含有渗透促进剂丙二醇的睾丸激素凝胶
技术领域
本发明涉及含睾丸激素的药物组合物和凝胶,以及它们的使用方法。
背景技术
男性体内的睾丸激素
睾丸激素,男性体内循环的主要雄激素,是由胆固醇合成的。试验中约500百万个睾丸间质细胞分泌每天所生成的6-7mg睾丸激素中的95%以上。由脑垂体生成的两种激素,促黄体生成激素(“LH”)和促卵泡激素(“FSH”),是发展和维持睾丸功能以及负调节睾丸激素生成所需要的。循环的睾丸激素通过两种不同的途径代谢为各种17-酮类固醇。睾丸激素可由5-alpha-还原酶代谢为双氢睾丸酮(“DHT”)或由芳香化酶络合物代谢为雌二醇(“E2”)。血液中循环的睾丸激素有98%与蛋白质结合。男性中,约40%与高亲合力性激素结合蛋白(“SHBG”)结合。其余60%与白蛋白弱结合。因此,许多用于睾丸激素的测定从临床实验室获得。
来自加利福尼亚州立大学洛杉矶分校-港湾医疗中心(UCLA-Harbor MedicalCenter)的下表总结了正常成年男性的激素浓度:
正常男性体内的激素水平: 激素正常范围
睾丸激素(总量) 298到1043ng/dL
游离睾丸激素 3.5到17.9ng/dL
DHT 31到193ng/dL
DHT/T比率 0.052到0.33
DHT+T 372到1349ng/dL
SHBG 10.8到46.6nmol/L
LH 1.0到8.ImILVmL
E2 17.1到46.1pg/mL
文献所报道的睾丸激素的半衰期有着相当大的变化,从10到100分钟。然而,研究员认为正常年轻男性体内循环的睾丸激素每日变化。最高水平发生在上午大约6:00到8:00,然后整个白天该水平下降。特征曲线中睾丸激素的最大水平为720ng/dL,最低水平为430ng/dL。然而,这种日循环的生理意义,如果有的话,还尚未清楚。
女性体内的睾丸激素
成年女性尿中雄性类固醇的排泄在50多年前被证实。因为那时候,生理学家和临床医生已研究了女性体内睾丸激素和其他内源性的雄性激素的来源和生物功能。现在知道,雄激素由女性的卵巢素和肾上腺两者分泌。每个来源贡献约50%(直接地和通过前体)到约300μg的健康“循环”女性每日生成的睾丸激素。当雄激素过量生成(如发生在多囊卵巢综合症和某些产生雄激素的肿瘤)的副作用已经充分描述时,雄激素在女性中的正常生理效应却不被更多人理解。从动物研究、男性生理和雄激素生成缺乏的女性症状推断,雄激素在正常女性中的主要生理效应包括但不限于:肌肉、皮肤、毛发和骨的合成代谢效应;红血球生成的刺激效应;免疫功能的调节效应;和情绪、健康和性功能的心理效应。
另外,内源性雄激素对阴毛的生长很重要,并被认为可调节各种生殖靶组织上的雌激素和孕激素的效应。人们还相信,雄激素在调节泪腺的分泌功能中起重要作用。
百分之五十循环的睾丸激素源自于在促黄体生成激素支配下卵泡膜细胞中直接的卵巢分泌。另一半源自于肾上腺雄激素前体脱氢表雄酮、雄甾烯二酮和硫酸脱氢表雄酮的外部转化。睾丸激素还可以转化为双氢睾丸酮或雌二醇。因此,睾丸激素作为激素和前激素。
血液中循环的睾丸激素有98%与蛋白质结合。女性中,约66%与高亲合力性激素结合蛋白结合。其余34%与白蛋白弱结合。因此,许多用于睾丸激素的测定从临床实验室获得。
大多数通过性激素结合蛋白强烈结合的类固醇的亲合力顺序是双氢睾丸酮>睾丸激素>雄甾烯二酮>雌二醇>雌激素酮。性激素结合蛋白与双氢睾丸酮而不是硫酸双氢睾丸酮弱结合。下表显示了正常绝经前女性的近似激素水平。
正常绝经前女性体内的激素水平
激素 平均值+/-标准差 中值 范围
睾丸激素(nmol/L) 1.20+/-0.69 0.98 0.4-2.7
游离睾丸激素(pmol/L) 12.80+/-5.59 12.53 4.1-24.2
总睾丸激素中的
游离睾丸激素% 1.4+/-1.1 1.1 0.4-6.3
促黄体生成激素(IU/L) 7.2+/-3.3 6.7 3.0-18.7
促卵泡激素(IU/L) 4.7+/-3.6 4.2 1.5-21.4
性激素结合蛋白(nmol/L) 66.1+/-22.7 71.0 17.8-114.0
与其他激素缺乏状况相比,女性的睾丸激素不足作为一种临床实体已被大大地忽视。然而,存在雄激素生成明显缺乏且相关的症状已经描述的定义明确的患者人群,例如包括,使用雌激素替代治疗的年轻的卵巢切除/子宫切除女性、绝经后女性,使用口服避孕药的女性,患肾上腺功能紊乱的女性,患皮质类固醇诱导的肾上腺抑制的女性,以及人类免疫缺陷性病毒阳性的女性。
因为升高的睾丸激素浓度被证明可改变性能力和性欲,研究人员研究了将睾丸激素释放给男性以及女性的方法。这些方法包括肌肉注射、口服代替、颗粒植入和透皮贴片。然而,这些释放睾丸激素的方法有着一种或多种缺点。例如,皮下颗粒植入和酯注射很疼痛,并需要外科过程和/或大夫就诊。此外,在性腺机能减退的男性体内,植入疗法包括挤压的风险(8.5%)、出血的风险(2.3%)、或感染的风险(0.6%)。许多这些方法,例如口服/舌下/口含制剂,有着不符合要求的药代动力学曲线,其产生超生理性的睾丸激素浓度,然后回到基线。透皮贴片不能提供最佳的药代动力学特征,这使得透皮贴片不能用于多数患者,并且贴片还与明显的皮肤刺激有关。另外,贴片不能提供剂量灵活性,这可能造成视觉的无吸引力,并且贴片可能有脱落的倾向,特别是在剧烈体育活动过程中。口服给药在患者体内产生不适当的睾丸激素水平和不可预见的吸收模式。此外,因为肝脏代谢该制剂,因此有着肝脏毒性的风险,更不用说首过代谢了。
最近,一种百分之一睾丸激素凝胶已被批准用于男性,其提供剂量灵活性,且极少皮肤刺激。该凝胶可从美国Unimed Pharmaceuticals,Inc,Inc.,Deerfield,111.,SolvayPharmaceuticals,Inc.Co.,Marietta,GA30062买到,商标为AndroGel
发明内容
本发明提供含睾丸激素的药物组合物和凝胶,以及它们的使用方法。更具体地,本发明提供含睾丸激素的水醇/醇的药物组合物和凝胶,其适于局部和透皮应用,其中所述组合物包含丙二醇。除了可实现非常有效的睾丸激素释放外,本发明组合物是美学观点上非常具有吸引力的。丙二醇被证明是本发明组合物中的一种非常有效的渗透促进剂,其单独作为渗透促进剂使用或与其他渗透促进剂结合,例如与十四烷酸异丙酯结合。
本发明涉及一种药物组合物,该药物组合物包含睾丸激素、至少一种C2-C6醇、至少一种胶凝剂、至少一种渗透促进剂、和水。
所述药物组合物可被制成各种剂型,例如凝胶、溶液、霜剂、洗液、喷雾剂、软膏剂、气溶胶。优选地,所述药物组合物是凝胶。
下文所使用的术语“睾丸激素”不仅指睾丸激素本身,而且指其对映体、异构体、互变异构体、盐、螯合物、酯、酰胺、衍生物、和前药及其前体,例如DHT(双氢睾丸酮)、17-甲基睾丸激素、17[alpha]-甲基-睾丸激素3-环戊基烯醇醚、庚酸睾丸激素、γ-环戊丙酸睾丸甾酮(testosterone cypionate)、十一酸睾丸激素、环糊精睾丸激素、正丁基环己基羧酸睾丸激素(testosterone buciclate)。根据本发明,睾丸激素可以是天然来源,或源于半合成或合成方法。
C2-C6醇是本领域所公知的。这样的醇包括乙醇、正丙醇、异丙醇(丙-2-醇)、n-正丙醇(丙-1-醇)、丁醇、丁-1-醇、丁-2-醇、叔-丁醇、戊醇、己醇。乙醇是优选的,因为它一经与皮肤接触就迅速蒸发,可有效帮助睾丸激素经皮透过。
胶凝剂是本领域公知的。术语“胶凝剂”通常指一种可能为聚合物性质的化合物,当其与一种特定的溶剂例如水接触时,具有成胶的能力。胶凝剂可以增加本发明药物组合物的粘度,还可以作为增溶剂。胶凝剂的例子包括阴离子聚合物,例如基于丙烯酸的聚合物(包括聚丙烯酸聚合物,例如B.F.Goodrich Specialty Polymers和ChemicalsDivision ofCleveland,Ohio生产的CARBOPOL
纤维素衍生物,泊洛沙姆和poloxamines,更确切地说,Carbomers或基于丙烯酸的聚合物,例如Carbopol
980或940、981或941、1382或1382、5984、2984、934或934P(Carbopol
通常是丙烯酸与烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交联的聚合物、),Pemulen TR1
或TR2
Ultrez,Synthalen CR,等等);纤维素衍生物,例如乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素(CMC)等等;泊洛沙姆或聚乙烯-聚丙烯共聚物,例如Lutrol
68或127级,poloxamines及其他胶凝剂例如壳聚糖、低分子右旋糖酐、胶质和天然胶。所有的这些胶凝剂,单独或组合,可用于本发明的药物组合物。可根据本发明组合物的pH以及所需的粘度来选择所述胶凝剂。
根据本发明,羟丙基纤维素、Carbopol
980和Lutrol
是特别优选的。
渗透促进剂也是本领域已知的。“渗透促进剂”通常是一种可促进药物或活性成分透皮释放的试剂。这些试剂还被称为透皮加速剂、活化剂和吸收增进剂。该类试剂包括那些具有不同作用机理、那些具有改善药物溶解度和扩散性的功能、和那些通过改变角质层性能以保持湿度、软化皮肤、改善皮肤的渗透率、用作透皮助剂或毛囊开启剂或暂时改变皮肤例如边界层的状态来改善透皮吸收的试剂。
除非另有说明,百分比(%)指基于组合物总重量的重量份。
根据一个方面,所述药物组合物包含0.5到5.0%(w/w),优选0.5到2.5%(w/w),更优选0.6到2.0%(w/w),更优选0.7到1.5%(w/w),更优选0.75到1.25%(w/w),更优选0.8到1.2%(w/w),更优选0.9到1.1%(w/w),最优选约1.0%(w/w)的睾丸激素。
根据本发明的另一个方面,所述药物组合物包含0.5到5.0%(w/w),优选0.5到2.5%(w/w),更优选0.75到2.25%(w/w),更优选0.9到2.0%(w/w),更优选1.0到1.8%(w/w),更优选1.25到1.75%(w/w),更优选1.3到1.6%(w/w),最优选约1.5%(w/w)的睾丸激素。
根据另一个方面,所述药物组合物包含40.0到75.0%(w/w),优选40.0到70.0%(w/w),更优选45.0到65.0%(w/w),更优选50.0到60.0(w/w),更优选52.0到58.0%(w/w),更优选53.0到57.0%(w/w),更优选54.0到56.0%(w/w),最优选约56%(w/w)的至少一种C2-C6醇。
根据本发明的另一方面,所述C2-C6醇选自下组:乙醇、丙-1-醇和丙-2-醇,及其混合物。优选地,所述C2-C6醇是乙醇。
根据本发明的另一方面,所述药物组合物包含0.1到5.0%(w/w),优选0.15到4.5%(w/w),更优选0.2到4.0%(w/w),更优选0.25到3.5%(w/w),更优选0.3到3.0%(w/w),更优选0.4到2.5%(w/w),更优选0.5到2.0%(w/w),最优选约0.5到1.0%(w/w)的至少一种胶凝剂。
根据本发明的另一方面,所述胶凝剂选自下组:基于丙烯酸的聚合物,包括纤维素,包括纤维素酯和衍生物(纤维素衍生物例如是乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素(CMC)等等);Carbomers例如Carbopol
聚合物,例如Carbopol
980或940、981或941、1382或1382、5984、2984、934或934P、Pemulen TR1
或TR2
Ultrez、Synthalen CR等等;poloxamines,泊洛沙姆或聚乙烯-聚丙烯共聚物,例如Lutrol
68或127级,poloxamines或其他胶凝剂,例如脱乙酰壳聚糖、低分子右旋糖酐、果胶和天然胶,及其混合物。
根据本发明的另一方面,所述药物组合物包括0.1到5.0%(w/w),优选0.15到4.5%(w/w),更优选0.2到4.0%(w/w),更优选0.3到3.5%(w/w),更优选0.4到3.0%(w/w),更优选0.5到2.5%(w/w),最优选0.5到2.0%(w/w)的丙二醇。根据本发明,有利地,对于本发明的睾丸激素含量和组分来说,发现丙二醇是一种非常有效和相容的渗透促进剂。另外,根据本发明,丙二醇的使用导致药物组合物具有非常有吸引力的外观。本发明的药物组合物是非常透明的,视觉上吸引人的,且具有非常舒适的质地,这改善了患者的使用。另外,本发明的药物组合物需要低级醇含量。此外,本发明的组合物是很稳定的,且丙二醇被证明是与标准中和剂例如三乙醇胺相容的。本发明组合物可包含几种渗透促进剂。
任选地,根据本发明,所述药物组合物还包含水。
在一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-0.5到5.0%(w/w)的睾丸激素,
-40.0到75.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到5.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.1到5.0%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-0.75到1.25%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到4.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.2到4.0%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-0.8到1.2%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到3.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.3到3.0%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-0.9到1.1%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到2.5%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.4到2.5%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-约1.0%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到2.5%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.4到2.5%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-1.0到2.0%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到75.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到5.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.2到5.0%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-1.25到1.75%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到4.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.2到4.0%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-1.4到1.6%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到3.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.3到3.0%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,包含:
-约1.5%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到2.5%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.4到2.5%(w/w)的丙二醇,
-任选地,水。
所述药物组合物适于睾丸激素的控制透皮释放。因此,所述药物组合物可由患者他/她自己给药,而不需要在给药过程中存在医生。而且,该给药不需要外科手术或注射。
根据本发明,有利地,丙二醇作为睾丸激素的非常有效的渗透促进剂,特别是与本发明组合物的睾丸激素剂量和胶凝剂结合。
另一方面,本发明的药物组合物还包含一种碱。有利的,所述碱是药学上可接受的,并优选选自下组:三乙醇胺、氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾、精氨酸、氨基甲基丙醇或氨基丁三醇(tromethamine)、及其混合物。当所述药物组合物的pH对于透皮给药不是最佳的时,例如,其中所述胶凝剂包含至少一种基于丙烯酸的聚合物,所述碱用于中和在局部应用到人类皮肤上的所述药物组合物。此外,在中和电荷以及聚合物盐的形成过程中,所述碱(中和剂)允许聚合物链的最优溶胀。特别是,当所述胶凝剂包含基于丙烯酸的聚合物时,所述碱优选包含三乙醇胺。它还允许本发明的药物组合物实现最优粘度。本领域的技术人员知道如何选择组合物中适量的所述碱,特别是根据存在于其中的所述胶凝剂的性质,和该组合物的酒精含量,以达到该组合物所需的最后的pH。例如,使用卡波姆和/或存在高的醇含量时,可以使用氨基丁三醇和/或NaOH作为碱,所选择的用量为可以达到组合物所需的最后的pH。或者,在一个实施方式中,本发明的药物组合物包含0.1到5.0%(w/w),优选0.15到4.5%(w/w),更优选0.2到4.0%(w/w),更优选0.25到3.5%(w/w),更优选0.3到3.0%(w/w),更优选0.4到2.5%(w/w),更优选0.5到2.0%(w/w),最优选0.5到1.0%(w/w)的三乙醇胺。
优选地,本发明的药物组合物的pH为2到9,优选为3到8,更优选为3到7。根据本发明的另一方面,所述药物组合物还包含十四烷酸异丙酯。有利地,根据本发明,出乎意料地显示,当十四烷酸异丙酯与丙二醇联用,作为另一个渗透促进剂时,十四烷酸异丙酯的添加导致显著改善的结果。优选地,所述药物组合物包含0.05到5.0%(w/w),更优选0.1到4.0%(w/w),更优选0.15到3.0%(w/w),更优选0.25到2.5%(w/w),更优选0.25到2.0%(w/w),更优选0.25到1.5%(w/w),更优选0.25到1.0%(w/w),最优选0.5到0.75%(w/w)的十四烷酸异丙酯。
因此,在一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-0.5到5.0%(w/w)的睾丸激素,
-40.0到75.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到5.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.1到5.0%(w/w)的丙二醇,
-0.1到4.0%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-0.75到1.25%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到4.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.2到4.0%(w/w)的丙二醇,
-0.15到2.0%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-0.8到1.2%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到3.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.3到3.0%(w/w)的丙二醇,
-0.35到1.5%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-0.9到1.1%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到2.5%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.4到2.5%(w/w)的丙二醇,
-0.4到1.0%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-约1.0%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到2.5%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.4到2.5%(w/w)的丙二醇,
-约0.5%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-1.0到2.0%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到5.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.1到5.0%(w/w)的丙二醇,
-0.1到4.0%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-1.25到1.75%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到4.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.2到4.0%(w/w)的丙二醇,
-0.15到2.0%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-1.4到1.6%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到3.0%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.3到3.0%(w/w)的丙二醇,
-0.35到1.5%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
在另一个实施方式中,本发明提供一种药物组合物,含有:
-约1.5%(w/w)的睾丸激素,
-50.0到70.0%(w/w)的至少一种C2-C6醇,
-0.1到2.5%(w/w)的至少一种胶凝剂,
-0.4到2.5%(w/w)的丙二醇,
-0.4到1.0%(w/w)的十四烷酸异丙酯,
-任选地,水。
另外,所述药物组合物可以包含常用的药物添加剂,包括盐、软化剂、稳定剂、抗菌剂、香精、和/或推进剂。所述药物组合物还可以包括至少一种其他活性成分,例如另一种激素。
本发明还提供可用于经皮或透皮释放的凝胶,该凝胶包含根据本发明的所述药物组合物。因此,本发明还涉及一种含睾丸激素的水-醇凝胶。
根据另一个实施方式,本发明提供一种剂量包装、单剂量包装或多剂量包装,该剂量包装包含所述药物组合物或所述水醇凝胶。有利地,所述药物组合物的这种状态使得患者更易于应用。因此,这些包装形式可以反映应用的时间表,例如每日或每周给药。
根据另一个实施方式,本发明提供一种分配器,例如带手泵或阀门,该分配器包含所述的药物组合物或所述的水醇凝胶。这种分配器允许给药剂量的灵活性,剂量作为需要应用的组合物量的函数。
根据一种实施方式,所述包装或分配器可以附有药物使用方法的说明书。
本发明的药物组合物、凝胶、包装和容器用于治疗睾丸激素不足,和治疗和/或预防睾丸激素不足相关病症和/或紊乱。
本发明所使用的术语“治疗”或“治疗”指任何哺乳动物的病症、紊乱、或与抑郁症有关的疾病的治疗,并包括但不限于,预防该病症、紊乱、或一患者出现的疾病,该患者可能易于患该病症、紊乱、或疾病,但是还没有诊断为患有该病症、紊乱或疾病;抑制该病症、紊乱、或疾病,例如,阻止该病症、紊乱、或疾病的发展;减轻该病症、紊乱、或疾病,例如,促使该病症、紊乱、或疾病的衰退;或减轻由疾病或紊乱所引起的症状,例如,停止该疾病或紊乱的症状。
与病症、紊乱、或疾病有关的术语“预防”或“预防”是指,如果没有人出现,就不存在病症、紊乱、或疾病发展,或者,如果已经有该病症、紊乱、或疾病的存在,则没有进一步的病症、紊乱、或疾病发展。
本发明所使用的“睾丸激素不足”是指与同岁的健康的患者的中值血清水平相比,患者体内游离睾丸激素的较低的血清水平。例如,正常循环女性每天产生约300μg睾丸激素。它们的总血清睾丸激素水平通常的范围为约20ng/dL到约80ng/dL,平均值为约40ng/dL。在健康年轻女性体内,例如,平均游离睾丸激素水平通常是约3.6pg/mL。然而,几个因素可以影响总睾丸激素血清水平和游离睾丸激素血清水平两者。例如,在正常的排卵女性体内,在月经周期的中间的三分之一时期内,血浆睾丸激素水平存在一小的但是明显的增加。然而,在黄体期和卵泡期,平均睾丸激素水平(1.2nmol/L或33ng/dL)和平均游离的睾丸激素水平(12.8pmo/L或3.6pg/mL)没有显著的不同。另外,在30岁之后,睾丸激素的产生量连续下降,因此在一位60岁女性体内,血清睾丸激素水平仅有年轻的30岁女性的50%水平。尽管游离睾丸激素的百分比通常不随年龄而变化,已经观察到游离睾丸激素的绝对下降。这种下降不是在绝经期骤然发生,相反,它作为与年龄相关的肾上腺和卵巢雄激素产生的减少的结果,是逐渐和连续地发生的。因此,在接近绝经前的数年内,女性开始遭遇与绝经有关的症状。继绝经之后,睾丸激素的下降由卵巢衰竭、肾分泌减少和外部转化的组合而产生。而且,例如,在卵巢切除之后,睾丸激素浓度减少约50%。睾丸激素不足的诊断为医学相关领域开业的一般水平的医生所知。
本发明的药物组合物和凝胶还用于治疗许多男性或女性的与睾丸激素不足有关的生理性和心理上的参数和/或病症。例如,本发明的药物组合物和凝胶用于:
-提高性欲和改善性功能和/或治疗性功能障碍;校正性腺机能减退;
-增加骨矿物密度和相关标识物,增加瘦人的体重和减少胖人的体重,改善肌块和性能;
-校正葡萄糖水平;改善糖尿病性视网膜病以及降低糖尿病患者的胰岛素需求;治疗、预防或减少白内障发病;
-治疗、预防或减少心血管疾病的发病,包括校正高血压,和治疗肥胖病;校正胆固醇含量;校正患者的异常心电图和治疗、预防或减少血管扩张症状;
-预防人类免疫缺陷性病毒消耗综合征;
-预防骨质疏松症、骨质减少、阴道干涩,和使阴道壁变薄;减轻绝经期症状和潮热;治疗经前期综合征;
-治疗、预防或减少阿尔茨海默病、痴呆病的发病;
-改善认知,改善情绪和自尊,治疗和/或预防抑郁症;治疗、预防或减少认知功能紊乱;
-治疗自身免疫性疾病。
本发明的药物组合物和凝胶还可以用于“联合疗法”,与另一种激素或类固醇,或能增加患者的睾丸激素水平的药剂,或一种雌激素,或另一种药剂例如一种抗抑郁药合用。
根据本发明,本发明还涉及制备药物组合物的方法,该药物组合物例如凝胶或溶液形式。
一方面,所述方法包含:搅拌下,在至少一种C2-C6醇和至少一种渗透促进剂(例如丙二醇,和/或十四烷酸异丙酯)的溶剂中溶解睾丸激素的步骤。
另一方面,所述方法包含搅拌下往所得混合物中加水的步骤。
当需要凝胶剂时,则将至少一种胶凝剂,例如Carbopol
在搅拌下加入混合物中。
任选地,将一种碱/中和剂例如三乙醇胺在搅拌下加入混合物中。
另一方面,本发明涉及制备根据本发明的药物组合物或凝胶的方法,该方法包括下列步骤:
-制备一种混合物,该混合物包含至少一种C2-C6醇,至少一种渗透促进剂(例如丙二醇,和/或十四烷酸异丙酯)和睾丸激素;
-任选添加水,并搅拌,
-任选往该混合物中添加胶凝剂,并搅拌;
-任选添加碱,并再次搅拌。
一方面,本发明还涉及根据本发明的凝胶或溶液在制备治疗与雄激素/睾丸激素不足有关的生理病症的用于透皮应用的药物产品中的应用。
另一方面,本发明涉及一种治疗方法。
在一个实施方式中,所述方法包含将睾丸激素给药予需要它的患者的步骤。
根据一个方面,本发明的药物组合物或凝胶涂敷在健康皮肤上,例如涂敷在肩部,或涂敷在手臂、股或腿的外部。
为测量和确定要递送给需要它的患者的睾丸激素的量,使用标准试验技术测定血清睾丸激素浓度。
由此,本领域的技术人员将知道如何根据所述药物组合物的准确的睾丸激素剂量,来确定需要给药的组合物的量。
一般而言,根据本发明的凝胶或溶液形式的药物组合物的常用的日剂量为每天使用制剂的2.5g到5g。
本发明的优点将从以下实施例中显现,所述如下实施例仅是举例说明而非限制性的。本领域的技术人员将理解,本发明可以结合任何数量的上述优选特征。
所有这里提及的文献全部在此引入作为参考。这里不再介绍本发明的其他实施方式,这些实施方式对本领域的技术人员来说是显而易见的,因此也落在本发明的范围和精神之内。除非另有说明,本发明的实施将使用药学和药剂学的常规方法,其属于现有技术。
具体实施方式
实施例1
使用放射性标记(14C)睾丸激素和液体闪烁滴定,在动物和人类皮肤上进行睾丸激素凝胶剂的透皮释放研究。这些研究给出动力学参数(在24小时之后的释放量和流量)。研究了如下两个方面:
-物理-化学研究(睾丸激素溶解度和凝胶粘度)
-透皮释放(睾丸激素浓度、胶凝剂性质、渗透促进剂的存在的影响)
原料和方法
1.原料
化学制品
睾丸激素(Fluka)
14C睾丸激素(Amersham)
胶凝剂
Carbopol
934P(Carb.934P)(Polyplastic)
Carbopol
980(Carb.980)(Lot4419,Laboratoires Besins Iscovesco)
中和剂
三乙醇胺(lot4343,Laboratoires Besins Iscovesco)
渗透促进剂
Transcutanol(Gattefosse)
油酸(OA)(Prolabo)
丙二醇(PG)(Gattefosse)
双壬酸丙二醇酯(PGDP)(Gattefosse)
动物皮肤模型
雄性裸鼠,5周
人类皮肤模型
腹部活组织,白种女性,35岁
2.放射性标记的睾丸激素凝胶的制备
在需要的水量中,使胶凝剂(聚合物)溶胀过夜。将标记和非-标记的睾丸激素(可与渗透促进剂一起)溶解在乙醇里,混合水相和醇相,然后与三乙醇胺中和。用刮刀进行混合,直至达到完美的均匀。评估十七个制剂的透皮释放。下表给出了其组分(以基于制剂总重量的%重量)。制剂13和14相当于非凝胶溶液。
表1
Nr |
睾丸激素 |
胶凝剂 |
95%乙醇 |
三乙醇胺 |
PG |
OA |
十四烷酸异丙酯 |
11 |
1 |
1%Carb.934P |
58 |
1.35 |
0 |
0 |
0 |
12 |
0.5 |
1%Carb.934P |
58 |
1.35 |
0 |
0 |
0 |
13 |
0.5 |
0 |
58 |
0 |
0 |
0 |
0 |
14 |
0.75 |
0 |
58 |
0 |
0 |
0 |
0 |
15 |
2.5 |
1%Carb.934P |
58 |
1.35 |
0 |
0 |
0 |
16 |
2.5 |
1%Carb.934P |
58 |
1.35 |
5 |
0 |
0 |
17 |
2.5 |
2%Klucel |
58 |
1.35 |
0 |
0 |
0 |
18 |
2.5 |
2%Klucel |
58 |
1.35 |
5 |
0 |
0 |
19 |
2.5 |
1%Carb.934P |
58 |
1.35 |
0 |
0 |
5 |
20 |
2.5 |
0.5%Carb.980 |
58 |
1.35 |
0 |
0 |
0 |
21 |
1 |
0.5%Carb.980 |
58 |
0.6 |
0 |
0 |
0 |
22 |
1 |
0.5%Carb.980 |
58 |
0.6 |
2 |
0 |
0 |
23 |
1 |
1%Carb.980 |
58 |
1.35 |
2 |
0 |
0 |
24 |
1 |
1%Carb.934P |
58 |
1.35 |
2 |
0 |
0 |
25 |
1 |
1%Carb.934P |
58 |
1.35 |
2 |
2 |
0 |
26 |
1 |
0.5%Carb.980 |
58 |
0.5 |
1 |
0 |
0 |
27 |
1 |
0.5%Carb.980 |
58 |
0.5 |
1 |
0 |
0.5 |
3.透皮动力学方案
3.1透皮试样盒
使用含有两个不相等的隔室的静态流动试样盒(图1)
上部的圆柱状(截面:2.54cm2)供体隔室1允许制剂(溶液或局部形式)涂敷到皮肤2上。该上部的隔室1用金属环安装到下隔室4上。
下部受体隔室4(平均体积10mL)也具有一上部的2.54cm2的开口。一配备有针和导管系统的侧向刷辫5可以取样。用一磁性搅拌器3实现该下隔室中介质的均化。(参见图1)
3.2生物膜
动物皮肤
在腹部水平取样雄性裸鼠皮肤(IOPS老鼠,5周)的皮肤活体组织。去除位于内表面的脂肪组织,将皮肤切成面积大于2.54cm2的样本。每个样本粘到下隔室上,皮肤外表面朝上。
人类皮肤
在从一个35岁的白种女性腹部水平取样的外科塑料上进行实验。取样之后立即使用样本并切成约250μm的厚度。
3.3研究方案
透皮试样盒的两个隔室1、4与皮肤片段2安装在一起。接受隔室4充满着精确测定体积的0.5%的白蛋白溶液。然后将试样盒置于搅拌平台上的37℃的恒温槽内15小时,以达到皮肤和接受介质之间的平衡。
将制剂涂敷到皮肤2上后开始动力学。涂敷约20mg到2.54cm2的皮肤上。在24小时内,在平均间隔的时点,将2mL样本从接受隔室4中取出,并将2mL新鲜的白蛋白溶液立即加到隔室中,以使其体积保持恒定。每一制剂使用5个透皮试验池。低温储藏之后,通过液体闪烁滴定样本。
4.14C睾丸激素的滴定
将样本分成两份1mL,每份加入4mL闪烁液(Pico Fluor
),测量时间是5分钟。
然后,使用β分光光度仪,通过液体闪烁滴定样本。对于闪烁,猝灭导致降低的检测效率,这是精确评估建立的校准曲线,称为猝灭曲线。对于每个样本,使用外标准源计算取决于猝灭的测定收率,并测定实际放射性。
结果
1.睾丸激素溶解度
37℃下,在密闭的Erlenmeyer中搅拌已知量的溶剂(2mL)。从已知量的睾丸激素开始,分批逐渐加入。称重睾丸激素的余量,以确定Erlenmeyer中的量(通过差值)。
通过增量法测定睾丸激素在37℃的水/乙醇混合物和各种渗透促进剂中的溶解度,渗透促进剂例如丙二醇(PG)、油酸(OA)、双壬酸酯丙二醇(PGDP)、乙二醇单乙基醚(transcutol)。
表2
睾丸激素在各种溶媒中的溶解度
溶剂 |
PG(100%) |
PG/OA(50/50) |
OA(100%) |
PGDP(100%) |
乙二醇单乙基醚(100%) |
溶解度(mg/mL) |
86 |
79 |
66 |
18 |
140 |
还评估了睾丸激素作为醇含量的函数的溶解度。
表3
睾丸激素在水/乙醇混合物中的溶解度
参见图2中的图表
2.凝胶粘度
用Carri-Med控制压力流变仪表现凝胶流变学的特征,测量几何结构:平面/平面,直径2cm,间隙1mm,温度20℃。
按照以下确定的剪应周期绘制流变图:
-上相:剪应力在2分钟里从0增加到300N/m2;
-平台期:恒应力300N/m2,保持1分钟;
-下相:剪应力在2分钟里从300N/m2减小到0。
所有凝胶具有剪切软化(假塑料)性能,没有任何滞后周期。
进行两种流变学研究:
-乙醇含量对Carbopol
934凝胶粘度的影响,
-聚合物含量对Carbopol
980凝胶粘度的影响。
通过将95%乙醇的含量从50%变化到70%,来研究乙醇含量对Carbopol
水醇凝胶的影响。
表4
乙醇(%wt) |
粘度(Pa.s) |
最大流速梯度(s<sup>-1</sup>) |
50 |
15.00 |
22.5 |
55 |
6.500 |
50 |
60 |
2.375 |
140 |
65 |
0.800 |
400 |
55%以上的乙醇,粘度较小,且有着与乙醇含量相关的强烈变化。对于50%乙醇,粘度增大。
通过将Carbopol
980的含量从0.3%变化到0.70%,来研究聚合物含量对含40%乙醇的水醇凝胶的影响。
在300N/m2应力的平台期下1分钟,测量粘度。
表5
3.睾丸激素制剂在大鼠皮肤上的透皮性
在大鼠皮肤上体外评估表1中制剂的透皮性。由于异质性(相分离),不能评估制剂25。下表给出了在24h时的释放量和释放速率的结果。
表6
制剂号 |
睾丸激素(%) |
释放量(24h)(μg/cm<sup>2</sup> ) |
释放速率(24h)(%) |
11 |
1 |
28.1 |
35 |
12 |
0.5 |
11.6 |
29 |
13 |
0.5 |
24.4 |
61 |
14 |
0.75 |
36.7 |
61 |
15 |
2.5 |
16.2 |
8 |
16 |
2.5 |
30.9 |
15 |
17 |
2.5 |
10.5 |
5 |
18 |
2.5 |
36.9 |
18 |
19 |
2.5 |
44.5 |
22 |
20 |
2.5 |
18.5 |
9 |
21 |
1 |
21.6 |
27 |
22 |
1 |
33.5 |
42 |
23 |
1 |
34.4 |
43 |
24 |
1 |
36.9 |
46 |
25 |
1 |
- |
- |
26 |
1 |
30.0 |
37.5 |
27 |
1 |
62.0 |
77 |
制剂11-27:涂敷8mg/cm2
4.睾丸激素在人类皮肤上的透皮性
制剂26和27在人类皮肤上进行评估,同时制剂15作为参考。祥细结果如下:
制剂26:
5个试验池的透皮参数平均值:
时间(h) |
量Q(μg) |
量/面积Q/S(μg/cm<sup>2</sup>) |
Q/S标准差(n=5) |
2 |
0 |
0 |
0 |
4 |
1.9 |
0.75 |
0.4 |
6 |
3.5 |
1.4 |
0.6 |
9 |
5.6 |
2.2 |
0.6 |
12 |
7.4 |
2.9 |
0.8 |
24 |
15.3 |
6.01 |
1.4 |
图3给出了平均动力学曲线
平均流量:0.26μg/cm2.h
制剂27:
5个试验池的透皮参数平均值:
时间(h) |
量Q(μg) |
量/面积Q/S(μg/cm<sup>2</sup>) |
Q/S标准差(n=5) |
2 |
0 |
0 |
0 |
4 |
3 |
1.2 |
0.9 |
6 |
5.6 |
22.2 |
1.1 |
9 |
8.6 |
3.4 |
1.2 |
12 |
11.7 |
4.6 |
1.4 |
图4给出了平均动力学曲线
平均流量:0.39μg/cm2.h
制剂15(参考):
5个试验池的透皮参数平均值:
时间(h) |
量Q(μg) |
量/面积Q/S(μg/cm<sup>2</sup>) |
Q/S标准差(n=5) |
2 |
0 |
0 |
0 |
4 |
1.1 |
0.45 |
0.3 |
6 |
2.2 |
0.84 |
0.5 |
9 |
6.6 |
1.3 |
0.6 |
12 |
4.3 |
1.7 |
0.7 |
24 |
9.1 |
3.6 |
1.2 |
图5给出了平均动力学曲线
平均流量:0.15μg/cm2.h
实施例2
原料和方法
1.原料
[1,2,6,7-3H]睾丸激素(Amersham实验室):MW295,1mCi/mL(37MBq/mL)的乙醇溶液;比活性99Ci/mmol(3.66TBq/mmol),即336mCi/mg(批号t18)。
无水乙醇 Carlo Erba 批号V4N051154N
由Besins实验室控制的原料
睾丸激素 批号92039/4461
十四烷酸异丙酯 批号91169/5781
三乙醇胺 批号9304020/5721
丙二醇(PG)
涂敷到皮肤上的制剂:(100g最后制剂重)
制剂号 |
睾丸激素 |
胶凝剂 |
无水乙醇 |
中和剂 |
丙二醇 |
十四烷酸异丙酯 |
1(参考) |
2.5 |
Carb.934:1.0 |
57 |
TEA:1.35 |
- |
- |
2 |
1 |
Carb.980:0.6 |
58 |
TEA:0.60 |
0.5 |
- |
3 |
1 |
Carb.980:0.8 |
58 |
TEA:0.80 |
0.5 |
- |
4 |
1 |
Carb.980:0.9 |
67 |
NaOH(0.1M):4.725 |
- |
0.5 |
5 |
1 |
Carb.980:0.5 |
67 |
TEA:0.50 |
- |
0.5 |
制剂如下制备:
制剂1:
如下制备1g放射性标记的凝胶。
-将100μL(100μCi)放射性注记的睾丸激素溶液(3H)干燥,并与下列物质再悬浮:
-595mg溶液,该溶液包含57g无水乙醇中的2.5g睾丸激素,
-391.5mg基质凝胶,由1gCarbopol
934在38.15g水中溶胀所得;在完全溶胀后且在使用前,该粘液用超-turax均质化几秒钟。
-13.5mgTEA。
制剂的放射性浓度:100μCi/g凝胶
即1.77cm2、8mg(约10μL)的每个试验池装入0.8μCi和200μg睾丸激素
制剂2:
根据如下方案制备1g放射性标记的凝胶。
-将100μL(100μCi)放射性注记的睾丸激素溶液(3H)干燥,并与下列物质再悬浮:
-595mg溶液,该溶液包含58g无水乙醇中的1g睾丸激素和0.5gPG,
-393mg基质凝胶,由0.6gCarbopol
980在38.7g水中溶胀所得;在完全溶胀后且在使用前,该粘液用超-turax均质化几秒钟。
-半稀释于水中的12mgTEA。
制剂的放射性浓度:100μCi/g凝胶
即8mg(约10μL)的每个试验池中装入0.8μCi和80μg睾丸激素
制剂3:
根据如下方案制备1g放射性标记的凝胶。
-将100μL(100μCi)放射性注记的睾丸激素溶液(3H)干燥,并与下列物质再悬浮:
-595mg溶液,该溶液包含58g无水乙醇中的1g睾丸激素和0.5gPG,
-389mg基质凝胶,由0.8gCarbopol
980在38.1g水中溶胀所得;在完全溶胀后且在使用前,该粘液用超-turax均质化几秒钟。
-半稀释于水中的16mgTEA。
制剂的放射性浓度:100μCi/g凝胶
即8mg(约10μL)的每个试验池中装入0.8μCi和80μg睾丸激素
制剂4:
根据如下方案制备1g放射性标记的凝胶。
-将100μL(100μCi)放射性注记的睾丸激素溶液(3H)干燥,并与下列物质再悬浮:
-685mg溶液,该溶液包含67g无水乙醇中的1g睾丸激素和0.5g十四烷酸异丙酯,
-267.75mg基质凝胶,由0.9gCarbopol
980在25.875g水中溶胀所得;在完全溶胀后且在使用前,该粘液用超-turax均质化几秒钟。
-47.25mgNaOH(0.1M)。
制剂的放射性浓度:100μCi/g凝胶
即8mg(约10μL)的每个试验池中装入0.8μCi和80μg睾丸激素
制剂5:
根据如下方案制备1g放射性标记的凝胶。
-将100μL(100μCi)放射性注记的睾丸激素溶液(3H)干燥,并与下列物质再悬浮:
-685mg溶液,该溶液包含67g无水乙醇中的1g睾丸激素和0.5g十四烷酸异丙酯,
-305mg基质凝胶,由0.5gCarbopol
980在30g水中溶胀所得;在完全溶胀后且在使用前,该粘液用超-turax均质化几秒钟。
-半稀释于水中的10mgTEA。
制剂的放射性浓度:100μCi/g凝胶
即8mg(约10μL)的每个试验池中装入0.8μCi和80μg睾丸激素
2.方法
体外皮肤吸收:
原理
在置于静态扩散池(Franz池)中的人类腹侧部皮区活组织切片上定量研究体外透皮吸收,其允许皮肤与存活液(受体液)接触,在存活液中发生透皮吸收。
将一块皮肤活组织切片水平保持在池的两部分之间,因此限定了两个隔室:
-一个表皮隔室由玻璃汽缸组成,其精确确定的面积为1.77cm2,置于皮肤的上侧;
-另一个隔室,应用于外皮下表面的皮肤,包含一个具有固定体积且带有一个侧向收集孔的储库。
这两个组件通过一个夹子组装。
下隔室(皮肤的)充满着存活液,存活液由9g/L的氯化钠溶液组成,并以15g/L的牛血清清蛋白补充。在每一时间点,存活液通过侧向收集孔全部取出,并用新鲜液体替代。
池的下部调节在恒温37℃。通过搅拌(磁性搅拌器)保持受体液中温度和含量的均质。
上部(表皮隔室)朝外打开,因此将皮肤表面暴露到实验室的空气中。
人类腹部皮肤活组织切片的制备
这些样本来自整形外科的白种供体者的人类腹部皮肤。使用前,将皮肤保持在-20℃。用解剖刀去除粘附着的皮下脂肪,并用皮刀将皮肤切成约0.5mm的厚度。对于每个试验,各种皮肤样本等同分布在所有批号之间。
一般方案
Franz池通常在装载要研究的制剂前一天安装。表皮隔室与实验室的空气接触,皮肤隔室调节到恒温37℃,且皮肤与变性的生理血清接触约17小时。在这些条件下,皮肤是高度水合的。
用微量吸液管将10μL溶液(约8μL,约8μCi)吸到由玻璃汽缸限定的表皮的整个表面上。在时间点2h、4h、6h、8h和24h,通过侧向收集孔进行包含于皮肤隔室中的液体的取样。在每个时间点,将存活液全部取出,用新鲜液体替换。在试验结束时,用200L的根据以下方案的各种溶剂洗涤经处理的皮肤表面:
-第1次洗涤:Cetavlon
水(1/9,v/v);
-第2次洗涤:水;
-第3次洗涤:Cetavlon
/水(1/9,v/v);
-第4次洗涤:水;
-第5次洗涤:水。
然后用Q-tip
擦拭应用区域。然后用解剖刀机械分离表皮和真皮,并分别溶解在1mL和3mLSoluene
(Packard)里。
放射性检测
使用微粒计数Packard-tricarb 4530通过液体闪烁进行检测。
放射性样品的制备
将从扩散池的下隔室中取样的存活液直接加入15mL的液体闪烁鸡尾酒(Picofluor 40R,Packard)中用于放射性检测。
将洗脱液和Q-tips
引入含有约30mL95°乙醇的小瓶中并精确称重。在4℃下培育过夜后,按照用于存活液的相同方法测定来自该稀释液的精确称重的试样量的放射性。
表皮和真皮首先必须溶解在有机强碱里。通过在37℃下与Soluene 350
Packard(每100mg组织1mL)接触24h,该Soluene350
Packard加入15mL液体闪烁鸡尾酒(HionicFluor 30
Packard),它们溶解然后计量。
放射性检测
就所涉及的猝灭而言,通过外校准法得到的计量速率是正确的,以得到说明每个样本的实际活性的每分钟衰变数(dpm)。扣除cpm中每个样本的基数。每一闪烁液确定了特定的猝灭曲线。
以相对于给药量的样品中发现的物质的重量或百分比表示结果,该结果由适当稀释校准的计量速度确定。
透皮吸收:
透皮吸收的强度通过计算装载量(Qi)作为时间函数的吸收百分比(%)来评估:
%=(Qt/Qi)×100
其中Qt是时间点t的吸收量。
还测定了每一时间间隔的平均流量和吸收量,分别以ng/cm2/h和ng表示。
平均结果相当于6-8次实验测定,并和标准偏差(Sd)相关。
通过方差分析进行平均结果的对比。
3.结果
以百分比表示的浓度为100g最后制剂的物质重量。
体外Franz池中睾丸激素透皮(累积值)
平均值+/-Sd作为时间的函数
@:不同于参照(方差分析,Fisher检验显著差异,p<5%)
*:不同于参照(变量分析;Fisher和Scheffe F检验,显著差异,p<5%)
回收量(累积值)
E:表皮,D:真皮,C:池,W:洗脱液,T:总数
@:不同于参照(方差分析,Fisher测试显著差异,p<5%)
°:不同于制剂2、3和4(变量分析;Fisher检验,p<5%)
*:不同于参照(变量分析;Fisher和Scheffe F检验,显著差异,p<5%)
体外Franz池中睾丸激素透皮(非累积值)
平均值+/-Sd作为时间的函数
@:不同于参照(方差分析,Fisher检验显著差异,p<5%)
*:不同于参照(变量分析;Fisher和Scheffe F检验,显著差异,p<5%)