盒蛋白MADS6(U78782，AAB64250)	1-251*100-251*
				相互作用子
Os008339PN20847(SEQ ID NO：224)	水稻OS008339 MADS盒转录因子，片段(AJ293816)	50-200	108-226(输出性状)
				OsBAA81880PN20837(SEQ ID NO：246)	水稻MADS盒-样蛋白质(AB003322，BAA81880)	50-200	2x 120-228(输出性状)
OsFDRMADS8PN20698(SEQ ID NO：228)	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS8(AF141965，AAD38369)	50-200	91-233(输出性状)

OsMADS1PN19788(SEQ ID NO：230)	水稻MADS盒蛋白MADS1(AF204063，AAG35652)	50-200	3x 70-257(输出性状)
				OsMADS5PN20770(SEQ ID NO：234)	水稻MADS盒蛋白MADS5(U78890，AAB71434)	50-200	61-171(输出性状)
OsMADS7PN21116(SEQ ID NO：248)	水稻MADS盒蛋白MADS7(U78891，AAC49816)	50-200	95-259(输出性状)
				OsMADS8PN20778(SEQ ID NO：250)	水稻MADS盒蛋白MADS8(U78892，AAC49817)	50-200	2x 79-24875-238(输出性状)
OsMADS15PN20842(SEQ ID NO：240)	水稻OSMADS15(AF058698，AAF19048)	50-200	73-1831-176(输出性状)
				OsMADS18PN20912(SEQ ID NO：242)	水稻MADS盒转录因子MADS18(AF091458，AAF04972)	50-200	64-249(输出性状)
OsMADS45PN20231(SEQ ID NO：202)	水稻水稻MADS盒蛋白MADS45(U31994，AAB50180)	50-200	83-234(输出性状)
				OsPN29949(SEQ ID NO：60)	新的蛋白质PN29949推定的MADS蛋白	50-200	118-241109-193(输出性状)

OsRAP1BPN20232(SEQ ID NO：244)	水稻AP1-样MADS 盒蛋白RAP1B(AB041020，BAA94342)	50-200	1-188(输入性状)1-179(输出性状)
				OsRP5PN19877(SEQ ID NO：254)	水稻谷醇溶蛋白(AF156714，AAF73991)	50-200	13-140(输出性状)

^*自身激活克隆，即其在没有猎物蛋白的情况中激活双杂交系统中报道基因，并因此未用于研究中。

注意：通过酵母双杂交系统鉴别的OsMADS6与OsMADS14及与OsMADS17的相互作用在文献中报道(Moon et al.，1999)。

表11

针对OsFDRMADS8鉴别的相互作用蛋白质

(水稻MADS盒蛋白FDRMADS8)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsFDRMADS8PN20698(SEQ ID NO：228)	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS8(AF141965，AAD38369)
				相互作用子
OsMADS45PN20231(SEQ ID NO：202)	水稻MADS 盒蛋白MADS45(U31994，AAB50180)	60-160	3x 56-249(输出性状)

表12

针对OsMADS3鉴别的相互作用蛋白质

(水稻MADS盒蛋白MADS3)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsMADS3PN20700(SEQ ID NO：232)	水稻MADS盒蛋白MADS3(L37528，AAA99964)	120-210*120-237*
				相互作用子
OsMADS8PN20778(SEQ ID NO：250)	水稻MADS盒蛋白MADS8(U78892，AAC49817)	70-170	61-248(输入性状)6-15968-245(输出性状)
				OsMADS45PN20231(SEQ ID NO：202)	水稻水稻MADS盒蛋白MADS45(U31994，AAB50180)	70-170	48-249(输入性状)4x 2-21457-249(输出性状)
OsPN31165(SEQ ID NO：62)	新的蛋白质PN31165	70-170	58-252(输入性状)

^*自身激活克隆，即其在没有猎物蛋白的情况中激活双杂交系统中报道基因，并因此未用于研究中。

表13

针对OsMADS5鉴别的相互作用蛋白质

(水稻MADS盒蛋白MADS5)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsMADS5PN20770(SEQ ID NO：234)	水稻MADS 盒蛋白MADS5(U78890，AAB71434)	100-226
				相互作用子
OsFDRMADS6PN19766(SEQ ID NO：226)	水稻MADS-盒蛋白FDRMADS6(AF139664，AAF66997)	50-160	74-246(输出性状)
				OsMADS13PN20668(SEQ ID NO：238)	水稻MADS 盒蛋白MADS13(AF151693，AAF13594)	50-160	2x 69-230(输出性状)
OsMADS17PN20914(SEQ ID NO：252)	水稻MADS 盒转录因子MADS17(AF109153，AAF21900)	50-160	51-248(输出性状)
				Os000564-11 02PN20072(SEQ ID NO：64)	假设蛋白000564-1102	50-160	72-172(输出性状)
OsBAB56078PN28517(SEQ ID NO：256)	水稻假设蛋白BAB56078(AP003106，BAB56078)	50-160	51-155(输出性状)

表14

针对OsMADS15鉴别的相互作用蛋白质

(水稻MADS盒蛋白MADS15)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsMADS15PN20842(SEQ ID NO：240)	水稻MADS 盒蛋白MADS15(AF058698，AAF19048)
				相互作用子
OsMADS1PN19788(11493806-OS015136(SEQ ID NO：230)	水稻MADS 盒蛋白MADS1(AF204063，AAG35652)	100-235	95-2544x 74-172(输入性状)
				OsMADS45PN20231(SEQ ID NO：202)	水稻水稻MADS 盒蛋白MADS45(U31994，AAB50180)	100-235	120-249(输出性状)
OsPN29971(SEQ ID NO：66)	新的蛋白质PN29971，片段，与拟南芥着丝粒蛋白NP_191066相似	100-235	2x 1-108(输入性状)

水稻MADS盒蛋白MADS45(OsMADS45)作为饵

通过氨基酸序列分析(3.05e^-41期望值)确定OsMADS45(GENBANK_登录号AAB50180；Greco et al.，1997)是具有249个氨基酸的一种蛋白质，其包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)。分析还确定存在两个卷曲螺旋(第83-117位氨基酸和第152-176位氨基酸)。这些卷曲螺旋很可能是在第73-176位氨基酸之间的推定的K-盒的一部分(3.7e^-45)。这个研究中使用的饵片段编码第50-198位氨基酸，是包括OsMADS45的两个推定的卷曲螺旋和K-盒的一个序列。OsMADS45与AGL2和AGL4 MADS盒基因高度同源，认为其通过作为分生组织相同性和器官相同性基因之间的中间物在所有花器官的发育中起重要作用(Greco et al.，1997；Savidge et al.，1995)。与AGL2和AGL4的表达模式一致，Northern印迹和原位杂交实验示出水稻OsMADS45 RNA在花分生组织中，在所有原基(primordia)，在成熟花器官，及在发育中的种子中高度表达(Greco et al.，1997)，与果实发育中的情况一致。然而，时间和空间基因表达模式仅提示OsMADS45及拟南芥AGL2和AGL4在花发育中起相似作用(Greco et al.，1997)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS45的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS014912_f_at(6e^-64期望值)和probeset OS000555_f_at(6e^-60)是最接近的匹配。基因表达分析表明这些基因在种子发育早期中表达。

发现与OsMADS45相互作用的蛋白质包括Os008339(GENBANK_登录号AJ293816)，一个包括MADS盒结构域(第10-67位氨基酸，8.4e^-29)的具有233个氨基酸的蛋白质，这提示Os008339是MADS盒蛋白家族的一个成员。氨基酸序列分析还鉴别了一个K-盒(第80-181位氨基酸)和一个碱性亮氨酸拉链结构域(bZIP；第156-186位氨基酸)，通常发现bZIP结构域在转录因子中并包括一个碱性DNA结合结构域和一个亮氨酸拉链，其与许多基因调节蛋白中二聚化相关(Landschulz et al.，1988；Busch et al.，1990；O′Shea et al.，1989)。因此这个蛋白质很可能与其它MADS盒家族成员功能相同，其与OsMADS45的关联代表一种新鉴别的异源二聚体，推测参与水稻发育相关基因的转录调节。挽回的Os008339的猎物克隆编码跨越Os008339中K-盒的大部分的一个区域。这个克隆的挽回与通过其各自的K-盒的OsMADS45和Os008339相互作用一致，认为这个结构域包括用于蛋白质相互作用的卷曲螺旋。还发现Os008339与饵蛋白OsRAP1B和OsMADS6相互作用(分别见表9和表10)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比Os008339的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS011977_i_at(7e^-91期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激、除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsMADS45与水稻MADS盒蛋白OsFDRMADS6(GENBANK_登录号AF139664)相互作用，这是具有246个氨基酸的蛋白质，包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸，6.79e^-39)，位于MADS盒结构域C末端的一个卷曲螺旋(第116-182位氨基酸)。这个推定的卷曲螺旋很可能是在第73和174位氨基酸之间推定的K-盒的一部分(8.9e^-47)，其有效性通过MADS盒蛋白结合DNA并作为异源二聚体调节转录的事实而支持。先前公布的研究表明FDRMADS6转录物存在于花中，但不存在于根或茎，并且在花发育的早期阶段及再次在当花器官原基开始分化时的晚期阶段，在小穗顶端分生组织中发现转录体(Jia et al.，2000)。OsFDRMADS6-OsMADS45相互作用先前未报道。还发现OsFDRMADS6与饵蛋白OsRAP1B(见表9)和OsMADS5(见表13)相互作用。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsFDRMADS6的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS003005.1_i_at(2e^-82期望值)时最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激、除草剂或应用的激素特异性诱导的。

OsMADS45还与OsFDRMADS8(GENBANK_登录号AF141965)相互作用，通过氨基酸序列分析确定这是具有233个氨基酸的蛋白质，具有在第1-60位氨基酸之间的一个MADS盒结构域(9.6e^-39)及一个卷曲螺旋签名(第122-178位氨基酸，预期显著性低于阈值)。这个推定的卷曲螺旋区域与K-盒结构域(第73-173位氨基酸，1.3e^-10)重叠。在文献中没有关于OsFDRMADS8的信息可利用，MADS盒和K-盒的存在有力地提示其是MADS盒家族的一个转录因子。这个蛋白质与OsMADS45的关联提示OsFDRMADS8在参与植物发育的基因的转录调节中的作用。先前未报道过OsFDRMADS8-OsMADS45相互作用。还发现OsFDRMADS8与饵蛋白OsRAP1B和OsMADS6相互作用(见表9和表10)。

还将OsFDRMADS8构建作为饵。其相互作用示于表11并在这个实施例的后文描述。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsFDRMADS8的核苷酸序列的BLAST 分析鉴别probesetOS015116_at(2e^-82期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现编码OsMADS45的第50-198位氨基酸的饵与OsMADS1(GENBANK_登录号AF204063)相互作用，这是具有257个氨基酸的蛋白质，是MADS盒基因家族的一个成员。通过氨基酸序列分析确定OsMADS1包括一个MADS结构域(第1-60位氨基酸)和一个卷曲螺旋(第119-179位氨基酸)。OsMADS1是MADS盒基因的AP1/AGL9家族中的AGL2亚家族的一个成员(Moon et al.，1999)。OsMADS1基因在同源或异源植物中的异位表达导致提前开花，从而提示OsMADS1在花诱导中的作用(Chung et al.，1994)。OsMADS1在花发育早期直至晚期阶段表达，转录物存在于内稃/外稃和心皮中(Moon et al.，1999)。草毒麦(Loliurn temulentum)中OsMADS1同系物在植物苗顶端分生组织中表达，其表达在多天的花诱导的30小时内明显增加，通过原位杂交确定(Gocal et al.，2001)。先前未报道过OsMADS1-OsMADS45相互作用。

还发现OsMADS1与饵蛋白OsRAP1B(见表9)，OsMADS6(见表10)和OsMADS15(见表14)相互作用。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS1的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000262_f_at和OS015136_f_at(分别为5e^-46和2e^-36期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsMADS45与MADS盒蛋白OsMADS3相互作用。具有236个氨基酸的OsMADS3蛋白(GENBANK_登录号L37528)，包括MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)，基于序列同源而与AG基因家族在结构和功能上相关，如Kang et al.，1995所报道。RNA印迹分析和原位定位研究示出OsMADS3 RNA转录物优先在生殖器官中表达，尤其在雄蕊和心皮中表达。工程化为异位表达OsMADS3基因的转基因植物呈现花被器官改变的形态学和颜色，提示OsMADS3在花发育中的重要作用。先前未报道过OsMADS3-OsMADS45相互作用。

还构建了OsMADS3作为饵蛋白。其相互作用示于表12并在这个实施例的后文描述。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS3的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS000554_f_at(e^-43期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsMADS45与水稻MADS盒蛋白OsMADS5相互作用。通过氨基酸序列分析确定OsMADS5(GENBANK_登录号U78890)是具有225个氨基酸的蛋白质，包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸，3.17e^-39)。因此，OsMADS5是MADS盒蛋白家族的一个成员。氨基酸序列分析还预测了一个位于MADS盒结构域C末端的卷曲螺旋(第142-182位氨基酸)，虽然预期显著性低于阈值。这个卷曲螺旋很可能是第73和175位氨基酸之间预测的K-盒的一部分(3.4e^-40)。OsMADS5属于MADS盒基因的AP1/AGL9家族中AGL2亚家族，其成员大部分在早期开花阶段表达(Moon et al.，1999)。OsMADS5在整个花发育阶段均表达，在早期比在晚期较高表达，转录物存在于花药中，在心皮中较弱，如Kanget al.，1997所报道。异位表达OsMADS5的转基因植物呈现软弱矮小及提前开花的表型，提示整个蛋白质参与控制开花时间。先前未报道过OsMADS5-OsMADS45相互作用。

还发现OsMADS5与饵蛋白OsRAP1B和OsMADS6(分别见表9表10)相互作用。还将OsMADS5构建为饵蛋白。其相互作用示于表13并在这个实施例的后文描述。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS5的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS011934_at(e^-58期望值)是最接近的匹配。基因表达的时间和空间模式分析表明这个基因在圆锥花序中特异性表达，与先前就OsMADS5基因报道的表达数据一致(Kang et al.，1997)。另外，基因表达实验表明OsMADS5基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsMADS45与水稻MADS盒蛋白OsMADS6相互作用。通过氨基酸序列分析确定OsMADS6(GENBANK_登录号U78782)是具有250个氨基酸的蛋白质，包括一个MADS盒结构域(第1-59位氨基酸，3.3e^-42)。因此，OsMADS6是MADS盒蛋白家族的一个成员。分析还确定了一个K-盒(第72-172位氨基酸，3.4e^-47)。作为支持K-盒的存在，分析还确定了一个卷曲螺旋(第118-172位氨基酸)。Moon et al.，1999报道了与OsMADS14相似，OsMADS6属于基因的AP1/AGL9家族，其控制发育中的花中分生组织和器官相同性的特化。OsMADS6和OsMADS14从花发育的早期直至晚期阶段均表达，OsMADS6转录物可在浆片中检测，在成熟花的空稃和心皮中也较弱(Moon et al.，1999)。因此，这些基因可调节非常早期的花发育，基于观测到异位表达OsMADS6和OsMADS14的转基因植物呈现极早的开花和矮态而表明。先前未报道过OsMADS6-OsMADS45相互作用。

还发现OsMADS6与饵蛋白OsRAP1B(见表9)相互作用。OsMADS6也用作饵。其相互作用子示于表10并在这个实施例的后文描述。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS6的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS000571_f_at(e^-7期望值)是最接近的匹配。这个probeset期望值太低以至于不能是OsMADS6基因表达的可靠指征。

还发现OsMADS45与水稻MADS盒蛋白OsMADS 13相互作用。OsMADS13(GENBANK_登录号AF151693)是具有250个氨基酸的蛋白质，包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)。Lopez-Dee et al.，1999确定这个基因是ZAG2(主要在胚珠中表达玉米MADS-盒基因)和ZAG2共生同源基因ZMM1的直向同源物。OsMADS13基因在发育中的胚珠中高度表达，并可以在水稻胚珠和种子发育中起作用(Lopez-Dee etal.，1999)。胚珠包含于心皮(种子植物如水稻的花中的结构)中，在受精后它们发育成种子。先前未报道过OsMADS13-OsMADS45相互作用。

还发现OSMADS13与饵蛋白OSMADS5相互作用(见表13)。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS13的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000554_f_at(e^-77期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsMADS45与水稻MADS盒蛋白OsMADS14相互作用。OsMADS14(GENBANK_登录号AF058697)是具有246个氨基酸的蛋白质，包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)。OsMADS14与玉米AP1同系物ZAP1同源并且是MADS盒基因的AP1/AGL9家族中SQUAMOSA样(SQUA)亚家族的一个成员，其控制发育中的花中分生组织和器官相同性特化(Moon et al.，1999)。OsMADS14，以及OsMADS6，从花发育的早期直至晚期阶段均表达，OsMADS 14转录物在成熟花的空稃，内稃/外稃，雄蕊，和心皮中可检测。因此，这些基因可调节非常早期的花发育，这是基于观测到异位表达OsMADS 14和OsMADS6的转基因植物呈现极早开花和矮态而表明的(Moon et al.，1999)。先前未报道过OsMADS14-OsMADS45相互作用。

还发现OsMADS14与Os018989-4003(与小麦属DP蛋白相似的假设蛋白018989-4003)相互作用。使用酵母双杂交系统，还报道了OsMADS14与OsMADS1(Lim et al.，1999)及与OsMADS6(Moon et al.，1999)相互作用。K结构域是OsMADS14与OsMADS1之间相互作用所必需的，在K结构域之后的一个区域增加这个相互作用(Lim et al.，1999)。另外，就位于K结构域紧邻下游的一个14个氨基酸区域增强OsMADS14-OsMADS6相互作用，在这个区域内的两个亮氨酸残基在这个增强作用中起重要作用(Moon et al.，1999)。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS13的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS003005.1_i_at(e^-82期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导。

还发现OsMADS45与水稻MADS盒蛋白OsMADS15相互作用。通过氨基酸序列分析确定OsMADS15(GENBANK_登录号U78782)是具有267个氨基酸的蛋白质，在第1和60位氨基酸之间具有一个MADS盒结构域(5.39e^-42期望值)。该分析还预测了一个卷曲螺旋签名(第145-184位氨基酸)。这个推定的卷曲螺旋区域与一个推定的K-盒结构域(第73-174位氨基酸，1.20e^-40)重叠。OsMADS15与玉米AP1同系物ZAP1同源，并被分类为MADS盒基因的AP1/AGL9家族中的SQUAMOSA样(SQUA)亚家族的一个成员，其控制发育中的花中分生组织和器官相同性的特化(Moon et al.，1999)。OsMADS15-OsMADS45相互作用代表先前未报道的一个异源二聚体。

还发现OsMADS15与饵蛋白OsMADS6相互作用(见表10)。OsMADS15也被构建为饵蛋白。其相互作用示于表14并在这个实施例的后文描述。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS15的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015053_f_at(e^-77期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素诱导的。

还发现OsMADS45与水稻MADS盒蛋白OsMADS18相互作用。通过氨基酸序列分析确定OsMADS18(GENBANK_登录号AF091458)是具有249个氨基酸的蛋白质，在第1和60位氨基酸之间具有一个MADS盒结构域(1.67e^-38)。这个氨基酸序列分析还预测了一个卷曲螺旋签名(第141-191位氨基酸)。这个推定的卷曲螺旋区域与K-盒结构域(第73-173位氨基酸，3.80e^-32)重叠。OsMADS18与玉米AP1同系物ZAP1高度同源，并属于MADS盒基因的AP1/AGL9家族中SQUA亚家族，其控制发育中的花中分生组织和器官相同性的特化(Moon et al.，1999)。OsMADS18-OsMADS45相互作用代表先前未报道的一个异源二聚体。

还发现OsMADS18与OsMADS6相互作用(见表10)。针对TMRI’sGENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS18的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015196_i_at(e^-58期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsMADS45与新的水稻蛋白OsPN23495相互作用。OsPN23495是具有335个氨基酸的一种新的蛋白质。BLAST分析表明OsPN23495与从拟南芥中表达的蛋白质相似(GENBANK_登录号NM_129661，42.1％相同性，2e^-054)，对此在公众结构域中无可利用的信息。然而，还发现OsPN23495与两种水稻假设蛋白(Os006111-3329和Os020134-3170)相互作用，这两种蛋白与来自Curcurbita maxima的锌/DNA结合抗坏血酸氧化酶启动子结合蛋白(AOBP)相似，其包括一个Dof结构域锌指DNA结合结构域(就Os006111-33229而言第103-165位氨基酸，1.9e^-37；就Os020134-3170而言第101-163位氨基酸，3.8e^-38)。Dof结构域的存在提示这两个蛋白质是转录调节物。因此，根据其与这两种蛋白质及与OsMADS45的相互作用，新的蛋白质PN23495可以是参与调节控制植物发育的基因的一种新的转录因子。

OsPN23495-OsMADS45相互作用是一个新鉴别的相互作用。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23495的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS001986_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsMADS45与AP-1样MADS盒蛋白OsRAP1B相互作用。OsRAP1B(GENBANK_登录号AB041020)是具有246个氨基酸的蛋白质，由MADS盒基因家族的一个成员编码。其包括在第1和60位氨基酸之间的一个MADS盒结构域。Kyozuka et al.，2000鉴别OsRAP1B是拟南芥APETALA1(AP1)一种推定的水稻直向同源物，这是参与花器官相同性的特化的一类MADS盒基因。先前未报道过OsRAP1B-OsMADS45相互作用。

OsRAP1B还被构建作为饵。其相互作用子列于表9并在这个实施例的后文描述。这些OsRAP1B相互作用子包括OsMADS45的猎物克隆。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsRAP1B的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS003005.1_I_at(2e^-82期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在根和叶中表达，并在花，圆锥花序，和种子中更高程度表达。该基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导。

使用OsRAP1B作为饵的双杂交系统

构建含有水稻AP1样MADS盒蛋白RAP1B(OsRAP1B)的饵构建体以搜索相互作用蛋白质。这个蛋白质在这个实施例的前文针对OsMADS45的相互作用子加以描述。这个研究中使用的一些饵片段涵盖了OsRAP1B的第1-150位，第125-235位，第1-247位，第100-247位，第65-200位，及第30-180位氨基酸(见表9)。

发现编码OsRAP1B的第1-150位氨基酸的饵与转录因子Os008339的一个片段相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文针对饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。先前未报道过Os008339-OsRAP1B相互作用。

还发现编码OsRAP1B的第125-235位氨基酸的饵与水稻MADS盒样蛋白OsBAA81880相互作用。通过氨基酸序列分析确定OsBAA81880(GENBANK_登录号AB003322)是具有228个氨基酸的蛋白质，在第1和60位氨基酸之间具有一个MADS盒结构域(4.59e^-36)。该分析还检测了两个卷曲螺旋签名(第83-113位氨基酸和第140-174位氨基酸)。这些推定的卷曲螺旋区域与K-盒结构域(第73-173位氨基酸，3.80e^-32)重叠。OsBAA81880在文献中未加以描述；然而，MADS盒和K-盒的存在明显提示其是MADS盒家族的一个转录因子，其与OsRAP1B的相互作用很可能参与植物发育相关基因的转录调节。

还发现OsBAA81880与OsMADS6相互作用(见表10)。针对TMRI’sGENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsBAA81880的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS011977_i_at和OS011794_i_at(期望值分别为e^-25和e^-12)是最接近的匹配。这些probeset的期望值太低以至于不能是OsBAA81880基因表达的可靠指征。

还发现编码OsRAP1B的第1-247位氨基酸及OsRAP1B的第100-247位氨基酸的饵与水稻MADS-盒蛋白FDRMADS6相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文就作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。先前未报道过OsFDRMADS6-OsRAP1B相互作用。

还发现编码OsRAP1B的第1-247位氨基酸和OsRAP1B的第100-247位氨基酸的饵与水稻MADS盒蛋白OsFDRMADS8相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文就作为OsMADS45饵蛋白的相互作用子加以了描述。OsFDRMADS8-OsRAP1B相互作用代表先前未报道的一个异源二聚体。

还发现编码OsRAP1B的第1-247位氨基酸，OsRAP1B的第100-247位氨基酸，OsRAP1B的第65-200位氨基酸，及OsRAP1B的第125-235位氨基酸的饵与MADS盒蛋白OsMADS1相互作用。这个蛋白质在此就作为OsMADS45饵蛋白的相互作用子加以了描述。先前未报道过OsMADS1-OsRAP1B相互作用。

还发现编码OsRAP1B的第30-80位氨基酸，OsRAP1B的第1-247位氨基酸，OsRAP1B的第125-235位氨基酸的饵与水稻MADS盒蛋白OsMADS5相互作用。这个蛋白质在此就作为OsMADS45饵蛋白的相互作用子加以了描述。先前未报道过OsMADS5-OsRAP1B相互作用。

还发现编码OsRAP1B的第1-247位氨基酸的饵与水稻MADS盒蛋白OsMADS6相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文就作为OsMADS45饵蛋白的相互作用子加以了描述。先前未报道过OsMADS6-OsRAP1B相互作用。

还发现编码OsRAP1B的第1-247位氨基酸的饵与水稻MADS盒蛋白OsMADS7相互作用。通过氨基酸序列分析确定OsMADS7(GENBANK_登录号U78891)是具有259个氨基酸的蛋白质，在第11和71位氨基酸之间具有一个MADS盒结构域(3.22e^-40)。这个分析还预测了两个卷曲螺旋签名(第93-126和162-186位氨基酸)。这些卷曲螺旋与MADS盒结构域不重叠。OsMADS7，以及OsMADS8，基于序列同源而与AGL2基因家族在结构上相关，并且是一种花特异性MADS盒基因(Kang et al.，1997)。这两个基因均在从幼花阶段直至花发育的晚期阶段表达，转录物主要在心皮中检测，在花药中较弱(Kang et al.，1997)。为支持OsMADS7在花发育特别是在控制开花时间中具有重要作用，观测到工程化为表达OsMADS7基因的转基因烟草植物呈现提前开花及矮态(Kang et al.，1997)。先前未报道过OsMADS7-OsRAP1B相互作用。

还发现OsMADS7与OsMADS6相互作用(见表10)。针对TMRI’sGENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS8的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS014912_f_at(e^-61期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因在种子发育早期表达，并且不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

发现编码OsRAP1B的第1-247，30-180，100-247，和125-235位氨基酸的饵与水稻MADS盒蛋白OsMADS8相互作用。通过氨基酸序列分析确定OsMADS8(GENBANK_登录号U78892)是具有248个氨基酸的蛋白质，其包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸，3e^-40)。因此，OsMADS8是MADS盒蛋白家族的一个成员。氨基酸序列分析还预测了MADS盒结构域C末端的一个卷曲螺旋(第87-117位氨基酸)。这个卷曲螺旋很可能是在第73和176位氨基酸之间推定的K-盒的一部分(8.9e^-44期望值)。通过序列同源确定OsMADS8，以及OsMADS7，与AGL2基因家族在结构上相关，并且是一种花特异性MADS盒基因(Kang et al.，1997)。这两个基因均在从幼花阶段直至花发育的晚期阶段表达，转录物主要在心皮中可检测，在花药中较弱(Kang et al.，1997)。为支持OsMADS7和OsMADS8在花发育特别是在控制开花时间中具有重要作用，观测到工程化为表达这些基因的转基因烟草植物呈现提前开花及矮态(Kang etal.，1997)。先前未报道过OsMADS8-OsRAP1B相互作用。

还发现OsMADS8与饵蛋白OsMADS6(见表10)及OsMADS3(见表12)相互作用。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS8的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015209_at(e^-83期望值)是最接近的匹配。基因表达的时间和空间模式分析表明这个基因在种子发育早期表达。应答不同诱导剂的基因表达分析表明其不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

发现编码OsRAP1B的第1-247位氨基酸的饵与水稻MADS盒蛋白OsMADS17相互作用。通过氨基酸序列分析(4.31e^-41期望值)确定OsMADS17(GENBANK_登录号AF109153)是具有249个氨基酸的蛋白质，其包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)。因此，OsMADS17是MADS盒蛋白家族的一个成员。氨基酸序列分析还预测了位于MADS盒结构域C末端的一个卷曲螺旋(第122-178位氨基酸)。这个推定的卷曲螺旋很可能是在第72-174位氨基酸之间推定的K-盒的一部分(5.2e^-44)。OsMADS17基因与拟南芥AG的玉米同系物ZAG3同源，并且属于MADS盒基因的AP1/AGL9家族中的AGL6亚家族(Moon et al.，1999)。OsMADS17-OsRAP1B相互作用代表先前未报道过的一个异源二聚体。在筛选中挽回的OsMADS17猎物克隆包括推定的卷曲螺旋及OsMADS17中的大多数K-盒。

还发现OsMADS17与饵蛋白OsMADS5相互作用(见表13)。已经报道了OsMADS17与OsMADS6的相互作用(Moon et al.，1999)。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsMADS8的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000571_f_at(e^-60期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现编码OsRAP1B的第1-247，30-180，和125-235位氨基酸的饵与水稻MADS盒蛋白OsMADS45相互作用，这个蛋白质在这个实施例的前文已经加以描述。这个相互作用证实酵母双杂交系统中反向饵/猎物作用中使用的两种蛋白质之间的相互作用(见表1)。

还发现编码OsRAP1B的第1-247位氨基酸的饵与新的蛋白质OsPN22834相互作用，这是与Oshox6相似的一种蛋白质。OsPN22834是具有278个氨基酸的蛋白质，其在第70-131位氨基酸之间包括一个同源框结构域，在第1-93位氨基酸之间的一个转座酶8结构域，及在第129-167位氨基酸之间的一个bZIP转录因子结构域。Hox基因是经充分说明的在许多物种和器官系统中发育和模式形成的调节物(Fromental-Ramain et al.，1996；Godwin et al.，1998)。这些基因编码调节发育调节的基因表达的转录因子。与Hox蛋白相关的大多数公布的研究利用小鼠模型，Hox基因产物也已经示出调节植物发育(Holk et al.，1996)。OsRAP1B-OsPN22834相互作用代表先前未报道的MADS盒蛋白与hox基因产物的异源二聚体。

使用OsMADS6作为饵的双杂交系统

水稻MADS盒蛋白MADS6也用作饵蛋白以鉴别相互作用子。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以描述。这个研究中使用的饵片段编码第50-200位氨基酸，这是包括OsMADS6推定的卷曲螺旋和K-盒的一个序列。

发现OsMADS6与水稻OS008339 MADS盒转录因子(Os008339)相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以描述。Os008339-OsMADS6相互作用代表一个新鉴别的相互作用，其很可能参与水稻发育相关的基因的转录调节。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒样蛋白OsBAA81880相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵蛋白OsRAP1B的相互作用子加以描述。OsBAA81880-OsRAP1B相互作用代表先前未报道的一个异源二聚体。

还发现OsMADS6与水稻MADS-盒蛋白OsFDRMADS8相互作用。这个蛋白质在这个实施例中前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。先前未报道过OsFDRMADS8-OsMADS6相互作用。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒蛋白OsMADS1相互作用。这个蛋白质在这个实施例中前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。这个相互作用证实了Moon et al.，1999的前期工作，其使用酵母双杂交系统描述了相同的相互作用。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒蛋白OsMADS5相互作用。这个蛋白质在这个实施例中前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。这个相互作用证实了Moon et al.，1999的前期工作，其使用酵母双杂交系统描述了相同的相互作用。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒蛋白OsMADS7相互作用。这个蛋白质在这个实施例中前文作为饵蛋白OsRAP1B的相互作用子加以了描述。这个相互作用证实了Moon et al.，1999的前期工作，其使用酵母双杂交系统描述了相同的相互作用。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒蛋白OsMADS8相互作用。这个蛋白质在这个实施例中前文作为饵蛋白饵蛋白OsRAP1B的相互作用子加以了描述。这个相互作用证实了Moon et al.，1999的前期工作，其使用酵母双杂交系统描述了相同的相互作用。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒蛋白OsMADS15相互作用。这个蛋白质在这个实施例中前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。其与OsMADS6的相互作用证实了Moon et al.，1999的前期工作，其使用酵母双杂交系统描述了相同的相互作用。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒蛋白OsMADS18相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为OsMADS45的相互作用子加以了描述。其与OsMADS6的相互作用证实了Moon et al.，1999先前的工作，其使用双杂交系统描述了MADS18，以及MADS14，MADS15，和MADS17，是MADS6的相互作用子。

还发现OsMADS6与水稻MADS盒蛋白OsMADS45相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵加以了描述。OsMADS45-OsMADS6相互作用证实了使用OsMADS45作为饵观测到的相互作用，并代表一个新鉴别的相互作用。

还发现OsMADS6与新的蛋白质OsPN29949相互作用。OsPN29949是具有241个氨基酸的新蛋白质，其包括一个MADS盒结构域(第1-61位氨基酸)。这个结构域的存在提示这个蛋白质是MADS盒蛋白家族的一个成员。对相互作用的克隆进行的氨基酸对比分析(见图3A和3B)示出OsPN29949与OsMADS18具有高度序列相似性，OsMADS18是AP1样MADS盒蛋白SQUA亚家族的一个成员。因此OsPN29949可分类属于这个基因组群，已知其参与金鱼草的花器官原基的特化(参见Moon etal.，1999)。OsPN29949-OsMADS6相互作用代表一个新鉴别的异源二聚体，其很可能参与水稻发育相关基因的转录调节。

编码OsPN29949的第118-241位和第109-193位氨基酸的两个猎物克隆在筛选中挽回。这些序列提示负责OsPN29949-OsMADS6相互作用的结构域位于第118-193位氨基酸之间，包括K盒(第95-169位氨基酸；见图3A-3D序列分析)。在TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列上没有与OsPN29949基因匹配的。

还发现OsMADS6与水稻AP-样MADS盒蛋白OsRAP1B相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述，并也用作饵，其相互作用在这个实施例的前文也加以了报道。OsRAP1B-OsMADS6相互作用代表了先前未报道的一个异源二聚体。

还发现OsMADS6与水稻谷醇溶蛋白(OsRP5)相互作用。通过氨基酸序列分析确定谷醇溶蛋白(GENBANK_登录号AF156714，AAF73991)是具有156个氨基酸的蛋白质，具有一个可切割的信号肽结构域(第1-19位氨基酸)。谷醇溶蛋白是在谷类植物胚乳中独特的种子贮存蛋白。种子贮存蛋白由在种子发育期间合成的多肽链组成并作为发芽和秧苗生长的氨基酸的主要来源。谷醇溶蛋白聚集在衍生自内质网(ER)的蛋白质体。OsRP5中可切割的信号肽结构域的存在与谷醇溶蛋白的结构一致，其具有指导新翻译的动态进入ER的内腔及然后经蛋白酶解除去的信号肽。在ER中，谷醇溶蛋白形成聚集体并随后修剪形成被ER产生的膜环绕的蛋白质体(种子贮存蛋白的分子结构及其输送至种子中的液泡的机制见Buchanan et al.，2002所揭示)。OsRP5-OsMADS6相互作用代表一个先前未报道过的异源二聚体。

除了OsMADS6之外，发现谷醇溶蛋白OsRP5与水稻假设蛋白Os006111-3329相互作用，其与来自Curcurbita maxima的锌/DNA结合抗坏血酸氧化酶启动子结合蛋白(AOBP)相互作用，并包括一个Dof结构域锌指DNA结合结构域(第103-165位氨基酸，1.9e^-37)。 Dof结构域的存在提示Os006111-3329是一个转录调节物。谷醇溶蛋白与这个蛋白质及与OsMADS6的相互作用可代表控制种子发育的基因的转录调节步骤。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比谷醇溶蛋白的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000235_at(e^-155期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因不是由广泛的植物刺激，除草剂或应用的激素特异性诱导的。

使用OsFDRMADS8作为饵的双杂交系统

使用水稻MADS-盒蛋白FDRMADS8作为饵进行双杂交分析。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。筛选中使用的饵克隆编码OsFDRMADS8的第60-160位氨基酸。

发现OsFDRMADS8与OsMADS45相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵加以了描述。OsFDRMADS8-OsMADS45相互作用证实酵母双杂交系统中反向饵/猎物作用中使用的两个蛋白质之间的相互作用。

使用OsMADS3作为饵的双杂交系统

使用水稻MADS盒蛋白MADS3作为饵进行双杂交分析。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵蛋白OsMADS45的相互作用子加以了描述。筛选中使用的饵克隆编码OsMADS3的第70-170位氨基酸。

发现OsMADS3与MADS盒蛋白OsMADS8相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵蛋白OsRAP1B的相互作用子加以了描述。先前未报道过OsMAD8-OsMADS3相互作用。

还发现OsMADS3与OsMADS45相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为饵加以了描述。OsMADS45-OsMADS3相互作用证实了酵母双杂交系统中反向饵/猎物作用中使用的两个蛋白质之间的相互作用。

还发现OsMADS3与OsPN31165相互作用，这是具有301个氨基酸的蛋白质，与来自拟南芥的3个未知功能的蛋白质相似(第一个采样是未知蛋白质，GENBANK_登录号NP_565966，62％相同性；2e^-087)，通过BLAST分析确定。OsPN31165的功能未知，但其与OsMADS3的关联提示OsPN31165在植物发育特别是花发育中的作用。OsMADS3-OsPN31165相互作用代表一个新鉴别的异源二聚体。

使用OsMADS5作为饵的双杂交分析

使用OsMADS5作为饵进行双杂交分析。这个蛋白质在这个实施例的前文作为OsMADS45的相互作用子加以了描述。筛选中使用的饵克隆编码OsMADS5的第50-160位氨基酸。

发现OsMADS5与OsFDRMADS6相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为OsMADS45的相互作用子加以了描述。

OsFDRMADS6-OsMADS5相互作用代表了先前未报道过的一个异源二聚体。

发现OSMADS5与OsMADS13相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为OsMADS45的相互作用子加以了描述。先前未报道过OsMADS13-OsMADS5相互作用。

还发现OsMADS5与OsMADS17相互作用。这个蛋白质在这个实施例的前文作为OsRAP1B的相互作用子加以描述。先前未报道过OsMADS17-OsMADS5相互作用。

还发现OsMADS5与假设蛋白000564-1102(Os000546-1102)相互作用。Os000564-1102是具有262个氨基酸的新蛋白质，与来自水稻的14-3-3样同系物GF14-b蛋白相似(GENBANK_登录号AAB07456.1；98％相同性；1e^-141)，这是通过BLAST分析确定的。14-3-3蛋白包括两个高度保守的签名模式：第一个是位于N末端部分的具有11个氨基酸的肽；第二个是位于C末端部分的具有20个氨基酸的区域。Os000564-1102的氨基酸序列分析鉴别了一个从第49位氨基酸开始的14-3-3签名1，及从第221位氨基酸开始的14-3-3签名2。14-3-3家族成员与参与多种信号途径包括转录调节的蛋白质相互作用并从而对其加以调节。很可能Os000564-1102是一种14-3-3蛋白，其通过参与蛋白质-蛋白质相互作用而调节核活动如转录。假设OsMADS5参与花发育，则OsMADS5与Os000564-1102的相互作用很可能代表一个新鉴别的异源二聚体，参与控制与植物发育相关的转录活动，Os000564-1102调节14-3-3家族成员的MADS盒转录因子功能。

还发现OsMADS6与水稻假设蛋白BAB56078相互作用。这个蛋白质直接属于公布的结构域(GENBANK_登录号BAB56078)，在文献中未加以描述。然而，其与OsMADS5的关联提示OsBAB56078在植物发育中的作用，并且这种关联代表先前未报道过的一个异源二聚体。

还发现OsBAB56078与水稻14-3-3蛋白同系物GF14-b(OsGF14-b)相互作用，其受刺激和植物激素脱落酸的正调节(通过基因表达分析确定；见实施例V)，及与转录因子NAC2(OsORF01393-P14)相互作用。

使用OsMADS15作为饵的双杂交分析

使用OsMADS15作为饵进行双杂交分析。这个蛋白质在这个实施例的前文作为OsMADS45的相互作用子加以了描述。筛选中使用的饵克隆编码OsMADS15的第100-235位氨基酸。

发现OsMADS15与MADS盒蛋白OsMADS1相互作用。这个蛋白质作为OsMADS45的相互作用子加以了描述。OsMADS1-OsMADS15相互作用证实了Lim et al.，2000先前的工作，其描述了使用酵母双杂交系统将OsMADS15以及OsMADS14作为OsMADS1的相互作用子并确定当K结构域是这些蛋白质之间相互作用所必需的时，在K结构域之后的一个区域增加这种相互作用。

还发现OsMADS15与OsMADS45相互作用。这个蛋白质在此作为饵蛋白加以了描述。OsMADS45-OsMADS15相互作用证实了酵母双杂交系统中反向饵/猎物作用中使用的两个蛋白质之间的相互作用。

还发现OsMADS15与OsPN29971相互作用，通过BLAST分析确定这是具有108个氨基酸的蛋白质，其与来自拟南芥的着丝粒蛋白样蛋白相似(GENBANK_登录号191066.1；31.1％相同性；9e^-09)。着丝粒是与动粒相关的一个染色体区域，其富集蛋白质结构，所述结构是有丝分裂和减数分裂期间细胞骨架结构和染色体之间相互作用的主要部位。动物中着丝粒蛋白参与染色体分离及胞质分裂活动。OsPN29971可代表植物中一个新的着丝粒-动粒相关蛋白。其与MADS盒蛋白OsMADS15的关联代表一个新鉴别的异源二聚体，其很可能调节植物发育期间细胞分裂相关的转录活动。

小结

在双杂交筛选中使用OsMADS45，OsRAP1B，和OsMADS6作为饵分离的相互作用蛋白形成主要由MADS盒转录因子组成的一个网络。这表明MADS盒蛋白在酵母中彼此有效地相互作用，如先前所报道(Moonet al.，1999)。

发现的相互作用子是先前鉴别的MADS盒蛋白Os008339，OsFDRMADS6，OsFDRMADS8，OsMADS1，OsMADS3，OsMADS5，OsMADS6，OsMADS7，OsMADS8，OsMADS13，OsMADS14，OsMADS15，OsMADS17，OsMADS18，OsBAA81880，OsMADS45，OsRAP1B和OsMADS6，及新的蛋白质OsPN29949(其与OsMADS6相互作用)。因为已知MADS盒蛋白作为异源二聚体介导多种植物发育过程，并假设饵蛋白OsMADS45，OsRAP1B和OsMADS6参与花发育的调节，因此这个实施例中鉴别的MADS盒蛋白之间的相互作用很可能代表一个异源二聚体网络，其调节水稻中植物发育相关的基因的转录。这些相互作用有一些代表先前未报道的异源二聚体，如上述针对每个相互作用子的描述中所述。

本发明鉴别了5种额外的新相互作用子：OsPN23495是一种推定的转录调节物，通过与OsMADS45关联，其很可能参与花发育。OsPN22834是一种推定的hox基因产物。MADS盒蛋白和Hox基因产物均已熟知其在发育过程中的作用，MADS盒蛋白与植物中花和果实发育相关，Hox蛋白与植物中胚发育相关(Holk et al.，1996)。RAP1B与OsPN22834之间的相互作用可意味着一或这两种蛋白质在水稻植物发育中的先前未知的作用。Os000564-1102是一种推定的14-3-3蛋白，其大概调节与其相互作用的MADS盒转录因子OsMADS5的功能。OsPN29971是一种蛋白质，其与来自拟南芥的着丝粒样蛋白的相似性(尽管具有较低预期显著性)提示在细胞分裂活动中的作用。OsPN29971与MADS盒蛋白OsMADS15的相互作用很可能在植物发育相关的细胞分裂活动期间参与调节基因的转录。最后，OsPN31165是一种未知功能的蛋白质，其与OsMADS3相互作用很可能参与调节植物发育过程。这些新相互作用子与这个实施例中的MADS盒饵蛋白的关联代表新鉴别的异源二聚体。

这个实施例中报道的另一种新鉴定的异源二聚体是在OsMADS6与种子贮存蛋白谷醇溶蛋白(OsRP5)之间的二聚体。贮存蛋白的表达及其在发育中的种子中的出现时间是受转录和转录后双重调节的。已经鉴别了控制其时间和空间表达并确定种子和组织特异性的调节序列，认为贮存蛋白基因中的一个以上的调节区域(启动子)通过特异性DNA结合蛋白而参与这种调节(Buchanan et al.，2002)。发现谷醇溶蛋白OsRP5与OsMADS6相互作用及与另一种转录调节物相互作用(未包括在这个实施例中)。这些相互作用可能代表种子发育相关的谷醇溶蛋白表达的转录调节步骤。或者，MADS盒蛋白可通过与谷醇溶蛋白相互作用而隔离，与贮存蛋白一起贮存，在种子萌发时利用。在另一种情况中，这种相互作用意味着OsMADS6除了花发育之外在种子发育中的先前未报道的作用。

在这个实施例的MADS盒蛋白中鉴别的卷曲螺旋(s)/K-盒很可能促进MADS盒蛋白相互作用。对由相互作用克隆编码的区域进行的氨基酸序列对比分析表明所有克隆均共有一个高度保守的MADS结构域，一个低保守的K盒，及更可变的I区域(MADS结构域的直接下游)和C末端结构域，与在针对MADS盒蛋白的文献中报道的模块结构一致(Moon etal.，1999；Lim et al.，2000)。序列对比如图3A-3D所示。这个分析还确定了所有相互作用片段包括至少K盒，提示这个结构域负责二聚化，如先前报道所述。另外，从这些对比中构建了一个系统发生树以例证相互作用蛋白质之间的关系(如图3E所示)。基于先前的报道(Moon et al.，1999)，系统发生树表明OsMADS45，OsMADS7，OsMADS8，OsMADS1和OsMADS5是AGL2亚家族的成员；OsMADS6和OsMADS17属于AGL6亚家族；OsFDRMADS6，OsMADS14，RAP1B，OsMADS15，OsMADS18和新的蛋白质OsPN29949属于SQUA亚家族，所有这些亚家族均包含在MADS盒基因的AP1/AGL9家族中。剩余的相互作用子-OsMADS13，OsMADS3，OsFDRMADS8，OsBAA81880和Os008339-分类为其它类别。

已知分离自一些植物物种的MADS盒基因在植物发育尤其在花发育中起重要作用。关于调节发育过程如花和果实发育及开花时间的基因的知识在农业学具有重要应用价值，提供了控制花和果实产生的新方法。例如，一种突变的MADS-盒基因，拟南芥突变体PI的苹果PI同系物(MdPI)(其导致无花)，废除了MdPI基因的正常表达，导致在一些苹果品种中出现单性果实(没有种子的果实)(Yao et al.，2001)。单性果实不用授粉或授精而发育，与其具有种子的相比具有较高的商业价值。MdPI序列的鉴别提出了遗传工程学方法以产生单性果实栽培变种。

作为人类的主要原材料之一，水稻是遗传工程的目标以获得更高的产量及对多种疾病、有害物和环境刺激的抗性。由MADS基因编码的蛋白质调节发育过程如花器官相同性、开花时间及果实发育相关的基因的转录。这个实施例中鉴别的水稻MADS盒转录因子之间的相互作用与农业相关。这些相互作用的调节可以用于产生遗传工程化的植物，特征在于花发育被调节。因为水稻是其它谷类植物的一个模型，因此控制水稻发育的遗传机制的知识将有机会获得增强的食物农作物。

例如从营养生长至开花的过渡时间选择是植物发育中最重要的步骤之一。这个步骤决定了大多数农作物物种的性质和数量，通过影响营养生长和生殖生长之间的平衡而进行。因此，遗传工程化的谷类农作物中开花时间的控制在农业学中很重要。具有经济学价值的一种遗传修饰是加速植物的开花时间。开花的诱导通常是生长中的农作物的限制因素。控制开花诱导的最重要因素之一是日照的长度，其随着季节和地理位置而变化。需要揭示控制和诱导植物开花的方法，而不论场所或环境条件如何，从而使得农作物在任何给定的时间产生。由于大多数农作物产品(例如种子，谷类，果实)得白花，因此控制开花的这种方法的具有重要经济学价值。鉴别调节植物开花时间的基因并提议用于产生遗传修饰的植物，其中这个基因的过表达导致在拟南芥中提前开花，而基因丧失功能突变或基因的反义则导致延后开花(见美国专利申请No.20010049831所述)。与水稻的OsMADS1，OsMADS5，OsMADS6，OsMADS7和OsMADS8基因及烟草的NtMADS3基因相关的分离的核酸和方法也已经提供，其在转基因植物中的表达产生一种改变的表型，包括与营养生长和生殖生长之间过渡时间选择相关的表型(例如降低的顶端优势，提前开花，部分或完全改变的开花昼长需求，较高的同步开花，或者不严格的春化需求；见美国专利No.5,990,386所述)。针对OsMADS1，OsMADS5，OsMADS6，OsMADS7和OsMADS8在这个实施例中鉴别的蛋白质相互作用的调节，可以导致在谷类农作物中控制花诱导。另外，植物发育的调节可以通过化合物的鉴别和应用而实现，所述化合物可影响这个实施例中提供的蛋白质的活性或基因的表达。

在另一种潜在的应用中，MADS盒蛋白中存在的植物特异性K-盒结构域可用于揭示增加果实产生的数量或质量但不影响人或家畜的化合物。另外，因为K-盒结构域是MADS盒蛋白的一个区域，其赋予蛋白质结合特异性，这些结构域，部分或全部，可以进行遗传修饰，目的是操纵通过特异性MADS盒蛋白质-蛋白质的相互作用赋予的性状。

实施例IV

植物发育也可以通过含有同源框结构域的蛋白质影响。如Gehring，1992所述，这种含有同源框结构域的蛋白质是DNA结合转录调节物，有许多参与发育过程。这种蛋白质已经在植物中鉴别(见例如Ruberti etal.，1991；Vollbrecht et al.，1991所述)。同源框基因特征在于非常保守的序列的每个基因内存在同源框，其编码称为同源域的具有61个氨基酸的DNA结合结构域。由同源框基因编码的含有同源域的蛋白质因此能结合特异性DNA序列并作为控制下游基因表达的转录因子以调节发育。在高等植物中，同源域蛋白主要参与器官发生或发育过程(见下文参考文献)，并还参与发病机理相关的防御应答(Korfhage et al.，1994)。然而由含有同源域的蛋白质直接调节的靶基因仍未大量鉴别(Mannervick，1999)。

植物同源框基因(参见Chan et al.，1998)根据同源域内的序列保守情况及额外序列的存在可以再分为不同家族(Hd-Zip，Glabra，Knotted，PHD指(finger)，Bell，Zmbox-PHD)。植物特异性 knotted-like同源框(KNOX)类别的同源框基因含有位于同源域上游的一个保守的结构域，KNOX结构域。植物KNOX基因属于同源框基因的TALE超类(superclass)，其还包含在动物和真菌中鉴别的基因(Burglin et al.，1997)。已经在众多的植物中，在单子叶植物如水稻和玉米，及双子叶植物如拟南芥和番茄中鉴别了KNOX基因；它们在分生组织中正常表达并认为其主要参与茎和叶的发育，特别是在茎分生组织中控制细胞命运(Chan et al.，1998)。首先鉴别的植物同源框基因，knotted1(kn1；Vollbrecht et al.，1991)分离自玉米，提供了植物同源框基因与动物的相似在调节发育过程中起重要作用的迹象。玉米kn1基因(及相关的双子叶植物基因)的异位表达通常导致双子叶植物叶片中新分生组织的组织化，但通常在单子叶植物中不发生(Sinha et al.，1993；Lincoln et al.，1994；Hake et al.，1995；Muller et al.，1995；Haraven et al.，1996；Williams-Carrier et al.，1997)。玉米kn1基因丧失功能突变导致茎分生组织保持中产生缺陷(Kerstetter et al.，1997)。Kn1属于同源框基因的植物特异性KNOX类别。在玉米中鉴别的其它KNOX基因包括rough sheath 1(rs1)和liguleless3(Lg3)(参见Chan et al.，1998；Muehlbauer et al，1999所述)，认为其参与晚期器官发育并特别地参与延迟末期区域相同性的获得。

基于序列同源和表达模式，将KNOX基因分为两类：I和II(Kerstetter et al.，1997；Chan et al.，1998)。I类基因主要在营养和花序分生组织中表达并参与调节茎顶端分生组织形成和功能及参与叶和花的形态。较少鉴定的II类KNOX基因在大多数植物器官和组织中表达，在分生组织中不表达，认为它们调节发育的晚期阶段。另外，当在转基因植物中异位表达时，分析的所有I类基因产生相似的和独特的表型作用，如叶片中发育混乱导致形态学缺陷。例如，玉米突变体rough sheath 2(rs2)表现为至少三个KNOX基因的异位表达及因此的茎和叶表型的一系列情况，包括异常的维管发育，叶舌置换，及矮态(Schneeberger et al.，1998)。这些研究提示KNOX基因表达的负调节是正常叶产生和发育所必需的。相反，在异位表达II类基因的植物中无发育缺陷。

蛋白质-蛋白质相互作用可有助于KNOX蛋白的功能，这是通过两个水稻KNOX I类蛋白形成同源或异源二聚体的能力而表明的(Postma-Haarsma et al.，2002)。除了同源域之外，KNOX蛋白含有保守的ELK和KNOX结构域，后者含有一个推定的螺旋结构，提示在蛋白质-蛋白质相互作用中的功能(Postma-Haarsma et al.，2002)。根据同源框基因在控制植物发育中的重要性，本发明的相互作用研究针对鉴定水稻同源框蛋白OsHOS59，这是II类KNOX基因的一个成员，在文献中未加以描述。编码参与水稻同源框调节的蛋白质的基因的鉴别使得可以遗传操纵农作物，以达到植物生长或发育中农业学希望的改变。

这个实施例提供了新鉴定的与水稻同源框蛋白HOS59(OsHOS59)相互作用的水稻蛋白。使用自动的高通量酵母双杂交分析技术(由MyriadGenetics Inc.，Salt Lake City，Utah，United States of America提供)搜索与饵蛋白OsHOS59相互作用的蛋白质。

结果

发现OsHOS59与在公众结构域中有注解的5种蛋白质相互作用：发现与GTP酶激活蛋白相似的一种假设蛋白(OsAAD27557)；一种推定的肌球蛋白(OsAAG13633)；一种推定的同源域蛋白(OsAAK00972)；推定的真核翻译起始因子3大亚基；及水稻可能的Myb因子。OsHOS59的7种额外的相互作用子是新的水稻蛋白：热激样蛋白(Os000221-3976)；与橡胶树乳胶丰富蛋白相似的一种蛋白质(OsPN23251)；一种推定的S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(OsPN23829)，这是在控制甲基化中起作用的一种酶；一种推定的PHD-指蛋白(OsPN23830)；与上述肌球蛋白OsAAG13633相似的一种肌球蛋白(OsPN24092)；及两种未知功能的蛋白质(OsPN23388和OsPN30858)。针对一些猎物蛋白鉴别了额外的相互作用子。

这个实施例的相互作用蛋白示于表15，随后是每个蛋白质的详细信息及关于相互作用意义的讨论。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO：67-80和257-268中提供。

鉴别的一些蛋白质代表先前未鉴定的水稻蛋白质。基于其推测的生物学功能及猎物蛋白与饵蛋白OsHOS59特异性相互作用的能力，推测相互作用蛋白与水稻发育过程相关。

表15

针对HOS59鉴别的相互作用蛋白

(同源框蛋白HOS59，片段)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由研究中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsHOS59PN20559(SEQ ID NO：258)	水稻同源框蛋白HOS59，片段(BAB55659.1)
				相互作用子
OsAAD27557*PN22896(SEQ ID NO：260)	水稻假设蛋白，与GTP酶激活蛋白相似(AF111710；AAD27557)	1-100	7-142(输入性状)

OsAAG13633#PN25701(SEQ ID NO：262)	水稻推定的肌球蛋白(AC078840；AAG13633)	1-100	799-951(输出性状)
				OsAAK00972PN23253(SEQ ID NO：264)	水稻推定的同源域蛋白质OsAAK00972(AC079736；AAK00972.1)	1-100	236-350(输出性状)
OsBAB07943PN23832(SEQ ID NO：266)	水稻推定的真核翻译起始因子3大亚基(AP002487；BAB07943.1)	1-100	525-767(输出性状)
				OsMYBPN20689(SEQ ID NO：268)	水稻可能的Myb因子(T03830)	1-100	36-129(输出性状)
Os000221-3976&PN23169(SEQ ID NO：68)	假设蛋白000221-3976，片段，与OsHP82相似(P33126；e＝0.0)	1-100	2x123-238(输入性状)
				OsPN23251(SEQ ID NO：70)	新的蛋白质PN23251	1-206	112-291(输入性状)
OsPN23388(SEQ ID NO：72)	新的蛋白质PN23388	1-100	229-331(输出性状)
				OsPN23829@(SEQ ID NO：74)	新的蛋白质PN23829推定的s-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(P32112；e＝0.0)	1-100	3x2-226(输出性状)
1-206	3x1-247(输出性状)
		OsPN23830！(SEQ ID NO：76)	新的蛋白质PN23830，与推定的PHD-指状蛋白相似(NP_566742.1；2e-73)			1-100	4-2072x1-169(输出性状)
OsPN24092(SEQ ID NO：78)	新的蛋白质PN24092，与水稻推定的肌球蛋白相似			1-100	797-948(输出性状)
		OsPN30858(SEQ ID NO：80)	新的蛋白质PN30858			1-206	230-400(输出性状)

^*针对OsAAD27557鉴别的额外的相互作用示于表16

#针对OsAAG13633鉴别的额外的相互作用示于表17

&针对Os000221-3976鉴别的额外的相互作用示于表18

@针对OsPN23829鉴别的额外的相互作用示于表19

！针对OsPN23830鉴别的额外的相互作用示于表20

表16

针对AAD27557鉴别的相互作用蛋白

(与GTP酶激活蛋白相似的假设蛋白)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白
OsAAD27557PN22896(SEQ ID NO：260)	与GTP酶激活蛋白相似的假设蛋白(AF111710；AAD27557)
				饵蛋白
Os003181-3684PN21036(SEQ ID NO：82)	假设蛋白003181-3684	58-140	1-149(输出性状)

表17

针对AAG13633鉴别的相互作用蛋白

(推定的肌球蛋白)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白
OsAAG13633PN25701(SEQ ID NO：262)	水稻推定的肌球蛋白(AC078840；AAG13633)
				饵蛋白
Os005750-3115PN20466(SEQ ID NO：270)	水稻bZIP转录因子(AB051294；BAB72061.1)	50-150	2x528-789538-738612-738(输出性状)

表18

针对000221-3976鉴别的相互作用蛋白

(假设蛋白000221-3976，片段)

基因名称

蛋白质名称(GENBANK_登录号)

饵坐标

猎物坐标(来源)

猎物蛋白
				Os000221-3976PN30899(SEQ ID NO：24)	假设蛋白000221-3976，片段，与OsHP82相似(P33126；e＝0.0)
饵蛋白
				OsCYCOS2PN20257(SEQ ID NO：210)	水稻细胞周期蛋白2(X82036；CAA57556)	50-233	163-313(输入性状)

表19

针对PN23829鉴别的相互作用蛋白

(新的蛋白质PN23829推定的S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白
OsPN23829(SEQ ID NO：74)	新的蛋白质PN23829推定的S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(P32112；e＝0.0)
				饵蛋白
OsTFX1PN19697(SEQ ID NO：272)	水稻推定的转录因子X1(AF101045；AAF21887)	400-629	-21-216-4-226-2-195(输出性状)
				Os005792-3529PN20080(SEQ ID NO：274)	假设蛋白005792-3529，与水稻受体激酶相似(AAK18840.1；8e-07)	1-55	3-220(输出性状)

表20

针对PN23830鉴别的相互作用蛋白

(与拟南芥推定的PHD-指状蛋白相似)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白

OsPN23830(SEQ ID NO：76)	新的蛋白质PN23830，与拟南芥推定的PHD-指状蛋白相似(NP_566742.1；2e-73)
				饵蛋白
Os018049-3655PN20534(SEQ ID NO：176)	假设蛋白018049-3655，片段，水稻推定的同源域转录因子，3′-部分(AC092697；AAL58126.1)	1-148	89-250(输出性状)

使用OsHOS59作为饵的双杂交分析

通过氨基酸序列分析确定OsHOS59是具有205个氨基酸的蛋白质片段，具有一个在第122-185位氨基酸的同源框结构域(Gehring，1992；Gehring&Hiromi，1986；Schofield，1987)。这组内的蛋白质是参与发育过程的DNA结合转录调节物。氨基酸序列的BLAST分析表明OsHOS59是水稻KNOX家族II类同源域蛋白(GENBANK_登录号BAB55659.1)。分析表明与OsHOS59接近同源的所有蛋白质也是同源域蛋白，特别是来自植物物种的蛋白质。这显然提示OsHOS59尽管在文献中未加以描述，但是一种水稻同源框蛋白，其最可能与这个蛋白质家族其它成员功能相似。

关于II类KNOX基因的作用没有更多的证据。然而，基于对来自拟南芥的II类KNAT3基因的研究，发现其在幼叶、芽和花梗中，在器官之间的结合处及在成熟组织中表达，并且其表达受光的调节，这提示II类KNOX基因参与植物发育晚期调节(见Chan et al.，1998所述)。

在酵母双杂交筛选中使用编码OsHOS59第1-100位和第1-206位氨基酸的两个片段。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsHOS59的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS011682 at和OS002989.1_i_at(期望值分别为e^-100和7e^-26)是最接近的匹配。水稻植物中基因表达分析表明这个基因受寒冷环境及脱落酸和茉莉酮酸的负调节。

发现OsHOS59与OsAAD27557相互作用。OsAAD27557是茎注解的一种水稻假设蛋白(GENBANK_登录号AAD27557)。通过氨基酸序列分析确定其是具有789个氨基酸的蛋白质，具有在第214-241位氨基酸之间的一个亮氨酸富集重复(1.28e^-03期望值)。认为亮氨酸富集重复参与蛋白质-蛋白质相互作用(Kobe et al.，1994)。针对公布的数据库进行的BLAST分析表明OsAAD27557的氨基酸序列与来自植物Medicago sativasubsp.x varia的Ran GTP酶激活蛋白的氨基酸序列(GENBANK_登录号AAF19528.1，66.4％相同性，e＝0.0)及来自拟南芥的GTP酶激活蛋白2(GENBANK_登录号NP_197433，62％相同性，e^-179)的相似。与这些结果一致，针对Myriad’s专有数据库进行的BLAST分析表明人RanGTP酶激活蛋白1(RANGAP1)是与OsAAD27557最相似的蛋白质(28％相同性，5e^-24)。GTP酶激活蛋白与GTP酶如Ras相互作用，从而增强GTP酶活性(Bischoff et al.，1994)。GTP水解为GDP在许多细胞内信号转导途径中是一个重要的步骤，控制多种细胞过程如细胞生长和发育，编程性细胞死亡，脂质代谢，细胞结构，膜运输，及转录调节(Aznar&Lacal，2001)。Ran GTP酶是核-胞质转运、细胞周期行进的调节、有丝分裂纺锤体形成及有丝分裂后核装配所需要的(参见Sazer&Dasso，2000，和Dasso，2000所述)。认为植物Ran蛋白是其哺乳动物和酵母同系物的功能等价物，并且是保持同等细胞周期、蛋白质输入细胞核及有丝分裂发生所必需的(Ach&Gruissem，1997；Merkle et al.，1994)。另外，植物小GTP结合蛋白与疾病抗性相关(Ono et al.，2001)。因此，猎物蛋白OsAAD27557是一种水稻GTP酶激活蛋白，其很可能参与信号转导，包括在细胞分裂相关的活动期间GTP水解，作为植物发育和/或应答病原体入侵的一部分。

OsAAD27557还与假设蛋白003181-3684相互作用(Os003181-3684；见表16)。Os003181-3684是具有176个氨基酸的假设蛋白，其包括一个推定的跨膜结构域(第43-59位氨基酸)。氨基酸序列的BLAST分析表明在公众或Myriad’s专有数据库中均没有与Os003181-3684高度相似的蛋白质。然而，推定的跨膜结构域提示这个蛋白质可以是一些类型的细胞表面受体或者受体相互作用蛋白质，其对信号转导很重要。OsAAD27557-Os0031813684相互作用可代表信号转导途径包括GTP水解和发育过程转录调节的一个步骤。

还发现OsHOS59与水稻推定的肌球蛋白(OsAAG13633)相互作用。针对OsAAG13633的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个猎物蛋白是水稻推定的肌球蛋白(GENBANK_登录号AAG13633，100％相同性，e＝0.0)。肌球蛋白在实施例I中论述。基于关于植物肌球蛋白的现有知识，猎物蛋白OsAAG13633可以是细胞骨架成分，参与植物发育期间胞质流动或细胞分裂相关的活动。

OsAAG13633还与水稻bZIP转录因子(Os005750-3115；见表17)相互作用。Os005750-3115是具有333个氨基酸的蛋白质，具有一个推定的碱性亮氨酸拉链(bZIP)结构域(第45-108位氨基酸，1.54e^-6；见Hurst，1995；Ellenberger，1994所述)。这个结构域包括一个碱性DNA结合区域和一个亮氨酸拉链，用于起始蛋白质-蛋白质相互作用，通常发现其在转录因子中。对Os005750-3115的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个蛋白质是水稻bZIP转录因子(GENBANK_登录号BAB72061.1，99.3％相同性，e＝0.0)。

还发现OsHOS59与OsAAK00972相互作用，通过氨基酸序列分析确定OsAAK00972是具有642个氨基酸的蛋白质，其包括一个同源框结构域(Prosite确定为379-442位氨基酸，Pfam确定为406-441位氨基酸)。这个分析还鉴别了一个位于第188-333位氨基酸之间的一个POX结构域(与HOX结构域相关的一个结构域)(1.36e^-56)。挽回的猎物克隆编码OsAAK00972的第236-350位氨基酸，这是包括OsAAK00972的POX结构域的一个区域。Hox基因簇集成为含有同源框的基因，在动物发育中起重要作用(Mann&Affolter，1998)。对OsAAK00972的氨基酸序列进行BLAST分析表明这是水稻推定的同源域蛋白(GENBANK_登录号AAK00972.1，100％相同性，e＝0.0)。OsAAK00972因此是同源框蛋白家族的一个成员。

还发现OsHOS59与OsBAB07943相互作用，这是具有984个氨基酸的蛋白质，具有一个推定的跨膜结构域(第316-332位氨基酸)。其序列分析还鉴别了一个PINT(蛋白酶体，Int-6，Nip-1和TRIP-15)基序(第441-532位氨基酸，3.91e^-07)，其存在于26S蛋白酶体和其它蛋白质的一些调节成分的C末端区域中。这个基序的功能还未知。这个分析还推定三个卷曲螺旋(第91-123位，第552-700位，及第794-963位氨基酸)。挽回的猎物克隆编码OsBAB07943的第525-767位氨基酸，这是包括OsBAB07943内推定的卷曲螺旋之一的一个区域。PINT基序的存在与BLAST分析的结果一致，这表明OsBAB07943是水稻推定的真核翻译起始因子3(eIF3)大亚基(GENBANK_登录号BAB07943.1，100％相同性，e＝0.0)，eIF3e与Int-6的产物同源(eIF3e；Shalev et al.，2001)。这个分析还表明OsBAB07943与其它物种包括玉米(Zea mays)(GENBANK_登录号AAD39834，69％相同性，e＝0.0)及烟草(GENBANK_登录号Q40554，66％相同性，e＝0.0)的真核翻译起始复合物相似。因此，很可能OsBAB07943真是一种水稻翻译起始因子亚基。

哺乳动物真核起始因子3(eIF3)由至少8个亚基组成，最大的一个具有180kDa的相对分子量。来自几个物种的相应eIF3大亚基的序列对比得出的结论是eIF3大亚基在动物、植物和真菌王国中是高度保守的(Johnson et al.，1997)。在玉米中，真核翻译起始因子3大亚基在围绕中柱的根分生组织的区域中及在幼根、雄性花序及发育中的穗轴和种子中表达(Sabelli et al.，1999)。真核起始因子复合物起始mRNA的翻译(参见Hannig et al.，1995所述)，部分通过使用其螺旋酶活性以伸直mRNA的5’非翻译区中mRNA链二级结构，这促进mRNA与40S核糖体亚基的结合(Rogers et al.，2001)。另外，人体中eIF3在一些情况中是由蛋白质-蛋白质相互作用调节的(Guo et al.，2000)。

还发现OsHOS59与水稻Myb因子(OsMYB)相互作用。对OsMYB的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个猎物蛋白是水稻可能的Myb因子(GENBANK_登录号T03830，100％相同性，e^-168)。OsMYB是具有279个氨基酸的蛋白质，其包括一个ATP/GTP结合位点基序A(P-环，第45-52位氨基酸(见例如Saraste et al.，1990；Koonin，1993)和两个Myb DNA结合结构域重复(签名1为第17-25位氨基酸，签名2为第89-112位氨基酸；见例如Grotewold et al.，1991；Oppenheimer et al.，1991所述)。挽回的猎物克隆编码OsMYB的第36-129位氨基酸，这是包括P-环和Myb DNA结合结构域签名2的一个区域。Myb蛋白是核DNA-结合蛋白，其识别序列pyAAC(G/T)G(Biedenkapp et al.，1988)。两个Myb DNA结合签名的存在提示OsMYB是Myb蛋白的两个重复家族的一个成员。这些重复的数目决定了蛋白质怎样结合DNA及因此的功能(参见Jin&Martin，1999所述)。

还发现OsHOS59与Os000221-3976相互作用，通过氨基酸序列分析确定这是具有480个氨基酸的蛋白质片段，其包括一个Hsp90结构域(第6-480位氨基酸)(e＝0.0)。针对公众的和Myriad’s专有的数据库进行的BLAST分析示出Os000221-3976与许多热激蛋白呈现氨基酸序列相似性，最高采样是水稻热激蛋白82(Van Breusegem et al.，1994；GENBANK_登录号P33126，96.4％相同性，e＝0.0)。因此，Os000221-3976是热激蛋白82的一种剪接变体或者是一种单独但非常相似的蛋白质。核苷酸序列对比提示后者是更可能的情况。水稻HSP82 mRNA基于热激而特异性诱导(Van Breusegem et al.，1994)。

尽管热激蛋白(HSP)被认为在植物应激反应中具有主要作用，但这些蛋白质中有一些仅基于序列同源而称作HSP，其在植物中的功能在体外还未论证。事实上，一些HSP在整个发育期间表达。HSP起分子侣伴的作用，促进正确的蛋白质折叠并可以具有与应激反应不相关的作用。例如HSP70蛋白是正常细胞功能所必需的。它们是ATP依赖性分子侣伴，可与许多不同的蛋白质相互作用，在蛋白质折叠、伸展、装配和解体中起作用。这些主题在Buchanan et al.，2002，在第1197-1202页加以论述。提议海胆细胞中热激蛋白HSP70当定位于中心体时在微管蛋白折叠中具有侣伴作用，当定位于纺锤体丝和星体时在有丝分裂器的装配和解体中具有侣伴作用(Agueli et al.，2001)。

热激蛋白Os000221-3976还与水稻细胞周期蛋白2(OsCYCOS2；见表18)相互作用。具有419个氨基酸的蛋白质OsCYCOS2(GENBANK_登录号CAA57556)是G2/M型细胞周期蛋白，其含有跨越第200-284位氨基酸(2.7e^-26)和第297-379位氨基酸(1.29e^-22)的两个细胞周期蛋白结构域。G2/M型细胞周期蛋白在植物发育期间调节细胞周期从G2行进至有丝分裂。细胞周期蛋白是调节蛋白质，其激活细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)，是真核细胞中细胞周期行进所必需的。认为细胞周期蛋白与特异性蛋白质的结合提供了CDK的潜在底物。细胞周期蛋白因此是重要的调节物，其结合影响植物生长的许多环境和发育的增殖控制(细胞周期蛋白-CDK复合物在调节植物细胞周期中的作用参见John et al.，2001和Potuschak&Doerner，2001所述；针对OsCYCOS2鉴别的相互作用在以上实施例II中论述)。

还发现OsHOS59与OsPN23251相互作用，这是具有420个氨基酸的蛋白质，具有在第19-20位氨基酸之间的一个可能的切割位点，尽管没有N末端信号肽。OsPN23251氨基酸序列的BLAST分析确定其与来自橡胶树Hevea brasiliensis的乳胶丰富的蛋白质相似(GENBANK_登录号AAD13216.1，62％相同性，e^-141)。分离自乳胶的许多蛋白质是防御相关的变应原(Kostyal et al.，1998)。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23251的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset Os004430.1_at(e＝0.0期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明整个基因在根中特异性表达。

还发现OsHOS59与新的蛋白质OsPN23388相互作用。OsPN23388是具有509个氨基酸的蛋白质，具有一个推定的BRCA1 C末端(BRCT)结构域(第1-42位氨基酸，5.2e^-05)，已知其促进蛋白质-蛋白质相互作用。这个结构域最初是在乳腺癌/卵巢癌抑制蛋白BRCA1中鉴别，并且在参与DNA修复、重组和细胞周期控制的大量蛋白质中发现(Zhang etal.，1998)。这些包括p53-结合蛋白(53BP1)及两个未鉴定的假设蛋白(KIAA0170和SPAC19G10.7)(Callebaut&Mornon，1997)。针对Genpept数据库进行的BLAST分析表明OsPN23388与未知功能的两种拟南芥蛋白相似：假设蛋白(GENBANK_登录号NP_180195，49.3％相同性，e^-114)和假设蛋白T15B3.70(GENBANK_登录号T48947，44％相同性，e^-72)。

还发现OsHOS59与OsPN23829相互作用，这是具有485个氨基酸的蛋白质。其氨基酸序列分析鉴别一个S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶签名1(第85-99位氨基酸)和一个S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶签名2(第262-278位氨基酸)(见Sganga et al.，1992)。与存在这些签名一致，针对Genpept数据库的BLAST分析表明OsPN23829的氨基酸序列与来自一些其它物种包括普通小麦(最高采样，GENBANK_登录号P32112，95.2％相同性，e＝0.0)，芦笋(GENBANK_登录号CAA03454，90％相同性，e＝0.0)和长春花(Catharanthus roseus)(GENBANK_登录号S38379，90％相同性，e＝0.0)的S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的氨基酸序列相似。与这些结果一致，Myriad’s专有数据库中最相似的蛋白质是普通小麦S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(92％相同性，e＝0.0)。

S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶在激活的甲基循环中是一种关键的酶，其参与S-腺苷-甲硫氨酸的产生(参见Kawalleck et al.，1992)，其命运对蛋白质合成或DNA修饰很重要。这种酶将S-腺苷-L-高半胱氨酸水解为腺苷和L-高半胱氨酸(需要NAD作为辅因子的一个反应)，并因此在正常细胞代谢中起重要作用。因为S-腺苷-L-高半胱氨酸是S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖性甲基转移酶反应的竞争性抑制剂，因此认为S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶在通过调节S-腺苷-L-高半胱氨酸的胞内浓度而控制甲基化中起重要作用。转甲基作用反应在大多数植物细胞中是生物合成机制的重要成分。由S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶介导的胞内甲基化反应的调节与inplanta形态发生相关联。甲基化的反常导致在表达S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因的反义RNA的转基因烟草中形态学改变，包括花同源异型改变(Tanaka et al.，1997)。另外，S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶在植物病原体诱导的防御应答中的作用已经基于观测到激发物(elicitor)处理诱导S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶mRNA在欧芹培养的细胞和完整的叶中的表达及活性而提示(Kawalleck et al.，1992)。相反，S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶活性可参与导致病毒感染的机制，因为抗病毒化合物的效力与其抑制其活性的能力相关(Robins et al.，1998；Liu et al.，1992；Wolf&Borchardt，1991；Kitade et al.，1999)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23829的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset Os001768.1_at(e＝0.0)期望值)是最接近的匹配。基因表达分析表明这个基因是由茉莉酮酸及由稻瘟霉诱导的，稻瘟霉是导致水稻黑锈病(blast disease)的真菌病原体。

OsPN23829还与水稻推定的转录因子X1(OsTFX1；GENBANK_登录号AAF21887.1)，与假设蛋白005792-3529(Os005792-3529；见表19)相互作用。OsTFX1是一种未鉴定转录因子。其可以与OsPN23829和OsHOS59均形成一种复合物以调节与细胞周期/发育相关的转录活动。Os005792-3529是具有54个氨基酸的一种假设蛋白，其中未鉴别出能够被充分表征的蛋白质结构域。分离的cDNA序列从推定的ATG起始密码子开始，远离以5’方向潜在的读框，提示真正的蛋白质也许超过54个残基。对可获得的氨基酸序列进行BLAST分析表明Os005792-3529与来自水稻的一种推定的受体激酶相似(GENBANK_登录号AAK18840.1，72％相同性，8e^-07)。然而，注意与推定的受体激酶AAK18840.1相似的结构域长度仅为36个残基。

还发现OsHOS59与新的蛋白质PN23830相互作用，其与推定的拟南芥PHD-指状蛋白OsPN23830相似。OsPN23830是具有253个氨基酸的蛋白质。其氨基酸序列分析鉴别一个另一个PHD结构域(植物同源域，Pascual et al.，2000；Aasland et al.，1995；第199-246位氨基酸，e^-10)。PHD指结构域的存在与BLAST分析一致，表明OsPN23830与拟南芥推定的PHD-指状蛋白相似(GENBANK_登录号NP_566742.1，53.8％相同性，2e^-73)。PHD指是一个Cys⁴-His-Cys³锌指，主要在广泛的染色质相关蛋白质中发现，包括HAT3.1，一种植物同源框基因(Aasland et al.，1995)。尽管还未知PHD指的准确功能，但认为其促进蛋白质-蛋白质相互作用(O’Connell et al.，2001)。OsPN23830与OsHOS59的关联提示OsPN23830在发育期间的转录调节作用。

OsPN23830还与另一个同源域蛋白，假设蛋白018049-3655(Os018049-3655；见表20)相互作用。对Os018049-3655的氨基酸序列进行BLAST分析确定这个蛋白质是水稻推定的同源域转录因子，3′-部分(GENBANK_登录号AAL58126.1，100％相同性，5e^-134)。

还发现OsHOS59与新的蛋白质PN24092相互作用。对OsPN24092的氨基酸序列进行BLAST分析确定这个蛋白质与同样的水稻推定的肌球蛋白相似(GENBANK_登录号AAG13633，84.7％相同性，e＝0.0)，发现其与OsHOS59相互作用(见水稻推定的肌球蛋白；OsAAG13633)。

还发现OsHOS59与新的蛋白质PN30858相互作用。对OsPN30858的氨基酸序列进行BLAST分析确定这个蛋白质与来自拟南芥的表达的蛋白质相似(GENBANK_登录号NP_566372.1，63.2％相同性，e＝0.0)，这是一种未知功能的蛋白质。

小结

KNOX同源域蛋白OsHOS59与认为参与转录调节的其它DNA-结合蛋白相互作用，包括一种推定的同源域蛋白(OsAAK00972)和一种Myb蛋白(OsMYB)。这些相互作用与公布的KNOX蛋白作为同源和异源二聚体起作用的迹象一致。确实，KNOX蛋白的特异性可通过与其它转录因子相互作用而进一步增强(Mann&Affolter，1998；Postma-Haarsma et al.，2002)。基于OsHOS59在植物发育中的推定作用，我们推测OsHOS59-OsAAK00972及OsHOS59-OsMYB相互作用代表蛋白质复合物，其调节参与发育过程的基因的转录，及在OsMYB调节情况中，在其启动子中包括一个特异性序列。这个假说通过观测到HOX和Myb转录因子协同起作用以调节哺乳动物中骨髓细胞分化而支持(Nagamara-Inoue et al.，2001，及参见Lenny et al.，1997所述)。

还发现OsHOS59与推定的Ran GTP酶激活蛋白(OsAAD27557)相互作用。假设Ran GTP酶在核-胞质转运，细胞周期行进的调节，有丝分裂纺锤体形成，及有丝分裂后核装配中起作用(Sazer&Dasso，2000 andDasso，2000)，则推测OsHOS59-OsAAD27557相互作用代表信号转导途径中的一个步骤，其包括在与细胞周期行进或细胞分裂相关的活动期间GTP水解，作为植物发育和/或应答病原体入侵的一部分。

在酵母双杂交筛选中鉴别的两个相互作用子OsAAG13633和新的蛋白质OsPN24092是彼此高度相似的推定的肌球蛋白(84.7％相同性)。注意OsAAG13633还与另一个转录因子(Os005750-3115)相互作用。分子动力器，包括驱动蛋白，肌球蛋白和动力蛋白已经在非植物生物体中充分鉴定并参与许多细胞功能如小泡和细胞器转运，细胞骨架动力学，形态发生，极性生长，细胞运动，纺锤体形成，染色体运动，核融合，及信号转导。相反，在植物中鉴别的许多驱动蛋白和肌球蛋白的作用还未知(参见Reddy，2001)。一些研究提示高等植物中的肌球蛋白参与胞质流动期间细胞器和小泡的运动及参与花粉管生长，及参与在胞质分裂时细胞板的成熟(参见Yokota et al.，1999b；Reichelt et al.，1999所述)。这个实施例中鉴别的水稻肌球蛋白很可能参与与发育过程相关的细胞骨架动力学活动，如胞质流动，胞内物质运动或细胞分裂。其与转录因子OsHOS59和Os005750-3115的相互作用可代表这种活动的转录调节中的步骤。

另一个相互作用子，Os000221-3976，是与水稻HSP82相似的一种推定的热激蛋白。热激蛋白(HSP)起分子侣伴的作用，并且当植物中的这些分子主要与应激反应相关联时，有一些与刺激不相关及其功能仍需要阐明(Buchanan et al.，2002，1198页)。确实一些HSP在整个发育阶段均表达。就针对OsHOS59鉴别的所有相互作用而言，可能Os000221-3976起分子粘合剂作用以将相互作用蛋白结合在一起，或者在与刺激相关或不相关的植物发育相关的活动中促进正确的蛋白质折叠。这个猎物蛋白的另一个作用可以通过与动物热激蛋白的功能同源而推导，热激蛋白在微管蛋白折叠或有丝分裂结构装配/解体中依赖于其分别在中心体或纺锤体丝上的定位起侣伴作用(Agueli et al.，2001)。热激蛋白Os000221-3976可因此在与微管蛋白折叠或有丝分裂结构装配/解体相关的活动中起侣伴作用。这些是与OsCYCOS2控制的细胞周期阶段相关的功能，OsCYCOS2是一种G2/M细胞周期蛋白，其在植物发育期间调节细胞周期从G2行进至有丝分裂。这个实施例中鉴别的热激蛋白Os000221-3976与OsCYCOS2相互作用证实这个假说并进一步支持了这个新的水稻热激蛋白参与发育过程。Os000221-3976的亚细胞定位的揭示可阐明其功能。

与具有调节发育作用的OsHOS59相互作用的另一种蛋白质是一种推定的S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(OsPN23829)，这是参与控制甲基化反应的一种酶。转甲基反应在大多数植物细胞中是生物合成机制的重要成分。S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶参与激活的甲基循环，产生甲硫氨酸，其命运对蛋白质合成或DNA修饰很重要。在植物中，由S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶介导的胞内甲基化反应的调节与in planta研究中形态发生相关联。甲基化的反常导致在表达S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因的反义RNA的转基因烟草中形态学改变，包括花同源异型改变(Tanaka et al.，1997)。基因表达实验表明OsPN23829是由茉莉酮酸诱导的，其除了在防御应答中有作用之外，还抑制许多生长组织中的生长过程，并且在生殖发育中是活性的(认为其在花，果实，和种子的形成中起一些作用；Buchanan et al.，2002，917页)。这些数据提示OsPN23829可参与发育/植物形态发生，及其与OsHOS59关联可调节这些过程相关的转录活动。另外，在通过S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶介导的激活的甲基循环反应与植物病原体诱导的防御应答之间可存在一种代谢联系(Kawalleck et al.，1992)。针对这个结论没有其它公布的证据，我们的基因表达实验表明编码OsPN23829的基因是由茉莉酮酸诱导，其还是植物防御应答途径的成分，及真菌病原体稻瘟霉诱导。因此很可能水稻S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶OsPN23829在抗病原体的防御中也有作用。

发现与OsHOS59相互作用的剩余的新蛋白质包括一个真核翻译起始因子3大亚基(OsBAB07943)，其在起始mRNA翻译中具有推定的作用；与乳胶丰富的蛋白质相似的一种蛋白质(OsPN23251)；及与未知功能的拟南芥蛋白相似的三种蛋白质(OsPN23388，OsPN30858，和推定的PHD-指状蛋白OsPN23830)。这些猎物蛋白与OsHOS59的关联提示参与发育的基因的转录调节中的作用。

发现与KNOX同源域蛋白OsHOS59相互作用的许多水稻蛋白在植物细胞周期/发育中有作用。这个观测结果确证了这样的观点，即先前未鉴定的蛋白OsHOS59参与发育基因的转录调节。这些相互作用子中有一些是新鉴定的水稻蛋白，其与OsHOS59的相互作用代表了先前未描述的水稻中发育过程的转录调节的分子机制。

水稻中蛋白质-蛋白质相互作用的鉴别具有重要的商业应用价值。这些相互作用的调节使得可以控制这些分子介导的生物学过程，导致在遗传工程化的植物中导入希望的性状。这个实施例中鉴别的蛋白质可用于揭示植物发育种呈希望改变的遗传工程化的农作物。另外，这些蛋白质使得可以鉴别影响植物发育的化合物。

植物可以通过从衍生自体细胞的未分化的组织中再生不定芽或不定胚而再生各个植物，这是通过植物激素如生长素和细胞分裂素的相互作用调节的一个过程。除了应答植物激素产生的信号之外，同源框基因还参与植物形态发生。植物的再生能力用于从培养的茎干中产生幼苗，并用于在将基因导入体细胞组织或培养的植物细胞中之后再生转化的植物。提议的同源框蛋白的应用包括控制植物再生，分化，和生长过程。例如，能促进不定根或不定芽从未分化的细胞或植物组织中再生的基因可用于农业学应用。在一个这样的应用中，已经鉴别了拟南芥基因，其编码具有参与分化的同源域的一种蛋白质，特别地，其诱导不定芽及从培养的组织中分枝(见PCT国际出版物No.WO 01/07618，相应于欧洲专利No.1 116 793)。在另一个应用中，编码参与赤霉酸代谢及导致延迟开花表型的转录因子的植物同源框基因的异位表达被提议用于产生遗传修饰的草类植物，这种植物呈现开花抑制、无花序、分蘖产生增加、抽穗延迟、及从营养生长至生殖生长的发育转换抑制。这些修饰的表型代表在针对饲料和舒适性目的进行的草类培育中的有农业学价值的性状(见欧洲专利申请No.EP0109570 EP)。

也可以设想在这个实施例中鉴别的各个蛋白质的应用。例如，水稻推定的真核翻译起始因子3大亚基(OsBAB07943)可用于鉴别抑制这个植物起始因子与其mRNA的帽结构结合的化合物。这种化合物可具有除草剂功能。针对植物真核起始因子4E(eIF4E)提出了相似的应用(加拿大专利申请No.CA0001412 CA，July 6，2001公开)。

实施例V

这个实施例描述了叶绿体的类囊体和其它细胞膜相互作用的水稻蛋白的鉴别和鉴定。特别地，这个实施例描述的是新鉴定的水稻蛋白，其与水稻14-3-3蛋白同系物GF14-c(OsGF14-c)及与抗凋亡死亡防御物1(OsDAD1)相互作用。

14-3-3蛋白(参见Muslin&Xing，2000)通过与其配偶体蛋白结合而与多种细胞信号化、细胞周期及编程性细胞死亡的调节物相互作用。特异性蛋白质-蛋白质相互作用的高度潜力使得这些蛋白质适于双杂交分析。已知14-3-3蛋白参与核内蛋白质复合并通常在细胞质中发现。使用酵母双杂交分析研究还将GF14同种型定位于叶绿体基质和类囊体膜的基质侧(Sehnke et al.，2000)。然而，GF14-c的亚细胞定位至今还未直接评定。对蛋白质相互作用包括OsGF14-c的研究可以鉴别其在细胞内的位置。

OsDAD1由高度保守的DAD基因的水稻同系物编码的，这是动物和植物中内源性程序化细胞死亡或编程性细胞死亡的抑制剂(Apte et al.，1995；Gallois et al.，1997)。支持DAD的这个作用，已经示出DAD植物同系物的表达在花瓣衰老期间是负调节的(程序化细胞死亡的一个实例)及是由植物激素乙烯负调节的，这与多种应激反应和发育过程相关(Orzaez&Granell，1997)。已经用来自拟南芥和豌豆的DAD同系物进行了这些研究，水稻DAD1在文献中还未描述。以下提供的相互作用研究针对于进一步鉴定这个蛋白质。

使用一种自动高通量酵母双杂交分析技术(如上所述)研究与饵蛋白OsGF14-c和OsDAD1相互作用的水稻蛋白质。然后将编码研究中所用蛋白质片段的序列针对数据库进行BLAST分析对比，以确定全长基因的序列。发现蛋白质定位于叶绿体的类囊体，液泡膜，及质膜。结果表明OsGF14-c是水稻中的一种膜成分。在类囊体与OsGF14-c相互作用的蛋白质的亚组(subset)形成新的叶绿体蛋白复合物，参与光合作用。这个相互作用研究还鉴别水稻OsDAD1是膜蛋白，与先前从其它物种中鉴定的DAD同系物一致。关于在水稻叶绿体的类囊体及其它细胞膜相互作用的蛋白质的作用的阐明，使得可以揭示特异性针对破坏类囊体或内膜系统结构和功能的除草剂。

结果

发现GF14-c与如下蛋白质相互作用：EPSP合酶，这是莽草酸酯途径中的一种酶(OsBAB61062)；在叶绿体卡尔文(Calvin)循环反应中有作用的两种酶，水稻叶绿体醛缩酶(OsBAA02730)和叶绿体酶核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶(RUBISCO；OsRBCL)；RUBISCO活性酶前体(OsRCAA1)；及两种水稻光合系统蛋白，推定的33kDa光合系统II的氧进化(oxygen-evolving)蛋白(OsPN23059)及光合系统II 10kDa多肽(OsAAB46718)。GF14-c的8个额外的相互作用子是新的水稻蛋白：与大麦光合系统I反应中心亚基II相似的光合系统蛋白质(OsPN23061)，叶绿体前体；与拟南芥GTP环化水解酶II相似的蛋白质(OsPN22858)，参与维生素B核黄素生物合成的一种酶(莽草酸酯途径中的一个辅因子)；与拟南芥磷脂酰肌醇-4-磷酸5激酶(PI4P5K)相似的蛋白质(OsPN22874)，参与植物中水刺激应答相关的信号化活动的一种酶；两种H⁺-ATP酶，与拟南芥液泡ATP合酶亚基C(OsPN22866)及与大麦质膜H⁺-ATP酶(OsPN23022)相似；一种推定的发动蛋白同系物(OsPN30846)，其很可能与其它植物发动蛋白家族成员一样定位于叶绿体；及两种未知功能的蛋白质(OsPN29982和OsPN30974)。

发现OsDAD1与三种膜蛋白相互作用：水稻β-苹果青霉素(OsEXPB2)，其定位于与细胞壁邻近的质膜；一种新的推定的磷酸协同转运蛋白(OsPN23053)；及H⁺-ATP酶样蛋白质OsPN23022，其也与GF14-c相互作用。

与OsGF14-c(14-3-3蛋白质同系物GF14-c)和OsDAD1相互作用的蛋白质分别列于表21和22，随后是关于每个蛋白质的详细信息及相互作用意义的讨论。相互作用的图表示于图4。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列示于SEQ ID NO：83-100和277-294。

鉴别的蛋白质中有9个代表先前未鉴定的水稻蛋白。基于其推定的生物学功能及猎物蛋白与饵蛋白OsGF14-c和OsDAD1特异性相互作用的能力，推测OsGF14-c是一种膜成分。基于以下描述的结果，推测OsGF14-c位于水稻叶绿体的类囊体及其它细胞膜。在类囊体中相互作用的蛋白质是新的蛋白质复合物的一部分并且参与在叶绿体中发生的光合作用。对在水稻类囊体相互作用的蛋白质的作用的了解，可以用于揭示特异性针对破坏类囊体膜的结构和功能的除草剂。这个研究中发现的相互作用还鉴别OsDAD1是水稻中一种可能的膜成分，这个观测与先前关于其它动物和植物DAD同系物的报道一致。

表21

针对OsGF14-c鉴别的相互作用蛋白

(14-3-3蛋白同系物GF14-c)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由研究中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsGF14-cPN12464(SEQ ID NO：278)	水稻14-3-3蛋白同系物GF14-c(U65957)	1-257#
				相互作用子
OsBAB61062PN22844(SEQ ID NO：280)	水稻3-磷酸莽草酸酯1-羧基乙烯基转移酶(a.k.a.EPSP合酶)(AB052962；BAB61062.1)	1-150	463-511(输入性状)
				OsPN22858(SEQ ID NO：84)	新的蛋白质22858，片段，与拟南芥GTP环化水解酶II相似(BAB09512.1；e＝0)	1-150	27-154(输入性状)

OsPN22874(SEQ ID NO：86)	新的蛋白质22874，片段，与拟南芥推定的磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶相似(NP_187603.1；4e-18)	1-150	1-88(输入性状)
				OsBAA02730PN22832(Contig4280.fasta.Contig1)(SEQ ID NO：282)	水稻果糖-二磷酸醛缩酶，叶绿体前体(Q40677)	1-150	206-269(输入性状)
OsRBCLPN23426(SEQ ID NO：284)	水稻叶绿体核酮糖二磷酸羧化酶，大链(D00207；P12089)	1-150	287-462(输入性状)
				OsRCAA1PN19842(SEQ ID NO：286)	水稻核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶活性酶，大同种型A1(AB034698，BAA97583)	1-150	68-210(输入性状)
OsPN22866(Contig388.fasta.Contig2)(SEQ ID NO：88)	新的蛋白质PN22866，片段，与拟南芥液泡ATP合酶亚基C(V-ATP酶C亚基)(液泡质子泵C亚基)相似(Q9SDS7；e-152)	1-150	95-305(输入性状)
				OsPN23022$(SEQ ID NO：90)	新的蛋白质PN23022，片段，与大麦质膜H+-ATP酶相似(CAC50884；e＝0.0)	1-150	149-285(输入性状)
OsPN23061(Contig3864.fasta.Contig1)(SEQ ID NO：92)	假设蛋白OsContig3864，与大麦光合系统I反应中心亚基II相似，叶绿体前体(P36213；6e-87)	1-150	94-203(输入性状)

OsPN23059(Contig4331.fasta.Contig1)(SEQ IDNO：288)	OsContig4331，水稻推定的33kDa光合系统II氧进化蛋白(BAB64069)	1-150	193-33390-169(输入性状)
				OsAAB46718PN22840(FL_R01_003_H20.g.1a.Sp6a TMRI)(SEQ ID NO：290)	水稻光合系统II 10kDa多肽(U86018；T04177)	1-150	82-126(输入性状)
OsPN29982(SEQ ID NO：94)	新的蛋白质PN29982	1-150	201-300(输入性状)
				OsPN30846(SEQ ID NO：96)	新的蛋白质PN30846	1-150	1-266(输入性状)
OsPN30974(SEQ ID NO：98)	新的蛋白质PN30974	1-150	38-178(输入性状)

注意：GF14-c与玉米转录因子Viviparous-1(ZmVP1)及与Em结合蛋白(EmBp)的相互作用也在文献中报道(Schultz et al.，1998)。

#自身激活克隆，即其在没有猎物蛋白的情况中激活双杂交系统中报道基因，并因此未用于研究中。

$OsPN23022的猎物克隆还与用作饵的抗凋亡死亡防御物1的一个克隆(OsDAD1)相互作用，饵OsDAD1与β-苹果青霉素EXPB2(OsEXPB2)及与新的蛋白质23053，片段相互作用，与拟南芥推定的Na+依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白(OsPN23053)相似。这些相互作用示于下表22。

表22

针对OsDAD1鉴别的相互作用蛋白

(抗凋亡死亡防御物1)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsDAD1PN20251(SEQ ID NO：292)	水稻抗凋亡死亡防御物1(D89727；BAA24104)
				相互作用子
OsPN23022(SEQ ID NO：90)	新的蛋白质PN23022，片段，与大麦质膜H+-ATP酶相似(CAC50884；e＝0.0)	30-115	37-371(输入性状)
				OsPN23053(SEQ ID NO：100)	新的蛋白质23053，片段，与拟南芥推定的Na+-依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白相似(NP_181341.1；e-105)	30-115	2x1-180(输入性状)
OsEXPB2PN19902(SEQ ID NO：294)	β-苹果青霉素EXPB2(U95968；AAB61710)	1-115	80-207(输入性状)
				30-115	183-2612x80-218(输入性状)

使用Os GF14-c作为饵的双杂交系统

GF14-c(GENBANK_登录号U65957)是具有256个氨基酸的蛋白质，已经报道其与位点特异性DNA-结合蛋白(例如碱性亮氨酸拉链因子EmBP1)和组织特异性调节因子(即viviparous-1；VP-1；Schultz et al.，1998)相互作用。其还与EmBP1和VP-1形成复合物以介导基因表达。事实上在每种真核生物体和组织中均发现14-3-3蛋白并且在任何给定的生物体中通常由多种蛋白同种型组成(De Lille et al.，2001)。认为它们作为分子支架或侣伴并且调节与其相互作用的蛋白质的胞质和核定位，通过调节其核输入/输出而进行(Zilliacus et al.，2001；参见Muslin&Xing，2000)。14-3-3蛋白结合参与细胞信号化途径，细胞周期及编程性细胞死亡的许多功能不同的调节蛋白。在植物中，在14-3-3蛋白控制下的酶包括淀粉合酶，Glu合酶，F1 ATP合酶，抗坏血酸过氧化物酶，及affeate o-甲基转移酶，质膜H⁺-ATP酶，光和底物调节的氮和碳同化作用途径的代谢酶，及参与转录调节的那些酶，如G-盒复合物及核心转录因子TBP，TFIIB，和EmBP。然而，这些途径的每一途径需要的特异性14-3-3同种型还未充分鉴定(De Lille et al.，2001)。先前已经检测了14-3-3蛋白参与核内(Bihnet al.，1997；Imhof&Wolffe，1999；Zilliacus et al.，2001)、胞质和核线粒体内(De Lille et al.，2001)的蛋白质复合物。还已经将植物14-3-3蛋白定位于叶绿体基质和类囊体膜的基质侧(Sehnke et al.，2000)。然而，GF14-c的亚细胞定位还未直接估定，因此其在细胞内的位置仍未阐明。

GF14-c的氨基酸序列分析鉴别了一个在第107-110位氨基酸cAMP-和GMP-依赖性磷酸化位点，六个蛋白激酶C磷酸化位点(第10-12位，29-31，56-61，29-31，59-61，和第74-76位氨基酸)，三个酪蛋白激酶II磷酸化位点(第110-113位，120-123，和第177-180位氨基酸)，一个N-豆蔻酰化位点(第9-14位氨基酸)，及两个酰胺化位点(第77-80和105-108位氨基酸)。这个研究中使用的饵片段编码GF14-c的第1-150位氨基酸。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比GF14-c的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS009195_at(e^-48期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不由广泛的刺激，除草剂和应用的激素特异性诱导。

发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与水稻3-磷酸莽草酸酯-1-羧基乙烯基转移酶(也称作5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶(EPSPS)；OsBAB61062)相互作用。OsBAB61062是具有511个氨基酸的蛋白质，其含有一个EPSP合酶签名1位点(第162-176位氨基酸)，一个EPSP签名2位点(第423-441位点)，并且其在N末端是丙氨酸富集的。对OsBAB61062的氨基酸序列进行的BLAST分析确定这个蛋白质是水稻3-磷酸莽草酸酯-1-羧基乙烯基转移酶(通常称作EPSP合酶)(GENBANK_登录号BAB61062.1，83.9％相同性，e＝0.0)。这个具有511个氨基酸的酶位于叶绿体中，在此其催化芳族氨基酸合成的一个必需步骤，称作莽草酸酯途径。因为EPSP合酶是藻类、高等植物、细菌和真菌所必需的，但不存在于哺乳动物中，因此这种酶是一种有效的除草剂和抗微生物剂的靶。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比EPSP合酶的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS020639.1_at(e^-156期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由茉莉酮酸和导致水稻黑锈病的稻瘟霉诱导的，茉莉酮酸是参与植物应激反应相关的信号转导活动的一种植物激素。这个基因在干旱条件下被抑制。

发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白22858相互作用，这是与拟南芥GTP环化水解酶II相似的一个片段(OsPN22858)，这个OsPN22858的猎物克隆是具有460个氨基酸的蛋白质片段，具有跨越第182-198位氨基酸的一个跨膜区域和位于第24-25位氨基酸之间的一个可能的切割位点，尽管无N末端信号肽存在。OsPN22858的BLAST分析确定其氨基酸序列与GTP环化水解酶II的氨基酸序列最匹配；来自拟南芥的3，4-二羟基-2-丁酮-4-磷酸合酶(GENBANK_登录号BAB09512.1，74.4％相同性，e＝0)。GTP环化水解酶II催化维生素B核黄素的生物合成中的第一个进行的反应(Ritz et al.，2001)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比新的蛋白质22858的核苷酸序列的BLAST分析鉴别OS015318_s_at(5e^-10期望值)是最接近的匹配。这个probeset期望值太低以至于不是这个GTP环化水解酶的基因表达的可靠指征。

发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白质22874相互作用，这是与拟南芥推定的磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶相似的一个片段(OsPN22874)。OsPN22874的BLAST分析确定其89个氨基酸的序列与来自拟南芥的磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶(PI4P5K)的氨基酸序列最匹配(GENBANK_登录号NP_187603.1，65.5％相同性，4e^-18)。PI4P5K是在许多物种的许多信号化活动包括植物中内质网(ER)刺激应答中起充分阐明的作用的一种酶(Shank et al.，2001)。动物和酵母PI4P5K使磷脂酰肌醇-4-磷酸磷酸化以产生磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸作为两种第二信使肌醇-1，4，5-三磷酸和甘油二酯的前体，并作为参与信号转导和细胞骨架组织化的许多细胞蛋白的调节物(参见Mikami et al.，1998所述)。Mikami等鉴别了编码拟南芥中PI4P5K蛋白的一个全长cDNA克隆，其mRNA表达是由干旱、盐和脱落酸处理植物诱导的，提示这个蛋白质参与水刺激信号转导(Mikami et al.，1998)。Elge等报道了拟南芥PI4P5K主要在叶、花和根的维管组织中表达，也就是在侧生分生组织的细胞中，即原形成层中表达(Elge et al.，2001)。

还发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与水稻果糖-二磷酸醛缩酶相互作用，这是一种叶绿体前体(OsBAA02730)。通过氨基酸序列分析确定OsBAA02730(GENBANK_登录号Q40677)是具有388个氨基酸的蛋白质，其包括一个果糖-二磷酸醛缩酶I类活性位点(第44和388位氨基酸)(8.5e^-228)。对OsBAA02730的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个蛋白质是水稻果糖-二磷酸醛缩酶，叶绿体前体(GENBANK_登录号Q40677)。编码叶绿体醛缩酶的基因与编码这个酶的胞质形式的基因一起分离(Tsutsumi et al.，1994)。叶绿体醛缩酶是在单一基因座编码的，而胞质形式在基因组的三个基因座之间分布。醛缩酶以两种同种型存在于高等植物中：胞质型和叶绿体型。胞质形式在植物中是高度保守的并表现为是通过Ca²⁺-介导的蛋白激酶/磷酸酶途径调节的(Nakamura etal.，1996)，尽管这个酶在果实成熟过程中有作用(Schwab et al.，2001)。叶绿体型酶参与绿色叶绿体的两种主要的磷酸糖类代谢途径：C3光合作用碳反应循环(卡尔文循环)及淀粉生物合成途径的反应。在这两种情况中，醛缩酶催化果糖1，6-二磷酸从二羟基丙酮3-磷酸和甘油醛3-磷酸中形成。这些论题参见Michelis et al.，2000所述，其中描述了燕麦叶绿体中果糖-二磷酸醛缩酶的44-kDa热诱导的同种型，证实其位于类囊体膜并提示这个酶未包埋而是趋于粘附叶绿体膜。在其它植物物种中发现相似的热诱导的类囊体相关醛缩酶同系物。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比醛缩酶蛋白的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS006916.1_at(e^-156期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是受茉莉酮酸和干旱负调节的。

另外，发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与水稻核酮糖二磷酸羧化酶大链前体相互作用(RUBISCO大亚基；OsRBCL)。OsRBCL的氨基酸序列的BLAST分析确定这个蛋白质是水稻叶绿体核酮糖二磷酸羧化酶，大链前体(RUBISCO；GENBANK_登录号P12089)。RUBISCO是具有477个氨基酸的蛋白质，存在于高等植物的叶绿体中，具有在第196-204位的活性位点。叶绿体RUBISCO是与类囊体膜结合的CO₂固定多酶复合物的一部分(Suss et al.，1993)，在光合作用期间叶绿体的基质中发生的卡尔文循环反应中有作用。卡尔文循环中的起始和结束化合物是五碳糖核酮糖1，5-二磷酸(RuBP)。如其名称所表明，RuBP羧化酶/加氧酶催化涉及RuBP的两种类型反应。在存在高浓度二氧化碳和低浓度氧的情况中，RUBISCO的羧化酶活性被促进，并且这个酶催化卡尔文循环中的起始反应，RuBP的羧化导致3-磷酸甘油酸(PGA)形成。然而，在存在低浓度二氧化碳和高浓度氧的情况中，氧与二氧化碳竞争作为RUBISCO底物并且酶的加氧酶活性也发生，导致氧与RuBP缩合形成3-磷酸甘油酸和磷酸乙醇酸。RUBISCO是世界上最丰富的酶，在叶中占总可溶蛋白质的40％(这些论题在Raven et al.，1999中阐述)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比RUBISCO蛋白的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000296_s_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是受BAP，2，4-D，BL2，茉莉酮酸，赤霉素，和脱落酸负调节的。这个基因在渗透压条件下被正调节。

发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与水稻核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶活性酶，大同种型A1相互作用(OsRCAA1)。OsRCAA1的氨基酸序列的BLAST分析确定这个具有466个氨基酸的蛋白质是水稻RUBISCO活性酶大同种型前体(GENBANK_登录号BAA97583)。其含有两个活性位点(第31-38和156-163位氨基酸)。RUBISCO活性酶是一种AAA+(与多种细胞活性相关的ATP酶)蛋白，其促进从RUBISCO活性位点ATP依赖性除去磷酸糖类。这个作用释放了RUBISCO的活性位点，通过CO2和金属结合而自发氨甲酰化，这是活性所必需的(参见Salvucci et al.，2001；Salvucci&Ogren，1996)。

发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白质PN22866相互作用，这是与拟南芥液泡ATP合酶亚基C相似的一个片段(V-ATP酶C亚基；液泡质子泵C亚基；OsPN22866)。OsPN22866是具有408个氨基酸的蛋白质片段。通过BLAST分析确定其氨基酸序列与拟南芥液泡ATP合酶亚基C的氨基酸序列最匹配(V-ATP酶C亚基；液泡质子泵C亚基；Q9SDS7，72.7％相同性，e^-152)。H⁺-易位ATP酶(H⁺-ATP酶，V-ATP酶)是多亚基酶，在真核细胞中具有必需的质子泵作用。人V-ATP酶的催化位点由三个A亚基和三个B亚基的六聚体组成，结合并水解ATP，并且是由附属的亚基C，D和E调节的(van Hille et al.，1993)。

ATP酶是基本的细胞能量转换者，其将跨膜离子电化学电势差转换为ATP水解的化学能。植物ATP酶存在于叶绿体，线粒体和液泡中。在液泡中，ATP酶调节液泡的内容物和体积，这依赖于位于液泡形成体(液泡膜)中转运蛋白和通道的协同活性。V-ATP酶使用在胞质ATP的磷酸基团裂解期间释放的能量以将质子泵入液泡内腔。从而产生电化学H⁺-梯度，这是转运离子和代谢物的动力。因此V-ATP酶是重要的“管家”和应激反应酶。V-ATP酶的表达示出依赖于代谢条件而高度调节。V-ATP酶由位于两个主要结构域(一个膜周围结构域(V₁)和一个膜内在结构域(V_o))中的一些多肽亚基组成。亚基C是含有4个跨膜结构域的高度疏水性蛋白质。亚基C的功能还未知，尽管提示其直接参与H⁺转运及也许参与V₁的稳定化。植物V-ATP酶的结构，功能和调节参见Ratajczak R.，2000所述。

还发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白质PN23022相互作用，这是与大麦质膜H⁺-ATP酶相似的一个片段(OsPN23022)。氨基酸序列分析表明蛋白质PN23022是具有534个氨基酸的片段，其包括7个跨膜结构域(第170-186，202-218，226-242，266-282，308-324，337-353，和373-389位氨基酸)。OsPN23022的氨基酸序列的BLAST分析确定这个蛋白质与大麦质膜H⁺-ATP酶相似(GENBANK_登录号CAC50884；88.2％相同性，e＝0期望值)，这是将质子易位至细胞内细胞器或者穿过真核细胞质膜的一种酶。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比新的蛋白质PN23022的核苷酸序列的BLAST分析鉴别OS000972_f_at(e^-11期望值)是最接近的匹配。这个probeset的期望值太低以至于不是这个ATP酶基因表达的可靠指征。还发现OsPN23022与抗凋亡死亡防御物1(OsDAD1；见表22)相互作用。

发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白质OsContig3864相互作用，其与大麦光合系统I反应中心亚基II，叶绿体前体(OsPN23061)相似。OsContig3864氨基酸序列分析表明这是具有203个氨基酸的蛋白质，含有在第21和22位氨基酸之间的一个可能的切割位点，尽管表现为无N末端信号肽。BLAST分析确定OsContig3864克隆具有与大麦光合系统I反应中心亚基II，叶绿体前体(光合系统I 20kDa亚基；PSI-D；GENBANK_登录号P36213，80％相同性，3e^-86)的氨基酸序列最匹配的氨基酸序列。光合系统(光合系统I和II)是大的多亚基蛋白质复合物，包埋于光合作用类囊体膜中。它们连续运行并催化生氧光合作用中的主要步骤，这是光诱导的电荷分离过程，由此在植物和蓝藻类细菌中太阳光能被转换为二氧化碳和碳水化合物。光合系统I催化通过一系列电子载体将光诱导的电子从膜的向腔侧(类囊体内侧)上的质体蓝素/细胞色素c₆传递至基质侧的铁氧还蛋白/黄素氧还蛋白(参见Fromme et al.，2001所述)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsContig3864的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000721 at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的植物组织中非特异性表达，并且不是由广泛的刺激，除草剂和应用的激素特异性诱导的。

还发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与OsContig4331相互作用，这是一种水稻推定的33kDa光合系统II氧进化蛋白(OsPN23059)。从输入性状文库中挽回的两个猎物克隆编码OsContig4331的第193-333和90-169位氨基酸。这些克隆是不重叠的，提示在OsContig4331内存在多个GF14-c结合位点。OsContig4331蛋白质序列分析表明其编码一个具有333个氨基酸的蛋白质。分析还表明OsContig4331含有在第37和38位氨基酸之间的一个可能的切割位点，尽管无N末端信号肽存在。OsContig 4331氨基酸序列的BLAST分析确定这个蛋白质是水稻推定的33kDa光合系统II氧进化蛋白质(GENBANK_登录号BAB64069，90.6％相同性，e^-169)。光合系统II使用光氧化作用将水转换为分子氧，从而将电子释入光合作用电子传递链。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsContig4331，水稻光合系统I反应中心亚基II前体的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000372_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在寒冷刺激期间是负调节的。

还发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与水稻光合系统II 10kDa多肽相互作用(OSAAB46718)。OSAAB46718是具有126个氨基酸的蛋白质片段，其包括一个推定的跨膜结构域(第102-118位氨基酸)。针对Genpept数据库的BLAST分析表明OsAAB46718是水稻光合系统II10kDa多肽(GENBANK_登录号T04177，91.2％相同性，2e^-61)。

还发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白质PN29982(OsPN29982)相互作用。通过BLAST分析确定蛋白质OsPN29982的300个氨基酸序列与来自拟南芥的未知功能的推定的蛋白质的氨基酸序列最匹配(GENBANK_登录号NP_196688.1，47％相同性，3e-054)。其次最匹配的是CHICK LIM/同源框蛋白Lhx1(同源框蛋白LIM-1；GENBANK_登录号P53411，28％相同性，e＝0.002)。基于同源框结构域，这个相互作用与14-3-3蛋白与转录因子样VP1的相互作用相似。

还发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白质PN30846(OsPN30846)相互作用。蛋白质OsPN30846的BLAST分析确定其266个氨基酸的序列与来自豆科植物紫云英(Astragalus sinicus)的发动蛋白同系物的氨基酸序列最匹配(GENBANK_登录号AAF19398.1，70.6％相同性，2e^-99)。由于在大鼠脑中GTP-结合发动蛋白的发现，发动蛋白样蛋白质已经分离自多种生物体和组织并示出参与不同的和表面上不相关的生物学过程。发动蛋白样蛋白质的许多不同同种型已经在植物细胞中鉴别，这些植物同系物基于其氨基酸序列相似性可以分为几个亚家族，如G68/ADL1，ADL2和ADL3(参见Kim et al.，2001)。针对一些这种植物发动蛋白样蛋白质已经鉴定了生物学作用。来自拟南芥的发动蛋白样蛋白质ADL1已经示出定位于并参与叶绿体的类囊体膜的生物发生(Park et al.，1998)。另一种拟南芥发动蛋白样蛋白质ADL2靶定于质体，其在大肠杆菌中表达的重组形式通过ADL2中存在的血小板-普列克底物蛋白同源(PH)结构域而特异性结合磷脂酰肌醇4-磷酸(Kim et al.，2001)。基于ADL2与发动蛋白及其它相关蛋白质的生物化学性质之间的相似性，ADL2可以参与叶绿体包膜的小泡形成。

还发现编码GF14-c的第1-150位氨基酸的饵蛋白与蛋白质PN30974(OsPN30974)相互作用。新的蛋白质OsPN30974的BLAST分析确定其476个氨基酸的序列与未知功能的拟南芥假设蛋白的氨基酸序列最匹配(GENBANK_登录号NP_173623.1，49％相同性，e^-137)。期望值＜e^-15的其次13个最佳采样均是公众结构域中注解的未知功能的拟南芥或水稻蛋白质。

使用OsDAD1作为饵的双杂交系统

另一种饵蛋白，即水稻抗凋亡死亡防御物1(OsDAD1)，用于鉴别相互作用子。OsDAD1(GENBANK_登录号BAA24104)是具有114个氨基酸的蛋白质，其包括三个推定的跨膜结构域(第33-49，59-75，和94-110位氨基酸)。DAD1是程序化细胞死亡或编程性细胞死亡的抑制剂，编程性细胞死亡是其中不必要的细胞在生长和发育期间被消除的一个过程。DAD是在动物和植物中鉴别的高度保守的蛋白质同系物(Apte etal.，1995；Gallois et al，1997)。这个基因的功能失调和负调节与这些生物体中程序化细胞死亡相关(Lindholm et al.，2000)。DAD1是寡糖基转移酶的一个必需亚基，位于ER膜中(Lindholm et al.，2000)。DAD1表达在衰老的花瓣中开花期消失时急剧降低，并且是由植物激素乙烯负调节的(Orzaez&Granell，1997)，其参与许多应激反应和发育过程，包括花瓣衰老(Shibuya et al.，2000)，根表皮中细胞延长，细胞命运模式化，及果实成熟(Ecker，1995)。

编码OsDAD1的第1-115和30-115位氨基酸的两个克隆在这个实施例中用作饵。

发现OsDAD1与蛋白质23053相互作用，这是与拟南芥推定的Na⁺-依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白相似的一个片段(OsPN23053)。OsPN23053是一个蛋白质片段；然而其可获得的379个氨基酸的序列含有5个推定的跨膜区域(第100-116，118-134，226-242，259-275，和324-340位氨基酸)和一个可切割的信号肽(第1-46位氨基酸)。BLAST分析确定OsPN23053与拟南芥推定的Na⁺-依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白相似(GENBANK_登录号NP_181341.1，55.4％相同性，e^-105)。在哺乳动物中，Na⁺-依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白存在于神经元突触小泡和内分泌性突触样小泡中作为囊泡谷氨酸转运蛋白，并负责谷氨酸的贮存，是哺乳动物中枢神经系统的主要兴奋性神经递质(CNS；Takamori et al.，2000)。有至少两种Na⁺-依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白同种型存在(Takamori et al.，2000；Aihara et al.，2000)，并在胰腺和脑中表达(Hayashi et al.，2001；Fujiyama et al.，2001)。OsPN23053是在水稻中第一个揭示的Na⁺-依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白家族。植物在重要的生物学过程包括在蛋白质合成及谷氨酸介导的信号化中利用谷氨酸(Lacombe et al.，2001)。植物中在氮回收期间谷氨酸从谷氨酰胺中形成(Singh et al.，1998)及通过光信号化对氮同化途径的控制(Oliveira et al.，2001)，提示谷氨酸形成与光信号转导之间的联系。

发现OsDAD1与β-苹果青霉素EXPB2(OsEXPB2)相互作用。OsEXPB2的氨基酸序列的BLAST分析确定这个蛋白质是水稻β-苹果青霉素(GENBANK_登录号AAB61710，99.6％相同性，e^-156)。苹果青霉素促进植物中细胞壁延伸。Shcherban等从黄瓜中分离了两个cDNA克隆，其编码具有推测指导蛋白质分泌入细胞壁的信号肽的苹果青霉素(Shcherban et al.，1995)。这些作者从匿名的cDNA(即表达序列标签；EST)集合中鉴别了水稻中至少4种独特的苹果青霉素cDNA及拟南芥中至少6种。他们确定苹果青霉素的大小和序列是高度保守的，并提示这个多基因家族在单子叶植物和双子叶植物的进化趋异之前形成。他们的分析表明与已知的功能结构域无相似性，这说明了苹果青霉素对细胞壁延伸的作用，尽管一系列高度保守的色氨酸可以介导苹果青霉素与纤维素或其它聚糖结合。

小结

叶绿体的类囊体膜含有与光合作用相关的光合作用色素，反应中心和电子传递链。OsGF14-c定位于这个位点与OsGF14-c与这个实施例的光合系统蛋白的相互作用一致。光合系统(光合系统I和II)是包埋于类囊体膜中的大的多亚基蛋白质复合物。作为蛋白质色素复合物的较大组群的一部分，光合作用反应中心，它们催化与光合作用相关的光诱导的电荷分离。这两种光合系统均使用来自日光的光子能以通过电子载体链将电子转运穿过类囊体膜。电子转移过程与类囊体膜两侧的质子浓度差异的形成相关。所得电化学膜电势驱动ATP的合成，用于在随后的暗反应中将CO₂还原为碳水化合物。发现OsGF14-c与OsContig3864相互作用，其与光合系统I反应中心亚基II、叶绿体前体相似，及与OsContig4331相互作用，其是水稻推定的33kDa光合系统II的氧进化蛋白，及与水稻光合系统II 10kDa多肽相互作用。这些相互作用的有效性由Sehnke et al.，2000所报道的结果支持，其报道了应用酵母双杂交技术鉴别植物14-3-3蛋白与另一种光合系统I亚基蛋白，拟南芥光合系统I N-亚基At pPSI-N之间的相互作用。OsGF14-c与OsPN23061(OsContig3864)，OsPN23059(OsContig4331)，及OsAAB46718(光合系统II 10kDa多肽)的相互作用提示OsGF14-c在类囊体膜内或其上蛋白质之间物理接触中的作用。

考虑到OsGF14-c与叶绿体光合系统成分的相互作用，本研究中发现的与OsGF14-c相互作用的一些其它的蛋白质很可能定位于叶绿体，它们可能作为相互作用复合物共同位于类囊体膜。例如，OsGF14-c与EPSP合酶(OsBAB61062)相互作用，这是位于叶绿体中的一个莽草酸酯途径酶，在此开始芳族氨基酸合成。令人感兴趣地注意到莽草酸酯途径中的酶需要黄素作为辅因子(Bomemann et al.，1996)，OsGF14-c还与OsPN22858相互作用，这是与拟南芥GTP环化水解酶II相似的新的蛋白质片段。GTP环化水解酶II参与维生素B核黄素的生物合成，其是在莽草酸酯途径中起作用的酶的辅因子。这些蛋白质与OsGF14-c的相互作用可以将莽草酸酯途径的关键蛋白隔离在类囊体附近或其中。OsGF14-c与叶绿体醛缩酶(OsBAA02730)相互作用，这是示出定位于类囊体膜并参与叶绿体的磷酸糖类代谢途径的酶，及与卡尔文循环酶RUBISCO(OsRBCL)和RUBISCO活性酶大同种型前体(OsRCAA1)的相互作用，进一步支持了OsGF14-c及这些相互作用子定位于类囊体膜。先前的报道已经在燕麦叶绿体的类囊体膜鉴别了一种果糖-二磷酸醛缩酶同种型(Michelis et al.，2000)。

另外，针对OsGF14-c鉴别的一种新的相互作用子是推定的发动蛋白同系物(OsPN30846)。植物发动蛋白样蛋白质定位于叶绿体的类囊体和包膜(Park et al.，1998；Kim et al.，2001)。因此很可能这个水稻发动蛋白同系物是位于叶绿体中的一种膜蛋白。这个及针对OsGF14-c鉴别的其它相互作用子存在于叶绿体的类囊体中的事实证实了14-3-3蛋白作为叶绿体的类囊体或包膜的成分而起作用。进一步支持这个假说，ADL2亚家族的一个重组的拟南芥发动蛋白样蛋白质成员与磷脂酰肌醇4-磷酸特异性结合。在文献中论证的发动蛋白与磷酸肌醇之间的相互作用(参见Kim etal.，2001)，与均与OsGF14-c相互作用的发动蛋白样蛋白质OsPN30846和磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶OsPN22874(水稻PI4P5K)在类囊体相伴存在一致。上述相互作用子也许是参与在类囊体膜光合作用过程的蛋白质复合物的一部分。

除了叶绿体类囊体的成分之外，发现OsGF14-c与和质膜H⁺-ATP酶(OsPN23022)及与液泡ATP酶(OsPN22866)相似的蛋白质相互作用，这提示OsGF14-c也存在于质膜和液泡膜中。OsGF14-c与ATP酶的相互作用可代表14-3-3蛋白对植物膨压的调节。这个假说通过报道14-3-3蛋白通过调节至少一种形式的质膜H+ATP酶而实现这个功能而确证(参见DeLille et al.，2001)。液泡ATP酶与OsGF14-c的相互作用可发生在液泡膜中，也可发生在ER、高尔基体、包被的小泡及前液泡的膜中。

OsGF14-c与新的蛋白质OsPN22874(水稻PI4P5K)的相互作用的生物学意义可以基于与拟南芥PI4P5K的功能同源而阐明，其是在水刺激条件下诱导的并在叶中表达。假设OsGF14-c与类囊体和液泡膜相互作用，水稻PIP5K可以定位于叶绿体，但其也可以存在于液泡中，具有液泡ATP酶。在任一情况中，水稻PIP5K可以指导参与激酶信号化活动的分子，与在非生物刺激下叶绿体防护或液泡大小调节相关。

针对OsGF14-c发现的两个额外的相互作用子OsPN29982和OsPN30974是未知功能的蛋白质。然而，因为14-3-3蛋白作为侣伴，这些相互作用可以代表其中猎物蛋白达到正确的蛋白质折叠的一个过程，或者OsGF14-c可以负责OsPN29982和OsPN30974的正确亚细胞定位。因为OsGF14-c的所有其它相互作用子均呈现是膜相关蛋白，因此OsPN29982和OsPN30974很可能是膜蛋白并且可存在于类囊体或其它细胞膜结构中。

概括而言，发现与OsGF14-c相互作用的一些水稻蛋白看起来位于类囊体膜，在此它们参与在叶绿体中发生的光合作用过程；这些相互作用与先前报道的14-3-3蛋白定位于叶绿体基质和类囊体膜的基质侧一致(Sehnke et al.，2000)。鉴别的其它相互作用子与质膜或液泡膜相关。因此，OsGF14-c很可能是水稻中的一个膜成分。因为14-3-3蛋白参与许多类型的信号化途径并认为其作为蛋白质经过膜的装配、伸展或运输必需的分子侣伴作用，很可能OsGF14-c作为分子粘合剂或稳定剂以调节在类囊体或其它膜结构与其相互作用的蛋白质的功能。OsGF14-c作为膜成分的鉴别代表了水稻中GF14-c蛋白的一个新观测经过及首次的功能鉴定。特别地，这个实施例中鉴别的蛋白质在叶绿体的类囊体膜相互作用代表了一种新的水稻蛋白复合物。

在这个研究中针对OsDAD1鉴别了三个相互作用子。一个是推定的质膜H⁺-ATP酶(OsPN23022)，其与OsGF14-c相互作用。有OsDAD1和H⁺-ATP酶均是内在膜蛋白的证据存在(Lindholm et al.，2000；Ratajczaket al.，2000)。H⁺-ATP酶将质子易位至胞内细胞器或者穿过指定细胞的质膜，其活性导致真核细胞中胞内区室的酸化。溶酶体的酸性内部示出在一些条件下是编程性细胞死亡所必需的(Kagedal et al.，2001；Bursch，2001)。因此，这两种酶的活性可能是调节程序化细胞死亡所必需的，及其物理性相互作用可代表控制这种活动的一个步骤。另外，14-3-3蛋白参与调节许多细胞过程，包括编程性细胞死亡(van Hemert et al.，2001)。可能的是OsPN23022与GF14-c及与OsDAD1的相互作用代表这种调节中的步骤。

针对OsDAD1发现的另一个新的相互作用子是新的水稻Na⁺-依赖性无机磷酸盐协同转运蛋白。水稻磷酸盐协同转运蛋白基于其与哺乳动物同系物的功能同源也可以是一种膜蛋白，哺乳动物同系物位于神经元和内分泌小泡并在谷氨酸贮存中有作用(Takamori et al.，2000)。很可能谷氨酸参与植物中编程性细胞死亡调节，如其在哺乳动物中的作用一样(Bezziet al.，2001)，并且这是通过磷酸盐协同转运蛋白OsPN23053与OsDAD1的关联而在水稻中发生的。

最后，发现OsDAD1与水稻β-苹果青霉素相互作用。苹果青霉素定位于与细胞壁邻近的质膜，从中其介导细胞壁延伸。由于基因调节细胞死亡是防御应答的一部分，因此这个相互作用可与应答细胞死亡的细胞壁中的结构改变相关。

在此报道的相互作用代表水稻中DAD1蛋白同系物的首次鉴定。特别地，OsDAD1及其相互作用子看起来是膜蛋白并且其中之一，OsPN23022与OsGF14-c相互作用的事实进一步支持了OsGF14-c是一种膜成分的观点。

实施例VI

水稻衰老相关蛋白(Os006819-2510)与daylily衰老相关蛋白5具有61.4％的氨基酸序列相似性，daylily衰老相关蛋白5是由6个cDNA序列之一(DSA5)编码的蛋白质，其水平在花瓣衰老期间提高。这些基因的转录物主要在花瓣中发现，其表达在花瓣而不是叶衰老期间提高，并且其是由导致花瓣未成熟衰老的脱落酸(ABA)的浓度诱导。花瓣衰老是内源性程序化细胞死亡或编程性细胞死亡的实例，编程性细胞死亡是其中不必要的细胞在生长和防御期间消除的一个过程。在细胞死亡或存活中进行调节功能的基因对发育过程很重要。基于其潜在地与植物生长和发育相关而选择水稻衰老相关蛋白Os006819-2510作为这些相互作用研究的饵。

为鉴别与水稻衰老相关蛋白Os006819-2510相互作用的蛋白质，应用如上所述的一种自动的高通量酵母双杂交分析技术(由Myriad GeneticsInc.，Salt Lake City，Utah，United States of America提供)。

结果

发现水稻衰老相关蛋白Os006819-2510与8种水稻蛋白相互作用。已知5种相互作用子，即水稻组蛋白去乙酰酶(deacetylase)HD1(OsAAK01712)，这是参与核心组蛋白乙酰化调节的一种酶；钙-结合蛋白钙网蛋白前体(OsCRTC)，其还与淀粉生物合成酶可溶淀粉合酶(OsSSS)及与未知功能的一种新蛋白质(OsPN29950)相互作用；低温诱导的蛋白5(OsLIP5)；脱水素RAB 16B，其是通过水刺激诱导的；及水稻推定的肌球蛋白(OsPN23878)，这是一种肌动蛋白动力器蛋白，其还与参与细胞周期调节的蛋白质网络相关的推定的钙调蛋白-激酶相互作用(见实施例I和II)。衰老相关蛋白的三个相互作用子是新的蛋白质，包括一种推定的愈伤葡萄糖合酶(OsPN23226)，其参与愈伤葡聚糖的生物合成；一种与大麦粪卟啉原III氧化酶，叶绿体前体相似的蛋白质，这是叶绿素生物合成途径的一种酶(OsPN23485)；及与拟南芥γ羟丁酸脱氢酶相似的一种蛋白质。

这个实施例的相互作用蛋白质示于表23，随后是关于每个蛋白质的详细信息及相互作用意义的讨论。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO：101-106和295-306中示出。

注意鉴别的一些猎物蛋白如饵蛋白Os006819-2510是膜相关分子(OsCRTC，OsPN23226，OsLIP5)。一些看起来与水稻中细胞周期过程相关(OsPN23878，Os003118-3674，OsCRTC，OsSSS，OsPN23226，OsAAK01712)，另一些参与植物应激反应(OsRAB16B，OsLIP5，OsCRTC)。鉴别的一些蛋白质代表先前未鉴定的水稻蛋白。基于猎物蛋白推定的生物学功能及其与饵蛋白Os006819-2510特异性相互作用的能力，推测Os006819-2510参与细胞周期/有丝分裂过程及植物刺激抗性，并可以实际上代表水稻中这些过程之间的一种联系。

参与水稻中细胞周期调节的蛋白质可以是进行遗传操纵或者化合物处理的靶以修饰其水平或活性，从而调节植物细胞周期。编码这些蛋白质的基因的鉴别使得可以遗传操纵农作物或者应用化合物以达到植物发育或生长中希望的农业学改变。另外，参与赋予植物刺激抗性的基因具有重要的商业应用价值，因为它们可以用于促进农作物的产生和产量。

表23

针对Os006819-2510鉴别的相互作用蛋白

(假设蛋白006819-2510，与萱草衰老相关蛋白5相似)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标(Coord)是分别由研究中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
Os006819-2510PN20462(SEQ ID NO：296)	假设蛋白006819-2510，与来自萱草杂交栽培株的衰老相关蛋白5相似(AAC34855.1；e-97)
				相互作用子

OsAAK01712PN24059(SEQ ID NO：298)	水稻组蛋白去乙酰酶HD1(AF332875；AAK01712.1)	1-150	90-221(输出性状)
				OsCRTC*PN20544(SEQ ID NO：300)	水稻钙网蛋白前体(AB021259；BAA88900)	1-273	283-301(输出性状)
OsLIP5PN22883(SEQ ID NO：302)	水稻低温诱导的蛋白5(AB011368；BAA24979.1)	1-150	29-60(输入性状)
				OsPN23878#(SEQ ID NO：304)	水稻推定的肌球蛋白(AC090120；AAL31066.1)	1-150	685-888(输出性状)
OsRAB16BPN20554(SEQ ID NO：306)	水稻脱水素RAB 16B(P22911)	1-273	147-164(输出性状)
				OsPN23226(SEQ ID NO：102)	新的蛋白质PN23226，愈伤葡萄糖合酶	1-273	345-432(输出性状)
OsPN23485(SEQ ID NO：104)	新的蛋白质PN23485，与大麦粪卟啉原III氧化酶，叶绿体前体相似(Q42840；e-169)	1-273	90-243(输出性状)
				OsPN29037(SEQ ID NO：106)	新的蛋白质PN29037	1-150	73-165(输入性状)

^*针对OsCRTC鉴别的额外相互作用列于表24

#针对OsPN23878鉴别的额外相互作用列于表25

表24

针对OsCRTC鉴别的相互作用蛋白

(钙网蛋白前体)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsCRTCPN20544(SEQ ID NO：300)	钙网蛋白前体(AB021259；BAA88900)
				相互作用子
OsPN29950(SEQ ID NO：108)	新的蛋白质PN29950	1-150	7-1032x138-34350-343(输出性状)
				OsSSSPN19701(SEQ ID NO：308)	可溶淀粉合酶(AF165890；AAD49850)	250-425	68-270(输入性状)97-263(输出性状)

表25

针对OsPN23878鉴别的相互作用蛋白

(推定的肌球蛋白)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白
OsPN23878(SEQ ID NO：304)	水稻推定的肌球蛋白(AC090120；AAL31066.1)
				饵蛋白

Os003118-3674PN20551(SEQ ID NO：110)

假设蛋白003118-3674与番茄钙调蛋白相似

75-149

824-935(输出性状)

通过氨基酸序列分析确定Os006819-2510是具有276个氨基酸的蛋白质，包括一个可切割的信号肽(第1-27氨基酸)和三个跨膜结构域(第48-64，82-98，和233-249位氨基酸)。该分析还预测两个内质网保持基序(retention motif)，一个N末端基序(AFRL)及另一个C末端基序(KGGY)，及从第57位氨基酸开始的一个原核膜脂蛋白附着位点(Prosite)。这个位点当是功能性时，其是蛋白质加工的一个区域。Pfam分析还鉴别了一个跨膜超家族结构域，也称为四次跨膜(tetraspanin)家族结构域，典型地在进化相关的一组真核细胞表面抗原中发现，并包括跨膜结构域。

针对Genpept数据库进行的BLAST分析表明Os006819-2510与来自萱草杂交栽培株(Hemerocallis hybrid cultivar)的衰老相关蛋白5相似(daylily；GENBANK_登录号AAC34855.1；61.4％相同性；e^-97)。与这个结果一致，Myriad’s proprietary数据库中与Os006819-2510具有最相似(63％相同性)氨基酸序列的蛋白质是假设蛋白005991-3479，其与萱草衰老相关蛋白5(Os005991-3479)相似。在鉴别花开放后24小时导致daylily花瓣衰老和细胞死亡的遗传程序成分的努力中，编码花瓣中衰老相关蛋白5的cDNA被分离作为6个cDNA(称为DSA3，4，5，6，12和15)之一，其水平在花瓣衰老期间提高(Panavas et al.，1999)。然而，在公众的数据库中针对DSA5基因产物未鉴别到序列同源，仍是未确定的。确定叶中DSA mRNA的水平低于在花瓣中检测到的最大值的4％，在幼叶和老叶之间无差别，DSA基因(除了DSA12之外)在daylily根中低水平表达，并且(除了DSA4之外)是由导致花瓣不成熟衰老的脱落酸的浓度诱导的。

编码Os006819-2510的第1-273和1-150位氨基酸的两个饵片段用于酵母双杂交筛选中。

发现编码Os006819-2510的第1-150位氨基酸的饵片段与水稻组蛋白去乙酰酶HD1(OsAAK01712)相互作用。OsAAK01712的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白是水稻组蛋白去乙酰酶HD1(GENBANK_登录号AAK01712.1，100％相同性，e＝0.0)。组蛋白去乙酰酶(HD)已经分离自植物，真菌和动物(参见Lechner et al.，1996)。组蛋白去乙酰酶和组蛋白乙酰转移酶的酶活性保持可逆核心组蛋白乙酰化的酶平衡。核心组蛋白是真核细胞中一组高度保守的核蛋白；它们代表染色质的主要成分，是其中染色体DNA组织化的DNA-蛋白质复合物。除了染色质结构组织化的作用之外，核心组蛋白还参与基因调节，其调节功能归因于进行可逆翻译后修饰如乙酰化，磷酸化，糖基化，ADP-核糖基化，及遍在蛋白化的能力。组蛋白去乙酰酶以多种酶形式存在，这个多样性反映了核心组蛋白乙酰化的复杂调节。基于在发芽期间的表达、分子量、物理化学性质及由多种化合物的抑制情况，从发芽的玉米胚中已经鉴别和鉴定了4个核HD(HD1-A，HD1-BI，HD1-BII，和HD2)。基于这些数据，Lechner et al.，1996提示HD酶在建立和保持组蛋白-蛋白质相互作用中起作用，并且乙酰化可调节具有阴离子结构域的蛋白质与某些染色质区域的结合。

发现Os006819-2510与水稻钙网蛋白前体(OsCRTC)相互作用。猎物克隆OsCRTC的氨基酸序列的BLAST分析表明这个蛋白质是水稻钙网蛋白前体(GENBANK_登录号BAA88900/SwissProt No.Q9SLY8，100％相同性，e＝0.0)。对OsCRTC的氨基酸序列分析表明OsCRTC是具有424个氨基酸的蛋白质，具有一个可切割的信号肽(第1-29位氨基酸)，一个钙网蛋白家族重复基序(第218-230位氨基酸)，和一个内质网靶定序列(第421-424位氨基酸)(见Munro&Pelham，1987；Pelham，1990)。与其称作钙网蛋白前体一致，分析鉴别了一个钙网蛋白家族签名(第31-343位氨基酸，1.3e^-166)(见Michalak et al.，1992；Bergeron et al.，1994；Watanabe et al.，1994)。分析还鉴别了一个跨膜结构域(第7-29位氨基酸)和一个卷曲螺旋(第360-389位氨基酸)。编码水稻钙网蛋白OsCRTC的cDNA首先由Li&Komatsu，2000鉴别，他发现这个基因参与水稻培养的悬浮细胞的再生。这些作者报道了水稻钙网蛋白是高度保守的，示出与其它植物钙网蛋白的高度同源(70-93％)，但与哺乳动物钙网蛋白仅有50-53％同源。钙网蛋白(CRT)是一种内质网(ER)钙结合蛋白，认为其参与真核细胞的许多功能，包括Ca²⁺信号化，调节胞内Ca²⁺贮存及通过质膜的钙池操纵的Ca²⁺流出，调节内质网Ca²⁺-ATP酶功能，促进蛋白质折叠的侣伴活性，控制细胞粘附，基因表达，及编程性细胞死亡(参见Michalak et al.，1998及Persson et al.，2001)。在植物中，CRT定位于内质网，高尔基体，胞间连丝，及质膜(Hassan et al.，1995；Borisjuket al.，1998；Baluska et al.，2001)，并且示出影响细胞钙稳态，如前述Persson等所报道。这个研究示出在转基因烟草和拟南芥植物中诱导钙网蛋白表达增强内质网中ATP-依赖性Ca²⁺积聚，并且这个CRT介导的ERCa²⁺库(pool)的改变调节ER产生的Ca²⁺信号。这些结果表明CRT在内质网ER中作为钙贮存调节物起关键作用，并且除了液泡之外，ER是植物细胞中重要的Ca²⁺贮备处。拟南芥钙网蛋白同系物在花药成熟或开裂中的作用也已经基于这个蛋白质在最大CRT表达之时退化的花药中的定位而提出(Nelson et al.，1997)。另外，哺乳动物CRTC的烟草同系物以刺激和ATP依赖性方式参与蛋白质-蛋白质相互作用(Denecke et al.，1995)。这个观点支持了酵母双杂交技术在鉴别与OsCRTC相互作用的蛋白质中的应用。

OsCRTC也用作饵并发现与水稻可溶淀粉合酶(OsSSS；见表24)和新的蛋白质PN29950(OsPN29950)相互作用。OsSSS是水稻可溶淀粉合酶(SSS)的同系物，这是参与植物中淀粉生物合成的三种酶之一。淀粉是世界上主要农作物中产生的主要成分，并且是由植物合成的工业化过程中使用的最重要的产物之一。其由两种葡萄糖聚合物组成：高度分枝的支链淀粉及相对未分枝的直链淀粉。淀粉合酶有助于支链淀粉的合成。这个酶利用糖基供体ADP-葡萄糖(ADPGlc)，通过α(1→4)键将糖基单位加入一个葡聚糖链的非还原端，因此延长线性链(参见Cao et al.，2000；Kossman&Lloyd，2000)。淀粉合酶的不同类别的同种型基于氨基酸序列的相似性、分子量和抗原性质而阐明。植物器官就其类别而言以及对这些类别可溶淀粉合酶活性的相应的贡献而言变化非常大(Smith et al.，1997，cited in Cao et al.，2000)。通过BLAST分析确定OsPN29950是未知功能的蛋白质，与来自拟南芥的推定的蛋白质相似(GENBANK_登录号NP 199037.1，32％相同性，2e^-29)。

发现Os006819-2510与低温诱导的蛋白5(OsLIP5)相互作用。OsLIP5是具有276个氨基酸的蛋白质，具有一个可切割的信号肽(第1-27位氨基酸)和三个推定的跨膜区域(第48-64，82-98，和233-249位氨基酸)。对这个猎物克隆的氨基酸序列进行BLAST分析确定其是水稻LIP5蛋白(GENBANK_登录号BAA24979.1，100％相同性，8e^-052)。水稻LIP5蛋白直接公布于公众数据库，在文献中未加描述。在酵母中，LIP5参与硫辛酸代谢(Sulo&Martin，1993)。BLAST分析示出水稻LIP5样蛋白OsLIP5还与水稻WSI724(GENBANK_登录号T07613，98％相同性，3e^-051)相似，这是由短期水刺激诱导的9个cDNA之一编码的蛋白质，并认为负责水稻寒害敏感品种中获得的抗寒性(Takahashi et al.，1994)。在由这些cDNA编码的蛋白质中，发现其在水刺激后不同程度表达，WSI724蛋白的表达相对固定。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsLIP5的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS000070_r_at(e＝4e^-75)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由除草剂BL2负调节的。

还发现Os006819-2510与水稻推定的肌球蛋白(OsPN23878)相互作用。对OsPN23878的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个猎物蛋白是水稻推定的肌球蛋白(GENBANK_登录号AAL31066.1，99％相同性，e＝0.0)。OsPN23878还与来自玉米的肌球蛋白VIII，ZMM3-玉米(片段)相似(GENBANK_登录号A59311，89％相同性，e＝0.0)。肌球蛋白在实施例I中论述。基于关于植物肌球蛋白的现有知识，肌球蛋白VIII猎物蛋白OsPN23878可能是细胞骨架成分，参与胞质分裂相关的活动。

猎物蛋白OsPN23878还与假设蛋白003118-3674相互作用，其与番茄钙调蛋白(Os003118-3674；见表25)相似。Os003118-3674是具有148个氨基酸的蛋白质，具有两个EF-hand钙结合结构域(第22-34和93-105位氨基酸)。与观测到Os003118-3674包括EF-hand钙结合结构域一致，Genpept数据库的BLAST分析表明这个蛋白质与拟南芥推定的钙调蛋白(GENBANK_登录号NP_1764705，e^-57)具有72％相同性，尽管这个研究中最高采样是拟南芥推定的丝氨酸/苏氨酸激酶(GENBANK_登录号NP_172695.1，76％相同性，7e^-60)。因此，这个钙调蛋白样蛋白具有激酶活性的可能性值得考虑。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23878的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS002190_I_at(e^-165)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因不是在广泛的给定条件下特异性诱导的。

另外，发现Os006819-2510与OsRAB16B(OsRAB16B)相互作用，这是具有164个氨基酸的蛋白质，其在第51和52位氨基酸之间具有一个可能的切割位点，尽管其看起来没有一个可切割的信号肽。其氨基酸序列分析推测(2.6e^-81)这个蛋白质是称为脱水素的一组植物蛋白的成员，其在植物中通过水刺激被诱导(见Close et al.，1989；Robertson&Chandler，1992；Dure et al.，1989)。脱水素包括碱性甘氨酸-富集RAB(应答脱落酸)蛋白。与这个观点一致，分析表明OsRAB16B是碱性富含甘氨酸的蛋白。针对公众数据库的BLAST分析表明OsRAB16B是水稻脱水素RAB 16B(GENBANK_登录号P22911，100％相同性，4e^-95)。编码这个蛋白质的cDNA通过(Yamaguchi-Shinozaki et al.，1990)分离，作为在水稻组织中差异表达的四个水稻RAB基因之一。与OsRAB16B是水稻RAB蛋白的观点一致，针对Myriad’s私人数据库的BLAST分析表明OsRAB16B与OsRAB25具有57％相同性。OsRAB16B的表达数据未获得，水稻RAB16B启动子含有ABA诱导所需的两个脱落酸(ABA)应答元件(Onoet al.，1996)。在其它水稻RAB蛋白中，RAB16A基因与盐刺激相关(Saijoet al.，2001)，并且RAB16A启动子的活性也是由ABA和植物和花器官的不同组织中的渗透压诱导的(Ono et al.，1996)。另一个水稻RAB蛋白RAB21在用NaCl和/或ABA处理的水稻胚，叶，根和愈伤组织衍生的悬浮细胞中被诱导(Mundy&Chua，1988)。基于这些数据，很可能OsRAB16B猎物蛋白在应激反应中有作用。

发现Os006819-2510与蛋白PN23226(OsPN23226)相互作用。针对公众数据库的BLAST分析表明OsPN23226与推定的葡聚糖合酶(GENBANK_登录号NP_563743.1，78％相同性，e＝0.0)及与来自拟南芥的愈伤葡萄糖合酶1催化亚基(GENBANK_登录号NP_563743.1，78％相同性，e＝0.0)相似。来自高等植物的愈伤葡萄糖合酶(CalS)是一种多亚基膜相关酶，参与愈伤葡萄糖(callose)合成(参见Hong et al.，2001所述)。愈伤葡萄糖是一种线性1，3-β-葡聚糖，具有一些1，6-分枝，并与植物细胞壁的主要成分纤维素不同。愈伤葡萄糖是在植物中形成细胞板及一些其它部位上合成的，其在细胞板的沉积先于纤维素的合成。愈伤葡萄糖合成也是由创伤，病原体感染和生理刺激诱导的。愈伤葡萄糖合酶的活性在植物发育期间被高度调节并可以受到多种生物和非生物因素的影响。CalS，如纤维素合酶，是一种大跨膜蛋白。其结构包括一个在CalS同种型中相对保守的大的亲水性环，一个不太保守的长的N末端节段，及一个短的C末端节段，均位于胞质侧。中心环被认为是持有CalS催化活性必需的其它蛋白质的容器(见下文描述)；N-末端节段可含有与调节1，3-β-葡聚糖合酶活性的蛋白质相互作用的亚结构域。

编码来自拟南芥的愈伤葡萄糖合酶(CalS1)催化亚基的cDNA由Hong et al.，2001鉴别，其表明高等植物编码多种形式的CalS酶，并且拟南芥CalS1是细胞板特异性同种型。另外，这些作者使用酵母双杂交和体外实验以示出CalS1与两种其它细胞板特异性蛋白质phragmoplastin和UDP-葡萄糖转移酶相互作用，并提示其可以与这些及其它蛋白质形成大的复合物以促进愈伤葡萄糖在细胞板上沉积。另外，质膜CalS是严格Ca²⁺-依赖性的，并且Ca²⁺在细胞板形成中起关键作用及可以激活细胞板特异性CalS1。猎物蛋白OsPN23226可能是一种水稻愈伤葡萄糖合酶同系物，其与拟南芥CalS1催化亚基功能相似。

除了细胞板之外，愈伤葡萄糖还在多种特化的组织中及应答机械和生理刺激而合成。多种CalS同工酶被认为是高等植物中所必需的，以催化愈伤葡萄糖在不同的部位及应答不同的生理学和发育信号而合成(Hong et al.，2001)。

还发现Os006819-2510与蛋白PN23485相互作用，其与大麦粪卟啉原III氧化酶，叶绿体前体(OsPN23485)相似。OsPN23485的氨基酸序列的BLAST分析表明这个蛋白质与大麦(H.vulgare)粪卟啉原III氧化酶，叶绿体前体(粪原因子氧化酶；GENBANK_登录号Q42840，89.3％相同性，e^-169)相似。粪卟啉原III氧化酶(CPO)催化从5-氨基-乙酰丙酸至原卟啉IX的途径中的一个步骤，这是动物中血红素及光合作用生物体中叶绿素的生物合成中的一个共有的反应。植物CPO的N末端序列特征在于质体转运肽。CPO专门位于质体的基质中，在体外转录和翻译的CPO输入豌豆质体的基质中并通过基质内肽酶截短(参见Ishikawa et al.，2001)。编码CPO的植物cDNA序列得自大豆，烟草和大麦(Kruse et al.，1995)。他们发现植物粪原因子氧化酶mRNA在多种组织中不同程度表达，在发育中的细胞中最大量表达及在完全分化的细胞中表达量显著降低，提示在不同的器官中不同的四吡咯需求。基于这些结果，这些作者提议参与四吡咯(卟啉)合成的酶是受发育而不是受光调节的，这些酶的调节保证了代谢中间物的持续流出并帮助避免积聚卟啉所致的光力学损害。叶绿素合成途径的抑制导致损害形成，如发现lin2植物的淡绿色及损害形成表型。如前述Ishikawa等发现粪卟啉原III氧化酶的缺乏导致这些拟南芥突变体中损害形成。另外，基于观测到CPO活性降低的转基因烟草植物中积聚光敏性四吡咯中间物并呈现抗氧化性应答和坏死叶损害，这些作者提示CPO抑制引起损害形成，导致一系列防御应答的诱导，与在病原体攻击后观测到的HR相似。这些损害与已知人体中卟啉症的疾病相同。如果光敏物粪卟啉(原)积聚，则在活性氧的产生中诱导损害，这在HR和某些损害模拟突变体中引起细胞死亡和损害形成中均起关键作用。他们提示在lin2突变体中，通过粪卟啉积聚触发的氧化性突发的产生导致细胞死亡。

发现Os006819-2510与蛋白质PN29037(OsPN29037)相互作用。OsPN29037的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与来自拟南芥的γ羟丁酸脱氢酶相似(GENBANK_登录号AAK94781.1，80.7％，相同性，e^-127)。这个酶氧化γ羟丁酸。作为直接或间接参与动物中清除氧产生的自由基的次要脑代谢物，γ羟丁酸表明与褪黑素相似(Cash，1996)。

小结

因此，衰老相关蛋白Os006819-2510与一些在细胞周期过程中具有可能作用的蛋白质相互作用。其中之一是OsPN23878，这是在公众结构域中评注为水稻推定的肌球蛋白的蛋白质。肌球蛋白是细胞骨架蛋白，其在多种细胞活动中与肌动蛋白丝的ATP依赖性相互作用中作为分子动力器起作用。基于猎物蛋白与VIII类肌球蛋白的相似性及基于植物肌球蛋白VIII在细胞板的成熟和在胞质分裂时肌动蛋白细胞骨架的组织化中所报道的作用，我们推测肌球蛋白OsPN23878是一种细胞骨架成分，参与在水稻胞质分裂时发生的活动。肌球蛋白OsPN23878与衰老相关蛋白的关联可能是细胞周期依赖性活动中的一个步骤，参与细胞骨架组织化和衰老。在圆锥花序中编码OsPN23878的基因的特异性表达(我们的基因表达实验)与这个蛋白质与Os006819-2510之间的相互作用一致，及与后者在花衰老中的作用一致，提示这个基因编码这个蛋白质的daylily同系物(Panavas et al.，1999)。ER的衰老相关蛋白定位提示其中OsPN23878起作用的一些活动可能与胞间连丝功能相关。

注意肌球蛋白OsPN23878还与新的钙调蛋白-激酶样蛋白Os003118-3674(见表25)相互作用，后者与肌球蛋白重链(OsAAK98715)相互作用，发现肌球蛋白重链(OsAAK98715)与水稻细胞周期蛋白OsCYCOS2相互作用并推测参与有丝分裂活动期间细胞骨架组织化(见实施例II)。肌球蛋白与钙结合钙调蛋白样蛋白的相互作用与公布的钙调节肌球蛋白功能的证据一致(Yokota et al.，1999a；参见Reddy，2001)。Os003118-3674具有激酶活性的可能性产生这样的可能性，即这些相互作用传播细胞周期相关的信号化活动。钙调蛋白样蛋白Os003118-3674因此提供了衰老相关蛋白与这个实施例及细胞周期网络的相互作用配偶体之间的联系。

在细胞周期调节中具有可能作用的另一种相互作用子是水稻组蛋白去乙酰酶OsAAK01712。这种酶包括一个跨膜结构域并参与调节核心组蛋白乙酰化。染色质的主要蛋白质成分组蛋白的乙酰化/去乙酰化与在植物中细胞周期期间复制相关，在其它真核细胞中同样(Jasencakova et al.，2001)。因此，Os006819-2510-OsAAK01712相互作用很可能参与有丝分裂活动包括染色质组织化。

发现衰老相关蛋白的另一种新的相互作用子是OsPN23485，与粪卟啉原III氧化酶、叶绿体前体相似，这是导致植物中叶绿素生物合成途径的酶。观测到lin2突变体拟南芥植物中损害形成是CPO功能丧失的结果(Ishikawa et al.，2001)，这将编码CPO的基因与调节细胞死亡途径联系起来。另外，植物CPO酶是由发育及由光调节的(参见Ishikawa et al.，2001)。基于这些报道，水稻CPO(OsPN23485)与衰老相关蛋白的相互作用可能以发育依赖性方式参与调节水稻中程序化细胞死亡。

基于氨基酸序列分析推测是跨膜蛋白的衰老相关蛋白Os006819-2510与水稻钙网蛋白OsCRTC相互作用，水稻钙网蛋白OsCRTC与其它植物钙网蛋白相似很可能是一种ER跨膜蛋白。Os006819-2510中两个内质网保持基序及OsCRTC中一个内质网靶定序列的存在提示这个两种蛋白质均定位于ER。这个观点与in plantaOs006819-2510和OsCRTC之间的相互作用的可能性一致。Os006819-2510可参与内质网内OsCRTC控制的活动。这个相互作用与提示植物CRT在花药成熟和开裂中的作用一致，这是由Nelson et al.，1997基于拟南芥CRT在花药中的最大表达与花药退化相一致的观测结果而提议的。另外，Denecke et al.，1995报道了在核包膜、ER、及在有丝分裂细胞中检测到另一种植物CRT同系物与纺锤体设施和成膜体相关。假如衰老相关蛋白与在有丝分裂中有作用的蛋白质的相互作用，有可能这个实施例的水稻CRT在有丝分裂活动中起作用。然而，Nelson et al.，1997表明植物CRT在发育过程中的可能的额外作用，包括可与CRT定位于发育中的胚乳(特征在于高速度蛋白合成的部位)及在分泌蜜腺(与分泌的蛋白质通过ER大量运输相关)中一致的侣伴作用。注意OsCRTC还与水稻可溶淀粉合酶同系物OsSSS相互作用。可溶淀粉合酶已经分离自植物胚乳细胞(Cao et al.，2000)。这些数据提示这个实施例的水稻CRT同系物在这个组织中也可以发现，在此可能的是其与具有侣伴作用的可溶淀粉合酶OsSSS相互作用，促进在蛋白质合成期间这个蛋白质的正确折叠。

为进一步确证水稻衰老相关蛋白Os006819-2510是膜相关蛋白的观点，针对这个蛋白质鉴别的一个新的相互作用子是推定的愈伤葡萄糖合酶催化亚基(OsPN23226)，这是参与葡聚糖合成的另一种跨膜酶。质膜蛋白参与与细胞壁的多种相互作用，包括细胞壁聚合物的合成和装配(Buchanan et al.，2002，13页)。猎物蛋白OsPN23226可能如其拟南芥同系物起作用，这是利用UDP-葡萄糖作为底物以合成在细胞壁中沉积的愈伤葡萄糖的质膜酶。衰老相关蛋白与水稻推定的愈伤葡萄糖合酶OsPN23226及与钙网蛋白OsCRTC的相互作用，及OsCRTC与可溶淀粉合酶OsSSS之间的相互作用均包括膜相关蛋白。没有这种相互作用同时发生的迹象，它们可能与在细胞周期/发育的不同阶段及应答不同的生理学和发育信号期间淘选、分布和靶定内膜系统的区室之间膜蛋白及其它分子的运输相关(Buchanan et al.，2002，第14页)。另外，这个实施例中鉴别的相互作用将衰老相关饵蛋白与葡聚糖合成联系起来，这是对植物正常生长很重要的一个过程。例如，功能性愈伤葡萄糖合酶1催化亚基(CalS1)复合物的形成对细胞板形成很重要。CalS1复合物和CalS相关蛋白的多种成分的功能性鉴定是揭示这种酶的活性在细胞板形成期间怎样调节及阐明植物中愈伤葡萄糖合成和沉积的一种方式(Hong et al.，2001)。衰老相关蛋白和新的推定的愈伤葡萄糖合酶催化亚基(OsPN23226)之间鉴别的相互作用提供了对水稻这个过程的新观点。

针对衰老相关蛋白鉴别的其它相互作用将这个蛋白质与植物应激反应联系起来。OsRAB16B是已知由水刺激及用植物激素脱落酸处理而诱导的蛋白质RAB家族的一个成员。ABA水平在许多植物物种的种子发育期间增加，刺激种子贮存蛋白的产生及预防不成熟萌发；ABA还由水刺激诱导并认为调节气孔蒸腾(Raven et al.，1999，第684页)。基于与其它RAB蛋白的功能同源及基于OsRAB16B启动子中存在ABA应答元件，我们推测OsRAB16B在水稻应答非生物刺激中有作用，并且其功能可能由Ca²⁺调节。与刺激相关的另一种相互作用子是低温诱导的蛋白5(OsLIP5)，其在酵母中参与硫辛酸代谢。动物中硫辛酸已经示出帮助系统刺激作用最小化(Kelly，1999)并提供具有显著抗瑞品内酯(分离自Russian knapweed的一种倍半萜内酯)胞毒性作用的保护(Robles et al.，1997)。水稻LIP5-样蛋白与水稻WSI724(水稻中由水刺激诱导的并与寒冷抗性相关联的基因编码的蛋白质)的高度相似性(98％)，表明了与OsLIP5猎物蛋白的相似作用。基因表达实验表明编码OsLIP5的基因在用除草剂BL2处理时是负调节的。这个发现提示OsLIP5在应答非生物刺激中的作用。Os006819-2510与猎物蛋白OsRAB16B和OsLIP5之间的相互作用的特异性功能不明显，这些相互作用可参与花衰老相关的生物学过程并应答水刺激和寒冷。

另外，上述水稻钙网蛋白OsCRTC在应激反应中也有作用。这个假说基于与Denecke et al.，1995研究的烟草CRT蛋白功能同源并发现以应激依赖性方式参与蛋白质一蛋白质相互作用。

概括而言，针对水稻衰老相关蛋白Os006819-2510鉴别的相互作用子是一些膜相关蛋白，其支持水稻Os006819-2510是一种跨膜蛋白的观点。鉴别的相互作用子是参与细胞周期过程/有丝分裂的蛋白质及在植物应激反应中起作用的蛋白质。一些是新鉴定的水稻蛋白。针对水稻衰老相关蛋白与参与细胞周期/发育及对应激的抗性的蛋白质鉴别的相互作用提示与饵蛋白的重叠作用。Os006819-2510确实可以构成水稻中应激耐受与细胞分裂过程之间的联系。

实施例VII

OsSGT1是具有367个氨基酸的蛋白质，其包括一个三十四肽(tetratricopeptide)重复结构域，两个可变区域，存在于后生动物CHORD和SGT1蛋白中的CS基序，及SGS基序。在酵母中，Sgt1是细胞周期信号化所需的。在酵母中，SGT1与动粒复合物及与SKP1相互作用的SCF型E3遍在蛋白连接酶相关。COP9信号传导体(signalosome)与SCF E3遍在蛋白连接酶相互作用。通过其与SCF复合物的相互作用，SGT1发挥其在降解SIC1和CLN1中的基本活性。因此，SGT1的一个可能作用可能是靶定蛋白质以通过26S蛋白酶体降解，通过特异性SCF复合物或SGT1复合物可以参与蛋白质活性的修饰或者可通过遍在蛋白化而具有激活和降解靶物质的双重作用。拟南芥有两个SGT1同系物。在非许可温度，AtSGT1a和AtSGT1b可补足温度敏感的sgt1酵母突变体中停滞的G1和G2。然而，SGT1b与RAR1相互作用，RAR1是RPP5调节的霜霉病抗性所需的。在这个情况中，参与疾病抗性的靶蛋白可以通过SGT1途径靶定进行蛋白质降解。大麦编码一种也与大麦RAR1相互作用的一个SGT1同系物，其参与大麦霜霉病抗性(Austin et al.，2002；Azevedo et al.，2002)。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsSGT1的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS016424.1(98％)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由黑锈感染正调节的。

水稻SGT1蛋白与两种拟南芥SGT1同系物具有74％和75％氨基酸序列相似性，及与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SGT1具有45％氨基酸序列相似性。在酵母中，SGT1是细胞周期G1/S期和G2/M过渡期行进所需的。在拟南芥中，SGT1b与Rar1相互作用并介导疾病抗性。因此，在植物中SGT1很可能控制对疾病抗性和发育而言最基本的过程。针对这些相互作用研究，基于其与疾病抗性和发育的潜在相关性而选择水稻OsSGT1蛋白作为饵。编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的一个饵片段如上述在酵母双杂交筛选中使用。

结果

发现OsSGT1与10种水稻蛋白相互作用。先前已经鉴别了三种相互作用子，即OsSGT1，Ras GTP酶(GENBANK_登录号P40392)，及激发物应答蛋白(GENBANK_登录号T50649)。余下的七种相互作用子是具有可鉴别的蛋白质结构域的新的蛋白质，或者与其它蛋白质相似。这些是L-天冬氨酸酶样蛋白，RNA结合结构域蛋白，生长素诱导样蛋白，archainδCOP样蛋白，原纤蛋白样蛋白，HSP70样蛋白，即脯氨酸富集蛋白。激发物应答蛋白也用作饵并与12种新的蛋白质相互作用，所述新的蛋白质具有可鉴别的蛋白质结构域，与已知蛋白具有相似性或者通过序列相似性不可鉴别。这些是NAD(P)结合结构域蛋白，γ衔接蛋白样蛋白，果胶脂酶样蛋白，受体样激酶蛋白激酶样蛋白，丙酮酸正磷酸二激酶样蛋白，Isp-4样蛋白，黄嘌呤脱氢酶样蛋白，遍在蛋白特异性蛋白酶样蛋白及4种未知的蛋白质。

这个实施例的相互作用蛋白列于表26，随后是关于每个蛋白质的详细信息及相互作用意义的讨论。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO：111-150和309-316中提供。基于SGT1的生物学功能，可能相互作用蛋白也参与细胞周期/有丝分裂过程和/或植物对应激的抗性。另外，具有激发物应答蛋白的相互作用子也可以参与植物应激抗性。参与水稻细胞周期调节的蛋白质可以靶定进行遗传操纵或者进行化合物处理以修饰其水平或活性，从而调节植物细胞周期。编码这些蛋白质的基因的鉴别使得可以对农作物进行遗传操纵或者应用化合物以达到在植物发育或生长中产生希望的农业学改变。另外，参与赋予植物应激抗性的基因具有重要的商业应用价值，因为它们可用于促进应激抗性农作物的产生和产量。

表26

针对Os006819-2510鉴别的相互作用蛋白

(假设蛋白006819-2510，与萱草衰老相关蛋白5相似)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由研究中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
PN20285(SEQ ID NO：310)	OsSGT1(gi|6581058)
				相互作用子
PN24060(SEQ ID NO：112)	L-天冬氨酸酶样蛋白样	200-368	176-315(输出性状)

PN20696*(OsERP)(SEQ ID NO：312)	激发物应答蛋白(gi|11358958)	200-368	54-144(输入性状)
				PN23914(SEQ ID NO：114)	RNA结合结构域蛋白	200-368	1-263x3(输出性状)
PN23221#(SEQ ID NO：116)	脯氨酸富集蛋白	200-368	182-366x2(输出性状)207-344(输入性状)134-254(输出性状)
				PN20285(SEQ ID NO：310)	OsSGT1(gi|6581058)	200-368	9-227(输出性状)
PN24061(SEQ ID NO：118)	生长素诱导的蛋白样	200-368	34-236(输出性状)
				PN24063(SEQ ID NO：314)	RAS GTP酶(gi|730510)	200-368	63-202(输出性状)
PN23949(SEQ ID NO：120)	HSP70样	200-368	244-418(输出性状)
				PN29042(SEQ ID NO：122)	原纤蛋白样
PN28982(SEQ ID NO：124)	archainδCOP样

^*针对激发物应答蛋白鉴别的额外的相互作用示于表27

#针对PN23221鉴别的额外的相互作用示于表28

表27

针对OsERP鉴别的相互作用蛋白

(激发物应答蛋白(elicitor responsive protein))

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
PN20696(OsERP)(SEQ ID NO：312)	激发物应答蛋白(gi|11358958)
				相互作用子

PN29984(SEQ ID NO：126)	新的蛋白质PN29984	50-145	1-385-41(输入性状)
				PN30844(SEQ ID NO：128)	新的蛋白质PN30844	50-145	1-64(输入性状)
PN30868(SEQ ID NO：130)	NAD(P)结合结构域蛋白	50-145	167-336(输入性状)
				PN24292(SEQ ID NO：132)	γ衔接蛋白样	23-120	737-918(输出性状)
PN29983(SEQ ID NO：134)	新的蛋白质PN29983	50-145	1-131(输入性状)
				PN30845(SEQ ID NO：136)	果胶脂酶样	50-145	1-64(输入性状)
PN31085(SEQ ID NO：138)	受体样蛋白激酶样	23-120	378-553(输出性状)
				PN20674(SEQ ID NO：140)	丙酮酸正磷酸二激酶样	50-145	64-26371-298(输入性状)
PN30870(SEQ ID NO：142)	Isp-4样	50-145	1-446(输入性状)
				PN29997(SEQ ID NO：144)	黄嘌呤脱氢酶样	23-120	737/918(输出性状)
PN30843(SEQ ID NO：146)	遍在蛋白特异性蛋白酶样	50-145	164-221(输入性状)
				PN30857(SEQ ID NO：148)	新的蛋白质PN30857	50-145	1-148(输入性状)

表28

针对PN23221鉴别的相互作用蛋白

(脯氨酸富集蛋白)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_登录号)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				猎物蛋白
PN23221(SEQ ID NO：116)	脯氨酸富集蛋白
				饵蛋白
PN20621(SEQ ID NO：316)	Shaggy激酶(gi|13677093)	120-435	175-311(输出性状)
				PN20115(SEQ ID NO：150)	环锌指蛋白	5-140	84-302191-324(输出性状)

使用OsSGT1作为饵的酵母双杂交

发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与L-天冬氨酸酶样蛋白PN24060相互作用。PN24060的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与拟南芥L-天冬氨酸酶(在GENBANK_登录号NM_101325获得的核苷酸序列)具有36.5％相似性。酶L-天冬氨酸脱氨酶(天冬氨酸酶)催化氨基酸L-天冬氨酸的可逆脱氨作用，使用负碳离子机制以产生反丁烯二酸和铵离子。这个酶的催化活性已经已知接近100年，许多近来的研究表明这个充分鉴定的酶的一些感兴趣的和未预料到的新性质。在某些条件下见到的非线性动力学示出是由存在单独的调节位点导致的。底物天冬氨酸也起激活剂作用，在这个位点与所需的二价金属离子一起结合。因此可能的是PN24060催化适合蛋白质修饰的反应，并且修饰对疾病抗性或细胞周期蛋白是重要的。

还发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与激发物应答蛋白PN20696相互作用。猎物克隆PN20696的氨基酸序列的BLAST分析表明这个蛋白质是水稻激发物应答蛋白(GENBANK_登录号T50649；OsERP)。根据GENBANK_确定OsERP是具有144个氨基酸的蛋白质，是在存在水稻黑锈真菌激发物的情况中由水稻培养细胞表达的。因此，OsERP在水稻疾病应答中有作用。

OsERP也用作饵并发现与12种其它蛋白质相互作用(见表27)。这些猎物在这个实施例的下文描述。

OsERP的拟南芥同系物通过BLAST鉴别。At1g63220与OsERP具有75％氨基酸相似性。为了解OsERP的拟南芥同系物在疾病抗性中是否有作用，具有At1g63220中T-DNA插入的拟南芥(SAIL_320_D02品系)从随机插入体种子文库中鉴别。对插入体周围的DNA区域进行测序，表明T-DNA位于At1g63220的外显子5内。植物回交并通过PCR鉴别T-DNA插入体纯合植物。纯合突变体和野生型植物用丁香假单胞菌斑生致病变种(Pseudomonas syringae pv.Maculicola)ES4326攻击，接种3天后分析植物的P.syringae细菌积聚(Glazebrook et al.，1996)。对至少六个植物将这些实验重复两次。报道的数据是每平方厘米的叶中集落形成单位的对数的平均值和标准误差。在接种后3天，突变的植物积聚比野生型植物多10倍的细菌(wt＝3.94 log cfu/叶 disk std.0.57，at1g63220＝5.34 std.0.63)。因此，At1g63220有助于拟南芥中疾病抗性。可能的是At1g63220突变抑制依赖于SGT1相互作用的防御应答。

另外，发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与RNA结合结构域蛋白，PN23914相互作用。PN23914是具有164个氨基酸的蛋白质。这个猎物的氨基酸序列的BLAST分析示出其与来自虹鳟(Oncorhynchus mykiss)的tFZR1具有35.9％序列相同性(GENBANK_登录号BAA25269)。TFZR1是一个孤核受体(orphan nuclear receptor)家族成员tFZR1，其具有一个FTZ-F1盒。锌指结构域和FTZ-F1盒的氨基酸序列与斑马鱼(zebrafish)FTZ-F1的氨基酸序列分别具有92.8％和100％的相同性。另一方面，tFZR1与斑马鱼FTZ-F1之间的整体同源低(33.0％)。结果表明tFZR1是fushitarazu因子1(FTZ-F1)亚家族的一个新成员。PN23914可能通过锌指结构域而具有功能性。

另外，发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与脯氨酸富集蛋白PN23221相互作用。PN23221的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与水稻重复脯氨酸富集蛋白(GENBANK_登录号AAL73214)具有40.3％相似性。脯氨酸富集蛋白可介导蛋白质之间的相互作用(Zhao et al.，2001)。注意脯氨酸富集蛋白PN23221还与shaggy激酶PN20621及环锌指蛋白样PN20115相互作用(见表28)。因此，脯氨酸富集蛋白PN23221可将这些蛋白质与OsSGT1结合在一起。

还发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与OsSGT1相互作用。换句话说，OsSGT1与自身相互作用。尽管OsSGT1的饵包括第200-368位氨基酸，但猎物包括第9-227位氨基酸。尽管OsSGT1通过聚集可以是自身调节物，但这些饵和猎物结构域可反映一个天然OsSGT1蛋白的自然蛋白质折叠。

另外，发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与生长素诱导的蛋白质样蛋白PN24061相互作用。针对公众数据库进行的BLAST分析表明PN24061与水稻推定的IAA1蛋白有63.5％相似性(GENBANK_Accession No.CAC80823)。吲哚乙酸(IAA)是一种植物生长激素，并可被归类为生长素。IAA与许多生理学过程相关，包括顶端优势，向性，茎延伸，诱导形成层细胞分裂和根发生。因此，由IAA诱导的基因很可能产生应答于发育改变的蛋白质。这种关联与通过与SGT1相互作用而调节细胞分裂是密切相关的。

还发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与Ras GTP酶PN24063相互作用。对PN24063的氨基酸序列进行的BLAST分析确定这个蛋白质是具有GTP酶活性的ras相关GTP结合蛋白(GENBANK_Accession No.P40392)。这个蛋白质有四个参与GTP结合和水解的保守区域，这是在ras和ras相关小GTP结合蛋白基因所特有的。另外，还存在两个连续的半胱氨酸残基，接近膜锚定所需的羧基末端。这个蛋白质在具有GTP酶活性的大肠杆菌中合成(即GTP水解为GDP；Kidou et al.，1993)。Ras GTP酶很可能参与发育的信号化过程。在花发育早期表达的番茄ORFX控制心皮细胞数目，并具有与人癌基因c-H-ras p21结构相似的序列(fw2.2：番茄果实大小进化的关键数量性状基因座；Frary et al.，2000)。GTP酶的Rho家族也参与控制细胞形态，并也被认为介导细胞膜受体的信号(Winge et al.，1997)。

通过BLAST鉴别了PN24063的一个拟南芥同系物。At1g02130与PN24063具有90％的氨基酸相似性。为了解PN24063的拟南芥同系物是否具有疾病抗性，从随机插入种子文库中鉴别在At1g02130中具有T-DNA插入的拟南芥(SAIL_680_D03品系)。对插入体周围的DNA区域进行测序，表明T-DNA位于At1g02130的启动子内。将植物回交并通过PCR鉴别T-DNA插入纯合植物。将纯合的突变体和野生型植物用丁香假单胞菌斑生致病变种ES4326攻击，在接种3天后分析植物的丁香假单胞菌积聚数量(Glazebrook et al.，1996)。对至少6个植物将这些实验重复两次。报道的数据是每平方厘米叶的集落形成单位的对数的平均值和标准误差。在接种3天后，突变体植物积聚的细菌数是野生型植物的10倍以上(wt＝3.93 log cfu/叶 disk std.0.57，at1g02130＝5.22 std.0.9)。因此，At1g02130赋予拟南芥疾病抗性。可能的是At1g02130突变抑制依赖于SGT1相互作用的防御应答。

发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与ArchainδCOP(PN28982)相互作用。对PN28982的氨基酸序列进行BLAST分析表明这个猎物蛋白与水稻archainδCOP(GENBANK_Accession No.P49661)有92％相似性。可逆性结合膜的胞质外被蛋白在分泌途径内的膜转运中具有重要作用。一个经充分研究的实例是COPI或外被体(coatomer)，这是通过GTP-结合蛋白Arf1为膜补充的七聚体蛋白复合物。装配为电子密包被，然后帮助芽生远离膜以在内质网(ER)和高尔基体之间转运。激活的Arf1将外被体带至膜。然而，一旦与膜结合，则Arf1和外被体具有不同的滞留期：在Arf1-GTP已经水解并解离之后，外被体剩余在膜上。外被体和Arf1的快速膜结合及解离是随机发生的，即使没有小泡芽生也如此。外被体和Arf1的这种持续活性产生了动力学稳定的膜结构域，其与含有COPI的转运中间物关联。Arf1/外被体的这个作用可提供一个模型以研究细胞内其它外被蛋白系统的行为(Presley et al.，2002)。可能的是这个δCOP与OsSGT1和一种Ras GTP酶相互作用以调整蛋白酶解的蛋白质的膜转运。

通过BLAST鉴别一种PN28982的拟南芥同系物。At5g05010与PN28982有77％的氨基酸相似性。为了解PN28982的拟南芥同系物是否在疾病抗性中有作用，从一个随机插入种子文库中鉴别一个在At5g05010中具有T-DNA插入的拟南芥(SAIL_84_C10品系)。对插入体周围的DNA区域进行测序，表明T-DNA位于At5g05010的启动子内。将植物进行回交并通过PCR鉴别T-DNA插入纯合植物。将纯合的突变体和野生型植物用丁香假单胞菌斑生致病变种攻击，在接种3天后分析植物的丁香假单胞菌积聚数量(Glazebrook et al.，1996)。对至少6个植物将这些实验重复两次。报道的数据是每平方厘米叶的集落形成单位的对数的平均值和标准误差。在接种3天后，突变体植物积聚的细菌数是野生型植物的10倍以上(wt＝3.93 log cfu/叶 disk std.0.57，at5g05010＝5.24 std.0.52)。因此，At5g05010赋予拟南芥疾病抗性。可能的是At5g05010突变抑制依赖于SGT1相互作用的防御应答。

发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与原纤蛋白样蛋白PN29042相互作用。对OsPN29037的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个猎物蛋白与马铃薯叶绿体原纤蛋白同系物CDSP34前体(GENBANK_Accession No.T07825)有75％相似性。质体脂质相关蛋白质，也称为原纤蛋白/CDSP34蛋白，在非生物刺激条件下已知积聚在原纤维型色质体如成熟的胡椒果实的色质体中，及积聚在茄科(Solanaceae)植物的叶叶绿体中。另外，在应答水分亏缺的多种双子叶植物和单子叶植物中示出原纤蛋白/CDSP34蛋白的水平显著提高(Langenkamper et al.，2001)。在水分应激的番茄植物中，在野生型和ABA缺陷的flacca突变体中注意到CDSP 34相关转录物量的相似提高，但是仅在野生型中观测到蛋白质积聚，提示ABA在CDSP 34合成调节中的转录后作用。在进行高度照明的马铃薯植物中还观测到CDSP 34转录物和蛋白质丰度显著增加。提示CDSP 34蛋白在渗透压应激或氧化应激时在稳定基质片层类囊体中起结构作用(Gillet et al.，1998)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN29042的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS011738(100％)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由ABA处理正调节的。

通过BLAST鉴别PN29042的一个拟南芥同系物。At4g22240与PN29042具有79％氨基酸相似性。为了解PN29042的拟南芥同系物是否在疾病抗性中有作用，从一个随机插入种子文库中鉴别一个在At4g22240中具有T-DNA插入的拟南芥(SAIL_691_B11品系)。对插入体周围的DNA区域进行测序，表明T-DNA位于At4g22240的外显子1内。将植物回交并通过PCR鉴别T-DNA插入纯合植物。将纯合的突变体和野生型植物用丁香假单胞菌斑生致病变种攻击，在接种3天后分析植物的丁香假单胞菌积聚数量(Glazebrook et al.，1996)。对至少6个植物将这些实验重复两次。报道的数据是每平方厘米叶的集落形成单位的对数的平均值和标准误差。在接种3天后，突变体植物积聚的细菌数是野生型植物的10倍以上(wt＝3.93 log cfu/叶 disk std.0.57，at4g22240＝5.21 std.0.43)。因此，At4g22240赋予拟南芥疾病抗性。可能的是At4g22240突变抑制依赖于SGT1相互作用的防御应答。

另外，发现编码OsSGT1的第200-368位氨基酸的饵片段与HSP70样蛋白PN23949相互作用。OsPN3949的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与在叶绿体中发现的黄瓜70K热激蛋白(GENBANK_Accession No.T10248)具有71％相似性。热激蛋白(参见Bierkens et al.，2000)是应激蛋白，其作为胞内侣伴起作用以促进蛋白质折叠/伸展及装配/解体。它们应答多种刺激包括热及多种化合物而在植物细胞中选择性表达。作为调节物，HSP蛋白因此是植物保护性应激反应的一部分。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN23949的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015016(97％)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由除草剂和JA处理负调节的。

使用OsERP(PN20696)作为饵的酵母双杂交

接着，将发现与OsSGT1相互作用的蛋白质之一即激发物应答蛋白PN20696(GENBANK_Accession No.T50649；OsERP)用作饵。如表27所示，发现水稻激发物应答蛋白PN20696(GENBANK_AccessionNo.T50649；OsERP)与受体样蛋白激酶样蛋白PN31085相互作用。对OsPN31085的氨基酸序列进行BLAST分析表明这个猎物蛋白与水稻受体样蛋白激酶(GENBANK_Accession No.T04124)具有48％相似性。受体蛋白激酶包括一大组蛋白质，大多数蛋白质含有一个胞质蛋白激酶催化结构域，一个跨膜区，及和/或由亮氨酸富集重复组成的一个胞外结构域，认为其与其它大分子相互作用。细胞与细胞的通讯很可能是由受体激酶介导的，其在植物形态发生中起重要作用。

还发现OsERP与丙酮酸正磷酸二激酶PN20674相互作用。对PN20674的氨基酸序列进行BLAST分析表明这个猎物蛋白与水稻丙酮酸正磷酸二激酶(GENBANK_Accession No.T02979)具有96％相似性。已知丙酮酸正磷酸二激酶(PPDK)在C4光合作用中的作用，但在C3植物中无确定的功能。发现脱落酸，PEG和浸水在水稻根(C3)中显著诱导大约97kDa的蛋白质，通过微测序鉴别为PPDK。水稻PPDK是根的ABA诱导的蛋白质。Western印迹分析示出在逐步干燥、冷却、高盐及甘露醇处理期间水稻秧苗的根中PPDK诱导，表明水分亏缺应答。PPDK也在浸于水中的水稻秧苗的根和叶鞘中诱导，及在暴露于无氧N₂气中的黄化水稻秧苗中诱导，这表明一种低氧应激反应。应激处理无一诱导PPDK蛋白在绿色水稻秧苗的叶片中积聚。发现Ppdk转录物在浸于水中的秧苗的根中积聚，伴随醇脱氢酶1的诱导。低氧应激触发根和黄化的水稻秧苗中PPDK活性增加，伴随磷酸烯醇丙酮酸羧化酶和苹果酸脱氢酶活性增加。结果表明胞质PPDK参与水稻中水分亏缺和低氧应激的代谢应答，这是一种缺氧耐受物种(Moons et al.，1998)。

另外，发现OsERP与γ衔接蛋白PN24292相互作用。PN24292的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与拟南芥γ衔接蛋白(GENBANK_Accession No.BAA78745)具有97％相似性。真核液泡转运需要通过特异性蛋白质复合物对膜的识别。异四聚体衔接蛋白复合物1，2和3(AP1/2/3)由两个大的，一个小的及一个中等的衔接蛋白亚基组成。AP1/2/3的大亚基是同源的并且七聚体外被体I(COPI)复合物的两个亚基属于这个基因家族。另外，异四聚体的所有小亚基和中等亚基的氨基末端结构域均彼此同源；COPI复合物的两个相应的亚基也如此。AP1/2/3和七聚体COPI的亚结构(异四聚体，F-COPI亚复合物)具有共同的祖先复合物(称为前F-COPI)。由于所有大的和所有小的/中等亚基均具有序列相似性，因此推断这个复合物的祖先是由一个大的和一个小的亚基组成的异源二聚体(Schledzewski et al.，1999)。archain δCOP与OsSGT1相互作用，OsSGT1与γ衔接蛋白饵ERP相互作用。

还发现OsERP与黄嘌呤脱氢酶PN29997相互作用。PN29997的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与拟南芥黄嘌呤脱氢酶(GENBANK_Accession No.NP_195215)具有66％相似性。黄嘌呤脱氢酶是与黄嘌呤降解相关的酶。黄嘌呤脱氢酶参与嘌呤分解代谢和应激反应。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN29997的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS013724(100％)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在种子中表达。

还发现OsERP与遍在蛋白特异性蛋白酶PN30843相互作用。PN30843的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与拟南芥遍在蛋白特异性蛋白酶(GENBANK_Accession No.AAG42761)具有40％相似性。遍在蛋白/26S蛋白酶体途径是选择性降解真核细胞中胞质及核蛋白的一个主要途径。在这个途径中，遍在蛋白链附于短期存活的蛋白质，通过26S蛋白酶体进行信号化识别并破坏修饰的蛋白质。在靶降解期间或之后，附着的多个遍在蛋白链释放并随后通过遍在蛋白特异性蛋白酶(UBP)解体以再生游离的遍在蛋白单体以再应用。拟南芥遍在蛋白蛋白酶中T-DNA插入突变导致一种胚致死表型，纯合胚停滞在球形期阶段。停滞的种子具有显著增加的多个遍在蛋白链水平，表明遍在蛋白再循环中的缺陷。因此，在早期植物发育期间一般的遍在蛋白/26S蛋白酶体途径及特殊的AtUBP14存在基本作用(Doelling et al.，2001)。SGT1还与遍在蛋白/26S蛋白酶体途径的成分相互作用，与这个遍在蛋白特异性蛋白酶相互作用的ERP与OsSGT相互作用。这个蛋白酶在疾病抗性以及发育中有作用。

还发现OsERP与果胶脂酶PN30845相互作用。PN30845的氨基酸序列的BLAST分析表明这个猎物蛋白与水稻果胶脂酶(GENBANK_Accession No.BAB64824)有71％相似性。果胶脂酶催化细胞壁polygalacturonan的酯化。在双子叶植物中，这些遍在的细胞壁酶参与重要的发育过程，包括细胞附着和茎干延伸。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN30845的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS007057(99％)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由于JA处理、高盐度生长条件和除草剂处理的结果而正调节的。

还发现OsERP与一些蛋白质相互作用，即与PN30870，PN29984，PN30844，PN29983，PN30868和PN30857相互作用。PN30870，PN29984，PN30844，PN29983，PN30868和PN30857的氨基酸序列的BLAST分析表明这些猎物蛋白与任何其它鉴定的蛋白质无足够的同源性。然而，基于与水稻激发物应答蛋白PN20696的相关，这些蛋白质可能在疾病抗性或细胞周期中有作用。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN30857的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS008661.1(99％)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由于黑锈感染的结果而正调节的。

通过BLAST鉴别PN29983的一个拟南芥同系物。At2g36950与PN29983具有52％相似性。为了解PN29983的拟南芥同系物是否在疾病抗性中有作用，从一个随机插入种子文库中鉴别一个在At2g36950中具有T-DNA插入的拟南芥(SAIL_779_E11品系)。对插入体周围的DNA区域进行测序，表明T-DNA位于At2g36950的外显子3内。将植物回交并通过PCR鉴别T-DNA插入纯合植物。将纯合的突变体和野生型植物用丁香假单胞菌斑生致病变种攻击，在接种3天后分析植物的丁香假单胞菌积聚数量(Glazebrook et al.，1996)。对至少6个植物将这些实验重复两次。报道的数据是每平方厘米叶的集落形成单位的对数的平均值和标准误差。在接种3天后，突变体植物积聚的细菌数是野生型植物的10倍以上(wt＝3.94 log cfu/叶 disk std.0.57，at2g36950＝5.95 std.0.72)。因此，At2g36950赋予拟南芥疾病抗性。可能的是At2g36950突变抑制依赖于ERP/SGT1相互作用的防御应答。

应注意所有如下的饵蛋白，即OsSGT，环锌指，PN20115，和shaggy激酶，PN20621，鉴别的脯氨酸富集蛋白，PN23221，作为它们的猎物。OsSGT和PN23221在这个实施例的前文已经加以描述。

对环锌指PN20115的氨基酸序列进行BLAST分析表明这个饵蛋白与拟南芥环锌指蛋白At1g63170具有65％相似性。所述环形(RING)结构域是一个保守的锌指基序，其作为蛋白质-蛋白质相互作用的界面。这个蛋白质可与其它蛋白质相互作用以控制发育或应激耐受过程。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比PN20115的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015830(90％)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由于干旱条件的结果而正调节的。

shaggy激酶PN20621的氨基酸序列的BLAST分析表明这个饵蛋白是水稻shaggy激酶(gi|13677093)。GSK3/SHAGGY是一个高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，参与真核细胞中许多信号化途径。在植物中鉴别了许多GSK3/SHAGGY样激酶。拟南芥油菜素类固醇-不敏感2(BIN2)基因编码GSK3/SHAGGY样激酶。其编码序列内的功能放大突变或其过表达抑制油菜素类固醇(BR)信号化，产生类似BR缺陷的和BR应答突变体的植物。相反，通过共同抑制降低的BIN2表达部分拯救了弱BR信号化突变。因此，BIN2作为负调节物控制植物中类固醇信号化(Li&Nam，2002)。

小结

作为人类的主要原材料之一，水稻是遗传工程的目标以获得更高的产量及多种疾病、有害物和环境刺激抗性。这个实施例中鉴别的蛋白质在细胞周期过程和/或应激反应中有推测的作用。关于水稻中与细胞周期过程和应激反应相关的蛋白质和分子相互作用的知识可产生重要的农业学应用。这些相互作用的调节可用于实现植物发育或生长中的改变，导致农作物产量及对环境应激条件耐受性增加。

植物疾病应答通常模拟某些正常的发育过程。例如，植物应答真菌赤霉酸和壳梭孢素毒素分别与应答植物产生的赤霉素和生长素相似(Hedden&Kamiya，1977；Baunsgaard et al.，1998)。同样可以说是非生物应激反应和植物发育的某些阶段。经历脱水应激的叶细胞表达一些基因，这些基因与在发育或种子干燥期间由胚细胞表达的基因相同(Medinaet al.，2001)。由于基因表达的系统调节驱动发育过程和应激反应(Chen etal.，2002)，因此很可能存在参与这种应答的一系列广泛重叠的基因及其相关蛋白质。

这个实施例中描述的结果用于推测水稻或其它植物中的基因功能。例如，水稻具有大麦SGT1和拟南芥SGT1b蛋白的一个同系物(OsSGT1；GENBANK_Accession No.AAF18438)，通过与抗性基因相互作用和遍在蛋白化蛋白质降解途径而参与病原体防御。OsSGT1是可由黑锈感染诱导的并可能参与病原体防御。OsSGT1与一些未阐明的和已知的蛋白质相互作用，包括其转录在用水稻黑锈真菌激发物(GENBANK_AccessionNo.AF090698)处理时诱导的蛋白质。激发物应答蛋白(OsERP)与其它未阐明的蛋白质和已知遍在蛋白蛋白酶相关蛋白相互作用，包含SGT1介导的蛋白质降解中的OsERP。怀疑这些水稻蛋白以及其它植物同系物在疾病抗性中具有相关作用。

拟南芥蛋白与还已经鉴别了OsERP(PN20696)，Ras GTP酶(PN24063)，ArchainδCOP样蛋白(28982)，原纤蛋白样蛋白(PN29042)及与OsERP(PN29983)相互作用的未阐明的蛋白质之一同源。相关基因中插入突变纯合的拟南芥用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)攻击。在接种3天后，突变的植物中积聚的细菌是野生型植物的10倍以上。因此，这些拟南芥同系物赋予拟南芥疾病抗性。可能的是这些突变抑制依赖于SGT1相互作用的防御应答。基于同源及相互作用图谱，与拟南芥基因相关的水稻同系物也可能利用SGT1作为因子而参与疾病抗性及其它过程。这些结果表明组合的数据集(dataset)可用于推测使用突变体的表型可证实的基因功能。

实施例VIII

这个实施例描述了应答生物应激在细胞壁相互作用的水稻蛋白的鉴别和鉴定。如上所述，使用一种自动的高通量酵母双杂交分析技术鉴别与III类水稻壳多糖酶，及与纤维素合酶催化亚基相互作用的蛋白质。编码研究中所用蛋白质片段的序列然后针对专有的和公众的数据库通过BLAST分析对比以确定全长基因的序列。发现这个蛋白质看起来定位于或靶定于细胞壁并参与植物病原体诱导的防御应答。参与与水稻中病原体防御相关的途径和生物化学反应的蛋白质的鉴别和鉴定使得可以揭示具有增强或降低的疾病抗性的遗传修饰的农作物。

壳多糖酶是降解壳多糖的糖水解酶(glycohydrolase)，壳多糖是昆虫和植物病原体如线虫、真菌和细菌的一个结构成分。这些酶参与多种生物学功能，包括用具有特异于细菌细胞壁的底物的III类III壳多糖酶对抗含有壳多糖的病原体的防御(Brunner et al.，1998)。基于其与TMRI’s植物健康程序的相关性选择壳多糖酶进行这些相互作用研究。特异性酶-底物相互作用的高度潜力使得这些蛋白质适于双杂交分析。编码参与植物对病原体应答的蛋白质的水稻基因的鉴别对农业学很重要，因为这种揭示使得可以遗传修饰农作物以获得具有增强或降低的疾病抗性的植物。

这个实施例中使用的第二种饵，即纤维素合酶催化亚基是参与纤维素合成的膜结合酶复合物的一部分，纤维素是高等植物细胞壁的一种基本成分，其产生对植物中形态发生及许多其它的生物学过程很重要(参见Perrin，2001)。

这个实施例提供了新鉴定的与水稻壳多糖酶III类(OsCHIB1)及与水稻纤维素合酶催化亚基RSW1样蛋白(OsCS)相互作用的水稻蛋白。使用一种自动的高通量酵母双杂交分析技术(由Myriad Genetics Inc.，SaltLake City，Utah，United States of America提供)研究与壳多糖酶和纤维素合酶饵蛋白相互作用的蛋白质。

结果

发现III类壳多糖酶与水稻过氧化氢酶A相互作用，过氧化氢酶A是针对应答环境应激诱导的分子的植物解毒机制的一部分。另一种相互作用子纤维素合酶催化亚基，是参与纤维素生物合成的一种酶并且是这个实施例的另一种饵蛋白。这个研究还鉴别了与壳多糖酶相互作用的四种新的水稻蛋白：一种与植物ABC转运蛋白相似的蛋白质，其通过从组织种消除毒素而在防御应答种起重要作用；一种与拟南芥谷氨酰基氨基肽酶相似的肽酶，其蛋白水解活性与植物应答病原体期间信号化分子的激活相关；一种与来自拟南芥的推定的ATP酶相似的蛋白质；及与来自拟南芥的推定的蛋白相似的一种未知蛋白质。

发现纤维素合酶催化亚基饵克隆与其自身及与12种蛋白质相互作用。这些包括三种已知的水稻蛋白：DNAJ同系物，这是一种已知作为热激蛋白的调节物而参与植物保护性应激反应的分子；及两种作为跨膜泵起作用的蛋白质：salT基因的产物，其通过盐和应激诱导，及通道蛋白水通道蛋白。九种相互作用子是新的蛋白质：一种在针对核酸损害的植物防御机制中具有推定作用的DNA损害可诱导样的蛋白质；一种推定的BAG蛋白，推测其通过调节热激蛋白而参与植物应激反应；一种与来自拟南芥的核黄素前体6，7-二甲基-8-ribityllumazine合酶前体相似的蛋白质，并可能参与氧化应激期间核黄素的生物合成；一种与大豆钙依赖性蛋白激酶相似的蛋白质及一种与拟南芥推定的锌指蛋白相似的蛋白质，其可能在细胞壁损害后作为分子信号化或转录的中介物起作用；及四种未知功能的蛋白质。

这个实施例的相互作用蛋白列于表29和表30，随后是关于每个蛋白质的详细信息及相互作用意义的讨论。相互作用的图示在图5中提供。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO：151-176和317-328中提供。

鉴别的一些蛋白质代表先前未鉴定的水稻蛋白。这些蛋白质看起来参与植物的抗病原体防御机制。基于其推测的生物学功能及基于其与壳多糖酶和纤维素合酶饵蛋白的特异性相互作用的能力，相互作用蛋白可定位于或靶定于细胞壁，在此其参与与局部或系统性抗病原体防御相关的生物化学反应和基因诱导。

表29

针对OsCHIB1鉴别的相互作用蛋白(壳多糖酶，III类)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由研究中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_Accession No.)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsCHIB1PN19651(SEQ ID NO：318)	水稻壳多糖酶，III类(AF296279；AAG02504)
				相互作用子
OsCATAPN20899(SEQ ID NO：320)	水稻过氧化氢酶A同工酶(D29966；BAA06232)	10-200	332-433(输入性状)
				OsCS*PN19707(SEQ ID NO：322)	水稻纤维素合酶催化亚基，RSW1样蛋白(AF030052；AAC39333)	10-200	411-489(输入性状)
OsPN22823(SEQ ID NO：152)	新的蛋白质PN22823，与ABC转运蛋白相似(T02187，AB043999.1，NP_171753；e＝0)	10-200	25-106(输入性状)
				OsPN22154(SEQ ID NO：154)	新的蛋白质PN22154，与拟南芥谷氨酰基氨基肽酶相似(AL035525；e＝0)	10-200	390-562(输入性状)
OsPN29041(SEQ ID NO：156)	新的蛋白质PN29041，片段，与拟南芥推定的ATP酶相似(AAG52137；e-17)	10-200	2x5-108(输入性状)

OsPN22020(FL_R01_P005_C09.g.1a.Sp6a)(SEQ ID NO：158)

新的蛋白质PN22020，片段，与拟南芥推定的蛋白相似(NP_197783；3e-34)

10-200

3x76-170128-170(输入性状)

^*纤维素合酶催化亚基也用作饵，其相互作用示于表30。

表30

针对OsCS鉴别的相互作用蛋白

(纤维素合酶催化亚基，RSW1样蛋白)

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_Accession No.)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsCSPN19707(SEQ ID NO：322)	水稻纤维素合酶催化亚基，RSW1样蛋白(AF030052；AAC39333)
				相互作用子
OsCSPN19707(SEQ ID NO：322)	水稻纤维素合酶催化亚基，RSW1样蛋白(AF030052；AAC39333)	316-583	316-582(输入性状)
				OsAAB53810PN29086(SEQ ID NO：324)	水稻salT基因产物(AF001395；AAB538 10.1)	316-583	6-145(输出性状)
OsPIP2APN29098(SEQ ID NO：326)	水稻水通道蛋白(AF062393)	316-583	123-290(输出性状)
				OsPN22825(SEQ ID NO：160)	新的蛋白质PN22825，片段	316-583	5-129(输入性状)

OsPN29076(SEQ ID NO：162)	新的蛋白质PN29076，片段	316-583	1-18743-388122-304(输出性状)
				OsPN29077(SEQ ID NO：164)	新的蛋白质PN29077，片段，与拟南芥DNA损害可诱导的蛋白DDI1样蛋白相似(BAB02792；5e-94)	316-583	4x1-242(输出性状)
OsPN29084(SEQ ID NO：166)	新的蛋白质PN29084，片段，与大豆(Glycine max)钙依赖性蛋白激酶相似(A43713，2e-79)	316-583	3x1-253(输出性状)
				OsPN29113(SEQ ID NO：328)	水稻DNAJ同系物(BAB70509.1)	316-583	1-92(输出性状)
OsPN29115(SEQ ID NO：168)	新的蛋白质PN29115，片段，与拟南芥6，7-二甲基-8-Ribityllumazine合酶前体相似(AAK93590，6e-37)	316-583	1-188(输出性状)
				OsPN29116(SEQ ID NO：170)	新的蛋白质PN29116，片段	316-583	1-169(输出性状)
OsPN29117(FL_R01_P078_Nll.fasta.contig1)*(SEQ ID NO：172)	新的蛋白质PN29117	316-583	-7-151(输出性状)
				OsPN29118(SEQ ID NO：174)	新的蛋白质PN29118，片段	316-583	1-136(输出性状)

OsPN29119(FL_R01_P084_P01.g.1a.Sp6a)(SEQ ID NO：176)

新的蛋白质PN29119，片段

316-583

-53-155(输出性状)

^*OsPN29117还与热激蛋白hsp70(OsHSP70，PN20775)相互作用：来自输出性状文库的OsPN29117的三个猎物克隆(一个编码第11-160位氨基酸，两个编码第29-160位氨基酸)与用作饵的一个OsHSP70克隆(第138-360位氨基酸)相互作用。

使用OsCHIB1(壳多糖酶，III类)作为饵的酵母双杂交

水稻III类壳多糖酶(GENBANK_Accession No.AF296279)是具有286个氨基酸的蛋白质。壳多糖酶是降解壳多糖的糖水解酶。壳多糖是昆虫、线虫、真菌和细菌的一个结构成分。壳多糖酶是高等植物中应答病原体感染的几种发病机理相关(PR)的蛋白质之一(参见Stintzi et al.，1993)。壳多糖酶进行多种生物学功能，III类壳多糖酶针对细菌细胞壁的底物特异性提示这些酶作为防御蛋白的主要作用(Brunner et al.，1998)。这种酶通过降解真菌或细菌细胞壁而直接对病原体发起攻击。

这个研究中使用的饵片段编码OsCHIB1(壳多糖酶，III类)的第10-200位氨基酸。这个蛋白质区域包括所述酶的活性位点(第127-135位氨基酸)。编码OsCHIB1的基因在TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列上无匹配。

发现OsCHIB1(壳多糖酶，III类)与OsCATA.PN20899(水稻过氧化氢酶A同工酶；D29966；BAA06232)相互作用。过氧化氢酶A(GENBANK_Accession No.D29966)是水稻CatA基因的产物，其由Higo&Higo在1996年鉴别为玉米(Indian corn)的Cat-3基因的同系物(Zeamays；GENBANK_Accession No.L05934)。水稻CatA和玉米Cat-3基因均属于单子叶植物特异性组，这是其中植物过氧化氢酶基因已经基于其从共同祖先的分子进化而分类为三组之一(Guan&Scandalios，1996)。水稻过氧化氢酶A含有491个氨基酸，具有在H65和N138位的两个催化位点及在Y348位的一个血红素结合部位。所述血红素基团是过氧化氢酶的酶活性的一个辅因子。Higo&Higo于1996年示出CatA基因在种子早期发育及在幼秧苗中高水平表达，并且这个基因是由除草剂百草枯(paraquat)诱导的，但不或仅略微由脱落酸(ABA)，创伤，水杨酸，和过氧化氢诱导。

过氧化氢酶是在几乎所有的需氧生物体中发现的应激诱导的酶。它们是植物细胞中针对活性氧物种(AOS)的酶解毒机制的一部分。AOS是应答环境应激诱导的并通过诱导PR基因及其它信号化分子(例如水杨酸，SA)作为信号化分子以激活多种防御应答，导致应激耐受增加(Lamb&Dixon，1997)。然而，AOS也可以破坏蛋白质，膜脂质，DNA及植物的其它细胞成分。这两种不同作用之间的平衡依赖于严格控制AOS的细胞水平，这可以通过不同组的氧化清除剂而实现。在这些抗氧化剂分子中，过氧化氢酶保护细胞免于在氧化爆发中产生的AOS前体过氧化氢的毒性作用，通过将其转化为双氧和水而实现(参见Dat et al.，2001)。

发现OsCHIB1(壳多糖酶，III类)与水稻纤维素合酶催化亚基，RSW1样蛋白(OsCS；PN19707)相互作用。我们的研究中发现的猎物克隆从输入性状文库挽回，其编码水稻纤维素合酶催化亚基的第411-489位氨基酸。这个583个氨基酸的蛋白质区域是跨膜结构域的C末端，通过氨基酸序列分析推测其在质膜的胞质侧上。

纤维素合酶是包含多个同种型的膜结合酶复合物。纤维素合酶催化亚基(GENBANK_Accession No.AF030052)参与纤维素的合成，纤维素是高等植物细胞壁的一个基本成分。纤维素给予植物机械性质，其决定了植物生长和细胞形状，并且其产生影响植物生物学的许多方面。大多数植物通过纤维素合酶的活性在质膜合成纤维素。作为称为玫瑰花形骨针的结构的一部分，酶通过加入糖核苷酸前体而扩展新生纤维素链，然后这些链装配进微纤维以相同方向排列在质膜的表面上。这个过程似乎依赖于玫瑰花形骨针的精确组织化和方向(Perrin，2001)。导致纤维素解体的拟南芥rsw1基因中的突变引起根的形态发生改变(Baskin et al.，1992)，表明正确的纤维素合成对植物发育和形态学是关键的。Arioli等在1998年示出拟南芥中的rsw1基因编码纤维素合酶的催化亚基。然而，遗传和生物化学证据支持这样的观点，即编码高等植物中纤维素合酶的催化亚基的基因家族中有多种成员示出应答不同条件的组织特异性表达或差异表达。这些主题参见Perrin，2001所述。这些作者表明植物中纤维素合酶催化亚基的许多基因的存在提示纤维素合酶的多个同种型在同一细胞中的功能性多聚体复合物最可能是二聚体的形成中是必需的。另外，玫瑰花形骨针内已经检测了许多其它多肽，这些多肽的相同性还未确定。针对鉴别与合酶相互作用的蛋白质的相互作用研究可帮助阐明纤维素合酶玫瑰花形骨针机构的组织化，并解决了关于纤维素生物合成中仍存在的一些问题。编码OsCS的基因在TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列上没有匹配。

纤维素合酶催化亚基也用作饵蛋白。其相互作用子示于表30并在这个实施例后文中论述。

发现OsCHIB1(壳多糖酶，III类)与蛋白质PN22823相互作用，其与ABC转运蛋白(OsPN22823)相似。蛋白质PN22823是具有1239个氨基酸的蛋白质，其包括10个预测的跨膜结构域(第45-61，154-170，174-190，253-269，295-311，671-687，715-731，794-810，818-834，及933-949位氨基酸)及两个ATP/GTP结合位点基序A(P-环)(第383-390和1031-1038位氨基酸)。针对Genpept数据库的BLAST分析表明PN22823与Japanese goldthread(Coptis japonica)CjMDR1(GENBANK_Accession No.AB043999.1；e＝0.0)具有55％相同性。CjMDR1是在根茎中表达的多种药物抗性基因，在此与其它器官相比生物碱高度积聚(Yazaki et al.，2001)。与PN22823高度相似的其它蛋白质包括拟南芥推定的ABC转运蛋白(GENBANK_Accession No.T02187；e＝O)和推定的P-糖蛋白(GENBANK_Accession No.NP_171753；e＝0)。这些类型的蛋白质包含ATP结合盒(ABC)并属于包括P-糖蛋白(P-gp)和多种药物抗性相关蛋白质(MRP)2的一个家族(参见Fardel et al.，2001)。ABC蛋白是跨膜蛋白，其转运多种化合物经过生物膜，包括磷脂、离子、肽、类固醇、多糖、氨基酸、有机阴离子、药物及其它异生素。

在哺乳动物中，ABC转运蛋白参与胆汁消除外源化合物和异生素，其表达可由这些毒素正调节。在拟南芥中鉴别的大量ABC转运蛋白家族成员(129个，根据Sanchez-Fernandez et al.，2001所述)，提示这些蛋白质在植物中的重要作用。与这个观点一致，ABC转运蛋白是发现在热带日本产(tropica japonica)水稻品种(Oryza sativa cv.Drew)中应答茉莉酮酸，苯并噻二唑(benzothiadiazole)，和/或黑锈感染而正调节的立即早期基因(Xiong et al.，2001b)。这提示ABC蛋白在植物中对毒素防御中起作用，与它们在哺乳动物中一样。到目前为止在植物中鉴定的大多数ABC转运蛋白已经定位于液泡膜并认为参与细胞毒素的胞内隔离(参见Leslieet al.，2001)。另外，植物ABC转运蛋白看起来在多种药物抗性中具有与哺乳动物ABC转运蛋白等同的作用，如在其中ABC转运蛋白在用抗真菌二萜香紫苏醇(diterpene sclareol)的密切类似物处理后在菸草(Nicotiana plumbaginifolia)细胞培养物中是正调节的研究中示出(Jasinski et al.，2001)。分离自拟南芥的MRP同系物(AtMRPs)参与提供植物除草剂抗性(Rea et al.，1998)。还有一个迹象是ABC转运蛋白如其在哺乳动物中一样作为激素转运蛋白。特别地，拟南芥中ABC转运蛋白之一中的突变，AtMRP5，导致根生长降低及侧生根形成提高，可能是由于突变的AtMRP5不能作为生长素缀合转运蛋白所致(Gaedeke et al.，2001)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比新的蛋白质PN22823的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS_ORF012127_at(e^-145期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由真菌病原体稻瘟霉诱导的。

发现OsCHIB1(壳多糖酶，III类)与蛋白质PN22154相互作用，其与拟南芥谷氨酰基氨基肽酶(OsPN22154)相似。OsPN22154是具有173个氨基酸的蛋白质片段，其与作为小鼠氨基肽酶(GENBANK_AccessionNo.U35646)的同系物描述的来自拟南芥的蛋白质(GENBANK_AccessionNo.AL035525)具有65％相同性。拟南芥氨基肽酶样蛋白质的cDNA序列和水稻基因组序列(作为模板)用于产生编码具有874个氨基酸的一种蛋白质的水稻DNA序列，该蛋白质与拟南芥氨基肽酶样蛋白质具有54.7％相同性。新的水稻蛋白的结构域分析确实检测到一个肽酶M1结构域(第17-402位氨基酸)，及一个锌结合结构域(第311-320位氨基酸)，提示这个蛋白质是一种金属氨基肽酶。还不明了这个蛋白质是否由拟南芥氨基肽酶样基因的直向同源物或相似物编码。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比新的蛋白质PN22154的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS_004263_at(4e^-83期望值)是最接近的匹配。

基因表达实验表明这个基因在圆锥花序中表达。

发现OsCHIB1(壳多糖酶，III类)与蛋白质PN29041(OsPN29041)相互作用。BLAST分析表明这个蛋白质片段与来自拟南芥的推定的ATP酶(GENBANK_Accession No.AAG52137；e^-17)相似。ATP酶可以定位于与细胞壁邻近的质膜。在TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列上没有与这个基因的匹配，并因此没有推测其在应激或感染期间的功能的基因表达数据。可能的是这个蛋白质在病原体入侵中无作用。然而，其是在这个实施例中通过酵母双杂交相互作用鉴别的壳多糖酶多蛋白复合物的一部分，提示其存在于细胞壁界面。一个假说是ATP酶样蛋白质可存在于质膜中并参与细胞壁合成。进一步的相互作用数据可帮助阐明其参与壳多糖酶多蛋白复合物的生物学意义。

发现OsCHIB1(壳多糖酶，III类)与蛋白质PN22020(OsPN22020)相互作用。蛋白质PN22020是具有175个氨基酸的蛋白质片段，与拟南芥推定的蛋白(GENBANK_Accession No.NP_197783；3e^-34)具有55％相同性。氨基酸序列分析鉴别了一个C2结构域(第5-90位氨基酸，e＝0.037)，如在蛋白激酶C同工酶中发现的一样，提示PN22020可参与与蛋白激酶C调节的相似的信号化途径。也许其与壳多糖的相互作用代表应答病原体或毒素暴露而发生的一个信号化活动。然而，这个结构域已经在其它激酶及非激酶蛋白中检测到(Ponting&Parker，1996)。新的蛋白质PN22020的全部氨基酸序列的鉴别使得可以确定含有C2结构域的蛋白质的所属类别。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比新的蛋白质PN22020的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS008182_r_at(e^-102期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在叶，茎，根，种子，圆锥花序和花粉中组成型表达。

使用OsCS作为饵的醛母双杂交

还使用另一种饵，即水稻纤维素合酶催化亚基，RSW1-样蛋白(OsCS；PN19707；GENBANK_Accession No.AF030052)。这个蛋白质在这个实施例的前文加以了描述，因为发现其与饵蛋白水稻壳多糖酶，III类(OsCHIB1；PN19651)相互作用。这个研究中使用的饵片段编码OsCS的第316-583位氨基酸。

发现OsCS与水稻纤维素合酶催化亚基，RSW1样蛋白质(OsCS)相互作用。换句话说，发现OsCS与自身相互作用。猎物克隆从输入性状文库中挽回，并编码与饵克隆几乎相同的氨基酸(猎物克隆编码第316-582位氨基酸)。这种自身相互作用支持了已经提出的纤维素合酶作为二聚体起作用的观点(见Perrin，2001)。

还发现OsCS与水稻salT基因产物(OsAAB53810)相互作用。对145个氨基酸蛋白质OsAAB53810的氨基酸序列进行BLAST分析表明这个蛋白质是水稻salT基因产物(GENBANK_Accession No.AAB53810.1；100％相同性；3e^-80)。这个蛋白质由分离自进行盐度应激的水稻根的一个cDNA克隆salT编码，如Claes et al.，1990所报道。这些作者示出salTmRNA在应答盐度应激和干旱的成熟植物和秧苗的叶鞘和根中表达。先前由Garcia et al.，1998报道的表达数据表明salT在植物的每个区域中的表达依赖于细胞的代谢活性以及它们是否应答应激。这些作者还发现salT基因是由赤霉酸和脱落酸诱导的，并提示由这些生长调节物的诱导通过独立的及可能的对抗途径发生。OsAAB53810蛋白质序列的分析推测了一个jacalin样凝集素结构域(第14-145位氨基酸，2.3e^-32)。Jacalin与碳水化合物以高度特异性方式相互作用(Sankaranarayanan et al.，1996)。

还发现OsCS与水通道蛋白(OsPIP2a)相互作用。通过氨基酸序列分析确定水通道蛋白(GENBANK_Accession No.AF062393)是具有290个氨基酸的蛋白质，包括6个推定的跨膜结构域(第48-64，83-99，131-147，175-191，207-223，及254-270位氨基酸)和一个主要内在蛋白(MIP)家族签名(第34-271位氨基酸)。从输出性状文库挽回的猎物克隆编码OsPIP2a的第123-290位氨基酸，这是包括四个大多数C末端推定的跨膜结构域和部分MIP家族签名的一个区域。认为水通道蛋白是一种质膜内在蛋白(Malz&Sauter，1999)。这种蛋白质促进小分子的运动，通常是水通道功能的几倍。这是为什么OsPIP2a也称为水通道蛋白的原因。Malz和Sauter鉴别了OsPIP2a以及OsPIP1a，并报道了这两个蛋白质具有一些特色基序和同系物，证明其分配为其各自的PIP亚家族。他们报道了OsPIP2a和OsPIP1a表现为在水稻中表达模式相似但不相同，其均在秧苗中比在成熟植物中高水平表达，并且其在初生根中的表达由光调节。另外，他们的研究表明赤霉酸还调节这些OsPIP转录物在通过浸入水中而诱导快速生长的深水水稻植物的节间的表达，尽管表达与生长无关。在拟南芥中，不同的PIP蛋白应答不同的兴奋剂和条件而表达，例如盐应激诱导的液泡膜内在蛋白(SITIP)，如Pih et al.，1999所报道。这些作者提示PIP蛋白负责在高渗透压如高盐度条件下植物中的渗透调节。

还发现OsCS与蛋白质PN22825(OsPN22825)相互作用。OsPN22825是具有229个氨基酸的蛋白质片段，还未知其完整序列。针对公众的和Myriad’s专有数据库的BLAST分析表明OsPN22825与来自拟南芥的两个未知蛋白质相似(GENBANK_Accession No.NP_188565，67％相同性，3e^-82；及GENBANK_Accession No.AB025624，37％相同性，3e^-82)。编码OsPN22825的基因在TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列上无匹配，因此没有可以推测应激或感染期间其功能的基因表达数据。

还发现OsCS与蛋白质PN29076(OsPN29076)相互作用。OsPN29076是具有389个氨基酸的蛋白质片段，其完整的序列还未知。对可获得的氨基酸序列进行分析鉴别了一个细胞色素c家族血红素结合位点(第142-147位氨基酸)。BLAST分析表明没有蛋白质与OsPN29076具有高度相似性，最佳采样是一种拟南芥未知蛋白(GENBANK_AccessionNo.AAF24616，34％相同性，3e^-46)。编码OsPN29076的第1-187，42-389，和121-304位氨基酸的三个猎物克隆从输出性状文库挽回。这些克隆具有一个重叠区域，跨越OsPN29076的第121-187位氨基酸，并包括细胞色素c家族血红素结合位点。编码OsPN29076的基因在TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列上没有匹配，因此没有推测在应激或感染期间其功能的基因表达数据。缺少关于OsPN29076的信息使得难以确定其功能。OsPN29076的完整氨基酸序列的鉴别可有助于澄清这个蛋白质的功能及OsCS-OsPN29076相互作用的生物学意义。

还发现OsCS与蛋白质PN29077相互作用，其与拟南芥DNA损害可诱导的蛋白质DDI1样蛋白(OsPN29077)相似。OsPN29077是具有243个氨基酸的蛋白质片段，其完整序列还未知。BLAST分析表明OsPN29077与拟南芥DNA损害可诱导的蛋白质DDI1样蛋白(GENBANK_AccessionNo.BAB02792；5e^-94)具有73％相同性。认为DDI1是酵母中细胞周期关卡蛋白，并且其表达由多种DNA损害剂诱导。这种蛋白质使细胞停滞在某些阶段并调节对DNA损害的转录应答(Zhu&Xiao，1998)。已经有报道DDI1与遍在蛋白相互作用(Bertolaet et al.，2001)，这个观测支持了应用酵母双杂交方案研究这种蛋白质。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29077的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS016688.1_at(e^-83期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达并且不是由广泛的植物应激、除草剂和应用的激素特异性诱导的。

还发现OsCS与蛋白质PN29084相互作用，其与G.max钙依赖性蛋白激酶(OsPN29084)相似。OsPN29084是具有284个氨基酸的蛋白质片段，其完整序列还未知。对可获得的氨基酸序列的分析鉴别了四个EF-hand钙结合结构域(第110-122，146-158，182-194，和216-228位氨基酸)。与这些结构域的存在一致，BLAST分析表明OsPN29084与许多钙依赖性蛋白激酶包括大豆(G.max)钙依赖性蛋白激酶(GENBANK_Accession No.A43713，81％相同性，2e^-79)高度相似。这种大豆蛋白还包括四个EF-hand钙结合结构域并需要钙而不是钙调蛋白或磷脂以发挥其活性(Harper et al.，1991)。钙可以作为第二信使通过刺激这种钙依赖性蛋白激酶而起作用。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29084的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS004083.1_at(e^-83期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达并且不是由广泛的植物应激、除草剂和应用的激素特异性诱导的。

还发现OsCS与水稻DNAJ同系物(OsPN29113)相互作用。OsPN29113是具有92个氨基酸的蛋白质，其序列包括一个ATP/GTP-结合位点基序A(P-环，第43-50位氨基酸)。对可获得的氨基酸序列进行BLAST分析表明OsPN29113是水稻DNAJ同系物(GENBANK_AccessionNo.BAB70509.1；100％相同性；5e^-39)。在真核细胞中，DnaJ样蛋白通过指导不同的Hsp70和DnaJ样蛋白对的相互作用而调节Hsp70热激蛋白的侣伴(蛋白质折叠)功能(Cyr et al.，1994)。热激蛋白(参见Bierkens etal.，2000)是应激蛋白，其作为胞内侣伴以促进蛋白质折叠/伸展及装配/解体。它们在植物细胞中应答广泛的刺激而选择性表达，所述刺激包括热及多种化学物。作为热激蛋白的调节物，DnaJ样蛋白因此是植物保护性应激反应的一部分。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29113的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS002926_at(e^-124期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物应激、除草剂和应用的激素特异性诱导的。

还发现OsCS与蛋白质PN29115相互作用，其与拟南芥6，7-二甲基-8-ribityllumazine合酶前体(OsPN29115)相似。OsPN29115是具有188个氨基酸的蛋白质片段，其完整序列还未知。可获得的序列包括一个ATP/GTP-结合位点基序A(P-环，第94-101位氨基酸)和一个6，7-二甲基-8-ribityllumazine合酶家族签名(第42-186位氨基酸)，这是通过分析可获得的氨基酸序列而确定的。后者结构域的存在与BLAST分析的结果一致，BLAST分析表明OsPN29115与拟南芥推定的6，7-二甲基-8-ribityllumazine合酶前体(GENBANK_Accession No.AAK93590，6e^-37)具有50％相同性。辅因子核黄素从前体6，7-二甲基-8-ribityllumazine中合成(Nielsen et al.，1986)。黄素参与许多生物学过程(参见Massey，2000)。例如，它们参与电子传递反应并因此通过其产生超氧化物的能力而有助于氧化应激，但同时黄素还参与氧产生的自由基反应的产物氢过氧化物的还原。黄素还有助于土壤解毒并与植物中光诱导的DNA修复相关。黄素蛋白的化学多功能性受到与其结合的蛋白质的特异性相互作用的控制。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29115的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015577_at(e^-41期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不受由广泛的植物应激、除草剂和应用的激素特异性诱导的。

还发现OsCS与蛋白质PN29116(OsPN29116)相互作用。OsPN29116是具有170个氨基酸的蛋白质片段，其完整序列还未知。对可获得的氨基酸序列分析鉴别了一个WD40结构域(第82-118位氨基酸)，据报道其参与蛋白质-蛋白质相互作用(Ajuh et al.，2001)。BLAST分析表明OsPN29116与来自拟南芥的两个未知蛋白具有相同性(GENBANK_Accession No.T45879，67％相同性，e^-64；及GENBANK_AccessionNo.NP_181253，69％相同性，e^-58)。缺少关于OsPN29116的信息使得难以确定其功能。对OsPN29116完整氨基酸序列的鉴别可以澄清这个蛋白质的功能及OsCSC-OsPN29116相互作用的生物学相关性。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29116的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS016500_r_at(e^-12期望值)是最接近的匹配。这个probeset的期望值太低以至于不是OsPN29116的基因表达的可靠指征。

还发现OsCS与蛋白质PN29117(OsPN29117)相互作用。OsPN29117是具有237个氨基酸的蛋白质，其包括-个遍在蛋白结构域(第12-84位氨基酸)。氨基酸序列分析鉴别了一个BAG结构域(第106-187位氨基酸，2.1e^-11)，已知其结合并调节Hsp70/Hsc70分子侣伴(Briknarova et al.，2001)。共侣伴(cochaperone)的BAG家族功能性调节对细胞应激反应、编程性细胞死亡、增殖、细胞迁移和激素作用重要的信号转导蛋白和转录因子(Briknarova et al.，2001；Antoku et al.，2001)。BLAST分析表明OsPN29117与拟南芥未知蛋白具有相同性(GENBANK_AccessionNo.AAC14405，44％相同性，4e^-52)。与OsPN29117是蛋白质BAG家族的一个成员的观点一致，还发现其与hsp70(OsHSP70；见表30下注释^*)相互作用。热激蛋白(上述)是应激蛋白，其作为ATP依赖性胞内侣伴起作用并在应答广泛刺激的植物细胞中选择性表达，所述刺激包括热及多种化学物刺激。作为热激蛋白的调节物，BAG蛋白OsPN29117因此是植物保护性应激反应的一部分。

这个研究中挽回的猎物克隆编码OsPN29117的第1-151位氨基酸，这是包括遍在蛋白结构域的一个区域。注意猎物克隆包括一小部分(-7-0)的5’非翻译区，并因此其坐标在表2中以-7-151位氨基酸示出。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29117的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS017803_at(e^-73期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物应激、除草剂和应用的激素特异性诱导的。

还发现OsCS与PN29118(OsPN29118)相互作用。OsPN29118是具有136个氨基酸的蛋白质片段，其完整序列还未知。BLAST分析表明OsPN29118与公众结构域及Myriad’s专有数据库中的蛋白质仅有微弱的相似性，最佳采样是拟南芥推定的锌指蛋白SHI样蛋白(GENBANK_Accession No.NP_201436，42％相同性，5e^-15)。其次具有最高相似性的蛋白质是拟南芥假设蛋白(GENBANK_Accession No.T04595，38％相同性，9e^-15)。对OsPN29118的完整氨基酸序列的揭示可有助于澄清这个蛋白质的功能及OsCSC-OsPN29118相互作用的生物学相关性。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29118的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS004996.1_at(e-³⁸期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物应激、除草剂和应用的激素特异性诱导的。

还发现OsCS与蛋白质PN29119(OsPN29119)相互作用。OsPN29119是具有327个氨基酸的蛋白质片段，其完整序列还未知。BLAST分析表明OsPN29119与拟南芥未知蛋白T17H3.9(GENBANK_AccessionNo.AAD45997，7e-⁵⁴)具有38％相同性。对OsPN29119的完整氨基酸序列的揭示可有助于澄清这个蛋白质的功能及OsCSC-OsPN29119相互作用的生物学相关性。编码OsPN29119的第1-155位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。这个猎物克隆包括一部分5’非翻译区并因此其坐标在表2中以第-53-155位氨基酸示出。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN29119的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS014829.1_at(e^-131期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是有广泛的植物应激、除草剂和应用的激素特异性诱导的。

小结

与OsCHIB1(壳多糖酶，III类)相互作用的蛋白质

设计为研究与壳多糖酶饵蛋白相互作用的蛋白质的酵母双杂交分析导致蛋白质的分离，该蛋白质看起来与植物对病原体的防御应答相关。疾病抗性在一些水平发生，包括局部和非特异性系统应答。植物中的过敏反应(HR)是对病原性微生物的局部抗性机制，特征在于感染部位的快速和局部的组织萎陷及细胞死亡，导致侵入的病原体固定。这个过程是由病原体激发物触发及由氧化爆发而组合在一起，这是在攻击后快速发生的(Lamb&Dixon，1997)。活性氧物种(AOS)的积聚是在植物应答生物和非生物应激期间的一个重要主题。AOS是在HR发作时产生的，并且在感染初始阶段期间有助于杀伤宿主组织。AOS还作为信号化分子，诱导PR基因的表达及参与信号级联放大的其它信号化分子的产生导致PR基因诱导。防御基因的触发可扩展至未感染的组织和整个植物，导致局部抗性(LR)和系统性获得性抗性(SAR；参见Martinez et al.，2000)。作为SAR的结果，植物的其它部分拥有长期的保护作用，对抗相同的及不相关的病原体。

来自氧化爆发的过氧化氢在局部的HR中起重要作用，不仅通过驱动细胞壁结构蛋白的交联，还通过触发被攻击细胞细胞死亡而起作用，并作为可传播信号诱导编码细胞保护剂如谷胱甘肽S-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶的基因的相邻细胞及水杨酸(SA)的产生。认为SA在LR和SAR中通过SA自由基的产生而作为信号化分子，SA自由基很可能是SA与过氧化氢酶及过氧化物酶相互作用的副产物，如Martinez et al.，2000所报导。这些作者示出细菌病原体由棉花的识别触发了氧化爆发，之后经历HR的细胞中SA产生，过氧化氢是SA的局部和系统积聚所需的，因此作为LR和SAR的始发信号。过氧化氢酶参与植物中SA介导的诱导SAR先前已经由Chen et al.，1993报导，他揭示了过氧化氢酶与SA的结合导致过氧化氢酶活性的抑制，及因此的过氧化氢积聚诱导与SAR相关的防御相关基因的表达。

在这个研究中，发现壳多糖酶与过氧化氢酶A相互作用。假设壳多糖酶作为防御蛋白的确定作用，这个相互作用与病原体攻击期间存在应激诱导的过氧化氢酶一致，并提示这两种酶可位于细胞壁，在此其参与PR基因诱导。壳多糖酶-过氧化氢酶相互作用作为对抗微生物的防御应答的一部分的发现进一步支持了真菌过氧化氢酶在表达HR的宿主建群期间保护坏死营养(necrotrophic)真菌免于AOS的有害作用中具有作用的观测结果(Mayer et al.，2001)。这些生物体示出分泌过氧化氢酶，与其它酶一起从宿主中除去或灭活AOS。

另外，细胞壁在对抗细菌和真菌病原体中起防御作用，通过接受来自病原体表面称为激发物的分子的信息，并且将这个信息传递给植物细胞的质膜，引起基因激活的过程而产生抗性。由激发物诱导的并与过敏反应相关的一种生物化学反应是植物抗毒素的合成和积聚，植物抗毒素是植物中在真菌和细菌感染后产生的抗微生物化合物(参见Hammerschmidt，1999)。发现与壳多糖酶相互作用的蛋白质之一是ABC转运蛋白。已知ABC转运蛋白从植物组织中隔离细胞毒素、代谢物及其它分子。因此很可能发现ABC转运蛋白与位于细胞壁的壳多糖酶相互作用，在此参与毒素转运。尽管植物抗毒素在植物防御应答中的作用还未彻底阐明(Hammerschmidt，R.，1999)，但推测ABC转运蛋白可参与在植物病原体诱导的防御应答期间从植物细胞中消除这些毒素。另外，基因表达实验表明编码ABC转运蛋白的基因是由真菌病原体稻瘟霉诱导的。这些结果与这个蛋白质在水稻中由病原性真菌和细菌诱导的防御应答中推定的作用一致。

还发现壳多糖酶与新的蛋白质PN22154相互作用，所述新的蛋白质与拟南芥谷氨酰基氨基肽酶相似。这个猎物蛋白的特异性功能还未确定，但熟知蛋白酶解活性是植物对抗病原体的防御机制的一个共同成分。这些机制包括壳多糖酶和蛋白酶。肽酶活性与信号化的调节相关。例如羧肽酶水解性从肽激素中除去焦谷氨酰基，从而激活这些信号化分子。羧肽酶通过蛋白质的蛋白酶解而调节拟南芥中油菜素类固醇-不敏感1(BRI1)信号化(Li et al.，2001)。基于其与壳多糖酶相互作用的能力及基于后者在PR防御中确定的作用，壳多糖酶和新的蛋白质PN22154可相互作用作为针对植物入侵物具有壳多糖分解和蛋白酶解活性的复合物的成分，水稻谷氨酰基氨基肽酶样蛋白在激活位于细胞壁的参与植物防御应答的信号化分子中可能有作用。

发现壳多糖酶的第四个相互作用子是纤维素合酶催化亚基。这个酶作为在质膜的一种复合物起作用，在此其参与细胞壁合成，并且其调节可使植物产生形态学改变以应答因病原体攻击产生的物理攻击。这个相互作用对在防御应答期间保持细胞壁成分的代谢平衡有意义。可能壳多糖酶位于细胞壁，在此其在病原体攻击后立即与纤维素合酶相互作用，或者壳多糖酶靶定于这个部位并在PR基因诱导后与合酶相互作用。

除了新的蛋白质PN22020和PN29041之外，发现与壳多糖酶相互作用的水稻蛋白看起来位于或补充细胞壁，在此其参与植物对抗病原体攻击的防御应答。两个相互作用因子，ABC转运蛋白和谷氨酰基氨基肽酶样蛋白，是水稻中新鉴定的蛋白质。

总体上，所有这些蛋白质均可相互作用作为植物细胞中细胞壁界面上的一种多成分复合物，并且在控制AOS水平、诱导PR基因及合成和保持细胞壁的完整性以保护植物免于病原体入侵中均有作用。

与纤维素合酶催化亚基(OsCS)相互作用的蛋白质

包含OsCS的相互作用扩展了针对壳多糖酶饵蛋白鉴别的应激反应蛋白质网络。OsCS与一些看起来参与植物在细胞壁应答病原体诱导的应激的一些蛋白质相互作用。公布的迹象将若干这些蛋白质与植物应答多种应激联系起来。这些蛋白质包括水通道蛋白(OsPIP2a)和盐应激诱导蛋白(OsAAB53810)，这两种分子尽管对疾病抗性不能有直接作用，但可作为细胞壁上蛋白质复合物中跨膜泵以调节膨压或传递溶质。另外，OsAAB53810中jacalin样凝集素结构域的存在对其与合成碳水化合物链的酶相互作用中特别有益。假设jacalin的碳水化合物结合性质(Sankaranarayanan et al.，1996)，OsAAB53810可特异性结合由OsCS产生的新生纤维素链，因此在与细胞壁代谢相关的OsCS依赖性活动中起活性作用。OsAAB53810是由盐和应激诱导的事实支持了这个蛋白质在这种生理学活动中的作用。

另一个相互作用因子，水稻DNAJ同系物OsPN29113，很可能通过调节热激蛋白的侣伴功能而参与植物保护性应激反应，这是通过多种形式的应激诱导的。可能DNAJ蛋白与纤维素合酶的相互作用是植物应答由病原体产生的或者在经历HR的细胞中产生的化学物的一部分，这种应答与应答应激中已经发生的细胞壁损伤相关。

在发现与OsCS相互作用的新的蛋白质之中，OsPN29077与拟南芥DNA损害可诱导的蛋白质DDI1样蛋白质相似。基于酵母DDI1应答DNA损害的表达及基于序列同源，推测OsPN29077执行与DDI1同样的功能，并且OsCS-OsPN29077相互作用与植物对抗DNA损害的防御机制相关。同样，我们推测BAG样蛋白OsPN29117在植物保护性应激反应作为热激蛋白的调节物具有推定的作用。与这个作用一致，OsPN29117还与hsp70相互作用，基因表达实验表明其是组成型表达的并由茉莉酮酸负调节，是植物防御应答途径的一部分。由于OsPN29077和OsPN29117与纤维素合酶催化亚基相互作用，后者与病原体诱导的防御蛋白壳多糖酶相互作用，因此这些相互作用子可以是细胞壁上同样的复合物的一部分，在此其参与应答病原体入侵。

新的蛋白质OsPN29115与来自拟南芥的核黄素前体6，7-二甲基-8-ribityllumazine合酶前体相互作用。在关于核黄素报道的作用中是其与作为氧化应激的结果而发生的氧化还原反应相关(Massey，2000)。基于这个根据及基于与鉴别的相互作用子序列同源，OsCS-OsPN29115相互作用可将植物应答病原体产生的刺激和毒素与OsCS活性所需的结构变化联系起来。

与OsCS相互作用的另外的新的蛋白质包括与大豆钙依赖性蛋白激酶相似的蛋白质(OsPN29084)及与拟南芥推定的锌指蛋白相似的蛋白质(OsPN29118)。这些相互作用子与蛋白激酶和锌指蛋白的相似性提示它们分别作为分子信号化和转录的调节物。其与OsCS的相互作用可代表在病原体损害细胞壁后的破坏之后发生的信号化或转录活动，这些猎物蛋白可从细胞壁移至细胞的其它部分以介导这种活动。OsCS-OsPN29084相互作用很可能代表引起生理反应的胞外信号转导中的一个步骤，而OsCS-OsPN29118相互作用可与也应答胞外信号的转录调节相关。这个信号可以是通过病原体攻击产生的植物损伤形式。

基于其与纤维素合酶和壳多糖酶的相关性发现与OsCS相互作用的剩余的蛋白质OsPN22825，OsPN29076，OsPN29116和OsPN29119，这些猎物蛋白也可以是病原体防御、细胞壁完整性或结合这些蛋白质复合物的重要因子。

因此，这个实施例的结果示出与纤维素合酶催化亚基相互作用的蛋白质也是位于细胞壁界面上的壳多糖酶多蛋白复合物的一部分。

实施例IX

Janssens&Goris教导2A型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2A)是信号转导的重要调节物，它们受其它蛋白质的去磷酸化的影响(Janssens&Goris，2001)。丝氨酸/苏氨酸磷酸酶的蛋白磷酸酶2A(PP2A)家族成员含有非常保守的催化亚基，其活性是被高度调节的(Janssens and Goris，2001)。植物及其它生物体中有多个PP2A同种型，它们看起来在多种组织中及在发育的不同阶段差异表达(Arino et al.，1993)。 Harris et al.引用了许多描述PP2A亚基与除了调节亚基之外多种细胞蛋白的相关性的报道，提出PP2A作为与蛋白质合成、细胞周期和编程性细胞死亡相关的多种信号化途径的调节物而起作用(Harris et al.，1999)。PP2A酶是许多植物生长和发育过程的中间物。

另外，PP2A酶在病原体入侵中起作用。在动物中，多种病毒蛋白将特异性PP2A酶靶定于解除对宿主中选择的细胞途径的调节并促进病毒子代(Sontag，2001；Garcia et al.，2000)。PP2A酶与许多细胞和病毒蛋白相互作用，这些蛋白质-蛋白质相互作用对调节PP2A信号化是关键的(Sontag，2001)。与PP2A(例如PP2A)相互作用的蛋白质可例如将PP2A靶定于不同的亚细胞区室，或者影响PP2A酶活性。另外，PP2A酶在植物应答病毒感染中起作用(Dunigan&Madlener，1995)。丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶是烟草花叶病毒介导的程序化细胞死亡所需的(Dunigan&Madlener，1995)。

OsPP2A-2(GENBANK_Accession No.AF134552)是蛋白质磷酸酶家族的一个具有308个氨基酸的亚基，含有一个丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶签名(第112-117位氨基酸)。

如上所述，采取酵母双杂交方案剖析PP2A介导的信号化活动。这个研究中使用的并发现具有相互作用子的饵片段编码OsPP2A-2的第1-308和150-308位氨基酸。

这个实施例中使用的第二种饵OsCAA90866，是由仅已知是可由水稻寒冷诱导的一个完整cDNA序列编码的蛋白质。基于其与非生物应激的相关性选择OsCAA90866作为这些相互作用研究的饵。对包含OsCAA90866的相互作用的研究提供了对这个未充分阐明的蛋白质功能的了解。参与调节植物对环境攻击应答并因此赋予选择性优势的水稻基因的鉴别，将促进对非生物应激抗性的农作物的产生和产量。

结果

发现OsPP2A-2与水稻推定的可能是一种转录调节物的脯氨酸富集蛋白质及与种子贮存蛋白谷蛋白相互作用。研究还鉴别了与OsPP2A-2相互作用的5个新的水稻蛋白：一个推定的PP2A调节亚基蛋白，其也与水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(这个实施例的第二种饵蛋白)相似；一个与磷酸核糖邻氨基苯甲酸转移酶相似的酶，很可能参与植物应答病原体感染；一个二硫化物异构酶，在蛋白质折叠中具有推定作用；一个电压依赖性离子通道蛋白；及一个DnaJ样蛋白，在病原体诱导的防御应答中具有推定作用。

发现这个实施例的第二种饵蛋白，寒冷可诱导的蛋白CAA90866与其自身相互并用与6个蛋白质相互作用。这些蛋白质之一是同样推定的PP2A调节亚基蛋白(与饵蛋白自身相似)，发现其与这个实施例描述的饵OsPP2A-2相互作用。这个相互作用将在这个实施例中鉴别的两个网络的蛋白质联系起来(即将与生物和非生物应激相关的蛋白质与磷酸酶联系起来)。这个研究中鉴别的其它相互作用子包括14-3-3样蛋白，其在多种非生物应激条件下被诱导；吡咯烷酮羧肽酶样蛋白质，在激活参与植物应答寒冷刺激的信号肽中具有推定的作用；含有肌醇磷酸结构域的一种新的蛋白质，很可能参与调节与寒冷耐受相关的信号化活动；小麦起始因子(iso)4f p82亚基的一种新的水稻同系物，在与应激条件相关的RNA衰变途径中具有推定的作用；及与植物2-脱氢-3-deoxyphosphooctonate醛缩酶相似的一种新的蛋白质。

这个实施例的相互作用蛋白列于下表31和表32，随后是关于每个蛋白质的详细信息及相互作用意义的讨论。相互作用的图示在图6中提供。这个实施例的蛋白质的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO：177-192和329-340中提供。

鉴别的一些蛋白质代表先前未鉴定的水稻蛋白质。基于其推定的生物学功能及基于其与饵蛋白OsPP2A-2或OsCAA90866特异性相互作用的能力，看起来与OsPP2A-2相互作用的蛋白质代表参与水稻防御性应答生物刺激的一个蛋白质网络，与OsCAA90866相互作用的那些蛋白质与非生物应激反应相关。重要的是鉴别的相互作用提示磷酸酶在调节水稻的生物和非生物应激反应中起作用。

表31

针对OsPP2A-2鉴别的相互作用蛋白

(丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A-2)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由研究中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_Accession No.)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsPP2A-2PN20254(AF134552-OS002763)(SEQIDNO：330)	水稻丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A-2，催化亚基(AF134552，AAD22116)
				相互作用子

OsAAK63900PN23266(SEQ ID NO：332)	水稻推定的脯氨酸富集蛋白AAK63900(AC084884)	1-308	122-224(输入性状)
				OsORF020300-2233.2PN21639(2233(2)-OS-ORF020300新(SEQ ID NO：178)	假设蛋白ORF020300-2233.2，推定的PP2A调节亚基，与OsCAA90866相似(AAD39930；5e-92)(CAA90866；5e-53)	1-308	93-387118-388(输入性状)
OsPN23268PN23268新(SEQ ID NO：180)	新的蛋白质23268，与磷酸核糖邻氨基苯甲酸转移酶相似，叶绿体前体，片段(AAB02913.1；5e-95)	1-308	2x12-200(输入性状)
				OsCAA33838PN24775(SEQ ID NO：334)	水稻谷蛋白CAA33838(X15833)	150-308	5-155(输出性状)
OsPN26645(Contig3412.fasta.Contig1新)(SEQ ID NO：182)	新的蛋白质PN26645，推定的蛋白二硫化物异构酶相关的蛋白质前体(BAB09470.1；e-28)	1-308	24-164(输入性状)
				OsPN24162(Contig3453.fasta.Contig1新的(SEQ ID NO：184)	新的蛋白质PN24162，孔蛋白样电压依赖性阴离子通道蛋白(NP_201551；3e-86)	150-308	28-164(输出性状)
Os011994-D16 PN20618(FL_R01_P028_D16OS011994新的(SEQ ID NO：186)	假设蛋白011994-D16，与玉米DnaJ蛋白相似(T01643；e＝0)	150-308	99-368(输出性状)

表32

针对OsCAA90866鉴别的相互作用蛋白质

(水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866)

表中给出了用作饵及发现作为猎物的蛋白质克隆的名称。这个实施例的蛋白质(或相关蛋白质)的核苷酸/蛋白质序列登记号在蛋白质名称下的括号中示出。饵和猎物坐标是分别由研究中使用的饵片段和相互作用猎物克隆编码的氨基酸。来源是每个猎物克隆从中挽回的文库。

基因名称	蛋白质名称(GENBANK_Accession No.)	饵坐标	猎物坐标(来源)
				饵蛋白
OsCAA90866PN20311(984756_OS015052)(SEQ ID NO：336)	水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(Z54153，CAA90866)
				相互作用子
OsCAA90866PN20311(SEQ ID NO：336)	水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(Z54153，CAA90866)	100-250	1-126(输出性状)
				Os008938-3209PN20215(3209-OS208938)(SEQ ID NO：338)	水稻推定的14-3-3蛋白质(AAK38492)	100-250	4x53-259(输入性状)
OsAAG46136PN23186(SEQ ID NO：340)	水稻推定的吡咯烷酮羧肽酶(AAG46136)	100-250	2x92-222(输入性状)

OsORF020300-2233.2PN21639(SEQ ID NO：178)	假设蛋白ORF020300-2233.2，推定的PP2A调节亚基，与OsCAA90866相似(AAD39930；5e-92)(CAA90866，5e-53)	100-250	3x1-2063x1-190(输出性状)
				OsPN23045(SEQ ID NO：188)	新的蛋白质PN23045	100-250	2x240-287(输入性状)
OsPN23225(SEQ ID NO：190)	新的蛋白质PN23225，与小麦起始因子(iso)4f p82亚基相似(AAA74724；e＝0)	100-250	639-792(输入性状)
				OsPN29883(SEQ ID NO：192)	新的蛋白质PN29883，片段	100-250	58-175(输出性状)

使用OsPP2A作为饵的双杂交

发现编码水稻丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶PP2A-2催化亚基(OsPP2A-2)的第1-308位氨基酸的饵片段与水稻推定的脯氨酸富集蛋白质相互作用，其可能是一种转录调节物。饵片段(即OsPP2A-2的第1-308位氨基酸)包括OsPP2A-2的丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶签名。编码OsAAK63900的第122-224位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库中挽回。略有些惊奇地是这个猎物克隆不编码OsAAK63900的HLH结构域。

水稻推定的脯氨酸富集蛋白质AAK63900(OsAAK63900)(GENBANK_Accession No.AC084884)是具有224个氨基酸的蛋白质，其包括一个推定的跨膜区(第7-23位氨基酸)。其还含有与细菌中一组DNA结合转录调节蛋白共有的一个gntR家族签名(第10-34位氨基酸)(见Buck&Guest，1989；Haydon&Guest，1991；Reizer et al.，1991)。这个签名包括一个螺旋-环-螺旋(HLH)蛋白质二聚化结构域(第5-20位氨基酸)，其通常在转录因子中发现(见Murre et al.，1989；Garrel&Campuzano，1991，Kato&Dang，1992；Krause et al.，1990；Riechmann et al.，1994)。然而，无DNA结合基序可检测。

注意OsAAK63900的氨基酸序列分析还检测了一个Ole e I家族签名(第30-162位氨基酸)，其包括参与二硫键的6个保守的半胱氨酸。这个签名是在一组未知功能的植物花粉蛋白质中发现的一个保守区域，其趋于是分泌的并由大约145个氨基酸组成(并因此比OsAAK63900短)。揭示的第一个蛋白质Ole e I家族是Ole e I(IUIS命名法)，这是在橄榄树Oleaeuropaea花粉中的一种组成型蛋白质及一种主要的过敏原(Villalba et al.，1993)。

还发现编码OsPP2A-2的第1-308位氨基酸的饵片段(其包括OsPP2A-2的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶签名)与水稻OsORF020300-223.2相互作用，这是一种新的具有418个氨基酸的蛋白质，具有一个推定的PP2A调节亚基，与OsCAA90866相似。编码ORF020300-233的第93-387位和第118-388位氨基酸的两个猎物克隆从输入性状文库中挽回，这表明OsORF020300-2233.2通过第118-387位氨基酸内的一个区域与OsPP2A-2相互作用。OsORF020300-2233.2包括在第50和51位氨基酸之间的一个可能的切割位点，尽管看起来其没有N末端信号肽。OsORF020300-2233.2与拟南芥PP2A调节亚基相似(GENBANK_Accession No.AAD39930.1；44.5％氨基酸序列相同性；5e^-91期望值)。OsORF020300-2233.2还与水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866相似(GENBANK_Accession No.CAA90866，68％序列相同性；9e^-48期望值)，这是与水稻中寒冷耐受性相关的蛋白质，OsORF020300-2233.2也与其相互作用。CAA90866也用作饵蛋白，针对其鉴别的相互作用在这个实施例后文论述。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsORF020300-2233.2的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS015607_at(e^-135期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由真菌病原体稻瘟霉诱导的。

还发现编码OsPP2A-2的第1-308位氨基酸的饵片段(其包括OsPP2A-2的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶签名)与新的蛋白质(PN23268)相互作用，这是与磷酸核糖邻氨基苯甲酸转移酶相似的一种酶，很可能参与植物应答病原体感染。新的蛋白质称为OsPN23268，其与邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶，一种叶绿体前体相似。编码新的蛋白质OsPN23268的第12-200位氨基酸的两个猎物克隆从输入性状文库挽回。

OsPN23268是一种新的具有320个氨基酸的蛋白质，在第43和44位氨基酸之间有一个可能的切割位点，尽管看起来没有N末端肽序列。Os23268蛋白质序列分析检测了最初在大肠杆菌胸苷磷酸化酶中阐明的两个结构域(Walter et al.，1990)：糖基转移酶家族螺旋束结构域(第1-61位氨基酸)和糖基转移酶家族a/b结构域(第66-303位氨基酸)。后者含有一个β-折叠，其得以张开以容纳推定的磷酸结合位点(Walter et al.，1990)。OsPN23268的两个猎物克隆从输入性状文库挽回并发现与包括编码新蛋白OsPN23268的第12-200位氨基酸序列的OsPP2A-2相互作用。OsPN23268的这个序列包括糖基转移酶家族螺旋束结构域和部分a/b结构域。

糖基转移酶家族包括胸苷磷酸化酶和邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶。在哺乳动物细胞中，胸苷磷酸化酶与血管生成因子即血小板衍生内皮细胞生长因子相同(Morita et al.，2001；Browns&Bicknell，1998)，并且其还通过将化疗药物希罗达(capecitabine)转变为活性形式而控制其效力(Ackland&Peters，1999)。正如其名称所示出的，新的蛋白质23268与拟南芥磷酸核糖邻氨基苯甲酸转移酶相似(GENBANK_AccessionNo.AAB02913.1；56.6％相同性；5e^-95)，这是在细菌中也发现的在色氨酸生物合成途径中起作用的一种酶(Edwards et al.，1988)。在拟南芥中，这个色氨酸生物合成酶是作为较高分子量前体合成的，然后输入叶绿体中加工成其成熟形式(Zhao&Last，1995)。拟南芥邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶还与DESCA11(GENBANK_Accession No.BI534445；e^-17)相似，这是在苋色藜(Chenopodium amaranticolor)(具有广谱病毒抗性的一种植物)中鉴别的基因之一，其是在植物感染烟草花叶病毒和烟草脆裂病毒(tobacco rattle tobravirus)后过敏反应(HR)应答期间诱导的(Goff，2001)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23268的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015603_s_at(3e^-41期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是由真菌病原体稻瘟霉诱导的。

还发现含有第150-308位氨基酸的OsPP2A-2的饵片段与种子贮存蛋白质谷蛋白CAA33838(OsCAA33838)相互作用。谷蛋白CAA33838是水稻中主要的种子贮存蛋白。其cDNA序列由Wen et al.，1989鉴别，并且该蛋白质在水稻胚乳中的积聚在开花后5-7天之间发生(Udaka etal.，2000)。编码OsCAA33838的第5-155位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。

OsCAA33838(GENBANK_Accession No.X15833)是具有499个氨基酸的蛋白质，其包括一个可切割的信号肽(第1-24位氨基酸)，这是通过氨基酸序列分析确定的。这个分析鉴别了11S植物种子贮存蛋白质结构域(第1-469位氨基酸；1e^-243)。11S植物种子贮存蛋白趋于是糖基化的蛋白质，形成六聚体结构。它们由通过二硫键连接的两个肽组成，并且根据两个β桶结构域其还是蛋白质cupin超家族的成员。这个分析还检测了这个结构域，但定位于一个狭窄的区域(第302-324位氨基酸)。另外，鉴别了7S种子贮存蛋白，C末端结构域(第319-478位氨基酸；602e^-04)，也发现其是cumin超家族的成员。与OsCAA33838是一种糖基化的蛋白质的迹象一致，鉴别了一个N-糖基化位点(第491-494位氨基酸)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsCAA33838的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS000688.1_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是有广泛的植物应激、除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsPP2A-2的饵片段与新的蛋白质PN26645相互作用，这是一种推定的蛋白质二硫化物异构酶相关蛋白前体(也称为OsPN26645)。这个研究中使用的饵片段编码OsPP2A-2的第1-308位氨基酸，其包括OsPP2A-2的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶签名。编码OsPN26645的第24-164位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库中挽回。OsPN26645是具有311个氨基酸的蛋白质，其包括一个可切割的信号肽(第1-17位氨基酸)和一个推定的跨膜结构域(第210-226位氨基酸)，这是通过氨基酸序列分析确定的。针对Genpept数据库进行的BLAST分析表明OsPN26645与一种拟南芥蛋白质相似(GENBANK_Accession No.BAB09470.1；32.8％相同性；e^-28)，所述拟南芥蛋白质与大鼠蛋白质二硫化物异构酶相关蛋白前体相似(GENBANK_Accession No.AAD46003，46％相同性，1e^-63)。正如其名称所示，二硫化物异构酶催化二硫键的形成。这个酶因此对正确的蛋白质折叠很重要。在哺乳动物中，内质网内腔中二硫化物异构酶在分泌的和细胞表面的蛋白质中产生二硫键，缺乏这个酶的微粒体不能进行二硫键的共翻译形成(Bulledi&Freedman，1988)。尽管这个酶的活性在植物中未充分鉴定，但很可能其以相似的能力起作用。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN26645的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS002485.1_at(e^-105期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物应激、除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsPP2A-2的饵片段与新的蛋白质PN24162(OsPN24162)相互作用，这是一种孔蛋白样电压依赖性阴离子通道蛋白。这个研究中使用的饵片段编码OsPP2A-2的第150-308位氨基酸。编码OsPN24162的第28-164位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。对OsPN24162的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个蛋白质与来自拟南芥的孔蛋白样蛋白质最相似(GENBANK_Accession No.NP_201551；53％氨基酸序列相同性；3e^-86)。OsPN24162还与水稻线粒体电压依赖性阴离子通道相似(GENBANK_Accession#Y18104；44％相同性；2e^-61)，这是由发现属于水稻基因组中小多基因家族的一个cDNA编码的具有274个氨基酸的蛋白质(Roosens et al.，2000)。发现这个基因的表达受植物幼苗和器官的功能的调节，而不应答渗透应激(Roosens et al.，2000)。线粒体电压依赖性离子通道也称作线粒体孔蛋白，这是根据与在革兰氏阴性菌的外膜中蛋白质形成孔的相似性而命名的。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN24162的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS007036.1_at(e^-65期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在一些不同的组织类型中非特异性表达，并且不是由广泛的植物应激、除草剂或应用的激素特异性诱导的。

还发现OsPP2A-2的饵片段与在病原体诱导的防御应答中具有推定作用的DnaJ样蛋白质相互作用。这个研究中使用的饵片段编码OsPP2A-2的第150-308位氨基酸。编码Os011994-D16的第99-368位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。这个新蛋白质称为011994-D16，或者因为其从水稻中鉴别而称作Os011994-D16。

对Os011994-D16的氨基酸序列进行的BLAST分析表明这个蛋白质与玉米(Zea mays)DnaJ蛋白质同系物ZMDJ1相似(GENBANK_Accession No.T01643；84％相同性；e＝0)。在真核细胞中，DnaJ样蛋白质调节Hsp70热激蛋白质的侣伴(蛋白质折叠)功能，通过不同的Hsp70和DnaJ样蛋白质对的直接相互作用而进行(Cyr et al.，1994)。热激蛋白(参见Bierkens et al.，2000)是应激蛋白，其作为胞内侣伴起作用以促进蛋白质折叠和装配，并且其在植物细胞中应答多种刺激，包括热和多种化学物而选择性表达。作为热激蛋白的调节物，DnaJ样蛋白质因此是植物保护性应激反应的一部分。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比Os011994-D16的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS009139.1_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因的表达受植物激素茉莉酮酸的抑制。

使用水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)作为饵的酵母双 杂交

饵蛋白，即水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)，是由水稻中寒冷耐受性相关的一个完整cDNA序列编码的具有379个氨基酸的蛋白质。BLAST分析表明OsCAA90866与来自拟南芥的同样的PP2A调节亚基相似(GENBANK_Accession No.AAD39930；35％氨基酸序列相同性；e^-57期望值)，发现PP2A调节亚基与OsORF020300-223(饵蛋白PP2A-2的相互作用子)相似(见实施例3)。针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比寒冷可诱导的蛋白质的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS015052_at(4e^-78期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因是受寒冷刺激诱导的。

如表32所述，发现编码水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)的第100-250位氨基酸的一个饵克隆与编码从输出性状文库挽回的相同蛋白质的第1-126位氨基酸的一个猎物克隆相互作用。

另外，发现编码水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)的第100-250位氨基酸的一个饵克隆与Os008938-3209相互作用。编码Os008938-3209的第53-259位氨基酸的四个猎物克隆从输入性状文库挽回。Os008938-3209是具有260个氨基酸的蛋白质，其包括一个14-3-3蛋白质签名1(第48-60位氨基酸)和一个14-3-3蛋白质签名2(第220-260位氨基酸)，这提示Os008938-3209是14-3-3家族的成员。BLAST分析表明Os008938-3209的氨基酸序列与水稻推定的14-3-3蛋白质的氨基酸序列具有100％相同性(GENBANK_Accession No.AAK38492，8e^-145)。14-3-3蛋白质与细胞信号化、细胞周期调节和编程性细胞死亡的调节物相互作用。认为它们作为分子支架或侣伴而起作用，并通过调节与其相互作用的蛋白质的核输入/输出而调节蛋白质的胞质及核定位(Zilliacus et al.，2001；参见Muslin&Xing，2000)。由于14-3-3蛋白质参与核内(Imhof&Wolffe，1999；Zilliacus et al.，2001)，胞质内(De Lilleet al.，2001)，线粒体内(De Lille et al.，2001)及叶绿体内(Sehnke et al.，2000)的蛋白质复合物，因此需要额外的信息以确定Os008938-3209位于细胞内的何处。这个猎物蛋白的细胞定位可以更好地阐明其与寒冷可诱导的蛋白质CAA90866相互作用的意义。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比Os008938-3209蛋白质的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probesetOS008938_s_at(e^-61期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在寒冷应激期间及在甘寒条件下是由水杨酸，ABA，BAP，BL2，和2，4-D诱导的。

另外，发现编码水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)的第100-250位氨基酸的饵克隆与OsAAG46136(来自水稻的吡咯烷酮羧肽酶)相互作用。编码OsAAG46136的第92-222位氨基酸的两个猎物克隆从输入性状文库挽回。这些克隆包括OsAAG46136的焦谷氨酰肽酶I基序。

OsAAG46136是具有222个氨基酸的蛋白质，其含有一个焦谷氨酰肽酶I基序(第11-221位氨基酸)。发现这个基序在肽激素(包括促甲状腺激素释放激素和黄体素释放激素)的N末端区域内，并且其赋予蛋白质蛋白酶抗性(Odagaki et al.，1999)。BLAST分析表明OsAAG46136的氨基酸序列与水稻推定的吡咯烷酮羧肽酶的氨基酸序列具有100％相同性(GENBANK_Accession No.AAG46136；4e^-126)。OsAAG46136还与来自拟南芥的两种未知的蛋白质相似(GENBANK_Accession No.NP_176063，8e^-080和AAK25976.1，e^-076，在文献中均未描述)。OsAAG46136与吡咯烷酮羧肽酶的相似性提示了这个未充分阐明的水稻蛋白质的一些功能。吡咯烷酮羧肽酶(Pcps)是从一些蛋白质中除去N末端焦谷氨酰基团的一种酶。其存在于许多物种中(参见Awade et al.，1994)并且是细菌诊断的颇有价值的工具(描述这个蛋白质的大多数文献认为其是细菌同系物)。荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)Pcps的活性位点已经鉴定，这个位点的性质(Cys-144和His-166是活性所必需的)提示其可代表一类新的硫醇氨基肽酶(Le Saux et al.，1996)。这个蛋白质家族中的肽酶是重要的生物活性肽包括与阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)密切相关的淀粉样前体蛋白质(APP)的加工和激活所必需的(Lefterov et al.，2000).另外，这种酶脱去氨基并因此使糖肽抗癌制剂博来霉素失活(Schwartz et al.，1999)。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsAAG46136的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS013894_s_at(e^-8期望值)是最接近的匹配。这个probeset的期望值太低以至于不是OsAAG46136的基因表达的可靠指征。

还发现编码水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)的第100-250位氨基酸的饵克隆与蛋白质ORF020300-2233.2(OsORF020300-223)相互作用，所述蛋白质具有一个推定的PP2A调节亚基并与OsCAA90866相似(见实施例III所述)。编码OsORF020300-2233.2的第1-206位氨基酸的三个猎物克隆及编码第1-190位氨基酸的三个猎物克隆从输出性状文库挽回。

另外，发现编码水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)的第100-250位氨基酸的饵克隆与蛋白质PN23045(OsPN23045)相互作用。编码OsPN23045的第240-287位氨基酸的两个猎物克隆从输入性状文库挽回。

OsPN23045是具有287个氨基酸的蛋白质，其包括一个肌醇P结构域(第233-272位氨基酸)。这个结构域在牛肌醇磷酸1-磷酸酶蛋白中鉴别，其参与信号转导(见York et al.，1994)。 Mikami等揭示了磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶(AtPIP5K11)在拟南芥中是由水应激和脱落酸(ABA)诱导的，提示植物中磷酸肌醇信号化级联与水应激反应之间的关联(Mikamiet al.，1998)。 Xiong等报道了FRY1(拟南芥中编码肌醇多磷酸1-磷酸酶的突变基因)在这个植物中是ABA和应激信号化的阴性调节物(Xiong etal.，2001a)，提供磷酸肌醇介导植物中ABA和应激信号化转导的证据。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23045的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS006742.1_at(e＝0期望值)是最接近的匹配。基因表达实验表明这个基因在叶和茎干中特异性表达。

还发现编码水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)的第100-250位氨基酸的饵克隆与蛋白质PN23225相互作用，这是与小麦起始因子(iso)4f p82亚基(p82)相似的一种新的具有792个氨基酸的蛋白质(GENBANK_Accession No.AAA74724；69.6％氨基酸序列相同性；e＝0)。编码OsPN23225的第639-792位氨基酸的一个猎物克隆从输入性状文库挽回。小麦蛋白质含有ATP结合、金属结合，及磷酸化的可能的基序(Allen et al.，1992)。OsPN23225含有根据真核起始因子4G(eIF4G)的Middle结构域命名的一个MIF4G结构域(第207-434位氨基酸)，及也在eIF蛋白质中发现的一个MA3结构域(第627-739位氨基酸)(Ponting，2000)。这些结构域在参与mRNA衰变途径的分子中发现。尽管饵寒冷可诱导的蛋白质CAA90866的功能还未充分阐明，但看起来其是一种核蛋白质并且其与eIF样蛋白质OsPN23225的相互作用支持了CAA90866参与水稻转录机制的观点。OsPN23225猎物蛋白的鉴别很可能代表了一种新的水稻eIF的揭示。

针对TMRI’s GENECHIP_水稻基因组阵列序列数据库对比OsPN23225的核苷酸序列的BLAST分析鉴别probeset OS003249_at(e^-17期望值)是最接近的匹配。这个probeset的期望值太低以至于不是OsPN23225基因表达的可靠指征。

还发现编码水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866)的第100-250位氨基酸的饵克隆与OsPN29883相互作用，这是与拟南芥推定的2-脱氢-3-deoxyphosphooctonate醛缩酶(GENBANK_AccessionNo.NP_178068；3e^-142期望值)和豌豆(Pisum sativum)2-脱氢-3-deoxyphosphooctonate醛缩酶(Kdo8P合酶；GENBANK_AccessionNo.O50044；3e^-142期望值)相似的具有340个氨基酸的片段。编码OsPN29883的第58-175位氨基酸的一个猎物克隆从输出性状文库挽回。豌豆中Kdo8P合酶催化Kdo-8-P的合成，Kdo-8-P是植物细胞壁的脂多糖的一个成分，与肠细菌Kdo8P合酶具有高度结构和功能相似性(Brabetz et al.，2000)。

小结

针对OsPP2A-2饵蛋白鉴别的相互作用子(即结合OsPP2A-2的蛋白质)包含推测与植物病原体防御应答相关的一个网络。5种新水稻蛋白质鉴别为OsPP2A-2的相互作用子，Os23268与拟南芥色氨酸生物合成酶邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶相似。这种酶由与参与病毒感染抗性的DESCA11基因相似的一个基因编码(Goff，2001)。虽然色氨酸在疾病抗性中的作用未知，但色氨酸用于吲哚-3-乙酸(一种植物激素和信号化分子)的生物合成中。因此色氨酸在调节植物基因表达中起作用。另外，糖基转移酶在Os23268中的功能与疾病抗性信号化途径或与植物抗毒素细胞分布相关。植物抗毒素是低分子量的抗微生物化合物，其由于感染或应激的结果而在植物中积聚，其积聚的速度与植物对真菌或细菌所致疾病的抗性相关。总而言之，这些数据提示邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶在植物应答病原体感染中起作用。另外，基因表达实验证实这个基因是由真菌病原体稻瘟霉诱导的。因此，确信邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶样新的蛋白质Os23268参与介导水稻应答生物刺激的信号化和调节途径。

与DnaJ蛋白质相似的新的蛋白质Os011994-D16是OsPP2A-2的另一个相互作用子，在病原体诱导的防御应答中可能起作用。已知DnaJ样蛋白质是热激蛋白的调节物并因此是植物保护性应激反应的一部分。基因表达实验支持了这个观点，表明编码这个实施例的DnaJ样蛋白质的基因由茉莉酮酸抑制，茉莉酮酸是提供植物病原体诱导的防御应答的特异性的信号化网络的一个成分(参见Nurnberger&Scheel，2001)。

还发现OsPP2A-2与新的蛋白质OsORF020300-223相互作用，其与拟南芥PP2A调节亚基及与水稻寒冷可诱导的蛋白质CAA90866(OsCAA90866；这个实施例中的第二种饵蛋白)相似。OsORF020300-2233.2与PP2A调节亚基的相似性证实了其与PP2A-2催化亚基相互作用，这个相互作用与PP2A酶的亚基成分一致(Awotunde etal.，2000)。OsORF020300-223-OsPP2A-2相互作用提示OsORF020300-2233.2参与信号化活动，包括OsPP2A-2酶活性，OsORF020300-2233.2与水稻寒冷可诱导的蛋白质OsCAA90866的相似性提示寒冷耐受可包含这些信号化活动之一。

还发现OsPP2A-2与水稻推定的脯氨酸富集蛋白质OsAAK63900相互作用。尽管未知DNA结合基序，但表明了OsAAK63900可发挥转录调节物作用。其具有转录因子共有的一个HLH结构域，尽管这个结构域仅介导蛋白质二聚体化。其还具有细菌DNA结合转录调节物共有的一个gntR家族签名，尽管这个结构域的功能还未知。Ole e I的存在提示OsPP2-2可以使OsAAK69300去磷酸，因此调节其作为花粉蛋白质的功能，尽管还没有关于Ole e I签名功能的数据而使得这种可能性更难以信服。还存在PP2A蛋白质调节植物(Vazquez-Tello et al.，1998)及哺乳动物细胞(Wadzinski et al.，1993)中转录因子的DNA结合活性这样的迹象。因此，很可能的是OsPP2A-2-OsAAK63900相互作用发生在核中并在调节水稻转录活动中起作用。

发现与OsPP2A-2相互作用的其它蛋白质包括在蛋白质折叠中具有推定作用的二硫化物异构酶(新的蛋白质OsPN26645)，一种电压依赖性离子通道蛋白(新的蛋白质OsPN24162)及种子贮存蛋白质谷蛋白(OsCAA33838)。这些相互作用的生物学意义还不清楚。对谷蛋白的氨基酸序列的分析鉴别一些蛋白激酶C和酪蛋白激酶II磷酸化位点。可能的是谷蛋白的磷酸化状态决定了其功能或稳定性，其与OsPP2A-2的相互作用可发生在谷蛋白的去磷酸化期间。或者，这种相互作用可导致OsPP2A-2定位并从而影响OsPP2A-2依赖性去磷酸化的下游活动。假设在典型的植物种子贮存蛋白的两个肽链之间存在二硫键，令人感兴趣的是OsPP2A-2还与推定的蛋白质二硫化物异构酶(OsPN26645)相互作用。也许OsPP2A-2与其它酶的相互作用产生一种共同翻译修饰复合物。额外的酵母双杂交数据可阐明这些相互作用的用途。然而，假设PP2A与参与生物应激反应的其它蛋白质的相关性，因此前述相关性也可参与生物应激反应。

发现寒冷可诱导的蛋白质CAA90866与自身及与6种蛋白质相互作用。推测这些蛋白质相互作用作为水稻应答寒冷刺激相关的一个蛋白质网络的成分。这个假说在基因表达实验中得以支持，其证实编码寒冷可诱导的蛋白质的基因是由寒冷诱导的。这些相互作用子之一是推定的14-3-3蛋白质Os008938-3209。与饵蛋白OsCAA90866的寒冷耐受的关系提示其与Os008938-3209的相互作用可与寒冷耐受相关。基因表达实验示出这个蛋白质在广泛的应激条件下被诱导。其激活可能使得其与许多应激蛋白相互作用。假设14-3-3蛋白质作为分子侣伴，Os008938-3209可作为这些相互作用的分子粘合剂以保持蛋白质复合物在膜中的稳定性，或者其可以调整包含应激基因相关的转录因子的相互作用。Os008938-3209的亚细胞定位可进一步阐明其与OsCAA90866相互作用的意义。

OsCAA90866的另一个相互作用子是吡咯烷酮羧肽酶样蛋白质(OsAAG46136)。OsAAG46136的推定的吡咯烷酮羧肽酶功能提示其参与底物蛋白质的加工和/或激活，并且这些蛋白质对植物应答寒冷而言很重要。肽酶活性与信号化的调节相关。例如，羧肽酶从肽激素中水解除去焦谷氨酰基团，从而激活这些信号化分子。羧肽酶通过蛋白质的蛋白酶解加工调节拟南芥中油菜素类固醇不敏感1(BRI1)信号化(Li et al.，2001)。基于其与寒冷可诱导的蛋白质的相互作用能力及基于后者在寒冷耐受中的作用，推测羧肽酶样蛋白质OsAAG46136在激活参与植物应答寒冷刺激的信号化分子/激素肽中起作用。

OsCAA90866与OsPN23045(具有推定的肌醇磷酸功能的蛋白质)及与OsPN23225(小麦起始因子(iso)4f p82亚基的水稻同系物)相互作用，提供了对饵蛋白功能的进一步了解。已知磷酸肌醇介导植物中ABA和应激信号转导(Mikami et al.，1998；Xiong et al.，2001a)。推定的肌醇磷酸酶蛋白质OsPN23045可以相似方式起作用并且其与寒冷可诱导的蛋白质的相互作用可与寒冷耐受性相关的细胞信号化活动的调节相关。猎物蛋白质OsPN23225很可能代表新的水稻eIF。eIF蛋白质在RNA加工途径中起作用(Ponting，2000)，并且应激典型地与RNA转录物的丰度相关。基于这个信息及基于CAA90866与寒冷耐受的关系，推测OsCA90866-PN23225相互作用控制与寒冷应激相关的翻译活动。

最后，OsCAA90866与发现与饵蛋白OsPP2A-2相互作用的同样推定的PP2A调节亚基蛋白质OsORF020300-2233.2相似并与其相互作用。这个相互作用提供了这个实施例的两个网络之间的联系，并提示OsPP2A-2参与生物和非生物应激反应途径。基于观测到的相互作用及基于参与这些相互作用的蛋白质之间的序列相似性，看起来OsPP2A-2调节生物和非生物应激反应途径。因此，这两个途径尽管是独立的，但推测通过蛋白质磷酸酶而联系起来，并且这些酶很可能通过参与这些途径的蛋白质的磷酸化而介导植物的应激反应。在这种情况中，可能观测到的OsCAA90866自身相互作用参与多成分磷酸酶复合物的产生。另外，OsCA90866与醛缩酶样蛋白质OsPN29883的相互作用提示醛缩酶需要去磷酸化以激活/失活，并且这个新的蛋白质基于寒冷可诱导的蛋白质的其它相互作用及基因表达模式在应激反应期间可起作用。

另外，OsORF020300-2233.2(拟南芥蛋白质磷酸酶2A(PP2A-A)的调节A亚基)参与调节拟南芥中生长素转运的调节(Garbers et al.，1996)。植物激素生长素控制如细胞延长，根毛发育及根分支等过程。由于OsORF020300-2233.2还与寒冷可诱导的蛋白质CAA90866相似并与其相互作用，因此可能后者可参与生长素转运。

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下列参考文献及说明书中所引参考文献在此并入参考，其补充、解释、提供或教导了本文所用的方法学、技术和/或组合物。

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本领域技术人员使用常规实验将知道或能够确定与本说明书所述的特定实施方案等同的许多实施方案。这种等同物也包括在本权利要求书的范围之内。

序列表

<110>先正达合作有限公司

<120>细胞增殖相关多肽及其应用

<130>1392-10-19-2

<150>US 60/436,565

<151>2002-12-26

<160>349

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>885

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(885)

<400>1

atg gcg cct ccc tgc ggc gat gcc gcg gcg gct gcc tcc gcc gcg ccc 48

Met Ala Pro Pro Cys Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ala Ala Pro

1 5 10 15

ggc ctg gcc aac ctg ctc att cgc gaa ggc gcc ggc ctc cct tcg cgt 96

Gly Leu Ala Asn Leu Leu Ile Arg Glu Gly Ala Gly Leu Pro Ser Arg

20 25 30

ccc gaa cgg tac ccg cca ttc cgg ccc tgt act tct gat tcc ttt gct 144

Pro Glu Arg Tyr Pro Pro Phe Arg Pro Cys Thr Ser Asp Ser Phe Ala

35 40 45

cca atc tct agg gaa ggg gac gat att ccc ccc caa aaa aaa tcg gtt 192

Pro Ile Ser Arg Glu Gly Asp Asp Ile Pro Pro Gln Lys Lys Ser Val

50 55 60

tct tta cgc agc ggc ggc ggc ggc aat gcg gca gag agg gag gag ggc 240

Ser Leu Arg Ser Gly Gly Gly Gly Asn Ala Ala Glu Arg Glu Glu Gly

65 70 75 80

ggt gcg aac agg aac ggg aag aag gag aag acc ggg gcg cag agg atc 288

Gly Ala Asn Arg Asn Gly Lys Lys Glu Lys Thr Gly Ala Gln Arg Ile

85 90 95

acc ggg tgg ggg ctc cgt gag ttc agc aag ata gtt tct aag aaa gtt 336

Thr Gly Trp Gly Leu Arg Glu Phe Ser Lys Ile Val Ser Lys Lys Val

100 105 110

gag gcc aaa gga aga acc aca tat aat gag gtt gcc gat gag att ttt 384

Glu Ala Lys Gly Arg Thr Thr Tyr Asn Glu Val Ala Asp Glu Ile Phe

115 120 125

gcg gag ctg aag tcc att acg cag aac ggt ctg gag ttt gat gag aag 432

Ala Glu Leu Lys Ser Ile Thr Gln Asn Gly Leu Glu Phe Asp Glu Lys

130 135 140

aat att agg cgg agg gta tat gat gct ttc aat gtg ctc att gca att 480

Asn Ile Arg Arg Arg Val Tyr Asp Ala Phe Asn Val Leu Ile Ala Ile

145 150 155 160

cgt gtt att gca aaa gat aaa aag gag ata aag tgg atg ggc ctt act 528

Arg Val Ile Ala Lys Asp Lys Lys Glu Ile Lys Trp Met Gly Leu Thr

165 170 175

aat tat aga tac gaa aag ata cag aag ttg gag gaa gtt cac aaa gaa 576

Asn Tyr Arg Tyr Glu Lys Ile Gln Lys Leu Glu Glu Val His Lys Glu

180 185 190

ctc atc acc agg atc aag aat aag aag aag ctt ctc cag gaa att gaa 624

Leu Ile Thr Arg Ile Lys Asn Lys Lys Lys Leu Leu Gln Glu Ile Glu

195 200 205

aag cag ttt gat gac ctt cag aat att aca tta cgc aac cag gct agt 672

Lys Gln Phe Asp Asp Leu Gln Asn Ile Thr Leu Arg Asn Gln Ala Ser

210 215 220

cag agg cca gca gaa agt gtt aat ggc atc ctc ctt ccg ttc tta ttg 720

Gln Arg Pro Ala Glu Ser Val Asn Gly Ile Leu Leu Pro Phe Leu Leu

225 230 235 240

atc aag aca tcc cga aaa gca agg gtg gaa att gag att tcg gaa gat 768

Ile Lys Thr Ser Arg Lys Ala Arg Val Glu Ile Glu Ile Ser Glu Asp

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165 170 175

agc agc ggc ggc gac tca atc ggt ggc atg cag gtg aaa gcc atg gtc 576

Ser Ser Gly Gly Asp Ser Ile Gly Gly Met Gln Val Lys Ala Met Val

180 185 190

gac gat gat gag gaa gag caa ttc acc cct gtg gag aag gag ttc gag 624

Asp Asp Asp Glu Glu Glu Gln Phe Thr Pro Val Glu Lys Glu Phe Glu

195 200 205

tac acg gtg gat gtg agg tgc gcg agc tcg acg acg aag gta tcc ggg 672

Tyr Thr Val Asp Val Arg Cys Ala Ser Ser Thr Thr Lys Val Ser Gly

210 215 220

gcg gtg gtt gtt ggg gag ttc atg ggg gag ggc aat gca gct gca ggg 720

Ala Val Val Val Gly Glu Phe Met Gly Glu Gly Asn Ala Ala Ala Gly

225 230 235 240

gga ttg tac gcc agg gtg gag gct ctg gag gcg gac agg gcg gca atg 768

Gly Leu Tyr Ala Arg Val Glu Ala Leu Glu Ala Asp Arg Ala Ala Met

245 250 255

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Arg Arg Glu Ile Ala Ala Leu Arg Ala Glu Arg Ala Gln Leu Val Met

260 265 270

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Ala Arg Ala Met Ala Arg Arg Leu Cys Arg Glu Val Val Ala Glu Gln

275 280 285

aaa gcc aag aaa gtg gct gcc tca cca cga agc ttc tcg gtg cta ggg 912

Lys Ala Lys Lys Val Ala Ala Ser Pro Arg Ser Phe Ser Val Leu Gly

290 295 300

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Val Cys Lys Trp Val Leu Ser Ile Ile Phe Trp Arg Asn Arg Ser Ser

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325 330 335

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Leu Leu Leu Asp Arg Ser Thr Met Leu Ser Pro Trp Arg Arg Leu Pro

340 345 350

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Ser Pro Arg Gln

355

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

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Met Asp Pro Ile Gly Asp Pro Ser Pro Ser Ser Arg Arg Ser Val Lys

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Arg Arg Pro Pro Ala Arg Ser Pro Glu Leu Ser Pro Lys Ala Trp Gly

20 25 30

Gly Glu Ala Pro Glu Leu Ile Arg Arg Leu Glu Glu Leu Glu Glu Ala

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Ala Ala Arg Leu Arg Gly Glu Lys Glu Ala Ala Glu Glu Ala Ala Arg

50 55 60

Glu Leu Gln Ala Glu Leu Asp Ala Glu Arg Ala Ser Ala Glu Thr Ala

65 70 75 80

Thr Ser Glu Ala Met Leu Met Ile Glu Arg Leu Gln Arg Glu Lys Ala

85 90 95

Ala Ala Gln Met Glu Ala Arg Gln Phe Arg Arg Tyr Ala Glu Gly Arg

100 105 110

Glu Asp Arg Glu Arg Glu Val Gln Glu Glu Leu Ala Ser Leu Ser Asp

115 120 125

Leu Ala Ala Ser Tyr His Ser Arg Leu Gln Ser His Gly Ile Asp Pro

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Asp Ser Phe Ser Asp Asp Gly Glu Glu Glu Gln His Asp Glu Glu Asp

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Gly Glu Glu Val Glu Gln Ile Asp Thr Ala Ala Leu Gln Thr Asp Gly

165 170 175

Ser Ser Gly Gly Asp Ser Ile Gly Gly Met Gln Val Lys Ala Met Val

180 185 190

Asp Asp Asp Glu Glu Glu Gln Phe Thr Pro Val Glu Lys Glu Phe Glu

195 200 205

Tyr Thr Val Asp Val Arg Cys Ala Ser Ser Thr Thr Lys Val Ser Gly

210 215 220

Ala Val Val Val Gly Glu Phe Met Gly Glu Gly Asn Ala Ala Ala Gly

225 230 235 240

Gly Leu Tyr Ala Arg Val Glu Ala Leu Glu Ala Asp Arg Ala Ala Met

245 250 255

Arg Arg Glu Ile Ala Ala Leu Arg Ala Glu Arg Ala Gln Leu Val Met

260 265 270

Ala Arg Ala Met Ala Arg Arg Leu Cys Arg Glu Val Val Ala Glu Gln

275 280 285

Lys Ala Lys Lys Val Ala Ala Ser Pro Arg Ser Phe Ser Val Leu Gly

290 295 300

Val Cys Lys Trp Val Leu Ser Ile Ile Phe Trp Arg Asn Arg Ser Ser

305 310 315 320

Thr Ala Arg Tyr Thr Phe Gly Leu Ser Thr Thr Phe Leu Gly Phe Leu

325 330 335

Leu Leu Leu Asp Arg Ser Thr Met Leu Ser Pro Trp Arg Arg Leu Pro

340 345 350

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<220>

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gag cat gaa tca gat gaa gag aag aat gaa gtt gat act agc aat gaa 48

Glu His Glu Ser Asp Glu Glu Lys Asn Glu Val Asp Thr Ser Asn Glu

1 5 10 15

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20 25 30

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Gly Phe Leu Phe Met Tyr Arg Asp Asn Leu Val Gly Asp Asp Glu Leu

35 40 45

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Ser Ala Ser Ser Ser Asp Cys Ser Ile Phe Asp Thr Leu Ala Gly Lys

50 55 60

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Leu Leu Ala Ala Ala Asp Arg Tyr Glu Leu Pro Arg Leu Arg Leu Leu

65 70 75 80

tgt gaa tct tac ttg tgc aag cat att tct gta aac tct gtg gca act 288

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85 90 95

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100 105 110

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Cys Leu Lys Phe Ala Ala Glu Asn Leu Ser Ala Val Ile Arg Thr Asp

115 120 125

ggg ttt gat tac ctc aaa gac aac tgc ccc gcg ctg caa tcg gag ata 432

Gly Phe Asp Tyr Leu Lys Asp Asn Cys Pro Ala Leu Gln Ser Glu Ile

130 135 140

ctg agg acg gtc gcc ggg tgt gag gag gaa tgc agc agc gga ggg aag 480

Leu Arg Thr Val Ala Gly Cys Glu Glu Glu Cys Ser Ser Gly Gly Lys

145 150 155 160

agc cag agc gtg tgg ggg cag ctc tcg gat ggc ggc gat acc agc ggg 528

Ser Gln Ser Val Trp Gly Gln Leu Ser Asp Gly Gly Asp Thr Ser Gly

165 170 175

cgc agg gtg agg cca agg gtc tga 552

Arg Arg Val Arg Pro Arg Val

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

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Ser Ala Ser Ser Ser Asp Cys Ser Ile Phe Asp Thr Leu Ala Gly Lys

50 55 60

Leu Leu Ala Ala Ala Asp Arg Tyr Glu Leu Pro Arg Leu Arg Leu Leu

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Cys Glu Ser Tyr Leu Cys Lys His Ile Ser Val Asn Ser Val Ala Thr

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Thr Leu Ala Leu Ala Asp Arg His His Ala Met Glu Leu Lys Ser Val

100 105 110

Cys Leu Lys Phe Ala Ala Glu Asn Leu Ser Ala Val Ile Arg Thr Asp

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Ser Gln Ser Val Trp Gly Gln Leu Ser Asp Gly Gly Asp Thr Ser Gly

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Met Ala Lys Ser Ser Ala Asp Asp Ala Glu Leu Arg Arg Ala Cys Ala

1 5 10 15

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20 25 30

atc cgc gtc gcc aag ggg agg ggc atc ttc gag aag ctc ggc cgc ctc 144

Ile Arg Val Ala Lys Gly Arg Gly Ile Phe Glu Lys Leu Gly Arg Leu

35 40 45

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Ala Lys Pro Arg Val Leu Ala Leu Thr Val Lys Gln Ser Thr Lys Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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Glu Leu Ala Leu Trp Ala Lys Glu Asn Thr Val Thr Leu Asp Asn Gln

165 170 175

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Ser Ser Thr Gln Asp Gly Gln Glu Lys Ser Val Thr Thr Gln Thr Glu

180 185 190

agg aaa gta act gta act gtt gaa aat gat ctt ggg tcc caa gca aag 624

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195 200 205

gat gaa gag gaa gac atg gag gca ctt ctt gac aca tat gtc atg ggc 672

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210 215 220

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gct ttg gaa gca gcc aat gtc tat caa cta ctg cag agt gaa cct tta 768

Ala Leu Glu Ala Ala Asn Val Tyr Gln Leu Leu Gln Ser Glu Pro Leu

245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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305 310 315 320

gat cgc ttg cga att cca cag gag 984

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Glu Ala Ala Lys Ala Phe Leu Arg Val Leu Lys Tyr Ser Ser Gly Ala

65 70 75 80

Val Leu Glu Pro Ala Lys Leu Tyr Lys Leu Lys His Leu Thr Lys Val

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Glu Val Ile Ser Asn Asp Pro Ser Gly Cys Thr Phe Val Leu Gly Phe

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Asn Ile Asp Asp Arg Asn Arg Leu Leu Phe Ser Ile Leu Thr Met Cys

130 135 140

Lys Glu Ile Leu Ser Tyr Leu Pro Lys Val Val Gly Ile Asp Phe Val

145 150 155 160

Glu Leu Ala Leu Trp Ala Lys Glu Asn Thr Val Thr Leu Asp Asn Gln

165 170 175

Ser Ser Thr Gln Asp Gly Gln Glu Lys Ser Val Thr Thr Gln Thr Glu

180 185 190

Arg Lys Val Thr Val Thr Val Glu Asn Asp Leu Gly Ser Gln Ala Lys

195 200 205

Asp Glu Glu Glu Asp Met Glu Ala Leu Leu Asp Thr Tyr Val Met Gly

210 215 220

Ile Gly Glu Ala Asp Ala Phe Ser Glu Arg Leu Lys Gln Glu Leu Val

225 230 235 240

Ala Leu Glu Ala Ala Asn Val Tyr Gln Leu Leu Gln Ser Glu Pro Leu

245 250 255

Ile Asp Glu Val Leu Gln Gly Leu Asp Ala Ala Ser Ala Thr Val Asp

260 265 270

Asp Met Asp Glu Trp Leu Arg Ile Phe Asn Met Lys Leu Arg His Met

275 280 285

Arg Glu Asp Ile Ala Ser Ile Glu Ser Arg Asn Asn Gly Leu Glu Met

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50 55 60

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65 70 75 80

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Glu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Ser Asp Glu Thr Glu Gly Val Ser

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aaa act aaa ggt gtt cac cag aag gat gtt act gaa aag gga aag cat 336

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

agc agg gga tat gct ttt gtt aat ttt aga aca aaa ggt ttg gca tta 528

Ser Arg Gly Tyr Ala Phe Val Asn Phe Arg Thr Lys Gly Leu Ala Leu

165 170 175

aag gct gtc aaa gaa ttg aac aat gca aaa ctg aag gga aag cgg ata 576

Lys Ala Val Lys Glu Leu Asn Asn Ala Lys Leu Lys Gly Lys Arg Ile

180 185 190

agg gtt tct tcc tcg cag gct aag aac aag ctt ttt att gga aat gta 624

Arg Val Ser Ser Ser Gln Ala Lys Asn Lys Leu Phe Ile Gly Asn Val

195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

cgc aat cgg ggt tat ggt ttt gtt gaa tac tac aac cat gca tgt gca 768

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245 250 255

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260 265 270

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Asn Ala Pro Thr Val Ser Trp Ala Asp Pro Lys Asn Asn Asp Ser Ala

275 280 285

tct act tct cag gtt aaa tct gta tat gtg aaa aat ctg ccc aag aat 912

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290 295 300

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305 310 315 320

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Glu Lys Val Val Leu Pro Pro Ser Arg Gly Gly His Asp Asn Arg Tyr

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100 105 110

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Gly Ile Ser Ser Asp Val Ser Ser Glu Asp Leu Lys Arg Leu Cys Glu

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145 150 155 160

Ser Arg Gly Tyr Ala Phe Val Asn Phe Arg Thr Lys Gly Leu Ala Leu

165 170 175

Lys Ala Val Lys Glu Leu Asn Asn Ala Lys Leu Lys Gly Lys Arg Ile

180 185 190

Arg Val Ser Ser Ser Gln Ala Lys Asn Lys Leu Phe Ile Gly Asn Val

195 200 205

Pro His Ser Trp Thr Asp Asp Asp Phe Arg Lys Val Val Glu Glu Val

210 215 220

Gly Pro Gly Val Leu Lys Ala Asp Leu Met Lys Val Ser Ser Ala Asn

225 230 235 240

Arg Asn Arg Gly Tyr Gly Phe Val Glu Tyr Tyr Asn His Ala Cys Ala

245 250 255

Glu Tyr Ala Arg Gln Glu Met Ser Ser Pro Thr Phe Lys Leu Asp Ser

260 265 270

Asn Ala Pro Thr Val Ser Trp Ala Asp Pro Lys Asn Asn Asp Ser Ala

275 280 285

Ser Thr Ser Gln Val Lys Ser Val Tyr Val Lys Asn Leu Pro Lys Asn

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Val Thr Gln Ala Gln Leu Lys Arg Leu Phe Glu His His Gly Glu Ile

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Glu Lys Val Val Leu Pro Pro Ser Arg Gly Gly His Asp Asn Arg Tyr

325 330 335

Gly Phe Val His Phe Lys Asp Arg Ser Met Ala Met Arg Ala Leu Gln

340 345 350

Asn Thr Glu Arg Tyr Glu Leu Asp Gly Gln Val Leu Asp Cys Ser Leu

355 360 365

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Ser Ser Asn Gly Ala Pro Leu Leu Pro Ser Tyr Pro Pro Leu Gly Tyr

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Gly Ile Met Ser Val Pro Gly Ala Tyr Gly Ala Ala Pro Ala Ser Thr

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Val Leu Leu Asp Ser Leu Lys Arg Lys Thr Tyr Asp Asp Glu Leu Arg

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agg gag gag ctt ttg aac tac ttc aga cgg ttt cag agt gct tct caa 96

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20 25 30

aag aaa gga gga agt ggt att ttt cga caa ggg ttt agc cct tct gaa 144

Lys Lys Gly Gly Ser Gly Ile Phe Arg Gln Gly Phe Ser Pro Ser Glu

35 40 45

ggt gtt gat gaa gga cct tat ggt tta tca aga aga ata gcc tgc aag 192

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50 55 60

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cgg aag gcc gcc tcg ctc ggc cgg ata tgc cgg cgg tgg gca gcc gcc 1968

Arg Lys Ala A1a Ser Leu Gly Arg Ile Cys Arg Arg Trp Ala Ala Ala

645 650 655

tcc gcc gcc gac ggg gag cga ggc ggc ggt tgc ccc gtt gcc acc gtg 2016

Ser Ala Ala Asp Gly Glu Arg Gly Gly Gly Cys Pro Val Ala Thr Val

660 665 670

gtg ccc cct gcc atg atg gct tcg tga 2043

Val Pro Pro Ala Met Met Ala Ser

675 680

<210>30

<211>680

<212>PRT

<213>Oryza sativa

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Met Ala Gly Asn Pro Ala Ala Ala Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Ser

1 5 10 15

Ser Val Phe Leu Pro Pro Pro Ser Pro Ser Asp Gly Glu Leu Leu Arg

20 25 30

Pro Leu His Arg Leu Ala Arg Asp Leu Ser Ala Val Asp Thr Pro Ala

35 40 45

Pro Phe Leu Arg Ala Ala Phe Ala Ser Ile Ser Arg Arg Ser Lys Leu

50 55 60

Leu Ala Ala Ala Phe Asp Asp Leu Leu Leu Cys Gly Ala Ala Gly Glu

65 70 75 80

Leu Pro Arg Ser Ala Ser Leu Cys Leu Arg Glu Val Leu Leu Val Leu

85 90 95

Gln Arg Phe Lys Ala Ile Val Ala Asp Cys Ser Ala Arg Ser Arg Met

100 105 110

Arg Leu Leu Leu Glu Ser Asp Glu Met Glu Ala Glu Leu Arg Glu Leu

115 120 125

Asn His Asp Leu Ala Thr Leu Leu Asp Leu Leu Pro Val Val Glu Leu

130 135 140

Gly Leu Ala Asp Asp Val Leu Asp Val Leu Ala Leu Ala Ser Arg Gln

145 150 155 160

Cys Arg Arg Cys Ser Pro Ala Pro Glu Ser Glu Glu Ala Leu Lys Ala

165 170 175

Ser Val Leu Ser Leu Ile Gln Glu Ile Glu Arg Glu Ile Val Pro Glu

180 185 190

Arg Glu Arg Leu Glu Glu Ile Leu Val Glu Val Gly Ile Asn Asp Pro

195 200 205

Ala Ser Cys Ser Glu Glu Ile Glu Ser Leu Glu Gln Glu Ile Gly Asp

210 215 220

Arg Ala Ser Glu Lys Trp Thr Ala Ser Met Ile Ala Leu Val Gly Leu

225 230 235 240

Leu Arg Tyr Ala Lys Cys Val Leu Phe Ser Ala Thr Pro Arg Pro Ser

245 250 255

Asp Ser Asn Ser Lys Ala Asp Val Glu Ala Glu Asp Gly Glu Pro Pro

260 265 270

Val Pro Pro Ser Asp Phe Arg Cys Pro Ile Ser Leu Asp Leu Met Arg

275 280 285

Asp Pro Val Val Val Ala Ser Gly Gln Thr Tyr Asp Arg Glu Ser Ile

290 295 300

Asp Arg Trp Phe Ser Ser Gly Lys Ser Thr Cys Pro Lys Thr Gly Gln

305 310 315 320

Val Leu Ala Asn Leu Glu Leu Val Ser Asn Lys Ala Leu Lys Asn Leu

325 330 335

Ile Ser Lys Trp Cys Arg Glu Asn Gly Val Ala Met Glu Ala Cys Glu

340 345 350

Ala Ser Lys Ser Glu Gln Ala Gln Ala Val Ala Ala Asn Lys Ala Ala

355 360 365

Leu Glu Ala Ala Arg Met Thr Ala Ser Phe Leu Val Lys Lys Leu Ser

370 375 380

Val Ser Phe Ser Pro Asp Ala Ala Asn Arg Val Val His Glu Ile Arg

385 390 395 400

Leu Leu Ser Lys Ser Gly Ser Glu Asn Arg Ala Phe Val Gly Glu Ala

405 410 415

Gly Ala Val Pro Leu Leu Val Pro Leu Leu Tyr Ser Glu Asp Ala Gly

420 425 430

Leu Gln Leu Asn Ala Val Thr Ala Leu Leu Asn Leu Ser Ile Leu Glu

435 440 445

Ala Asn Lys Lys Arg Ile Met His Ala Asp Gly Ala Val Glu Ala Val

450 455 460

Ala His Ile Met Ser Ser Gly Ala Thr Trp Arg Ala Lys Glu Asn Ala

465 470 475 480

Ala Ala Ala Val Leu Ser Leu Ala Ser Val His Ser Tyr Arg Arg Arg

485 490 495

Leu Gly Arg Asn Gln Ser Val Val Glu Lys Leu Val His Leu Val Arg

500 505 510

Thr Gly Pro Thr Ser Thr Lys Lys Asp Ala Leu Ala Ala Leu Leu Thr

515 520 525

Leu Ala Gly Glu Arg Glu Asn Val Gly Lys Leu Val Asp Ala Gly Val

530 535 540

Ala Glu Val Ala Leu Ser Ala Ile Ser Lys Glu Glu Thr Ala Ala Ala

545 550 555 560

Val Leu Ala Ala Leu Ala Lys Arg Gly Gly Ala Glu Ala Ile Val Asn

565 570 575

Ile Asp Gly Ala Val Ala Arg Leu Val Ala Glu Met Arg Arg Gly Thr

580 585 590

Asp Trp Ala Arg Glu Asn Ala Thr Ala Ala Leu Val Leu Leu Cys Arg

595 600 605

Arg Leu Gly Ala Pro Ala Val Thr Gln Val Met Ala Val Pro Gly Val

610 615 620

Glu Trp Ala Ile Trp Glu Leu Met Ser Ile Gly Thr Glu Arg Ala Arg

625 630 635 640

Arg Lys Ala Ala Ser Leu Gly Arg Ile Cys Arg Arg Trp Ala Ala Ala

645 650 655

Ser Ala Ala Asp Gly Glu Arg Gly Gly Gly Cys Pro Val Ala Thr Val

660 665 670

Val Pro Pro Ala Met Met Ala Ser

675 680

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

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1 5 10 15

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20 25 30

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Gln Lys Gln Ile His Ser Ala Gly Lys Arg Gly Phe Phe Ser Lys Lys

35 40 45

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Ser Val Gly Pro His Val Arg Glu Lys Phe Thr Leu Glu Asp Met Leu

50 55 60

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65 70 75 80

gac ctt gta agc cgt tca att aag tta ttc cat gtc ata ctg aag tac 288

Asp Leu Val Ser Arg Ser Ile Lys Leu Phe His Val Ile Leu Lys Tyr

85 90 95

atg ggc atc gat tcc cca gca ata ata agt ttg gat gaa aga att gaa 336

Met Gly Ile Asp Ser Pro Ala Ile Ile Ser Leu Asp Glu Arg Ile Glu

100 105 110

ctt gtt gca aag ctt tac aag cat act ttg aaa cgt tct gaa ctg aga 384

Leu Val Ala Lys Leu Tyr Lys His Thr Leu Lys Arg Ser Glu Leu Arg

115 120 125

gat gag ctc ttt gca cag att tca aaa caa aca cgt aac aat ccc gac 432

Asp Glu Leu Phe Ala Gln Ile Ser Lys Gln Thr Arg Asn Asn Pro Asp

130 135 140

agg gct tgg tta ata aga gct tgg gag ctt atg tat tta tgt gcg tca 480

Arg Ala Trp Leu Ile Arg Ala Trp Glu Leu Met Tyr Leu Cys Ala Ser

145 150 155 160

tcc atg cca cca agc aaa gat att gga gca tac ttg tct gag tat gtt 528

Ser Met Pro Pro Ser Lys Asp Ile Gly Ala Tyr Leu Ser Glu Tyr Val

165 170 175

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His Tyr Ile Ala His Gly Ala Thr Thr Asp Ser Asp Val Arg Val Leu

180 185 190

gca ctt aac aca cta aat gca ctg aaa cgc tca gtt aag gca ggc cct 624

Ala Leu Asn Thr Leu Asn Ala Leu Lys Arg Ser Val Lys Ala Gly Pro

195 200 205

agg gtt aca att cct gca cgg gag gag ata gag gct ctt tta tcc agc 672

Arg Val Thr Ile Pro Ala Arg Glu Glu Ile Glu Ala Leu Leu Ser Ser

210 215 220

cgt aag ctt aca aca att gtt ttt ttc ttg gat gaa act ttt gaa gag 720

Arg Lys Leu Thr Thr Ile Val Phe Phe Leu Asp Glu Thr Phe Glu Glu

225 230 235 240

atc aca tat gac atg gca aca act gtt gct gat gct gtt gag gaa ctt 768

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245 250 255

gct ggc att atc aaa ctt tca gta tat tct agt ttc agc ctt ttt gaa 816

Ala Gly Ile Ile Lys Leu Ser Val Tyr Ser Ser Phe Ser Leu Phe Glu

260 265 270

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Cys Arg Lys Val Val Asn Gly Ser Lys Ser Ser Asp Val Gly Asn Glu

275 280 285

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Glu Tyr Ile Gly Leu Asp Asp Asn Lys Tyr Ile Gly Asp Leu Leu Ser

290 295 300

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Glu Phe Lys Ala Ala Lys Asp Arg Asn Lys Gly Glu Ile Leu His Cys

305 310 315 320

aaa ctt gta ttt aaa aaa cgc ctc ttc cgt gag tcc gat gag gct ata 1008

Lys Leu Val Phe Lys Lys Arg Leu Phe Arg Glu Ser Asp Glu Ala Ile

325 330 335

act gat cca atg ttt gtt cag cta tct tat gtc cag tta caa cat gat 1056

Thr Asp Pro Met Phe Val Gln Leu Ser Tyr Val Gln Leu Gln His Asp

340 345 350

tat att tta gga aac tat cca gta ggt agg gat gat gct gca cag cta 1104

Tyr Ile Leu Gly Asn Tyr Pro Val Gly Arg Asp Asp Ala Ala Gln Leu

355 360 365

tct gct ctg caa ata ttg gtc gaa att ggc ttt gtt gac aat cct gag 1152

Ser Ala Leu Gln Ile Leu Val Glu Ile Gly Phe Val Asp Asn Pro Glu

370 375 380

tct tgt gtt gaa tgg ata tct ctt tta gag aga ttt cta ccc aga caa 1200

Ser Cys Val Glu Trp Ile Ser Leu Leu Glu Arg Phe Leu Pro Arg Gln

385 390 395 400

gtt gca att aca aga gca aag cga gac tgg gag ctt gac att gtc tca 1248

Val Ala Ile Thr Arg Ala Lys Arg Asp Trp Glu Leu Asp Ile Val Ser

405 410 415

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Arg Tyr Gln Leu Met Glu His Leu Ser Lys Asp Asp Ala Arg Gln Gln

420 425 430

ttt ctc aga atc tta agg act ctt cca tat ggg aac tca gtt ttc ttc 1344

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435 440 445

agt gtc cgg aag att gat gat cca ata gga ctt tta cct gga aga atc 1392

Ser Val Arg Lys Ile Asp Asp Pro Ile Gly Leu Leu Pro Gly Arg Ile

450 455 460

att ctg gga ata aac aaa cga ggg gtt cat ttt ttc cgt ccg gtt ccc 1440

Ile Leu Gly Ile Asn Lys Arg Gly Val His Phe Phe Arg Pro Val Pro

465 470 475 480

aag gaa tat ctt cat tct gca gaa ctg aga gat atc atg caa ttt ggg 1488

Lys Glu Tyr Leu His Ser Ala Glu Leu Arg Asp Ile Met Gln Phe Gly

485 490 495

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Ser Ser Asn Thr Ala Val Phe Phe Lys Met Arg Val Ala Gly Val Leu

500 505 510

cat atc ttt cag ttt gaa act aag cag ggc gag gaa ata tgt gta gca 1584

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515 520 525

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Leu Gln Thr His Ile Asn Asp Val Met Leu Arg Arg Tyr Ser Lys Ala

530 535 540

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Arg Ser Ala Thr Ser Ala Val Ser Gln Asn Asp Val Ser Gln Thr Tyr

545 550 555 560

aaa cca ccg aat att gaa ata tat gag aaa cgt gtc caa gaa ctg tca 1728

Lys Pro Pro Asn Ile Glu Ile Tyr Glu Lys Arg Val Gln Glu Leu Ser

565 570 575

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Lys Ala Val Glu Glu Ser Glu Arg Lys Ala Asp Leu Leu Asn Glu Glu

580 585 590

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Leu Gln Lys Lys Thr Lys Gln Glu Arg Asp Met Gln Lys Glu Leu Glu

595 600 605

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610 615 620

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Thr Asn Asp Leu Asp Lys Leu Lys Ser Leu Cys Asp Glu Lys Asp Ser

625 630 635 640

tct ttg cag gct tca ctg atg gag aaa act aga ctg gag acc aga tta 1968

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645 650 655

aaa agt ggt cag ggc caa gaa agc agt aat aga aca gga gta tca gga 2016

Lys Ser Gly Gln Gly Gln Glu Ser Ser Asn Arg Thr Gly Val Ser Gly

660 665 670

aat cat ttt gag aga gat act ctc cca act gta ggc act gtc aat aat 2064

Asn His Phe Glu Arg Asp Thr Leu Pro Thr Val Gly Thr Val Asn Asn

675 680 685

agc att gag atg tta gca aag ctt gag gag gag tta aaa tcc tgt aag 2112

Ser Ile Glu Met Leu Ala Lys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Ser Cys Lys

690 695 700

aag gag ctt gat gca tcc aag gaa tta tca aag aaa tta aca atg gaa 2160

Lys Glu Leu Asp Ala Ser Lys Glu Leu Ser Lys Lys Leu Thr Met Glu

705 710 715 720

aat aat ctg ctt gac cag aag gtt caa agg ctt gaa aga gca aaa agt 2208

Asn Asn Leu Leu Asp Gln Lys Val Gln Arg Leu Glu Arg Ala Lys Ser

725 730 735

gaa gag aaa agt aat atg gaa aga gtt tat gag gat gaa tgt tgc aag 2256

Glu Glu Lys Ser Asn Met Glu Arg Val Tyr Glu Asp Glu Cys Cys Lys

740 745 750

ctg aaa tct cgt att gct gaa ttg gag caa aaa ctg gaa agc aga aca 2304

Leu Lys Ser Arg Ile Ala Glu Leu Glu Gln Lys Leu Glu Ser Arg Thr

755 760 765

cgt tcc ctg aat gtt act gaa tcg act ctt gcc tta aga aat gct gag 2352

Arg Ser Leu Asn Val Thr Glu Ser Thr Leu Ala Leu Arg Asn Ala Glu

770 775 780

gtg gat aca ttg caa aac agt ctc aaa gaa ctt gac gag tta cga gag 2400

Val Asp Thr Leu Gln Asn Ser Leu Lys Glu Leu Asp Glu Leu Arg Glu

785 790 795 800

ttc aaa gcg gat gtg gac aga aaa aac caa cag act gct gag att ctt 2448

Phe Lys Ala Asp Val Asp Arg Lys Asn Gln Gln Thr Ala Glu Ile Leu

805 810 815

aaa agg caa gga gca caa ttg att gag ctt gaa aat ctt tat aag caa 2496

Lys Arg Gln Gly Ala Gln Leu Ile Glu Leu Glu Asn Leu Tyr Lys Gln

820 825 830

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Glu Gln Val Leu Arg Lys Arg Tyr Tyr Asn Thr Ile Glu Asp Met Lys

835 840 845

gga aaa ata aga gtt ttt tgt cgt ctg cgt cct cta aat gat aag gag 2592

Gly Lys Ile Arg Val Phe Cys Arg Leu Arg Pro Leu Asn Asp Lys Glu

850 855 860

ctc att gaa aag gac aag aat att gtt tgc agc cct gat gag ttt aca 2640

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865 870 875 880

gtt gca cat cca tgg aaa gat gac aag tca aaa caa cat ata tat gac 2688

Val Ala His Pro Trp Lys Asp Asp Lys Ser Lys Gln His Ile Tyr Asp

885 890 895

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Arg Val Phe Asp Ala Asn Thr Thr Gln Glu Glu Val Phe Glu Asp Thr

900 905 910

aag tat cta gtt caa tcg gcc gtt gat gga tat aat gtt tgt ata ttt 2784

Lys Tyr Leu Val Gln Ser Ala Val Asp Gly Tyr Asn Val Cys Ile Phe

915 920 925

gct tat ggg caa act ggt tct gga aaa act ttt aca att tat gga tct 2832

Ala Tyr Gly Gln Thr Gly Ser Gly Lys Thr Phe Thr Ile Tyr Gly Ser

930 935 940

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Glu Asn Asn Pro Gly Leu Thr Pro Arg Ala Thr Ser Glu Leu Phe Arg

945 950 955 960

gtg ata aag cgt gat ggt cac aaa tat tca ttt tct ttg aag gca tat 2928

Val Ile Lys Arg Asp Gly His Lys Tyr Ser Phe Ser Leu Lys Ala Tyr

965 970 975

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Met Val Glu Leu Tyr Gln Asp Asn Leu Val Asp Leu Leu Leu Ala Lys

980 985 990

aac gca aca cac caa aaa ttg gaa ata aaa aag gat tcc aag ggg gtt 3024

Asn Ala Thr His Gln Lys Leu Glu Ile Lys Lys Asp Ser Lys Gly Val

995 1000 1005

gtt act gtt gaa aat gtg aca gtt gtg aac att tca agt ttt gaa 3069

Val Thr Val Glu Asn Val Thr Val Val Asn Ile Ser Ser Phe Glu

1010 1015 1020

gaa ctg agg gct ata att tta aga ggt tcc gag aga aga cac acc 3114

Glu Leu Arg Ala Ile Ile Leu Arg Gly Ser Glu Arg Arg His Thr

1025 1030 1035

gct gga aca aat atg aat gtt gag agc tca agg tct cat tta att 3159

Ala Gly Thr Asn Met Asn Val Glu Ser Ser Arg Ser His Leu Ile

1040 1045 1050

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Leu Ser Ile Ile Ile Glu Ser Thr Asn Leu Gln Thr Gln Ser Tyr

1055 1060 1065

gca aga gga aag cta agt ttc gtg gac ctt gct ggt tct gag agg 3249

Ala Arg Gly Lys Leu Ser Phe Val Asp Leu Ala Gly Ser Glu Arg

1070 1075 1080

gtg aaa aag tcc ggc tca gca gga aaa caa ctg aaa gaa gct caa 3294

Val Lys Lys Ser Gly Ser Ala Gly Lys Gln Leu Lys Glu Ala Gln

1085 1090 1095

agc atc aat aag tct ctt tct gca ttg gct gat gtg att ggg gct 3339

Ser Ile Asn Lys Ser Leu Ser Ala Leu Ala Asp Val Ile Gly Ala

1100 1105 1110

tta tct tct gat gga caa cat ata cct tat cgg aac cat aag ttg 3384

Leu Ser Ser Asp Gly Gln His Ile Pro Tyr Arg Asn His Lys Leu

1115 1120 1125

aca atg ctg atg agt gat tct ctt gga ggc aat gcg aaa acc ttg 3429

Thr Met Leu Met Ser Asp Ser Leu Gly Gly Asn Ala Lys Thr Leu

1130 1135 1140

atg ttt gtg aat gtc tca cca gca gag tcc aac ctg gag gag act 3474

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1145 1150 1155

tac aat tca ctc atg tat gct tca cga gtg cgt tgc att gtc aat 3519

Tyr Asn Ser Leu Met Tyr Ala Ser Arg Val Arg Cys Ile Val Asn

1160 1165 1170

gat acg agc aag cat gtt gcc cca aag gaa atc atg agg ttg aag 3564

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1175 1180 1185

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Lys Leu Ile Ala Tyr Trp Lys Glu Gln Ala Gly Lys Arg Ser Glu

1190 1195 1200

gac gac gac ctg gag gaa ata cag gaa gag agg aca cca aag gag 3654

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<210>32

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<213>Oryza sativa

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1 5 10 15

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Asp Leu Val Ser Arg Ser Ile Lys Leu Phe His Val Ile Leu Lys Tyr

85 90 95

Met Gly Ile Asp Ser Pro Ala Ile Ile Ser Leu Asp Glu Arg Ile Glu

100 105 110

Leu Val Ala Lys Leu Tyr Lys His Thr Leu Lys Arg Ser Glu Leu Arg

115 120 125

Asp Glu Leu Phe Ala Gln Ile Ser Lys Gln Thr Arg Asn Asn Pro Asp

130 135 140

Arg Ala Trp Leu Ile Arg Ala Trp Glu Leu Met Tyr Leu Cys Ala Ser

145 150 155 160

Ser Met Pro Pro Ser Lys Asp Ile Gly Ala Tyr Leu Ser Glu Tyr Val

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His Tyr Ile Ala His Gly Ala Thr Thr Asp Ser Asp Val Arg Val Leu

180 185 190

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195 200 205

Arg Val Thr Ile Pro Ala Arg Glu Glu Ile Glu Ala Leu Leu Ser Ser

210 215 220

Arg Lys Leu Thr Thr Ile Val Phe Phe Leu Asp Glu Thr Phe Glu Glu

225 230 235 240

Ile Thr Tyr Asp Met Ala Thr Thr Val Ala Asp Ala Val Glu Glu Leu

245 250 255

Ala Gly Ile Ile Lys Leu Ser Val Tyr Ser Ser Phe Ser Leu Phe Glu

260 265 270

Cys Arg Lys Val Val Asn Gly Ser Lys Ser Ser Asp Val Gly Asn Glu

275 280 285

Glu Tyr Ile Gly Leu Asp Asp Asn Lys Tyr Ile Gly Asp Leu Leu Ser

290 295 300

Glu Phe Lys Ala Ala Lys Asp Arg Asn Lys Gly Glu Ile Leu His Cys

305 310 315 320

Lys Leu Val Phe Lys Lys Arg Leu Phe Arg Glu Ser Asp Glu Ala Ile

325 330 335

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340 345 350

Tyr Ile Leu Gly Asn Tyr Pro Val Gly Arg Asp Asp Ala Ala Gln Leu

355 360 365

Ser Ala Leu Gln Ile Leu Val Glu Ile Gly Phe Val Asp Asn Pro Glu

370 375 380

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Val Ala Ile Thr Arg Ala Lys Arg Asp Trp Glu Leu Asp Ile Val Ser

405 410 415

Arg Tyr Gln Leu Met Glu His Leu Ser Lys Asp Asp Ala Arg Gln Gln

420 425 430

Phe Leu Arg Ile Leu Arg Thr Leu Pro Tyr Gly Asn Ser Val Phe Phe

435 440 445

Ser Val Arg Lys Ile Asp Asp Pro Ile Gly Leu Leu Pro Gly Arg Ile

450 455 460

Ile Leu Gly Ile Asn Lys Arg Gly Val His Phe Phe Arg Pro Val Pro

465 470 475 480

Lys Glu Tyr Leu His Ser Ala Glu Leu Arg Asp Ile Met Gln Phe Gly

485 490 495

Ser Ser Asn Thr Ala Val Phe Phe Lys Met Arg Val Ala Gly Val Leu

500 505 510

His Ile Phe Gln Phe Glu Thr Lys Gln Gly Glu Glu Ile Cys Val Ala

515 520 525

Leu Gln Thr His Ile Asn Asp Val Met Leu Arg Arg Tyr Ser Lys Ala

530 535 540

Arg Ser Ala Thr Ser Ala Val Ser Gln Asn Asp Val Ser Gln Thr Tyr

545 550 555 560

Lys Pro Pro Asn Ile Glu Ile Tyr Glu Lys Arg Val Gln Glu Leu Ser

565 570 575

Lys Ala Val Glu Glu Ser Glu Arg Lys Ala Asp Leu Leu Asn Glu Glu

580 585 590

Leu Gln Lys Lys Thr Lys Gln Glu Arg Asp Met Gln Lys Glu Leu Glu

595 600 605

Gly Leu Arg Asp Thr Leu Gln Ser Glu Arg Gln Ser Ile Lys Glu Val

610 615 620

Thr Asn Asp Leu Asp Lys Leu Lys Ser Leu Cys Asp Glu Lys Asp Ser

625 630 635 640

Ser Leu Gln Ala Ser Leu Met Glu Lys Thr Arg Leu Glu Thr Arg Leu

645 650 655

Lys Ser Gly Gln Gly Gln Glu Ser Ser Asn Arg Thr Gly Val Ser Gly

660 665 670

Asn His Phe Glu Arg Asp Thr Leu Pro Thr Val Gly Thr Val Asn Asn

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Gly Leu Asp Gly Asp Asn Ile Asp Leu Arg Ser Arg His Gln Arg Lys

290 295 300

atc atg 918

Ile Met

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Leu Ser Thr Gln Val Leu Lys Thr Asn Met Arg Ser Ser Gly Asp Gln

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Asn Thr Val Arg Thr Val Lys Asp Met Glu Leu Gln Lys Leu His Gly

50 55 60

Thr Ile Lys Ala Leu Gln Lys Val Val Thr Asp Thr Ala Val Leu Leu

65 70 75 80

Asp Gln Glu Arg Leu Asp Phe Asn Ala Asn Leu Gln Glu Ala Arg Lys

85 90 95

Gln Ile Glu Val Leu Lys Leu Lys Glu Ile Leu Asp Asp Asp Leu Ile

100 105 110

Glu Met Asn Tyr Glu Gln Met Leu Lys Asp Ile Gln Leu Asp Leu Ile

115 120 125

Gln Ile Ser Ser Gly Asn Lys Thr Gly Ser Leu Gly Gln Ala Asn Lys

130 135 140

Thr Val Ala Gln Ala Asn Glu Lys Met Leu Asp Ser His Gly Ile Val

145 150 155 160

Gly Ala Ser Ser Ser His Val Arg Asn Asp Leu Arg Pro Pro Gln Ser

165 170 175

Glu Ser Phe Glu Arg Asp Asn Tyr Lys Arg Pro Pro Ser Glu Leu Met

180 185 190

Val Val Lys Glu Leu Ser Ile Asp Lys Gln Glu Leu Pro Arg Ser Ile

195 200 205

Thr Thr Glu Pro His Gln Glu Trp Lys Asn Lys Val Ile Glu Arg Leu

210 215 220

Ala Ser Asp Ala Gln Arg Leu Asn Ala Leu Gln Ser Ser Ile Gln Glu

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Leu Lys Thr Asn Thr Glu Ala Ser Glu Gly Leu Glu Leu Glu Ser Val

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Arg Tyr Gln Ile Arg Glu Ala Glu Gly Phe Ile Thr Gln Leu Ile Asp

260 265 270

Ser Asn Gly Lys Leu Ser Lys Lys Ala Glu Glu Phe Thr Ser Glu Asp

275 280 285

Gly Leu Asp Gly Asp Asn Ile Asp Leu Arg Ser Arg His Gln Arg Lys

290 295 300

Ile Met

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gat agt gct atg gac cac aag tat ggg caa aaa gat ggt gct cct gat 48

Asp Ser Ala Met Asp His Lys Tyr Gly Gln Lys Asp Gly Ala Pro Asp

1 5 10 15

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20 25 30

gct gct gat gca att att gat gca ctt gac act gcc gag gaa gaa gta 144

Ala Ala Asp Ala Ile Ile Asp Ala Leu Asp Thr Ala Glu Glu Glu Val

35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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Val Leu Asn Val Val Ser Asn Val Arg Pro Asn Asp Leu Glu Gln Ala

85 90 95

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Leu Leu Ser Leu Pro Phe Ser Asp Ala Leu Lys Ile Met Ser Tyr Leu

100 105 110

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Lys Glu Trp Ser Met Val Pro Leu Lys Val Glu Leu Val Cys Arg Val

115 120 125

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Cys Leu Val Leu Leu Gln Thr His His Ser Gln Leu Thr Thr Thr Pro

130 135 140

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145 150 155 160

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Val Lys Glu Cys Lys Asp Ala Ile Gly Phe Asn Leu Ala Ala Met Asp

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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Asp Arg Ser Asp Gly Ala Glu Lys Arg Lys Lys Lys Lys Arg Arg Pro

210 215 220

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Ala Ala Asp Ala Ile Ile Asp Ala Leu Asp Thr Ala Glu Glu Glu Val

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Lys Arg Leu Asp Gln His Gln Glu Gly Gln Asn Asn Gly Asn Gly Thr

50 55 60

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65 70 75 80

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Leu Leu Ser Leu Pro Phe Ser Asp Ala Leu Lys Ile Met Ser Tyr Leu

100 105 110

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Ser Ala Arg Ser Ile Leu Thr Glu Leu Lys Gly Ile Leu Tyr Ser Arg

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Val Lys Glu Cys Lys Asp Ala Ile Gly Phe Asn Leu Ala Ala Met Asp

165 170 175

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180 185 190

Ala Arg Ala Lys Leu Met Glu Ile Arg Gln Glu Gln Ser Arg Arg Ser

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cta cta gag gaa agc acg tac gcg aaa ggc ttg gct tcg gct gcg gga 48

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

tcg taa 438

Ser

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Arg Arg Ala Asn Ser Gly Leu Arg Gly Thr Arg Arg Asp Ser Ile Ser

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Arg Arg His Glu Pro Ala Pro Arg Arg Asp Asn Asn Ala Gly Tyr Glu

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Arg Glu Lys Ala Leu Glu Ala Val Leu Met Glu Lys Glu Gln Lys Glu

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Ser

145

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1 5 10 15

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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Arg Leu Lys Arg Glu Asn Leu Lys Lys Glu Gly Pro Asn Pro Trp His

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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Arg Ile Lys Ser Asp Val Phe Pro Gly Gln Gln Asp

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Ser Ala Arg Gln Ile Ala Ser Lys Asp Ala Glu Ile Ala Phe Leu Asn

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Gly Ser Asn Glu Asp Ile Phe Ile Asp Pro Thr Val Leu Lys His Met

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Asp Arg Asp Glu Leu Val Ala His Phe Asn Lys Met Met Asn Gln Met

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Arg Leu Lys Arg Glu Asn Leu Lys Lys Glu Gly Pro Asn Pro Trp His

165 170 175

Leu Arg Asn Asn Lys Glu Phe Glu Leu Met Arg Lys Lys Ile Trp Glu

180 185 190

Val Ile Thr Lys Leu Asp Glu Val Leu Val Glu Asn Lys Arg Thr Ile

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tct cct ctc ctc tcc tcc tcc cct tcc acc cca cgc gcc ccg cac cca 48

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20 25 30

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35 40 45

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65 70 75 80

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Glu Glu Lys Ile Ser Glu Leu Asp Glu Ser Gln Ser Gln Leu Met Gly

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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Ala Leu Asn Ser Glu Ile Glu Gln Leu Arg Ser Asp Phe Gln Glu Leu

130 135 140

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Arg Thr Thr Leu Lys Lys Gln Gln Glu Asp Val Ser Asn Ser Leu Lys

145 150 155 160

aat ttg ggg cta caa gat gct act gac aat gat ggg aac aaa gga agt g 529

Asn Leu Gly Leu Gln Asp Ala Thr Asp Asn Asp Gly Asn Lys Gly Ser

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Pro Thr Arg Arg Ala Leu Thr Leu Thr Leu Thr Leu Thr Leu Leu Leu

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Ser Leu Ala Met Ser Glu Pro Ala Ser Pro Pro Pro Ala Met Pro Glu

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Asp Ala Ala Pro Pro Gln Pro Gln Pro Glu Pro Ala Val Pro Ala Gly

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Glu Glu Ala Ala Pro Ser Leu Glu Arg Lys Glu Glu Leu Leu Pro Val

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Glu Glu Lys Ile Ser Glu Leu Asp Glu Ser Gln Ser Gln Leu Met Gly

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Arg Thr Thr Leu Lys Lys Gln Gln Glu Asp Val Ser Asn Ser Leu Lys

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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gat taa 342

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<212>PRT

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Met Lys Ser Arg Leu Ala Ala Thr Tyr Pro Asp Ala Phe Pro Thr Gly

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Asp

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

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20 25 30

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35 40 45

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Leu Thr His Phe Asn Glu Tyr Ser Glu Gln Cys Phe Ala Glu Val Ser

50 55 60

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65 70 75 80

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Leu Asp His Ile Phe Leu Lys Leu Arg Ser Met Lys Ser Arg Leu Ala

85 90 95

gca aca tat cca gat gct ttt ccc gat ggt gca atg gca aaa acg atg 336

Ala Thr Tyr Pro Asp Ala Phe Pro Asp Gly Ala Met Ala Lys Thr Met

100 105 110

gac caa aga ccg gac ctt gaa agt ccg ctt gat taa 372

Asp Gln Arg Pro Asp Leu Glu Ser Pro Leu Asp

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<210>52

<211>123

<212>PRT

<213>Oryza sativa

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Met Glu Lys Ser Pro Pro Glu Thr Ala Ala Ala Ala Ala Glu Val Glu

1 5 10 15

Ala Arg Phe Arg Ser Leu Val Asp Thr Gly Asp Ile Gly Ala Ile Arg

20 25 30

Gln Thr Gln His Leu Ile Leu Gly Arg Leu Gln Asp Ser Asn Ala Val

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Leu Thr His Phe Asn Glu Tyr Ser Glu Gln Cys Phe Ala Glu Val Ser

50 55 60

Asn Asp Phe Ala Ser Lys Thr Arg Leu Leu Lys Ser Met Lys Asp Asp

65 70 75 80

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Ala Thr Tyr Pro Asp Ala Phe Pro Asp Gly Ala Met Ala Lys Thr Met

100 105 110

Asp Gln Arg Pro Asp Leu Glu Ser Pro Leu Asp

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<211>510

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

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<400>53

atg cag ggg gag gtg gat cag ccg atg cag atg gtg ctg cgg gtg aag 48

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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Glu Gln Ile Glu Arg Lys Lys Met Glu Val Arg Glu Lys Val Phe Ala

50 55 60

cag ctc ggc cgc gtc gag gag gag tcc aag cgc ctt gcc ttc atc cga 240

Gln Leu Gly Arg Val Glu Glu Glu Ser Lys Arg Leu Ala Phe Ile Arg

65 70 75 80

cag gaa ctg gaa ggg atg gcg gat cca acc agg aag gag gtg gag gtg 288

Gln Glu Leu Glu Gly Met Ala Asp Pro Thr Arg Lys Glu Val Glu Val

85 90 95

atc agg aag agg atc gac gtg gtg aac cgt cag ctc aag cct ctc ggc 336

Ile Arg Lys Arg Ile Asp Val Val Asn Arg Gln Leu Lys Pro Leu Gly

100 105 110

aaa acc tgc gtc aag aag gag aag gaa tac aaa gaa atc ctg gag gcg 384

Lys Thr Cys Val Lys Lys Glu Lys Glu Tyr Lys Glu Ile Leu Glu Ala

115 120 125

tac aac gag aag aac aag gag aag gca ctg ctt gta aac agg cta att 432

Tyr Asn Glu Lys Asn Lys Glu Lys Ala Leu Leu Val Asn Arg Leu Ile

130 135 140

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Glu Leu Val Ser Glu Ser Glu Arg Met Arg Met Lys Lys Leu Glu Glu

145 150 155 160

ctg aac aag acg gtc gat tca ctc tac tag 510

Leu Asn Lys Thr Val Asp Ser Leu Tyr

165

<210>54

<211>169

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>54

Met Gln Gly Glu Val Asp Gln Pro Met Gln Met Val Leu Arg Val Lys

1 5 10 15

His Pro Ser Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Glu Glu Ala

20 25 30

Gly Glu Ala Ser Ser Arg Ser Ala Leu Ser Val Phe Lys Ala Lys Glu

35 40 45

Glu Gln Ile Glu Arg Lys Lys Met Glu Val Arg Glu Lys Val Phe Ala

50 55 60

Gln Leu Gly Arg Val Glu Glu Glu Ser Lys Arg Leu Ala Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Glu Leu Glu Gly Met Ala Asp Pro Thr Arg Lys Glu Val Glu Val

85 90 95

Ile Arg Lys Arg Ile Asp Val Val Asn Ang Gln Leu Lys Pro Leu Gly

100 105 110

Lys Thr Cys Val Lys Lys Glu Lys Glu Tyr Lys Glu Ile Leu Glu Ala

115 120 125

Tyr Asn Glu Lys Asn Lys Glu Lys Ala Leu Leu Val Asn Arg Leu Ile

130 135 140

Glu Leu Val Ser Glu Ser Glu Arg Met Arg Met Lys Lys Leu Glu Glu

145 150 155 160

Leu Asn Lys Thr Val Asp Ser Leu Tyr

165

<210>55

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1008)

<400>55

atg agc tcc ggc gcc gcc tcg ccc ccg ccg ccg ccg ccc gcc gcc gcg 48

Met Ser Ser Gly Ala Ala Ser Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ala

1 5 10 15

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Glu Asp Gly Arg Val Thr Ser His Val Asp Pro Phe Leu Val Glu Ala

20 25 30

ctc gac aac cct cgc cac cgc ctc atg gtt ttg cgt atg gca atg gat 144

Leu Asp Asn Pro Arg His Arg Leu Met Val Leu Arg Met Ala Met Asp

35 40 45

ata cag aaa ttt atg cag aat cct caa ctg cat gaa ttc gaa ttc cag 192

Ile Gln Lys Phe Met Gln Asn Pro Gln Leu His Glu Phe Glu Phe Gln

50 55 60

cat ttt cca act tct tat ctc cgc tgt gct gct cat cgt gtt gca caa 240

His Phe Pro Thr Ser Tyr Leu Arg Cys Ala Ala His Arg Val Ala Gln

65 70 75 80

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His Tyr Gly Leu Glu Thr Thr Val Ala Asp Ser Leu Val Asp Gly Ser

85 90 95

gtt agc aag ata gtt gca aag aaa aca tct gaa agc aaa ctt cca gtt 336

Val Ser Lys Ile Val Ala Lys Lys Thr Ser Glu Ser Lys Leu Pro Val

100 105 110

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Ile Ala Leu Ser Glu Val Pro Ser Lys Gln Ala Arg Asn Glu His Glu

115 120 125

gct gca gag aag ctt aag ttt gtt att tgt cca agg ccc aag gct ttc 432

Ala Ala Glu Lys Leu Lys Phe Val Ile Cys Pro Arg Pro Lys Ala Phe

130 135 140

caa aat ggt gca ggt gat gcc ggt gcc aag aac aat gca gca aga act 480

Gln Asn Gly Ala Gly Asp Ala Gly Ala Lys Asn Asn Ala Ala Arg Thr

145 150 155 160

gtt gaa gag agg ata gag gaa tac aac aaa gca cga gca cgc att ttc 528

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165 170 175

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Asn Gly Ser Ile Ser Asp Ile Glu Gly Thr Ser Asp Leu Gly Ala Leu

180 185 190

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195 200 205

aat aag gtg aac aca atg aac agc cgt tcc aga gtt gct gtt ttt aag 672

Asn Lys Val Asn Thr Met Asn Ser Arg Ser Arg Val Ala Val Phe Lys

210 215 220

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225 230 235 240

agg tat gtt agg ggc cca gtg cac gac ttc aat gtg agt cct ggt ggc 768

Arg Tyr Val Arg Gly Pro Val His Asp Phe Asn Val Ser Pro Gly Gly

245 250 255

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260 265 270

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Gln Ser Ala Asr Met Ser Arg Asn Gln Pro Ser Val Tyr Phe Gly Gln

275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

cat atg att tct cag gtt ccg gtt tac cag tcc ttc aac cat ggc tga 1008

His Met Ile Ser Gln Val Pro Val Tyr Gln Ser Phe Asn His Gly

325 330 335

<210>56

<211>335

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>56

Met Ser Ser Gly Ala Ala Ser Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ala

1 5 10 15

Glu Asp Gly Arg Val Thr Ser His Val Asp Pro Phe Leu Val Glu Ala

20 25 30

Leu Asp Asn Pro Arg His Arg Leu Met Val Leu Arg Met Ala Met Asp

35 40 45

Ile Gln Lys Phe Met Gln Asn Pro Gln Leu His Glu Phe Glu Phe Gln

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

Val Ser Lys Ile Val Ala Lys Lys Thr Ser Glu Ser Lys Leu Pro Val

100 105 110

Ile Ala Leu Ser Glu Val Pro Ser Lys Gln Ala Arg Asn Glu His Glu

115 120 125

Ala Ala Glu Lys Leu Lys Phe Val Ile Cys Pro Arg Pro Lys Ala Phe

130 135 140

Gln Asn Gly Ala Gly Asp Ala Gly Ala Lys Asn Asn Ala Ala Arg Thr

145 150 155 160

Val Glu Glu Arg Ile Glu Glu Tyr Asn Lys Ala Arg Ala Arg Ile Phe

165 170 175

Asn Gly Ser Ile Ser Asp Ile Glu Gly Thr Ser Asp Leu Gly Ala Leu

180 185 190

Ser Val Ala Arg Asp Glu Pro Ile Asn Val Glu Pro Pro Val Asp Glu

195 200 205

Asn Lys Val Asn Thr Met Asn Ser Arg Ser Arg Val Ala Val Phe Lys

210 215 220

Asp Thr Glu Lys Asp Arg Ser Asp Pro Asp Tyr Asp Arg Asn Tyr Lys

225 230 235 240

Arg Tyr Val Arg Gly Pro Val His Asp Phe Asn Val Ser Pro Gly Gly

245 250 255

Phe Asn Phe Val Val Pro Gln Phe Met Gln Tyr Gly Val Gly Phe Met

260 265 270

Gln Ser Ala Asn Met Ser Arg Asn Gln Pro Ser Val Tyr Phe Gly Gln

275 280 285

Pro Asp Leu Ser Met Gly Ser Ser Ser Gly Thr Ala Val Tyr Pro Gln

290 295 300

Trp Pro Thr Pro Ala Met Ile Tyr Pro His Cys Tyr Asp Asn Leu Gly

305 310 315 320

His Met Ile Ser Gln Val Pro Val Tyr Gln Ser Phe Asn His Gly

325 330 335

<210>57

<211>837

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(837)

<400>57

cac gcg tcc gat ggt cga aca cag cta gct agc tgg gct agg atc gcc 48

His Ala Ser Asp Gly Arg Thr Gln Leu Ala Ser Trp Ala Arg Ile Ala

1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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Glu Ser Phe Cys Ala Thr Pro Glu Leu Trp Glu Pro Trp Pro Leu Val

260 265 270

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Glu Trp Asn Ala Val Ala

275

<210>58

<211>278

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>58

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1 5 10 15

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Met Pro Pro Pro Ala Pro Val Val Pro Pro Gln Leu Cys Met Pro Ala

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Met Met Ala Asp Glu Gln Tyr Met Asp Leu Gly Gly Gly Gly Ala Ala

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Ala Ala Pro Gly Arg Gly Gly Ala Gly Glu Arg Lys Arg Arg Phe Thr

65 70 75 80

Glu Glu Gln Ile Arg Ser Leu Glu Ser Met Phe His Ala His His Ala

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Lys Leu Glu Pro Arg Glu Lys Ala Glu Leu Ala Arg Glu Leu Gly Leu

100 105 110

Gln Pro Arg Gln Val Ala Ile Trp Phe Gln Asn Lys Arg Ala Arg Trp

115 120 125

Arg Ser Lys Gln Leu Glu His Asp Tyr Ala Ala Leu Arg Ser Lys Tyr

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Asp Ala Leu His Ser Arg Val Glu Ser Leu Lys Gln Glu Lys Leu Ala

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Leu Thr Val Gln Leu His Glu Leu Arg Glu Arg Leu Arg Glu Arg Glu

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Glu Arg Ser Gly Asn Gly Gly Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ser Ser Ser

180 185 190

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Arg Asn Ala Ala Ala Gly Cys Leu Asp Leu Glu Pro Pro Glu Ser Cys

210 215 220

Val Leu Gly Gly Ala Thr Cys Ala Thr Pro Ala Asp Val Ser Val Glu

225 230 235 240

Ser Asp Gln Cys Asp Asp Gln Leu Asp Tyr Asp Glu Gly Leu Phe Pro

245 250 255

Glu Ser Phe Cys Ala Thr Pro Glu Leu Trp Glu Pro Trp Pro Leu Val

260 265 270

Glu Trp Asn Ala Val Ala

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<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(726)

<400>59

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Met Gly Arg Gly Lys Ile Val Ile Arg Arg Ile Asp Asn Ser Thr Ser

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20 25 30

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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Leu Glu Ile Ser Leu Arg Asn Ile Arg Met Arg Lys Asp Asn Leu Leu

130 135 140

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145 150 155 160

gaa aac atc gaa ctt tct aga agc cta aat gtc atg tcg caa caa aaa 528

Glu Asn Ile Glu Leu Ser Arg Ser Leu Asn Val Met Ser Gln Gln Lys

165 170 175

ttg gaa ctg tat aac aag ctt cag gcc tgt gaa cag aga ggt gcc aca 576

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180 185 190

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Asp Ala Asn Glu Ser Ser Ser Thr Pro Tyr Ser Phe Arg Ile Ile Gln

195 200 205

aat gct aat atg cct cct agt ctt gaa ttg agc caa tca cag caa aga 672

Asn Ala Asn Met Pro Pro Ser Leu Glu Leu Ser Gln Ser Gln Gln Arg

210 215 220

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Glu Gly Glu Cys Ser Lys Thr Ala Ala Pro Glu Leu Gly Leu His Leu

225 230 235 240

cct taa 726

Pro

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<211>241

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<220>

<221>misc feature

<222>(53)..(53)

<223>The′Xaa′at location 53 stands for Arg，Ser，or Thr.

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Ser Ser Thr Gly Xaa Leu Tyr Glu Phe Ser Ser Thr Asn Met Lys Thr

50 55 60

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Glu Leu Ser Gly Leu Gly Val Arg Asp Leu Gln Gly Leu Glu Asn Arg

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Glu Asn Ile Glu Leu Ser Arg Ser Leu Asn Val Met Ser Gln Gln Lys

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Pro

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<220>

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Ser Pro Thr Thr Val Ala His Phe Thr Gly Leu Asp Val Leu Ile Lys

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165 170 175

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Arg Glu Glu Thr Leu Pro Asp Gln Leu Lys Gly Phe Phe Gly Gln Thr

210 215 220

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Ala Gly Ala Leu Gln Gln Leu Pro Ala Pro Ile Arg Asp Ala Val Ser

225 230 235 240

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Glu Gly Ile Lys Leu Pro Leu Asn Gly Met Phe Gln Arg Leu Phe Met

245 250 255

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Ile Ser Tyr Leu Asp Glu Glu Ile Leu Ile Ile Arg Asp Ala Ser Gly

260 265 270

gca cct gat gtc cta aca aga ttg gaa ggg cca cag cca aat tca att 864

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275 280 285

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180 185 190

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195 200 205

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Glu Gly Ile Lys Leu Pro Leu Asn Gly Met Phe Gln Arg Leu Phe Met

245 250 255

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<220>

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Met Ser Ala Gln Ala Glu Leu Ser Arg Glu Glu Asn Val Tyr Met Ala

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35 40 45

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Arg Asn Leu Leu Ser Val Ala Tyr Lys Asn Val Ile Gly Ala Arg Arg

50 55 60

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Ala Ser Trp Arg Ile Ile Ser Ser Ile Glu Gln Lys Glu Glu Ser Arg

65 70 75 80

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115 120 125

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130 135 140

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<212>PRT

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65 70 75 80

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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<220>

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<213>Oryza sativa

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<400>67

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65 70 75 80

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85 90 95

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325 330 335

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180 185 190

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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325 330 335

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370 375 380

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Ala Phe Lys Pro Trp Ile Val Thr Leu Pro Leu Ser Gly Ser Pro Gly

115 120 125

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Ala Gln Leu His Val Thr Ile Gln Arg Val Val Gly Gly Gly Gly Gly

130 135 140

ggc ggc ggt ggg tgc ggt gac gac gcc agt gag aac ggc ggc gac gtg 480

Gly Gly Gly Gly Cys Gly Asp Asp Ala Ser Glu Asn Gly Gly Asp Val

145 150 155 160

tcg ccg gtg gtg gcg agg acg ccg ccg agg aag acg ctg cag agc cag 528

Ser Pro Val Val Ala Arg Thr Pro Pro Arg Lys Thr Leu Gln Ser Gln

165 170 175

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Leu Ser Arg Cys Glu Asp Glu Glu Ala Glu Lys Ala Arg Ala Ala Ala

180 185 190

gcg gcg gcg gat gcg atg agc cct atg caa gac gga ttg gtg ata aac 624

Ala Ala Ala Asp Ala Met Ser Pro Met Gln Asp Gly Leu Val Ile Asn

195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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Gly Ser Asp Gly Ser Ser Gly Arg Phe Thr Pro Lys Asn Asn Ala Ser

245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

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325 330 335

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Lys Gln Ile Val Lys Glu Ser Arg Arg Gly Gln Asp Leu Ser Lys Glu

340 345 350

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Val Gly Ser Leu Arg Asp Glu Arg Asp Ala Leu Arg Arg Glu Cys Glu

355 360 365

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Ala Leu Arg Gly Met Lys Lys Thr Ile His Asp Ala Asn Gly Ser Gly

370 375 380

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Lys Arg Leu Ser Ser Gly Glu Asp Pro Trp Ser Gln Ile Glu Glu Leu

385 390 395 400

aag caa gaa ctg ggc cat gag aag aat cta aat gga gat ctg cat tta 1248

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405 410 415

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Gln Leu Gln Lys Met Gln Glu Ser Asn Ser Glu Leu Leu Leu Ala Val

420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

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465 470 475 480

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485 490 495

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500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

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545 550 555 560

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Glu Gln Leu Arg Met Gln Tyr Glu Cys Ser Ala His Leu Ser Ile Ile

565 570 575

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580 585 590

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595 600 605

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610 615 620

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625 630 635 640

aag atg ttg tct tca caa gtt tcc tct gct ttc agc gca aat gaa cag 1968

Lys Met Leu Ser Ser Gln Val Ser Ser Ala Phe Ser Ala Asn Glu Gln

645 650 655

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Leu Leu Met Gln Ala Arg Lys Glu Ala Ala Glu Leu Gln Leu Gln Lys

660 665 670

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Gly Gln Leu Glu Glu Leu Leu Gln Lys Ala Gln Glu Asp Leu Gly Ser

675 680 685

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705 710 715 720

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Lys Ser Asp Glu Phe Gln Asn Gln Lys Arg Cys Asn Glu Ala Lys Leu

725 730 735

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Ser Val Leu Ser Glu Glu Ile Asp Gln Leu Lys Ala Lys Ile Glu Asn

740 745 750

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Leu Ser Asn Glu Arg Asp Asn Leu Phe Glu Glu Asn Glu Gln Lys Asp

755 760 765

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Lys Glu Leu Ala Ala Asn Cys Gln Lys Asp Met Phe Leu Gln Asp Arg

770 775 780

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caa gtg cag aca tat tta gag gag ata aac act tta aaa agt tca aag 2448

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820 825 830

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885 890 895

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900 905 910

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930 935 940

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945 950 955 960

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Ala Glu Val Glu Gly Glu Arg Gln Gln Leu Val Met Thr Val Arg Ala

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980

<210>78

<211>982

<212>PRT

<213>Oryza gativa

<400>78

Met Phe Lys Ser Ala Arg Trp Arg Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Lys

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Ala Lys Ala Val Phe Lys Leu Gln Phe His Ala Thr Gln Val Pro Glu

20 25 30

Val Gly Trp Glu Ala Met Met Val Val Val Thr Pro Arg Asp Ala Gly

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Gln Trp Pro Ala Pro Val Tyr Glu Ala Thr Lys Leu Pro Ser Ser Gly

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85 90 95

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Ala Phe Lys Pro Trp Ile Val Thr Leu Pro Leu Ser Gly Ser Pro Gly

115 120 125

Ala Gln Leu His Val Thr Ile Gln Arg Val Val Gly Gly Gly Gly Gly

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Gly Gly Gly Gly Cys Gly Asp Asp Ala Ser Glu Asn Gly Gly Asp Val

145 150 155 160

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180 185 190

Ala Ala Ala Asp Ala Met Ser Pro Met Gln Asp Gly Leu Val Ile Asn

195 200 205

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210 215 220

Val Asp His Leu His Asn Ser Asn Ser Phe Asp Ala Ile Ser Val Ser

225 230 235 240

Gly Ser Asp Gly Ser Ser Gly Arg Phe Thr Pro Lys Asn Asn Ala Ser

245 250 255

Met His Ser Thr Phe Leu Gln Glu Gly Thr Asn Thr Leu Ser Pro Leu

260 265 270

Arg Asn Thr Leu Thr Ser Ser Gly Asp Trp Ser Gly Ser Ser Ala Pro

275 280 285

Asp Ala Ser Thr Asp Gly Ser Thr Ser Asn Ser Gly Glu Ala Gly Leu

290 295 300

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305 310 315 320

Leu Thr Arg Lys Leu Asp Val Ser Asp Met Glu Leu Gln Thr Leu Arg

325 330 335

Lys Gln Ile Val Lys Glu Ser Arg Arg Gly Gln Asp Leu Ser Lys Glu

340 345 350

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355 360 365

Ala Leu Arg Gly Met Lys Lys Thr Ile His Asp Ala Asn Gly Ser Gly

370 375 380

Lys Arg Leu Ser Ser Gly Glu Asp Pro Trp Ser Gln Ile Glu Glu Leu

385 390 395 400

Lys Gln Glu Leu Gly His Glu Lys Asn Leu Asn Gly Asp Leu His Leu

405 410 415

Gln Leu Gln Lys Met Gln Glu Ser Asg Ser Glu Leu Leu Leu Ala Val

420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

Ala Leu Ser Asn Val His Asn Ala Gly His Lys Ile Asp Ile Ser Glu

465 470 475 480

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485 490 495

Ala Lys Thr Thr Asp Gly Ile Ala Thr Ser Glu Leu Gln Asn Lys Ile

500 505 510

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545 550 555 560

Glu Gln Leu Arg Met Gln Tyr Glu Cys Ser Ala His Leu Ser Ile Ile

565 570 575

Ser Asp Leu Glu Ala Asn Val Glu Ser Leu Glu Asn Glu Leu Gln Glu

580 585 590

Gln Ser Lys Arg Leu Glu Ala Asp Ile Gln Glu Val Met Arg Ala Lys

595 600 605

Val Glu Gln Glu Gln Arg Ala Ile Lys Ala Glu Glu Ser Leu Arg Lys

610 615 620

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Lys Met Leu Ser Ser Gln Val Ser Ser Ala Phe Ser Ala Asn Glu Gln

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Leu Leu Met Gln Ala Arg Lys Glu Ala Ala Glu Leu Gln Leu Gln Lys

660 665 670

Gly Gln Leu Glu Glu Leu Leu Gln Lys Ala Gln Glu Asp Leu Gly Ser

675 680 685

Ile Gln Glu Gln His Arg Val Lys Val Gln Gln Leu Leu Thr Leu Val

690 695 700

Asp Phe Lys Ser Lys Glu Thr Asp Arg Leu Val Met Glu Leu Lys Ser

705 710 715 720

Lys Ser Asp Glu Phe Gln Asn Gln Lys Arg Cys Asn Glu Ala Lys Leu

725 730 735

Ser Val Leu Ser Glu Glu Ile Asp Gln Leu Lys Ala Lys Ile Glu Asn

740 745 750

Leu Ser Asn Glu Arg Asp Asn Leu Phe Glu Glu Asn Glu Gln Lys Asp

755 760 765

Lys Glu Leu Ala Ala Asn Cys Gln Lys Asp Met Phe Leu Gln Asp Arg

770 775 780

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785 790 795 800

Gln Val Gln Thr Tyr Leu Glu Glu Ile Asn Thr Leu Lys Ser Ser Lys

805 810 815

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820 825 830

Leu Lys Phe Glu Tyr Asp Asn Leu Lys Ile Leu Met Ser Thr Asn Asp

835 840 845

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850 855 860

Leu Glu Ser Arg Glu Asp Val Lys Gln Asn Gly Val Lys Ser Asp Glu

865 870 875 880

Asp Asn His His Ala Thr Ser Lys Arg Ile Lys His Asp Asp Gly Thr

885 890 895

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900 905 910

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Leu Lys Asn Ser Leu Arg

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<220>

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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Leu Leu Ser Arg Asn Asp Val Glu Ser Leu Met Arg Leu Asp Pro Ala

260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

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Leu Ile Leu Leu Ala Ser Leu Ser Asp Ser Leu Glu Tyr Leu Ala Asp

325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

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370 375 380

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385 390 395 400

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405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

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465 470 475 480

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485 490 495

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500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

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545 550 555 560

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Ile Ser Gln Ile Leu Gly His

565

<210>80

<211>567

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<220>

<221>misc_feature

<222>(71)..(71)

<223>The′Xaa′at location 71 stands for Leu，or Phe.

<400>80

Trp Asn Pro Asp Ser Glu Ser Ser Gln Ala Thr Gly Gly Phe Thr Val

1 5 10 15

Ala Phe Ser Leu Ser Val Val Gln Ser Glu Cys Gln Gln Leu Leu Cys

20 25 30

Glu Ile Leu Arg Ala Thr Pro Glu Ala Ala Thr Ala Asp Ala Ala Val

35 40 45

Gln Thr Ala Arg Leu Ala Asn Lys Asp Pro Val Lys Glu Lys Arg Asp

50 55 60

Gly Ser Glu Gly Leu Ser Xaa Ala Phe Arg Ile Thr Asp Ala Ala Ile

65 70 75 80

Thr Ala Pro Asn Glu Gly Gln Gly Trp Arg Arg Asn Ser Thr Val Pro

85 90 95

Gln Glu Gly Tyr Gly Thr Ala Ser Val Ile Pro Asp Gln Gly Ile Phe

100 105 110

Leu Ala Ala Ser Val Tyr Arg Pro Val Phe Glu Phe Met Asn Lys Ile

115 120 125

Gly Leu Met Leu Pro Gln Lys Tyr Trp Gln Leu Gly Asn Asp Gly Leu

130 135 140

Leu Ala Phe Val Asn Asn Phe Leu Lys Glu His Phe Leu Pro Ala Ile

145 150 155 160

Phe Val Asp Tyr Arg Lys Cys Val Gln Gln Ala Ile Ser Ser Pro Ala

165 170 175

Ala Phe Arg Pro Arg Val His Ala Thr Ser Val Tyr Ser Pro Leu Val

180 185 190

Glu Asn Gly Arg Pro Val Leu Gln Gly Leu Leu Ala Val Asp Ile Ile

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210 215 220

Glu Leu Val Glu Tyr Val Arg Thr Phe Leu Glu Arg Thr His Glu Arg

225 230 235 240

Cys Arg Ala Ser Tyr Met Glu Ala Val Leu Glu Lys Gln Ser Tyr Ile

245 250 255

Leu Leu Ser Arg Asn Asp Val Glu Ser Leu Met Arg Leu Asp Pro Ala

260 265 270

Asn Leu Ser Leu Gln Asn Ser Phe Gly Gln Leu Asp His Ser Ile Pro

275 280 285

Asp Ala Glu Ala Val Glu Val Glu Ile Glu Leu Ser Asp Leu Leu Leu

290 295 300

Asp Met Cys Pro Ile Lys Gln Glu Asn Leu Ile His Asp Asp Gln Lys

305 310 315 320

Leu Ile Leu Leu Ala Ser Leu Ser Asp Ser Leu Glu Tyr Leu Ala Asp

325 330 335

Ser Val Glu Arg Leu Gly Glu Ser Phe Ile Asn Ser Ser Thr Met Leu

340 345 350

Glu Asn Lys Asn His Ile His Gln Gly Arg His Thr Arg Ser Thr Ser

355 360 365

Ala Ile Pro Lys Ser Leu Ala Ser Leu Ala Asn Glu Tyr Arg Arg Leu

370 375 380

Ala Ile Asp Cys Val Arg Val Leu Arg Leu Glu Met Gln Leu Glu Thr

385 390 395 400

Ile Tyr His Met Gln Glu Met Thr Lys Arg Glu Tyr Val Glu Asp Gln

405 410 415

Asp Ala Glu Asp Pro Asp Asp Phe Ile Ile Ser Leu Thr Thr Gln Ile

420 425 430

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435 440 445

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515 520 525

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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65 70 75 80

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130 135 140

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<213>Oryza sativa

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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195 200 205

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275 280 285

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290 295 300

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325 330 335

Gln Lys Leu Arg Ala Tyr Asn Leu Gln Asp Asp Gly His Asp Thr Val

340 345 350

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370 375 380

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<213>Oryza sativa

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<221>CDS

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275 280 285

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325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

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65 70 75 80

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Leu Lys Glu Ile Ala Gly Ser Ile Gln Ser Gln Val Ser Lys Ile Glu

165 170 175

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180 185 190

Leu Asn Ala Ile Asn Arg Lys Gln Thr Gly Ser Leu Ala Val Arg Asp

195 200 205

Leu Ser Asn Leu Val Lys Pro Glu Asp Met Val Thr Ser Glu His Leu

210 215 220

Val Thr Leu Leu Ala Val Val Pro Gln Tyr Ser Gln Lys Asp Trp Leu

225 230 235 240

Ser Ser Tyr Glu Ser Leu Asp Thr Phe Val Val Pro Arg Ser Ser Lys

245 250 255

Lys Leu Tyr Glu Asp Asn Glu Tyr Ala Leu Tyr Thr Val Thr Leu Phe

260 265 270

Ala Lys Val Val Asp Asn Phe Lys Val Arg Ala Arg Glu Lys Gly Phe

275 280 285

Gln Val Arg Asp Phe Glu Tyr Ser Ser Glu Ala Gln Glu Ser Arg Lys

290 295 300

Glu Glu Leu Glu Lys Leu Met Gln Asp Gln Glu Ala Met Arg Ala Ser

305 310 315 320

Leu Leu Gln Trp Cys Tyr Ala Ser Tyr Ser Glu Val Phe Ser Ser Trp

325 330 335

Met His Phe Cys Leu Val Arg Val Phe Val Glu Ser Ile Leu Arg Tyr

340 345 350

Gly Leu Pro Pro Ser Phe Leu Ser Ala Val Leu Ala Pro Ser Gln Lys

355 360 365

Gly Glu Lys Lys Val Arg Ser Ile Leu Arg Asn Ser Val Gly Asn Val

370 375 380

His Ser Ile Tyr Trp Lys Ser Glu Asp Asp Val Gly Val Ala Gly Leu

385 390 395 400

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aag tat gct gag cgt ggg ctt cgt tct ctt gct gtt gca aga cag gaa 48

Lys Tyr Ala Glu Arg Gly Leu Arg Ser Leu Ala Val Ala Arg Gln Glu

1 5 10 15

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Val Pro Glu Lys Ser Lys Glu Ser Ala Gly Gly Pro Trp Gln Phe Val

20 25 30

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Gly Leu Leu Pro Leu Phe Asp Pro Pro Arg His Asp Ser Ala Glu Thr

35 40 45

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Ile Arg Lys Ala Leu His Leu Gly Val Asn Val Lys Met Ile Thr Gly

50 55 60

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Asp Gln Leu Ala Ile Gly Lys Glu Thr Gly Arg Arg Leu Gly Met Gly

65 70 75 80

aca aac atg tat cct tca tcc gca ttg ctc gga caa aac aag gac gct 288

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85 90 95

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100 105 110

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Phe Ala Gly Val Phe Pro Glu His Lys Tyr Glu Ile Val Lys Arg Leu

115 120 125

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Gln Glu Lys Lys His Ile Val Gly Met Thr Gly Asp Gly Val Asn Asp

130 135 140

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Ala Pro Ala Leu Lys Lys Ala Asp Ile Gly Ile Ala Val Ala Asp Ala

145 150 155 160

ata gat gct gca aga agt gct tcc gac att gtg ctc act gag cca ggt 528

Ile Asp Ala Ala Arg Ser Ala Ser Asp Ile Val Leu Thr Glu Pro Gly

165 170 175

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Leu Ser Val Ile Ile Ser Ala Val Leu Thr Ser Arg Cys Ile Phe Gln

180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

acg atc tcg aag gac aga gtt aag cct tct ccc ttg cca gac agc tgg 768

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245 250 255

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Lys Leu Lys Glu Ile Phe Ala Thr Gly Ile Val Leu Gly Ser Tyr Leu

260 265 270

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275 280 285

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Phe Thr Asp Lys Phe Gly Val Arg Ser Ile Arg Asn Ser Glu His Glu

290 295 300

atg atg tct gca ctg tac ctc caa gtc agt att gtg agt cag gcc ctc 960

Met Met Ser Ala Leu Tyr Leu Gln Val Ser Ile Val Ser Gln Ala Leu

305 310 315 320

atc ttc gtc acc cgt tct cgc agc tgg tcc ttc atc gaa cgc cct ggt 1008

Ile Phe Val Thr Arg Ser Arg Ser Trp Ser Phe Ile Glu Arg Pro Gly

325 330 335

ctt ctc ttg gtc act gca ttc atg ctt gca caa ctg gtt gcg aca ttc 1056

Leu Leu Leu Val Thr Ala Phe Met Leu Ala Gln Leu Val Ala Thr Phe

340 345 350

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Leu Ala Val Tyr Ala Asn Trp Gly Phe Ala Arg Ile Lys Gly Ile Gly

355 360 365

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370 375 380

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Pro Leu Asp Ile Phe Lys Phe Phe Ile Arg Phe Val Leu Ser Gly Arg

385 390 395 400

gcc tgg gac aac ctc ctt gag aac aag att gca ttc acc acc aag aag 1248

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405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

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465 470 475 480

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485 490 495

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65 70 75 80

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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275 280 285

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325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

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370 375 380

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385 390 395 400

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405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

Asn Asp Lys Ser Ser Tyr Arg Glu Leu Ser Glu Ile Ala Glu Gln Ala

450 455 460

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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Leu Glu Arg Val Tyr Ser Arg Thr Lys Arg Pro Thr Asn Thr Met Ile

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Ser Ser Ile Val Gln Val Thr Ser Leu Pro Arg Lys Thr Ile Val Lys

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Trp Phe Glu Asp Arg Arg Glu Gln Asp Gly Val Pro Asp His Arg Val

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20 25 30

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ctg cag gac agg ctc agc aag ggg gcg tcc agc gga tcc agt agg ggc 288

Leu Gln Asp Arg Leu Ser Lys Gly Ala Ser Ser Gly Ser Ser Arg Gly

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

gtg ata cct gca atg caa gca gct gat gtt gcg tca tct cga gct ctt 480

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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Tyr Tyr Gly Thr Thr Leu Leu His Gly Gly Ala Glu Tyr Arg Ala Thr

580 585 590

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Leu Ile Val Tyr Glu Ile Phe Gly Gln Ser Tyr Arg Gly Ala Ile Ala

625 630 635 640

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660 665 670

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675 680 685

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Ala Ile Ala Asn Pro Met Phe Lys Leu Lys Gly Pro Ser Met Leu Gln

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115 120 125

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195 200 205

aga ggt caa ggt ggc att gac ttg tct aga atg atg cag caa atg atg 672

Arg Gly Gln Gly Gly Ile Asp Leu Ser Arg Met Met Gln Gln Met Met

210 215 220

cct gtt gta tcc caa gtt ctt ggt gga gct ggg gct cgt cct gct ggt 720

Pro Val Val Ser Gln Val Leu Gly Gly Ala Gly Ala Arg Pro Ala Gly

225 230 235 240

aca aat agt gga caa tcc aga ttg cag cct cgg cgc agt gac atg aga 768

Thr Asn Ser Gly Gln Ser Arg Leu Gln Pro Arg Arg Ser Asp Met Arg

245 250 255

gtg gat gat gct tca gat tat gga aat tct cag att gat cta cac caa 816

Val Asp Asp Ala Ser Asp Tyr Gly Asn Ser Gln Ile Asp Leu His Gln

260 265 270

gct cgt gaa cac att gag caa cat gac tcc ccc agg gat atc ttc ggt 864

Ala Arg Glu His Ile Glu Gln His Asp Ser Pro Arg Asp Ile Phe Gly

275 280 285

gcg gtc ctc gaa act gct gca cag gct tat ggt gaa gat gag agt att 912

Ala Val Leu Glu Thr Ala Ala Gln Ala Tyr Gly Glu Asp Glu Ser Ile

290 295 300

gag gac atg ctt gaa gag ctt gtc agt gac cca gaa ctt aca gat gac 960

Glu Asp Met Leu Glu Glu Leu Val Ser Asp Pro Glu Leu Thr Asp Asp

305 310 315 320

tsc ctg aaa ctt ctg ctc caa caa gtt cgc cag agg ata cag tcg gca 1008

Tyr Leu Lys Leu Leu Leu Gln Gln Val Arg Gln Arg Ile Gln Ser Ala

325 330 335

tct caa tcc ggg aac cag tct tga 1032

Ser Gln Ser Gly Asn Gln Ser

340

<210>108

<211>343

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>108

Ala Ser Glu Glu Ser Thr Thr Ala Asn Leu Val Gly Gln Ile Thr Thr

1 5 10 15

Thr Cys Thr Asp Asp Ile Ser Val Asn Arg Ser Ala Glu Asn Ser Ser

20 25 30

Gln Lys Asn Ile Pro Leu Asp Gly Val Ser Ala Gln Ser Ile Lys Pro

35 40 45

Ser Ala Ser Ser Arg Ser Glu Pro Val Gly Leu Gly Gly Gly Leu Gln

50 55 60

Pro Lys Arg Arg Ser Arg Thr Ala Lys Pro Pro Gly Ser Ser Ser Asp

65 70 75 80

Thr Gly Glu Val Val Asn Ser Ser Arg Ile Ser Asn Ser Gln Asn Ala

85 90 95

Val Ser Met Gly Gln Gln Val Leu Gln Ala Leu Ala Ser Gln Asn Thr

100 105 110

Asn Val Asn Arg Ser His Val Thr Asp Ser Pro Leu Pro Ser Thr Thr

115 120 125

Ser Gln Phe Ser Gly Gly Met Pro Pro Arg Arg Gln Gly Gly Glu Gly

130 135 140

Gln Val Asp Phe Gly Ser Met Ile Ser Ser Val Leu Asn Asn Pro Ala

145 150 155 160

Phe Gly Asn Leu Leu Ser Asn Val Ala Glu Gln Thr Gly Met Gly Ser

165 170 175

Ala Gly Asp Leu Arg Asn Met Val Glu Glu Cys Ala Gln Ser Pro Ala

180 185 190

Ile Met Asp Thr Met Ser Asn Leu Val Gln Asn Val Asp Gly Ser Gly

195 200 205

Arg Gly Gln Gly Gly Ile Asp Leu Ser Arg Met Met Gln Gln Met Met

210 215 220

Pro Val Val Ser Gln Val Leu Gly Gly Ala Gly Ala Arg Pro Ala Gly

225 230 235 240

Thr Asn Ser Gly Gln Ser Arg Leu Gln Pro Arg Arg Ser Asp Met Arg

245 250 255

Val Asp Asp Ala Ser Asp Tyr Gly Asn Ser Gln Ile Asp Leu His Gln

260 265 270

Ala Arg Glu His Ile Glu Gln His Asp Ser Pro Arg Asp Ile Phe Gly

275 280 285

Ala Val Leu Glu Thr Ala Ala Gln Ala Tyr Gly Glu Asp Glu Ser Ile

290 295 300

Glu Asp Met Leu Glu Glu Leu Val Ser Asp Pro Glu Leu Thr Asp Asp

305 310 315 320

Tyr Leu Lys Leu Leu Leu Gln Gln Val Arg Gln Arg Ile Gln Ser Ala

325 330 335

Ser Gln Ser Gly Asn Gln Ser

340

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(447)

<400>109

atg ggg ggg aag gag ctg agc gag gag cag gtg gcg tcg atg cgg gag 48

Met Gly Gly Lys Glu Leu Ser Glu Glu Gln Val Ala Ser Met Arg Glu

1 5 10 l5

gcg ttc tcc ctc ttc gac acc gac ggc gac ggc cgg atc gcg ccg tcg 96

Ala Phe Ser Leu Phe Asp Thr Asp Gly Asp Gly Arg Ile Ala Pro Ser

20 25 30

gag ctc ggc gtc ctg atg cgc tcc ctc ggc ggg aac ccc acc cag gcg 144

Glu Leu Gly Val Leu Met Arg Ser Leu Gly Gly Asn Pro Thr Gln Ala

35 40 45

cag ctc cgc gac atc gcc gcg cag gag aag ctc acc gcg ccc ttc gac 192

Gln Leu Arg Asp Ile Ala Ala Gln Glu Lys Leu Thr Ala Pro Phe Asp

50 55 60

ttc ccg cgc ttc ctc gac ctc atg cgc gcc cac ctc cgc ccc gag ccc 240

Phe Pro Arg Phe Leu Asp Leu Met Arg Ala His Leu Arg Pro Glu Pro

65 70 75 80

ttc gac cgc ccg ctc cgc gac gcc ttc cgc gtc ctc gac aag gac gcc 288

Phe Asp Arg Pro Leu Arg Asp Ala Phe Arg Val Leu Asp Lys Asp Ala

85 90 95

tcc ggc acc gtc tcc gtc gcc gat ctc cgc cac gtc ctc acc tcc atc 336

Ser Gly Thr Val Ser Val Ala Asp Leu Arg His Val Leu Thr Ser Ile

100 105 110

ggc gag aag ctc gag ccc cac gag ttc gac gag tgg atc cgc gag gtc 384

Gly Glu Lys Leu Glu Pro His Glu Phe Asp Glu Trp Ile Arg Glu Val

115 120 125

gac gtc gcc ccc gac ggc acc atc cgc tac gac gac ttc atc cgc cgc 432

Asp Val Ala Pro Asp Gly Thr Ile Arg Tyr Asp Asp Phe Ile Arg Arg

130 135 140

atc gtc gcc aaa taa 447

Ile Val Ala Lys

145

<210>110

<211>148

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>110

Met Gly Gly Lys Glu Leu Ser Glu Glu Gln Val Ala Ser Met Arg Glu

1 5 10 15

Ala Phe Ser Leu Phe Asp Thr Asp Gly Asp Gly Arg Ile Ala Pro Ser

20 25 30

Glu Leu Gly Val Leu Met Arg Ser Leu Gly Gly Asn Pro Thr Gln Ala

35 40 45

Gln Leu Arg Asp Ile Ala Ala Gln Glu Lys Leu Thr Ala Pro Phe Asp

50 55 60

Phe Pro Arg Phe Leu Asp Leu Met Arg Ala His Leu Arg Pro Glu Pro

65 70 75 80

Phe Asp Arg Pro Leu Arg Asp Ala Phe Arg Val Leu Asp Lys Asp Ala

85 90 95

Ser Gly Thr Val Ser Val Ala Asp Leu Arg His Val Leu Thr Ser Ile

100 105 110

Gly Glu Lys Leu Glu Pro His Glu Phe Asp Glu Trp Ile Arg Glu Val

115 120 125

Asp Val Ala Pro Asp Gly Thr Ile Arg Tyr Asp Asp Phe Ile Arg Arg

130 135 140

Ile Val Ala Lys

145

<210>111

<211>1692

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1692)

<400>111

atg gcc tcc gcc gcc gtc atc ccg tcg tcc gcg ccc ggc gcc gcc gcc 48

Met Ala Ser Ala Ala Val Ile Pro Ser Ser Ala Pro Gly Ala Ala Ala

1 5 10 15

gca ggt gcg gcc gcg gtt arr agc gct ggg tgg gtg gtg gac gag cgg 96

Ala Gly Ala Ala Ala Val Xaa Ser Ala Gly Trp Val Val Asp Glu Arg

20 25 30

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Asp Gly Phe Ile Ser Trp Leu Arg Gly Lys Phe Ala Ala Ala Asn Ala

35 40 45

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Ile Ile Asp Leu Leu Leu Leu Xaa Xaa Arg Ser Val Gly Glu Pro Gly

50 55 60

gag ttc gag cac gtc gcc gcc gcg gtg cag cag cgg cgc cac cac tgg 240

Glu Phe Glu His Val Ala Ala Ala Val Gln Gln Arg Arg His His Trp

65 70 75 80

gcg ccc gtg atc cac atg cag cag ttc ttc ccc gtc ggc gac gtc gcg 288

Ala Pro Val Ile His Met Gln Gln Phe Phe Pro Val Gly Asp Val Ala

85 90 95

tac gcg ctc cag cag gcc ggg tkg cgc cgc cgc gcg ccg ccg cac cac 336

Tyr Ala Leu Gln Gln Ala Gly Xaa Arg Arg Arg Ala Pro Pro His His

100 105 110

cag cag cag ggc ccc ggc gcc tcg ccg tcc ccg ccg ccc cyt ccc ccg 384

Gln Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Pro Ser Pro Pro Pro Xaa Pro Pro

115 120 125

cgc ggc cgc ccc tcg ttc tcg gcg tcc cac tcg cac cat cgc cac ggt 432

Arg Gly Arg Pro Ser Phe Ser Ala Ser His Ser His His Arg His Gly

130 135 140

ggt cac cat cat cgc tcc gat tcg gtg cgc ggc ggc ggc act ggt gcg 480

Gly His His His Arg Ser Asp Ser Val Arg Gly Gly Gly Thr Gly Ala

145 150 155 160

acg gct gga tcc gat aaa gat gga cgt gaa gtt cat aac aag gaa gag 528

Thr Ala Gly Ser Asp Lys Asp Gly Arg Glu Val His Asn Lys Glu Glu

165 170 175

aaa gga atg aag gaa gca gag aat gtg gtt gaa gct aaa agc tca cag 576

Lys Gly Met Lys Glu Ala Glu Asn Val Val Glu Ala Lys Ser Ser Gln

180 185 190

ttg gag tct ctt gtt tct cat gaa ggt gaa aaa act cct agg ccg caa 624

Leu Glu Ser Leu Val Ser His Glu Gly Glu Lys Thr Pro Arg Pro Gln

195 200 205

gct gtt gct gaa gga agc agt aaa gtg gtt cca act cct gtg gag tat 672

Ala Val Ala Glu Gly Ser Ser Lys Val Val Pro Thr Pro Val Glu Tyr

210 215 220

acg gtc aat gac att att gat ggc aag acg gtt aat gct gtt gaa ggg 720

Thr Val Asn Asp Ile Ile Asp Gly Lys Thr Val Asn Ala Val Glu Gly

225 230 235 240

ctt aag gtt tat gaa ggg ttg gta aat gag aat gag aaa aac aag att 768

Leu Lys Val Tyr Glu Gly Leu Val Asn Glu Asn Glu Lys Asn Lys Ile

245 250 255

ctc tct tta ctt aat gaa aca aaa gct tct ttt cgt cga gga ggg ctt 816

Leu Ser Leu Leu Asn Glu Thr Lys Ala Ser Phe Arg Arg Gly Gly Leu

260 265 270

gaa gct ggg cag act gta ata att gga aaa aga cca atg aag ggt cat 864

Glu Ala Gly Gln Thr Val Ile Ile Gly Lys Arg Pro Met Lys Gly His

275 280 285

ggg agg gaa att att cag ctg ggc att cct atc gtt gaa ggc cct cct 912

Gly Arg Glu Ile Ile Gln Leu Gly Ile Pro Ile Val Glu Gly Pro Pro

290 295 300

gaa gat gac tat cca aga gag aca aaa gtg gag gct gtt cct gga ttg 960

Glu Asp Asp Tyr Pro Arg Glu Thr Lys Val Glu Ala Val Pro Gly Leu

305 310 315 320

ctg cat gat ctg ttt gac cgc ttg tgt cag aag gaa att ata cca aca 1008

Leu His Asp Leu Phe Asp Arg Leu Cys Gln Lys Glu Ile Ile Pro Thr

325 330 335

aaa cca gat tat tgt gtt att gat tac tac aat gag ggg gat tat tct 1056

Lys Pro Asp Tyr Cys Val Ile Asp Tyr Tyr Asn Glu Gly Asp Tyr Ser

340 345 350

cac cct cac caa tcc cct cct tgg tat ggt aga ccc ttt tgt aca ttc 1104

His Pro His Gln Ser Pro Pro Trp Tyr Gly Arg Pro Phe Cys Thr Phe

355 360 365

tgc ctg aca gat tgt gac atg gtg ttc ggc cga gtt att tca gga gaa 1152

Cys Leu Thr Asp Cys Asp Met Val Phe Gly Arg Val Ile Ser Gly Glu

370 375 380

cga ggt gat cat aga ggt cct ctg aag ctc ctt ctc tcg aca ggg tct 1200

Arg Gly Asp His Arg Gly Pro Leu Lys Leu Leu Leu Ser Thr Gly Ser

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ctt ctg gtg ttg cat ggg aag agt gct gat gtt gct aag cga gct att 1248

Leu Leu Val Leu His Gly Lys Ser Ala Asp Val Ala Lys Arg Ala Ile

405 410 415

cot gct gca tgt aag cag cgg atc cta cta agc ttc ggg aag tct tta 1296

Pro Ala Ala Cys Lys Gln Arg Ile Leu Leu Ser Phe Gly Lys Ser Leu

420 425 430

tcg aga aaa caa gta cca tct gaa agt gtt tca cgg ttt act acc ccg 1344

Ser Arg Lys Gln Val Pro Ser Glu Ser Val Ser Arg Phe Thr Thr Pro

435 440 445

ttg aca cca cct cct atg ccc tgg ggt cct cca agg ccg gct aac atg 1392

Leu Thr Pro Pro Pro Met Pro Trp Gly Pro Pro Arg Pro Ala Asn Met

450 455 460

gcg cgt cat tct tca agc cct aaa cac ttt gga tat gcc cca aac agt 1440

Ala Arg His Ser Ser Ser Pro Lys His Phe Gly Tyr Ala Prc Asn Ser

465 470 475 480

ggc gta ctt cca gcg ccg gcc att gga gcg cat cac att cct cca tca 1488

Gly Val Leu Pro Ala Pro Ala Ile Gly Ala His His Ile Prc Pro Ser

485 490 495

gat gga atg cag cca ctc ttt gta gca cct gct cca gtt gct gct gca 1536

Asp Gly Met Gln Pro Leu Phe Val Ala Pro Ala Pro Val Ala Ala Ala

500 505 510

gcc atg cct ttc cca tca cct gtt cct ttg cca aac tta acc aac agc 1584

Ala Met Pro Phe Pro Ser Pro Val Pro Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser

515 520 525

ttg gat ggc aga agc tgc tcc aag gtc tgc tcc aca acg act ccc agt 1632

Leu Asp Gly Arg Ser Cys Ser Lys Val Cys Ser Thr Thr Thr Pro Ser

530 535 540

tcc tgg cac ggg ggt ctt cct tcc tcc tgg atc ggg tca cgc act gcc 1680

Ser Trp His Gly Gly Leu Pro Ser Ser Trp Ile Gly Ser Arg Thr Ala

545 550 555 560

tca tca gat gat 1692

Ser Ser Asp Asp

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

<220>

<221>misc_feature

<222>(23)..(23)

<223>The′Xaa′at location 23 stands for Arg，or Lys.

<220>

<221>misc_feature

<222>(56)..(56)

<223>The′Xaa′at location 56 stands for Gln，or His.

<220>

<221>misc_feature

<222>(57)..(57)

<223>The′Xaa′at location 57 stands for Leu.

<220>

<221>misc_feature

<222>(104)..(104)

<223>The′Xaa′at location 104 stands for Trp，or Leu.

<220>

<221>misc_feature

<222>(126)..(126)

<223>The′Xaa′at location 126 stands for Pro，or Leu.

<400>112

Met Ala Ser Ala Ala Val Ile Pro Ser Ser Ala Pro Gly Ala Ala Ala

1 5 10 15

Ala Gly Ala Ala Ala Val Xaa Ser Ala Gly Trp Val Val Asp Glu Arg

20 25 30

Asp Gly Phe Ile Ser Trp Leu Arg Gly Lys Phe Ala Ala Ala Asn Ala

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Ile Ile Asp Leu Leu Leu Leu Xaa Xaa Arg Ser Val Gly Glu Pro Gly

50 55 60

Glu Phe Glu His Val Ala Ala Ala Val Gln Gln Arg Arg His His Trp

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Ala Pro Val Ile His Met Gln Gln Phe Phe Pro Val Gly Asp Val Ala

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Tyr Ala Leu Gln Gln Ala Gly Xaa Arg Arg Arg Ala Pro Pro His His

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Gln Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Pro Ser Pro Pro Pro Xaa Pro Pro

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Arg Gly Arg Pro Ser Phe Ser Ala Ser His Ser His His Arg His Gly

130 135 140

Gly His His His Arg Ser Asp Ser Val Arg Gly Gly Gly Thr Gly Ala

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Thr Ala Gly Ser Asp Lys Asp Gly Arg Glu Val His Asn Lys Glu Glu

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Lys Gly Met Lys Glu Ala Glu Asn Val Val Glu Ala Lys Ser Ser Gln

180 185 190

Leu Glu Ser Leu Val Ser His Glu Gly Glu Lys Thr Pro Arg Pro Gln

195 200 205

Ala Val Ala Glu Gly Ser Ser Lys Val Val Pro Thr Pro Val Glu Tyr

210 215 220

Thr Val Asn Asp Ile Ile Asp Gly Lys Thr Val Asn Ala Val Glu Gly

225 230 235 240

Leu Lys Val Tyr Glu Gly Leu Val Asn Glu Asn Glu Lys Asn Lys Ile

245 250 255

Leu Ser Leu Leu Asn Glu Thr Lys Ala Ser Phe Arg Arg Gly Gly Leu

260 265 270

Glu Ala Gly Gln Thr Val Ile Ile Gly Lys Arg Pro Met Lys Gly His

275 280 285

Gly Arg Glu Ile Ile Gln Leu Gly Ile Pro Ile Val Glu Gly Pro Pro

290 295 300

Glu Asp Asp Tyr Pro Arg Glu Thr Lys Val Glu Ala Val Pro Gly Leu

305 310 315 320

Leu His Asp Leu Phe Asp Arg Leu Cys Gln Lys Glu Ile Ile Pro Thr

325 330 335

Lys Pro Asp Tyr Cys Val Ile Asp Tyr Tyr Asn Glu Gly Asp Tyr Ser

340 345 350

His Pro His Gln Ser Pro Pro Trp Tyr Gly Arg Pro Phe Cys Thr Phe

355 360 365

Cys Leu Thr Asp Cys Asp Met Val Phe Gly Arg Val Ile Ser Gly Glu

370 375 380

Arg Gly Asp His Arg Gly Pro Leu Lys Leu Leu Leu Ser Thr Gly Ser

385 390 395 400

Leu Leu Val Leu His Gly Lys Ser Ala Asp Val Ala Lys Arg Ala Ile

405 410 415

Pro Ala Ala Cys Lys Gln Arg Ile Leu Leu Ser Phe Gly Lys Ser Leu

420 425 430

Ser Arg Lys Gln Val Pro Ser Glu Ser Val Ser Arg Phe Thr Thr Pro

435 440 445

Leu Thr Pro Pro Pro Met Pro Trp Gly Pro Pro Arg Pro Ala Asn Met

450 455 460

Ala Arg His Ser Ser Ser Pro Lys His Phe Gly Tyr Ala Pro Asn Ser

465 470 475 480

Gly Val Leu Pro Ala Pro Ala Ile Gly Ala His His Ile Pro Pro Ser

485 490 495

Asp Gly Met Gln Pro Leu Phe Val Ala Pro Ala Pro Val Ala Ala Ala

500 505 510

Ala Met Pro Phe Pro Ser Pro Val Pro Leu Pro Asn Leu Thr Asn Ser

515 520 525

Leu Asp Gly Arg Ser Cys Ser Lys Val Cys Ser Thr Thr Thr Pro Ser

530 535 540

Ser Trp His Gly Gly Leu Pro Ser Ser Trp Ile Gly Ser Arg Thr Ala

545 550 555 560

Ser Ser Asp Asp

<210>113

<211>858

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(858)

<400>113

atg gag ggc ggc ggc gag gtg ggc tgg tac gtg ctc ggc ccg aac cag 48

Met Glu Gly Gly Gly Glu Val Gly Trp Tyr Val Leu Gly Pro Asg Gln

1 5 10 15

gag cac gtc ggc ccc tac gcg ctc tcc gag ctg cga gaa cat ttt gct 96

Glu His Val Gly Pro Tyr Ala Leu Ser Glu Leu Arg Glu His Phe Ala

20 25 30

aat ggg tac atc agt gag agc tca atg ctc tgg gca gaa ggg agg agt 144

Asn Gly Tyr Ile Ser Glu Ser Ser Met Leu Trp Ala Glu Gly Arg Ser

35 40 45

gaa tgg atg cca ttg tcg tcg att cct gac cta ctt gcg gtg gtc aca 192

Glu Trp Met Pro Leu Ser Ser Ile Pro Asp Leu Leu Ala Val Val Thr

50 55 60

aaa aag gat caa cct gat gaa gga att gaa gat gat ttc gat aaa ttt 240

Lys Lys Asp Gln Pro Asp Glu Gly Ile Glu Asp Asp Phe Asp Lys Phe

65 70 75 80

caa aag gag gtt ata gaa gct gag gca gag gtg gaa gcc tcg aca gac 288

Gln Lys Glu Val Ile Glu Ala Glu Ala Glu Val Glu Ala Ser Thr Asp

85 90 95

aag gct gca gat aac gac ata aac caa gaa cat ggg gcc gat gat cct 336

Lys Ala Ala Asp Asn Asp Ile Asn Gln Glu His Gly Ala Asp Asp Pro

100 105 110

gat gac cgg cca gca acc cca cca gat ggc gag gac gaa ttt act gat 384

Asp Asp Arg Pro Ala Thr Pro Pro Asp Gly Glu Asp Glu Phe Thr Asp

115 120 125

gat gat ggt act gtt tac aag tgg gat cgt gtc ctg agg gca tgg gtt 432

Asp Asp Gly Thr Val Tyr Lys Trp Asp Arg Val Leu Arg Ala Trp Val

130 135 140

cct caa gat gac cta gaa ggc aaa aat gac aac tat gaa gtt gaa gac 480

Pro Gln Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Asp Asn Tyr Glu Val Glu Asp

145 150 155 160

atg act ttt gca cat gag gaa gaa gtt ttc caa gca cca gat att gct 528

Met Thr Phe Ala His Glu Glu Glu Val Phe Gln Ala Pro Asp Ile Ala

165 170 175

ggt tca acc aca tta gaa gaa aac aat gtt tct gcg gaa att gaa atc 576

Gly Ser Thr Thr Leu Glu Glu Asn Asn Val Ser Ala Glu Ile Glu Ile

180 185 190

aaa gaa cca cca aag gta gaa aag aga gca cat aag aag cgg aag tct 624

Lys Glu Pro Pro Lys Val Glu Lys Arg Ala His Lys Lys Arg Lys Ser

195 200 205

tct gaa aag cca gcc gat aaa aag gaa gct tac aaa cct cca gat agt 672

Ser Glu Lys Pro Ala Asp Lys Lys Glu Ala Tyr Lys Pro Pro Asp Ser

210 215 220

tgg gtt gat ctc aaa gtt aac aca cat gtc tac gtt act ggt ttg cct 720

Trp Val Asp Leu Lys Val Asn Thr His Val Tyr Val Thr Gly Leu Pro

225 230 235 240

gat gat gtc aca gct gag gag att gtg gag gta ttt tcc aaa tgt gga 768

Asp Asp Val Thr Ala Glu Glu Ile Val Glu Val Phe Ser Lys Cys Gly

245 250 255

att ata aag gag gac cca gag aca aga aaa ccc cga gta aaa atc tat 816

Ile Ile Lys Glu Asp Pro Glu Thr Arg Lys Pro Arg Val Lys Ile Tyr

260 265 270

act gac aga gaa aca ggc aga aag aaa ggt gat gcg cta gtg 858

Thr Asp Arg Glu Thr Gly Arg Lys Lys Gly Asp Ala Leu Val

275 280 285

<210>114

<211>286

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>114

Met Glu Gly Gly Gly Glu Val Gly Trp Tyr Val Leu Gly Pro Asn Gln

1 5 10 15

Glu His Val Gly Pro Tyr Ala Leu Ser Glu Leu Arg Glu His Phe Ala

20 25 30

Asn Gly Tyr Ile Ser Glu Ser Ser Met Leu Trp Ala Glu Gly Arg Ser

35 40 45

Glu Trp Met Pro Leu Ser Ser Ile Pro Asp Leu Leu Ala Val Val Thr

50 55 60

Lys Lys Asp Gln Pro Asp Glu Gly Ile Glu Asp Asp Phe Asp Lys Phe

65 70 75 80

Gln Lys Glu Val Ile Glu Ala Glu Ala Glu Val Glu Ala Ser Thr Asp

85 90 95

Lys Ala Ala Asp Asn Asp Ile Asn Gln Glu His Gly Ala Asp Asp Pro

100 105 110

Asp Asp Arg Pro Ala Thr Pro Pro Asp Gly Glu Asp Glu Phe Thr Asp

115 120 125

Asp Asp Gly Thr Val Tyr Lys Trp Asp Arg Val Leu Arg Ala Trp Val

130 135 140

Pro Gln Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Asp Asr Tyr Glu Val Glu Asp

145 150 155 160

Met Thr Phe Ala His Glu Glu Glu Val Phe Gln Ala Pro Asp Ile Ala

165 170 175

Gly Ser Thr Thr Leu Glu Glu Asn Asn Val Ser Ala Glu Ile Glu Ile

180 185 190

Lys Glu Pro Pro Lys Val Glu Lys Arg Ala His Lys Lys Arg Lys Ser

195 200 205

Ser Glu Lys Pro Ala Asp Lys Lys Glu Ala Tyr Lys Pro Pro Asp Ser

210 215 220

Trp Val Asp Leu Lys Val Asn Thr His Val Tyr Val Thr Gly Leu Pro

225 230 235 240

Asp Asp Val Thr Ala Glu Glu Ile Val Glu Val Phe Ser Lys Cys Gly

245 250 255

Ile Ile Lys Glu Asp Pro Glu Thr Arg Lys Pro Arg Val Lys Ile Tyr

260 265 270

Thr Asp Arg Glu Thr Gly Arg Lys Lys Gly Asp Ala Leu Val

275 280 285

<210>115

<211>1251

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1251)

<400>115

atg gcg agg cgc tct cct tgc ctc gcc gtc gcc atg ctc ctg ctt ggg 48

Met Ala Arg Arg Ser Pro Cys Leu Ala Val Ala Met Leu Leu Leu Gly

1 5 10 15

gcg ttg gcg gtg gcg agc gcc ttc att gat gaa gcg gcg gct gct ggc 96

Ala Leu Ala Val Ala Ser Ala Phe Ile Asp Glu Ala Ala Ala Ala Gly

20 25 30

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Thr Tyr Glu Lys Leu Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro

50 55 60

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His Pro Lys Pro Thr Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Glu Pro

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aaa cca gta cct gag cct gag cct aaa ccg gaa cca aag cca gaa cca 288

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aaa cct gag cct aag cct gaa cct aaa cca tac cca gag cca aaa ccg 336

Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Pro Lys Pro

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gag ccg aag cca gag cca aaa cct gag ccg gag cct aaa cct gag cct 384

Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro

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aag cca gaa cca aaa cca gaa cca aag ccg tac cca gag ccg aag cca 432

Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Pro Lys Pro

130 135 140

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Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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aag cca gag ccc aaa cca cac cca gaa cca aag cct gat ccg aaa cct 528

Lys Pro Glu Pro Lys Pro His Pro Glu Pro Lys Pro Asp Pro Lys Pro

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gag cct aag cca cac cca gag cct gag cct aag cct gaa cct aag cct 576

Glu Pro Lys Pro His Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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Glu Pro Lys Pro His Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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aag cca aag cca gag cca aag cca aag cct gag ccc aag cca tac cct 720

Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro

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gag cct aag cct aag cct gaa cca aag cct gag cct aag cct gag cca 768

Glu Pro Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro

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aag cca gaa cca aag ccg gag cca aaa cct gaa cca aaa cca gag cca 816

Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro

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aag cca gag cca aag cca aag cct gag ccc aag cca cac cct aag cct 864

Lys Pro Glu Pro Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro His Pro Lys Pro

275 280 285

gag cct aag cct gag ccc aag cca gaa cca aag cca gag cca aaa cct 912

Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro

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Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Pro Lys Pro

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gat ccc asa cca gaa ccc aaa cca cac cca gaa cca aag cca gag ccc 1056

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Lys Pro Gln Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Pro

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Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Pro Lys Pro

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Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Pro Lys Pro

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Lys Pro Glu Pro Lys Pro His Pro Glu Pro Lys Pro Asp Pro Lys Pro

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Glu Pro Lys Pro His Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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Glu Pro Lys Pro His Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro

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Glu Pro Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro

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Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro

260 265 270

Lys Pro Glu Pro Lys Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro His Pro Lys Pro

275 280 285

Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro

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Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro

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Lys Pro Glu Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Tyr Pro Glu Pro Lys Pro

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35 40 45

cgg cgg ctg acg gcg cgg gcg gtg gcc ggg gac gcc gag gac gag tkg 192

Arg Arg Leu Thr Ala Arg Ala Val Ala Gly Asp Ala Glu Asp Glu Xaa

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Glu Ala Pro Ala Asp Val Pro Val Thr Ser Glu Val Ala Glu Leu Lys

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Ala Lys Leu Lys Glu Ala Leu Tyr Gly Thr Glu Arg Gly Leu Arg Ala

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Leu Gly Ser Gly Ser Leu Pro Gln Leu Val Lys Val Glu Glu Ile Ser

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<223>The′Xaa′at location 64 stands for Trp，or Leu.

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50 55 60

Gly Lys Glu Pro Ala Ala Asp Gln Gly Gly Ala Ala Ala Ala Val Ala

65 70 75 80

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165 170 175

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<220>

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<210>126

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<213>Oryza sativa

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

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165 170 175

Lys Ser Ser Lys Ser Lys Leu Leu Ile Ala Lys Phe Lys Ser Pro Lys

180 185 190

Ser Leu Asn Gly Trp Glu Val Asp Gln Gly Ser Tyr Phe Pro Asn Thr

195 200 205

Phe Ala Ser Arg Phe Asp Glu Gly Ile Asp Ala Ser Phe Asp Phe Ser

210 215 220

Glu Ala Gly Gln Ala Val Phe Ser Gly Phe Val Phe Thr Arg Gly Gly

225 230 235 240

Tyr Val Glu Ile Ser Lys Arg Leu Ser Leu Pro Leu Gly Ser Thr Leu

245 250 255

Asp Arg Tyr Asp Gly Leu Leu Phe Ser Val Gly Gly Asn Gly Arg Ser

260 265 270

Tyr Val Val Ile Leu Glu Thr Gly Pro Leu Ala Asp Thr Ser Gln Ser

275 280 285

Lys Lys Tyr Phe Ala Arg Met Thr Thr Lys Val Gly Phe Cys Arg Val

290 295 300

Arg Val Pro Phe Ser Ala Phe Arg Pro Val Asn Pro Gln Asp Pro Pro

305 310 315 320

Leu Asp Pro Phe Leu Val His Thr Leu Thr Ile Arg Phe Glu Pro Lys

325 330 335

Arg Gln Arg Pro Gly Asp Gly Ser Gln Ser Ala Thr Asp Pro Arg Asn

340 345 350

Phe Glu Leu Ile Leu Glu Tyr Ile Lys Ala Leu Pro Thr Gly Gln Glu

355 360 365

Thr Asp Phe Ile Leu Val Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ile Glu Pro Asn

370 375 380

Arg Arg Glu Gln Val Leu Lys Ala Lys Lys Ala Gly Glu Asp Ala Leu

385 390 395 400

Arg Arg Ser Gly Leu Gly Tyr Thr Ile Val Arg Pro Gly Pro Leu Gln

405 410 415

Glu Glu Pro Gly Gly Gln Arg Ala Leu Ile Phe Asp Gln Gly Asn Arg

420 425 430

Ile Ser Gln Gly Ile Ser Cys Ala Asp Val Ala Asp Ile Cys Val Lys

435 440 445

Ala Leu His Asp Ser Thr Ala Arg Asn Lys Ser Phe Asp Val Cys Tyr

450 455 460

Glu Tyr Val Ala Lys Gln Gly Asn Glu Leu Tyr Glu Leu Val Ala His

465 470 475 480

Leu Pro Asp Lys Ala Asn Asn Tyr Leu Thr Pro Ala Leu Ser Val Leu

485 490 495

Glu Lys Asn Thr

500

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(2688)

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atg ata cgg gcg ata cgc gcg tgc aag acg gcg gcg gag gag cgg gcg 48

Met Ile Arg Ala Ile Arg Ala Cys Lys Thr Ala Ala Glu Glu Arg Ala

1 5 10 15

gtg gtg cgg cgg gag tgc gcg gcg ata cgg gcg gcc atc agc gag ggg 96

Val Val Arg Arg Glu Cys Ala Ala Ile Arg Ala Ala Ile Ser Glu Gly

20 25 30

gac cag gac tac cgc cac cgg aac atg gcc aag ctc atg ttc atc cac 144

Asp Gln Asp Tyr Arg His Arg Asn Met Ala Lys Leu Met Phe Ile His

35 40 45

atg ctc ggg tac ccc acc cac ttc ggc cag atg gag tgc ctc aag ctc 192

Met Leu Gly Tyr Pro Thr His Phe Gly Gln Met Glu Cys Leu Lys Leu

50 55 60

atc gcc gcc gcg ggc ttc ccc gag aag cgc atc ggg tac ctc ggc ctc 240

Ile Ala Ala Ala Gly Phe Pro Glu Lys Arg Ile Gly Tyr Leu Gly Leu

65 70 75 80

atg ctg ctg ctc gac gag cgg cag gag aat gct atg ttc tgc ttt gag 288

Met Leu Leu Leu Asp Glu Arg Gln Glu Asn Ala Met Phe Cys Phe Glu

85 90 95

cat ttg gta gta ctt aac gcg gac aga gat ctt aac cac tcg aac cag 336

His Leu Val Val Leu Asn Ala Asp Arg Asp Leu Asn His Ser Asn Gln

100 105 110

ttc att gtg ggg ctt gca ctc tgt gct ctt ggc aac att tgc tcc gct 384

Phe Ile Val Gly Leu Ala Leu Cys Ala Leu Gly Asn Ile Cys Ser Ala

115 120 125

gaa atg gcg cgt gat ctg tca cct gag gtg gag agg cta ttg caa agt 432

Glu Met Ala Arg Asp Leu Ser Pro Glu Val Glu Arg Leu Leu Gln Ser

130 135 140

agg gaa cca aat acc aag aag aag gct gcc tta tgc tct ata agg atc 480

Arg Glu Pro Asn Thr Lys Lys Lys Ala Ala Leu Cys Ser Ile Arg Ile

145 150 155 160

gta cgg aag gtt cca gat ttg gca gag aac ttc atg ggc tct gct gtt 528

Val Arg Lys Val Pro Asp Leu Ala Glu Asn Phe Met Gly Ser Ala Val

165 170 175

tca cta ctg aag gaa aaa cat cac ggg gtt ctc ata tct gct gtt cag 576

Ser Leu Leu Lys Glu Lys His His Gly Val Leu Ile Ser Ala Val Gln

180 185 190

ctc tgc gca gaa ctt tgt aaa gca agc aaa gag gca ttg gag tac ctg 624

Leu Cys Ala Glu Leu Cys Lys Ala Ser Lys Glu Ala Leu Glu Tyr Leu

195 200 205

agg aag aac tgc ctt gat ggt ttg gtc aga ata ctg aga gat gtg tcc 672

Arg Lys Asn Cys Leu Asp Gly Leu Val Arg Ile Leu Arg Asp Val Ser

210 215 220

aat agt tca tat gct cct gaa tat gac att gct gga att acg gat ccg 720

Asn Ser Ser Tyr Ala Pro Glu Tyr Asp Ile Ala Gly Ile Thr Asp Pro

225 230 235 240

ttc ttg cat atc aga gtg ctt aag ctc atg cga att ttg ggt caa gga 768

Phe Leu His Ile Arg Val Leu Lys Leu Met Arg Ile Leu Gly Gln Gly

245 250 255

gat gca gat tgc agt gag ttt gtg aat gat att ctt gct cag ctg tgc 816

Asp Ala Asp Cys Ser Glu Phe Val Asn Asp Ile Leu Ala Gln Leu Cys

260 265 270

tct gta tct tat atc gaa tta ttt gca ttg cat ttc cag gtt gca aoa 864

Ser Val Ser Tyr Ile Glu Leu Phe Ala Leu His Phe Gln Val Ala Thr

275 280 285

aaa act gag tca aat aag aac gca gga aat gct att tta tat gaa tgt 912

Lys Thr Glu Ser Asn Lys Asn Ala Gly Asn Ala Ile Leu Tyr Glu Cys

290 295 300

gtt gag act ata atg ggc atc gaa gct act agt ggt tta cgt gtg ctg 960

Val Glu Thr Ile Met Gly Ile Glu Ala Thr Ser Gly Leu Arg Val Leu

305 310 315 320

gca atc aat atc ttg ggt aga ttt ctg tcc aac cgt gat aat aac atc 1008

Ala Ile Asn Ile Leu Gly Arg Phe Leu Ser Asn Arg Asp Asn Asn Ile

325 330 335

aga tat gtt gct ctg aac atg ctt atg aag gcc atg gag gta gac acg 1056

Arg Tyr Val Ala Leu Asn Met Leu Met Lys Ala Met Glu Val Asp Thr

340 345 350

caa gca gtg cag agg cat aga gca aca ata tta gag tgt gtc aag gat 1104

Gln Ala Val Gln Arg His Arg Ala Thr Ile Leu Glu Cys Val Lys Asp

355 360 365

gct gat gta tct att cgc aaa agg gcc ctt gaa ctt gtt tac ctt ctt 1152

Ala Asp Val Ser Ile Arg Lys Arg Ala Leu Glu Leu Val Tyr Leu Leu

370 375 380

gtc aac gat gca aat gca aaa tct ttg acc aag gag ctt gtt gat tac 1200

Val Asn Asp Ala Asn Ala Lys Ser Leu Thr Lys Glu Leu Val Asp Tyr

385 390 395 400

ctg gaa gta agt gat cag gac ttc aag gac gac ctc aca gca aag ata 1248

Leu Glu Val Ser Asp Gln Asp Phe Lys Asp Asp Leu Thr Ala Lys Ile

405 410 415

tgc tca att gtt gaa aag ttt tcc caa gat aaa ctt tgg tac tta gac 1296

Cys Ser Ile Val Glu Lys Phe Ser Gln Asp Lys Leu Trp Tyr Leu Asp

420 425 430

cag atg ttc aag gtt tta tct ctg gct gga aat tat gtg aag gac gat 1344

Gln Met Phe Lys Val Leu Ser Leu Ala Gly Asn Tyr Val Lys Asp Asp

435 440 445

gta tgg cat gct cta ata gtc tta ata agc aat gca tct gaa ctc caa 1392

Val Trp His Ala Leu Ile Val Leu Ile Ser Asn Ala Ser Glu Leu Gln

450 455 460

gga tac tca gtg aga tca tta tac aag gca ttg cta gct tgc ggt gaa 1440

Gly Tyr Ser Val Arg Ser Leu Tyr Lys Ala Leu Leu Ala Cys Gly Glu

465 470 475 480

cag gaa agt ttg gtt agg gta gct gta tgg tgc att ggt gag tat ggt 1488

Gln Glu Ser Leu Val Arg Val Ala Val Trp Cys Ile Gly Glu Tyr Gly

485 490 495

gaa atg ctg gtg aac aat gtt ggt atg ctg gac ata gag gaa cca atc 1536

Glu Met Leu Val Asn Asn Val Gly Met Leu Asp Ile Glu Glu Pro Ile

500 505 510

acg gta sca gaa tct gat gcc gtg gat gct gta gag gtc tct ctt aaa 1584

Thr Val Thr Glu Ser Asp Ala Val Asp Ala Val Glu Val Ser Leu Lys

515 520 525

cga tac tct gca gac gtg aca act cgg gct atg tgt cta gta tct ctc 1632

Arg Tyr Ser Ala Asp Val Thr Thr Arg Ala Met Cys Leu Val Ser Leu

530 535 540

ttg aag ctc tct tcc cga ttc cca ccg act tca gaa tca tct ttg ctt 1680

Leu Lys Leu Ser Ser Arg Phe Pro Pro Thr Ser Glu Ser Ser Leu Leu

545 550 555 560

gag cgg atg cct gtg ata gat gaa gct agt tac ttg gct aag aga gct 1728

Glu Arg Met Pro Val Ile Asp Glu Ala Ser Tyr Leu Ala Lys Arg Ala

565 570 575

gct tcc aca caa gca act att tca tca gat aaa tta gct gct gca gca 1776

Ala Ser Thr Gln Ala Thr Ile Ser Ser Asp Lys Leu Ala Ala Ala Ala

580 585 590

act cct gga agc tcg ctt aag ctt cca aat ggt gta gca aag cca cca 1824

Thr Pro Gly Ser Ser Leu Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Lys Pro Pro

595 600 605

ccg gct cct cta gct gat ttg ctt gat tta agt tct gac gat gct cct 1872

Pro Ala Pro Leu Ala Asp Leu Leu Asp Leu Ser Ser Asp Asp Ala Pro

610 615 620

gcg act act tcc gcc cct act aca gca cct aat gat ttc cta cag gat 1920

Ala Thr Thr Ser Ala Pro Thr Thr Ala Pro Asn Asp Phe Leu Gln Asp

625 630 635 640

ctt ttg ggc ata ggc ttg act gat aca tct aca gca ggt ttt gat ctt 1968

Leu Leu Gly Ile Gly Leu Thr Asp Thr Ser Thr Ala Gly phe Asp Leu

645 650 655

act ttt ttg ttc att cag tac ata ttt ggt ttg aca agt gaa gca agt 2016

Thr Phe Leu Phe Ile Gln Tyr Ile Phe Gly Leu Thr Ser Glu Ala Ser

660 665 670

gat gct cat att ctc aca ttt gat act cat tta tgt gga gct cca tca 2064

Asp Ala His Ile Leu Thr phe Asp Thr His Leu Cys Gly Ala Pro Ser

675 680 685

gca agc aca gat att ctg atg gat ctt cta tca att ggt tct tct cca 2112

Ala Ser Thr Asp Ile Leu Met Asp Leu Leu Ser Ile Gly Ser Ser Pro

690 695 700

gta caa aat ggc cca cca aca gta tca aac ttt agc ctt cct ggt caa 2160

Val Gln Asn Gly Pro Pro Thr Val Ser Asn Phe Ser Leu Pro Gly Gln

705 710 715 720

gat gag aat aca gct tac ccg cca atc aca gct ttc cag agt gca gct 2208

Asp Glu Asn Thr Ala Tyr Pro Pro Ile Thr Ala Phe Gln Ser Ala Ala

725 730 735

ttg aag atc act ttc aat ttt aag aag cag tct gga aaa cct cag gag 2256

Leu Lys Ile Thr Phe Asn Phe Lys Lys Gln Ser Gly Lys Pro Gln Glu

740 745 750

act aca att cat gct agc ttt aca aat ttg aca tct aat aca ttc acg 2304

Thr Thr Ile His Ala Ser Phe Thr Asn Leu Thr Ser Asn Thr Phe Thr

755 760 765

gat ttc atc ttt cag gca gct gta cca aag ttt atc cag ttg cgt ttg 2352

Asp Phe Ile Phe Gln Ala Ala Val Pro Lys Phe Ile Gln Leu Arg Leu

770 775 780

gac ccc gct agc agc aac acg ctt cct gcc agt gga aat gat tct gtt 2400

Asp Pro Ala Ser Ser Asn Thr Leu Pro Ala Ser Gly Asn Asp Ser Val

785 790 795 800

aca caa agc ctc agt gtc aca aat aac caa cat gga cag aaa ccc ctt 2448

Thr Gln Ser Leu Ser Val Thr Asn Asn Gln His Gly Gln Lys Pro Leu

805 810 815

gcg atg cgt atc cgg ata act tac aaa gtg aac gac aaa ctc atc atg 2496

Ala Met Arg Ile Arg Ile Thr Tyr Lys Val Asn Asp Lys Leu Ile Met

820 825 830

aat cgg agg aga tgc tcg aca aaa tat gac ctg gta aag cac tcg agt 2544

Asn Arg Arg Arg Cys Ser Thr Lys Tyr Asp Leu Val Lys His Ser Ser

835 840 845

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Leu Leu Ala Ile Glu Ala Ile Asn Pro Pro Leu Tyr Arg Ser Glu Arg

850 855 860

gca cta gtg cac gag tac tta gcc tgt gtc tat cgc ttt cgg ccg ttt 2640

Ala Leu Val His Glu Tyr Leu Ala Cys Val Tyr Arg Phe Arg Pro Phe

865 870 875 880

cga aac gct ccc gtc caa gca ata aga cga gac gtg gct gag ata taa 2688

Arg Asn Ala Pro Val Gln Ala Ile Arg Arg Asp Val Ala Glu Ile

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Val Val Arg Arg Glu Cys Ala Ala Ile Arg Ala Ala Ile Ser Glu Gly

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Asp Gln Asp Tyr Arg His Arg Asn Met Ala Lys Leu Met Phe Ile His

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Met Leu Gly Tyr Pro Thr His Phe Gly Gln Met Glu Cys Leu Lys Leu

50 55 60

Ile Ala Ala Ala Gly Phe Pro Glu Lys Arg Ile Gly Tyr Leu Gly Leu

65 70 75 80

Met Leu Leu Leu Asp Glu Arg Gln Glu Asn Ala Met Phe Cys Phe Glu

85 90 95

His Leu Val Val Leu Asn Ala Asp Arg Asp Leu Asn His Ser Asn Gln

100 105 110

Phe Ile Val Gly Leu Ala Leu Cys Ala Leu Gly Asn Ile Cys Ser Ala

115 120 125

Glu Met Ala Arg Asp Leu Ser Pro Glu Val Glu Arg Leu Leu Gln Ser

130 135 140

Arg Glu Pro Asn Thr Lys Lys Lys Ala Ala Leu Cys Ser Ile Arg Ile

145 150 155 160

Val Arg Lys Val Pro Asp Leu Ala Glu Asn Phe Met Gly Ser Ala Val

165 170 175

Ser Leu Leu Lys Glu Lys His His Gly Val Leu Ile Ser Ala Val Gln

180 185 190

Leu Cys Ala Glu Leu Cys Lys Ala Ser Lys Glu Ala Leu Glu Tyr Leu

195 200 205

Arg Lys Asn Cys Leu Asp Gly Leu Val Arg Ile Leu Arg Asp Val Ser

210 215 220

Asn Ser Ser Tyr Ala Pro Glu Tyr Asp Ile Ala Gly Ile Thr Asp Pro

225 230 235 240

Phe Leu His Ile Arg Val Leu Lys Leu Met Arg Ile Leu Gly Gln Gly

245 250 255

Asp Ala Asp Cys Ser Glu Phe Val Asn Asp Ile Leu Ala Gln Leu Cys

260 265 270

Ser Val Ser Tyr Ile Glu Leu Phe Ala Leu His Phe Gln Val Ala Thr

275 280 285

Lys Thr Glu Ser Asn Lys Asn Ala Gly Asn Ala Ile Leu Tyr Glu Cys

290 295 300

Val Glu Thr Ile Met Gly Ile Glu Ala Thr Ser Gly Leu Arg Val Leu

305 310 315 320

Ala Ile Asn Ile Leu Gly Arg Phe Leu Ser Asn Arg Asp Asn Asn Ile

325 330 335

Arg Tyr Val Ala Leu Asn Met Leu Met Lys Ala Met Glu Val Asp Thr

340 345 350

Gln Ala Val Gln Arg His Arg Ala Thr Ile Leu Glu Cys Val Lys Asp

355 360 365

Ala Asp Val Ser Ile Arg Lys Arg Ala Leu Glu Leu Val Tyr Leu Leu

370 375 380

Val Asn Asp Ala Asn Ala Lys Ser Leu Thr Lys Glu Leu Val Asp Tyr

385 390 395 400

Leu Glu Val Ser Asp Gln Asp Phe Lys Asp Asp Leu Thr Ala Lys Ile

405 410 415

Cys Ser Ile Val Glu Lys Phe Ser Gln Asp Lys Leu Trp Tyr Leu Asp

420 425 430

Gln Met Phe Lys Val Leu Ser Leu Ala Gly Asn Tyr Val Lys Asp Asp

435 440 445

Val Trp His Ala Leu Ile Val Leu Ile Ser Asn Ala Ser Glu Leu Gln

450 455 460

Gly Tyr Ser Val Arg Ser Leu Tyr Lys Ala Leu Leu Ala Cys Gly Glu

465 470 475 480

Gln Glu Ser Leu Val Arg Val Ala Val Trp Cys Ile Gly Glu Tyr Gly

485 490 495

Glu Met Leu Val Asn Asn Val Gly Met Leu Asp Ile Glu Glu Pro Ile

500 505 510

Thr Val Thr Glu Ser Asp Ala Val Asp Ala Val Glu Val Ser Leu Lys

515 520 525

Arg Tyr Ser Ala Asp Val Thr Thr Arg Ala Met Cys Leu Val Ser Leu

530 535 540

Leu Lys Leu Ser Ser Arg Phe Pro Pro Thr Ser Glu Ser Ser Leu Leu

545 550 555 560

Glu Arg Met Pro Val Ile Asp Glu Ala Ser Tyr Leu Ala Lys Arg Ala

565 570 575

Ala Ser Thr Gln Ala Thr Ile Ser Ser Asp Lys Leu Ala Ala Ala Ala

580 585 590

Thr Pro Gly Ser Ser Leu Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Lys Pro Pro

595 600 605

Pro Ala Pro Leu Ala Asp Leu Leu Asp Leu Ser Ser Asp Asp Ala Pro

610 615 620

Ala Thr Thr Ser Ala Pro Thr Thr Ala Pro Asn Asp Phe Leu Gln Asp

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Leu Leu Gly Ile Gly Leu Thr Asp Thr Ser Thr Ala Gly Phe Asp Leu

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Thr Phe Leu Phe Ile Gln Tyr Ile Phe Gly Leu Thr Ser Glu Ala Ser

660 665 670

Asp Ala His Ile Leu Thr Phe Asp Thr His Leu Cys Gly Ala Pro Ser

675 680 685

Ala Ser Thr Asp Ile Leu Met Asp Leu Leu Ser Ile Gly Ser Ser Pro

690 695 700

Val Gln Asn Gly Pro Pro Thr Val Ser Asn Phe Ser Leu Pro Gly Gln

705 710 715 720

Asp Glu Asn Thr Ala Tyr Pro Pro Ile Thr Ala Phe Gln Ser Ala Ala

725 730 735

Leu Lys Ile Thr Phe Asn Phe Lys Lys Gln Ser Gly Lys Pro Gln Glu

740 745 750

Thr Thr Ile His Ala Ser Phe Thr Asn Leu Thr Ser Asn Thr Phe Thr

755 760 765

Asp Phe Ile Phe Gln Ala Ala Val Pro Lys Phe Ile Gln Leu Arg Leu

770 775 780

Asp Pro Ala Ser Ser Asn Thr Leu Pro Ala Ser Gly Asn Asp Ser Val

785 790 795 800

Thr Gln Ser Leu Ser Val Thr Asn Asn Gln His Gly Gln Lys Pro Leu

805 810 815

Ala Met Arg Ile Arg Ile Thr Tyr Lys Val Asn Asp Lys Leu Ile Met

820 825 830

Asn Arg Arg Arg Cys Ser Thr Lys Tyr Asp Leu Val Lys His Ser Ser

835 840 845

Leu Leu Ala Ile Glu Ala Ile Asn Pro Pro Leu Tyr Arg Ser Glu Arg

850 855 860

Ala Leu Val His Glu Tyr Leu Ala Cys Val Tyr Arg Phe Arg Pro Phe

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Gly Val Glu Thr Val Val Thr Asp Thr Ala Gly Asn Lys Val Val Val

1 5 10 15

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Thr Gly Ala Ala Asp Ala Ala Glu Leu Lys Glu Arg Ile Glu Ala Arg

20 25 30

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Thr Lys Lys Ala Val Gln Ile Val Ser Ala Gly Ala Gly Pro Pro Pro

35 40 45

aag aag gat aag gag gag aag aag gac aag gac aag aag ggc ggc ggc 192

Lys Lys Asp Lys Glu Glu Lys Lys Asp Lys Asp Lys Lys Gly Gly Gly

50 55 60

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Asp Asp Lys Lys Ala Glu Lys Glu Lys Gly Gly Gly Gly Gly Asp Lys

65 70 75 80

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Lys Ala Glu Lys Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys Pro Lys Glu Glu Lys

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Lys Ala Lys Glu Pro Lys Glu Glu Thr Val Thr Leu Lys Ile Arg Leu

100 105 110

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Gly Val Glu Thr Val Val Thr Asp Thr Ala Gly Asn Lys Val Val Val

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Thr Lys Lys Ala Val Gln Ile Val Ser Ala Gly Ala Gly Pro Pro Pro

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Lys Lys Asp Lys Glu Glu Lys Lys Asp Lys Asp Lys Lys Gly Gly Gly

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Asp Asp Lys Lys Ala Glu Lys Glu Lys Gly Gly Gly Gly Gly Asp Lys

65 70 75 80

Lys Ala Glu Lys Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys Pro Lys Glu Glu Lys

85 90 95

Lys Ala Lys Glu Pro Lys Glu Glu Thr Val Thr Leu Lys Ile Arg Leu

100 105 110

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Lys Gly Gly

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Gly Asp Gln Gly Arg Thr Tyr Leu Phe Arg Val Ser Asn Val Gly Val

1 5 10 15

aag acg tcc gtc aat gtc agg atc cag ggg cac tcg ctg agg ttg gtg 96

Lys Thr Ser Val Asn Val Arg Ile Gln Gly His Ser Leu Arg Leu Val

20 25 30

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Glu Val Glu Gly Thr His Pro Val Gln Asn Val Tyr Asp Ser Leu Asp

35 40 45

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Val His Val Gly Gln Ser Val Ala Phe Leu Val Thr Leu Asp Lys Ala

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Val His Val Gly Gln Ser Val Ala Phe Leu Val Thr Leu Asp Lys Ala

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

aac aac atc gac ctc aag aac gcc ggc ctc gcc ggg acg ctc ccc ttc 240

Asn Asn Ile Asp Leu Lys Asn Ala Gly Leu Ala Gly Thr Leu Pro Phe

65 70 75 80

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Thr Phe Ala Ala Leu Asp Ala Leu Gln Asp Leu Ser Leu Gln Asn His

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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405 410 415

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420 425 430

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465 470 475 480

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530 535 540

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cag aat ggg gca gaa gga att ggg cta tgc cgg act gaa cat atg ttc 1920

Gln Asn Gly Ala Glu Gly Ile Gly Leu Cys Arg Thr Glu His Met Phe

625 630 635 640

ttc gct tca gac gag agg att aag gct gtc agg cag atg att atg gct 1968

Phe Ala Ser Asp Glu Arg Ile Lys Ala Val Arg Gln Met Ile Met Ala

645 650 655

tca agt ctt gaa ctg agg cag aaa gca cta gat cgc ctt ttg cct tat 2016

Ser Ser Leu Glu Leu Arg Gln Lys Ala Leu Asp Arg Leu Leu Pro Tyr

660 665 670

cag agg tct gac ttt gaa ggc atc ttc cgt gca atg gat ggg ctt ccg 2064

Gln Arg Ser Asp Phe Glu Gly Ile Phe Arg Ala Met Asp Gly Leu Pro

675 680 685

gta act att aga ctc ttg gat cct cca ctt cat gag ttc ctt cca gaa 2112

Val Thr Ile Arg Leu Leu Asp Pro Pro Leu His Glu Phe Leu Pro Glu

690 695 700

ggc cat gtt gag gat atg gtg cgt gag cta tgc tct gaa act gga gca 2160

Gly His Val Glu Asp Met Val Arg Glu Leu Cys Ser Glu Thr Gly Ala

705 710 715 720

gct cag gat gat gtc ctt gca aga gta gaa aaa ctt tcc gaa gta aat 2208

Ala Gln Asp Asp Val Leu Ala Arg Val Glu Lys Leu Ser Glu Val Asn

725 730 735

cca atg ctt ggt ttc cgt ggg tgc agg ctt ggt ata tca tac cct gaa 2256

Pro Met Leu Gly Phe Arg Gly Cys Arg Leu Gly Ile Ser Tyr Pro Glu

740 745 750

ttg act gaa atg caa gcc cgt gcc atc ttt gaa gct gct ata acc atg 2304

Leu Thr Glu Met Gln Ala Arg Ala Ile Phe Glu Ala Ala Ile Thr Met

755 760 765

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Thr Asn Gln Gly Ile Gln Val Phe Pro Glu Ile Met Val Pro Leu Val

770 775 780

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Gly Thr Pro Gln Glu Leu Gly His Gln Val Asp Val Ile Arg Gln Ile

785 790 795 800

gcc aac aag gtg ttc aca gac atg gga aaa act att ggc tac aaa gtt 2448

Ala Asn Lys Val Phe Thr Asp Met Gly Lys Thr Ile Gly Tyr Lys Val

805 810 815

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Gly Thr Met Ile Glu Ile Pro Arg Ala Ala Leu Val Ala Asp Glu Ile

820 825 830

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Ala Glu Gln Ala Glu Phe Phe Ser Phe Gly Thr Asn Asp Leu Thr Gln

835 840 845

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Met Thr Phe Gly Tyr Ser Arg Asp Asp Val Gly Lys Phe Leu Pro Ile

850 855 860

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Tyr Leu Ser Gln Gly Ile Leu Gln His Asp Pro Phe Glu Val Leu Asp

865 870 875 880

cag agg gga gtt ggg gag ctg gtt aag ctg gct aca gag aga ggc cgc 2688

Gln Arg Gly Val Gly Glu Leu Val Lys Leu Ala Thr Glu Arg Gly Arg

885 890 895

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900 905 910

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915 920 925

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Ser Cys Ser Pro Phe Arg Val Pro Ile Ala Arg Leu Ala Ala Ala Gln

930 935 940

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945

<210>140

<211>947

<212>PRT

<213>Oryza satiVa

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Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ala Arg Gly Gly His Cys Ser Pro Leu Arg

50 55 60

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65 70 75 80

Gly Lys Gly Lys Ser Glu Gly Asn Lys Ala Met Lys Asp Leu Leu Gly

85 90 95

Gly Lys Gly Ala Asn Leu Ala Glu Met Ala Ser Ile Gly Leu Ser Val

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

Leu Gln Trp Val Glu Glu Tyr Met Ala Ala Arg Leu Gly Asp Pro Ala

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Arg Pro Leu Leu Leu Ser Val Arg Ser Gly Ala Ala Val Ser Met Pro

165 170 175

Gly Met Met Asp Thr Val Leu Asn Leu Gly Leu Asn Asp Glu Val Ala

180 185 190

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195 200 205

Arg Arg Phe Leu Asp Met Phe Gly Asn Val Val Met Asp Ile Pro His

210 215 220

Ala Leu Phe Glu Glu Lys Leu Glu Ala Met Lys Ala Val Lys Gly Leu

225 230 235 240

His Asn Asp Thr Asp Leu Thr Ala Thr Asp Leu Lys Glu Leu Val Ala

245 250 255

Gln Tyr Lys Asp Val Tyr Val Glu Ala Lys Gly Glu Pro Phe Pro Ser

260 265 270

Asp Pro Lys Lys Gln Leu Gln Leu Ala Val Leu Ala Val Phe Asn Ser

275 280 285

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290 295 300

Gly Lau Lys Gly Thr Ala Val Asn Val Gln Thr Met Val Phe Gly Asn

305 310 315 320

Met Gly Asn Thr Ser Gly Thr Gly Val Leu Phe Thr Arg Asn Pro Ser

325 330 335

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340 345 350

Glu Asp Val Val Ala Gly Ile Arg Thr Pro Glu Asp Leu Asp Ala Met

355 360 365

Arg Asp His Met Pro Glu Pro Tyr Glu Glu Leu Val Glu Asn Cys Lys

370 375 380

Ile Leu Glu Ser His Tyr Lys Glu Met Met Asp Ile Glu Phe Thr Val

385 390 395 400

Gln Glu Asn Arg Leu Trp Met Leu Gln Cys Arg Thr Gly Lys Arg Thr

405 410 415

Gly Lys Gly Ala Val Lys Ile Ala Leu Asp Met Val Asn Glu Gly Leu

420 425 430

Val Glu Arg Arg Thr Ala Leu Lys Met Val Glu Pro Gly His Leu Asp

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Gln Leu Leu His Pro Gln Phe Glu Asn Pro Ser Gly Tyr Lys Asp Lys

450 455 460

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465 470 475 480

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485 490 495

Asp Val Ile Leu Val Arg Thr Glu Thr Ser Pro Glu Asp Val Gly Gly

500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

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565 570 575

Gly Glu Val Ile Ile Gly Lys Gln Pro Leu Cys Pro Pro Ala Leu Ser

580 585 590

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595 600 605

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610 615 620

Gln Asn Gly Ala Glu Gly Ile Gly Leu Cys Arg Thr Glu His Met Phe

625 630 635 640

Phe Ala Ser Asp Glu Arg Ile Lys Ala Val Arg Gln Met Ile Met Ala

645 650 655

Ser Ser Leu Glu Leu Arg Gln Lys Ala Leu Asp Arg Leu Leu Pro Tyr

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Gln Arg Ser Asp Phe Glu Gly Ile Phe Arg Ala Met Asp Gly Leu Pro

675 680 685

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690 695 700

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705 710 715 720

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725 730 735

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740 745 750

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755 760 765

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770 775 780

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785 790 795 800

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820 825 830

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Gln Arg Gly Val Gly Glu Leu Val Lys Leu Ala Thr Glu Arg Gly Arg

885 890 895

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900 905 910

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930 935 940

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65 70 75 80

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85 90 95

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180 185 190

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Gly Asp Asp Glu Gly Glu Gly Glu Gly Glu Glu His Pro Pro Pro Arg

245 250 255

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gct cat cgc cga cct gct ctg cct cca gat gtc ccc gcc gtg gaa cag 960

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Gly Asp Gly Glu Gln Arg Ala Gln Val Gln Leu Pro Val Ala Leu Val

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Glu Val Asp Glu His Asp Glu Ala Arg Gly Gly Val Gly Asp Gly Arg

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cca cgg cgc cac cag cgg gct ccc gtg gta cgc cga gat gcc ggc cca 1296

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420 425 430

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Val Gly Arg Arg Arg Arg Arg His Pro Gly Glu Pro Val Gly Asp Asp

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115 120 125

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180 185 190

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195 200 205

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Val Pro Arg Leu Leu Val Gly Gly Gly Leu Asp Asp Ala Asp Gly Glu

225 230 235 240

Gly Asp Asp Glu Gly Glu Gly Glu Gly Glu Glu His Pro Pro Pro Arg

245 250 255

Gln Leu His Leu Leu Pro Val His Glu Arg His Asp Gln Arg His Gly

260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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325 330 335

Gly Asp Gly Glu Gln Arg Ala Gln Val Gln Leu Pro Val Ala Leu Val

340 345 350

Arg Arg His Val Glu Val Glu Leu Pro Arg Glu His Leu Gly Gly Val

355 360 365

Val Leu Leu Pro Gly Arg Arg Glu Gln Leu Val Gly Glu Asp Trp Glu

370 375 380

Leu Pro Arg Val Glu Arg Val Glu Leu Pro Val Ala Glu Arg His Asp

385 390 395 400

Glu Val Asp Glu His Asp Glu Ala Arg Gly Gly Val Gly Asp Gly Arg

405 410 415

Pro Arg Arg His Gln Arg Ala Pro Val Val Arg Arg Asp Ala Gly Pro

420 425 430

Val Gln Cys Glu Gly Ala Asp Ala Glu Ala Val Val Ala Gly

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<221>CDS

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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Leu His Pro Ile Gln Glu Arg Leu Ala Met Ala His Gly Ser Gln Cys

115 120 125

gga ttt tgc acc cct ggt ttt gtg atg tcg atg tat gca ttg ctg aga 432

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130 135 140

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145 150 155 160

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Gly Asn Leu Cys Arg Cys Thr Gly Tyr Arg Pro Ile Ile Asp Ala Phe

165 170 175

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Arg Val Phe Ser Lys Arg Asp Asp Leu Leu Tyr Asn Asn Ser Ser Leu

180 l85 190

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195 200 205

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210 215 220

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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325 330 335

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Ser Ser Val Arg Leu Ala Gln Leu Gln Asn Phe Leu Arg Lys Val Ile

340 345 350

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355 360 365

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Gln Leu Lys Trp Phe Ala Gly Thr Gln Ile Arg Asn Val Ala Ser Val

370 375 380

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Gly Gly Asn Ile Cys Thr Ala Ser Pro Ile Ser Asp Leu Asn Pro Leu

385 390 395 400

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405 410 415

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420 425 430

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Asp Leu Lys Pro Asp Glu Ile Leu Leu Ser Val Ile Leu Pro Trp Thr

435 440 445

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450 455 460

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Asp Asp Ile Ala Leu Val Asn Ala Gly Met Arg Val Tyr Ile Arg Lys

465 470 475 480

gtt gaa ggt gat tgg ata att tcg gat gtt tca att atc tat gga ggg 1488

Val Glu Gly Asp Trp Ile Ile Ser Asp Val Ser Ile Ile Tyr Gly Gly

485 490 495

gta gct gca gtt tca cac cgt gct tca aaa act gaa acc ttt ctc act 1536

Val Ala Ala Val Ser His Arg Ala Ser Lys Thr Glu Thr Phe Leu Thr

500 505 510

gga aaa aaa tgg gac tat gga ttg ttg gat aag act ttt gat ctg ttg 1584

Gly Lys Lys Trp Asp Tyr Gly Leu Leu Asp Lys Thr Phe Asp Leu Leu

515 520 525

aaa gaa gac gta gtt ctg gct gaa aat gca cct ggt gga atg gtt gaa 1632

Lys Glu Asp Val Val Leu Ala Glu Asn Ala Pro Gly Gly Met Val Glu

530 535 540

ttt cgc agt tca ctt act ttg agt ttc ttt ttc aaa ttt ttc ctt cat 1680

Phe Arg Ser Ser Leu Thr Leu Ser Phe Phe Phe LVs Phe Phe Leu His

545 550 555 560

gtt act cat gaa atg aat ata aaa gga ttt tgg aag gat gga tta cat 1728

Val Thr His Glu Met Asn Ile Lys Gly Phe Trp Lys Asp Gly Leu His

565 570 575

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Ala Thr Asn Leu Ser Ala Ile Gln Ser Phe Thr Arg Pro Val Gly Val

580 585 590

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Gly Thr Gln Cys Tyr Glu Leu Val Arg Gln Gly Thr Ala Val Gly Gln

595 600 605

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610 615 620

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625 630 635 640

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Val Leu Ser Thr Lys Ala His Ala Arg Ile Leu Ser Ile Asp Ala Ser

645 650 655

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Leu Ala Lys Ser Ser Pro Gly Phe Ala Gly Leu Phe Leu Ser Lys Asp

660 665 670

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Val Pro Gly Ala Asn His Thr Gly Pro Val Ile His Asp Glu Glu Val

675 680 685

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Phe Ala Ser Asp Val Val Thr Cys Val Gly Gln Ile Val Gly Leu Val

690 695 700

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Val Ala Asp Thr Arg Asp Asn Ala Lys Ala Ala Ala Asn Lys Val Asn

705 710 715 720

att gag tat tct gaa ctt cca gca att tta tcc ata gag gaa gct gtg 2208

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725 730 735

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Lys Ala Gly Ser Phe His Pro Asn Ser Lys Arg Cys Leu Val Lys Gly

740 745 750

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Asn Val Glu Gln Cys Phe Leu Ser Gly Ala Cys Asp Arg Ile Ile Glu

755 760 765

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Gly Lys Val Gln Val Gly Gly Gln Glu His Phe Tyr Met Glu Pro Gln

770 775 780

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785 790 795 800

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Ser Ser Thr Gln Ala Pro Gln Lys His Gln Lys Tyr Val Ala Asn Val

805 810 815

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Leu Gly Leu Pro Gln Ser Arg Val Val Cys Lys Thr Lys Arg Ile Gly

820 825 830

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Gly Gly Phe Gly Gly Lys Glu Thr Arg Ser Ala Ile Phe Ala Ala Ala

835 840 845

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Ala Ser Val Ala Ala Tyr Cys Leu Arg Gln Pro Val Lys Leu Val Leu

850 855 860

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Asp Arg Asp Ile Asp Met Met Thr Thr Gly Gln Arg His Ser Phe Leu

865 870 875 880

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Gly Lys Tyr Lys Val Gly Phe Thr Asp Asp Gly Lys Ile Leu Ala Leu

885 890 895

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900 905 910

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915 920 925

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Pro Asn Val Arg Val Asn Gly Gln Val Cys Phe Thr Asn Phe Pro Ser

930 935 940

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Asn Thr Ala Phe Arg Gly Phe Gly Gly Pro Gln Ala Met Leu Ile Ala

945 950 955 960

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Glu Asn Trp Ile Gln His Met Ala Thr Glu Leu Lys Arg Ser Pro Glu

965 970 975

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Glu Ile Lys Glu Leu Asn Phe Gln Ser Glu Gly Ser Val Leu His Tyr

980 985 990

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995 1000 1005

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1010 1015 1020

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Phe Asn Asn Asn Asn Arg Trp Arg Lys Arg Gly Ile Ala Met Val

1025 1030 1035

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1040 1045 1050

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1055 1060 1065

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1070 1075 1080

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1085 1090 1095

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1100 1105 1110

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1115 1120 1125

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1130 1135 1140

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1145 1150 1155

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1160 1165 1170

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1175 1180 1185

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1190 1195 1200

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1205 1210 1215

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1220 1225 1230

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1235 1240 1245

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1250 1255 1260

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1265 1270 1275

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1280 1285 1290

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1295 1300 1305

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1310 1315 1320

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1325 1330 1335

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1340 1345 1350

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1355 1360 1365

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Tyr Tyr Arg Pro Lys Leu Ser Val

1370 1375

<210>144

<211>1376

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>144

Met Gly Ser Leu Thr Arg Ala Glu Glu Glu Glu Thr Ala Ala Ala Glu

1 5 10 15

Glu Trp Ser Gly Glu Ala Val Val Tyr Val Asn Gly Val Arg Arg Val

20 25 30

Leu Pro Asp Gly Leu Ala His Leu Thr Leu Leu Gln Tyr Leu Arg Asp

35 40 45

Ile Gly Leu Pro Gly Thr Lys Leu Gly Cys Gly Glu Gly Gly Cys Gly

50 55 60

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65 70 75 80

Gln His Phe Ala Ile Asn Ala Cys Leu Ala Pro Leu Tyr Ser Val Glu

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Gly Asn Leu Cys Arg Cys Thr Gly Tyr Arg Pro Ile Ile Asp Ala Phe

165 170 175

Arg Val Phe Ser Lys Arg Asp Asp Leu Leu Tyr Asn Asn Ser Ser Leu

180 185 190

Lys Asn Ala Asp Gly Arg Pro Ile Cys Pro Ser Thr Gly Lys Pro Cys

195 200 205

Ser Cys Gly Asp Gln Lys Asp Ile Asn Gly Ser Glu Ser Ser Leu Leu

210 215 220

Thr Pro Thr Lys Ser Tyr Ser Pro Cys Ser Tyr Asn Glu Ile Asp Gly

225 230 235 240

Asn Ala Tyr Ser Glu Lys Glu Leu Ile Phe Pro Pro Glu Leu Gln Leu

245 250 255

Arg Lys Val Thr Ser Leu Lys Leu Asn Gly Phe Asn Gly Ile Arg Trp

260 265 270

Tyr Arg Pro Leu Lys Leu Lys Gln Val Leu His Leu Lys Ala Cys Tyr

275 280 285

Pro Asn Ala Lys Leu Ile Ile Gly Asn Ser Glu Val Gly Val Glu Thr

290 295 300

Lys Phe Lys Asn Ala Gln Tyr Lys Val Leu Ile Ser Val Thr His Val

305 310 315 320

Pro Glu Leu His Thr Leu Lys Val Lys Glu Asp Gly Ile His Ile Gly

325 330 335

Ser Ser Val Arg Leu Ala Gln Leu Gln Asn Phe Leu Arg Lys Val Ile

340 345 350

Leu Glu Arg Asp Ser His Glu Ile Ser Ser Cys Glu Ala Ile Leu Arg

355 360 365

Gln Leu Lys Trp Phe Ala Gly Thr Gln Ile Arg Asn Val Ala Ser Val

370 375 380

Gly Gly Asn Ile Cys Thr Ala Ser Pro Ile Ser Asp Leu Asn Pro Leu

385 390 395 400

Trp Met Ala Thr Gly Ala Thr Phe Glu Ile Ile Asp Val Asn Asn Asn

405 410 415

Ile Arg Thr Ile Pro Ala Lys Asp Phe Phe Leu Gly Tyr Arg Lys Val

420 425 430

Asp Leu Lys Pro Asp Glu Ile Leu Leu Ser Val Ile Leu Pro Trp Thr

435 440 445

Arg Pro Phe Glu Phe Val Lys Glu Phe Lys Gln Ala His Arg Arg Glu

450 455 460

Asp Asp Ile Ala Leu Val Asn Ala Gly Met Arg Val Tyr Ile Arg Lys

465 470 475 480

Val Glu Gly Asp Trp Ile Ile Ser Asp Val Ser Ile Ile Tyr Gly Gly

485 490 495

Val Ala Ala Val Ser His Arg Ala Ser Lys Thr Glu Thr Phe Leu Thr

500 505 510

Gly Lys Lys Trp Asp Tyr Gly Leu Leu Asp Lys Thr Phe Asp Leu Leu

515 520 525

Lys Glu Asp Val Val Leu Ala Glu Asn Ala Pro Gly Gly Met Val Glu

530 535 540

Phe Arg Ser Ser Leu Thr Leu Ser Phe Phe Phe Lys Phe Phe Leu His

545 550 555 560

Val Thr His Glu Met Asn Ile Lys Gly Phe Trp Lys Asp Gly Leu His

565 570 575

Ala Thr Asn Leu Ser Ala Ile Gln Ser Phe Thr Arg Pro Val Gly Val

580 585 590

Gly Thr Gln Cys Tyr Glu Leu Val Arg Gln Gly Thr Ala Val Gly Gln

595 600 605

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610 615 620

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625 630 635 640

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645 650 655

Leu Ala Lys Ser Ser Pro Gly Phe Ala Gly Leu Phe Leu Ser Lys Asp

660 665 670

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675 680 685

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690 695 700

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705 710 715 720

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725 730 735

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740 745 750

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755 760 765

Gly Lys Val Gln Val Gly Gly Gln Glu His Phe Tyr Met Glu Pro Gln

770 775 780

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785 790 795 800

Ser Ser Thr Gln Ala Pro Gln Lys His Gln Lys Tyr Val Ala Asn Val

805 810 815

Leu Gly Leu Pro Gln Ser Arg Val Val Cys Lys Thr Lys Arg Ile Gly

820 825 830

Gly Gly Phe Gly Gly Lys Glu Thr Arg Ser Ala Ile Phe Ala Ala Ala

835 840 845

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850 855 860

Asp Arg Asp Ile Asp Met Met Thr Thr Gly Gln Arg His Ser Phe Leu

865 870 875 880

Gly Lys Tyr Lys Val Gly Phe Thr Asp Asp Gly Lys Ile Leu Ala Leu

885 890 895

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900 905 910

Pro Val Leu Glu Arg Ala Met Phe His Ser Asp Asn Val Tyr Asp Ile

915 920 925

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930 935 940

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945 950 955 960

Glu Asn Trp Ile Gln His Met Ala Thr Glu Leu Lys Arg Ser Pro Glu

965 970 975

Glu Ile Lys Glu Leu Asn Phe Gln Ser Glu Gly Ser Val Leu His Tyr

980 985 990

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995 1000 1005

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1010 1015 1020

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1025 1030 1035

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1040 1045 1050

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1055 1060 1065

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1070 1075 1080

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1085 1090 1095

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1100 1105 1110

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1115 1120 1125

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1130 1135 1140

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1145 1150 1155

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1160 1165 1170

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1175 1180 1185

Gly Lys Gly Thr Pro Phe Tyr Tyr Phe Thr Tyr Gly Ala Ala Phe

1190 1195 1200

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1205 1210 1215

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1220 1225 1230

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1235 1240 1245

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1250 1255 1260

Trp Ile Arg Pro Gly His Leu Phe Thr Cys Gly Pro Gly Ser Tyr

1265 1270 1275

Lys Ile Pro Ser Val Asn Asp Ile Pro Leu Asn Phe Lys Val Ser

1280 1285 1290

Leu Leu Lys Gly Val Leu Asn Pro Lys Val Ile His Ser Ser Lys

1295 1300 1305

Ala Val Gly Glu Pro Pro Phe Phe Leu Gly Ser Ala Val Leu Phe

1310 1315 1320

Ala Ile Lys Asp Ala Ile Ser Ala Ala Arg Ala Glu Glu Gly His

1325 1330 1335

Phe Asp Trp Phe Pro Leu Asp Ser Pro Ala Thr Pro Glu Arg Ile

1340 1345 1350

Arg Met Ala Cys Val Asp Ser Ile Thr Lys Lys Phe Ala Ser Val

1355 1360 1365

Tyr Tyr Arg Pro Lys Leu Ser Val

1370 1375

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<212>DNA

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<220>

<221>CDS

<222>(1)..(2529)

<400>145

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Gly Ala Gly Leu Gln Asn Leu Gly Asn Thr Cys Tyr Leu Asn Ser Val

1 5 10 15

ctg caa tgc ttg acg tac aca gaa cca ttt gcg gcc tat ttg cag agc 96

Leu Gln Cys Leu Thr Tyr Thr Glu Pro Phe Ala Ala Tyr Leu Gln Ser

20 25 30

ggg aag cac aag tct tca tgt cgt act gct gga ttt tgt gca cta tgt 144

Gly Lys His Lys Ser Ser Cys Arg Thr Ala Gly Phe Cys Ala Leu Cys

35 40 45

gct ctt caa aac cat gtt aag act gct cta cag tca act gga aaa ata 192

Ala Leu Gln Asn His Val Lys Thr Ala Leu Gln Ser Thr Gly Lys Ile

50 55 60

gtg acg cca tca cag att gtc aag aac ttg cgc tgc atc tcc cgt agt 240

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65 70 75 80

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85 90 95

ctt gaa tcc atg cat aaa tgt tgt cta cct tct gga gta cca agt gag 336

Leu Glu Ser Met His Lys Cys Cys Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Glu

100 105 110

tct cct agt gca tat gag aag agc tta gtt cac aaa ata ttt ggt ggc 384

Ser Pro Ser Ala Tyr Glu Lys Ser Leu Val His Lys Ile Phe Gly Gly

115 120 125

cgc cta aga agt cag gtg aaa tgc aca cag tgc tca cat tgc tcc aac 432

Arg Leu Arg Ser Gln Val Lys Cys Thr Gln Cys Ser His Cys Ser Asn

130 135 140

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145 150 155 160

tct ctg gtg agg gca ctt caa aat ttc act gcg gaa gag ctc tta gat 528

Ser Leu Val Arg Ala Leu Gln Asn Phe Thr Ala Glu Glu Leu Leu Asp

165 170 175

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Gly Gly Glu Lys Gln Tyr Gln Cys Gln Arg Cys Arg Lys Lys Val Val

180 185 190

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195 200 205

cat ctg aag cgc ttt agc cct ttc aac ccc cgt gaa aag att gac aaa 672

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210 215 220

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Lys Val Asp Phe Gln Pro Met Leu Asp Leu Lys Pro Phe Ile Ser Asp

225 230 235 240

tct aaa gtg agt aat ttg aaa tac agc ctt tat ggt gtt ttg gtt cat 768

Ser Lys Val Ser Asn Leu Lys Tyr Ser Leu Tyr Gly Val Leu Val His

245 250 255

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Ala Gly Trp Asn Thr Gln Ser Gly His Tyr Tyr Cys Phe Val Arg Thr

260 265 270

tcc agt gga atg tgg cac aac ctt gat gat aac cag gta cgc caa gtc 864

Ser Ser Gly Met Trp His Asn Leu Asp Asp Asn Gln Val Arg Gln Val

275 280 285

cgt gag gca gat gta ttg aga cag aaa gca tat atg tta ttt tat gta 912

Arg Glu Ala Asp Val Leu Arg Gln Lys Ala Tyr Met Leu Phe Tyr Val

290 295 300

cgt gac aga gtt ggg aat ccg act cca cgc aag gat aat atc act gct 960

Arg Asp Arg Val Gly Asn Pro Thr Pro Arg Lys Asp Asn Ile Thr Ala

305 310 315 320

aat atg cca gcc agg aga aca ata cct gaa aag atc tca ggt ctg agt 1008

Asn Met Pro Ala Arg Arg Thr Ile Pro Glu Lys Ile Ser Gly Leu Ser

325 330 335

gat atg atc cag agc ggc gta att gaa gca aaa ttg aac ggt tcc tcg 1056

Asp Met Ile Gln Ser Gly Val Ile Glu Ala Lys Leu Asn Gly Ser Ser

340 345 350

tct cct tat ggc gat aag agg ttg cac ggc ata agc aat ggg aac tca 1104

Ser Pro Tyr Gly Asp Lys Arg Leu His Gly Ile Ser Asn Gly Asn Ser

355 360 365

atc aag act tca aga gag cat tat ttg aag aaa gat ggc aaa act gaa 1152

Ile Lys Thr Ser Arg Glu His Tyr Leu Lys Lys Asp Gly Lys Thr Glu

370 375 380

gct cct aaa gcc tct gaa aac aat ggc ctg gct tcc aca cag aaa gct 1200

Ala Pro Lys Ala Ser Glu Asn Asn Gly Leu Ala Ser Thr Gln Lys Ala

385 390 395 400

tct gca cct caa att gat ggt gct acc tta tct gct caa tct aag caa 1248

Ser Ala Pro Gln Ile Asp Gly Ala Thr Leu Ser Ala Gln Ser Lys Gln

405 410 415

att act tca act ggt cac aga gag gta tct tca tca gat cga tct gca 1296

Ile Thr Ser Thr Gly His Arg Glu Val Ser Ser Ser Asp Arg Ser Ala

420 425 430

tct ctt aca cat gtg att gtg aac caa gca gtg gcc atg gtt ccg tcg 1344

Ser Leu Thr His Val Ile Val Asn Gln Ala Val Ala Met Val Pro Ser

435 440 445

cag gaa ttg caa cca aag gtt gat ggc tta acc gat acc tct tcc ctg 1392

Gln Glu Leu Gln Pro Lys Val Asp Gly Leu Thr Asp Thr Ser Ser Leu

450 455 460

ggc aat ggc aat gcg ata ttg tct gag cga aat aaa caa aca tcc cag 1440

Gly Asn Gly Asn Ala Ile Leu Ser Glu Arg Asn Lys Gln Thr Ser Gln

465 470 475 480

cat caa aat cca ttt tct atg cca gct tcc cat gga aag gac aca ggg 1488

His Gln Asn Pro Phe Ser Met Pro Ala Ser His Gly Lys Asp Thr Gly

485 490 495

gca ggg ctt gct gca caa act ttc cca act aag gat gct att gtt tca 1536

Ala Gly Leu Ala Ala Gln Thr Phe Pro Thr Lys Asp Ala Ile Val Ser

500 505 510

aat ggt gtt gta cct agt agc agg gat cca att tcc agt gag aag gtg 1584

Asn Gly Val Val Pro Ser Ser Arg Asp Pro Ile Ser Ser Glu Lys Val

515 520 525

tgt ggc ttg caa aaa tcc atc aag caa gat gac aaa acg gtg aaa gaa 1632

Cys Gly Leu Gln Lys Ser Ile Lys Gln Asp Asp Lys Thr Val Lys Glu

530 535 540

ctt cct ata agt gag aac aat ata gta tca gga ctt gaa cga gtc aac 1680

Leu Pro Ile Ser Glu Asn Asn Ile Val Ser Gly Leu Glu Arg Val Asn

545 550 555 560

gcc aga aaa cag act agc tct gaa gtt tcc atg aag gta gct gca gct 1728

Ala Arg Lys Gln Thr Ser Ser Glu Val Ser Met Lys Val Ala Ala Ala

565 570 575

gat tcg tgc aat agc aac aca cct aaa agg gtg gat ttg aag tca aag 1776

Asp Ser Cys Asn Ser Asn Thr Pro Lys Arg Val Asp Leu Lys Ser Lys

580 585 590

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595 600 605

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Val Met Leu Gly Ser Leu Lys Val Gln Lys Lys Lys Lys Cys Asn Arg

610 615 620

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625 630 635 640

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Ser Gly Asn Asn Thr Ser Glu Gln Gln Ala Ser Thr Ser Thr Thr Thr

645 650 655

tcg tct gaa act gtg caa tgt act ccc aga ggg cgg aaa cgt gcc tat 2016

Ser Ser Glu Thr Val Gln Cys Thr Pro Arg Gly Arg Lys Arg Ala Tyr

660 665 670

gat agt gac agt cct aaa aat aat aac cag aag caa aac aag caa gac 2064

Asp Ser Asp Ser Pro Lys Asn Asn Asn Gln Lys Gln Asn Lys Gln Asp

675 680 685

gtt att gga gcc gat act ggt agt ggt gaa ctt aac atg gat aag aga 2112

Val Ile Gly Ala Asp Thr Gly Ser Gly Glu Leu Asn Met Asp Lys Arg

690 695 700

aat gtt att agt gaa acc gct gct agt gct gag ctt ccg aag ctg ggt 2160

Asn Val Ile Ser Glu Thr Ala Ala Ser Ala Glu Leu Pro Lys Leu Gly

705 710 715 720

cca ggc tct tct gca aat cag gaa cat tca agg aac aat gtt cat gca 2208

Pro Gly Ser Ser Ala Asn Gln Glu His Ser Arg Asn Asn Val His Ala

725 730 735

aaa ttg gga gtt ccc cgg cat ttt act gtt ctg aca agg gac ttg gct 2256

Lys Leu Gly Val Pro Arg His Phe Thr Val Leu Thr Arg Asp Leu Ala

740 745 750

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Glu Val Thr Val Pro Cys Trp Asp Asp Val Ala Val Ser Asn Ala Glu

755 760 765

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770 775 780

gat gaa tgg gac gag gag tat gac cgt gga aag acc aag aaa atc aga 2400

Asp Glu Trp Asp Glu Glu Tyr Asp Arg Gly Lys Thr Lys Lys Ile Arg

785 790 795 800

aat tca aag gaa gac tac ggt gga cca aac ccc ttc cag gag gag gcc 2448

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805 810 815

aac tac atc tca cag aga aac atg aaa cag agg acc tat caa ccc aaa 2496

Asn Tyr Ile Ser Gln Arg Asn Met Lys Gln Arg Thr Tyr Gln Pro Lys

820 825 830

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Ser Trp Lys Lys His Ala His Val Arg Arg

835 840

<210>146

<211>842

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>146

Gly Ala Gly Leu Gln Asn Leu Gly Asn Thr Cys Tyr Leu Asn Ser Val

1 5 10 15

Leu Gln Cys Leu Thr Tyr Thr Glu Pro Phe Ala Ala Tyr Leu Gln Ser

20 25 30

Gly Lys His Lys Ser Ser Cys Arg Thr Ala Gly Phe Cys Ala Leu Cys

35 40 45

Ala Leu Gln Asn His Val Lys Thr Ala Leu Gln Ser Thr Gly Lys Ile

50 55 60

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65 70 75 80

Phe Arg Asn Ser Arg Gln Glu Asp Ala His Glu Leu Met Val Asn Leu

85 90 95

Leu Glu Ser Met His Lys Cys Cys Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Glu

100 105 110

Ser Pro Ser Ala Tyr Glu Lys Ser Leu Val His Lys Ile Phe Gly Gly

115 120 125

Arg Leu Arg Ser Gln Val Lys Cys Thr Gln Cys Ser His Cys Ser Asn

130 135 140

Lys Phe Asp Pro Phe Leu Asp Leu Ser Leu Asp Ile Gly Lys Ala Thr

145 150 155 160

Ser Leu Val Arg Ala Leu Gln Asn Phe Thr Ala Glu Glu Leu Leu Asp

165 170 175

Gly Gly Glu Lys Gln Tyr Gln Cys Gln Arg Cys Arg Lys Lys Val Val

180 185 190

Ala Lys Lys Lys Phe Thr Ile Asp Lys Ala Pro Tyr Val Leu Thr Ile

195 200 205

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210 215 220

Lys Val Asp Phe Gln Pro Met Leu Asp Leu Lys Pro Phe Ile Ser Asp

225 230 235 240

Ser Lys Val Ser Asn Leu Lys Tyr Ser Leu Tyr Gly Val Leu Val His

245 250 255

Ala Gly Trp Asn Thr Gln Ser Gly His Tyr Tyr Cys Phe Val Arg Thr

260 265 270

Ser Ser Gly Met Trp His Asn Leu Asp Asp Asn Gln Val Arg Gln Val

275 280 285

Arg Glu Ala Asp Val Leu Arg Gln Lys Ala Tyr Met Leu Phe Tyr Val

290 295 300

Arg Asp Arg Val Gly Asn Pro Thr Pro Arg Lys Asp Asn Ile Thr Ala

305 310 315 320

Asn Met Pro Ala Arg Arg Thr Ile Pro Glu Lys Ile Ser Gly Leu Ser

325 330 335

Asp Met Ile Gln Ser Gly Val Ile Glu Ala Lys Leu Asn Gly Ser Ser

340 345 350

Ser Pro Tyr Gly Asp Lys Arg Leu His Gly Ile Ser Asn Gly Asn Ser

355 360 365

Ile Lys Thr Ser Arg Glu His Tyr Leu Lys Lys Asp Gly Lys Thr Glu

370 375 380

Ala Pro Lys Ala Ser Glu Asn Asn Gly Leu Ala Ser Thr Gln Lys Ala

385 390 395 400

Ser Ala Pro Gln Ile Asp Gly Ala Thr Leu Ser Ala Gln Ser Lys Gln

405 410 415

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420 425 430

Ser Leu Thr His Val Ile Val Asn Gln Ala Val Ala Met Val Pro Ser

435 440 445

Gln Glu Leu Gln Pro Lys Val Asp Gly Leu Thr Asp Thr Ser Ser Leu

450 455 460

Gly Asn Gly Asn Ala Ile Leu Ser Glu Arg Asn Lys Gln Thr Ser Gln

465 470 475 480

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485 490 495

Ala Gly Leu Ala Ala Gln Thr Phe Pro Thr Lys Asp Ala Ile Val Ser

500 505 510

Asn Gly Val Val Pro Ser Ser Arg Asp Pro Ile Ser Ser Glu Lys Val

515 520 525

Cys Gly Leu Gln Lys Ser Ile Lys Gln Asp Asp Lys Thr Val Lys Glu

530 535 540

Leu Pro Ile Ser Glu Asn Asn Ile Val Ser Gly Leu Glu Arg Val Asn

545 550 555 560

Ala Arg Lys Gln Thr Ser Ser Glu Val Ser Met Lys Val Ala Ala Ala

565 570 575

Asp Ser Cys Asn Ser Asn Thr Pro Lys Arg Val Asp Leu Lys Ser Lys

580 585 590

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595 600 605

Val Met Leu Gly Ser Leu Lys Val Gln Lys Lys Lys Lys Cys Asn Arg

610 615 620

Thr Arg Arg Arg Ser Val Val Cys Glu Asp Met Ala Asn Ala Thr Cys

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Ser Gly Asn Asn Thr Ser Glu Gln Gln Ala Ser Thr Ser Thr Thr Thr

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Ser Ser Glu Thr Val Gln Cys Thr Pro Arg Gly Arg Lys Arg Ala Tyr

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Asp Ser Asp Ser Pro Lys Asn Asn Asn Gln Lys Gln Asn Lys Gln Asp

675 680 685

Val Ile Gly Ala Asp Thr Gly Ser Gly Glu Leu Asn Met Asp Lys Arg

690 695 700

Asn Val Ile Ser Glu Thr Ala Ala Ser Ala Glu Leu Pro Lys Leu Gly

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Pro Gly Ser Ser Ala Asn Gln Glu His Ser Arg Asn Asn Val His Ala

725 730 735

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740 745 750

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755 760 765

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770 775 780

Asp Glu Trp Asp Glu Glu Tyr Asp Arg Gly Lys Thr Lys Lys Ile Arg

785 790 795 800

Asn Ser Lys Glu Asp Tyr Gly Gly Pro Asn Pro Phe Gln Glu Glu Ala

805 810 815

Asn Tyr Ile Ser Gln Arg Asn Met Lys Gln Arg Thr Tyr Gln Pro Lys

820 825 830

Ser Trp Lys Lys His Ala His Val Arg Arg

835 840

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

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Gln Asp Thr Arg Pro Leu Gln Ala Gln Arg Arg Arg His Gly Gly Gly

1 5 10 15

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20 25 30

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Gln Arg Glu Glu His Pro Gly Gly Glu Glu Asp Arg Ala Pro His Gly

35 40 45

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Ala Gly Gly His Ala Ala Ala Gly Glu Gly Arg Gly Pro Arg Ala Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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Arg Glu Gly Gly Gly Arg Ala His Leu Leu Arg Pro Arg Arg His Arg

85 90 95

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Asp Ile Gly Asp Arg Val Gly His Thr Tyr Cys Leu Ser Arg Leu Arg

100 105 110

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Arg Ile Ala Gln Asn Glu Gln Pro Ser Ile His Pro Cys Pro Ser Leu

115 120 125

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130 135 140

aat acg ttc cas gaa aaa aag agg agg gtg ttc cgt gga agt tca gga 480

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145 150 155 160

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Phe Arg Met

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

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1 5 10 15

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Gln Arg Glu Glu His Pro Gly Gly Glu Glu Asp Arg Ala Pro His Gly

35 40 45

Ala Gly Gly His Ala Ala Ala Gly Glu Gly Arg Gly Pro Arg Ala Gly

50 55 60

Glu His Pro Gln His Gln Gly Gly Ala Ala Gly Ala Val Gly Gly Gly

65 70 75 80

Arg Glu Gly Gly Gly Arg Ala His Leu Leu Arg Pro Arg Arg His Arg

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Asp Ile Gly Asp Arg Val Gly His Thr Tyr Cys Leu Ser Arg Leu Arg

100 105 110

Arg Ile Ala Gln Asn Glu Gln Pro Ser Ile His Pro Cys Pro Ser Leu

115 120 125

Ala Gly Gln Val Ile Ile Arg Trp Glu Phe Arg Ile Gly Arg Asp Asn

130 135 140

Asn Thr Phe Gln Glu Lys Lys Arg Arg Val Phe Arg Gly Ser Ser Gly

145 150 155 160

Phe Arg Met

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(753)

<400>149

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1 5 10 15

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20 25 30

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Ser Ser Ser Asp Asp Asp Val Thr Glu Asp Asp Arg Arg Gly Ser Cys

35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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Ala Cys Ile Ile Gly Ile Ala Val Cys Cys Cys Leu Pro Cys Ile Ile

115 120 125

gct att ctc tat gcg gtt tct gat cag gaa gga gcg tca gaa gat gat 432

Ala Ile Leu Tyr Ala Val Ser Asp Gln Glu Gly Ala Ser Glu Asp Asp

130 135 140

att cgc caa att cca aga tac aaa ttt cgg aga aca gat gaa cct gaa 480

Ile Arg Gln Ile Pro Arg Tyr Lys Phe Arg Arg Thr Asp Glu Pro Glu

145 150 155 160

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165 170 175

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Cys Gly Thr Asn Gln Pro Ile Glu Lys Val Leu Ala Pro Glu Asp Ala

180 185 190

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Glu Cys Cys Ile Cys Leu Ser Ala Tyr Asp Asp Gly Ala Glu Leu Arg

195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

agt ggc agt agc agt gga agt gaa gaa gta tga 753

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Glu Glu Val

245 250

<210>150

<211>250

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>150

Met Val Cys Val Ala Ile Glu Tyr Arg Met Arg Arg Gly Gln Arg Asp

1 5 10 15

Arg Ala Pro Ala Ser Ala Asp Glu Glu Arg Gly Ser Asp Gly Ser Ser

20 25 30

Ser Ser Ser Asp Asp Asp Val Thr Glu Asp Asp Arg Arg Gly Ser Cys

35 40 45

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50 55 60

Phe Ser Phe Ile Trp Trp Ile Ile Gly Phe Tyr Trp Ile Ser Ala Gly

65 70 75 80

Gly Glu Asp Val Ile Arg Asp Ala Pro Gln Leu Tyr Trp Leu Cys Ile

85 90 95

Val Phe Leu Ala Phe Asp Val Phe Phe Val Val Phe Cys Val Ala Leu

100 105 110

Ala Cys Ile Ile Gly Ile Ala Val Cys Cys Cys Leu Pro Cys Ile Ile

115 120 125

Ala Ile Leu Tyr Ala Val Ser Asp Gln Glu Gly Ala Ser Glu Asp Asp

130 135 140

Ile Arg Gln Ile Pro Arg Tyr Lys Phe Arg Arg Thr Asp Glu Pro Glu

145 150 155 160

Lys Gln Thr Ala Asp Glu Thr Gly Pro Phe Gly Gly Ile Met Thr Glu

165 170 175

Cys Gly Thr Asn Gln Pro Ile Glu Lys Val Leu Ala Pro Glu Asp Ala

180 185 190

Glu Cys Cys Ile Cys Leu Ser Ala Tyr Asp Asp Gly Ala Glu Leu Arg

195 200 205

Glu Leu Pro Cys Gly His His Phe His Cys Ala Cys Ile Asp Lys Trp

210 215 220

Leu His Ile Asn Ala Thr Cys Pro Leu Cys Lys Phe Asn Ile Arg Lys

225 230 235 240

Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Glu Glu Val

245 250

<210>151

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(3720)

<400>151

atg gac gag tca ggc aga gga aca ggt gat gat cat ggc cgg gag acg 48

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1 5 10 15

aag gat gct gcg gcg gcg gcg tcg tcg tcg tcg ggg aag aag gtg ccg 96

Lys Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Val Pro

20 25 30

ctg ttc agc ttg ttc cgg tac gcc gac cgc ctc gac gtg ctg ctg atg 144

Leu Phe Ser Leu Phe Arg Tyr Ala Asp Arg Leu Asp Val Leu Leu Met

35 40 45

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Val Val Gly Thr Val Gly Ala Leu Gly Asn Gly Ile Ser Gln Pro Leu

50 55 60

atg acg gtc ctc ttc ggc aac gtc atc aac tcc ttc ggc gcg aac acc 240

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65 70 75 80

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Ser Gly Ser Val Leu Arg Ser Val Thr Lys Val Lys Val Ser Cys Trp

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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Gly Ala Leu Gly Glu Lys Gly Gly Lys Leu Val Glu Leu Leu Ser Ser

145 150 155 160

ttc atc ggt ggc ttt atc ata gca ttc act aga gga tgg ctt ctc act 528

Phe Ile Gly Gly Phe Ile Ile Ala Phe Thr Arg Gly Trp Leu Leu Thr

165 170 175

ctt gtc atg cta aca tcg cta ccg tta att gct att gcc agt gca gtt 576

Leu Val Met Leu Thr Ser Leu Pro Leu Ile Ala Ile Ala Ser Ala Val

180 185 190

tct gca cag gcc cta act aga gtt tct agc aag aga caa aca tca tat 624

Ser Ala Gln Ala Leu Thr Arg Val Ser Ser Lys Arg Gln Thr Ser Tyr

195 200 205

agt gat gct ggg gac aca gtt gaa cag acc att gga tct ata aga aca 672

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

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Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Gly Lys Leu Ile Ile Glu Lys Gly Tyr Thr

275 280 285

gga gga aaa atc atg act atc ttg ttt gcc gtg ttg acc ggc aat gca 912

Gly Gly Lys Ile Met Thr Ile Leu Phe Ala Val Leu Thr Gly Asn Ala

290 295 300

aca cct gca gtt gct gca gtt gtg gaa ggt caa tct gca gca tac aat 960

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305 310 315 320

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Leu Phe Lys Thr Ile Glu Arg Lys Pro Glu Ile Asp Ser Asp Asp Asn

325 330 335

aat ggc atg gtt tta gaa gat atg aat ggc gat att gag cta aag gat 1056

Asn Gly Met Val Leu Glu Asp Met Asn Gly Asp Ile Glu Leu Lys Asp

340 345 350

gtg tac ttt cgt tac cct gca aga cca gag cag ttg ata ttg gat gga 1104

Val Tyr Phe Arg Tyr Pro Ala Arg Pro Glu Gln Leu Ile Leu Asp Gly

355 360 365

ttg tcg tta caa gta gcg agt gga aca aca atg gct ata gtc gga gag 1152

Leu Ser Leu Gln Val Ala Ser Gly Thr Thr Met Ala Ile Val Gly Glu

370 375 380

agt gga agc gga aag tca act gtt atc agc cta gtc gaa aga ttc tac 1200

Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Val Ile Ser Leu Val Glu Arg Phe Tyr

385 390 395 400

gat cca cag tct ggc gaa gtt tta ata gat gga att agc atc aag aaa 1248

Asp Pro Gln Ser Gly Glu Val Leu Ile Asp Gly Ile Ser Ile Lys Lys

405 410 415

ctg aga ctt gat tgg ata aga ggg aag atc ggt ctt gtt agc caa gag 1296

Leu Arg Leu Asp Trp Ile Arg Gly Lys Ile Gly Leu Val Ser Gln Glu

420 425 430

cct ctg ctt ttt atg gcc tcc att aaa gat aac ata ata tat ggt aaa 1344

Pro Leu Leu Phe Met Ala Ser Ile Lys Asp Asn Ile Ile Tyr Gly Lys

435 440 445

aaa gat gca acg ctt gaa gag atc aag aga gca gcg gag ctt gca aat 1392

Lys Asp Ala Thr Leu Glu Glu Ile Lys Arg Ala Ala Glu Leu Ala Asn

450 455 460

gca gct aac ttc att gac aag tta cca aat ggt tat gat act tta gtt 1440

Ala Ala Asn Phe Ile Asp Lys Leu Pro Asn Gly Tyr Asp Thr Leu Val

465 470 475 480

ggc cag cgc ggt act cag ctc tct gga gga caa aaa cag aga att gca 1488

Gly Gln Arg Gly Thr Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Ile Ala

485 490 495

att gca aga gcc atc ctc aaa gat cca aaa atc ctt ttg ctc gat gaa 1536

Ile Ala Arg Ala Ile Leu Lys Asp Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu

500 505 510

gca aca agt gca ctt gat gtg gag tct gag agg ata gtt cag gag gca 1584

Ala Thr Ser Ala Leu Asp Val Glu Ser Glu Arg Ile Val Gln Glu Ala

515 520 525

cta aat aga atg atg gta gaa aga acc aca ctc gtt gtc gct cat cgt 1632

Leu Asn Arg Met Met Val Glu Arg Thr Thr Leu Val Val Ala His Arg

530 535 540

ttg agc act gtg agg aat gtt gat tgc atc aca gtc gtc cgc aaa gga 1680

Leu Ser Thr Val Arg Asn Val Asp Cys Ile Thr Val Val Arg Lys Gly

545 550 555 560

aaa ata gtt gaa caa ggt cct cat gat gca ctg gtg aag gat ccc gat 1728

Lys Ile Val Glu Gln Gly Pro His Asp Ala Leu Val Lys Asp Pro Asp

565 570 575

gga gct tac tcc cag cta att agg cta caa gag act cat cgt gat gaa 1776

Gly Ala Tyr Ser Gln Leu Ile Arg Leu Gln Glu Thr His Arg Asp Glu

580 585 590

agg cat aaa cta cca gat tcc aga tca aaa agt act agt ttg tca ttc 1824

Arg His Lys Leu Pro Asp Ser Arg Ser Lys Ser Thr Ser Leu Ser Phe

595 600 605

aga cga tca aga act aaa gat ttt ctc agc aag agc aac agg tat tcc 1872

Arg Arg Ser Arg Thr Lys Asp Phe Leu Ser Lys Ser Asn Arg Tyr Ser

610 615 620

ttc aag agc ccc tta gga ttg cct gtt gat ata cat gag gat gga atg 1920

Phe Lys Ser Pro Leu Gly Leu Pro Val Asp Ile His Glu Asp Gly Met

625 630 635 640

aca agc gaa caa caa aag gtt gac cac tct gac agt aag gcc att aaa 1968

Thr Ser Glu Gln Gln Lys Val Asp His Ser Asp Ser Lys Ala Ile Lys

645 650 655

aaa aca cca ttt gga cgg ctt ttt aat ctt aat aag cca gaa gtg cca 2016

Lys Thr Pro Phe Gly Arg Leu Phe Asn Leu Asn Lys Pro Glu Val Pro

660 665 670

gtt ctt ttg tta ggt tct ata gca gca tca gtg cat gga gtc att ttg 2064

Val Leu Leu Leu Gly Ser Ile Ala Ala Ser Val His Gly Val Ile Leu

675 680 685

cca cta tac ggt ata ata atg cca ggt gtt cta aaa tca ttc tat gaa 2112

Pro Leu Tyr Gly Ile Ile Met Pro Gly Val Leu Lys Ser Phe Tyr Glu

690 695 700

ccg cca gat cag ctg cga aaa gat tct aga ttt tgg gca ttg atg tct 2160

Pro Pro Asp Gln Leu Arg Lys Asp Ser Arg Phe Trp Ala Leu Met Ser

705 710 715 720

gtt gtt ctg ggg gtt gct tgt ttg att tca atc cca gca gaa tat ttt 2208

Val Val Leu Gly Val Ala Cys Leu Ile Ser Ile Pro Ala Glu Tyr Phe

725 730 735

ttg ttt gga att gct ggg gga aag ctt ata cag cgt gtc cgt aca ctg 2256

Leu Phe Gly Ile Ala Gly Gly Lys Leu Ile Gln Arg Val Arg Thr Leu

740 745 750

tca ttt caa aga att atg cac caa gag gtt gct tgg ttt gat aag ccc 2304

Ser Phe Gln Arg Ile Met His Gln Glu Val Ala Trp Phe Asp Lys Pro

755 760 765

tcc aat tcc agt ggg gca ctt ggt aca agg ctc tca gtc gat gcg ttg 2352

Ser Asn Ser Ser Gly Ala Leu Gly Thr Arg Leu Ser Val Asp Ala Leu

770 775 780

aat gtc cgc cgt tta gta gga gat aac ctg gcc ctt ata gtc cag gct 2400

Asn Val Arg Arg Leu Val Gly Asp Asn Leu Ala Leu Ile Val Gln Ala

785 790 795 800

gta gct aca cta atc act ggc ttt gcc ata gct ttt gcg gca gat tgg 2448

Val Ala Thr Leu Ile Thr Gly Phe Ala Ile Ala Phe Ala Ala Asp Trp

805 810 815

agg ctt gca ctg atc atc act tgt gta att cct tta gtg ggt gca cag 2496

Arg Leu Ala Leu Ile Ile Thr Cys Val Ile Pro Leu Val Gly Ala Gln

820 825 830

ggc tat gct caa gtt aag ttc ttg aag ggg ttc agt gaa gaa tct aag 2544

Gly Tyr Ala Gln Val Lys Phe Leu Lys Gly Phe Ser Glu Glu Ser Lys

835 840 845

gag atg tat gag gat gca aac caa gtt gcg gct gac gct gta ggc agc 2592

Glu Met Tyr Glu Asp Ala Asn Gln Val Ala Ala Asp Ala Val Gly Ser

850 855 860

atc aga act gta gca tct ttc tgt tca gag aaa aga gtg gtg gca ata 2640

Ile Arg Thr Val Ala Ser Phe Cys Ser Glu Lys Arg Val Val Ala Ile

865 870 875 880

tac aac aag aaa tgt gaa gct tta aga aaa cag gga att cga agc gga 2688

Tyr Asn Lys Lys Cys Glu Ala Leu Arg Lys Gln Gly Ile Arg Ser Gly

885 890 895

atc gtt gga ggg att ggc tta agt ttc tca aac ttg atg tta tat ctg 2736

Ile Val Gly Gly Ile Gly Leu Ser Phe Ser Asn Leu Met Leu Tyr Leu

900 905 910

act tac ggt ctt tgc ttc tat gtt ggt gca aag ttc gta agt cag gga 2784

Thr Tyr Gly Leu Cys Phe Tyr Val Gly Ala Lys Phe Val Ser Gln Gly

915 920 925

aaa act act ttt tca gat gtt ttc aaa gtt ttc ttt gct tta gtt ttg 2832

Lys Thr Thr Phe Ser Asp Val Phe Lys Val Phe Phe Ala Leu Val Leu

930 935 940

gca gcc gtt ggt gtt tcg cag tca agt gca ttg tcw act aat gca aca 2880

Ala Ala Val Gly Val Ser Gln Ser Ser Ala Leu Xaa Thr Asn Ala Thr

945 950 955 960

arg gca agg gat tct gcc att tcc att ttt agt att atc gat cgg aag 2928

Xaa Ala Arg Asp Ser Ala Ile Ser Ile Phe Ser Ile Ile Asp Arg Lys

965 970 975

tct agg att gat tca agt agc gac gag gga gcg ata atg gaa aac gtc 2976

Ser Arg Ile Asp Ser Ser Ser Asp Glu Gly Ala Ile Met Glu Asn Val

980 985 990

act ggc agc att gat ttc aat aat gtc agt ttc aag tac cca tca cgc 3024

Thr Gly Ser Ile Asp Phe Asn Asn Val Ser Phe Lys Tyr Pro Ser Arg

995 1000 1005

cct gat gtt caa ata ttc agt gac ttt acc ttg cac att cct tcc 3069

Pro Asp Val Gln Ile Phe Ser Asp Phe Thr Leu His Ile Pro Ser

1010 1015 1020

caa aag acc ata gca ctt gtt gga gaa agc ggt agt ggg aag tcc 3114

Gln Lys Thr Ile Ala Leu Val Gly Glu Ser Gly Ser Gly Lys Ser

1025 1030 1035

acg ata att gct tta tta gag cgt ttc tat gat cct gat tct ggt 3159

Thr Ile Ile Ala Leu Leu Glu Arg Phe Tyr Asp Pro Asp Ser Gly

1040 1045 1050

aat atc tca cta gat gga gtt gaa att aga agc tta aaa gtc agc 3204

Asn Ile Ser Leu Asp Gly Val Glu Ile Arg Ser Leu Lys Val Ser

1055 1060 1065

tgg ttg agg gat cag atg ggg ctt gta ggc cag gag cca gtg ctt 3249

Trp Leu Arg Asp Gln Met Gly Leu Val Gly Gln Glu Pro Val Leu

1070 1075 1080

ttc aac gam aca atc cgt gcc aac ata aca tac ggg aaa cac agt 3294

Phe Asn Xaa Thr Ile Arg Ala Asn Ile Thr Tyr Gly Lys His Ser

1085 1090 1095

gag gta aca gag gaa gag atc act gct gtg gcc aag gca gca aac 3339

Glu Val Thr Glu Glu Glu Ile Thr Ala Val Ala Lys Ala Ala Asn

1100 1105 1110

gcc cat gag ttc gta tca agc ctg cca caa gga tac gac aca gtg 3384

Ala His Glu Phe Val Ser Ser Leu Pro Gln Gly Tyr Asp Thr Val

1115 1120 1125

gta ggt gag aaa ggg gtg caa cta tct ggt ggg caa aaa cag agg 3429

Val Gly Glu Lys Gly Val Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg

1130 1135 1140

gta gca att gca agg gcc atc cta aag gac cct aag ata ctg cta 3474

Val Ala Ile Ala Arg Ala Ile Leu Lys Asp Pro Lys Ile Leu Leu

1145 1150 1155

ctt gat gag gca acc agt gct cta gat gca gaa tca gaa cgt gtt 3519

Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ala Glu Ser Glu Arg Val

1160 1165 1170

gtt caa gat gca ttg gat cga gtc atg gtc aac agg act acc att 3564

Val Gln Asp Ala Leu Asp Arg Val Met Val Asn Arg Thr Thr Ile

1175 1180 1185

gta gtg gca cac cgc ctc tcc aca atc aaa ggg gct gat atg att 3609

Val Val Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Lys Gly Ala Asp Met Ile

1190 1195 1200

gca gtc ctc aag gaa gga aaa att gca gaa aaa gga aag cat gaa 3654

Ala Val Leu Lys Glu Gly Lys Ile Ala Glu Lys Gly Lys His Glu

1205 1210 1215

gca cta ttg cgg atc aag gat ggt gca tat gct tca ctt gta caa 3699

Ala Leu Leu Arg Ile Lys Asp Gly Ala Tyr Ala Ser Leu Val Gln

1220 1225 1230

ctc cgc tct aat tcc gag taa 3720

Leu Arg Ser Asn Ser Glu

1235

<210>152

<211>1239

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<220>

<221>misc_feature

<222>(956)..(956)

<223>The′Xaa′at location 956 stands for Ser.

<220>

<221>misc_feature

<222>(961)..(961)

<223>The′Xaa′at location 961 stands for Arg，or Lys.

<220>

<221>misc_feature

<222>(1086)..(1086)

<223>The′Xaa′at location 1086 stands for Glu，or Asp.

<400>152

Met Asp Glu Ser Gly Arg Gly Thr Gly Asp Asp His Gly Arg Glu Thr

1 5 10 15

Lys Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Val Pro

20 25 30

Leu Phe Ser Leu Phe Arg Tyr Ala Asp Arg Leu Asp Val Leu Leu Met

35 40 45

Val Val Gly Thr Val Gly Ala Leu Gly Asn Gly Ile Ser Gln Pro Leu

50 55 60

Met Thr Val Leu Phe Gly Asn Val Ile Asn Ser Phe Gly Ala Asn Thr

65 70 75 80

Ser Gly Ser Val Leu Arg Ser Val Thr Lys Val Lys Val Ser Cys Trp

85 90 95

Thr Met Ala Gly Glu Arg Gln Ser Ala Arg Ile Arg Ser Leu Tyr Leu

100 105 110

Lys Ala Val Leu Arg Gln Asp Ile Thr Phe Phe Asp Thr Glu Met Thr

115 120 125

Thr Gly Glu Ala Val Ser Arg Met Ser Ser Asp Thr Leu Leu Ile Gln

130 135 140

Gly Ala Leu Gly Glu Lys Gly Gly Lys Leu Val Glu Leu Leu Ser Ser

145 150 155 160

Phe Ile Gly Gly Phe Ile Ile Ala Phe Thr Arg Gly Trp Leu Leu Thr

165 170 175

Leu Val Met Leu Thr Ser Leu Pro Leu Ile Ala Ile Ala Ser Ala Val

180 185 190

Ser Ala Gln Ala Leu Thr Arg Val Ser Ser Lys Arg Gln Thr Ser Tyr

195 200 205

Ser Asp Ala Gly Asp Thr Val Glu Gln Thr Ile Gly Ser Ile Arg Thr

210 215 220

Val Val Ser Phe Asn Gly Glu Lys Lys Ala Ile Ala Met Tyr Arg Asn

225 230 235 240

Phe Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Ala Thr Ile Glu Glu Gly Ile Ile Thr

245 250 255

Gly Phe Gly Met Gly Ser Val Met Cys Val Val Phe Gly Ser Tyr Gly

260 265 270

Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Gly Lys Leu Ile Ile Glu Lys Gly Tyr Thr

275 280 285

Gly Gly Lys Ile Met Thr Ile Leu Phe Ala Val Leu Thr Gly Asn Ala

290 295 300

Thr Pro Ala Val Ala Ala Val Val Glu Gly Gln Ser Ala Ala Tyr Asn

305 310 315 320

Leu Phe Lys Thr Ile Glu Arg Lys Pro Glu Ile Asp Ser Asp Asp Asn

325 330 335

Asn Gly Met Val Leu Glu Asp Met Asn Gly Asp Ile Glu Leu Lys Asp

340 345 350

Val Tyr Phe Arg Tyr Pro Ala Arg Pro Glu Gln Leu Ile Leu Asp Gly

355 360 365

Leu Ser Leu Gln Val Ala Ser Gly Thr Thr Met Ala Ile Val Gly Glu

370 375 380

Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Val Ile Ser Leu Val Glu Arg Phe Tyr

385 390 395 400

Asp Pro Gln Ser Gly Glu Val Leu Ile Asp Gly Ile Ser Ile Lys Lys

405 410 415

Leu Arg Leu Asp Trp Ile Arg Gly Lys Ile Gly Leu Val Ser Gln Glu

420 425 430

Pro Leu Leu Phe Met Ala Ser Ile Lys Asp Asn Ile Ile Tyr Gly Lys

435 440 445

Lys Asp Ala Thr Leu Glu Glu Ile Lys Arg Ala Ala Glu Leu Ala Asn

450 455 460

Ala Ala Asn Phe Ile Asp Lys Leu Pro Asn Gly Tyr Asp Thr Leu Val

465 470 475 480

Gly Gln Arg Gly Thr Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Ile Ala

485 490 495

Ile Ala Arg Ala Ile Leu Lys Asp Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu

500 505 510

Ala Thr Ser Ala Leu Asp Val Glu Ser Glu Arg Ile Val Gln Glu Ala

515 520 525

Leu Asn Arg Met Met Val Glu Arg Thr Thr Leu Val Val Ala His Arg

530 535 540

Leu Ser Thr Val Arg Asn Val Asp Cys Ile Thr Val Val Arg Lys Gly

545 550 555 560

Lys Ile Val Glu Gln Gly Pro His Asp Ala Leu Val Lys Asp Pro Asp

565 570 575

Gly Ala Tyr Ser Gln Leu Ile Arg Leu Gln Glu Thr His Arg Asp Glu

580 585 590

Arg His Lys Leu Pro Asp Ser Arg Ser Lys Ser Thr Ser Leu Ser Phe

595 600 605

Arg Arg Ser Arg Thr Lys Asp Phe Leu Ser Lys Ser Asn Arg Tyr Ser

610 615 620

Phe Lys Ser Pro Leu Gly Leu Pro Val Asp Ile His Glu Asp Gly Met

625 630 635 640

Thr Ser Glu Gln Gln Lys Val Asp His Ser Asp Ser Lys Ala Ile Lys

645 650 655

Lys Thr Pro Phe Gly Arg Leu Phe Asn Leu Asn Lys Pro Glu Val Pro

660 665 670

Val Leu Leu Leu Gly Ser Ile Ala Ala Ser Val His Gly Val Ile Leu

675 680 685

Pro Leu Tyr Gly Ile Ile Met Pro Gly Val Leu Lys Ser Phe Tyr Glu

690 695 700

Pro Pro Asp Gln Leu Arg Lys Asp Ser Arg Phe Trp Ala Leu Met Ser

705 710 715 720

Val Val Leu Gly Val Ala Cys Leu Ile Ser Ile Pro Ala Glu Tyr Phe

725 730 735

Leu Phe Gly Ile Ala Gly Gly Lys Leu Ile Gln Arg Val Arg Thr Leu

740 745 750

Ser Phe Gln Arg Ile Met His Gln Glu Val Ala Trp Phe Asp Lys Pro

755 760 765

Ser Asn Ser Ser Gly Ala Leu Gly Thr Arg Leu Ser Val Asp Ala Leu

770 775 780

Asn Val Arg Arg Leu Val Gly Asp Asn Leu Ala Leu Ile Val Gln Ala

785 790 795 800

Val Ala Thr Leu Ile Thr Gly Phe Ala Ile Ala Phe Ala Ala Asp Trp

805 810 815

Arg Leu Ala Leu Ile Ile Thr Cys Val Ile Pro Leu Val Gly Ala Gln

820 825 830

Gly Tyr Ala Gln Val Lys Phe Leu Lys Gly Phe Ser Glu Glu Ser Lys

835 840 845

Glu Met Tyr Glu Asp Ala Asn Gln Val Ala Ala Asp Ala Val Gly Ser

850 855 860

Ile Arg Thr Val Ala Ser Phe Cys Ser Glu Lys Arg Val Val Ala Ile

865 870 875 880

Tyr Asn Lys Lys Cys Glu Ala Leu Arg Lys Gln Gly Ile Arg Ser Gly

885 890 895

Ile Val Gly Gly Ile Gly Leu Ser Phe Ser Asn Leu Met Leu Tyr Leu

900 905 910

Thr Tyr Gly Leu Cys Phe Tyr Val Gly Ala Lys Phe Val Ser Gln Gly

915 920 925

Lys Thr Thr Phe Ser Asp Val Phe Lys Val Phe Phe Ala Leu Val Leu

930 935 940

Ala Ala Val Gly Val Ser Gln Ser Ser Ala Leu Xaa Thr Asn Ala Thr

945 950 955 960

Xaa Ala Arg Asp Ser Ala Ile Ser Ile Phe Ser Ile Ile Asp Arg Lys

965 970 975

Ser Arg Ile Asp Ser Ser Ser Asp Glu Gly Ala Ile Met Glu Asn Val

980 985 990

Thr Gly Ser Ile Asp Phe Asn Asn Val Ser Phe Lys Tyr Pro Ser Arg

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Pro Asp Val Gln Ile Phe Ser Asp Phe Thr Leu His Ile Pro Ser

1010 1015 1020

Gln Lys Thr Ile Ala Leu Val Gly Glu Ser Gly Ser Gly Lys Ser

1025 1030 1035

Thr Ile Ile Ala Leu Leu Glu Arg Phe Tyr Asp Pro Asp Ser Gly

1040 1045 1050

Asn Ile Ser Leu Asp Gly Val Glu Ile Arg Ser Leu Lys Val Ser

1055 1060 1065

Trp Leu Arg Asp Gln Met Gly Leu Val Gly Gln Glu Pro Val Leu

1070 1075 1080

Phe Asn Xaa Thr Ile Arg Ala Asn Ile Thr Tyr Gly Lys His Ser

1085 1090 1095

Glu Val Thr Glu Glu Glu Ile Thr Ala Val Ala Lys Ala Ala Asn

1100 1105 1110

Ala His Glu Phe Val Ser Ser Leu Pro Gln Gly Tyr Asp Thr Val

1115 1120 1125

Val Gly Glu Lys Gly Val Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg

1130 1135 1140

Val Ala Ile Ala Arg Ala Ile Leu Lys Asp Pro Lys Ile Leu Leu

1145 1150 1155

Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ala Glu Ser Glu Arg Val

1160 1165 1170

Val Gln Asp Ala Leu Asp Arg Val Met Val Asn Arg Thr Thr Ile

1175 1180 1185

Val Val Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Lys Gly Ala Asp Met Ile

1190 1195 1200

Ala Val Leu Lys Glu Gly Lys Ile Ala Glu Lys Gly Lys His Glu

1205 1210 1215

Ala Leu Leu Arg Ile Lys Asp Gly Ala Tyr Ala Ser Leu Val Gln

1220 1225 1230

Leu Arg Ser Asn Ser Glu

1235

<210>153

<211>2625

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(2625)

<400>153

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Met Ala Ala Ala Glu Gln Ser Ala Glu Gln Phe Arg Gly Gln Ala Arg

1 5 10 15

ctc ccg ggg ttc gcg gcg ccc cgg cgg tac gac ctg cgg ctc gtc ccc 96

Leu Pro Gly Phe Ala Ala Pro Arg Arg Tyr Asp Leu Arg Leu Val Pro

20 25 30

gac ctc gac ggg tgc gcc ttc acg gga tct gtg gac gtc tcc gtc gac 144

Asp Leu Asp Gly Cys Ala Phe Thr Gly Ser Val Asp Val Ser Val Asp

35 40 45

gtc acg gcg ccc acc agg ttc ctc gtg ctc aac gcc gcc gag ctc gag 192

Val Thr Ala Pro Thr Arg Phe Leu Val Leu Asn Ala Ala Glu Leu Glu

50 55 60

gtc tcc ccc ggg ggc gtc cag ttc aag ccc cat ggc gcc gag cag gag 240

Val Ser Pro Gly Gly Val Gln Phe Lys Pro His Gly Ala Glu Gln Glu

65 70 75 80

ctg cac cca gcg gag gtt acc aat gtg cca gag gat gag atc ctg att 288

Leu His Pro Ala Glu Val Thr Asn Val Pro Glu Asp Glu Ile Leu Ile

85 90 95

atc cgc ttc aat gag gtt ctt cct gta ggg gag gga act tta gta att 336

Ile Arg Phe Asn Glu Val Leu Pro Val Gly Glu Gly Thr Leu Val Ile

100 105 110

gca ttc aag gga act ctg aac gac aag atg cat ggc ttc tac aga agt 384

Ala Phe Lys Gly Thr Leu Asn Asp Lys Met His Gly Phe Tyr Arg Ser

115 120 125

gtg tat gaa ctc aat ggg gag aag aag aac atg gcg gta acc cag ttt 432

Val Tyr Glu Leu Asn Gly Glu Lys Lys Asn Met Ala Val Thr Gln Phe

130 135 140

gaa cct gct gac gca agg cgt tgt ttt cct tgt tgg gat gag ccc tct 480

Glu Pro Ala Asp Ala Arg Arg Cys Phe Pro Cys Trp Asp Glu Pro Ser

145 150 155 160

ttt aag gct ata ttc aaa att act cta gaa gtt ccg tct gag acc gtt 528

Phe Lys Ala Ile Phe Lys Ile Thr Leu Glu Val Pro Ser Glu Thr Val

165 170 175

gca ttg tca aac atg cca gtg gtt gaa gag aag gtc aat ggc ctt atc 576

Ala Leu Ser Asn Met Pro Val Val Glu Glu Lys Val Asn Gly Leu Ile

180 185 190

aaa gct gtc tat ttt caa gaa aca cca ata atg tca aca tac cta gtg 624

Lys Ala Val Tyr Phe Gln Glu Thr Pro Ile Met Ser Thr Tyr Leu Val

195 200 205

gct gtt att gtt ggc atg ttc gac tat gtg gaa gct ttc acc act gat 672

Ala Val Ile Val Gly Met Phe Asp Tyr Val Glu Ala Phe Thr Thr Asp

210 215 220

ggc act agg gtt cgt gtt tac act caa gtt ggc aag agt gcc cag gga 720

Gly Thr Arg Val Arg Val Tyr Thr Gln Val Gly Lys Ser Ala Gln Gly

225 230 235 240

aag ttt gca cta gag gtt gct gtg aag aca ctg gtc ctc ttc aag gag 768

Lys Phe Ala Leu Glu Val Ala Val Lys Thr Leu Val Leu Phe Lys Glu

245 250 255

tat ttt gct gtg cca tac cca ctc cca aaa atg gac atg att gcc att 816

Tyr Phe Ala Val Pro Tyr Pro Leu Pro Lys Met Asp Met Ile Ala Ile

260 265 270

cct gat ttt gcc tct gga gca atg gag aac tat ggc ttg gtt aca tat 864

Pro Asp Phe Ala Ser Gly Ala Met Glu Asn Tyr Gly Leu Val Thr Tyr

275 280 285

cgt gaa aca gct ttg tta ttt gat gag aaa cac tct gca gct gcg aat 912

Arg Glu Thr Ala Leu Leu Phe Asp Glu Lys His Ser Ala Ala Ala Asn

290 295 300

aag caa agg gtt gca gtt gtg gta gcc cat gaa tta gct cac cag tgg 960

Lys Gln Arg Val Ala Val Val Val Ala His Glu Leu Ala His Gln Trp

305 310 315 320

ttt gga aat ctt gtg acg atg gag tgg tgg aca cac cta tgg ctt aac 1008

Phe Gly Asn Leu Val Thr Met Glu Trp Trp Thr His Leu Trp Leu Asn

325 330 335

gag ggt ttt gcg aca tgg gtc tcc tac tta gct gca gac aat ttc ttt 1056

Glu Gly Phe Ala Thr Trp Val Ser Tyr Leu Ala Ala Asp Asn Phe Phe

340 345 350

cct gaa tgg aat gtt tgg acc caa ttt ctt gag gaa tct aca aca ggt 1104

Pro Glu Trp Asn Val Trp Thr Gln Phe Leu Glu Glu Ser Thr Thr Gly

355 360 365

ttc aag tta gat gcc ctt gca ggg tca cat cca att gag gtc gac gta 1152

Phe Lys Leu Asp Ala Leu Ala Gly Ser His Pro Ile Glu Val Asp Val

370 375 380

aat cac gtt gat gaa ata gat gaa ata ttt gat gct ata agc tac agg 1200

Asn His Val Asp Glu Ile Asp Glu Ile Phe Asp Ala Ile Ser Tyr Arg

385 390 395 400

aaa gga gct gct gtt att cgg atg ctg caa agc tat ctt ggg gct gaa 1248

Lys Gly Ala Ala Val Ile Arg Met Leu Gln Ser Tyr Leu Gly Ala Glu

405 410 415

act ttt cag aaa tct ctg gcc gca tac atc gaa aag ttc gca tat tca 1296

Thr Phe Gln Lys Ser Leu Ala Ala Tyr Ile Glu Lys Phe Ala Tyr Ser

420 425 430

aat gcc aag act gag gac ttg tgg gct gcc ctt gaa gag ggg tct ggt 1344

Asn Ala Lys Thr Glu Asp Leu Trp Ala Ala Leu Glu Glu Gly Ser Gly

435 440 445

gaa cca gtg aaa aca tta atg cat tca tgg aca aag cag caa ggg tac 1392

Glu Pro Val Lys Thr Leu Met His Ser Trp Thr Lys Gln Gln Gly Tyr

450 455 460

cct gtt gtt aat gtg aag ctc aag gat gga aag cta gag atg gag cag 1440

Pro Val Val Asn Val Lys Leu Lys Asp Gly Lys Leu Glu Met Glu Gln

465 470 475 480

aca cag ttc cta tca agc ggg gct gaa gga gtt ggg caa tgg gtg gtt 1488

Thr Gln Phe Leu Ser Ser Gly Ala Glu Gly Val Gly Gln Trp Val Val

485 490 495

ccc atc aca ctg tgt tgc tgt tcg tac tca cgt caa gag aag ttc ctt 1536

Pro Ile Thr Leu Cys Cys Cys Ser Tyr Ser Arg Gln Glu Lys Phe Leu

500 505 510

ttt aat gga aag caa gag gat ttt aat ttg tca ggg ctt gta gaa tgt 1584

Phe Asn Gly Lys Gln Glu Asp Phe Asn Leu Ser Gly Leu Val Glu Cys

515 520 525

caa aag aaa gaa gac ttc tgg att aaa ctt aat gtc aat cag act ggc 1632

Gln Lys Lys Glu Asp Phe Trp Ile Lys Leu Asn Val Asn Gln Thr Gly

530 535 540

ttc tat aga gtg agc tat gat gag gaa ctt gca tct cga ctt aga tat 1680

Phe Tyr Arg Val Ser Tyr Asp Glu Glu Leu Ala Ser Arg Leu Arg Tyr

545 550 555 560

gca att gaa gcc aac aaa ctg agt gca gca gac aga tat ggt gta ctt 1728

Ala Ile Glu Ala Asn Lys Leu Ser Ala Ala Asp Arg Tyr Gly Val Leu

565 570 575

gat gac aca tat gcc ctc tgt atg gct ggc aaa cag aag cta gtc tcc 1776

Asp Asp Thr Tyr Ala Leu Cys Met Ala Gly Lys Gln Lys Leu Val Ser

580 585 590

tta ttg cat ttg att gct gcg tac aag gat gaa acc gag tat act gtg 1824

Leu Leu His Leu Ile Ala Ala Tyr Lys Asp Glu Thr Glu Tyr Thr Val

595 600 605

ctc gcc aca agt ctg agc att gtc gag atg gtg gct gtt gct gct cct 1872

Leu Ala Thr Ser Leu Ser Ile Val Glu Met Val Ala Val Ala Ala Pro

610 615 620

gag ggg ttg ggc aag ctg aaa aag ttc ctg att gac ttt ctt gag cca 1920

Glu Gly Leu Gly Lys Leu Lys Lys Phe Leu Ile Asp Phe Leu Glu Pro

625 630 635 640

ttt gca cag aga att ggt tgg gat gct aaa agc ggt gag ggt cac ttg 1968

Phe Ala Gln Arg Ile Gly Trp Asp Ala Lys Ser Gly Glu Gly His Leu

645 650 655

gat gca tta ttg aga ggt aca ctt tta act gct ctg gca gaa ctt ggc 2016

Asp Ala Leu Leu Arg Gly Thr Leu Leu Thr Ala Leu Ala Glu Leu Gly

660 665 670

cat gaa gct aca ata aat gaa gct gta cgc cga ttt aac atc ttt gtg 2064

His Glu Ala Thr Ile Asn Glu Ala Val Arg Arg Phe Asn Ile Phe Val

675 680 685

gaa gat aga gaa aca cca cta ctc cct cca gat gtt cga aag gcg gca 2112

Glu Asp Arg Glu Thr Pro Leu Leu Pro Pro Asp Val Arg Lys Ala Ala

690 695 700

tat gtt gct ttg atg cag aca gtg aac aaa tca aac aga gcc ggc tat 2160

Tyr Val Ala Leu Met Gln Thr Val Asn Lys Ser Asn Arg Ala Gly Tyr

705 710 715 720

gaa tca cta ttg aag atc tat aaa gaa act gat ctg agc cag gaa aaa 2208

Glu Ser Leu Leu Lys Ile Tyr Lys Glu Thr Asp Leu Ser Gln Glu Lys

725 730 735

gtc aga att tta ggt tct cta gca tct tgc cct gat cct gat gtt gtt 2256

Val Arg Ile Leu Gly Ser Leu Ala Ser Cys Pro Asp Pro Asp Val Val

740 745 750

cgt gat aca ctg gac ttc atg ctg tca cct gag gtg agg aat cag gac 2304

Arg Asp Thr Leu Asp Phe Met Leu Ser Pro Glu Val Arg Asn Gln Asp

755 760 765

tct ata ttt ttg ctt aga gga gtc ggt gca gcg gga cat gag gtg gca 2352

Ser Ile Phe Leu Leu Arg Gly Val Gly Ala Ala Gly His Glu Val Ala

770 775 780

tgg aca tgg ttg aag gaa aag tgg gac tac att tca gac acc ttc tct 2400

Trp Thr Trp Leu Lys Glu Lys Trp Asp Tyr Ile Ser Asp Thr Phe Ser

785 790 795 800

gga act ctt ctc acc tat ttc gtt tcc acc acc gtc tca ccg ctg cgc 2448

Gly Thr Leu Leu Thr Tyr Phe Val Ser Thr Thr Val Ser Pro Leu Arg

805 810 815

acc gat gaa atg ggc gac gac gcg gag gag ttc ttc aag agc agg acg 2496

Thr Asp Glu Met Gly Asp Asp Ala Glu Glu Phe Phe Lys Ser Arg Thr

820 825 830

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Lys Ala Asn Ile Ala Arg Thr Val Lys Gln Ser Ile Glu Arg Val Arg

835 840 845

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Ile Asn Ala Lys Trp Val Glu Ser Thr Arg Ala Glu Ala Asn Leu Gly

850 855 860

aat gtc ctc aag gaa att tct cac gac cac tga 2625

Asn Val Leu Lys Glu Ile Ser His Asp His

865 870

<210>154

<211>874

<212>PRT

<213>Oryza sativa

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Met Ala Ala Ala Glu Gln Ser Ala Glu Gln Phe Arg Gly Gln Ala Arg

1 5 10 15

Leu Pro Gly Phe Ala Ala Pro Arg Arg Tyr Asp Leu Arg Leu Val Pro

20 25 30

Asp Leu Asp Gly Cys Ala Phe Thr Gly Ser Val Asp Val Ser Val Asp

35 40 45

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50 55 60

Val Ser Pro Gly Gly Val Gln Phe Lys Pro His Gly Ala Glu Gln Glu

65 70 75 80

Leu His Pro Ala Glu Val Thr Asn Val Pro Glu Asp Glu Ile Leu Ile

85 90 95

Ile Arg Phe Asn Glu Val Leu Pro Val Gly Glu Gly Thr Leu Val Ile

100 105 110

Ala Phe Lys Gly Thr Leu Asn Asp Lys Met His Gly Phe Tyr Arg Ser

115 120 125

Val Tyr Glu Leu Asn Gly Glu Lys Lys Asn Met Ala Val Thr Gln Phe

130 135 140

Glu Pro Ala Asp Ala Arg Arg Cys Phe Pro Cys Trp Asp Glu Pro Ser

145 150 155 160

Phe Lys Ala Ile Phe Lys Ile Thr Leu Glu Val Pro Ser Glu Thr Val

165 170 175

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180 185 190

Lys Ala Val Tyr Phe Gln Glu Thr Pro Ile Met Ser Thr Tyr Leu Val

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Ala Val Ile Val Gly Met Phe Asp Tyr Val Glu Ala Phe Thr Thr Asp

210 215 220

Gly Thr Arg Val Arg Val Tyr Thr Gln Val Gly Lys Ser Ala Gln Gly

225 230 235 240

Lys Phe Ala Leu Glu Val Ala Val Lys Thr Leu Val Leu Phe Lys Glu

245 250 255

Tyr Phe Ala Val Pro Tyr Pro Leu Pro Lys Met Asp Met Ile Ala Ile

260 265 270

Pro Asp Phe Ala Ser Gly Ala Met Glu Asn Tyr Gly Leu Val Thr Tyr

275 280 285

Arg Glu Thr Ala Leu Leu Phe Asp Glu Lys His Ser Ala Ala Ala Asn

290 295 300

Lys Gln Arg Val Ala Val Val Val Ala His Glu Leu Ala His Gln Trp

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Phe Gly Asn Leu Val Thr Met Glu Trp Trp Thr His Leu Trp Leu Asn

325 330 335

Glu Gly Phe Ala Thr Trp Val Ser Tyr Leu Ala Ala Asp Asn Phe Phe

340 345 350

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355 360 365

Phe Lys Leu Asp Ala Leu Ala Gly Ser His Pro Ile Glu Val Asp Val

370 375 380

Asn His Val Asp Glu Ile Asp Glu Ile Phe Asp Ala Ile Ser Tyr Arg

385 390 395 400

Lys Gly Ala Ala Val Ile Arg Met Leu Gln Ser Tyr Leu Gly Ala Glu

405 410 415

Thr Phe Gln Lys Ser Leu Ala Ala Tyr Ile Glu Lys Phe Ala Tyr Ser

420 425 430

Asn Ala Lys Thr Glu Asp Leu Trp Ala Ala Leu Glu Glu Gly Ser Gly

435 440 445

Glu Pro Val Lys Thr Leu Met His Ser Trp Thr Lys Gln Gln Gly Tyr

450 455 460

Pro Val Val Asn Val Lys Leu Lys Asp Gly Lys Leu Glu Met Glu Gln

465 470 475 480

Thr Gln Phe Leu Ser Ser Gly Ala Glu Gly Val Gly Gln Trp Val Val

485 490 495

Pro Ile Thr Leu Cys Cys Cys Ser Tyr Ser Arg Gln Glu Lys Phe Leu

500 505 510

Phe Asn Gly Lys Gln Glu Asp Phe Asn Leu Ser Gly Leu Val Glu Cys

515 520 525

Gln Lys Lys Glu Asp Phe Trp Ile Lys Leu Asn Val Asn Gln Thr Gly

530 535 540

Phe Tyr Arg Val Ser Tyr Asp Glu Glu Leu Ala Ser Arg Leu Arg Tyr

545 550 555 560

Ala Ile Glu Ala Asn Lys Leu Ser Ala Ala Asp Arg Tyr Gly Val Leu

565 570 575

Asp Asp Thr Tyr Ala Leu Cys Met Ala Gly Lys Gln Lys Leu Val Ser

580 585 590

Leu Leu His Leu Ile Ala Ala Tyr Lys Asp Glu Thr Glu Tyr Thr Val

595 600 605

Leu Ala Thr Ser Leu Ser Ile Val Glu Met Val Ala Val Ala Ala Pro

610 615 620

Glu Gly Leu Gly Lys Leu Lys Lys Phe Leu Ile Asp Phe Leu Glu Pro

625 630 635 640

Phe Ala Gln Arg Ile Gly Trp Asp Ala Lys Ser Gly Glu Gly His Leu

645 650 655

Asp Ala Leu Leu Arg Gly Thr Leu Leu Thr Ala Leu Ala Glu Leu Gly

660 665 670

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675 680 685

Glu Asp Arg Glu Thr Pro Leu Leu Pro Pro Asp Val Arg Lys Ala Ala

690 695 700

Tyr Val Ala Leu Met Gln Thr Val Asn Lys Ser Asn Arg Ala Gly Tyr

705 710 715 720

Glu Ser Leu Leu Lys Ile Tyr Lys Glu Thr Asp Leu Ser Gln Glu Lys

725 730 735

Val Arg Ile Leu Gly Ser Leu Ala Ser Cys Pro Asp Pro Asp Val Val

740 745 750

Arg Asp Thr Leu Asp Phe Met Leu Ser Pro Glu Val Arg Asn Gln Asp

755 760 765

Ser Ile Phe Leu Leu Arg Gly Val Gly Ala Ala Gly His Glu Val Ala

770 775 780

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785 790 795 800

Gly Thr Leu Leu Thr Tyr Phe Val Ser Thr Thr Val Ser Pro Leu Arg

805 810 815

Thr Asp Glu Met Gly Asp Asp Ala Glu Glu Phe Phe Lys Ser Arg Thr

820 825 830

Lys Ala Asn Ile Ala Arg Thr Val Lys Gln Ser Ile Glu Arg Val Arg

835 840 845

Ile Asn Ala Lys Trp Val Glu Ser Thr Arg Ala Glu Ala Asn Leu Gly

850 855 860

Asn Val Leu Lys Glu Ile Ser His Asp His

865 870

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<220>

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1 5 10 15

gat cac acg gat ggg ttg atg gat ttt gaa gat act gaa gtg aga tct 96

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20 25 30

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35 40 45

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Val Val Ile Pro Lys Gly Glu Ser Val Gln Leu Leu Pro Arg Pro Pro

50 55 60

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Ser Ile Ile Ala Ser Gln Val Asp Leu Val Glu Ser Phe Lys Leu Lys

65 70 75 80

tgg gaa tct ata ggc cag gag cca aac gca tgc ctc aga att ctt ccg 288

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85 90 95

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Gln Phe Val Gly Val Glu Glu Gly Gly Lys Ser Val Lys Gln Glu Ala

100 105 110

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Ala Thr Glu Leu Thr Asp Ser Asp Asn Ser Asp Asp Met Asp

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<210>156

<211>126

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20 25 30

Ser Glu Glu Thr Asp Ala Leu Glu Glu Ala Arg Leu Ala Ile Glu Gln

35 40 45

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50 55 60

Ser Ile Ile Ala Ser Gln Val Asp Leu Val Glu Ser Phe Lys Leu Lys

65 70 75 80

Trp Glu Ser Ile Gly Gln Glu Pro Asn Ala Cys Leu Arg Ile Leu Pro

85 90 95

Gln Phe Val Gly Val Glu Glu Gly Gly Lys Ser Val Lys Gln Glu Ala

100 105 110

Ala Thr Glu Leu Thr Asp Ser Asp Asn Ser Asp Asp Met Asp

115 120 125

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(528)

<400>157

cca cgc gtc cgg acg gtg gcc tcg gcg cgc gac ctc aag aac gtc aac 48

Pro Arg Val Arg Thr Val Ala Ser Ala Arg Asp Leu Lys Asn Val Asn

1 5 10 15

tgg cgc aac ggc gac ctc aag ccc tac gcc gtc gtg tgg atc gac gac 96

Trp Arg Asn Gly Asp Leu Lys Pro Tyr Ala Val Val Trp Ile Asp Asp

20 25 30

ggc gcc aag tgc tcc acc cgc gtc gac ctc gac aac gcc gac aac ccc 144

Gly Ala Lys Cys Ser Thr Arg Val Asp Leu Asp Asn Ala Asp Asn Pro

35 40 45

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Thr Trp Asp Asp Lys Leu Thr Val Pro Leu Pro Pro Ser Thr Arg Leu

50 55 60

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65 70 75 80

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Gly Val Lys Pro Leu Val Gly Ser Ala Arg Leu Pro Leu Arg Asp Val

85 90 95

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Leu Ala Asp Thr Gly Ile Gly Ala Arg Ala Ser Arg Ser Leu Arg Leu

100 105 110

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Lys Arg Pro Ser Gly Arg Pro His Gly Arg Leu Glu Val Arg Val Ala

115 120 125

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130 135 140

ccc tac cac cag cag acg aac cgt gac ccc tac gcc tac ggt aac act 480

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145 150 155 160

aca act ggt ggc tat ggc tat gcc tat ggc ggt acc cct ttc cta taa 528

Thr Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala Tyr Gly Gly Thr Pro Phe Leu

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<210>158

<211>175

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1 5 10 15

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Asp Asp Ala Val Leu Tyr Leu Asp Val Val His Ala Asn Ala Thr Asp

65 70 75 80

Gly Val Lys Pro Leu Val Gly Ser Ala Arg Leu Pro Leu Arg Asp Val

85 90 95

Leu Ala Asp Thr Gly Ile Gly Ala Arg Ala Ser Arg Ser Leu Arg Leu

100 105 110

Lys Arg Pro Ser Gly Arg Pro His Gly Arg Leu Glu Val Arg Val Ala

115 120 125

Val Arg Glu Pro Lys Arg Tyr Tyr Asp Pro Ser Pro Ala Tyr Pro Ala

130 135 140

Pro Tyr His Gln Gln Thr Asn Arg Asp Pro Tyr Ala Tyr Gly Asn Thr

145 150 155 160

Thr Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala Tyr Gly Gly Thr Pro Phe Leu

165 170 175

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

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<221>CDS

<222>(1)..(687)

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1 5 10 15

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Leu Glu Arg Glu Ser Val Ile Pro Ile Met Lys Pro Lys Leu Ile Met

20 25 30

aag ctc gcc tac ctc atc gaa caa caa tct gac aga gaa gaa ttc ttg 144

Lys Leu Ala Tyr Leu Ile Glu Gln Gln Ser Asp Arg Glu Glu Phe Leu

35 40 45

aag ctc tgc aag agg att gag tac acc att agg gcc tgg tat cat ctc 192

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50 55 60

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65 70 75 80

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Gly Ala Gln Lys Leu Gln Gln Gln Asn Phe Ser Thr Glu Glu Val Asp

85 90 95

aca ctc gag cag aac ttc ctg acc tat ttc ttt cag gtg atg caa aaa 336

Thr Leu Glu Gln Asn Phe Leu Thr Tyr Phe Phe Gln Val Met Gln Lys

100 105 110

agc aat ttc aac ata tta tca gat gat gag gtt gag ctt gct cat tct 384

Ser Asn Phe Asn Ile Leu Ser Asp Asp Glu Val Glu Leu Ala His Ser

115 120 125

gga caa tat ctg ctg aat ctt ccc atc aaa gtt gat gaa gca aag tta 432

Gly Gln Tyr Leu Leu Asn Leu Pro Ile Lys Val Asp Glu Ala Lys Leu

130 135 140

gat aac aaa ctt ttg tca aag tat ttt aaa gag cac cat cac gac aac 480

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145 150 155 160

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Leu Pro Glu Phe Ser Asp Lys Tyr Val Ile Phe Arg Arg Gly Ile Gly

165 170 175

ctg gat cgc act agc aac ttt ttc ttt atg gag aaa gtg gac atg atc 576

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180 185 190

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195 200 205

ctc ttc tca aga aag aaa agt gtt agg cca aag aca gat tcc aag aag 672

Leu Phe Ser Arg Lys Lys Ser Val Arg Pro Lys Thr Asp Ser Lys Lys

210 215 220

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Asn Asp Asp Leu Val

225

<210>160

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

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1 5 10 15

Leu Glu Arg Glu Ser Val Ile Pro Ile Met Lys Pro Lys Leu Ile Met

20 25 30

Lys Leu Ala Tyr Leu Ile Glu Gln Gln Ser Asp Arg Glu Glu Phe Leu

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Lys Leu Cys Lys Arg Ile Glu Tyr Thr Ile Arg Ala Trp Tyr His Leu

50 55 60

Gln Phe Asp Asp Met Met Glu Leu Phe Ala Leu Phe Asp Pro Val His

65 70 75 80

Gly Ala Gln Lys Leu Gln Gln Gln Asn Phe Ser Thr Glu Glu Val Asp

85 90 95

Thr Leu Glu Gln Asn Phe Leu Thr Tyr Phe Phe Gln Val Met Gln Lys

100 105 110

Ser Asn Phe Asn Ile Leu Ser Asp Asp Glu Val Glu Leu Ala His Ser

115 120 125

Gly Gln Tyr Leu Leu Asn Leu Pro Ile Lys Val Asp Glu Ala Lys Leu

130 135 140

Asp Asn Lys Leu Leu Ser Lys Tyr Phe Lys Glu His His His Asp Asn

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Leu Pro Glu Phe Ser Asp Lys Tyr Val Ile Phe Arg Arg Gly Ile Gly

165 170 175

Leu Asp Arg Thr Ser Asn Phe Phe Phe Met Glu Lys Val Asp Met Ile

180 185 190

Ile Ala Arg Ala Trp Arg Trp Phe Leu Glu Lys Thr Arg Leu Gln Lys

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Leu Phe Ser Arg Lys Lys Ser Val Arg Pro Lys Thr Asp Ser Lys Lys

210 215 220

Asn Asp Asp Leu Val

225

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

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gag aga gat atc agt atg gtt aac agt tat ccc cca tct gct ttt gat 48

Glu Arg Asp Ile Ser Met Val Asn Ser Tyr Pro Pro Ser Ala Phe Asp

1 5 10 15

tgc aaa ggt tgg aat tca gca tct att ttc att tat gaa tct gat gag 96

Cys Lys Gly Trp Asn Ser Ala Ser Ile Phe Ile Tyr Glu Ser Asp Glu

20 25 30

gaa atc cag tgc ctt ctt gac tgg tta aga gac tat gac cca agg gag 144

Glu Ile Gln Cys Leu Leu Asp Trp Leu Arg Asp Tyr Asp Pro Arg Glu

35 40 45

aag gaa ctg aaa gac tct atc ttg cag tgg caa aga cat ttc tgt cat 192

Lys Glu Leu Lys Asp Ser Ile Leu Gln Trp Gln Arg His Phe Cys His

50 55 60

caa agc agt tct cct ctc gtt gat cct cca att tct ggt cca aag ggt 240

Gln Ser Ser Ser Pro Leu Val Asp Pro Pro Ile Ser Gly Pro Lys Gly

65 70 75 80

gaa cag ctt atg gag ctt cca aat acc aag gct gca gta att ttg gaa 288

Glu Gln Leu Met Glu Leu Pro Asn Thr Lys Ala Ala Val Ile Leu Glu

85 90 95

caa aag tat ggt ctg caa ttg gac cag gac aca agt gat cta ccg aaa 336

Gln Lys Tyr Gly Leu Gln Leu Asp Gln Asp Thr Ser Asp Leu Pro Lys

100 105 110

aag cga gga aag aag ata aag tta agt tct gaa gat aga aca tat cgc 384

Lys Arg Gly Lys Lys Ile Lys Leu Ser Ser Glu Asp Arg Thr Tyr Arg

115 120 125

tgc gac tgt ttg gaa cct gta tgg cct tct cga tac cat tgt tta aca 432

Cys Asp Cys Leu Glu Pro Val Trp Pro Ser Arg Tyr His Cys Leu Thr

130 135 140

tgt cat gag act tat ctc ata tct aca gag ttt gag ggg cat aat gat 480

Cys His Glu Thr Tyr Leu Ile Ser Thr Glu Phe Glu Gly His Asn Asp

145 150 155 160

gga aaa tgc agt aaa atc cac cag tct cct gat gaa agc aga gaa aat 528

Gly Lys Cys Ser Lys Ile His Gln Ser Pro Asp Glu Ser Arg Glu Asn

165 170 175

gat gag cca aaa gtg aag gtt acc aaa tct gat acg aag gaa aaa gat 576

Asp Glu Pro Lys Val Lys Val Thr Lys Ser Asp Thr Lys Glu Lys Asp

180 185 190

tcc ctt gaa tgt agc tct gtc att gaa ccg tcc agt gac aga aaa ttg 624

Ser Leu Glu Cys Ser Ser Val Ile Glu Pro Ser Ser Asp Arg Lys Leu

195 200 205

atg caa tgc cca tat gac ttt gaa gaa att tgc aga aag ttc gtc aca 672

Met Gln Cys Pro Tyr Asp Phe Glu Glu Ile Cys Arg Lys Phe Val Thr

210 215 220

aat gat tcg aac aag gag aca gta aag cag att gga ctt aat ggg tcc 720

Asn Asp Ser Asn Lys Glu Thr Val Lys Gln Ile Gly Leu Asn Gly Ser

225 230 235 240

aat gga gtt cca tca ttt gtg cct tca cct gca ttt ttt ctt gaa cct 768

Asn Gly Val Pro Ser Phe Val Pro Ser Pro Ala Phe Phe Leu Glu Pro

245 250 255

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Ala Ile Val Gln Ser Gln Asn Xaa Lys Asp Asp Glu Leu Lys Asp Trp

260 265 270

acc tcc tct tta gag gaa tgc aat gca atg tct gct caa aag cta gtt 864

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275 280 285

caa gag gtt tcc aaa tct ggt caa agt tgt cct ggc aat gtg ggt gat 912

Gln Glu Val Ser Lys Ser Gly Gln Ser Cys Pro Gly Asn Val Gly Asp

290 295 300

gag aag gtg caa aaa tct aaa aag ccc acc cct gat aat act tct ggt 960

Glu Lys Val Gln Lys Ser Lys Lys Pro Thr Pro Asp Asn Thr Ser Gly

305 310 315 320

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Glu Glu Ala His Ser Thr Thr Gly Lys Pro Thr Arg Leu Leu Ala Val

325 330 335

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Asn Gly Gly Leu Val Pro Glu Ser Ser Leu Arg Pro Leu Ile Gly Arg

340 345 350

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Asn Ser His Ile Leu Lys Gln Gln Lys Ile Asn Leu Leu Asp Ile Glu

355 360 365

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Ala Ala Leu Pro Glu Glu Ala Leu Arg Ala Ser Lys Cys Gln Gln Ile

370 375 380

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Arg Arg Arg Ser Trp

385

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<213>Oryza sativa

<220>

<221>misc_feature

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<223>The′Xaa′at location 264 stands for Arg.

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Glu Arg Asp Ile Ser Met Val Asn Ser Tyr Pro Pro Ser Ala Phe Asp

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Cys Lys Gly Trp Asn Ser Ala Ser Ile Phe Ile Tyr Glu Ser Asp Glu

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Lys Glu Leu Lys Asp Ser Ile Leu Gln Trp Gln Arg His Phe Cys His

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65 70 75 80

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Lys Arg Gly Lys Lys Ile Lys Leu Ser Ser Glu Asp Arg Thr Tyr Arg

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Gly Lys Cys Ser Lys Ile His Gln Ser Pro Asp Glu Ser Arg Glu Asn

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Asn Asp Ser Asn Lys Glu Thr Val Lys Gln Ile Gly Leu Asn Gly Ser

225 230 235 240

Asn Gly Val Pro Ser Phe Val Pro Ser Pro Ala Phe Phe Leu Glu Pro

245 250 255

Ala Ile Val Gln Ser Gln Asn Xaa Lys Asp Asp Glu Leu Lys Asp Trp

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275 280 285

Gln Glu Val Ser Lys Ser Gly Gln Ser Cys Pro Gly Asn Val Gly Asp

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Glu Lys Val Gln Lys Ser Lys Lys Pro Thr Pro Asp Asn Thr Ser Gly

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Glu Glu Ala His Ser Thr Thr Gly Lys Pro Thr Arg Leu Leu Ala Val

325 330 335

Asn Gly Gly Leu Val Pro Glu Ser Ser Leu Arg Pro Leu Ile Gly Arg

340 345 350

Asn Ser His Ile Leu Lys Gln Gln Lys Ile Asn Leu Leu Asp Ile Glu

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370 375 380

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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Glu Leu Gly Phe Asp Arg Ala Ser Val Ile Gln Ala Leu Lys Leu Phe

225 230 235 240

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210 215 220

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165 170 175

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225 230 235 240

aat gct ggt gga gtc act tct act ggt gga aca gga agg a 760

Asn Ala Gly Gly Val Thr Ser Thr Gly Gly Thr Gly Arg

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Asn Ala Gly Gly Val Thr Ser Thr Gly Gly Thr Gly Arg

245 250

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20 25 30

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

gct ggt ggt aag gct gga aac aag gga gct gaa gcc gct cta act gca 528

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Val Val Val Ala Arg Phe Asn Glu Ile Val Thr Asn Leu Leu Leu Gln

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Gly Ala Leu Glu Thr Phe Glu Arg Tyr Ser Val Lys Lys Glu Asn Ile

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Cys Ala Phe Arg Gly Asp Thr Thr His Tyr Gly Ala Val Ala Asn Ser

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Ile Phe Gly Val Leu Thr Cys Asp Asp Met Asp Gln Ala Leu Asn Arg

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Ala Gly Gly Lys Ala Gly Asn Lys Gly Ala Glu Ala Ala Leu Thr Ala

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<213>Oryza sativa

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gga agg aag cct gtt gcg gcc caa cat tac aac aag ggt gat aaa gat 48

Gly Arg Lys Pro Val Ala Ala Gln His Tyr Asn Lys Gly Asp Lys Asp

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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Lys Ser Tyr Tyr Gly Ala Leu Leu Cys Cys Thr Trp Ser Ser Asp Gly

130 135 140

aaa tat ctg ttg act ggt ggt gaa gat gat ctt gtg cag gta tgg agc 480

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Met Asp Asp Arg Lys Ile Val Ala Trp

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<213>Oryza sativa

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Gly Arg Lys Pro Val Ala Ala Gln His Tyr Asn Lys Gly Asp Lys Asp

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Gly Thr Ser Thr Gly Ser Arg Cys Thr Ser Val Ala Trp Val Pro Glu

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Lys Tyr Leu Leu Thr Gly Gly Glu Asp Asp Leu Val Gln Val Trp Ser

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Met Asp Asp Arg Lys Ile Val Ala Trp

165

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

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atg ctg gtg cag cgc agg gac ggc gac acg ggt ccg gcc gtc agg ctc 48

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20 25 30

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35 40 45

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Glu Pro Glu Arg Gln Arg Leu Phe Phe Arg Gly Lys Glu Lys Ser Asp

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

gta aga gct gaa gtt gac aga ctc tct gcc aag gta tgt gat ttg gag 384

Val Arg Ala Glu Val Asp Arg Leu Ser Ala Lys Val Cys Asp Leu Glu

115 120 125

aag agt gtg ttt gca ggg aga aag att gag gat aaa gat ttt gtt gtc 432

Lys Ser Val Phe Ala Gly Arg Lys Ile Glu Asp Lys Asp Phe Val Val

130 135 140

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Leu Thr Glu Leu Leu Met Met Glu Leu Leu Lys Leu Asp Gly Ile Glu

145 150 155 160

gca gag gga gaa gca agg gca caa agg aag gct gag gta cgc cgt gtc 528

Ala Glu Gly Glu Ala Arg Ala Gln Arg Lys Ala Glu Val Arg Arg Val

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caa ggt ctt gtg gag acg ttg gat aag ctg aag gca aga aat gcc aat 576

Gln Gly Leu Val Glu Thr Leu Asp Lys Leu Lys Ala Arg Asn Ala Asn

180 185 190

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acg ttc gac aat ggc atg ggc agc ttg aat gca ccc cca cca cgg gtt 672

Thr Phe Asp Asn Gly Met Gly Ser Leu Asn Ala Pro Pro Pro Arg Val

210 215 220

tct tcc aca caa ata aac acc gac tgg gag caa ttc gac tag 714

Ser Ser Thr Gln Ile Asn Thr Asp Trp Glu Gln Phe Asp

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>172

Met Leu Val Gln Arg Arg Asp Gly Asp Thr Gly Pro Ala Val Arg Leu

1 5 10 15

Arg Val Ser His Gly Ala Ser Phe Arg Asp Val Ala Val Pro Ala His

20 25 30

Ser Thr Phe Gly Glu Leu Lys Gly Val Leu Thr Gln Ala Thr Gly Val

35 40 45

Glu Pro Glu Arg Gln Arg Leu Phe Phe Arg Gly Lys Glu Lys Ser Asp

50 55 60

Asn Glu Phe Leu His Thr Ala Gly Val Lys Asp Gly Ala Lys Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu Glu Lys Pro Ala Pro Ala Asn Val Glu Gln Arg Ala Glu Pro

85 90 95

Val Ile Met Asp Glu Ser Met Met Lys Ala Cys Glu Ala Val Gly Arg

100 105 110

Val Arg Ala Glu Val Asp Arg Leu Ser Ala Lys Val Cys Asp Leu Glu

115 120 125

Lys Ser Val Phe Ala Gly Arg Lys Ile Glu Asp Lys Asp Phe Val Val

130 135 140

Leu Thr Glu Leu Leu Met Met Glu Leu Leu Lys Leu Asp Gly Ile Glu

145 150 155 160

Ala Glu Gly Glu Ala Arg Ala Gln Arg Lys Ala Glu Val Arg Arg Val

165 170 175

Gln Gly Leu Val Glu Thr Leu Asp Lys Leu Lys Ala Arg Asn Ala Asn

180 185 190

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210 215 220

Ser Ser Thr Gln Ile Asn Thr Asp Trp Glu Gln Phe Asp

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

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<222>(1)..(411)

<400>173

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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115 120 125

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130 135

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

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1 5 10 15

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50 55 60

Leu Ala Val Ala Gly Gly Gly Gly Ala Ser Glu Tyr His Phe Arg Leu

65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135

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<213>Oryza sativa

<220>

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<400>175

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1 5 10 15

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20 25 30

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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115 120 125

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145 150 155 160

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210 215 220

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305 310 315 320

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325

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<213>Oryza sativa

<400>176

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180 185 190

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210 215 220

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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Glu Arg Ala Ser Arg Ala Ser Lys Asp Glu Pro Ser Thr Leu Asp Met

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<220>

<221>CDS

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210 215 220

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275 280 285

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Cys Gly

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Arg Phe Lys Arg Gln Lys Ala Ala Glu Thr Lys Leu Leu Glu Ile Lys

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195 200 205

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210 215 220

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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Cys Gly

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100 105 110

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225 230 235 240

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275 280 285

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<212>PRT

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65 70 75 80

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85 90 95

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Val Arg Lys Lys Leu Lys Ile Lys Thr Val Phe Asn Ile Leu Gly Pro

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Leu Leu Asn Pro Ala Arg Val Pro Tyr Ala Val Ile Gly Val Tyr His

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Glu Asn Ile Val Thr Lys Met Ala Lys Ala Ala Gln Lys Phe Gly Met

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Lys Arg Ala Leu Val Val His Ser Lys Gly Leu Asp Glu Ile Ser Pro

195 200 205

Leu Gly Pro Gly Tyr Ile Leu Asp Val Thr Pro Arg Lys Ile Glu Lys

210 215 220

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Asp Leu Lys Gly Gly Asp Pro Ala Phe Asn Ala Lys Val Leu Gln Asp

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Val Leu Ala Gly Gln Arg Gly Ser Ile Ala Asp Ala Leu Val Leu Asn

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Ala Ala Ala Ser Leu Leu Val Ser Gly Lys Val Asn Thr Leu His Asp

275 280 285

Gly Val Ala Leu Ala Gln Glu Thr Gln Arg Ser Gly Glu Ala Ile Asn

290 295 300

Thr Leu Glu Ser Trp Ile Lys Ile Ser Asn Val Ser Thr Ser Asp Asn

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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180 185 190

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210 215 220

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225 230 235 240

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180 185 190

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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Gln

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Glu Lys Arg Glu Ile Tyr Asp Gln Tyr Gly Glu Asp Ala Leu Lys Glu

65 70 75 80

Gly Met Gly Gly Gly Gly Ser His Val Asp Pro Phe Asp Ile Phe Ser

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Phe Thr Val Glu Phe Pro Asp Ser Leu Ala Pro Glu Gln Cys Lys Ala

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Gln

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20 25 30

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50 55 60

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180 185 190

Tyr Ser Arg Phe Phe Ala Val Gly Leu Phe Arg Leu Leu Glu Leu Ala

195 200 205

Asn Ala Thr Glu Pro Thr Ile Leu Asp Lys Leu Cys Ala Ala Leu Asn

210 215 220

Ile Asn Lys Arg Ser Val Asp Arg Asp Leu Asp Val Tyr Arg Asn Ile

225 230 235 240

Leu Ser Lys Leu Val Gln Ala Lys Glu Leu Leu Lys Glu Tyr Val Glu

245 250 255

Arg Glu Lys Lys Lys Arg Glu Glu Arg Ser Glu Thr Pro Lys Ser Asn

260 265 270

Glu Ala Val Thr Lys Phe Asp Gly Ser Leu Asn Ser Met Arg His

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<220>

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Met Glu Lys Asp His Gln Pro Val Ile Ser Leu Arg Pro Gly Gly Gly

1 5 10 15

ggc ggc ggc ccc cgc ccc ggc cgc ctc ttc tcc ccc gcc ttc gcc gcc 96

Gly Gly Gly Pro Arg Pro Gly Arg Leu Phe Ser Pro Ala Phe Ala Ala

20 25 30

gcc gcc tcc ggc tcc ggc gac ttg ctc cgc tcc cac gtc ggc ggc gca 144

Ala Ala Ser Gly Ser Gly Asp Leu Leu Arg Ser His Val Gly Gly Ala

35 40 45

tcc aag att ggt gat cca aat ttt gag gtg cgc gag cgt gtt cgc tat 192

Ser Lys Ile Gly Asp Pro Asn Phe Glu Val Arg Glu Arg Val Arg Tyr

50 55 60

aca aga gat caa ctt ctc gag ctg cgt gag atc gtt gac ata cct gag 240

Thr Arg Asp Gln Leu Leu Glu Leu Arg Glu Ile Val Asp Ile Pro Glu

65 70 75 80

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Ala Ile Leu Ile Lys Gln Glu Ile Asp Ile Glu Leu His Gly Glu Asp

85 90 95

cag att tgg ggt cgc cct gag tca gat gtg caa gtg cag aca caa acc 336

Gln Ile Trp Gly Arg Pro Glu Ser Asp Val Gln Val Gln Thr Gln Thr

100 105 110

cag gcg caa ccg cac aat cgg tat ggt gag aca gat aac cgt gac tgg 384

Gln Ala Gln Pro His Asn Arg Tyr Gly Glu Thr Asp Asn Arg Asp Trp

115 120 125

cgt gca cgc acg gtt caa cct ccg gca gct aat gaa gag aag tcc tgg 432

Arg Ala Arg Thr Val Gln Pro Pro Ala Ala Asn Glu Glu Lys Ser Trp

130 135 140

gac aac att cgt gaa gct aaa gca gca cat gct tca agt ggt cgg caa 480

Asp Asn Ile Arg Glu Ala Lys Ala Ala His Ala Ser Ser Gly Arg Gln

145 150 155 160

caa gag caa gtt aac agg cag gat caa tta aac cac cag ttt gct tca 528

Gln Glu Gln Val Asn Arg Gln Asp Gln Leu Asn His Gln Phe Ala Ser

165 170 175

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Lys Ala Gln Val Gly Pro Thr Pro Ala Leu Ile Lys Ala Glu Val Pro

180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

ctc aag ggc caa cta atg gaa tct gga att acc act gct gat att cta 720

Leu Lys Gly Gln Leu Met Glu Ser Gly Ile Thr Thr Ala Asp Ile Leu

225 230 235 240

aag gat gtt att tct ctc ata ttt gag aag gct gtt ttt gag ccc acc 768

Lys Asp Val Ile Ser Leu Ile Phe Glu Lys Ala Val Phe Glu Pro Thr

245 250 255

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260 265 270

cca tca ttc cct tcg gaa gaa cca ggt ggc aaa gag att acg ttc aag 864

Pro Ser Phe Pro Ser Glu Glu Pro Gly Gly Lys Glu Ile Thr Phe Lys

275 280 285

cgc gtg ctg ttg aac aat tgt cag gaa gca ttt gaa ggc gct gag agc 912

Arg Val Leu Leu Asn Asn Cys Gln Glu Ala Phe Glu Gly Ala Glu Ser

290 295 300

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Leu Arg Ala Glu Ile Ala Lys Leu Thr Gly Pro Asp Gln Glu Met Glu

305 310 315 320

aga agg gac aaa gaa agg att gtc aaa cta aga aca ctt gga aat atc 1008

Arg Arg Asp Lys Glu Arg Ile Val Lys Leu Arg Thr Leu Gly Asn Ile

325 330 335

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Arg Leu Ile Gly Glu Leu Leu Lys Gln Lys Met Val Pro Glu Lys Ile

340 345 350

gtt cat cac att gtt cag gaa ctc ttg ggg tct gga cct gat aaa aag 1104

Val His His Ile Val Gln Glu Leu Leu Gly Ser Gly Pro Asp Lys Lys

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Ala Cys Pro Glu Glu Glu Asn Val Glu Ala Ile Cys Gln Phe Phe Asn

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aca att ggt aaa cag ctt gac gag aac cca aaa tct cgt cga att aat 1200

Thr Ile Gly Lys Gln Leu Asp Glu Asn Pro Lys Ser Arg Arg Ile Asn

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Ala Pro Arg Leu Arg Phe Met Val Arg Asp Val Val Asp Leu Arg Ser

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Glu Ile His Asp Glu Ala Ile Lys Thr Leu Gly Leu Arg Pro Gly Ala

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aca gga ctc acg agg aat ggc cgt aat gca cca ggt ggt cct ctt tcc 1440

Thr Gly Leu Thr Arg Asn Gly Arg Asn Ala Pro Gly Gly Pro Leu Ser

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cct ggt gga ttc cca atg aat cga cca gga aca gga ggg atg atg cct 1488

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atg cct ggg tta gat aat gat aac tgg gaa gtt cca cgt tct aaa tca 1584

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cca tca tct att aac aag cca tca tct att aac tcc agg ctt ctt cct 1680

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Ala Ala Val Gln Lys Lys Thr Val Ser Leu Leu Glu Glu Tyr Phe Gly

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ata cgt att ctg gat gaa gca caa caa tgt atc gag gag ctt cag tgt 1968

Ile Arg Ile Leu Asp Glu Ala Gln Gln Cys Ile Glu Glu Leu Gln Cys

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gat aag ggt ccc aac ttc att gat ccc ctt gtt agg ctg ctg gag cat 2064

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675 680 685

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Ser Leu Ser Phe Glu Val Val Glu Glu Ile Leu Lys Ala Val Glu Asp

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Gly Asn Ser Ser Gly Gln Ala Ile Leu Ser Ser His Ala Val Val Ile

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275 280 285

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ata ggg ttg att gaa aag aca ctc aag aac aga atc cgt tgg aag ggc 528

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Glu Met Asp Ser Ser Ser Val Ser Asp Leu Gln Trp Glu His Glu Leu

180 185 190

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Gln Leu Glu Val Ile Asn Ile Thr Ile Gly Glu Phe Ile Ser Gly Leu

195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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Glu Ser His Ile Ser His Ser Lys His Glu Thr Ser Ser Asn Arg Ser

260 265 270

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325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

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370 375 380

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385 390 395 400

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

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545 550 555 560

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565 570 575

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580 585 590

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625 630 635 640

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Glu Asp Leu Ser Asp His Cys Asn His Met Val Arg Gln Ala Val Val

660 665 670

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675 680 685

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290 295 300

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340 345 350

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370 375 380

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405 410 415

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485 490 495

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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115 120 125

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130 135 140

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165 170 175

agc aac cat gtt cgc ggg cag caa gtg tgg gag cag ggc tgc aac tta 576

Ser Asn His Val Arg Gly Gln Gln Val Trp Glu Gln Gly Cys Asn Leu

180 185 190

att ggc tat gaa cgt cag cct gaa gtg cag cag cct ctt cac ggc ggc 624

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195 200 205

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210 215 220

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Asn Thr Tyr Met Pro Pro Trp Leu Pro

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Ser Asn Arg Gly Lys Leu Tyr Glu Phe Cys Ser Thr Gln Ser Met Thr

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Lys Thr Leu Glu Lys Tyr Gln Lys Cys Ser Tyr Ala Gly Prc Glu Thr

65 70 75 80

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Tyr Leu Lys Leu Lys Ala Arg Val Glu Asn Leu Gln Arg Thr Gln Arg

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Met Ser Ala Ser Arg Phe Ile Lys Cys Val Thr Val Gly Asp Gly Ala

1 5 10 15

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20 25 30

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Val Asp Gly Ser Thr Val Asn Leu Gly Leu Trp Asp Thr Ala Gly Gln

50 55 60

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Glu Asp Tyr Asn Arg Leu Arg Pro Leu Ser Tyr Arg Gly Ala Asp Val

65 70 75 80

ttc ctg ctg gcc ttt tct ctg atc agc aaa gca agc tat gag aat gtt 288

Phe Leu Leu Ala Phe Ser Leu Ile Ser Lys Ala Ser Tyr Glu Asn Val

85 90 95

tct aaa aag tgg ata cct gaa tta agg cat tat gct cct ggt gtg cca 336

Ser Lys Lys Trp Ile Pro Glu Leu Arg His Tyr Ala Pro Gly Val Pro

100 105 110

ata att ctc gtt gga aca aag ctt gat ctg cgg gat gat aag caa ttt 384

Ile Ile Leu Val Gly Thr Lys Leu Asp Leu Arg Asp Asp Lys Gln Phe

115 120 125

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130 135 140

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Glu Leu Arg Lys Leu Ile Gly Ala Ala Ala Tyr Ile Glu Cys Ser Ser

145 150 155 160

aaa aca cag caa aac atc aag gca gtt ttc gat gct gcg att aag gtg 528

Lys Thr Gln Gln Asn Ile Lys Ala Val Phe Asp Ala Ala Ile Lys Val

165 170 175

gtt ctc cag cct cca aag caa aag aag aag aag aaa aag gcg cag aaa 576

Val Leu Gln Pro Pro Lys Gln Lys Lys Lys Lys Lys Lys Ala Gln Lys

180 185 190

gga tgt gcc atc ttg taa 594

Gly Cys Ala Ile Leu

195

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<211>197

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>204

Met Ser Ala Ser Arg Phe Ile Lys Cys Val Thr Val Gly Asp Gly Ala

1 5 10 15

Val Gly Lys Thr Cys Met Leu Ile Ser Tyr Thr Ser Asn Thr Phe Pro

20 25 30

Thr Asp Tyr Val Pro Thr Val Phe Asp Asn Phe Ser Ala Asn Val Val

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Val Asp Gly Ser Thr Val Asn Leu Gly Leu Trp Asp Thr Ala Gly Gln

50 55 60

Glu Asp Tyr Asn Arg Leu Arg Pro Leu Ser Tyr Arg Gly Ala Asp Val

65 70 75 80

Phe Leu Leu Ala Phe Ser Leu Ile Ser Lys Ala Ser Tyr Glu Asn Val

85 90 95

Ser Lys Lys Trp Ile Pro Glu Leu Arg His Tyr Ala Pro Gly Val Pro

100 105 110

Ile Ile Leu Val Gly Thr Lys Leu Asp Leu Arg Asp Asp Lys Gln Phe

115 120 125

Phe Val Asp His Pro Gly Ala Val Pro Ile Ser Thr Ala Gln Gly Glu

130 135 140

Glu Leu Arg Lys Leu Ile Gly Ala Ala Ala Tyr Ile Glu Cys Ser Ser

145 150 155 160

Lys Thr Gln Gln Asn Ile Lys Ala Val Phe Asp Ala Ala Ile Lys Val

165 170 175

Val Leu Gln Pro Pro Lys Gln Lys Lys Lys Lys Lys Lys Ala Gln Lys

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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225 230 235 240

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Gln Gly Asp Ile Asn Glu Lys Met Arg Ala Ile Leu Ile Asp Trp Leu

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100 105 110

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195 200 205

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210 215 220

Leu Phe Leu Leu Glu Ser Gly Ala Gly Gly Tyr Asn Leu Lys Lys Gln

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<220>

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1 5 10 15

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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275 280 285

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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115 120 125

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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Arg Phe Leu Ala Arg Glu Asn Val Val Arg Lys Lys Leu Gln Leu Val

225 230 235 240

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245 250 255

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325 330 335

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340 345 350

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385 390 395 400

tat ggt tgc ccc gca aaa tcg gag ccc gcc gtc ttc ttg ctc aag agc 1248

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Glu Tyr Val Asp Glu Ile Tyr Ser Phe Tyr Arg Arg Ser Glu Gly Leu

165 170 175

Ser Cys Val Ser Pro Asn Tyr Met Leu Ser Gln Asn Asp Ile Asn Glu

180 185 190

Lys Met Arg Gly Ile Leu Ile Asp Trp Leu Ile Glu Val His Tyr Lys

195 200 205

Leu Glu Leu Leu Asp Glu Thr Leu Phe Leu Thr Val Asn Ile Ile Asp

210 215 220

Arg Phe Leu Ala Arg Glu Asn Val Val Arg Lys Lys Leu Gln Leu Val

225 230 235 240

Gly Val Thr Ala Met Leu Leu Ala Cys Lys Tyr Glu Glu Val Ser Val

245 250 255

Pro Val Val Glu Asp Leu Ile Leu Ile Cys Asp Arg Ala Tyr Thr Arg

260 265 270

Thr Asp Ile Leu Glu Met Glu Arg Met Ile Val Asn Thr Leu Gln Phe

275 280 285

Asp Met Ser Val Pro Thr Pro Tyr Cys Phe Met Arg Arg Phe Leu Lys

290 295 300

Ala Ala Gln Ser Asp Lys Lys Leu Glu Leu Met Ser Phe Phe Ile Ile

305 310 315 320

Glu Leu Ser Leu Val Glu Tyr Glu Met Leu Lys Phe Gln Pro Ser Met

325 330 335

Leu Ala Ala Ala Ala Ile Tyr Thr Ala Gln Cys Thr Ile Asn Gly Phe

340 345 350

Lys Ser Trp Asn Lys Cys Cys Glu Leu His Thr Lys Tyr Ser Glu Glu

355 360 365

Gln Leu Met Glu Cys Ser Lys Met Met Val Glu Leu His Gln Lys Ala

370 375 380

Gly His Gly Lys Leu Thr Gly Val His Arg Lys Tyr Ser Thr Phe Arg

385 390 395 400

Tyr Gly Cys Pro Ala Lys Ser Glu Pro Ala Val Phe Leu Leu Lys Ser

405 410 415

Val Ala Leu

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<213>Oryza sativa

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Gln Arg Arg Arg Arg Arg Lys Arg Gly Arg Gly Arg Asp Gly Glu Pro

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

cag cgc atc ctc ctc gcc atc gac gcc ttc act cgc cag gtg tcg gag 240

Gln Arg Ile Leu Leu Ala Ile Asp Ala Phe Thr Arg Gln Val Ser Glu

65 70 75 80

atg ctg gag gcg ggg cgt gcg ctg ttc aag aac ctc gcc gcc gac ttc 288

Met Leu Glu Ala Gly Arg Ala Leu Phe Lys Asn Leu Ala Ala Asp Phe

85 90 95

gag gac cgc ctc tgc tcg atc cac aag gag agg gtg gag agg tgg gag 336

Glu Asp Arg Leu Cys Ser Ile His Lys Glu Arg Val Glu Arg Trp Glu

100 105 110

gag gag atc cgg gag ctg cgc gcc cgc gac gcc gcc aac gag cag gca 384

Glu Glu Ile Arg Glu Leu Arg Ala Arg Asp Ala Ala Asn Glu Gln Ala

115 120 125

cgc tcc ctc ctc cac aac gcc cag ctc cac ctc ctc gcc acc gtc cgc 432

Arg Ser Leu Leu His Asn Ala Gln Leu His Leu Leu Ala Thr Val Arg

130 135 140

cac gac cac acc tga 447

His Asp His Thr

145

<210>212

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>212

Gln Arg Arg Arg Arg Arg Lys Arg Gly Arg Gly Arg Asp Gly Glu Pro

1 5 10 15

Gly Glu Arg Gly Arg Gly Ser Gly Gly Ser Ser Gly Val Ala Val Thr

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

Glu Glu Ile Arg Glu Leu Arg Ala Arg Asp Ala Ala Asn Glu Gln Ala

115 120 125

Arg Ser Leu Leu His Asn Ala Gln Leu His Leu Leu Ala Thr Val Arg

130 135 140

His Asp His Thr

145

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(2064)

<400>213

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1 5 10 15

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130 135 140

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>214

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50 55 60

Asn Ser Leu Leu Lys Ser Tyr Gln Glu Glu Val Asp Asn Leu Thr Lys

65 70 75 80

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100 105 110

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Glu Ala Glu Lys Lys Ile Ala Glu Leu Thr Ala Lys Ala Glu Glu Gln

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515 520 525

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530 535 540

Ser His Glu Lys Ile Val Ser Arg Gly Pro Lys Lys Tyr Ala Glu Asp

545 550 555 560

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565 570 575

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580 585 590

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<220>

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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645 650 655

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660 665 670

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675 680 685

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690 695 700

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Ile Ile Val Gln Lys Tyr Val Arg Arg Trp Arg Leu His Arg Thr Tyr

865 870 875 880

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Gln Gln Ser His Ser Ala Ala Leu Leu Ile Gln Ser Cys Ile Arg Gly

885 890 895

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Phe Ile Ala Arg His Tyr Phe Ser Val Ile Lys Glu Gln Lys Ala Ala

900 905 910

ttg gtg ata cag tcc ttg tgg aga aaa cgg aag gtt atc att ctt ttc 2784

Leu Val Ile Gln Ser Leu Trp Arg Lys Arg Lys Val Ile Ile Leu Phe

915 920 925

caa caa tac agg caa gcc act gtg gca att cag tgt gct tgg aga cag 2832

Gln Gln Tyr Arg Gln Ala Thr Val Ala Ile Gln Cys Ala Trp Arg Gln

930 935 940

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Lys Val Ala Arg Arg Glu Leu Arg Arg Leu Lys Met Ala Ala Asn Glu

945 950 955 960

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Ala Gly Ala Leu Arg Glu Ala Lys Asn Lys Leu Glu Lys Lys Leu Asp

965 970 975

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Asp Leu Thr Leu Arg Leu Thr Leu Glu Arg Arg Leu Arg Ala Ala Gly

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1010 1015 1020

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1025 1030 1035

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Leu Arg Glu Ile Thr Met Leu Arg Ser Ser Lys Ile Met Thr Ala

1040 1045 1050

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1070 1075 1080

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Arg Lys Gly Ser Asp Ala Thr Met Lys Lys Leu Lys Asp Val Glu

1085 1090 1095

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1115 1120 1125

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1130 1135 1140

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1145 1150 1155

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1160 1165 1170

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Ala Ser Leu Pro Gln Ser Leu Thr Arg Ser Arg Arg Thr Arg Met

1175 1180 1185

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1190 1195 1200

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1280 1285 1290

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1310 1315 1320

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1430 1435 1440

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485 490 495

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Ile Ile Val Gln Lys Tyr Val Arg Arg Trp Arg Leu His Arg Thr Tyr

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885 890 895

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<213>Oryza sativa

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20 25 30

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85 90 95

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85 90 95

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115 120 125

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Leu Asp Ser Leu Gly Ile Lys Glu Leu Glu Ser Leu Glu Lys Gln Leu

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165 170 175

aat aga tgc ctt agg aga aaa ctg gag gaa agc aac cat gtt cgc ggg 576

Asn Arg Cys Leu Arg Arg Lys Leu Glu Glu Ser Asn His Val Arg Gly

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cag caa gtg tgg gag cag ggc tgc aac tta att ggc tat gaa cgt cag 624

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50 55 60

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130 135 140

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245

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180 185 190

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210 215 220

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245

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1 5 10 15

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130 135 140

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ctt gga gag ctc aat aag caa ctg aaa aac aag cta gaa gct gaa gcc 528

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165 170 175

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180 185 190

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<213>Oryza sativa

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65 70 75 80

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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<211>205

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>258

Leu Asp Leu Phe Met Thr His Tyr Val Leu Leu Leu Cys Ser Phe Lys

1 5 10 15

Glu Gln Leu Gln Gln His Val Arg Val His Ala Met Glu Ala Val Met

20 25 30

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50 55 60

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65 70 75 80

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Glu Arg Val Arg Gln Glu Leu Lys His Glu Leu Lys Gln Gly Tyr Arg

100 105 110

Glu Lys Leu Val Asp Ile Arg Glu Glu Ile Leu Arg Lys Arg Arg Ala

115 120 125

Gly Lys Leu Pro Gly Asp Thr Ala Ser Thr Leu Lys Ala Trp Trp Gln

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Val Gln Glu Thr Gly Leu Gln Leu Lys Gln Ile Asn Asn Trp Phe Ile

165 170 175

Asn Gln Arg Lys Arg Asn Trp His Ser Asn Pro Ala Ser Ser Ser Ser

180 185 190

Asp Lys Ser Lys Arg Lys Arg Tyr Arg Val Val Asp Phe

195 200 205

<210>259

<211>2370

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(2370)

<400>259

atg gat tcg act aag caa gat ttc caa ccc cgg aca ttc tcc atc aaa 48

Met Asp Ser Thr Lys Gln Asp Phe Gln Pro Arg Thr Phe Ser Ile Lys

1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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Leu Gly Lys Glu Glu Ala His Asp Asn Ala Lys Arg Ile Glu Glu Val

50 55 60

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Cys Phe Ala Ser Ala Asp Glu His Phe Lys Glu Glu Pro Asp Gly Asp

65 70 75 80

ggg agt tct gct gtc cag ctg tac gca aag gaa act agc aag ttg atg 288

Gly Ser Ser Ala Val Gln Leu Tyr Ala Lys Glu Thr Ser Lys Leu Met

85 90 95

ctg gaa gtt ctg aaa aga ggg cca agg acc act gtg gaa cca gaa gta 336

Leu Glu Val Leu Lys Arg Gly Pro Arg Thr Thr Val Glu Pro Glu Val

100 105 110

cct gtt gct gat aca cct ctt gag cct gct gat tct gta ttt gat ata 384

Pro Val Ala Asp Thr Pro Leu Glu Pro Ala Asp Ser Val Phe Asp Ile

115 120 125

tct ggt ggc aag cgt gcg ttt att gag gca gat gaa gcg aag gaa ctt 432

Ser Gly Gly Lys Arg Ala Phe Ile Glu Ala Asp Glu Ala Lys Glu Leu

130 135 140

ttg agc ccg ctt atc aaa cca gga aat gca tat aaa cgg att tgc ttc 480

Leu Ser Pro Leu Ile Lys Pro Gly Asn Ala Tyr Lys Arg Ile Cys Phe

145 150 155 160

agc aac agg agc ttt ggt att ggt gct gcc aat gtt gct gga cct att 528

Ser Asn Arg Ser Phe Gly Ile Gly Ala Ala Asn Val Ala Gly Pro Ile

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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Ser Lys Ala Leu Glu Gly Ala Val Leu Arg Tyr Leu Asn Ile Ser Asp

210 215 220

aat gct tta ggt gag aag ggt gtc aga gca ttt gaa gag ctc ctg aaa 720

Asn Ala Leu Gly Glu Lys Gly Val Arg Ala Phe Glu Glu Leu Leu Lys

225 230 235 240

tca cag gac aac ctg gaa gaa cta tat gtg atg aat gat ggt ata tca 768

Ser Gln Asp Asn Leu Glu Glu Leu Tyr Val Met Asn Asp Gly Ile Ser

245 250 255

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Glu Glu Ala Ala Gln Ala Leu Ser Glu Leu Ile Pro Ser Thr Glu Lys

260 265 270

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Leu Lys Ile Leu His Phe His Asn Asn Met Thr Gly Asp Glu Gly Ala

275 280 285

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290 295 300

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Arg Cys Ser Ala Thr Arg Ile Gly Ser Asp Gly Gly Val Ala Leu Ala

305 310 315 320

gag gca tta ggg acc tgt act cgt ctg aag aaa ctt gat ctc agg gac 1008

Glu Ala Leu Gly Thr Cys Thr Arg Leu Lys Lys Leu Asp Leu Arg Asp

325 330 335

aac ttg ttt gga gtt gag gca ggg ttg gct ctc agc aaa acc ctt tca 1056

Asn Leu Phe Gly Val Glu Ala Gly Leu Ala Leu Ser Lys Thr Leu Ser

340 345 350

aaa ctt cct gat ctt gtt gag ctg tat ctc agt gat ctc aat ctt gag 1104

Lys Leu Pro Asp Leu Val Glu Leu Tyr Leu Ser Asp Leu Asn Leu Glu

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485 490 495

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370 375 380

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420 425 430

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465 470 475 480

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690 695 700

caa gct ttt caa aaa cgc ctt gaa gta gag aaa atc ctt cat gag caa 2160

Gln Ala Phe Gln Lys Arg Leu Glu Val Glu Lys Ile Leu His Glu Gln

705 710 715 720

gag cag ctg aga gag att gag ctc agc aag caa cac cat gca ggt gac 2208

Glu Gln Leu Arg Glu Ile Glu Leu Ser Lys Gln His His Ala Gly Asp

725 730 735

ctg cag gag aag aac aga ctt tct cga atg ttg gag cat aag aac att 2256

Leu Gln Glu Lys Asn Arg Leu Ser Arg Met Leu Glu His Lys Asn Ile

740 745 750

ttc cag gaa aga att gtc caa cgt cgt gaa gct gag ttt agt cgt ctt 2304

Phe Gln Glu Arg Ile Val Gln Arg Arg Glu Ala Glu Phe Ser Arg Leu

755 760 765

aag aaa gag agg gat gaa agg act agt caa ttg ata tca tca agg aag 2352

Lys Lys Glu Arg Asp Glu Arg Thr Ser Gln Leu Ile Ser Ser Arg Lys

770 775 780

cgt gaa agg gat aca gtg cgg aag tta atg tac tat ctt aactta gaa 2400

Arg Glu Arg Asp Thr Val Arg Lys Leu Met Tyr Tyr Leu Asn Leu Glu

785 790 795 800

gag cag cgc ctc caa agg ctc cgt gag gaa gag gaa gct aga aaa cag 2448

Glu Gln Arg Leu Gln Arg Leu Arg Glu Glu Glu Glu Ala Arg Lys Gln

805 810 815

gaa gag agg aga aag agg gaa gag act gag agg aag gct aag ctg gat 2496

Glu Glu Arg Arg Lys Arg Glu Glu Thr Glu Arg Lys Ala Lys Leu Asp

820 825 830

gca att gca gcc aag cag ctg cag aga gag agg gaa cta gaa gag aag 2544

Ala Ile Ala Ala Lys Gln Leu Gln Arg Glu Arg Glu Leu Glu Glu Lys

835 840 845

aag gaa aaa cag aga atg gaa gct ctc atg gga aga gga gct gga gct 2592

Lys Glu Lys Gln Arg Met Glu Ala Leu Met Gly Arg Gly Ala Gly Ala

850 855 860

gct gag cct gca cgc act cct gat gct gct ccg gtt gca cag cca gct 2640

Ala Glu Pro Ala Arg Thr Pro Asp Ala Ala Pro Val Ala Gln Pro Ala

865 870 875 880

cag ccg gta gct gca ccg gct gct gct gct gcc gct gct gca cca gct 2688

Gln Pro Val Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ala

885 890 895

gct ggt aag tat gtc ccg aag ttt aaa cga ggt ggt gat ggt ggc agt 2736

Ala Gly Lys Tyr Val Pro Lys Phe Lys Arg Gly Gly Asp Gly Gly Ser

900 905 910

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Ser Ala Gly Gly Gln Arg Pro Ala Val Ala Pro Glu Gln Asp Arg Trp

915 920 925

ggt tca cgg gat gat cgc cca cgt cct gat atg cgt ccg ctc cgc caa 2832

Gly Ser Arg Asp Asp Arg Pro Arg Pro Asp Met Arg Pro Leu Arg Gln

930 935 940

gag gca ccc cct gct cgc gat gct gct ccc cca gcc cgc caa gat ggt 2880

Glu Ala Pro Pro Ala Arg Asp Ala Ala Pro Pro Ala Arg Gln Asp Gly

945 950 955 960

cct cca ggc aca tgg cga cct tca aga tac tca agt tca tca tct tcc 2928

Pro Pro Gly Thr Trp Arg Pro Ser Arg Tyr Ser Ser Ser Ser Ser Ser

965 970 975

tca acc tgg agc agc agg cgc aac tga 2955

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Asn Val Ser Ser Leu Glu Glu Val Ile Lys His Phe Met Gln Leu Ser

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180 185 190

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Lys Ser Tyr Asn Lys Asn Leu Ser Gln Lys Asp Leu Gln Leu Ile Ala

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Ser Ser Val Leu Leu Ala Ala Leu Ala Val Ser Pro Tyr Asp His Lys

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675 680 685

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Gln Ala Phe Gln Lys Arg Leu Glu Val Glu Lys Ile Leu His Glu Gln

705 710 715 720

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725 730 735

Leu Gln Glu Lys Asn Arg Leu Ser Arg Met Leu Glu His Lys Asn Ile

740 745 750

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Lys Lys Glu Arg Asp Glu Arg Thr Ser Gln Leu Ile Ser Ser Arg Lys

770 775 780

Arg Glu Arg Asp Thr Val Arg Lys Leu Met Tyr Tyr Leu Asn Leu Glu

785 790 795 800

Glu Gln Arg Leu Gln Arg Leu Arg Glu Glu Glu Glu Ala Arg Lys Gln

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Glu Glu Arg Arg Lys Arg Glu Glu Thr Glu Arg Lys Ala Lys Leu Asp

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Ala Ile Ala Ala Lys Gln Leu Gln Arg Glu Arg Glu Leu Glu Glu Lys

835 840 845

Lys Glu Lys Gln Arg Met Glu Ala Leu Met Gly Arg Gly Ala Gly Ala

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865 870 875 880

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885 890 895

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Gly Gln Cys Cys Trp Arg Ala Val Pro Lys Leu Ala Gly Leu Leu Arg

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Cys Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Thr Asn Tyr Leu Arg Pro Asp

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Lys Lys Lys Leu Arg Lys Met Gly Ile Asp Pro Val Thr His Lys Pro

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50 55 60

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Arg Leu Arg Lys Lys Ala Tyr Val Gln Gln Leu Glu Ser Ser Lys Leu

65 70 75 80

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Lys Leu Ala Ser Leu Glu Gln Glu Ile Asn Lys Ala Arg Gln Gln Gly

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Gly Ala Met Thr Phe Asp Leu Glu Tyr Ala Arg Trp Leu Glu Glu Gln

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130 135 140

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gag ata ttc agg ctg aag ggt gtt gcc gca aag gct gat gtg ttt cat 528

Glu Ile Phe Arg Leu Lys Gly Val Ala Ala Lys Ala Asp Val Phe His

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180 185 190

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195 200 205

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Gln Ser Ser Gln Gln Ala Glu Asp Ala Leu Ser Gln Gly Met Glu Ala

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ttg caa caa tcc ttg gca gat acg ttg gcc ggg tcc ctt ggt cca tca 768

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275 280 285

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Gln Ala Ala Arg Ala Leu Leu Ala Ile His Asp Tyr Phe Ser Arg Leu

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Asp Ser Asp Leu Arg Leu Ile Val Asp Gly Ile Met Ala His Tyr Asp

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Glu Ile Phe Arg Leu Lys Gly Val Ala Ala Lys Ala Asp Val Phe His

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Leu Gly Gly Phe Arg Ser Ser Glu Leu Leu Lys Leu Leu Val Asn Gln

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Gln Ser Ser Gln Gln Ala Glu Asp Ala Leu Ser Gln Gly Met Glu Ala

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Leu Gln Gln Ser Leu Ala Asp Thr Leu Ala Gly Ser Leu Gly Pro Ser

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Gly Ser Ser Gly Asn Val Ala Asn Tyr Met Gly Gln Met Ala Met Ala

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Met Gly Lys Leu Gly Thr Leu Glu Asn Phe Leu Arg Gln Ala Asp Asn

275 280 285

Leu Arg Gln Gln Thr Leu His Gln Met Gln Arg Ile Leu Thr Ile Arg

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Gln Ala Ala Arg Ala Leu Lau Ala Ile His Asp Tyr Phe Ser Arg Leu

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Arg Ala Leu Ser Ser Leu Trp Leu Ala Arg Pro Arg Glu

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gac gag tat gca gac aaa ttt tat gca cga ctg gtg gca ggg gaa ttc 96

Asp Glu Tyr Ala Asp Lys Phe Tyr Ala Arg Leu Val Ala Gly Glu Phe

20 25 30

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Lys Val Lys Asp Gly Gln Ser Tyr Ser Cys Pro Phe Cys Ser Gly Lys

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aag aag aaa gat ttc aac ata aac aat ctt att cag cat gcc tcg gga 192

Lys Lys Lys Asp Phe Asn Ile Asn Asn Leu Ile Gln His Ala Ser Gly

50 55 60

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Val Gly Ala Ala Ser Asn Arg Gln Ala Lys Asp Lys Ala Thr His Arg

65 70 75 80

gcc ctt gcc aag cac ttg aag aat ggc ctc act aag tcg tca gga caa 288

Ala Leu Ala Lys His Leu Lys Asn Gly Leu Thr Lys Ser Ser Gly Gln

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cag tca cag aca gct gtt gtg gag cca caa ccg ctt cca aac aga gat 336

Gln Ser Gln Thr Ala Val Val Glu Pro Gln Pro Leu Pro Asn Arg Asp

100 105 110

gag aag ttc gtg tgg ccc tgg atg ggt gtt cta gtt aat gtg cct acc 384

Glu Lys Phe Val Trp Pro Trp Met Gly Val Leu Val Asn Val Pro Thr

115 120 125

gaa tgg aag gat ggg cgc caa att gga cga agt gga aat cat ttg aag 432

Glu Trp Lys Asp Gly Arg Gln Ile Gly Arg Ser Gly Asn His Leu Lys

130 135 140

gag caa ctg tca cgc ttt tgc cca ctt aag atc att cca tta tgg aat 480

Glu Gln Leu Ser Arg Phe Cys Pro Leu Lys Ile Ile Pro Leu Trp Asn

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ttt aga ggt cat tca ggg aat gct att gtt gag ttt gga aaa gat tgg 528

Phe Arg Gly His Ser Gly Asn Ala Ile Val Glu Phe Gly Lys Asp Trp

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cat ggc ttc aga aat gcg ctt gcc ttt gaa gat tac ttt ggg aaa gaa 576

His Gly Phe Arg Asn Ala Leu Ala Phe Glu Asp Tyr Phe Gly Lys Glu

180 185 190

gga tat ggt agg agg gac tgg aag gag aaa cag aat caa ggg tca aac 624

Gly Tyr Gly Arg Arg Asp Trp Lys Glu Lys Gln Asn Gln Gly Ser Asn

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ctc ttt gga tgg gtt gca aga gct gaa gat cac act tct cca ggg cta 672

Leu Phe Gly Trp Val Ala Arg Ala Glu Asp His Thr Ser Pro Gly Leu

210 215 220

ata ggc gac cat tta aga aaa aat ggt gac ctg aag act atc aat gat 720

Ile Gly Asp His Leu Arg Lys Asn Gly Asp Leu Lys Thr Ile Asn Asp

225 230 235 240

ctt gag aat gaa gga gca cgt aaa act gac aaa ctt gta gct aat tta 768

Leu Glu Asn Glu Gly Ala Arg Lys Thr Asp Lys Leu Val Ala Asn Leu

245 250 255

gca aac caa att gag gta aag aac agg cat ttg cag gaa ctt gaa gtt 816

Ala Asn Gln Ile Glu Val Lys Asn Arg His Leu Gln Glu Leu Glu Val

260 265 270

aca tac aat gaa aga act aca tca ctt gag aag atg atg ggg caa agg 864

Thr Tyr Asn Glu Arg Thr Thr Ser Leu Glu Lys Met Met Gly Gln Arg

275 280 285

gaa cag ctt ctc cag aaa tat aat gaa gaa att cgc aag atg cag cag 912

Glu Gln Leu Leu Gln Lys Tyr Asn Glu Glu Ile Arg Lys Met Gln Gln

290 295 300

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Leu Ala Gln Arg His Ser Gln Lys Ile Ile Asp Glu Asn Gln Lys Leu

305 310 315 320

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Arg Ser Glu Leu Glu Ser Lys Met Ser Glu Leu Asn Thr Arg Ser Lys

325 330 335

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Glu Leu Asp Glu Ile Ala Ala Lys Ser Asp Tyr Asp Arg Arg Ile Ile

340 345 350

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Asp Gln Glu Lys Gln Lys Asn Ala Ile Lys Ser Ser His Leu Lys Leu

355 360 365

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Ala Thr Leu Glu Gln Glu Arg Ala Asp Glu Asn Val Leu Lys Leu Val

370 375 380

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Arg Glu His Lys Arg Glu Lys Glu Ala Ala Val Lys Lys Ile Leu Lys

385 390 395 400

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Leu Glu Gln Gln Val Asp Ala Lys Gln Lys Leu Glu Leu Asp Ile Gln

405 410 415

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Gln Leu Lys Gly Lys Leu Glu Val Met Lys His Met Pro Gly Asp Glu

420 425 430

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Asp Ser Ala Leu Lys Asn Lys Ile Asp Glu Leu Ser Glu Glu Leu Gln

435 440 445

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Glu Lys Met Asp Glu Leu Asp Ala Met Glu Ser Leu Asn Gln Thr Leu

450 455 460

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465 470 475 480

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Glu Leu Glu Asn Gly Leu Leu Asp Leu Leu Asp Gly Gln Ser His Ile

485 490 495

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500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

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545 550 555 560

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565 570 575

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580 585 590

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595 600 605

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610 615 620

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

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50 55 60

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65 70 75 80

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Leu Phe Gly Trp Val Ala Arg Ala Glu Asp His Thr Ser Pro Gly Leu

210 215 220

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225 230 235 240

Leu Glu Asn Glu Gly Ala Arg Lys Thr Asp Lys Leu Val Ala Asn Leu

245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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305 310 315 320

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Glu Leu Asp Glu Ile Ala Ala Lys Ser Asp Tyr Asp Arg Arg Ile Ile

340 345 350

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370 375 380

Arg Glu His Lys Arg Glu Lys Glu Ala Ala Val Lys Lys Ile Leu Lys

385 390 395 400

Leu Glu Gln Gln Val Asp Ala Lys Gln Lys Leu Glu Leu Asp Ile Gln

405 410 415

Gln Leu Lys Gly Lys Leu Glu Val Met Lys His Met Pro Gly Asp Glu

420 425 430

Asp Ser Ala Leu Lys Asn Lys Ile Asp Glu Leu Ser Glu Glu Leu Gln

435 440 445

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450 455 460

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465 470 475 480

Glu Leu Glu Asn Gly Leu Leu Asp Leu Leu Asp Gly Gln Ser His Ile

485 490 495

Gly Ile Lys Arg Met Gly Glu Leu Asp Leu Glu Ala Phe Ser Lys Ala

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Leu Cys Ser Lys Trp Gln Ala Glu Ile Lys Asn Pro Asp Trp His Pro

530 535 540

Phe Arg Phe Val Leu Val Asp Gly Gln Glu Lys Glu Ile Ile Glu Asp

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Asp Ala Lys Leu Gln Glu Leu Lys Glu Glu His Gly Glu Asp Ile Tyr

565 570 575

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580 585 590

Gly Arg Phe Pro Val Gly Glu Leu Trp Asn Phe Lys Asp Lys Arg Lys

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50

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>274

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Gly Glu Glu Pro Ser Leu

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

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1 5 10 15

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20 25 30

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145 150 155 160

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245 250 255

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260 265 270

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Gln Leu Gln Ala Val Arg Lys Gln Leu Gly Glu Lys Asp Thr Ala Val

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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Ser Ser Ile Glu Gln Lys Glu Glu Gly Arg Gly Asn Glu Glu His Val

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50 55 60

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85 90 95

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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355 360 365

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370 375 380

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165 170 175

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180 185 190

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225 230 235 240

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245 250 255

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325 330 335

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Tyr Asp Phe Asp Asn Thr Met Gly Gly Phe Tyr Ile Ala Pro Ala Phe

115 120 125

atg gac aag ctc gtc gtc cac atc tcc aag aac ttc atg acc ctc ccc 432

Met Asp Lys Leu Val Val His Ile Ser Lys Asn Phe Met Thr Leu Pro

130 135 140

aac atc aag gtc cca ctc atc ctg ggt atc tgg gga ggc aag ggt cag 480

Asn Ile Lys Val Pro Leu Ile Leu Gly Ile Trp Gly Gly Lys Gly Gln

145 150 155 160

gga aaa tcc ttc cag tgt gag ctc gtc ttc gcc aag atg ggg atc aac 528

Gly Lys Ser Phe Gln Cys Glu Leu Val Phe Ala Lys Met Gly Ile Asn

165 170 175

ccc atc atg atg agc gcc gga gag ctg gag agc ggc aac gcc gga gag 576

Pro Ile Met Met Ser Ala Gly Glu Leu Glu Ser Gly Asn Ala Gly Glu

180 185 190

ccg gcg aag ctg atc agg cag cgg tac cgt gag gcg gca gac atc atc 624

Pro Ala Lys Leu Ile Arg Gln Arg Tyr Arg Glu Ala Ala Asp Ile Ile

195 200 205

aag aag ggg aag atg tgc tgc ctc ttc atc aac gat ctg gac gcg ggt 672

Lys Lys Gly Lys Met Cys Cys Leu Phe Ile Asn Asp Leu Asp Ala Gly

210 215 220

gca ggt cgc atg gga ggc acc acc cag tac acg gtg aac aac cag atg 720

Ala Gly Arg Met Gly Gly Thr Thr Gln Tyr Thr Val Asn Asn Gln Met

225 230 235 240

gtg aac gcc acc ctg atg aac atc gcc gac aac cca acc aac gtg cag 768

Val Asn Ala Thr Leu Met Asn Ile Ala Asp Asn Pro Thr Asn Val Gln

245 250 255

ctc ccc ggg atg tac aac aag gag gac aac ccc cgt gtc ccc atc atc 816

Leu Pro Gly Met Tyr Asn Lys Glu Asp Asn Pro Arg Val Pro Ile Ile

260 265 270

gtc acc ggc aac gac ttc tcc acg ctg tac gcg ccg ctc atc cgt gac 864

Val Thr Gly Asn Asp Phe Ser Thr Leu Tyr Ala Pro Leu Ile Arg Asp

275 280 285

ggg cgt atg gag aag ttc tac tgg gct ccc acc cgc gac gac cgt gtc 912

Gly Arg Met Glu Lys Phe Tyr Trp Ala Pro Thr Arg Asp Asp Arg Val

290 295 300

ggc gtc tgc aag ggt atc ttc cgc acc gac aac gtc ccc gac gag gac 960

Gly Val Cys Lys Gly Ile Phe Arg Thr Asp Asn Val Pro Asp Glu Asp

305 310 315 320

atc gtc aag atc gtc gac agc ttc cca ggc caa tcc atc gat ttc ttc 1008

Ile Val Lys Ile Val Asp Ser Phe Pro Gly Gln Ser Ile Asp Phe Phe

325 330 335

ggc gct ctt cgt gcc cgt gtt tac gac gac gag gtg cgc aag tgg gtg 1056

Gly Ala Leu Arg Ala Arg Val Tyr Asp Asp Glu Val Arg Lys Trp Val

340 345 350

tcg gac acg ggt gtg gag aac att ggc aag agg ctg gtg aac tcg agg 1104

Ser Asp Thr Gly Val Glu Asn Ile Gly Lys Arg Leu Val Asn Ser Arg

355 360 365

gag ggc cca ccg gag ttc gag cag ccc aag atg acg atc gaa aag ctc 1152

Glu Gly Pro Pro Glu Phe Glu Gln Pro Lys Met Thr Ile Glu Lys Leu

370 375 380

atg gag tac gga tac atg ctt gtg aag gag cag gag aac gtc aag cgt 1200

Met Glu Tyr Gly Tyr Met Leu Val Lys Glu Gln Glu Asn Val Lys Arg

385 390 395 400

gtg cag ctg gct gag cag tac ttg agc gag gct gct ctt ggt gac gct 1248

Val Gln Leu Ala Glu Gln Tyr Leu Ser Glu Ala Ala Leu Gly Asp Ala

405 410 415

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Asn Ser Asp Ala Met Lys Thr Gly Ser Phe Tyr Gly Gln Gly Ala Gln

420 425 430

caa gca ggt aac ctg cct gtg ccg gaa ggt tgc acc gac cct gtt gcc 1344

Gln Ala Gly Asn Leu Pro Val Pro Glu Gly Cys Thr Asp Pro Val Ala

435 440 445

aag aac ttc gac cca acg gcg agg agc gac gac ggc agc tgc ctt tac 1392

Lys Asn Phe Asp Pro Thr Ala Arg Ser Asp Asp Gly Ser Cys Leu Tyr

450 455 460

acc ttt taa 1401

Thr Phe

465

<210>286

<211>466

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>286

Met Ala Ala Ala Phe Ser Ser Thr Val Gly Ala Pro Ala Ser Thr Pro

1 5 10 15

Thr Asn Phe Leu Gly Lys Lys Leu Lys Lys Gln Val Thr Ser Ala Val

20 25 30

Asn Tyr His Gly Lys Ser Ser Asn Ile Asn Arg Phe Lys Val Met Ala

35 40 45

Lys Glu Leu Asp Glu Gly Lys Gln Thr Asp Gln Asp Arg Trp Lys Gly

50 55 60

Leu Ala Tyr Asp Ile Ser Asp Asp Gln Gln Asp Ile Thr Arg Gly Lys

65 70 75 80

Gly Phe Val Asp Ser Leu Phe Gln Ala Pro Thr Gly Asp Gly Thr His

85 90 95

Glu Ala Val Leu Ser Ser Tyr Glu Tyr Leu Ser Gln Gly Leu Arg Thr

100 105 110

Tyr Asp Phe Asp Asn Thr Met Gly Gly Phe Tyr Ile Ala Pro Ala Phe

115 120 125

Met Asp Lys Leu Val Val His Ile Ser Lys Asn Phe Met Thr Leu Pro

130 135 140

Asn Ile Lys Val Pro Leu Ile Leu Gly Ile Trp Gly Gly Lys Gly Gln

145 150 155 160

Gly Lys Ser Phe Gln Cys Glu Leu Val Phe Ala Lys Met Gly Ile Asn

165 170 175

Pro Ile Met Met Ser Ala Gly Glu Leu Glu Ser Gly Asn Ala Gly Glu

180 185 190

Pro Ala Lys Leu Ile Arg Gln Arg Tyr Arg Glu Ala Ala Asp Ile Ile

195 200 205

Lys Lys Gly Lys Met Cys Cys Leu Phe Ile Asn Asp Leu Asp Ala Gly

210 215 220

Ala Gly Arg Met Gly Gly Thr Thr Gln Tyr Thr Val Asn Asn Gln Met

225 230 235 240

Val Asn Ala Thr Leu Met Asn Ile Ala Asp Asn Pro Thr Asn Val Gln

245 250 255

Leu Pro Gly Met Tyr Asn Lys Glu Asp Asn Pro Arg Val Pro Ile Ile

260 265 270

Val Thr Gly Asn Asp Phe Ser Thr Leu Tyr Ala Pro Leu Ile Arg Asp

275 280 285

Gly Arg Met Glu Lys Phe Tyr Trp Ala Pro Thr Arg Asp Asp Arg Val

290 295 300

Gly Val Cys Lys Gly Ile Phe Arg Thr Asp Asn Val Pro Asp Glu Asp

305 310 315 320

Ile Val Lys Ile Val Asp Ser Phe Pro Gly Gln Ser Ile Asp Phe Phe

325 330 335

Gly Ala Leu Arg Ala Arg Val Tyr Asp Asp Glu Val Arg Lys Trp Val

340 345 350

Ser Asp Thr Gly Val Glu Asn Ile Gly Lys Arg Leu Val Asn Ser Arg

355 360 365

Glu Gly Pro Pro Glu Phe Glu Gln Pro Lys Met Thr Ile Glu Lys Leu

370 375 380

Met Glu Tyr Gly Tyr Met Leu Val Lys Glu Gln Glu Asn Val Lys Arg

385 390 395 400

Val Gln Leu Ala Glu Gln Tyr Leu Ser Glu Ala Ala Leu Gly Asp Ala

405 410 415

Asn Ser Asp Ala Met Lys Thr Gly Ser Phe Tyr Gly Gln Gly Ala Gln

420 425 430

Gln Ala Gly Asn Leu Pro Val Pro Glu Gly Cys Thr Asp Pro Val Ala

435 440 445

Lys Asn Phe Asp Pro Thr Ala Arg Ser Asp Asp Gly Ser Cys Leu Tyr

450 455 460

Thr Phe

465

<210>287

<211>1002

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1002)

<400>287

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Leu Gly Gly Arg Ala Ser Ser Ala Ala Leu Pro Ser Arg Pro Ser Ser

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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Asp Ala Ala Lys Leu Ala Gly Phe Ala Leu Ala Thr Ser Ala Leu Leu

65 70 75 80

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Val Ser Gly Ala Ser Ala Glu Gly Val Pro Arg Arg Leu Thr Phe Asp

85 90 95

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Glu Ile Gln Ser Lys Thr Tyr Met Glu Val Lys Gly Thr Gly Thr Ala

100 105 110

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Asn Gln Cys Pro Thr Val Glu Gly Gly Val Asp Ser Phe Ala Phe Lys

115 120 125

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Ala Gly Lys Tyr Asn Met Lys Lys Phe Cys Leu Glu Pro Thr Ser Phe

130 135 140

acc gtt aag gcg gag ggc gtg gcc aag aac gcg cca ccc gag ttc cag 480

Thr Val Lys Ala Glu Gly Val Ala Lys Asn Ala Pro Pro Glu Phe Gln

145 150 155 160

aag acc aag ctc atg acc cgc ctg acc tac acc ctc gac gag atc gag 528

Lys Thr Lys Leu Met Thr Arg Leu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Ile Glu

165 170 175

ggc ccg ctc gag gtc agc tcc gac gga acc atc aag ttc gag gag aag 576

Gly Pro Leu Glu Val Ser Ser Asp Gly Thr Ile Lys Phe Glu Glu Lys

180 185 190

gac gga atc gac tac gcc gcc gtc acc gtg cag ctg ccg gga ggc gag 624

Asp Gly Ile Asp Tyr Ala Ala Val Thr Val Gln Leu Pro Gly Gly Glu

195 200 205

cgc gtg ccg ttc ctc ttc acc atc aag aat ctg gtc gcc acc ggc aag 672

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210 215 220

ccg gag agc ttc ggc ggg ccc ttc ctc gtg ccc agc tac cgt ggt tcg 720

Pro Glu Ser Phe Gly Gly Pro Phe Leu Val Pro Ser Tyr Arg Gly Ser

225 230 235 240

tcc ttc ctc gac cca aag ggc cgc ggt ggc tct acc ggc tac gac aac 768

Ser Phe Leu Asp Pro Lys Gly Arg Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Asp Asn

245 250 255

gct gtg gcg ctc ccc gcc gga ggc aga gga gac gag gag gag ctc gct 816

Ala Val Ala Leu Pro Ala Gly Gly Arg Gly Asp Glu Glu Glu Leu Ala

260 265 270

aag gag aac gtc aag aac gcc tcg tcg tcg acg ggc aac atc acg ttg 864

Lys Glu Asn Val Lys Asn Ala Ser Ser Ser Thr Gly Asn Ile Thr Leu

275 280 285

agc gtc acc aag agc aag cca gag acc ggc gag gtg att ggc gtc ttc 912

Ser Val Thr Lys Ser Lys Pro Glu Thr Gly Glu Val Ile Gly Val Phe

290 295 300

gag agc gtg cag ccg tcg gac aca gac ctc ggc gcc aag gtg ccc aag 960

Glu Ser Val Gln Pro Ser Asp Thr Asp Leu Gly Ala Lys Val Pro Lys

305 310 315 320

gat gtc aag atc caa ggg gtg tgg tac gcg cag ctc gag tag 1002

Asp Val Lys Ile Gln Gly Val Trp Tyr Ala Gln Leu Glu

325 330

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<211>333

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>288

Met Ala Ala Ser Leu Gln Ala Ala Ala Thr Leu Met Gln Pro Ala Lys

1 5 10 15

Leu Gly Gly Arg Ala Ser Ser Ala Ala Leu Pro Ser Arg Pro Ser Ser

20 25 30

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35 40 45

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Asp Ala Ala Lys Leu Ala Gly Phe Ala Leu Ala Thr Ser Ala Leu Leu

65 70 75 80

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

Thr Val Lys Ala Glu Gly Val Ala Lys Asn Ala Pro Pro Glu Phe Gln

145 150 155 160

Lys Thr Lys Leu Met Thr Arg Leu Thr Tyr Thr Leu Asp Glu Ile Glu

165 170 175

Gly Pro Leu Glu Val Ser Ser Asp Gly Thr Ile Lys Phe Glu Glu Lys

180 185 190

Asp Gly Ile Asp Tyr Ala Ala Val Thr Val Gln Leu Pro Gly Gly Glu

195 200 205

Arg Val Pro Phe Lau Phe Thr Ile Lys Asn Leu Val Ala Thr Gly Lys

210 215 220

Pro Glu Ser Phe Gly Gly Pro Phe Leu Val Pro Ser Tyr Arg Gly Ser

225 230 235 240

Ser Phe Leu Asp Pro Lys Gly Arg Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Asp Asn

245 250 255

Ala Val Ala Leu Pro Ala Gly G1y Arg Gly Asp Glu Glu Glu Leu Ala

260 265 270

Lys Glu Asn Val Lys Asn Ala Ser Ser Ser Thr Gly Asn Ile Thr Leu

275 280 285

Ser Val Thr Lys Ser Lys Pro Glu Thr Gly Glu Val Ile Gly Val Phe

290 295 300

Glu Ser Val Gln Pro Ser Asp Thr Asp Leu Gly Ala Lys Val Pro Lys

305 310 315 320

Asp Val Lys Ile Gln Gly Val Trp Tyr Ala Gln Leu Glu

325 330

<210>289

<211>381

<212>DNA

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<220>

<221>CDS

<222>(1)..(381)

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1 5 10 15

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Ser Ile Ser Arg Arg Gly Ser Ser Phe Ala Ile Val Cys Ser Gly Gly

20 25 30

aag aag atc aag acc gac aag ccc tac ggg att gga ggt ggc atg tca 144

Lys Lys Ile Lys Thr Asp Lys Pro Tyr Gly Ile Gly Gly Gly Met Ser

35 40 45

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Gln Phe Val Asp Lys Tyr Gly Ala Asn Val Asp Gly Tyr Ser Pro Ile

65 70 75 80

tac tcg ccg gag gaa tgg tct ccc acc ggt gac acc tac gtt ggt gga 288

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85 90 95

acc acc ggg ctt ctg atc tgg gcc gtg acc ctc gcc ggg ctc ctc ggc 336

Thr Thr Gly Leu Leu Ile Trp Ala Val Thr Leu Ala Gly Leu Leu Gly

100 105 110

ggc ggc gcc ctc ctc gtc tac aac acc agc gcc ctc gcc ggc taa 381

Gly Gly Ala Leu Leu Val Tyr Asn Thr Ser Ala Leu Ala Gly

115 120 125

<210>290

<211>126

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>290

Met Ile Thr Ser Pro Leu Val Ala Pro Ala Arg Ala Lys Gly Leu Pro

1 5 10 15

Ser Ile Ser Arg Arg Gly Ser Ser Phe Ala Ile Val Cys Ser Gly Gly

20 25 30

Lys Lys Ile Lys Thr Asp Lys Pro Tyr Gly Ile Gly Gly Gly Met Ser

35 40 45

Val Asp Ile Asp Ala Ser Gly Arg Lys Ser Thr Gly Lys Gly Val Tyr

50 55 60

Gln Phe Val Asp Lys Tyr Gly Ala Asn Val Asp Gly Tyr Ser Pro Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Pro Glu Glu Trp Ser Pro Thr Gly Asp Thr Tyr Val Gly Gly

85 90 95

Thr Thr Gly Leu Leu Ile Trp Ala Val Thr Leu Ala Gly Leu Leu Gly

100 105 110

Gly Gly Ala Leu Leu Val Tyr Asn Thr Ser Ala Leu Ala Gly

115 120 125

<210>291

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(345)

<400>291

atg ccg agg gcc acg agc gat gcg aag ctt cta att cag tcc ctg ggc 48

Met Pro Arg Ala Thr Ser Asp Ala Lys Leu Leu Ile Gln Ser Leu Gly

1 5 10 15

aag gct tat gct gcc aca cca aca aat ctc aag atc att gac ctc tat 96

Lys Ala Tyr Ala Ala Thr Pro Thr Asn Leu Lys Ile Ile Asp Leu Tyr

20 25 30

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Val Val Phe Ala Val Ala Thr Ala Leu Ile Gln Val Val Tyr Met Gly

35 40 45

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Ile Val Gly Ser Phe Pro Phe Asn Ser Phe Leu Ser Gly Val Leu Ser

50 55 60

tgc ata gga act gca gtc ctc gct gtt tgc ctt cgt att caa gtt aac 240

Cys Ile Gly Thr Ala Val Leu Ala Val Cys Leu Arg Ile Gln Val Asn

65 70 75 80

aaa gat aac aag gaa ttc aag gat ctt cct cct gaa agg gcg ttt gca 288

Lys Asp Asn Lys Glu Phe Lys Asp Leu Pro Pro Glu Arg Ala Phe Ala

85 90 95

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Asp Phe Val Leu Cys Asn Leu Val Leu His Leu Val Ile Met Asn Phe

100 105 110

ctt ggt tga 345

Leu Gly

<210>292

<211>114

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>292

Met Pro Arg Ala Thr Ser Asp Ala Lys Leu Leu Ile Gln Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Ala Tyr Ala Ala Thr Pro Thr Asn Leu Lys Ile Ile Asp Leu Tyr

20 25 30

Val Val Phe Ala Val Ala Thr Ala Leu Ile Gln Val Val Tyr Met Gly

35 40 45

Ile Val Gly Ser Phe Pro Phe Asn Ser Phe Leu Ser Gly Val Leu Ser

50 55 60

Cys Ile Gly Thr Ala Val Leu Ala Val Cys Leu Arg Ile Gln Val Asn

65 70 75 80

Lys Asp Asn Lys Glu Phe Lys Asp Leu Pro Pro Glu Arg Ala Phe Ala

85 90 95

Asp Phe Val Leu Cys Asn Leu Val Leu His Leu Val Ile Met Asn Phe

100 105 110

Leu Gly

<210>293

<211>786

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(786)

<400>293

atg gct ggg gcc tct gcc aag gtc gtc gcg atg ctg ctc tcc gtg ctc 48

Met Ala Gly Ala Ser Ala Lys Val Val Ala Met Leu Leu Ser Val Leu

1 5 10 15

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Ala Thr Tyr Gly Phe Ala Ala Gly Val Val Tyr Thr Asn Asp Trp Leu

20 25 30

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Pro Ala Lys Ala Thr Trp Tyr Gly Gln Pro Asn Gly Ala Gly Pro Asp

35 40 45

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Asp Asn Gly Gly Ala Cys Gly Phe Lys Asn Thr Asn Gln Tyr Pro Phe

50 55 60

atg tcc atg acc tcc tgc ggc aac gag cct ctg ttc cag gac ggc aag 240

Met Ser Met Thr Ser Cys Gly Asn Glu Pro Leu Phe Gln Asp Gly Lys

65 70 75 80

ggc tgt ggc gcc tgc tac cag ata cgg tgc acc aac aac ccg tcg tgc 288

Gly Cys Gly Ala Cys Tyr Gln Ile Arg Cys Thr Asn Asn Pro Ser Cys

85 90 95

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Ser Gly Gln Pro Arg Thr Val Ile Ile Thr Asp Met Asn Tyr Tyr Pro

100 105 110

gtg gcc agg tac cac ttc gac ctg agc ggc acg gcg ttc ggc gcc atg 384

Val Ala Arg Tyr His Phe Asp Leu Ser Gly Thr Ala Phe Gly Ala Met

115 120 125

gcg agg ccg ggg ctg aac gac cag ctc cgc cac gcc ggc atc atc gac 432

Ala Arg Pro Gly Leu Asn Asp Gln Leu Arg His Ala Gly Ile Ile Asp

130 135 140

atc cag ttc agg cgc gtc ccg tgc tac cac cgc ggc ctc tac gtg aac 480

Ile Gln Phe Arg Arg Val Pro Cys Tyr His Arg Gly Leu Tyr Val Asn

145 150 155 160

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Phe His Val Glu Ala Gly Ser Asn Pro Val Tyr Leu Ala Val Leu Val

165 170 175

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Glu Phe Ala Asn Lys Asp Gly Thr Val Val Gln Leu Asp Val Met Glu

180 185 190

tcg ctc ccc agc ggc aag ccg acg cgg gtc tgg acg ccc atg cgc cgc 624

Ser Leu Pro Ser Gly Lys Pro Thr Arg Val Trp Thr Pro Met Arg Arg

195 200 205

tcc tgg gga tcc atc tgg cgc ctc gac gcc aac cac cgc ctc cag ggc 672

Ser Trp Gly Ser Ile Trp Arg Leu Asp Ala Asn His Arg Leu Gln Gly

210 215 220

ccc ttm tcc ctc cgc atg gtc agc gag tcc ggc cag acc gtc atc gcc 720

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225 230 235 240

cac cag gtc atc ccg gcc aac tgg agg gcc aac acc aac tac ggc tcc 768

His Gln Val Ile Pro Ala Asn Trp Arg Ala Asn Thr Asn Tyr Gly Ser

245 250 255

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Lys Val Gln Phe Arg

260

<210>294

<211>261

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<220>

<221>misc_feature

<222>(226)..(226)

<223>The ′Xaa′at location 226 stands for Leu，or Phe.

<400>294

Met Ala Gly Ala Ser Ala Lys Val Val Ala Met Leu Leu Ser Val Leu

1 5 10 15

Ala Thr Tyr Gly Phe Ala Ala Gly Val Val Tyr Thr Asn Asp Trp Leu

20 25 30

Pro Ala Lys Ala Thr Trp Tyr Gly Gln Pro Asn Gly Ala Gly Pro Asp

35 40 45

Asp Asn Gly Gly Ala Cys Gly Phe Lys Asn Thr Asn Gln Tyr Pro Phe

50 55 60

Met Ser Met Thr Ser Cys Gly Asn Glu Pro Leu Phe Gln Asp Gly Lys

65 70 75 80

Gly Cys Gly Ala Cys Tyr Gln Ile Arg Cys Thr Asn Asn Pro Ser Cys

85 90 95

Ser Gly Gln Pro Arg Thr Val Ile Ile Thr Asp Met Asn Tyr Tyr Pro

100 105 110

Val Ala Arg Tyr His Phe Asp Leu Ser Gly Thr Ala Phe Gly Ala Met

115 120 125

Ala Arg Pro Gly Leu Asn Asp Gln Leu Arg His Ala Gly Ile Ile Asp

130 135 140

Ile Gln Phe Arg Arg Val Pro Cys Tyr His Arg Gly Leu Tyr Val Asn

145 150 155 160

Phe His Val Glu Ala Gly Ser Asn Pro Val Tyr Leu Ala Val Leu Val

165 170 175

Glu Phe Ala Asn Lys Asp Gly Thr Val Val Gln Leu Asp Val Met Glu

180 185 190

Ser Leu Pro Ser Gly Lys Pro Thr Arg Val Trp Thr Pro Met Arg Arg

195 200 205

Ser Trp Gly Ser Ile Trp Arg Leu Asp Ala Asn His Arg Leu Gln Gly

210 215 220

Pro Xaa Ser Leu Arg Met Val Ser Glu Ser Gly Gln Thr Val Ile Ala

225 230 235 240

His Gln Val Ile Pro Ala Asn Trp Arg Ala Asn Thr Asn Tyr Gly Ser

245 250 255

Lys Val Gln Phe Arg

260

<210>295

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(831)

<400>295

atg gcg ttc cgg ctg agc aac agc ctg ctc ggg atc ctg aac gcg gtg 48

Met Ala Phe Arg Leu Ser Asn Ser Leu Leu Gly Ile Leu Asn Ala Val

1 5 10 15

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<220>

<221>CDS

<222>(1)..(3321)

<400>303

gar arg ggt gga ggt kac gcg gag gtg gat tcg gcg gct gct gct act 48

Glu Xaa Gly Gly Gly Xaa Ala Glu Val Asp Ser Ala Ala Ala Ala Thr

1 5 10 15

ggt gct cgg gcc acg gcg gcg acg aca cca cgg agg cag tct ccg gcg 96

Gly Ala Arg Ala Thr Ala Ala Thr Thr Pro Arg Arg Gln Ser Pro Ala

20 25 30

gga gct ggg agc ccc tcg cag cgc gac gcg cgg tgg ggt gac acg agc 144

Gly Ala Gly Ser Pro Ser Gln Arg Asp Ala Arg Trp Gly Asp Thr Ser

35 40 45

tcc tac ggt gct aga aag aag cac agg gtt ttt tgc cag ctt cca aat 192

Ser Tyr Gly Ala Arg Lys Lys His Arg Val Phe Cys Gln Leu Pro Asn

50 55 60

agt gat tgg gcc tta tgc act gta att aca acc tcc ggt gac gat tcc 240

Ser Asp Trp Ala Leu Cys Thr Val Ile Thr Thr Ser Gly Asp Asp Ser

65 70 75 80

gta cta aag ctt cct gaa gga aaa gta ctg agg ttg aaa aca gag agc 288

Val Leu Lys Leu Pro Glu Gly Lys Val Leu Arg Leu Lys Thr Glu Ser

85 90 95

ctt gaa gct gca aat cct gaa att ctt gac ggg gtg gat gat ctt atg 336

Leu Glu Ala Ala Asn Pro Glu Ile Leu Asp Gly Val Asp Asp Leu Met

100 105 110

cag cta agt tat cta agt gag cca tcc gtt ctg tac aat ttg cag tac 384

Gln Leu Ser Tyr Leu Ser Glu Pro Ser Val Leu Tyr Asn Leu Gln Tyr

115 120 125

aga tac tct caa gac ttg ata tat act aaa gca ggt cca gtt ttg gtg 432

Arg Tyr Ser Gln Asp Leu Ile Tyr Thr Lys Ala Gly Pro Val Leu Val

130 135 140

gcg gtc aat cct ttt aag aaa gtt cct cta tat ggt aat gag tac att 480

Ala Val Asn Pro Phe Lys Lys Val Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Tyr Ile

145 150 155 160

gat gca tat aga aat aaa aca aag gat agc cca cac gtt tat gca ata 528

Asp Ala Tyr Arg Asn Lys Thr Lys Asp Ser Pro His Val Tyr Ala Ile

165 170 175

gca gat tca gcc ctc cgt gaa atg aaa aga gat gaa gtt aac cag tct 576

Ala Asp Ser Ala Leu Arg Glu Met Lys Arg Asp Glu Val Asn Gln Ser

180 185 190

atc atc ata agt ggt gag agt gga gca gga aag aca gaa act gca aag 624

Ile Ile Ile Ser Gly Glu Ser Gly Ala Gly Lys Thr Glu Thr Ala Lys

195 200 205

att gct atg cag tat ttg gct tct ctt gga ggt ggg ggt ggc ata gaa 672

Ile Ala Met Gln Tyr Leu Ala Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ile Glu

210 215 220

tat gag atc cta caa acc aac cca ata ctc gag gct ttt ggc aac gca 720

Tyr Glu Ile Leu Gln Thr Asn Pro Ile Leu Glu Ala Phe Gly Asn Ala

225 230 235 240

aag aca cta aga aat gac aac tca agt cgc ttt gga aag ctc att gaa 768

Lys Thr Leu Arg Asn Asp Asn Ser Ser Arg Phe Gly Lys Leu Ile Glu

245 250 255

att cat ttt agt aca act gga agg att tgt ggt gcc atg att caa aca 816

Ile His Phe Ser Thr Thr Gly Arg Ile Cys Gly Ala Met Ile Gln Thr

260 265 270

ttt cta ctt gag aag tca agg gtt gta caa tgt gca gtt ggc gag cgc 864

Phe Leu Leu Glu Lys Ser Arg Val Val Gln Cys Ala Val Gly Glu Arg

275 280 285

tcc tac cat att ttt tat caa cta tgt gcc ggt gct cct gcg tcc ctc 912

Ser Tyr His Ile Phe Tyr Gln Leu Cys Ala Gly Ala Pro Ala Ser Leu

290 295 300

aga gat aag ttg aat atg aag aaa gcg gat gaa tac aaa tat ttg aag 960

Arg Asp Lys Leu Asn Met Lys Lys Ala Asp Glu Tyr Lys Tyr Leu Lys

305 310 315 320

cag agt tgc tgc tat tca att gcc ggt gtg gat gat gct caa atg ttc 1008

Gln Ser Cys Cys Tyr Ser Ile Ala Gly Val Asp Asp Ala Gln Met Phe

325 330 335

cgt act gta acg gaa gct atg aac atc gtt cat atc agc aaa gag gac 1056

Arg Thr Val Thr Glu Ala Met Asn Ile Val His Ile Ser Lys Glu Asp

340 345 350

caa gat aat gtt ttc acg atg gtt tct gca att cta tgg cta gga gat 1104

Gln Asp Asn Val Phe Thr Met Val Ser Ala Ile Leu Trp Leu Gly Asp

355 360 365

gtc tct ttc acg gtc att gac aac gaa aac cat gtt gag att gtt gta 1152

Val Ser Phe Thr Val Ile Asp Asn Glu Asn His Val Glu Ile Val Val

370 375 380

gat gaa gcg gca gaa acg gtc gca aga ctt ctt ggc tgc agt att gaa 1200

Asp Glu Ala Ala Glu Thr Val Ala Arg Leu Leu Gly Cys Ser Ile Glu

385 390 395 400

gat ctc aat tta gct ttg tcg aag agg cac atg aaa gtt aat aat gaa 1248

Asp Leu Asn Leu Ala Leu Ser Lys Arg His Met Lys Val Asn Asn Glu

405 410 415

aat att gta cag aaa ctc acc ctt tca cag gca atc gac aca aga gat 1296

Asn Ile Val Gln Lys Leu Thr Leu Ser Gln Ala Ile Asp Thr Arg Asp

420 425 430

gcg ttg gcc aag tca ctc tat gcc agt ttg ttt gag tgg ctt gtt gaa 1344

Ala Leu Ala Lys Ser Leu Tyr Ala Ser Leu Phe Glu Trp Leu Val Glu

435 440 445

caa att aac aag tct ctt tca gtt ggc aag cgt cga act ggg aga tca 1392

Gln Ile Asn Lys Ser Leu Ser Val Gly Lys Arg Arg Thr Gly Arg Ser

450 455 460

atc agc att ctt gat atc tat ggc ttt gaa tca ttc gat agg aac agt 1440

Ile Ser Ile Leu Asp Ile Tyr Gly Phe Glu Ser Phe Asp Arg Asn Ser

465 470 475 480

ttt gaa cag ttc tgt att aac tat gct aat gaa agg ctc caa caa cat 1488

Phe Glu Gln Phe Cys Ile Asn Tyr Ala Asn Glu Arg Leu Gln Gln His

485 490 495

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Phe Asn Arg His Leu Phe Lys Leu Glu Gln Glu Glu Tyr Val Glu Asp

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Gly Ile Asp Trp Ala Lys Val Glu Phe Glu Asp Asn Gln Asn Cys Leu

515 520 525

aat ctc ttt gag aaa aag cca ctg ggg ttg ttg tct ctg cta gat gaa 1632

Asn Leu Phe Glu Lys Lys Pro Leu Gly Leu Leu Ser Leu Leu Asp Glu

530 535 540

gaa tct acc ttc ccc aat gcc aca gat ctt act ttt gcg aac aag ctt 1680

Glu Ser Thr Phe Pro Asn Ala Thr Asp Leu Thr Phe Ala Asn Lys Leu

545 550 555 560

aag caa cat ctg aac aat aat tct tgc ttc cga gga gaa aga ggc aag 1728

Lys Gln His Leu Asn Asn Asn Ser Cys Phe Arg Gly Glu Arg Gly Lys

565 570 575

gct ttt gca gtc cgt cac tat gca gga gag gtg gct tat gac acg tca 1776

Ala Phe Ala Val Arg His Tyr Ala Gly Glu Val Ala Tyr Asp Thr Ser

580 585 590

ggt ttt cta gag aag aat aga gat tta ttg cac atg gac tca att cag 1824

Gly Phe Leu Glu Lys Asn Arg Asp Leu Leu His Met Asp Ser Ile Gln

595 600 605

ttc ctt gcc aaa tgc aaa tcc tca cta cca caa atg ttt gca tcc aaa 1872

Phe Leu Ala Lys Cys Lys Ser Ser Leu Pro Gln Met Phe Ala Ser Lys

610 615 620

atg ctt tct caa tct gat aat ccg tta cct gtt cca tat aga aat agt 1920

Met Leu Ser Gln Ser Asp Asn Pro Leu Pro Val Pro Tyr Arg Asn Ser

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gct gct gac tca cag aag tta agt gtt gcg atg aag ttt aag gga caa 1968

Ala Ala Asp Ser Gln Lys Leu Ser Val Ala Met Lys Phe Lys Gly Gln

645 650 655

ttg ttc caa ctt atg caa aga ctc gaa agt aca aca cca cac ttt ata 2016

Leu Phe Gln Leu Met Gln Arg Leu Glu Ser Thr Thr Pro His Phe Ile

660 665 670

cgt tgt att aag cca aac aat ttg caa ctc cct gca att tat gaa caa 2064

Arg Cys Ile Lys Pro Asn Asn Leu Gln Leu Pro Ala Ile Tyr Glu Gln

675 680 685

gga ctt gtg ctt caa caa ctc aaa tgt tgt ggg gtt ctt gag gtt gtc 2112

Gly Leu Val Leu Gln Gln Leu Lys Cys Cys Gly Val Leu Glu Val Val

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cga att tca aga tct gga tat cca aca aga atg act cat cag aaa ttt 2160

Arg Ile Ser Arg Ser Gly Tyr Pro Thr Arg Met Thr His Gln Lys Phe

705 710 715 720

gct cga cgg tat ggc ttt ctt ctt ctt gag gat gtc gca tct caa gac 2208

Ala Arg Arg Tyr Gly Phe Leu Leu Leu Glu Asp Val Ala Ser Gln Asp

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cca ctt agt gtt tcg gtt gca att ctt cac cag ttt aac att ttg cct 2256

Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Ile Leu His Gln Phe Asn Ile Leu Pro

740 745 750

gag atg tat caa gtt ggg tac aca aaa ttg ttc ttt cga act ggc cag 2304

Glu Met Tyr Gln Val Gly Tyr Thr Lys Leu Phe Phe Arg Thr Gly Gln

755 760 765

att ggc aaa ctt gaa gac act cgg aac cgt act ctg cat ggt att tta 2352

Ile Gly Lys Leu Glu Asp Thr Arg Asn Arg Thr Leu His Gly Ile Leu

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Arg Val Gln Ser Cys Phe Arg Gly His Gln Ala Arg Arg His Ala Arg

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gaa cga ata aga gga gtt ttg gct ctt caa tca ttt att cga ggt gag 2448

Glu Arg Ile Arg Gly Val Leu Ala Leu Gln Ser Phe Ile Arg Gly Glu

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aat gca aga aaa atg tat tcg tct ctg gca agg aaa cac agg gca gcc 2496

Asn Ala Arg Lys Met Tyr Ser Ser Leu Ala Arg Lys His Arg Ala Ala

820 825 830

att att tta cag aga aat cta aaa tgc tgg ctt gca aga aga tat ttc 2544

Ile Ile Leu Gln Arg Asn Leu Lys Cys Trp Leu Ala Arg Arg Tyr Phe

835 840 845

gtt aac ata cgg aag gct tca gta gta ata caa tct ggc att cgt ggt 2592

Val Asn Ile Arg Lys Ala Ser Val Val Ile Gln Ser Gly Ile Arg Gly

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tgt ctt gtt cga aga tgt gct ggc aat gtt gat cta ttg aat gtg cta 2640

Cys Leu Val Arg Arg Cys Ala Gly Asn Val Asp Leu Leu Asn Val Leu

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aga gaa ttc gaa tca aag aag gag gca gag ggt gac caa att ttg att 2688

Arg Glu Phe Glu Ser Lys Lys Glu Ala Glu Gly Asp Gln Ile Leu Ile

885 890 895

aag gca tca ttc ctg gct gag cta caa agg cga ata tta aag gcc gag 2736

Lys Ala Ser Phe Leu Ala Glu Leu Gln Arg Arg Ile Leu Lys Ala Glu

900 905 910

gcg aca gtc cga gaa aag gat gaa gag aac gag atg ctt cag cag cga 2784

Ala Thr Val Arg Glu Lys Asp Glu Glu Asn Glu Met Leu Gln Gln Arg

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ctt cag caa tat gaa aac cga tgg tca gaa tac gag cag aaa atg aaa 2832

Leu Gln Gln Tyr Glu Asn Arg Trp Ser Glu Tyr Glu Gln Lys Met Lys

930 935 940

gcg atg gag gaa atg tgg cag aag caa atg cgg tca tta caa tca agc 2880

Ala Met Glu Glu Met Trp Gln Lys Gln Met Arg Ser Leu Gln Ser Ser

945 950 955 960

cta tcc gta gca aag aag agc ctt gct ctt gat gag acg cct agg atg 2928

Leu Ser Val Ala Lys Lys Ser Leu Ala Leu Asp Glu Thr Pro Arg Met

965 970 975

tcc gac tca tcg gtc gac cag agc tgg gag agc aat ggg gtt cac att 2976

Ser Asp Ser Ser Val Asp Gln Ser Trp Glu Ser Asn Gly Val His Ile

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ggc agc gcg tcg cag ctg gtt cca cgc acc gtt gga cgg gag atg aat 3024

Gly Ser Ala Ser Gln Leu Val Pro Arg Thr Val Gly Arg Glu Met Asn

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gcc agc atc agc gtc atc agc cgc ttg gcc gaa gag ttc gag cag 3069

Ala Ser Ile Ser Val Ile Ser Arg Leu Ala Glu Glu Phe Glu Gln

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Arg Ser Gln Val Phe Ala Asp Asp Ala Lys Phe Leu Val Glu Val

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<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>The ′Xaa′at location 2 stands for Arg，or Lys.

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>The ′Xaa′at location 6 stands for Asp，or Tyr.

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Gln Ser Cys Cys Tyr Ser Ile Ala Gly Val Asp Asp Ala Gln Met Phe

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Asp Leu Asn Leu Ala Leu Ser Lys Arg His Met Lys Val Asn Asn Glu

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Gln Ile Asn Lys Ser Leu Ser Val Gly Lys Arg Arg Thr Gly Arg Ser

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Phe Glu Gln Phe Cys Ile Asn Tyr Ala Asn Glu Arg Leu Gln Gln His

485 490 495

Phe Asn Arg His Leu Phe Lys Leu Glu Gln Glu Glu Tyr Val Glu Asp

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Gly Ile Asp Trp Ala Lys Val Glu Phe Glu Asp Asn Gln Asn Cys Leu

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Asn Leu Phe Glu Lys Lys Pro Leu Gly Leu Leu Ser Leu Leu Asp Glu

530 535 540

Glu Ser Thr Phe Pro Asn Ala Thr Asp Leu Thr Phe Ala Asn Lys Leu

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580 585 590

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Met Leu Ser Gln Ser Asp Asn Pro Leu Pro Val Pro Tyr Arg Asn Ser

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Ala Gly Ala Gly Gly Gln Phe Gln Pro Ala Arg Glu Asp Arg Lys Thr

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ggc ggc atc ctc cac cgc tcc ggc agc tca agc tcc agc tcg tcg tct 240

Gly Gly Ile Leu His Arg Ser Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser

65 70 75 80

gag gac gac ggg atg gga ggg agg agg aag aag ggg atc aag gag aag 288

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atc aag gag aag ctg ccc ggc ggc aac aag ggc aac aac cag cag cag 336

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Ala Gly Met Thr Gly Ala Gly Thr Gly Val His Gly Ala Glu Tyr Gly

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Asn Ala Gly Glu Lys Lys Gly Phe Met Asp Lys Ile Lys Glu Lys Leu

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<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1881)

<400>307

atg gcg acg gcg gcg ggg atg ggg atc ggg gcg gcg tgc ctg gtg gcg 48

Met Ala Thr Ala Ala Gly Met Gly Ile Gly Ala Ala Cys Leu Val Ala

1 5 10 15

ccg cag gtg agg ccg ggg agg agg ttg cgg ctc cag cgg gtg cgg agg 96

Pro Gln Val Arg Pro Gly Arg Arg Leu Arg Leu Gln Arg Val Arg Arg

20 25 30

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Arg Cys Val Ala Glu Leu Ser Arg Asp Gly Gly Ser Ala Gln Arg Pro

35 40 45

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Leu Ala Pro Ala Pro Leu Val Lys Gln Pro Val Leu Pro Thr Phe Leu

50 55 60

gtg ccg acg tcg acg cca ccc gcg ccc acg cag tcg ccg gcg ccg gcg 240

Val Pro Thr Ser Thr Pro Pro Ala Pro Thr Gln Ser Pro Ala Pro Ala

65 70 75 80

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85 90 95

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Asp Leu Glu Gly Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Lys Thr Ile Phe Val

100 105 110

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115 120 125

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Ala Lys Val Thr Arg Ser Val Val Phe Val Thr Gly Glu Ala Ser Pro

130 135 140

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145 150 155 160

gct ctt gct ctt cgt ggt cat cgt gtg atg gtt gta atg ccg aga tac 528

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

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340 345 350

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355 360 365

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405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

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465 470 475 480

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Val Pro Val Ser His Arg Ile Thr Ala Gly Cys Asp Ile Leu Leu Met

515 520 525

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530 535 540

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420 425 430

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435 440 445

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Leu Ile Lys Leu Ala Ile Pro Asp Leu Met Arg Asp Asn Ile Gln Phe

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180 185 190

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Lys Leu Glu Ala Glu Val Lys Lys Glu Glu Lys Glu Glu Lys Leu Glu

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Asp Phe Val Gly Glu Ala Thr Ile Ser Leu Glu Ala Ile Tyr Thr Glu

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Met Asn Pro Glu Tyr Asp Tyr Leu Phe Lys Leu Leu Leu Ile Gly Asp

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tcg ggc gtc ggg aag tct tgc ctg ctt ctg agg ttt gcg gac gat tca 96

Ser Gly Val Gly Lys Ser Cys Leu Leu Leu Arg Phe Ala Asp Asp Ser

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tat ctg gag agc tat atc agt acc atc ggc gtt gat ttt aaa atc cgc 144

Tyr Leu Glu Ser Tyr Ile Ser Thr Ile Gly Val Asp Phe Lys Ile Arg

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Ala Gly Gln Glu Arg Phe Arg Thr Ile Thr Ser Ser Tyr Tyr Arg Gly

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100 105 110

aat gtg aac aag ctc ttg gtg ggg aac aag tgt gat cta gct gag aac 384

Asn Val Asn Lys Leu Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Ala Glu Asn

115 120 125

aga gtg gtt tct tat gag gct ggc aag gcc ctt gct gat gag att gga 432

Arg Val Val Ser Tyr Glu Ala Gly Lys Ala Leu Ala Asp Glu Ile Gly

130 135 140

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145 150 155 160

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Ala Phe Met Thr Met Ala Gly Glu Ile Lys Asn Arg Met Ala Ser Gln

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ggc cgt aca aat gca agc aag cct gca acc gtg caa atg ccg agg caa 576

Gly Arg Thr Asn Ala Ser Lys Pro Ala Thr Val Gln Met Pro Arg Gln

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Leu Arg Arg Arg Val Ala His Pro Lys Val Ser Pro Glu Leu Arg Ala

450 455 460

Ile Trp Val Asn Tyr Leu Ser Gln Cys Asp Glu Ser Leu Gly Val Lys

465 470 475 480

Ile Ala Asn Arg Leu Asn Val Lys Pro Ser Met

485 490

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<212>DNA

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<220>

<221>CDS

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<400>321

atg gcg gcg aac gcg ggg atg gtg gcg gga tcc cgc aac cgg aac gag 48

Met Ala Ala Asn Ala Gly Met Val Ala Gly Ser Arg Asn Arg Asn Glu

1 5 10 15

ttc gtc atg atc cgc ccc gac ggc gac gcg cca ccg ccg gct aag cca 96

Phe Val Met Ile Arg Pro Asp Gly Asp Ala Pro Pro Pro Ala Lys Pro

20 25 30

ggg aag agt gtg aat ggt cag gtc tgc cag att tgt ggc gac act gtt 144

Gly Lys Ser Val Asn Gly Gln Val Cys Gln Ile Cys Gly Asp Thr Val

35 40 45

ggc gtc tcg gcc acc ggc gac gtc ttt gtt gcc tgc aat gag tgc gcc 192

Gly Val Ser Ala Thr Gly Asp Val Phe Val Ala Cys Asn Glu Cys Ala

50 55 60

ttc ccg gtc tgc cgc cct tgc tac gag tac gag cgc aag gaa ggg aac 240

Phe Pro Val Cys Arg Pro Cys Tyr Glu Tyr Glu Arg Lys Glu Gly Asn

65 70 75 80

cag tgc tgc ccc cag tgc aag act aga tac aag agg cac aaa ggt agc 288

Gln Cys Cys Pro Gln Cys Lys Thr Arg Tyr Lys Arg His Lys Gly Ser

85 90 95

cct aga gtt cag ggc gat gag gag gag gaa gat gtt gat gac ctg gac 336

Pro Arg Val Gln Gly Asp Glu Glu Glu Glu Asp Val Asp Asp Leu Asp

100 105 110

aat gaa ttc aat tat aag cat ggc aat ggc aaa ggt cca gag tgg cag 384

Asn Glu Phe Asn Tyr Lys His Gly Asn Gly Lys Gly Pro Glu Trp Gln

115 120 125

ata cag aga cag ggg gaa gat gtt gac ctg tct tca tct tct cgc cac 432

Ile Gln Arg Gln Gly Glu Asp Val Asp Leu Ser Ser Ser Ser Arg His

130 135 140

gaa caa cat cgg att ccc cgt ctg aca agt ggg caa cag atc tca gga 480

Glu Gln His Arg Ile Pro Arg Leu Thr Ser Gly Gln Gln Ile Ser Gly

145 150 155 160

gag atc cct gat gct tcc ccc gat cgc cat tct atc cgc agc gga aca 528

Glu Ile Pro Asp Ala Ser Pro Asp Arg His Ser Ile Arg Ser Gly Thr

165 170 175

tca agc tat gtt gat cca agt gtt cca gtt cct gtg agg att gtg gac 576

Ser Ser Tyr Val Asp Pro Ser Val Pro Val Pro Val Arg Ile Val Asp

180 185 190

ccc tcc aag gac ttg aat tcc tat ggg att aac agt gtt gac tgg caa 624

Pro Ser Lys Asp Leu Asn Ser Tyr Gly Ile Asn Ser Val Asp Trp Gln

195 200 205

gaa aga gtt gcc agc tgg agg aac aag cag gac aaa aat atg atg cag 672

Glu Arg Val Ala Ser Trp Arg Asn Lys Gln Asp Lys Asn Met Met Gln

210 215 220

gta gct aat aaa tat cca gag gca aga ggg gga gac atg gaa ggg act 720

Val Ala Asn Lys Tyr Pro Glu Ala Arg Gly Gly Asp Met Glu Gly Thr

225 230 235 240

ggt tca aat ggt gaa gat atc caa atg gtt gat gat gca cgt cta cct 768

Gly Ser Asn Gly Glu Asp Ile Gln Met Val Asp Asp Ala Arg Leu Pro

245 250 255

ctg agc cgc ata gtg cct atc cct tca aac cag ctc aac ctt tac cgg 816

Leu Ser Arg Ile Val Pro Ile Pro Ser Asn Gln Leu Asn Leu Tyr Arg

260 265 270

att gtt atc att ctc cgt ctt atc atc ctg atg ttc ttc ttc caa tat 864

Ile Val Ile Ile Leu Arg Leu Ile Ile Leu Met Phe Phe Phe Gln Tyr

275 280 285

cgt gtc act cat cca gtg cgg gat gct tat gga ttg tgg cta gta tct 912

Arg Val Thr His Pro Val Arg Asp Ala Tyr Gly Leu Trp Leu Val Ser

290 295 300

gtt atc tgt gaa att tgg ttt gcc tta tcc tgg ctc cta gat caa ttc 960

Val Ile Cys Glu Ile Trp Phe Ala Leu Ser Trp Leu Leu Asp Gln Phe

305 310 315 320

cca aag tgg tac ccg ata aac cgt gaa aca tac ctt gac agg ctt gca 1008

Pro Lys Trp Tyr Pro Ile Asn Arg Glu Thr Tyr Leu Asp Arg Leu Ala

325 330 335

ttg aga tat gat agg gag gga gag cca tca cag ctt gct ccc att gat 1056

Leu Arg Tyr Asp Arg Glu Gly Glu Pro Ser Gln Leu Ala Pro Ile Asp

340 345 350

gtc ttt gtc agt acg gtg gat cca cta aag gaa cct cct ctg atc aca 1104

Val Phe Val Ser Thr Val Asp Pro Leu Lys Glu Pro Pro Leu Ile Thr

355 360 365

gca aac act gtt ttg tcc att ctg gct gtg gat tac cct gtt gac aaa 1152

Ala Asn Thr Val Leu Ser Ile Leu Ala Val Asp Tyr Pro Val Asp Lys

370 375 380

gtg tca tgc tat gtt tct gac gat ggt tca gct atg tta act ttt gag 1200

Val Ser Cys Tyr Val Ser Asp Asp Gly Ser Ala Met Leu Thr Phe Glu

385 390 395 400

gct ctg tca gaa act gca gaa ttt gct agg aag tgg gtt ccg ttt tgc 1248

Ala Leu Ser Glu Thr Ala Glu Phe Ala Arg Lys Trp Val Pro Phe Cys

405 410 415

aag aag cac aat att gaa cca cga gct cca gag ttt tac ttt gct caa 1296

Lys Lys His Asn Ile Glu Pro Arg Ala Pro Glu Phe Tyr Phe Ala Gln

420 425 430

aaa ata gat tac ctg aag gac aaa atc caa cct tcc ttt gtt aaa gaa 1344

Lys Ile Asp Tyr Leu Lys Asp Lys Ile Gln Pro Ser Phe Val Lys Glu

435 440 445

agg cgg gca atg aag aga gag tat gaa gaa ttc aag gta cgg atc aat 1392

Arg Arg Ala Met Lys Arg Glu Tyr Glu Glu Phe Lys Val Arg Ile Asn

450 455 460

gct ctt gtt gcg aag gca caa aaa gta cct gaa gag ggg tgg acc atg 1440

Ala Leu Val Ala Lys Ala Gln Lys Val Pro Glu Glu Gly Trp Thr Met

465 470 475 480

gct gat ggc act gct tgg cct ggg aat aac cca agg gat cac cct ggc 1488

Ala Asp Gly Thr Ala Trp Pro Gly Asn Asn Pro Arg Asp His Pro Gly

485 490 495

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Met Ile Gln Val Phe Leu Gly His Ser Gly Gly Leu Asp Thr Asp Gly

500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

tct gct gtg ctg aca aat ggt gcc tat ctt ctc aat gtg gat tgt gat 1680

Ser Ala Val Leu Thr Asn Gly Ala Tyr Leu Leu Asn Val Asp Cys Asp

545 550 555 560

cat tac ttc aac aat agc aaa gct ctt aga gaa gca atg tgc ttc atg 1728

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565 570 575

atg gat ccc gca cta gga aga 1749

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<212>PRT

<213>Oryza sativa

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Gly Lys Ser Val Asn Gly Gln Val Cys Gln Ile Cys Gly Asp Thr Val

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Gly Val Ser Ala Thr Gly Asp Val Phe Val Ala Cys Asn Glu Cys Ala

50 55 60

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65 70 75 80

Gln Cys Cys Pro Gln Cys Lys Thr Arg Tyr Lys Arg His Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Arg Val Gln Gly Asp Glu Glu Glu Glu Asp Val Asp Asp Leu Asp

100 105 110

Asn Glu Phe Asn Tyr Lys His Gly Asn Gly Lys Gly Pro Glu Trp Gln

115 120 125

Ile Gln Arg Gln Gly Glu Asp Val Asp Leu Ser Ser Ser Ser Arg His

130 135 140

Glu Gln His Arg Ile Pro Arg Leu Thr Ser Gly Gln Gln Ile Ser Gly

145 150 155 160

Glu Ile Pro Asp Ala Ser Pro Asp Arg His Ser Ile Arg Ser Gly Thr

165 170 175

Ser Ser Tyr Val Asp Pro Ser Val Pro Val Pro Val Arg Ile Val Asp

180 185 190

Pro Ser Lys Asp Leu Asn Ser Tyr Gly Ile Asn Ser Val Asp Trp Gln

195 200 205

Glu Arg Val Ala Ser Trp Arg Asn Lys Gln Asp Lys Asn Met Met Gln

210 215 220

Val Ala Asn Lys Tyr Pro Glu Ala Arg Gly Gly Asp Met Glu Gly Thr

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Gly Ser Asn Gly Glu Asp Ile Gln Met Val Asp Asp Ala Arg Leu Pro

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Leu Ser Arg Ile Val Pro Ile Pro Ser Asn Gln Leu Asn Leu Tyr Arg

260 265 270

Ile Val Ile Ile Leu Arg Leu Ile Ile Leu Met Phe Phe Phe Gln Tyr

275 280 285

Arg Val Thr His Pro Val Arg Asp Ala Tyr Gly Leu Trp Leu Val Ser

290 295 300

Val Ile Cys Glu Ile Trp Phe Ala Leu Ser Trp Leu Leu Asp Gln Phe

305 310 315 320

Pro Lys Trp Tyr Pro Ile Asn Arg Glu Thr Tyr Leu Asp Arg Leu Ala

325 330 335

Leu Arg Tyr Asp Arg Glu Gly Glu Pro Ser Gln Leu Ala Pro Ile Asp

340 345 350

Val Phe Val Ser Thr Val Asp Pro Leu Lys Glu Pro Pro Leu Ile Thr

355 360 365

Ala Asn Thr Val Leu Ser Ile Leu Ala Val Asp Tyr Pro Val Asp Lys

370 375 380

Val Ser Cys Tyr Val Ser Asp Asp Gly Ser Ala Met Leu Thr Phe Glu

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Ala Leu Ser Glu Thr Ala Glu Phe Ala Arg Lys Trp Val Pro Phe Cys

405 410 415

Lys Lys His Asn Ile Glu Pro Arg Ala Pro Glu Phe Tyr Phe Ala Gln

420 425 430

Lys Ile Asp Tyr Leu Lys Asp Lys Ile Gln Pro Ser Phe Val Lys Glu

435 440 445

Arg Arg Ala Met Lys Arg Glu Tyr Glu Glu Phe Lys Val Arg Ile Asn

450 455 460

Ala Leu Val Ala Lys Ala Gln Lys Val Pro Glu Glu Gly Trp Thr Met

465 470 475 480

Ala Asp Gly Thr Ala Trp Pro Gly Asn Asn Pro Arg Asp His Pro Gly

485 490 495

Met Ile Gln Val Phe Leu Gly His Ser Gly Gly Leu Asp Thr Asp Gly

500 505 510

Asn Glu Leu Pro Arg Leu Val Tyr Val Ser Arg Glu Lys Arg Pro Gly

515 520 525

Phe Gln His His Lys Lys Ala Gly Ala Met Asn Ala Leu Ile Arg Val

530 535 540

Ser Ala Val Leu Thr Asn Gly Ala Tyr Leu Leu Asn Val Asp Cys Asp

545 550 555 560

His Tyr Phe Asn Asn Ser Lys Ala Leu Arg Glu Ala Met Cys Phe Met

565 570 575

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580

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<220>

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atg acg ctg gtg aag att ggt ccg tgg ggc gga aat gga ggg tca gct 48

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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Gly Gln Glu Tyr Ala Ile Gly Pro Trp Gly Gly Gly Glu Ser Thr Ser

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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Phe Gly Arg Ser Gly Thr Leu Ile Asp Ala Ile Gly Ile Tyr Val His

130 135 140

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Pro

145

<210>324

<211>145

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>324

Met Thr Leu Val Lys Ile Gly Pro Trp Gly Gly Asn Gly Gly Ser Ala

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Gln Asp Ile Ser Val Pro Pro Lys Lys Leu Leu Gly Val Thr Ile Tyr

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Ser Ser Asp Ala Ile Arg Ser Ile Ala Phe Asn Tyr Ile Gly Val Asp

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Gly Gln Glu Tyr Ala Ile Gly Pro Trp Gly Gly Gly Glu Ser Thr Ser

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Thr Glu Ile Lys Leu Gly Ser Ser Glu Gln Ile Lys Glu Ile Ser Gly

65 70 75 80

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Ile Val Thr Ser Ala Asn Asn Thr Tyr Glu Ala Gly Val Pro Asn Gly

100 105 110

Lys Glu Phe Ser Ile Pro Leu Gln Asp Ser Gly His Val Val Gly Phe

115 120 125

Phe Gly Arg Ser Gly Thr Leu Ile Asp Ala Ile Gly Ile Tyr Val His

130 135 140

Pro

145

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(873)

<400>325

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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Gly Gly Val Gly Val Leu Gly Ile Ser Trp Ala Phe Gly Gly Met Ile

85 90 95

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Phe Ile Leu Val Tyr Cys Thr Ala Gly Ile Ser Gly Gly His Ile Asn

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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Ile Ala Thr Leu Leu Phe Leu Tyr Ile Thr Val Ala Thr Val Ile Gly

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100 105 110

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115 120 125

Arg Ala Ile Leu Tyr Ile Val Ala Gln Cys Lau Gly Ala Ile Cys Gly

130 135 140

Val Gly Leu Val Asn Ala Phe Pro Asn Ala Tyr Phe Asn Arg Tyr Gly

145 150 155 160

Gly Gly Ala Asn Thr Leu Ala Ala Gly Tyr Ser Lys Gly Thr Gly Leu

165 170 175

Ala Ala Glu Ile Ile Gly Thr Phe Val Leu Val Tyr Thr Val Phe Ser

180 185 190

Ala Thr Asp Pro Lys Arg Asn Ala Arg Asp Ser His Val Pro Val Leu

195 200 205

Ala Pro Leu Pro Ile Gly Phe Ala Val Phe Met Val His Leu Ala Thr

210 215 220

Ile Pro Ile Thr Gly Thr Gly Ile Asn Pro Ala Arg Ser Ile Gly Ala

225 230 235 240

Ala Val Ile Phe Asn Asn Glu Lys Ala Trp His Asn His Trp Ile Phe

245 250 255

Trp Val Gly Pro Phe Val Gly Ala Ala Ile Ala Ala Phe Tyr His Gln

260 265 270

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275 280 285

Asn Ala

290

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<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

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<222>(1)..(27 9)

<400>327

tgc aaa gtt tca tat att gac gca att ctt ggg aca acc gtc aag gtt 48

Cys Lys Val Ser Tyr Ile Asp Ala Ile Leu Gly Thr Thr Val Lys Val

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20 25 30

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35 40 45

aag tca aat gct cgt gga gac cag cta gtg cgt gta cag gtc gag att 192

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Pro Lys Arg Leu Ser Ser Asp Glu Arg Lys Leu Ile Glu Glu Leu Ala

65 70 75 80

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<211>92

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>328

Cys Lys Val Ser Tyr Ile Asp Ala Ile Leu Gly Thr Thr Val Lys Val

1 5 10 15

Pro Thr Val Asp Gly Met Val Asp Leu Lys Ile Pro Ser Gly Thr Gln

20 25 30

Pro Gly Thr Thr Leu Val Met Ser Lys Lys Gly Val Pro Leu Leu Gly

35 40 45

Lys Ser Asn Ala Arg Gly Asp Gln Leu Val Arg Val Gln Val Glu Ile

50 55 60

Pro Lys Arg Leu Ser Ser Asp Glu Arg Lys Leu Ile Glu Glu Leu Ala

65 70 75 80

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85 90

<210>329

<211>924

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(924)

<400>329

atg agc agc ccc cat ggc ggc ctc gac gac cag atc gag cgc ctc atg 48

Met Ser Ser Pro His Gly Gly Leu Asp Asp Gln Ile Glu Arg Leu Met

1 5 10 15

cag tgc aag ccc ctc ccc gag ccc gag gtc aga gca ctt tgc gag aag 96

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

gaa ctg ttc cga atc ggt gga aag tgc cca gat aca aac tac ttg ttt 240

Glu Leu Phe Arg Ile Gly Gly Lys Cys Pro Asp Thr Asn Tyr Leu Phe

65 70 75 80

atg gga gat tac gtg gat cgt ggt tat tat tct gtt gaa act gtc acg 288

Met Gly Asp Tyr Val Asp Arg Gly Tyr Tyr Ser Val Glu Thr Val Thr

85 90 95

ctt ttg gtg gct tta aag gtt cgt tat cct cag cga att act att ctc 336

Leu Leu Val Ala Leu Lys Val Arg Tyr Pro Gln Arg Ile Thr Ile Leu

100 105 110

aga gga aac cac gaa agt cga cag atc act caa gtt tat gga ttc tat 384

Arg Gly Asn His Glu Ser Arg Gln Ile Thr Gln Val Tyr Gly Phe Tyr

115 120 125

gac gag tgc tta agg aag tac ggg aat gca aat gtg tgg aaa act ttt 432

Asp Glu Cys Leu Arg Lys Tyr Gly Asn Ala Asn Val Trp Lys Thr Phe

130 135 140

aca gat ctc ttc gat tac ttc ccc ttg aca gca ttg gtt gag tca gaa 480

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145 150 155 160

ata ttt tgc ctg cat ggt gga tta tcg cca tcc att gag aca ctt gat 528

Ile Phe Cys Leu His Gly Gly Leu Ser Pro Ser Ile Glu Thr Leu Asp

165 170 175

aac ata cgt aac ttc gat cgt gtc caa gaa gtt ccc cat gaa ggg ccc 576

Asn Ile Arg Asn Phe Asp Arg Val Gln Glu Val Pro His Glu Gly Pro

180 185 190

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

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65 70 75 80

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180 185 190

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

Ile Phe Ser Ala Pro Asn Tyr Cys Tyr Arg Cys Gly Asn Met Ala Ser

260 265 270

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275 280 285

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Tyr Phe Leu

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50 55 60

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100 105 110

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115 120 125

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180 185 190

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195 200 205

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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305 310 315 320

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Asn Ser Gln Lys Phe Pro Ile Leu Asn Leu Ile Gln Met Ser Ala Thr

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355 360 365

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gca caa tta ttg atc att ccg caa cat tat gct gtc ttg aag aaa gca 1248

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465 470 475 480

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405 410 415

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Arg Lys Glu Arg Arg Arg Arg His Glu Ser Ser Cys Leu Ser Ala Pro

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ggc atg gtt agc tac tat ctc att ggc tct atc gaa ggc ttt gac ctt 672

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210 215 220

ctt gac atg tta aag aag gaa gaa gaa atc gtt ccg gca gta aaa gaa 720

Leu Asp Met Leu Lys Lys Glu Glu Glu Ile Val Pro Ala Val Lys Glu

225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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Gly Ser Ser Ala Lys Arg Leu Gln Lys Gln Ser Ser Arg Ile Lys Glu

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Arg Lys Glu Arg Arg Arg Arg His Glu Ser Ser Cys Leu Ser Ala Pro

180 185 190

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Gly Met Val Ser Tyr Tyr Leu Ile Gly Ser Ile Glu Gly Phe Asp Leu

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Gly Lys Arg Arg Met Val Met His Leu Leu Val Lys Cys Leu Met Asn

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Gly Ala Gly Asn Lys Lys Leu Thr Pro Cys Gly

370 375

<210>337

<211>783

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(783)

<400>337

atg tcg cct gct gag gca tcg cgt gag gag aat gtg tac atg gca aag 48

Met Ser Pro Ala Glu Ala Ser Arg Glu Glu Asn Val Tyr Met Ala Lys

1 5 10 15

ctt gcc gag cag gct gag cgt tac gag gaa atg gtc gaa ttc atg gag 96

Leu Ala Glu Gln Ala Glu Arg Tyr Glu Glu Met Val Glu Phe Met Glu

20 25 30

aag gtg gca aag acc act gat gtt ggt gag ctc acc gtt gag gag cgg 144

Lys Val Ala Lys Thr Thr Asp Val Gly Glu Leu Thr Val Glu Glu Arg

35 40 45

aac ctg ctt tct gtg gct tac aag aac gtg att ggt gct cgg agg gca 192

Asn Leu Leu Ser Val Ala Tyr Lys Asn Val Ile Gly Ala Arg Arg Ala

50 55 60

tcg tgg agg atc atc tct tct att gag cag aag gag gag agc cgt ggg 240

Ser Trp Arg Ile Ile Ser Ser Ile Glu Gln Lys Glu Glu Ser Arg Gly

65 70 75 80

aat gag gca tat gtt gca tca att aag gag tac cgt agc agg att gaa 288

Asn Glu Ala Tyr Val Ala Ser Ile Lys Glu Tyr Arg Ser Arg Ile Glu

85 90 95

act gag ctc agc aag atc tgt gat ggt atc ctt aag ctt ctg gat tcc 336

Thr Glu Leu Ser Lys Ile Cys Asp Gly Ile Leu Lys Leu Leu Asp Ser

100 105 110

cac ctt gtc cca tct gcc act gct gca gag tcc aag gtg ttc tac ctg 384

His Leu Val Pro Ser Ala Thr Ala Ala Glu Ser Lys Val Phe Tyr Leu

115 120 125

aaa atg aag ggt gac tac cac agg tac ctt gct gag ttt aag tca gga 432

Lys Met Lys Gly Asp Tyr His Arg Tyr Leu Ala Glu Phe Lys Ser Gly

130 135 140

gct gag agg aag gaa gca gct gag aac act ctt gtg gca tac aag tct 480

Ala Glu Arg Lys Glu Ala Ala Glu Asn Thr Leu Val Ala Tyr Lys Ser

145 150 155 160

gcc cag gat att gca ctc gct gac ctg cct aca act cac ccg ata agg 528

Ala Gln Asp Ile Ala Leu Ala Asp Leu Pro Thr Thr His Pro Ile Arg

165 170 175

ctt gga ctt gca ctg aac ttc tca gtg ttc tac tat gag ata ctg aac 576

Leu Gly Leu Ala Leu Asn Phe Ser Val Phe Tyr Tyr Glu Ile Leu Asn

180 185 190

tca cca gac cgt gct tgc aac ctt gca aag cag gcg ttc gac gat gct 624

Ser Pro Asp Arg Ala Cys Asn Leu Ala Lys Gln Ala Phe Asp Asp Ala

195 200 205

att gct gaa ctg gac act ctt ggc gag gag tct tac aag gac agc acc 672

Ile Ala Glu Leu Asp Thr Leu Gly Glu Glu Ser Tyr Lys Asp Ser Thr

210 215 220

ttg atc atg caa ctt ctt cgt gac aat ctg act ctc tgg acc tct gac 720

Leu Ile Met Gln Leu Leu Arg Asp Asn Leu Thr Leu Trp Thr Ser Asp

225 230 235 240

aat gcg gag gat ggt ggt gac gag atc aag gaa gca gcg aag cct gaa 768

Asn Ala Glu Asp Gly Gly Asp Glu Ile Lys Glu Ala Ala Lys Pro Glu

245 250 255

gga gag ggc cac taa 783

Gly Glu Gly His

260

<210>338

<211>260

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>338

Met Ser Pro Ala Glu Ala Ser Arg Glu Glu Asn Val Tyr Met Ala Lys

1 5 10 15

Leu Ala Glu Gln Ala Glu Arg Tyr Glu Glu Met Val Glu Phe Met Glu

20 25 30

Lys Val Ala Lys Thr Thr Asp Val Gly Glu Leu Thr Val Glu Glu Arg

35 40 45

Asn Leu Leu Ser Val Ala Tyr Lys Asn Val Ile Gly Ala Arg Arg Ala

50 55 60

Ser Trp Arg Ile Ile Ser Ser Ile Glu Gln Lys Glu Glu Ser Arg Gly

65 70 75 80

Asn Glu Ala Tyr Val Ala Ser Ile Lys Glu Tyr Arg Ser Arg Ile Glu

85 90 95

Thr Glu Leu Ser Lys Ile Cys Asp Gly Ile Leu Lys Leu Leu Asp Ser

100 105 110

His Leu Val Pro Ser Ala Thr Ala Ala Glu Ser Lys Val Phe Tyr Leu

115 120 125

Lys Met Lys Gly Asp Tyr His Arg Tyr Leu Ala Glu Phe Lys Ser Gly

130 135 140

Ala Glu Arg Lys Glu Ala Ala Glu Asn Thr Leu Val Ala Tyr Lys Ser

145 150 155 160

Ala Gln Asp Ile Ala Leu Ala Asp Leu Pro Thr Thr His Pro Ile Arg

165 170 175

Leu Gly Leu Ala Leu Asn Phe Ser Val Phe Tyr Tyr Glu Ile Leu Asn

180 185 190

Ser Pro Asp Arg Ala Cys Asn Leu Ala Lys Gln Ala Phe Asp Asp Ala

195 200 205

Ile Ala Glu Leu Asp Thr Leu Gly Glu Glu Ser Tyr Lys Asp Ser Thr

210 215 220

Leu Ile Met Gln Leu Leu Arg Asp Asn Leu Thr Leu Trp Thr Ser Asp

225 230 235 240

Asn Ala Glu Asp Gly Gly Asp Glu Ile Lys Glu Ala Ala Lys Pro Glu

245 250 255

Gly Glu Gly His

260

<210>339

<211>669

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(669)

<400>339

atg ggt tct gaa gga cct tct ggt gtt acc gtt cac gtt act gga ttc 48

Met Gly Ser Glu Gly Pro Ser Gly Val Thr Val His Val Thr Gly Phe

1 5 10 15

aag aag ttc cat gga gtc gct gag aat ccg acg gag aag att gtg cgc 96

Lys Lys Phe His Gly Val Ala Glu Asn Pro Thr Glu Lys Ile Val Arg

20 25 30

aat ctt gag tca ttt atg gaa aag aga ggg ttg cct aaa ggt tta aca 144

Asn Leu Glu Ser Phe Met Glu Lys Arg Gly Leu Pro Lys Gly Leu Thr

35 40 45

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Leu Gly Ser Cys Thr Val Leu Glu Thr Ala Gly Gln Gly Gly Leu Gly

50 55 60

ccg ttg tat gaa gtg ttt gaa tca gcc atc gta gac aaa gag tat ggg 240

Pro Leu Tyr Glu Val Phe Glu Ser Ala I1e Val Asp Lys Glu Tyr Gly

65 70 75 80

ttg aat gat cag ggg caa gtg att ctg ctc cat ttt gga gtc aac agt 288

Leu Asn Asp Gln Gly Gln Val Ile Leu Leu His Phe Gly Val Asn Ser

85 90 95

ggc aca aca agg ttt gcc ctt gag aat caa gct att aat gaa gct acc 336

Gly Thr Thr Arg Phe Ala Leu Glu Asn Gln Ala Ile Asn Glu Ala Thr

100 105 110

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Phe Arg Cys Pro Asp Glu Leu Gly Trp Lys Pro Gln Arg Ala Pro Ile

115 120 125

gtg tca tct gat gga agc atc tca aat tta aga aag acc act gtg cct 432

Val Ser Ser Asp Gly Ser Ile Ser Asn Leu Arg Lys Thr Thr Val Pro

130 135 140

gtg aat gaa gtg aac aag tcc cta caa cag atg ggc ttc gat gtg gcg 480

Val Asn Glu Val Asn Lys Ser Leu Gln Gln Met Gly Phe Asp Val Ala

145 150 155 160

cct tcg gat gac gct ggt cga ttc gta tgc aac tat gtc tat tac caa 528

Pro Ser Asp Asp Ala Gly Arg Phe Val Cys Asn Tyr Val Tyr Tyr Gln

165 170 175

tct ctt agg ttc gca gaa cag cgc ggt atc aag tct ttg ttc gtc cat 576

Ser Leu Arg Phe Ala Glu Gln Arg Gly Ile Lys Ser Leu Phe Val His

180 185 190

ttc ccc ctc ttc acg acg att agt gag gaa gtt cag atg aac ttc gtc 624

Phe Pro Leu Phe Thr Thr Ile Ser Glu Glu Val Gln Met Asn Phe Val

195 200 205

gca acc ctc ctc gaa gtt ctt gct tcc cag aac tat gca cag taa 669

Ala Thr Leu Leu Glu Val Leu Ala Ser Gln Asn Tyr Ala Gln

210 215 220

<210>340

<211>222

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>340

Met Gly Ser Glu Gly Pro Ser Gly Val Thr Val His Val Thr Gly Phe

1 5 10 15

Lys Lys Phe His Gly Val Ala Glu Asn Pro Thr Glu Lys Ile Val Arg

20 25 30

Asn Leu Glu Ser Phe Met Glu Lys Arg Gly Leu Pro Lys Gly Leu Thr

35 40 45

Leu Gly Ser Cys Thr Val Leu Glu Thr Ala Gly Gln Gly Gly Leu Gly

50 55 60

Pro Leu Tyr Glu Val Phe Glu Ser Ala Ile Val Asp Lys Glu Tyr Gly

65 70 75 80

Leu Asn Asp Gln Gly Gln Val Ile Leu Leu His Phe Gly Val Asn Ser

85 90 95

Gly Thr Thr Arg Phe Ala Leu Glu Asn Gln Ala Ile Asn Glu Ala Thr

100 105 110

Phe Arg Cys Pro Asp Glu Leu Gly Trp Lys Pro Gln Arg Ala Pro Ile

115 120 125

Val Ser Ser Asp Gly Ser Ile Ser Asn Leu Arg Lys Thr Thr Val Pro

130 135 140

Val Asn Glu Val Asn Lys Ser Leu Gln Gln Met Gly Phe Asp Val Ala

145 150 155 160

Pro Ser Asp Asp Ala Gly Arg Phe Val Cys Asn Tyr Val Tyr Tyr Gln

165 170 175

Ser Leu Arg Phe Ala Glu Gln Arg Gly Ile Lys Ser Leu Phe Val His

180 185 190

Phe Pro Leu Phe Thr Thr Ile Ser Glu Glu Val Gln Met Asn Phe Val

195 200 205

Ala Thr Leu Leu Glu Val Leu Ala Ser Gln Asn Tyr Ala Gln

210 215 220

<210>341

<211>3825

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(3825)

<400>341

atg gtg ttc aag ggg agg ttc ttc tcg tcc cgg cac aag tcg tcg gag 48

Met Val Phe Lys Gly Arg Phe Phe Ser Ser Arg His Lys Ser Ser Glu

1 5 10 15

tcg tcg agc ccc acg gac ggg agc aac agc ccg cgg acg ccc acc tcc 96

Ser Ser Ser Pro Thr Asp Gly Ser Asn Ser Pro Arg Thr Pro Thr Ser

20 25 30

gcg ccg ccc gcg gcg ggg tcg ccg gcg gcg gcg tcg tcg tcg tcg tcg 144

Ala Pro Pro Ala Ala Gly Ser Pro Ala Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser

35 40 45

tcc aga tcc gac aag aag aag ccc aaa tcg gag acc ccc agg aag cgc 192

Ser Arg Ser Asp Lys Lys Lys Pro Lys Ser Glu Thr Pro Arg Lys Arg

50 55 60

gac aag ctc ttc ggc ggc tcc gcg tcc ggg tcc gcc gcc tcc aag ggc 240

Asp Lys Leu Phe Gly Gly Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ala Ser Lys Gly

65 70 75 80

ggc gcg ggg gcg gcg cct gcg tcg gcc tcg tcg agc ccg tcg gcg gac 288

Gly Ala Gly Ala Ala Pro Ala Ser Ala Ser Ser Ser Pro Ser Ala Asp

85 90 95

ggg agg aag gcc gcc gcg gcg cag ctt cgg gat ggg ggc gcg ggc ggg 336

Gly Arg Lys Ala Ala Ala Ala Gln Leu Arg Asp Gly Gly Ala Gly Gly

100 105 110

gcg tcg gcg gcg gcg ctg tcg ccc atc ctg gcg tcc tcg ctg ggc ctc 384

Ala Ser Ala Ala Ala Leu Ser Pro Ile Leu Ala Ser Ser Leu Gly Leu

115 120 125

aac cgg att aag acg aga tcc ggg ccc ctg ccg cag gag ggg cac cgc 432

Asn Arg Ile Lys Thr Arg Ser Gly Pro Leu Pro Gln Glu Gly His Arg

130 135 140

atc gct gcc gcg ctc ggg agc agt aat cta tcg cgt ggg cag gcg cag 480

Ile Ala Ala Ala Leu Gly Ser Ser Asn Leu Ser Arg Gly Gln Ala Gln

145 150 155 160

gcg gac ccg tcg gct gca tcg gct ggc ggc ggc ggc ggc ggc ggg agg 528

Ala Asp Pro Ser Ala Ala Ser Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg

165 170 175

aag gct gga agc tca tgg gca gat tcg acc agt ggc agc cgg ggg aaa 576

Lys Ala Gly Ser Ser Trp Ala Asp Ser Thr Ser Gly Ser Arg Gly Lys

180 185 190

ggg aaa gcg gcc gaa cat cca gcg cgg ggc gcc aca gca acg agc ctg 624

Gly Lys Ala Ala Glu His Pro Ala Arg Gly Ala Thr Ala Thr Ser Leu

195 200 205

gaa gga aag agc tct gca aaa gat gtg ttg agt tat aag gag att ggc 672

Glu Gly Lys Ser Ser Ala Lys Asp Val Leu Ser Tyr Lys Glu Ile Gly

210 215 220

gcc cat gat ttt cat ttt gcc gca tgg tgt cta gat gct aaa ctt gga 720

Ala His Asp Phe His Phe Ala Ala Trp Cys Leu Asp Ala Lys Leu Gly

225 230 235 240

acc acc ggt gct aac tgt gca tat gat ccc tgt gaa aca cca aag gaa 768

Thr Thr Gly Ala Asn Cys Ala Tyr Asp Pro Cys Glu Thr Pro Lys Glu

245 250 255

tcg gaa tct cca cgc ttt aag gcc atc atg cag gct acc agt gct cca 816

Ser Glu Ser Pro Arg Phe Lys Ala Ile Met Gln Ala Thr Ser Ala Pro

260 265 270

agg aag aga gtc cct gca gat ata aaa agt ttt tcg cat gag ttg aac 864

Arg Lys Arg Val Pro Ala Asp Ile Lys Ser Phe Ser His Glu Leu Asn

275 280 285

tcc aag ggg gtc cga cca ttc cct ttt tgg aag cct cgg ggc att tac 912

Ser Lys Gly Val Arg Pro Phe Pro Phe Trp Lys Pro Arg Gly Ile Tyr

290 295 300

aac ttg aag gag gtg tta aaa gtt att cag gtg aga ttt gag aaa gca 960

Asn Leu Lys Glu Val Leu Lys Val Ile Gln Val Arg Phe Glu Lys Ala

305 310 315 320

aag gag gag gta aat tca gat ttg gca gta ttt gca gga gac ttg gtt 1008

Lys Glu Glu Val Asn Ser Asp Leu Ala Val Phe Ala Gly Asp Leu Val

325 330 335

ggt gta atg gaa aag tac gca gat tct cat cct gag tgg aag gaa act 1056

Gly Val Met Glu Lys Tyr Ala Asp Ser His Pro Glu Trp Lys Glu Thr

340 345 350

ttg gaa gat ttg ctc ata ctt gca cgt agc tgc tgt gta atg aca ccg 1104

Leu Glu Asp Leu Leu Ile Leu Ala Arg Ser Cys Cys Val Met Thr Pro

355 360 365

ggg gag ttt tgg ctt caa tgt gaa ggc ata gtg caa gat tta gat gat 1152

Gly Glu Phe Trp Leu Gln Cys Glu Gly Ile Val Gln Asp Leu Asp Asp

370 375 380

cat cgt cag gag ctc cca atg ggt gtg ctg aag aaa ctg tac act cgg 1200

His Arg Gln Glu Leu Pro Met Gly Val Leu Lys Lys Leu Tyr Thr Arg

385 390 395 400

atg ctt ttt atc ctt acg aga tgt aca aga ttg ctt caa ttt cac aaa 1248

Met Leu Phe Ile Leu Thr Arg Cys Thr Arg Leu Leu Gln Phe His Lys

405 410 415

gag agt ggc ttt gcg gag gat gaa gtt gtt atg gat caa cgt gat aag 1296

Glu Ser Gly Phe Ala Glu Asp Glu Val Val Met Asp Gln Arg Asp Lys

420 425 430

atc ata caa tct gct gat agg cag ata ttg gct caa cca ggt gat gac 1344

Ile Ile Gln Ser Ala Asp Arg Gln Ile Leu Ala Gln Pro Gly Asp Asp

435 440 445

act aca acc aga ggc agc aaa agt gat gta cga aaa tcg tac agt caa 1392

Thr Thr Thr Arg Gly Ser Lys Ser Asp Val Arg Lys Ser Tyr Ser Gln

450 455 460

gag caa cat aat tta aaa tgg aag aga agc cag gag ata aag cct gtt 1440

Glu Gln His Asn Leu Lys Trp Lys Arg Ser Gln Glu Ile Lys Pro Val

465 470 475 480

aag ttt ctt tca ccg ctt gat aca aca gat gtt aaa aag gag gtt gag 1488

Lys Phe Leu Ser Pro Leu Asp Thr Thr Asp Val Lys Lys Glu Val Glu

485 490 495

tct cca acc agg gag cgt ata tct tcc tgg aaa cct ttt cca tca cct 1536

Ser Pro Thr Arg Glu Arg Ile Ser Ser Trp Lys Pro Phe Pro Ser Pro

500 505 510

gtc cca aaa ccc cct aaa gac cct acc cct att aaa gag gaa tca cct 1584

Val Pro Lys Pro Pro Lys Asp Pro Thr Pro Ile Lys Glu Glu Ser Pro

515 520 525

aat aag aaa aca gat aca ccc cct gca gtt agt agc cag gct gaa ttg 1632

Asn Lys Lys Thr Asp Thr Pro Pro Ala Val Ser Ser Gln Ala Glu Leu

530 535 540

aac agt cca gtg gaa tct aca tca cat caa tct ctt cct ccc aag cat 1680

Asn Ser Pro Val Glu Ser Thr Ser His Gln Ser Leu Pro Pro Lys His

545 550 555 560

caa cac aaa act tca tgg ggt cac tgg tct gac cag cca aat att tct 1728

Gln His Lys Thr Ser Trp Gly His Trp Ser Asp Gln Pro ASn Ile Ser

565 570 575

gaa gaa ggt tca ata atg tgt cgc ata tgt gaa gaa tat gtc cct act 1776

Glu Glu Gly Ser Ile Met Cys Arg Ile Cys Glu Glu Tyr Val Pro Thr

580 585 590

cat tat gta gaa aat cac tca gca ata tgt gca agt gct gac aga tgt 1824

His Tyr Val Glu Asn His Ser Ala Ile Cys Ala Ser Ala Asp Arg Cys

595 600 605

gat caa aaa ggt gta agc gtt gat gaa cgt cta att aga gtt gct gaa 1872

Asp Gln Lys Gly Val Ser Val Asp Glu Arg Leu Ile Arg Val Ala Glu

610 615 620

gca ctt gaa aag ttg gta gaa tct tat aca caa aaa gac ctt cca aat 1920

Ala Leu Glu Lys Leu Val Glu Ser Tyr Thr Gln Lys Asp Leu Pro Asn

625 630 635 640

gct gtt ggc agt cca gat gtt gca aaa gta tca aat tca agc atc aat 1968

Ala Val Gly Ser Pro Asp Val Ala Lys Val Ser Asn Ser Ser Ile Asn

645 650 655

gaa gaa tct gat ggc ccc tct cca aaa ctc tct gat tgg tct aga aga 2016

Glu Glu Ser Asp Gly Pro Ser Pro Lys Leu Ser Asp Trp Ser Arg Arg

660 665 670

ggc tca gct gat atg ctt gac tac ctc cag gag gct gat agc act att 2064

Gly Ser Ala Asp Met Leu Asp Tyr Leu Gln Glu Ala Asp Ser Thr Ile

675 680 685

tca ctg gat gac ata aaa aac ctt cct tcc atg aca tgt aag act cgt 2112

Ser Leu Asp Asp Ile Lys Asn Leu Pro Ser Met Thr Cys Lys Thr Arg

690 695 700

ttt ggg cca aaa tct gat cat gga atg gct aca tct tca gca gga agt 2160

Phe Gly Pro Lys Ser Asp His Gly Met Ala Thr Ser Ser Ala Gly Ser

705 710 715 720

atg acc cct aga tct cca cta aca act cca aga tct aat cac ata gac 2208

Met Thr Pro Arg Ser Pro Leu Thr Thr Pro Arg Ser Asn His Ile Asp

725 730 735

atg ctt tta gct ggc cga agt gca att aat gag agc gat gat ctt cct 2256

Met Leu Leu Ala Gly Arg Ser Ala Ile Asn Glu Ser Asp Asp Leu Pro

740 745 750

cag att gtt gaa ctt gct gat att gcg cgg tgc att gca act act cct 2304

Gln Ile Val Glu Leu Ala Asp Ile Ala Arg Cys Ile Ala Thr Thr Pro

755 760 765

cta gat gaa gaa agg gca ctc tcc cta ttg gtt acc tgc ata gaa gat 2352

Leu Asp Glu Glu Arg Ala Leu Ser Leu Leu Val Thr Cys Ile Glu Asp

770 775 780

ctg caa gaa att gtc aat cgt agg aag cat gag gct ctc acg gtg cag 2400

Leu Gln Glu Ile Val Asn Arg Arg Lys His Glu Ala Leu Thr Val Gln

785 790 795 800

aca ttt ggc aca cgt ata gaa aaa ctc cac cgg gag aag tac cta ctg 2448

Thr Phe Gly Thr Arg Ile Glu Lys Leu His Arg Glu Lys Tyr Leu Leu

805 810 815

ctt tgt gat tcg gtt gat atg gac aaa gtt gat tca gcg agt act gta 2496

Leu Cys Asp Ser Val Asp Met Asp Lys Val Asp Ser Ala Ser Thr Val

820 825 830

atg gat gaa gaa gat gat gtt gtc cgt agc tta cga gct agt cct gtt 2544

Met Asp Glu Glu Asp Asp Val Val Arg Ser Leu Arg Ala Ser Pro Val

835 840 845

cac cca gtc aag gat cgt act tcg att gat gac ttc gaa atc att aaa 2592

His Pro Val Lys Asp Arg Thr Ser Ile Asp Asp Phe Glu Ile Ile Lys

850 855 860

cct atc agc cgt gga gca ttt gga cgt gtt ttc ttg gcc aag aaa aga 2640

Pro Ile Ser Arg Gly Ala Phe Gly Arg Val Phe Leu Ala Lys Lys Arg

865 870 875 880

act aca gga gac ctc ttt gct ata aag gta tta agg aag gca gat atg 2688

Thr Thr Gly Asp Leu Phe Ala Ile Lys Val Leu Arg Lys Ala Asp Met

885 890 895

att cgg aaa aat gct gtt gag agt ata ttg gct gaa cgt gat atc ttg 2736

Ile Arg Lys Asn Ala Val Glu Ser Ile Leu Ala Glu Arg Asp Ile Leu

900 905 910

att aca gtg agg aat cct ttt gtg gtt cgt ttc ttc tat tct ttt acc 2784

Ile Thr Val Arg Asn Pro Phe Val Val Arg Phe Phe Tyr Ser Phe Thr

915 920 925

tcc cgg gaa aat ttg tat cta gtc atg gag tac ctg aat gga ggg gac 2832

Ser Arg Glu Asn Leu Tyr Leu Val Met Glu Tyr Leu Asn Gly Gly Asp

930 935 940

ctg tat tct cta ctg aga aat tta ggg tgc ttg gat gaa gat gtt gct 2880

Leu Tyr Ser Leu Leu Arg Asn Leu Gly Cys Leu Asp Glu Asp Val Ala

945 950 955 960

cgt ata tac ctt gca gaa gtt gtg cta gct ttg gaa tat ttg cac tct 2928

Arg Ile Tyr Leu Ala Glu Val Val Leu Ala Leu Glu Tyr Leu His Ser

965 970 975

atg cac ata gtt cat aga gat ctt aaa cct gac aac tta ttg ata gct 2976

Met His Ile Val His Arg Asp Leu Lys Pro Asp Asn Leu Leu Ile Ala

980 985 990

cat gac ggg cat ata aag ttg aca gat ttt ggg ttg tcc aag gtt ggt 3024

His Asp Gly His Ile Lys Leu Thr Asp Phe Gly Leu Ser Lys Val Gly

995 1000 1005

ctg atc aac agc acg gat gat cta tct ggt cct gct gtt agc ggg 3069

Leu Ile Asn Ser Thr Asp Asp Leu Ser Gly Pro Ala Val Ser Gly

1010 1015 1020

tct tcg ttg tat gga gat gat gaa cct cag atg agc gaa ttt gag 3114

Ser Ser Leu Tyr Gly Asp Asp Glu Pro Gln Met Ser Glu Phe Glu

1025 1030 1035

gaa atg gat cac cga gca cgg aga caa aag cgc tct gct gtc gga 3159

Glu Met Asp His Arg Ala Arg Arg Gln Lys Arg Ser Ala Val Gly

1040 1045 1050

act cct gat tat tta gca ccg gaa atc ctt ttg ggg aca gga cat 3204

Thr Pro Asp Tyr Leu Ala Pro Glu Ile Leu Leu Gly Thr Gly His

1055 1060 1065

ggt act agt gct gat tgg tgg tct gtg ggt gtt ata ctt ttt gaa 3249

Gly Thr Ser Ala Asp Trp Trp Ser Val Gly Val Ile Leu Phe Glu

1070 1075 1080

tta att gtt gga ata cct cca ttc aac gca gaa cac ccc cag aca 3294

Leu Ile Val Gly Ile Pro Pro Phe Asn Ala Glu His Pro Gln Thr

1085 1090 1095

att ttc gac aac att ctg aac cgc aaa ata cct tgg cca cat gtc 3339

Ile Phe Asp Asn Ile Leu Asn Arg Lys Ile Pro Trp Pro His Val

1100 1105 1110

cca gaa gag atg agt tct gaa gct cag gat cta att gac aaa tta 3384

Pro Glu Glu Met Ser Ser Glu Ala Gln Asp Leu Ile Asp Lys Leu

1115 1120 1125

ttg aca gaa gac cct cac caa cgg cta ggt gca aat ggc gcc tct 3429

Leu Thr Glu Asp Pro His Gln Arg Leu Gly Ala Asn Gly Ala Ser

1130 1135 1140

gag gtt aag cag cat caa ttt ttt aaa gac att agc tgg gat acc 3474

Glu Val Lys Gln His Gln Phe Phe Lys Asp Ile Ser Trp Asp Thr

1145 1150 1155

ctt gct agg caa aag gct gcc ttt gtc ccc tcc tca gat agt gca 3519

Leu Ala Arg Gln Lys Ala Ala Phe Val Pro Ser Ser Asp Ser Ala

1160 1165 1170

ttt gac acg agc tac ttc acc agc cgt tat tct tgg aat cca tcg 3564

Phe Asp Thr Ser Tyr Phe Thr Ser Arg Tyr Ser Trp Asn Pro Ser

1175 1180 1185

gac gaa aac atc tat gaa gca tac gaa ttt gag gat tcc agt gat 3609

Asp Glu Asn Ile Tyr Glu Ala Tyr Glu Phe Glu Asp Ser Ser Asp

1190 1195 1200

aat gga agc ctt agt ggc agc agt agc tgt gtg agc aat cac caa 3654

Asn Gly Ser Leu Ser Gly Ser Ser Ser Cys Val Ser Asn His Gln

1205 1210 1215

gat gat atg ggg gat gag tct agt ggc ttc act gag ttt gaa tct 3699

Asp Asp Met Gly Asp Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Phe Glu Ser

1220 1225 1230

agc tca aat gtc aac tat tct ttc agc aat ttc tca ttc aag aat 3744

Ser Ser Asn Val Asn Tyr Ser Phe Ser Asn Phe Ser Phe Lys Asn

1235 1240 1245

cta tca caa ctt gtc tct atc aat tac gat ttg ctc acc aaa gga 3789

Leu Ser Gln Leu Val Ser Ile Asn Tyr Asp Leu Leu Thr Lys Gly

1250 1255 1260

ttg aag gat gat cca cca acg aaa tct gag acg tag 3825

Leu Lys Asp Asp Pro Pro Thr Lys Ser Glu Thr

1265 1270

<210>342

<211>1274

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>342

Met Val Phe Lys Gly Arg Phe Phe Ser Ser Arg His Lys Ser Ser Glu

1 5 10 15

Ser Ser Ser Pro Thr Asp Gly Ser Asn Ser Pro Arg Thr Pro Thr Ser

20 25 30

Ala Pro Pro Ala Ala Gly Ser Pro Ala Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser

35 40 45

Ser Arg Ser Asp Lys Lys Lys Pro Lys Ser Glu Thr Pro Arg Lys Arg

50 55 60

Asp Lys Leu Phe Gly Gly Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ala Ser Lys Gly

65 70 75 80

Gly Ala Gly Ala Ala Pro Ala Ser Ala Ser Ser Ser Pro Ser Ala Asp

85 90 95

Gly Arg Lys Ala Ala Ala Ala Gln Leu Arg Asp Gly Gly Ala Gly Gly

100 105 110

Ala Ser Ala Ala Ala Leu Ser Pro Ile Leu Ala Ser Ser Leu Gly Leu

115 120 125

Asn Arg Ile Lys Thr Arg Ser Gly Pro Leu Pro Gln Glu Gly His Arg

130 135 140

Ile Ala Ala Ala Leu Gly Ser Ser Asn Leu Ser Arg Gly Gln Ala Gln

145 150 155 160

Ala Asp Pro Ser Ala Ala Ser Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg

165 170 175

Lys Ala Gly Ser Ser Trp Ala Asp Ser Thr Ser Gly Ser Arg Gly Lys

180 185 190

Gly Lys Ala Ala Glu His Pro Ala Arg Gly Ala Thr Ala Thr Ser Leu

195 200 205

Glu Gly Lys Ser Ser Ala Lys Asp Val Leu Ser Tyr Lys Glu Ile Gly

210 215 220

Ala His Asp Phe His Phe Ala Ala Trp Cys Leu Asp Ala Lys Leu Gly

225 230 235 240

Thr Thr Gly Ala Asn Cys Ala Tyr Asp Pro Cys Glu Thr Pro Lys Glu

245 250 255

Ser Glu Ser Pro Arg Phe Lys Ala Ile Met Gln Ala Thr Ser Ala Pro

260 265 270

Arg Lys Arg Val Pro Ala Asp Ile Lys Ser Phe Ser His Glu Leu Asn

275 280 285

Ser Lys Gly Val Arg Pro Phe Pro Phe Trp Lys Pro Arg Gly Ile Tyr

290 295 300

Asn Leu Lys Glu Val Leu Lys Val Ile Gln Val Arg Phe Glu Lys Ala

305 310 315 320

Lys Glu Glu Val Asn Ser Asp Leu Ala Val Phe Ala Gly Asp Leu Val

325 330 335

Gly Val Met Glu Lys Tyr Ala Asp Ser His Pro Glu Trp Lys Glu Thr

340 345 350

Leu Glu Asp Leu Leu Ile Leu Ala Arg Ser Cys Cys Val Met Thr Pro

355 360 365

Gly Glu Phe Trp Leu Gln Cys Glu Gly Ile Val Gln Asp Leu Asp Asp

370 375 380

His Arg Gln Glu Leu Pro Met Gly Val Leu Lys Lys Leu Tyr Thr Arg

385 390 395 400

Met Leu Phe Ile Leu Thr Arg Cys Thr Arg Leu Leu Gln Phe His Lys

405 410 415

Glu Ser Gly Phe Ala Glu Asp Glu Val Val Met Asp Gln Arg Asp Lys

420 425 430

Ile Ile Gln Ser Ala Asp Arg Gln Ile Leu Ala Gln Pro Gly Asp Asp

435 440 445

Thr Thr Thr Arg Gly Ser Lys Ser Asp Val Arg Lys Ser Tyr Ser Gln

450 455 460

Glu Gln His Asn Leu Lys Trp Lys Arg Ser Gln Glu Ile Lys Pro Val

465 470 475 480

Lys Phe Leu Ser Pro Leu Asp Thr Thr Asp Val Lys Lys Glu Val Glu

485 490 495

Ser Pro Thr Arg Glu Arg Ile Ser Ser Trp Lys Pro Phe Pro Ser Pro

500 505 510

Val Pro Lys Pro Pro Lys Asp Pro Thr Pro Ile Lys Glu Glu Ser Pro

515 520 525

Asn Lys Lys Thr Asp Thr Pro Pro Ala Val Ser Ser Gln Ala Glu Leu

530 535 540

Asn Ser Pro Val Glu Ser Thr Ser His Gln Ser Leu Pro Pro Lys His

545 550 555 560

Gln His Lys Thr Ser Trp Gly His Trp Ser Asp Gln Pro Asn Ile Ser

565 570 575

Glu Glu Gly Ser Ile Met Cys Arg Ile Cys Glu Glu Tyr Val Pro Thr

580 585 590

His Tyr Val Glu Asn His Ser Ala Ile Cys Ala Ser Ala Asp Arg cys

595 600 605

Asp Gln Lys Gly Val Ser Val Asp Glu Arg Leu Ile Arg Val Ala Glu

610 615 620

Ala Leu Glu Lys Leu Val Glu Ser Tyr Thr Gln Lys Asp Leu Pro Asn

625 630 635 640

Ala Val Gly Ser Pro Asp Val Ala Lys Val Ser Asn Ser Ser Ile Asn

645 650 655

Glu Glu Ser Asp Gly Pro Ser Pro Lys Leu Ser Asp Trp Ser Arg Arg

660 665 670

Gly Ser Ala Asp Met Leu Asp Tyr Leu Gln Glu Ala Asp Ser Thr Ile

675 680 685

Ser Leu Asp Asp Ile Lys Asn Leu Pro Ser Met Thr Cys Lys Thr Arg

690 695 700

Phe Gly Pro Lys Ser Asp His Gly Met Ala Thr Ser Ser Ala Gly Ser

705 710 715 720

Met Thr Pro Arg Ser Pro Leu Thr Thr Pro Arg Ser Asn His Ile Asp

725 730 735

Met Leu Leu Ala Gly Arg Ser Ala Ile Asn Glu Ser Asp Asp Leu Pro

740 745 750

Gln Ile Val Glu Leu Ala Asp Ile Ala Arg Cys Ile Ala Thr Thr Pro

755 760 765

Leu Asp Glu Glu Arg Ala Leu Ser Leu Leu Val Thr Cys Ile Glu Asp

770 775 780

Leu Gln Glu Ile Val Asn Arg Arg Lys His Glu Ala Leu Thr Val Gln

785 790 795 800

Thr Phe Gly Thr Arg Ile Glu Lys Leu His Arg Glu Lys Tyr Leu Leu

805 810 815

Leu Cys Asp Ser Val Asp Met Asp Lys Val Asp Ser Ala Ser Thr Val

820 825 830

Met Asp Glu Glu Asp Asp Val Val Arg Ser Leu Arg Ala ser Pro Val

835 840 845

His Pro Val Lys Asp Arg Thr Ser Ile Asp Asp Phe Glu Ile Ile Lys

850 855 860

Pro Ile Ser Arg Gly Ala Phe Gly Arg Val Phe Leu Ala Lys Lys Arg

865 870 875 880

Thr Thr Gly Asp Leu Phe Ala Ile Lys Val Leu Arg Lys Ala Asp Met

885 890 895

Ile Arg Lys Asn Ala Val Glu Ser Ile Leu Ala Glu Arg Asp Ile Leu

900 905 910

Ile Thr Val Arg Asn Pro Phe Val Val Arg Phe Phe Tyr Ser Phe Thr

915 920 925

Ser Arg Glu Asn Leu Tyr Leu Val Met Glu Tyr Leu Asn Gly Gly Asp

930 935 940

Leu Tyr Ser Leu Leu Arg Asn Leu Gly Cys Leu Asp Glu Asp Val Ala

945 950 955 960

Arg Ile Tyr Leu Ala Glu Val Val Leu Ala Leu Glu Tyr Leu His Ser

965 970 975

Met His Ile Val His Arg Asp Leu Lys Pro Asp Asn Leu Leu Ile Ala

980 985 990

His Asp Gly His Ile Lys Leu Thr Asp Phe Gly Leu Ser Lys Val Gly

995 1000 1005

Leu Ile Asn Ser Thr Asp Asp Leu Ser Gly Pro Ala Val Ser Gly

1010 1015 1020

Ser Ser Leu Tyr Gly Asp Asp Glu Pro Gln Met Ser Glu Phe Glu

1025 1030 1035

Glu Met Asp His Arg Ala Arg Arg Gln Lys Arg Ser Ala Val Gly

1040 1045 1050

Thr Pro Asp Tyr Leu Ala Pro Glu Ile Leu Leu Gly Thr Gly His

1055 1060 1065

Gly Thr Ser Ala Asp Trp Trp Ser Val Gly Val Ile Leu Phe Glu

1070 1075 1080

Leu Ile Val Gly Ile Pro Pro Phe Asn Ala Glu His Pro Gln Thr

1085 1090 1095

Ile Phe Asp Asn Ile Leu Asn Arg Lys Ile Pro Trp Pro His Val

1100 1105 1110

Pro Glu Glu Met Ser Ser Glu Ala Gln Asp Lau Ile Asp Lys Leu

1115 1120 1125

Leu Thr Glu Asp Pro His Gln Arg Leu Gly Ala Asn Gly Ala Ser

1130 1135 1140

Glu Val Lys Gln His Gln Phe Phe Lys Asp Ile Ser Trp Asp Thr

1145 1150 1155

Leu Ala Arg Gln Lys Ala Ala Phe Val Pro Ser Ser Asp Ser Ala

1160 1165 1170

Phe Asp Thr Ser Tyr Phe Thr Ser Arg Tyr Ser Trp Asn Pro Ser

1175 1180 1185

Asp Glu Asn Ile Tyr Glu Ala Tyr Glu Phe Glu Asp Ser Ser Asp

1190 1195 1200

Asn Gly Ser Leu Ser Gly Ser Ser Ser Cys Val Ser Asn His Gln

1205 1210 1215

Asp Asp Met Gly Asp Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Phe Glu Ser

1220 1225 1230

Ser Ser Asn Val Asn Tyr Ser Phe Ser Asn Phe Ser Phe Lys Asn

1235 1240 1245

Leu Ser Gln Leu Val Ser Ile Asn Tyr Asp Leu Leu Thr Lys Gly

1250 1255 1260

Leu Lys Asp Asp Pro Pro Thr Lys Ser Glu Thr

1265 1270

<210>343

<211>4242

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(4242)

<400>343

atg tat agt agt ccc aaa gca tta cta tat ctc ttc cac ctg gcc gtc 48

Met Tyr Ser Ser Pro Lys Ala Leu Leu Tyr Leu Phe His Leu Ala Val

1 5 10 15

ctg tac aga cgg ctg ggc cca aca tca cgt aca cca cac ttt ggc cca 96

Leu Tyr Arg Arg Leu Gly Pro Thr Ser Arg Thr Pro His Phe Gly Pro

20 25 30

gga agc aat cat ccg gcc cat ttc atg ttt acg cct tcg ctg ggc cgg 144

Gly Ser Asn His Pro Ala His Phe Met Phe Thr Pro Ser Leu Gly Arg

35 40 45

tta cgc gct ctc cgt gta cca tgt ggc cca tcc gcc cat gtg gca gag 192

Leu Arg Ala Leu Arg Val Pro Cys Gly Pro Ser Ala His Val Ala Glu

50 55 60

aga caa aca ccg aaa cag aca gac acg aat ctc aac gca gca gcg cca 240

Arg Gln Thr Pro Lys Gln Thr Asp Thr Asn Leu Asn Ala Ala Ala Pro

65 70 75 80

cca gcc tcc cgt cct gcc tcc gac gcc ggc gct gcg gcc gcc gcc ggt 288

Pro Ala Ser Arg Pro Ala Ser Asp Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly

85 90 95

gac ccg ccc ctc gcc gcg gcc ggc tgc cac gac cga cca gat ggc cgc 336

Asp Pro Pro Leu Ala Ala Ala Gly Cys His Asp Arg Pro Asp Gly Arg

100 105 110

cgc gcc gtc gag gtg cct cct cgt cac cgg ccc gcc gga atc ccc atc 384

Arg Ala Val Glu Val Pro Pro Arg His Arg Pro Ala Gly Ile Pro Ile

115 120 125

ccg caa acc cca acc gct aaa ccc ttt ctc ctt cct tcg tca acc gcc 432

Pro Gln Thr Pro Thr Ala Lys Pro Phe Leu Leu Pro Ser Ser Thr Ala

130 135 140

tca cgg ccg ccg ccg ccg ccg ccg ctc tcg cag ggc gtg ggg aag acg 480

Ser Arg Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Ser Gln Gly Val Gly Lys Thr

145 150 155 160

acg ctg gtt acg cgt gtg ttc gaa acc ctc cgc gaa tcc cac ccg cat 528

Thr Leu Val Thr Arg Val Phe Glu Thr Leu Arg Glu Ser His Pro His

165 170 175

ctc aac att cgc ggc ttc tac acc cgc gag gtg agg gag agt ggg gaa 576

Leu Asn Ile Arg Gly Phe Tyr Thr Arg Glu Val Arg Glu Ser Gly Glu

180 185 190

agg gtc ggg ttc gag gtc gtc acg ctc gat ggg cga acc ggg ccg ctc 624

Arg Val Gly Phe Glu Val Val Thr Leu Asp Gly Arg Thr Gly Pro Leu

195 200 205

gcc tcc tcc aag gtt tcc agc cgc gag tct gtt aga tgg cct act gtt 672

Ala Ser Ser Lys Val Ser Ser Arg Glu Ser Val Arg Trp Pro Thr Val

210 215 220

ggg agg tac aaa gta gat ata gct tct ctg gag tct cta gca ttg ccg 720

Gly Arg Tyr Lys Val Asp Ile Ala Ser Leu Glu Ser Leu Ala Leu Pro

225 230 235 240

gag ctg cag gtc aag gac gac act gat ctt ttc att att gat gaa gtg 768

Glu Leu Gln Val Lys Asp Asp Thr Asp Leu Phe Ile Ile Asp Glu Val

245 250 255

ggt aaa atg gag ctg ttt agt tcg gca ttc ttc cct gct gta atg aga 816

Gly Lys Met Glu Leu Phe Ser Ser Ala Phe Phe Pro Ala Val Met Arg

260 265 270

gtt att gaa tcg aac att cca gtg cta gcc aca att cct gta cca aga 864

Val Ile Glu Ser Asn Ile Pro Val Leu Ala Thr Ile Pro Val Pro Arg

275 280 285

ttg ggc cga gac att ccc gga gtt gcg agg ttg agg aat cat cct gga 912

Leu Gly Arg Asp Ile Pro Gly Val Ala Arg Leu Arg Asn His Pro Gly

290 295 300

gca gtt att tac acc tta aat act ggt aat agg gat gcc atg aga gaa 960

Ala Val Ile Tyr Thr Leu Asn Thr Gly Asn Arg Asp Ala Met Arg Glu

305 310 315 320

ggt gtc tac aat cat ttg agc agt ctg ttg cag aaa agg aat gct gtt 1008

Gly Val Tyr Asn His Leu Ser Ser Leu Leu Gln Lys Arg Asn Ala Val

325 330 335

agg atc atg tcc cgg aga aga tcc aac atg aag aag cat gtc tcc ttc 1056

Arg Ile Met Ser Arg Arg Arg Ser Asn Met Lys Lys His Val Ser Phe

340 345 350

aaa tta aat aag ctg tgc ttc agt gtg ctg ttc atc tta cag cat caa 1104

Lys Leu Asn Lys Leu Cys Phe Ser Val Leu Phe Ile Leu Gln His Gln

355 360 365

gcc ccc acc tct gga tct gat ctc cat ctc cat aag att cag tcg aca 1152

Ala Pro Thr Ser Gly Ser Asp Leu His Leu His Lys Ile Gln Ser Thr

370 375 380

tgg atg aaa cac cgg aga caa gga gga gaa aac atg ggt ccg tcc agc 1200

Trp Met Lys His Arg Arg Gln Gly Gly Glu Asn Met Gly Pro Ser Ser

385 390 395 400

cta ata gcc tgt ttc agt tgg cag ttt gga gga att att atc gct aag 1248

Leu Ile Ala Cys Phe Ser Trp Gln Phe Gly Gly Ile Ile Ile Ala Lys

405 410 415

cat ttc atg gct ttc tct tct tca cca gca tgt agg caa ggc cag ctg 1296

His Phe Met Ala Phe Ser Ser Ser Pro Ala Cys Arg Gln Gly Gln Leu

420 425 430

gct aga atg cca agc caa gaa gag att aag gca tct ctc ccg gca tct 1344

Ala Arg Met Pro Ser Gln Glu Glu Ile Lys Ala Ser Leu Pro Ala Ser

435 440 445

gtt aaa aat ttg caa gag cga gac ccc att tcc acg gtg gga gaa gca 1392

Val Lys Asn Leu Gln Glu Arg Asp Pro Ile Ser Thr Val Gly Glu Ala

450 455 460

aca gtt tcg ccg ctg atc ggc ggc ggc cgg ccg gtg gtt gcc ggg gag 1440

Thr Val Ser Pro Leu Ile Gly Gly Gly Arg Pro Val Val Ala Gly Glu

465 470 475 480

ctg cat gct aac tgc aga gag gag gca cga gag gat cct tcg tac tgc 1488

Leu His Ala Asn Cys Arg Glu Glu Ala Arg Glu Asp Pro Ser Tyr Cys

485 490 495

tgg atc tct ctg gca aca agt gcc acc atg ctg cag tac ctg gac ttc 1536

Trp Ile Ser Leu Ala Thr Ser Ala Thr Met Leu Gln Tyr Leu Asp Phe

500 505 510

tct cat gct agc acc tca agg aag tgg tca cac aag aag cag ggc gaa 1584

Ser His Ala Ser Thr Ser Arg Lys Trp Ser His Lys Lys Gln Gly Glu

515 520 525

gga ttt gaa gcc cca agg aat agc atg gag ttc acc ctg gag gct cca 1632

Gly Phe Glu Ala Pro Arg Asn Ser Met Glu Phe Thr Leu Glu Ala Pro

530 535 540

caa agc tat ggc gtc ttc caa gag gat gtc ccg tac tcc tgc aac atg 1680

Gln Ser Tyr Gly Val Phe Gln Glu Asp Val Pro Tyr Ser Cys Asn Met

545 550 555 560

agg caa caa tac cca aaa gct ggt ctc aac cac agc tca tcc cca atc 1728

Arg Gln Gln Tyr Pro Lys Ala Gly Leu Asn His Ser Ser Ser Pro Ile

565 570 575

aag agg atc atc cat gag gac gta tcc ttc aga aca aat gaa gtt cag 1776

Lys Arg Ile Ile His Glu Asp Val Ser Phe Arg Thr Asn Glu Val Gln

580 585 590

aag aga cca agt gtc att gcc agg ttg atg ggc atg gac tca cct cca 1824

Lys Arg Pro Ser Val Ile Ala Arg Leu Met Gly Met Asp Ser Pro Pro

595 600 605

atg agt aca acc gcc ggt gag ctt gcc gcc ggc cac acg gag gag aaa 1872

Met Ser Thr Thr Ala Gly Glu Leu Ala Ala Gly His Thr Glu Glu Lys

610 615 620

agg caa gac atg ata acc tcc aca agg cca atg cca aga aga gat cct 1920

Arg Gln Asp Met Ile Thr Ser Thr Arg Pro Met Pro Arg Arg Asp Pro

625 630 635 640

tct gaa atg gtc tca acc aag cat gtc tcc ttc gtg caa cac aag ggc 1968

Ser Glu Met Val Ser Thr Lys His Val Ser Phe Val Gln His Lys Gly

645 650 655

tcc atg aag cat tcg ccg aag caa gct gag gtc tgt gcc tac gac gac 2016

Ser Met Lys His Ser Pro Lys Gln Ala Glu Val Cys Ala Tyr Asp Asp

660 665 670

agc atg gag ctc ttt ggt cag ctg agc aag gcg atc agc agc agt gaa 2064

Ser Met Glu Leu Phe Gly Gln Leu Ser Lys Ala Ile Ser Ser Ser Glu

675 680 685

tgg gct aaa ccg cag ccg cga gag cac ccg cag gag gag gag ctg cag 2112

Trp Ala Lys Pro Gln Pro Arg Glu His Pro Gln Glu Glu Glu Leu Gln

690 695 700

aag ttc aag aag gat ttc gag gcg tgg cag gcg agc agg atg tgg gag 2160

Lys Phe Lys Lys Asp Phe Glu Ala Trp Gln Ala Ser Arg Met Trp Glu

705 710 715 720

cag tcg aga gct ctg gaa ttg gag agc cat ctc gac gac gat gac gtc 2208

Gln Ser Arg Ala Leu Glu Leu Glu Ser His Leu Asp Asp Asp Asp Val

725 730 735

agg tgc act gac atc gtg cct tac agg ttc cag cac aga ggg aag gat 2256

Arg Cys Thr Asp Ile Val Pro Tyr Arg Phe Gln His Arg Gly Lys Asp

740 745 750

aat gcc ggc aag aag cac acg cac tcc aat ggc gac gca cac tgg agg 2304

Asn Ala Gly Lys Lys His Thr His Ser Asn Gly Asp Ala His Trp Arg

755 760 765

agg agc aag gag agc ggc acc ggc acc ggc acg tcg atc tcc ggc agc 2352

Arg Ser Lys Glu Ser Gly Thr Gly Thr Gly Thr Ser Ile Ser Gly Ser

770 775 780

cgg acg ttc tcc ctg acg agc gcg gac gcc agc tcg acg cgg ctg ccg 2400

Arg Thr Phe Ser Leu Thr Ser Ala Asp Ala Ser Ser Thr Arg Leu Pro

785 790 795 800

ctg tcg aga ttc tac tac gag gag gag agg ctg ctg tcg ccg aag aag 2448

Leu Ser Arg Phe Tyr Tyr Glu Glu Glu Arg Leu Leu Ser Pro Lys Lys

805 810 815

ata gtg atc ctg aag ccc tgt ccc gag atg agc acc gac gac atc gag 2496

Ile Val Ile Leu Lys Pro Cys Pro Glu Met Ser Thr Asp Asp Ile Glu

820 825 830

gag tcg tcg ttg ggg tcg ccg gag atg gtg aag aag gag aac aac atg 2544

Glu Ser Ser Leu Gly Ser Pro Glu Met Val Lys Lys Glu Asn Asn Met

835 840 845

gag gcc ttc ctc gag gag gtg aag aag cgg ctc aag gtc gag ctc gaa 2592

Glu Ala Phe Leu Glu Glu Val Lys Lys Arg Leu Lys Val Glu Leu Glu

850 855 860

ggg agg atg gct tcc gac gac agg gcg gcg gac agg tgg gcc gcc ggc 2640

Gly Arg Met Ala Ser Asp Asp Arg Ala Ala Asp Arg Trp Ala Ala Gly

865 870 875 880

ggc gac att ccg gct gac ccg aag cag att gct cgg agc atc gcc aac 2688

Gly Asp Ile Pro Ala Asp Pro Lys Gln Ile Ala Arg Ser Ile Ala Asn

885 890 895

cag atc agg gag acc gtc acc aag gac ctg cac tcg gcg ttg ctc cgg 2736

Gln Ile Arg Glu Thr Val Thr Lys Asp Leu His Ser Ala Leu Leu Arg

900 905 910

tcg gag tcg acg cgg tcg tac cgc agc gac atc ccg ctc aat ggc cag 2784

Ser Glu Ser Thr Arg Ser Tyr Arg Ser Asp Ile Pro Leu Asn Gly Gln

915 920 925

agc cag atg gac tac atc tgc aga gat gcc agg aag cac ctc tcc gac 2832

Ser Gln Met Asp Tyr Ile Cys Arg Asp Ala Arg Lys His Leu Ser Asp

930 935 940

agg ctg aag aat gtg ctc cga cga gag ccg gag acc gag ccg ccg gca 2880

Arg Leu Lys Asn Val Leu Arg Arg Glu Pro Glu Thr Glu Pro Pro Ala

945 950 955 960

ctg tct cac cgg aga aga acc gcc tcg gcg tcg ttc aac gaa gag ccg 2928

Leu Ser His Arg Arg Arg Thr Ala Ser Ala Ser Phe Asn Glu Glu Pro

965 970 975

agg ccg aag ccg agg cat gag gtg gca agg aag ggc aag ata agg agc 2976

Arg Pro Lys Pro Arg His Glu Val Ala Arg Lys Gly Lys Ile Arg Ser

980 985 990

aag gag gag aag aag cac gcg atc gag ttc gac gtc agg tct ttc aga 3024

Lys Glu Glu Lys Lys His Ala Ile Glu Phe Asp Val Arg Ser Phe Arg

995 1000 1005

cgt ggc cac cac aag gcg tca cca act ccg gcg atc gac tcc gac 3069

Arg Gly His His Lys Ala Ser Pro Thr Pro Ala Ile Asp Ser Asp

1010 1015 1020

ccg gta tcg ccg agg aac ctc atc agg tcg ttc tcg gcg ccg gtg 3114

Pro Val Ser Pro Arg Asn Leu Ile Arg Ser Phe Ser Ala Pro Val

1025 1030 1035

tcg ggg acc act ttc gtg aag ctt ctc tcg gag gag ccg cgg gtg 3159

Ser Gly Thr Thr Phe Val Lys Leu Leu Ser Glu Glu Pro Arg Val

1040 1045 1050

ctg acc gga gca cgg ctg cag cgc aag cag gaa ggc tac ggg agc 3204

Leu Thr Gly Ala Arg Leu Gln Arg Lys Gln Glu Gly Tyr Gly Ser

1055 1060 1065

agg ccg cca ccg cca tcg tcg gag gag gag agg aag ggg agg aag 3249

Arg Pro Pro Pro Pro Ser Ser Glu Glu Glu Arg Lys Gly Arg Lys

1070 1075 1080

gac acg ttc aac atc aag ggc agg gtg tcc aac ctg agg cag aat 3294

Asp Thr Phe Asn Ile Lys Gly Arg Val Ser Asn Leu Arg Gln Asn

1085 1090 1095

ctg ggg ctg aga gcg aag ctg ttc ggc aag aag ctc cac tcc gcc 3339

Leu Gly Leu Arg Ala Lys Leu Phe Gly Lys Lys Leu His Ser Ala

1100 1105 1110

gac gag tcg cca ttc ccc gat gat ctc cct ccg atc gga acg ctg 3384

Asp Glu Ser Pro Phe Pro Asp Asp Leu Pro Pro Ile Gly Thr Leu

1115 1120 1125

gtc acc gcc cct tcc gtc ctc atc cac ccc ggc gtc ctc cag gag 3429

Val Thr Ala Pro Ser Val Leu Ile His Pro Gly Val Leu Gln Glu

1130 1135 1140

aac tcc acc gag gtg ccg ccg agc ccg gcg tcg tgg tgc agt agc 3474

Asn Ser Thr Glu Val Pro Pro Ser Pro Ala Ser Trp Cys Ser Ser

1145 1150 1155

cct cct gat gag atg agc agg gga ggt tac ccg agc cct gtc tcg 3519

Pro Pro Asp Glu Met Ser Arg Gly Gly Tyr Pro Ser Pro Val Ser

1160 1165 1170

cca ttg gag gct tcg ttc agc gag cac cga tct ccc ttg aag atg 3564

Pro Leu Glu Ala Ser Phe Ser Glu His Arg Ser Pro Leu Lys Met

1175 1180 1185

gcg gct agg gac atg agt tcg agt gct tct gaa cca gag cat cca 3609

Ala Ala Arg Asp Met Ser Ser Ser Ala Ser Glu Pro Glu His Pro

1190 1195 1200

tcg tcg gag caa gct caa acc gat caa gaa ctc gca gaa aca agt 3654

Ser Ser Glu Gln Ala Gln Thr Asp Gln Glu Leu Ala Glu Thr Ser

1205 1210 1215

cca atc cag gac gac gac gac gac gac aca gac gag ata gat aac 3699

Pro Ile Gln Asp Asp Asp Asp Asp Asp Thr Asp Glu Ile Asp Asn

1220 1225 1230

ccc atc aaa gct tac atc aga gca att ctt gtc atc gcc ggt ctg 3744

Pro Ile Lys Ala Tyr Ile Arg Ala Ile Leu Val Ile Ala Gly Leu

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tac gga cag aga cga agc tct gac caa ctc ttc tca gac cgc gag 3789

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1250 1255 1260

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Val Lys Pro Ile Pro Ala Trp Val Phe Glu Glu Val Glu Ser Ser

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tcg tcc tcc tca gcc ccg gcc acc acc gac tgc gac gct gcg gcc 3879

Ser Ser Ser Ser Ala Pro Ala Thr Thr Asp Cys Asp Ala Ala Ala

1280 1285 1290

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1295 1300 1305

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Leu Pro Arg Val Val Gln Ser Ser Thr Thr Leu Cys Ala Phe Ser

1310 1315 1320

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Arg Trp Tyr Gly Ala Ala Pro Arg Arg Ser Pro Gly Gly Lys Arg

1325 1330 1335

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Leu Leu Asp Gly Leu Trp Asn Thr Val Gln Ala Trp Leu Ala Pro

1340 1345 1350

ccg ccg ccg acg gac tcg ccc aac tcc gtg gac gag ctg atc ggc 4104

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1355 1360 1365

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Val Gly Ala Ala Gly Ala Glu Met Glu Ala Glu Ile Leu Asp Glu

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Leu Val Asp Glu Thr Leu Trp Asp Val Leu Leu Asn Val Gly Asp

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35 40 45

Leu Arg Ala Leu Arg Val Pro Cys Gly Pro Ser Ala His Val Ala Glu

50 55 60

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65 70 75 80

Pro Ala Ser Arg Pro Ala Ser Asp Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly

85 90 95

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100 105 110

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

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Leu Ile Ala Cys Phe Ser Trp Gln Phe Gly Gly Ile Ile Ile Ala Lys

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420 425 430

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450 455 460

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485 490 495

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595 600 605

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675 680 685

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770 775 780

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785 790 795 800

Leu Ser Arg Phe Tyr Tyr Glu Glu Glu Arg Leu Leu Ser Pro Lys Lys

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835 840 845

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865 870 875 880

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885 890 895

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915 920 925

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980 985 990

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1205 1210 1215

Pro Ile Gln Asp Asp Asp Asp Asp Asp Thr Asp Glu Ile Asp Asn

1220 1225 1230

Pro Ile Lys Ala Tyr Ile Arg Ala Ile Leu Val Ile Ala Gly Leu

1235 1240 1245

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1250 1255 1260

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1265 1270 1275

Ser Ser Ser Ser Ala Pro Ala Thr Thr Asp Cys Asp Ala Ala Ala

1280 1285 1290

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1295 1300 1305

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1310 1315 1320

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<220>

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<222>(1)..(1950)

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1 5 10 15

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20 25 30

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Asp Ser Glu Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Met

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ttt agc gat gct tct gtt cag agt gac att aag ctc tgg ccc ttc aag 288

Phe Ser Asp Ala Ser Val Gln Ser Asp Ile Lys Leu Trp Pro Phe Lys

85 90 95

gtg att gct gga cct ggt gac aag cct atg att gtt gtc cag tac aag 336

Val Ile Ala Gly Pro Gly Asp Lys Pro Met Ile Val Val Gln Tyr Lys

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

aat gcc gtt gtc act gtt cct gcc tac ttc aat gac tcc cag agg cag 480

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145 150 155 160

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Ala Thr Lys Asp Ala Gly Val Ile Ala Gly Leu Asn Val Met Arg Ile

165 170 175

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Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Lys

180 185 190

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Ala Thr Ser Val Gly Glu Lys Asn Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly

195 200 205

ggt acc ttt gat gtt tcc ctc ctt acc att gag gag ggt atc ttt gag 672

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210 215 220

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Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp

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Asn Arg Met Val Asn His Phe Val Gln Glu Phe Lys Arg Lys Asn Lys

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260 265 270

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275 280 285

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Glu Ile Asp Ser Leu Tyr Glu Gly Ile Asp Phe Tyr Ser Thr Ile Thr

290 295 300

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Arg Ala Arg Phe Glu Glu Leu Asn Met Asp Leu Phe Arg Lys Cys Met

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325 330 335

gtt cat gat gtt gtt ctt gtt ggt ggc tcc act agg atc ccg agg gtg 1056

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Gln Gln Leu Leu Gln Asp Phe Phe Asn Gly Lys Glu Leu Cys Lys Asn

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Ile Asn Pro Asp Glu Ala Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala

370 375 380

atc ttg agt ggt gag ggc aac gag aag gtc cag gac ctc ctc ctg ttg 1200

Ile Leu Ser Gly Glu Gly Asn Glu Lys Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu

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gat gtt acc cct ctt tct ctc ggt ttg gag act gct ggt ggt gtc atg 1248

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acc gtc ttg atc cca agg aac acc acc att ccc acc aag aag gag cag 1296

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420 425 430

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435 440 445

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Tyr Glu Gly Glu Arg Thr Arg Thr Arg Asp Asn Asn Leu Leu Gly Lys

450 455 460

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465 470 475 480

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485 490 495

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Glu Asp Lys Thr Thr Gly Gln Lys Asn Lys Ile Thr Ile Thr Asn Asp

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515 520 525

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Glu Lys Tyr Lys Ser Glu Asp Glu Glu His Lys Lys Lys Val Glu Ser

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Lys Asn Ala Leu Glu Asn Tyr Ala Tyr Asn Met Arg Asn Thr Ile Lys

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Asp Glu Lys Ile Ala Ser Lys Leu Pro Ala Ala Asp Lys Lys Lys Ile

565 570 575

gag gat gcc atc gac cag gcc atc cag tgg ctg gac ggc aac cag ctc 1776

Glu Asp Ala Ile Asp Gln Ala Ile Gln Trp Leu Asp Gly Asn Gln Leu

580 585 590

gct gag gct gat gag ttc gat gac aag atg aag gag ctg gag ggc atc 1824

Ala Glu Ala Asp Glu Phe Asp Asp Lys Met Lys Glu Leu Glu Gly Ile

595 600 605

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610 615 620

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Ala Gly Gly Met Asp Glu Asp Asp Ala Pro Pro Ala Gly Gly Ser Gly

625 630 635 640

gct ggc ccc aag atc gag gag gtc gac taa 1950

Ala Gly Pro Lys Ile Glu Glu Val Asp

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<213>Oryza sativa

<400>346

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Ala Asn Asp Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Gly Phe Thr

35 40 45

Asp Ser Glu Arg Leu Ile Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Met

50 55 60

Asn Pro Ile Asn Thr Val Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Arg

65 70 75 80

Phe Ser Asp Ala Ser Val Gln Ser Asp Ile Lys Leu Trp Pro Phe Lys

85 90 95

Val Ile Ala Gly Pro Gly Asp Lys Pro Met Ile Val Val Gln Tyr Lys

100 105 110

Gly Glu Glu Lys Gln Phe Ala Ala Glu Glu Ile Ser Ser Met Val Leu

115 120 125

Ile Lys Met Arg Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Thr Thr Ile Lys

130 135 140

Asn Ala Val Val Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln

145 150 155 160

Ala Thr Lys Asp Ala Gly Val Ile Ala Gly Leu Asn Val Met Arg Ile

165 170 175

Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Lys

180 185 190

Ala Thr Ser Val Gly Glu Lys Asn Val Leu Ile Phe Asp Leu Gly Gly

195 200 205

Gly Thr Phe Asp Val Ser Leu Leu Thr Ile Glu Glu Gly Ile Phe Glu

210 215 220

Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp

225 230 235 240

Asn Arg Met Val Asn His Phe Val Gln Glu Phe Lys Arg Lys Asn Lys

245 250 255

Lys Asp Ile Thr Gly Asn Pro Arg Ala Leu Arg Arg Leu Arg Thr Ala

260 265 270

Cys Glu Arg Ala Lys Arg Thr Leu Ser Ser Thr Ala Gln Thr Thr Ile

275 280 285

Glu Ile Asp Ser Leu Tyr Glu Gly Ile Asp Phe Tyr Ser Thr Ile Thr

290 295 300

Arg Ala Arg Phe Glu Glu Leu Asn Met Asp Leu Phe Arg Lys Cys Met

305 310 315 320

Glu Pro Val Glu Lys Cys Leu Arg Asp Ala Lys Met Asp Lys Ser Ser

325 330 335

Val His Asp Val Val Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Arg Val

340 345 350

Gln Gln Leu Leu Gln Asp Phe Phe Asn Gly Lys Glu Leu Cys Lys Asn

355 360 365

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370 375 380

Ile Leu Ser Gly Glu Gly Asn Glu Lys Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu

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Asp Val Thr Pro Leu Ser Leu Gly Leu Glu Thr Ala Gly Gly Val Met

405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

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485 490 495

Glu Asp Lys Thr Thr Gly Gln Lys Asn Lys Ile Thr Ile Thr Asn Asp

500 505 510

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515 520 525

Glu Lys Tyr Lys Ser Glu Asp Glu Glu His Lys Lys Lys Val Glu Ser

530 535 540

Lys Asn Ala Leu Glu Asn Tyr Ala Tyr Asn Met Arg Asn Thr Ile Lys

545 550 555 560

Asp Glu Lys Ile Ala Ser Lys Leu Pro Ala Ala Asp Lys Lys Lys Ile

565 570 575

Glu Asp Ala Ile Asp Gln Ala Ile Gln Trp Leu Asp Gly Asn Gln Leu

580 585 590

Ala Glu Ala Asp Glu Phe Asp Asp Lys Met Lys Glu Leu Glu Gly Ile

595 600 605

Cys Asn Pro Ile Ile Ala Lys Met Tyr Gln Gly Ala Gly Ala Asp Met

610 615 620

Ala Gly Gly Met Asp Glu Asp Asp Ala Pro Pro Ala Gly Gly Ser Gly

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Ala Gly Pro Lys Ile Glu Glu Val Asp

645

<210>347

<211>230

<212>PRT

<213>Artificial

<220>

<223>Artificial consensus sequence of alignment in Figure 3

<400>347

Met Gly Arg Gly Arg Val Glu Leu Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ile Asn

1 5 10 15

Arg Gln Val Thr Gly Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Leu Lys Lys Ala

20 25 30

Tyr Glu Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Leu Ile Ile Phe

35 40 45

Ser Ser Arg Gly Lys Leu Tyr Glu Phe Ala Ser Ser Ser Met Thr Lys

50 55 60

Thr Leu Glu Arg Tyr Gln Arg Tyr Ser Tyr Ala Glu Ser Ala Val Ile

65 70 75 80

Ser Ala Glu Ser Glu Thr Gln Gly Ser Trp Tyr Gln Glu Tyr Leu Lys

85 90 95

Leu Lys Ala Lys Val Glu Ala Leu Gln Lys Thr Gln Arg His Leu Leu

100 105 110

Gly Glu Asp Leu Glu Ser Leu Ser Leu Lys Glu Leu Gln Gln Leu Glu

115 120 125

Lys Gln Leu Glu Ser Ser Leu Lys His Ile Arg Ser Arg Lys Thr Gln

130 135 140

Leu Leu Leu Glu Gln Ile Ser Glu Leu Gln Arg Lys Glu Lys Ser Leu

145 150 155 160

Gln Glu Glu Asn Lys Val Leu Gln Lys Lys Leu Val Glu Thr Glu Lys

165 170 175

Gly Gln Gln Val Gln Gln Gln Gly Trp Asp Gln Gly Gln Gly Gln Thr

180 185 190

Pro Ala Gln Gln Pro Pro His Ser Ser Ser Phe His Arg Glu Ala Ala

195 200 205

Glu Pro Thr Leu Asn Ile Gly Tyr Ala Ala Gly Glu Arg Ile Ala Gln

210 215 220

Leu Pro Pro Trp Met Leu

225 230

<210>348

<211>224

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>348

Met Gly Arg Gly Lys Ile Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Ala Thr Asn

1 5 10 15

Arg Gln Val Thr Tyr Ser Lys Arg Arg Thr Gly Ile Met Lys Lys Ala

20 25 30

Arg Glu Leu Thr Val Leu Cys Asp Ala Gln Val Ala Ile Ile Met Phe

35 40 45

Ser Ser Thr Gly Lys Tyr His Glu Phe Cys Ser Pro Ser Thr Asp Ile

50 55 60

Lys Gly Ile Phe Asp Arg Tyr Gln Gln Ala Ile Gly Thr Ser Leu Trp

65 70 75 80

Ile Glu Gln Tyr Glu Asn Met Gln Arg Thr Leu Ser His Leu Lys Asp

85 90 95

Ile Asn Arg Asn Leu Arg Thr Glu Ile Arg Gln Arg Met Gly Glu Asp

100 105 110

Leu Asp Gly Leu Glu Phe Asp Glu Leu Arg Gly Leu Glu Gln Asn Val

115 120 125

Asp Ala Ala Leu Lys Glu Val Arg His Arg Lys Tyr His Val Ile Thr

130 135 140

Thr Gln Thr Glu Thr Tyr Lys Lys Lys Val Lys His Ser Tyr Glu Ala

145 150 155 160

Tyr Glu Thr Leu Gln Gln Glu Leu Gly Leu Arg Glu Glu Pro Ala Phe

165 170 175

Gly Phe Val Asp Asn Thr Gly Gly Gly Trp Asp Gly Gly Ala Gly Ala

180 185 190

Gly Ala Ala Ala Asp Met Phe Ala Phe Arg Val Val Pro Ser Gln Pro

195 200 205

Asn Leu His Gly Met Ala Tyr Gly Gly Asn His Asp Leu Arg Leu Gly

210 215 220

<210>349

<211>249

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>349

Met Gly Arg Gly Pro Val Gln Leu Arg Arg Ile Glu Asn Lys Ile Asn

1 5 10 15

Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Asn Gly Leu Leu Lys Lys Ala

20 25 30

His Glu Ile Ser Val Leu Cys Asp Ala Asp Val Ala Leu Ile Val Phe

35 40 45

Ser Thr Lys Gly Lys Leu Tyr Glu Phe Ser Ser His Ser Ser Met Glu

50 55 60

Gly Ile Leu Glu Arg Tyr Gln Arg Tyr Ser Phe Asp Glu Arg Ala Val

65 70 75 80

Leu Glu Pro Asn Thr Glu Asp Gln Glu Asn Trp Gly Asp Glu Tyr Gly

85 90 95

Ile Leu Lys Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Lys Ser Gln Arg Gln Leu

100 105 110

Leu Gly Glu Gln Leu Asp Thr Leu Thr Thr Lys Glu Leu Gln Gln Leu

115 120 125

Glu His Gln Leu Glu Tyr Ser Leu Lys His Ile Arg Ser Lys Lys Asn

130 135 140

Gln Leu Leu Phe Glu Ser Ile Ser Glu Leu Gln Lys Lys Glu Lys Ser

145 150 155 160

Leu Lys Asn Gln Asn Asn Val Leu Gln Lys Leu Met Glu Thr Glu Lys

165 170 175

Glu Lys Asn Asn Ala Ile Ile Asn Thr Asn Arg Glu Glu Gln Asn Gly

180 185 190

Ala Thr Pro Ser Thr Ser Ser Pro Thr Pro Val Thr Ala Pro Asp Pro

195 200 205

Ile Pro Thr Thr Asn Asn Ser Gln Ser Gln Pro Arg Gly Ser Gly Glu

210 215 220

Ser Glu Ala Gln Pro Ser Pro Ala Gln Ala Gly Asn Ser Lys Leu Pro

225 230 235 240

Pro Trp Met Leu Arg Thr Ser His Thr

245

Claims (58)

1.一种编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子，其中所述多肽在酵母双杂交分析中与选自如下一组的蛋白质的片段结合：OsE2F1(SEQ ID NO：194)，Os018989-4003(SEQ ID NO：2)，OsE2F2(SEQ ID NO：10)，OsS49462(SEQ ID NO：206)，OsCYCOS2(SEQID NO：210)，OsMADS45(SEQ ID NO：202)，OsRAP1B(SEQ ID NO：244)，OsMADS6(SEQ ID NO：236)，OsFDRMADS8(SEQ ID NO：228)，OsMADS3(SEQ ID NO：232)，OsMADS5(SEQ ID NO：234)，OsMADS15(SEQ ID NO：240)，OsHOS59(SEQ ID NO：258)，OsGF14-c(SEQ ID NO：278)，OsDAD1(SEQ ID NO：292)，Os006819-2510(SEQ ID NO：296)，OsCRTC(SEQ ID NO：300)，OsSGT1(SEQ ID NO：310)，OsERP(SEQ ID NO：312)，OsCHIB1(SEQ ID NO：318)，OsCS(SEQ ID NO：322)，OsPP2A-2(SEQ ID NO：330)及OsCAA90866(SEQ ID NO：336)。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子衍生自水稻(Oryza sativa)。

3.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含选自SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的核酸序列。

4.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：1-7中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：194的氨基酸序列。

5.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：9和11之一的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ IDNO：2的氨基酸序列。

6.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：1和13之一的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ IDNO：10的氨基酸序列。

7.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：15-21中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：206的氨基酸序列。

8.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：15、17、23-53中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：210的氨基酸序列。

9.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：55的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：202的氨基酸序列。

10.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：57的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：244的氨基酸序列。

11.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：59的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：236的氨基酸序列。

12.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：61的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：232的氨基酸序列。

13.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：63的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：234的氨基酸序列。

14.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：65的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：240的氨基酸序列。

15.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：67-79中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：258的氨基酸序列。

16.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：81的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：260的氨基酸序列。

17.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：83-97中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：278的氨基酸序列。

18.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：89和99之一的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQID NO：286的氨基酸序列。

19.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：101-105中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：296的氨基酸序列。

20.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：107的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ IDNO：300的氨基酸序列。

21.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：109的核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ IDNO：304的氨基酸序列。

22.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：111-123中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：310的氨基酸序列。

23.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：125-147中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：312的氨基酸序列。

24.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：151-157中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：318的氨基酸序列。

25.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：159-175中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：322的氨基酸序列。

26.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：177-185中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：330的氨基酸序列。

27.权利要求3的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：177、187-191中编号为奇数的一种核酸序列，而所述蛋白质包含SEQ ID NO：336的氨基酸序列。

28.一种编码细胞增殖相关多肽的分离的核酸分子，其中所述核酸分子选自如下一组：

(a)编码包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的一种氨基酸序列的多肽的一种核酸分子；

(b)包含SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列的一种核酸分子；

(c)具有与(a)或(b)的核酸分子的核酸序列具有至少90％相同性的核酸序列的一种核酸分子；

(d)在如下一组的杂交条件下与(a)或(b)杂交的一种核酸分子：

(i)7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mM乙二胺四乙酸(EDTA)，50℃；最后在50℃在2X标准柠檬酸盐水(SSC)，0.1％SDS中洗涤；

(ii)7％SDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA，50℃；最后在50℃在1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

(iii)7％SDS，0.5M NaPO₄，1mM EDTA，50℃；最后在0.5×SSC，0.1％SDS中洗涤；

(iv)7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mMEDTA，50℃；最后在50℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤；和

(v)7％十二烷基硫酸钠(SDS)，0.5M NaPO₄，1mMEDTA，50℃；最后在65℃在0.1×SSC，0.1％SDS中洗涤；

(e)包含与(a)完全互补的核酸序列的一种核酸分子；和

(f)包含与(a)完全反向互补的核酸序列的一种核酸分子。

29.由权利要求28的分离的核酸分子编码的一种分离的细胞增殖相关多肽，或其功能性片段、结构域或特征部分。

30.生产权利要求29的多肽的方法，包括如下步骤：

(a)在合适的生长条件下生长包含表达盒的细胞，所述表达盒包含权利要求28的核酸分子；和

(b)从细胞中分离该多肽。

31.一种包含权利要求1的分离的核酸分子的转基因植物细胞。

32.权利要求31的转基因植物，其中所述植物选自：玉米(Zeamays)、芸苔属、苜蓿(Medicago sativa)、水稻(Oryza sativa ssp.)、黑麦(Secale cereale)、高粱(两色蜀黍(Sorghum bicolor)、蜀黍(Soeghum vulgare))、珍珠粟(Pennisetum glaucum)、粟米(Panicummiliaceum)、谷子(Setaria italica)、穇子(Eleusine coracana)、向日葵(Helianthus annuus)、红花(Carthamus tinctorius)、小麦(Triticumaestivum)、大豆(Glycine max)、烟草(Nicotiana tabacum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、花生(Arachis hypogaea)、棉花，甘薯(Ipomoeabatatus)、木薯(Manihot esculenta)、咖啡(咖啡属)、椰子(Cocosnucifera)、风梨(Ananas comosus)、柑桔树(柑桔属)、可可(Theobroma cacao)、茶(Camellia sinensis)、香蕉(芭蕉属)，鳄梨(Persea ultilane)、无花果(Ficus casica)、番石榴(Psidium guajava)、芒果(ManTIFera indica)、橄榄(Olea europaea)、番木瓜(Carica papaya)、腰果(Anacardium occidentale)、澳洲坚果(Macadamia integrifolia)、杏仁(Prunus amygdalus)、甜菜(Beta vulgaris)、甘蔗(甘蔗属)、燕麦、浮萍(Lemna)、大麦、蔬菜、观赏植物及针叶树。

33.权利要求32的转基因植物，其中所述植物是水稻(Oryzasativa ssp.)。

34.权利要求32的转基因植物，其中所述浮萍选自浮萍属、紫萍属、芜萍属和Wofiella属。

35.权利要求32的转基因植物，其中所述蔬菜选自番茄、莴苣、瓜尔豆、角豆、胡芦巴、大豆、四季豆、豇豆、绿豆、利马豆、蚕豆、小扁豆、鹰嘴豆、青豆、利马豆、豌豆及香瓜属成员。

36.权利要求32的转基因植物，其中所述观赏植物选自凤仙花属、秋海棠属、天竺葵属、堇菜属、仙客来属、马鞭草属、长春花属、万寿菊属、报春花属、非洲紫罗兰属、藿香蓟属、苋属、金鱼草属、耧斗菜属、瓜叶菊属、三叶草属、秋英属、豇豆属、大丽花属、曼陀罗属、翠雀属、扶郎花属、唐菖蒲属、大岩桐属、朱顶红属、松叶菊属、Salpiglossos、百日草属、杜鹃花属、八仙花属、木槿属、蔷薇属、郁金香属、水仙属、矮牵牛属、石竹属、大戟属和菊属。

37.权利要求32的转基因植物，其中所述针叶树选自火炬松、沼泽松、美国黄松、黑松、辐射松、道格拉斯冷杉、西部铁杉、锡特卡云杉、红杉、银枞、香脂冷杉、西部红柏及阿拉斯加黄柏。

38.权利要求31的转基因植物，其中所述转基因植物是选自如下一组的一种植物：金合欢属、小茴香、朝鲜蓟、芝麻菜、黑莓、canola、芫荽、克莱门氏小柑橘、宽叶莴苣、桉树、茴香、葡萄柚、哈蜜瓜、豆薯、猕猴桃、柠檬、酸橙、蘑菇、坚果、黄秋葵、柑桔、欧芹、柿子、车前草、石榴、白杨、辐射松、菊苣、南方松、枫香、柑橘树、黑小麦、藤本植物、山药、苹果、梨、温柏、樱桃、杏、甜瓜、大麻、荞麦、葡萄、树莓、藜、蓝莓、油桃、桃、李子、草莓、西瓜、茄子、胡椒、花椰菜、芸苔、椰菜、甘蓝、ultilan sprouts、洋葱、胡萝卜、韭菜、甜菜、蚕豆、芹菜、萝卜、南瓜、菊苣、葫芦、大蒜、四季豆、菠菜、南瓜(squash)、芜箐、ultilane及绿皮西葫芦。

39.一种分离的细胞增殖相关多肽，其中所述多肽在酵母双杂交分析中结合选自如下一组的蛋白质的片段：OsE2F1(SEQ ID NO：194)，Os018989-4003(SEQ ID NO：2)，OsE2F2(SEQ ID NO：10)，OsS49462(SEQ ID NO：206)，OsCYCOS2(SEQ ID NO：210)，OsMADS45(SEQ ID NO：202)，OsRAP1B(SEQ ID NO：244)，OsMADS6(SEQ ID NO：236)，OsFDRMADS8(SEQ ID NO：228)，OsMADS3(SEQ ID NO：232)，OsMADS5(SEQ ID NO：234)，OsMADS15(SEQ ID NO：240)，OsHOS59(SEQ ID NO：258)，OsGF14-c(SEQ ID NO：278)，OsDAD1(SEQ ID NO：292)，Os006819-2510(SEQ ID NO：296)，OsCRTC(SEQ ID NO：300)，OsSGT1(SEQ ID NO：310)，OsERP(SEQ ID NO：312)，OsCHIB1(SEQ ID NO：318)，OsCS(SEQ ID NO：322)，OsPP2A-2(SEQ ID NO：330)及OsCAA90866(SEQ ID NO：336)。

40.权利要求39的分离的细胞增殖相关多肽，其中所述分离的增殖相关多肽选自如下一组：

(a)包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的一种氨基酸序列的多肽；和

(b)包含与(a)的多肽有至少80％相似性的氨基酸序列的多肽，使用GCG Wisconsin Package SEQWEB_的GAP应用软件，以默认GAP分析参数确定所述相似性。

41.权利要求40的分离的细胞增殖相关多肽，其中所述多肽包含SEQ ID NO：2-192中编号为偶数的一种氨基酸序列。

42.一种包含编码权利要求1的细胞增殖相关多肽的核酸分子的表达盒。

43.权利要求42的表达盒，其中编码细胞增殖相关多肽的核酸分子包含选自SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列。

44.权利要求42的表达盒，其中所述表达盒进一步包含可操纵地连接于所述核酸分子的一个调节元件。

45.权利要求44的表达盒，其中所述调节元件包含启动子。

46.权利要求45的表达盒，其中所述启动子是植物启动子。

47.权利要求45的表达盒，其中所述启动子是组成型启动子。

48.权利要求45的表达盒，其中所述启动子是组织特异性或细胞类型特异性启动子。

49.权利要求48的表达盒，其中所述组织特异性或细胞类型特异性启动子指导表达盒在选自表皮、根、维管组织、分生组织、形成层、皮层、木髓、叶、花、种子及其组合的位置表达。

50.一种包含权利要求42的表达盒的转基因植物细胞。

51.权利要求50的转基因植物细胞，其中所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列。

52.一种包含权利要求42的表达盒的转基因植物。

53.权利要求52的转基因植物的转基因种子或子代。

54.一种调节植物细胞增殖的方法，包括将一种包含编码细胞增殖相关多肽的一种分离的核酸分子的表达盒导入植物细胞中，其中所述多肽在酵母双杂交分析中与选自如下一组的蛋白质的片段相结合：OsE2F1(SEQ ID NO：194)，Os018989-4003(SEQ ID NO：2)，OsE2F2(SEQ ID NO：10)，OsS49462(SEQ ID NO：206)，OsCYCOS2(SEQ ID NO：210)，OsMADS45(SEQ ID NO：202)，OsRAP1B(SEQID NO：244)，OsMADS6(SEQ ID NO：236)，OsFDRMADS8(SEQ IDNO：228)，OsMADS3(SEQ ID NO：232)，OsMADS5(SEQ ID NO：234)，OsMADS15(SEQ ID NO：240)，OsHOS59(SEQ ID NO：258)，OsGF14-c(SEQ ID NO：278)，OsDAD1(SEQ ID NO：292)，Os006819-2510(SEQ ID NO：296)，OsCRTC(SEQ ID NO：300)，OsSGT1(SEQ ID NO：310)，OsERP(SEQ ID NO：312)，OsCHIB1(SEQ ID NO：318)，OsCS(SEQ ID NO：322)，OsPP2A-2(SEQ ID NO：330)及OsCAA90866(SEQ ID NO：336)。

55.权利要求54的方法，其中所述多肽在细胞中的表达导致细胞增殖的速度或程度增加。

56.权利要求54的方法，其中所述多肽在细胞中的表达导致细胞增殖的速度或程度降低。

57.权利要求54的方法，其中所述分离的核酸分子包含选自SEQ ID NO：1-339中编号为奇数的一种核酸序列。

58.权利要求57的方法，其中所述分离的核酸分子包含选自SEQ ID NO：1-191中编号为奇数的一种核酸序列。

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