CN101006097A

CN101006097A - Vla－4拮抗剂

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Publication number: CN101006097A
Application number: CNA2005800277189A
Authority: CN
Inventors: 陈为桥; A·D·莱布萨克; B·穆诺斯; S·文卡特拉曼; 王波维
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2004-08-16
Filing date: 2005-08-12
Publication date: 2007-07-25
Anticipated expiration: 2025-08-12
Also published as: IL181267A0; BRPI0514415A; CN101006097B; WO2006023396A3; US20070219252A1; AU2005277634B2; NO20071399L; KR20070044054A; CA2576647C; RU2007109601A; JP2008510005A; EP1781686A2; JP4649476B2; ATE430761T1; DE602005014364D1; WO2006023396A2; EP1781686B1; MX2007001876A; CA2576647A1; US7776891B2

Abstract

本发明提供了式(I)的化合物，其是VLA－4的拮抗剂并且因而可用于抑制或预防细胞粘着和细胞粘着诱导的病患。这些化合物可配制成药物组合物并可适于炎症性肠病(包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)、多发性硬化、哮喘和类风湿性关节炎的治疗。

Description

VLA-4拮抗剂

背景技术

VLA-4(″极迟抗原-4″；CD49d/CD29；或α₄β₁)是在除了血小板和成熟嗜中性粒细胞之外的所有细胞(包括树状细胞和巨噬细胞样细胞)上表达的整联蛋白并且是这些细胞类型的细胞-细胞相互作用和细胞-基质相互作用的关键介质。VLA-4的配体包括血管细胞粘着分子-1(VCAM-1)、纤连蛋白(FN)的CS-1结构域和基质蛋白、骨桥蛋白。抵消抗α4抗体或阻断那些抑制在VLA-4与其配体之间的互相作用的肽在包括以下的疾病的若干动物模型中已经证明具有预防有效性和治疗有效性：哮喘、多发性硬化、炎症性肠病和类风湿性关节炎。

对抗α4的人源化单克隆抗体，那他珠他单抗(natalizumab，Antegren^，Elan/Biogen)，已经在多发性硬化(D.H.Miller等人，NewEngland Journal of Medicine，348，15(2003))和克罗恩氏病(S.Ghosh等人，New England Journal of Medicine，348，23(2003))的治疗中显示出效力。还有几种VLA-4拮抗剂处在哮喘、关节炎、多发性硬化和克罗恩氏病的初期临床试验中。

在那他珠他单抗的初期临床试验中，观察到淋巴细胞增多(VLA-4功能阻断的带用标记)和＞80％的受体占据率。据报道，在皮下给药后的多发性硬化动物模型中，小分子VLA-4拮抗剂在大鼠实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)试验中表现出机能性活动(D.R.Leone等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003)。该化合物表现为诱导淋巴细胞增多，并且具有较慢的解离速率(下降速率(off-rate))，导致在带有VLA-4的细胞上的显著的和持续的受体占据率。在该文献所述的EAE模型中，在受体占据率、淋巴细胞增多和效力之间存在正相关。

在G.Doherty等人，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，13，1891(2003)中报道了一系列的异烟酰基-L-氨基苯丙氨酸衍生物表现为在Jurkat细胞上具有从VLA-4的较慢解离速率(下降速率)。然而，该化合物进一步的特征在于其具有极差的药代动力学性质，如低的口服生物利用度、中等到高度的血浆清除率和短的半衰期，使得其不适于口服给药。本发明的化合物是VLA-4的强力拮抗剂，能够实现和维持受体占据率持续足以用于口服给药的时间。

发明内容

本发明的取代的N-[N-苯磺酰基-脯氨酰基]-苯丙氨酸衍生物是VLA-4整联蛋白的拮抗剂，并且可用于治疗、预防和抑制由VLA-4-结合以及细胞粘着和活化介导的疾病。另外，本发明的化合物在口服给药后显示出显著的带有VLA-4的细胞的受体占据率并且适于每天一次、两次或三次口服给药。本发明还涉及含有所述化合物的组合物，和使用所述化合物的治疗方法。

发明详述

本发明提供了由式(I)表示的化合物：

或其可药用盐，其中：

A是N或N⁺-O^-；

X和Y独立地选自卤素、C_1-3烷基和C_1-3烷氧基；

R¹选自(1)氢、(2)C_1-10烷基、(3)-(C_1-10烷基)-芳基、(4)-(C_1-10烷基)-O-C_1-10烷基、(5)-(C_1-10烷基)-OC(O)-C_1-10烷基、(6)-(C_1-10烷基)-OC(O)-芳基、(7)-(C_1-10烷基)-OC(O)O-C_1-10烷基、和(8)-(C_1-10烷基)-N⁺(C_1-3烷基)₃；其中烷基任选被1-3个独立地选自R^a的取代基取代，并且芳基任选被1-3个独立地选自R^b的取代基取代；

R²是氢或甲基；

R³和R⁴之一是氢，且另一个为

k是0-4；

R⁵和R⁶独立地选自氢、氟、CF₃和CO₂R^f，条件是R⁵和R⁶不都是氢；

R⁷和R⁸独立地选自H、-SO₂-C_1-3烷基、CN、CF₃、OCF₃和卤素；

R^a选自(1)-OR^d、(2)-NR^dS(O)_mR^e、(3)-NO₂、(4)卤素、(5)-S(O)_mR^d、(6)-SR^d、(7)-S(O)₂OR^d、(8)-S(O)_mNR^dR^e、(9)-NR^dR^e、(10)-O(CR^fR^g)_nNR^dR^e、(11)-C(O)R^d、(12)-CO₂R^d、(13)-CO₂(CR^fR^g)_nCONR^dR^e、(14)-OC(O)R^d、(15)-CN、(16)-C(O)NR^dR^e、(17)-NR^dC(O)R^e、(18)-OC(O)NR^dR^e、(19)-NR^dC(O)OR^e、(20)-NR^dC(O)NR^dR^e、(21)-CR^d(N-OR^e)、(22)CF₃、(23)-OCF₃、(24)C_3-8环烷基和(25)杂环基；其中环烷基和杂环基任选被1-3个独立地选自R^c的取代基取代；

R^b选自(1)选自R^a的基团、(2)C_1-10烷基、(3)C_2-10烯基、(4)C_2-10炔基、(5)芳基、和(6)-(C_1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任选被1-3个选自独立选自R^c的基团取代；

R^c是(1)卤素、(2)氨基、(3)羧基、(4)C_1-4烷基、(5)C_1-4烷氧基、(6)芳基、(7)-(C_1-4烷基)-芳基、(8)羟基、(9)CF₃、(10)OC(O)C_1-4烷基、(11)OC(O)NR^fR^g、或(12)芳基氧基；

R^d和R^e独立地选自氢、C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、Cy和-(C_1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任选被1-4个独立选自R^c的取代基取代；或者

R^d和R^e与它们所连接的原子一起形成含有0-2个独立选自氧、硫和N-R^h的附加杂原子的4-7元杂环；

R^f和R^g独立地选自氢、C_1-10烷基、Cy和-(C_1-10烷基)-Cy；或者

R^f和R^g与它们所连接的碳原子一起形成含有0-2个独立选自氧、硫和氮的杂原子的5-7元环；

R^h选自R^f和-C(O)R^f；

Cy选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

m是1或2；且

n是2-5。

在式I的一个子集中是其中X和Y之一是卤素，并且另一个选自卤素、C_1-3烷基和C_1-3烷氧基的化合物。在它们的一个方案中，X和Y各自是卤素，优选各自为氯。

在式I的另一子集中是其中R¹是氢、C_1-4烷基、-(C_1-4烷基)OC_1-4烷基或-(C_1-4烷基)N⁺(C_1-3烷基)₃的化合物。在一个方案中，R¹选自氢、甲基、乙基、2-甲氧基乙基和2-(三甲基铵)乙基。

在式I的第三个子集中是其中R³和R⁴之一是氢并且另一个选自下式的化合物：

和

其中R⁵和R⁶之一是F并且另一个是H或F，k是0-4，且k′是0-2。在它们的一个方案中，非氢取代基选自3，3-二氟-1-氮杂环丁基、3，3-二氟-1-吡咯烷基、3，3-二氟-1-哌啶基、3-氟-1-氮杂环丁基、3-氟-1-吡咯烷基、3-氟-1-哌啶基、4，4-二氟-1-哌啶基、4-氟-1-哌啶基、2-三氟甲基-1-吡咯烷基、2-羧基-1-吡咯烷基和2-(叔丁氧羰基)-1-吡咯烷基。

在式I的第四个子集中是由下式Ia表示的化合物：

或其可药用盐，其中：

A是N或N⁺O^-；

R¹选自氢、C_1-10烷基、-(C_1-4烷基)-芳基、-(C_1-4烷基)-O-C_1-4烷基和-(C_1-4烷基)-N⁺(C_1-3烷基)₃；

R³和R⁴之一是氢并且另一个选自：

和

其中R⁵和R⁶之一是F并且另一个是H或F，k是0-4，且k′是0-2；R⁷和R⁸独立地选自H、SO₂-C_1-3烷基、CN、CF₃、OCF₃和卤素。优选k是0-2。

在式Ia的一个方案中，是其中R³是氢并且R⁴选自3，3-二氟-1-氮杂环丁基、3，3-二氟-1-吡咯烷基、3，3-二氟-1-哌啶基、3-氟-1-氮杂环丁基、3-氟-1-吡咯烷基、3-氟-1-哌啶基、4，4-二氟-1-哌啶基、4-氟-1-哌啶基、2-三氟甲基-1-吡咯烷基的化合物。在式Ia的第二个方案中，是其中R⁴是氢并且R³选自3，3-二氟-1-氮杂环丁基、3，3-二氟-1-吡咯烷基、3，3-二氟-1-哌啶基、3-氟-1-氮杂环丁基、3-氟-1-吡咯烷基、3-氟-1-哌啶基、4，4-二氟-1-哌啶基、4-氟-1-哌啶基、2-三氟甲基-1-吡咯烷基、2-羧基-1-吡咯烷基和2-(叔丁氧羰基)-1-吡咯烷基的化合物。

在本发明的另一方面，提供了预防或治疗哺乳动物的由细胞粘着介导的疾病、病症、状况或症状的方法，该方法包括对所述的哺乳动物给用有效量的式I的化合物或其可药用盐。这一方面包括式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗哺乳动物的由细胞粘着介导的疾病、病症、状况或症状的药物中的应用。在一个方案中，所述疾病或病症选自哮喘、变应性鼻炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、炎症性肠病、类风湿性关节炎、器官移植、急性白血病和镰状细胞性贫血。

在本发明的另一方面，提供了用于预防哺乳动物的VLA-4的作用的方法，该方法包括对所述哺乳动物给用治疗有效量的式I的化合物或其可药用盐。这一方面包括式I的化合物在制备用于预防哺乳动物的VLA-4的作用的药物中的应用。

本发明的另一方面提供了包括式I的化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。

“烷基”以及具有前缀“烷”的其它基团如烷氧基、烷酰基是指可为直链、支链或它们的组合的碳链。烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基等。

“烯基”是指含有至少一个碳碳双键并且可为直链、支链或它们的组合的碳链。烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、异丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等。

“炔基”是指含有至少一个碳碳三键并且可为直链、支链或它们的组合的碳链。炔基的例子包括乙炔基、炔丙基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基等。

“环烷基”是指单环或双环的饱和碳环，其各自具有3-10个碳原子。该术语还包括与芳基稠和的单环，其中的连接点在非芳香部分上。环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、四氢萘基、十氢萘基、2，3-二氢化茚基等。

“芳基”是指只含碳原子的单环或双环的芳香环。该术语还包括与单环环烷基或单环杂环基稠和的芳基，其中的连接点在芳香部分上。芳基的例子包括苯基、萘基、2，3-二氢化茚基、茚基、四氢萘基、2，3-二氢苯并呋喃基、二氢苯并吡喃基、1，4-苯并二烷基等。

“杂芳基”是指含有至少一个选自N、O和S的杂原子的单环或双环的芳香环，每个环含有5-6个原子。杂芳基的例子包括吡咯基、异唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、唑基、二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、苯并唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、呋喃并(2，3-b)吡啶基、喹啉基、吲哚基、异喹啉基等。

“杂环基”是指含有至少一个选自N、O和S的杂原子的单环或双环的饱和环，所述环各自含有3-10个原子，其中的连接点可为碳或氮。该术语还包括与芳基或杂芳基稠和的单环杂环，其中的连接点在非芳香部分上。“杂环基”的例子包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、2，3-二氢呋喃并(2，3-b)吡啶基、苯并嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、二氢吲哚基等。该术语还包括部分不饱和的非芳香性单环，如通过氮连接的2-或4-吡啶酮或N-取代的-(1H，3H)-嘧啶-2，4-二酮(N-取代的尿嘧啶)。

“卤素”包括氟、氯、溴和碘。

光学异构体-非对映体-几何异构体-互变异构体

式I的化合物可包含一个或多个不对称中心，因此可作为消旋物、外消旋混合物、单独的对映体、非对映体的混合物和单独的非对映体存在。本发明意在包括式I化合物的所有这些异构形式。

本文中所述的一些化合物包含烯属双键，除非另外说明，其意在包括E和Z型几何异构体。

本文中所述的一些化合物可以作为以不同的氢连接点存在的互变异构体形式存在。其例子是酮及其烯醇形式，称为酮-烯醇互变异构体。单独的互变异构体及其混合物都被包括在式I的化合物内。

式I的化合物可通过例如从适当的溶剂如甲醇或EtOAc或其混合物中分步结晶而分离为对映体的非对映异构体对。如此获得的对映体对可通过常规方法，例如通过使用光学活性胺作为拆分试剂或在手性HPLC柱上分离为单独的立体异构体。

或者，通式I或Ia的化合物的任何对映体可通过立体选择性合成使用具有已知构型的光学纯起始原料或试剂获得。

盐

术语“可药用盐”是指从无毒的可药用碱或酸制备的盐，包括从无机碱或有机碱和无机酸或有机酸制备的盐。得自无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜、铁(III)、铁(II)、锂、镁、锰(III)、锰(II)、钾、钠、锌的盐等。特别优选铵、钙、镁、钾和钠的盐。得自无毒的可药用有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺和碱离子交换树脂，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺和氨基丁三醇的盐等。

当本发明的化合物为碱性时，其相应的盐可从无毒的可药用酸(包括无机酸和有机酸)制备。这些酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。

应该理解，如本文中使用的，对式I的化合物所提及的还意在包括可药用盐。

实用性

式I化合物能够拮抗VLA-4整联蛋白的作用的能力使得它们可用于预防或反转由VLA-4与其各种配体结合诱导的症状、病症或疾病。因此，这些拮抗剂将抑制细胞粘着过程，包括细胞活化、移动、增殖和分化。因此，本发明的另一方面提供了用于治疗(包括预防、缓解、改善或抑制)由VLA-4结合以及细胞粘着和活化介导的疾病或病症或症状的方法，该方法包括对哺乳动物给用有效量的式I的化合物。所述的疾病、病症、状况或症状例如为：(1)多发性硬化；(2)哮喘；(3)变应性鼻炎；(4)变应性结膜炎；(5)炎症性肺病；(6)类风湿性关节炎；(7)脓毒性关节炎；(8)I型糖尿病；(9)器官移植排斥；(10)再狭窄；(11)自体骨髓移植；(12)病毒感染的炎症性后遗症；(13)心肌炎；(14)炎症性肠病(包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)；(15)某些类型的毒性和免疫性肾炎；(16)接触性皮肤超敏反应；(17)银屑病；(18)肿瘤转移；(19)动脉粥样硬化；(20)镰状细胞性贫血；(21)某些急性白血病；(22)各种黑素瘤、癌和肉瘤(包括多发性骨髓瘤)；(23)急性呼吸窘迫综合征；(24)葡萄膜炎；(25)循环性休克；和(26)肝炎。

本发明化合物在这些疾病或病症中的实用性可以在文献已报道的动物疾病模型中得以证明。以下是这些动物疾病模型的例子：i)实验性变应性脑脊髓炎，类似多发性硬化的神经元脱髓鞘模型(例如参见T.Yednock等人，Nature.356，63(1993)和E.Keszthelyi等人，Neurology.47，1053(1996))；ii)在作为用于哮喘各阶段的模型的羊和豚鼠中的支气管超应答性(例如参见W.M.Abraham等人，J.Clin.Invest.93，776(1993)和A.A.Y.Milne和P.P.Piper，Eur.J.Pharmacol..282.243(1995))；iii)在作为炎性关节炎模型的大鼠中的辅助剂诱导的关节炎(参见C.Barbadillo等人，Arthr.Rheuma.(SuppL)，36 95(1993)和D.Seiffge，J.Rheumatol..23，12(1996))；iv)在NOD小鼠中的继承性自身免疫糖尿病(参见J.L.Baron等人，J.Clin.Invest.93，1700(1994)，A.Jakubowski等人，J.Immunol..155.938(1995)，和X.D.Yang等人，Diabetes.46，1542(1997))；v)在作为器官移植模型的小鼠中的心脏异源移植幸存者(参见M.Isobe等人，Tranplant.Proc.26，867(1994)和S.Molossi等人，J.Clin Invest..95，2601(1995))；vi)在类似人溃疡性结肠炎(其是炎症性肠病的一种形式)的棉顶(cotton-top tamarin)中的自发性慢性结肠炎(参见D.K.Podolsky等人，J.Clin.Invest.，92，372(1993))；vii)作为皮肤过敏性反应模型的接触性超敏反应模型(参见T.A.Ferguson和T.S.Kupper，J.Immunol..150，1172(1993)和P.L.Chisholm等人，Eur.J.Immunol.，23，682(1993))；viii)急性肾毒性肾炎(参见M.S.Mulligan等人，J.Clin.Invest.，91.577(1993))；ix)肿瘤转移(例如参见M.Edward，Curr.Opin.Oncol.7，185(1995))；x)实验性自身免疫甲状腺炎(参见R.W.McMurray等人，Autoimmunity，23，9(1996)；xi)在大鼠中在动脉阻塞后的缺血性组织损伤(参见F.Squadrito等人，Eur.J.Pharmacol.，318，153(1996))；xii)通过使变应性应答减弱的VLA-4抗体抑制TH2 T细胞细胞因子产生，包括DL-4和IL-5(J.Clinical Investigation 100，3083(1997)；xiii)在灵长类和小鼠中，VLA-4整联蛋白的抗体移动长期恢复细胞并增加细胞因子诱导的移动(Blood.90 4779-4788(1997)；xiv)附着于VCAM-1的镰刀网织红细胞(Blood 85 268-274(1995)和Blood 88 4348-4358(1996)；xv)因子1由来的趋化因子基质细胞调节VLA-4整联蛋白介导的多发性骨髓瘤细胞对CS-1/纤连蛋白和VCAM-1的粘着(Blood.97.346-351 2001)。

剂量范围

式I化合物的预防性剂量或治疗性剂量当然随着治疗的状况的性质或严格性、使用的具体的式I化合物及其给药途径的不同而改变。所述剂量还根据个体患者的年龄、体重和应答的不同而改变。通常，日剂量范围在每千克哺乳动物体重约0.001毫克到约100毫克的范围内，优选每千克体重约0.01毫克到约50毫克，最优选为每千克体重0.1到10毫克，为单一剂量或分开剂量形式。另一方面，有时候根据需要可使用超过这些范围的剂量。

对于使用组合物用于静脉内给药的应用，适当的剂量范围为每天每千克体重约0.01毫克到约25毫克(优选0.1毫克到约10毫克)的式I化合物。

在使用口服组合物的情况下，适当的剂量范围是例如每天每千克体重约0.01毫克到约100毫克的式I化合物，优选每千克0.1毫克到约10毫克的式I化合物。

对于组合物用于舌下给药的应用，适当的剂量范围为每天每千克体重约0.01毫克到约25毫克(优选0.1毫克到约5毫克)的式I化合物。

对于哮喘的治疗，式I化合物的可用剂量范围为约0.1毫克/千克到约100毫克/千克，优选约1毫克/千克到10毫克/千克，通过每天一次、两次、三次等，经口/吸入/舌下/等途径给用。剂量可以作为单一日剂量或每天分为两次或三次进行给药。

对于多发性硬化的治疗，式I化合物的可用剂量范围为约0.1毫克/千克到约100毫克/千克，优选约1毫克/千克到10毫克/千克，通过每天一次、两次、三次等，经口/吸入/舌下/等途径给用。剂量可以作为单一日剂量或每天分为两次或三次进行给药。

对于炎症性肠病的治疗，式I化合物的可用剂量范围为约0.1毫克/千克到约100毫克/千克，优选约1毫克/千克到10毫克/千克，通过每天一次、两次、三次等，经口/吸入/等途径给用。剂量可以作为单一日剂量或每天分为两次或三次进行给药。

对于类风湿性关节炎的治疗，式I化合物的可用剂量范围为约0.1毫克/千克到约100毫克/千克，优选约1毫克/千克到10毫克/千克，通过每天一次、两次、三次等，经口/吸入/舌下/等途径给用。剂量可以作为单一日剂量或每天分为两次或三次进行给药。

药物组合物

本发明的另一方面提供包括式I的化合物以及可药用载体的药物组合物。药物组合物中的术语“组合物”意在包括含有活性成分、构成载体的惰性成分(可药用赋形剂)的产品，以及任何直接地或间接地得自任何两种或更多种成分的组合、络合或集合，或得自一种或多种成分的解离，或得自一种或多种成分的其它类型的反应或互相作用的产品。因此，本发明的药物组合物包括通过将式I化合物、附加活性成分和可药用赋形剂混合制备的任何组合物。

可使用任何适当的给药途径用于为哺乳动物特别是人提供有效剂量的本发明的化合物。例如，可使用经口、舌下、直肠、局部、非肠道、经眼、经肺、经鼻等途径。剂型包括片剂、锭剂、分散剂、混悬剂、溶液剂、胶囊、霜剂、膏剂、气雾剂等。

本发明的药物组合物包括作为活性成分的式I化合物或其可药用盐，还可包括可药用载体和任选的其它治疗成分。术语“可药用盐”是指从无毒的可药用碱或酸(包括无机碱或无机酸和有机碱或有机酸)制备的盐。

组合物包括适于经口、舌下、直肠、局部、非肠道(包括皮下、肌内和静脉内)、经眼(眼用的)、经肺(气雾剂吸入)或经鼻给药的组合物，但是在给定情况下的最适当的途径将根据治疗状况的性质和严重性以及活性成分的性质而定。它们可方便地存在于单位剂型中并通过制药领域公知的任何方法制备。

对于吸入给药，本发明的化合物方便地以从增压包装或喷雾器中提供气雾剂喷射的形式被递送。化合物还可作为经配制的粉末被递送，并且粉状组合物可在吹入粉末吸气器装置的帮助下被吸入。优选的吸入用递送系统是计量式剂量吸入(MDI)气雾剂(其可配制成式I化合物在适当的发射剂如碳氟化合物或烃中的混悬剂或溶液)，以及干粉吸入(DPI)气雾剂(其可配制为式I的化合物在有或无附加赋形剂条件下的干粉形式)。

式I化合物的适当的局部制剂包括透皮装置、气雾剂、霜剂、膏剂、洗液、粉剂等。

在实际使用中，式I的化合物可作为根据常规的药物配合技术与药物载体紧密混合的活性成分进行组合。载体可采取各种形式，根据给药所需的制剂形式如口服或非肠道(包括静脉内)而定。在制备口服剂型的组合物中，在口服液体制剂诸如例如混悬剂、酏剂和溶液剂的情况下，可使用任何常用的药物介质，诸如例如水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等；或者，在口服固体制剂诸如例如粉剂、胶囊和片剂的情况下，使用载体诸如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，固体口服制剂相对于液体制剂是优选的。由于片剂和胶囊的容易给药性，它们代表最有利的口服剂型单位形式，在口服剂型单位形式情况下，显然可使用固体药物载体。如果需要，可通过标准的水性或非水性技术对片剂包衣。

除了上述的常用剂型之外，式I化合物还可以诸如在美国专利3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；3,630,200和4,008,719中所述的控制释放装置和/或递送设备给药。

适于口服给药的本发明的药物组合物可以各自包含预定量的活性成分的离散单位如胶囊、锭剂或片剂形式存在，以粉末剂或粒剂或在水性液体、非水性液体中的溶液剂或混悬剂形式、水包油型乳剂或油包水型乳剂的形式存在。这些组合物可通过任何药学方法制备，但是所有方法都包括将活性成分与构成一种或多种必要成分的载体结合的步骤。通常，药物组合物可通过使活性成分均一地和密切地与液体载体或细粉形式的固体载体或者两者结合，然后如有必要使产品成形为所需形式而制备。例如，片剂可通过压缩或模制制备，任选与一种或多种辅助剂一起被制备。压缩片可通过在适当的机器中通过压缩任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合的自由流动形式如粉末或颗粒形式的活性成分而制备。模制片可通过在适当的机器中对用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物进行模制而制得。理想地，每片含有约1毫克到约500毫克活性成分，每个锭剂或胶囊含有约1毫克到约500毫克的活性成分。

以下是式I化合物的典型药物剂型的例子：

注射悬浮剂(IM)	mg/mL	片剂	mg/片	胶囊	mg/胶囊
注射悬浮剂(IM)	mg/mL	片剂	mg/片	胶囊	mg/胶囊	式I化合物甲基纤维素5.0吐温80苄醇苯扎氯铵注射用水到总体积1mL	100.59.01.0	式I化合物微晶纤维素聚维酮预胶化淀粉硬脂酸镁	2541514.043.52.5500	式I化合物乳糖粉末硬脂酸镁	25573.51.5600

气雾剂每罐

式I化合物 24mg

卵磷脂，NF浓缩液 1.2mg

三氯氟甲烷，NF 4.025g

二氯二氟甲烷，NF 12.15g

联合治疗

式I的化合物可用于与其他可用于治疗/预防/抑制或缓解式I化合物可用的疾病或状况的药物联合给用。这些其它药物可通过通常使用的途径或量给用，因此，与式I化合物同时或者顺序地给用。当式I的化合物与一种或多种其它药物同时给用时，可使用除了式I化合物之外还含有这些其他药物的药物组合物。因此，本发明的药物组合物包括那些除了式I化合物之外还包括一种或多种其他活性成分的组合物。可与式I化合物组合的其它活性成分(所述其它活性成分分开给用或在相同药物组合物中给用)的例子包括但不限于：(a)其它的诸如那些在US5,510,332、WO97/03094、WO97/02289、WO96/40781、WO96/22966、WO96/20216、WO96/01644、WO96/06108、WO95/15973和WO96/31206所述的VLA-4拮抗剂以及那他珠他单抗；(b)甾体如倍氯米松、甲泼尼龙、倍他米松、泼尼松、地塞米松和氢化可的松；(c)免疫抑制剂如环孢子菌素、他克莫司、雷帕霉素和其它FK-506型免疫抑制剂；(d)抗组胺剂(H1-组胺拮抗剂)如溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯马斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羟嗪、甲地嗪、异丙嗪、阿利马嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑啉、非尼拉敏、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、脱羧乙氧基氯雷他定等；(e)非甾体抗气喘药如β2-激动剂(特布他林、奥西那林、非诺特罗、新异丙肾上腺素、沙丁胺醇、比托特罗、沙美特罗和吡布特罗)、茶碱、色甘酸钠、阿托品、异丙托溴铵、白细胞三烯拮抗剂(扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106，203)、白细胞三烯生物合成抑制剂(齐留通、BAY-1005)；(f)非甾体抗炎剂(NSAID)如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普秦、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫洛芬)、醋酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齐多美辛和佐美酸)、芬那酸衍生物(氟芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、联苯羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康类(伊索昔康、吡罗昔康、舒多昔康和泰诺昔康)、水杨酸类(乙酰水杨酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮类(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羟布宗、保泰松)；(g)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂，如塞来昔布、罗非昔布和帕来昔布；(h)IV型磷酸二酯酶(PDE-IV)抑制剂；(i)趋化因子受体特别是CCR-1、CCR-2和CCR-3的拮抗剂；(j)降胆固醇药如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和其它他汀类)、多价螯合剂(考来烯胺和考来替泊)、烟酸、非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、安妥明、非诺贝特和苯扎贝特)、和普罗布考；(k)抗糖尿病药物，如胰岛素、磺酰脲类、双胍类(二甲双胍)、α-葡糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和格列酮类(曲格列酮、吡格列酮、恩格列酮、MCC-555、BRL49653等)；(l)干扰素β制剂(干扰素β-1a、干扰素β-1b)；(m)抗胆碱能药物如毒蕈碱拮抗剂(异丙托铵(ipratropium)和tiatropium)；(n)目前用于多发性硬化的治疗药，包括氢化泼尼松、glatiramer、脱氧腺苷、米托蒽醌、甲氨蝶呤、和环磷酰胺；(o)p38激酶抑制剂；(p)其它化合物，如5-氨基水杨酸及其前药，抗代谢物如硫唑嘌呤和6-巯基嘌呤，和细胞毒素性癌化疗剂。

式I化合物与第二活性成分的重量比可不同并根据各自成分的有效剂量而定。通常，可使用各自的有效剂量。因此，例如，当式I的化合物与NSAID组合时，式I的化合物与NSAID的重量比通常为约1000∶1到约1∶1000，优选约200∶1到约1∶200。式I的化合物与其它活性成分的组合也通常处在上述范围内，但是在所有情况下，应当使用各自活性成分的有效剂量。

在以下方案和实施例中可使用的缩写包括：4-DMAP：4-二甲基氨基吡啶；AcCN：乙腈；BOC：叔丁氧羰基；BOC-ON：2-(叔丁氧羰基亚胺基)-2-苯基乙腈；BOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-；盐水：饱和NaCl溶液；DIPEA：N，N-二异丙基乙胺；DMF：二甲基甲酰胺；DMSO：二甲基亚砜；Et：乙基；EtOAc：乙酸乙酯；EtOH：乙醇；g或gm：克；h或hr：小时；HATU：六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲；HBTU：六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲；HOAc：醋酸；HOAt：1-羟基-7-氮杂苯并三唑；HOBt：1-羟基苯并三唑；HPLC：高压液相色谱法；真空：旋转蒸发；Me：甲基；MeOH：甲醇；mg：毫克；MHz：兆赫；min：分钟；mL：毫升；mmol：毫摩尔；MS或ms：质谱；MsCl：甲磺酰氯；Ph：苯基；Ph3P：三苯基膦；PyBOP：六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基-；rt：室温；TEA：三乙胺；TFA：三氟乙酸；THF：四氢呋喃。

本发明的化合物可根据以下图解中所述的过程制备。在图解1中，取代的吡啶基-4-羧酸衍生物A用亚硫酰氯处理得到羧酰氯衍生物，其然后与4-氨基-(L)-苯丙氨酸衍生物反应，得到酰胺B。B中的N-BOC保护基用强酸(TFA或HCl)除去，得到游离胺C。

图解1

在图解2中，适当取代的(L)-脯氨酸酯 D(R′＝H)在碱(DIPEA或Na₂CO₃)的存在下用3-氰基-苯磺酰氯 L进行磺酰化，得到磺酰胺 E，如果其含有酯保护基，则用氢氧化物处理以得到游离酸。胺 C和酸 E一起在适当的偶联剂(如PyBOP、HBTU/HOAt，或E可首先转化成相应的酰基氯)的存在下反应得到酰胺 F。或者，脯氨酸酯 D(R′＝BOC)通过用碱如LiOH处理而水解得到相应的酸。然后该酸如上所述与 C偶联，在除去BOC基团后得到 M。然后在碱的存在下用L将胺 M磺酰化，得到 F。 F中的酯可用氢氧化物(如果R¹是正烷基或异烷基)或TFA或HCl(如果R¹是叔丁基)水解得到相应的酸。

图解2

生物学评价

式I的化合物是VLA-4的强力拮抗剂，在带有VLA-4的细胞上具有显著的和持续的受体占据率。实验化合物在Jurkat细胞上的VLA-4的解离速率可通过在G.Doherty等人，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，13，1891(2003)中的所述方法测定。在该试验中，本发明的化合物具有大于三小时的解离半衰期(t_1/2＞3小时)，显示它们是VLA-4的强结合抑制剂。

在大鼠和犬中口服剂量给药后的VLA-4的受体占据率可通过在D.R.Leone等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003)中的所述方法测定。本发明的化合物在口服剂量给药后具有持续的和显著的受体占据率(＞50％)。

本发明的化合物可通过在以下实施例中的详细过程制备。提供这些实施例只用于说明本发明，所述实施例不以任何方式限制本发明。

参考例1

4-((3′，5′-二氯异烟酰基)氨基)-(L)-苯丙氨酸乙酯盐酸盐

步骤A：在氮气下在0℃在5分钟内向500mL的绝对乙醇中添加亚硫酰氯(21mL，0.29mol)，透明溶液在0℃搅拌10分钟，然后在室温搅拌30分钟，一次性添加4-硝基-L-苯丙氨酸(50.2g，0.24mol)，混合物回流过夜。得到的混合物真空浓缩，得到4-硝基-L-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(60g)，为白色固体。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.21(d，2H)，7.54(d，2H)，4.39(dd，1H)，4.22(q，2H)，3.24-3.40(m，2H)，1.22(t，3H).

步骤B：在氮气下向步骤A的化合物(60g，0.22mol)在二氨甲烷(1.5L)中的悬浮液中添加TEA(31mL)，在室温搅拌10分钟后，添加二叔丁基二碳酸酯(di-t-butyl dicarbonate)(49g，0.22mol)和4-DMAP(0.1g)，反应混合物在室温搅拌过夜，用1N HCl(2×200mL)、H₂O(2×200mL)和盐水(1×250mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到N-BOC-4-硝基-L-苯丙氨酸乙酯(78g)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.14(d，2H)，7.28(d，2H)，4.30-4.65(m，1H)，4.15(q，2H)，3.00-3.30(m，2H)，1.35(s，9H)，1.20(t，3H).

步骤C：向步骤B的化合物(78.3g，0.22mol)在绝对乙醇(300mL)中的溶液中冲入氮气，添加10％的碳载钯(1.0g)，在40-50psi下氢化1小时后，反应混合物通过硅藻土过滤，将滤饼用EtOH然后用EtOAc洗涤。浓缩滤液，残余物通过硅胶上的闪柱色谱法纯化，用4∶1到1∶1的EtOAc/己烷洗脱，得到N-BOC-4-氨基-L-苯丙氨酸乙酯(60g)

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.90(d，2H)，6.63(d，2H)，4.20-4.50(m，1H)4.14(q，2H)，3.76-3.00(m，2H)，1.36(s，9H)，1.20(t，3H).

步骤D：向充有氮气的500mL圆底烧瓶中装入3，5-二氯异烟酸(46.5g，0.24mol)、CH₂Cl₂(150mL)、DMF(0.5mL)和亚硫酰氯(20mL，33.9g 0.28mol)，在淤浆回流5小时后，添加另外的亚硫酰氯(5mL，0.70mol)和CH₂Cl₂(100mL)，反应混合物回流另外的45分钟并浓缩，将残余物与甲苯进行共沸蒸馏，得到粗品酰基氯，该粗品酰基氯立刻使用。将粗品酰基氯溶于CH₂Cl₂(150mL)中，并在0℃在5分钟内添加到步骤C的化合物(60g，0.20mol)和4-甲基吗啉(44mL，0.40mol)在CH₂Cl₂(400mL)中，在0℃搅拌1小时后，反应用NaHCO₃稀水溶液淬灭。分离有机层，水层用CH₂Cl₂(500mL)提取。合并有机层，用无水MgSO₄干燥并真空浓缩，将残余物通过硅胶上的闪柱色谱法纯化，用4∶1到3∶2 EtOAc/己烷洗脱，得到N-BOC-4-((3′，5′-二氯-异烟酰基)氨基)-L-苯丙氨酸乙酯(95g)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.60(s，2H)，7.54(d，2H)，7.20(d，2H)，4.20-4.36(m，1H)，4.10(q，2H)，3.02-3.12(m，1H)，2.82-2.92(m，1H)，1.34/1.30(s，9H)，1.20(t，3H).

步骤E：在2小时内在室温下将步骤D的化合物(95g，0.197mol)在EtOAc(1.2L)中的溶液用氯化氢气流处理。得到的黄色悬浮液用己烷(250mL)稀释，冷却到0℃并过滤。滤饼用己烷洗涤并真空干燥，得到标题化合物，为黄色固体(80g)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，7.66(d，2H)，7.30(d，2H)4.28(dd，1H)，4.25(q，2H)，3.20(q，2H)，1.26(t，3H).

实施例1

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3′，5′-二氯-异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

步骤1：(2S，4S)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯

向顺式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯(10.0g，68.8mmol)、三乙胺(13.9g，138mmol)和CH₂Cl₂(200mL)的溶液中添加3-氰基苯-1-磺酰氯(13.9g，68.8mmol)。在1小时后，反应在饱和NaHCO₃水溶液(75mL)和CH₂Cl₂(100mL)之间分配。分离各层，水层用CH₂Cl₂(3×75mL)提取。合并的有机层经干燥(MgSO₄)、过滤和浓缩，残余物在硅胶上纯化(1∶99→30∶70的乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物，为无色结晶固体；

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.19-8.18(m，1H)，8.13-8.11(m，1H)，7.89-7.85(m，1H)，7.69-7.65(t，1H)，4.52-4.50(m，1H)，4.44-4.43(m，1H)，3.67(s，3H)，3.52(dd，1H)，3.47-3.41(m，1H)，3.1(d，1H)，2.33-2.27(m，1H)，2.20-2.17(m，1H)；LRMS(ESI)m/z 311(C₁₃H₁₄N₂O₅S，M+H，计算值311).

步骤2：(2S，4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，3-二氟哌啶-1-基)吡咯烷-2- 羧酸甲酯

通过注射器泵在-60℃在30分钟内向步骤1的化合物(19.6g，63.2mmol)、二异丙基乙胺(16.5g，127mmol)和CH₂Cl₂(200mL)的溶液中添加三氟甲磺酸酐(17.8g，63.2mmol)。然后使得到的溶液在1.5小时内回温到-20℃，此时添加二异丙基乙胺(5.5g，42.5mmol)，然后添加3，3-二氟-哌啶盐酸盐(6.67g，42.5mmol)，然后将混合物在5小时内慢慢地回温到室温。在室温12小时后，反应在H₂O(150mL)和CH₂Cl₂(100mL)之间分配。分离各层，水层用CH₂Cl₂(3×100mL)提取。合并的有机层经干燥(MgSO₄)、过滤和浓缩，残余物在硅胶上纯化(1∶99→99∶1的乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物，为无色泡沫；

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.16(s，1H)，8.10(d，1H)，7.88(d，1H)，7.68(t，1H)，4.48-4.59(m，1H)，3.73(s，3H)，3.68-3.65(m，1H)，3.22-3.17(m，2H)，2.64(brq，1H)，2.51(brq，1H)，2.42-2.41(m，2H)，2.23-2.20(m，1H)，2.13-2.04(m，1H)，1.90-1.82(m，2H)，1.74-1.72(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 414(C₁₈H₂₁F₂N₃O₄S，M+H，计算值414).

步骤3：N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

在室温下将LiOH一水合物(1.54g，64.4mmol)添加到步骤2的化合物(13.3g，32.2mmol)、CH₃CN(80mL)和H₂O(40mL)的溶液中。在2小时后，添加HCl的H₂O溶液(65mL，65mmol，1N)，溶液在乙酸乙酯之间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(6×100mL)提取。合并的有机层经干燥(MgSO₄)、过滤和浓缩。得到的残余物直接在以下步骤中使用而无需进一步纯化：LRMS(ESI)m/z 400(C₁₇H₁₉F₂N₃O₄S，M+H，计算值400)。

在室温下将三乙胺(16.4g，161mmol)滴加到上述的残余物(12.8g，32.2mmol)、参考例1的化合物(13.4g，32.2mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(12.3g，64.4mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(8.7g，64.4mmol)和DMF(140mL)的混合物中。在12小时后，反应在H₂O(500mL)和乙酸乙酯(200mL)之间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(3×200mL)提取。合并的有机层用盐水(1×150mL)洗涤，经干燥(MgSO₄)、过滤和浓缩，将残余物在硅胶上纯化(5∶95→99∶1乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.66(s，2H)，8.22-8.21(m，1H)，8.06-8.03(m，2H)，7.77(t，1H)，7.67-7.64(m，2H)，7.35-7.32(m，2H)，4.74-4.71(m，1H)，436-434(m，1H)，4.22(q，2H)，3.70-3.67(m，1H)，3.25-3.22(dd，1H)，3.11-2.95(m，3H)，2.64-2.48(m，2H)，2.40-2.38 (m，2H)，2.10-2.04(m，1H)，1.9-1.65(m，5H)，1.28(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C₃₄H₃₄Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值763).

实施例2

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

在室温下将氢氧化锂一水合物(126mg，5.24mmol)添加到实施例1的化合物(1.90g，2.62mmol)、CH₃CN(13mL)和H₂O(7mL)的混合物中。在2小时后，添加HCl的H₂O溶液(5.3mL，5.3mmol，1N)，溶液在乙酸乙酯(20mL)之间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(6×20mL)提取。合并的有机层经干燥(MgSO₄)、过滤和浓缩。残余物在硅胶上纯化(1∶99→20∶80的甲醇-CH₂Cl₂)，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.65(s，2H)，8.22(s，1H)，8.04(d，2H)，7.76（t，1H)，7.65(d，2H)，7.35(d，2H)，4.73-4.70(m，1H)，4.38-4.35(m，1H)，3.71-3.68(m，1H)，3.33-3.29(dd，1H)，3.11-2.95(m，3H)，2.65-2.50(m，1H)，2.40-2.39(m，2H)，2.11-2.10(m，1H)，1.86-1.60(m，5H)；LRMS(ESI)m/z 735(C₃₂H₃₀Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值735).

实施例3

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟氮杂环丁-1-基]-(L)-脯氨酰基}- 4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变成3，3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐，在制备性反相HPLC纯化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)后，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.65(s，2H)，8.21(s，1H)，8.04-8.01(m，2H)，7.75(t，1H)，7.65(app d，2H)，7.36(app d，2H)，4.74-4.72(m，1H)，4.34(t，1H)，4.20(q，2H)，3.61-3.44(m，5H)，3.33-3.10(m，4H)，2.05-2.01(m，1H)，1.92-1.88(m，1H)，1.26(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 735(C₃₂H₃₁C₁₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值735).

实施例4

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟氮杂环丁-1-基]-(L)-脯氨酰基}- 4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)后，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δ8.65(s，2H)，8.20(s，1H)，8.04-7.97(m，2H)，7.74(t，1H)，7.65(d，2H)，7.39(d，2H)，4.74-4.71(m，1H)，4.37(t，1H)，3.68-3.62(m，2H)，3.55-3.48(m，3H)，3.32-3.20(m，4H)，3.11-3.04(m，1H)，2.07-1.91(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 707(C₃₀H₂₇Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值707).

实施例5

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变为3，3-二氟吡咯烷盐酸盐，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，8.25-8.24(m，1H)，8.10-8.07(m，1H)，8.04-8.02(m，1H)，7.77(t，1H)，7.67-7.64(m，2H)，7.35-7.32(m，2H)，4.78-4.75(m，1H)，4.34-4.31(m，1H)，4.21(q，2H)，3.61-3.59(m，1H)，3.29-3.24(m，2H)，3.11(m，1H)，2.89-2.80(m，3H)，2.60-2.58(m，2H)，2.04-1.95(m，4H)，1.28(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 749(C₃₃H₃₂Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值749).

实施例6

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，将实施例5的化合物转化成标题化合物，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.52(s，2H)，8.13(m，1H)，7.98-7.97(m，1H)，7.90-7.88(m，1H)，7.65(t，1H)，7.50(d，2H)，7.24(d，2H)，4.54(m，1H)，4.20-4.17(m，1H)，3.47-3.44(m，1H)，3.22-3.20(m，1H)，3.13-3.10(m，1H)，3.04-3.02(m，1H)，2.73-2.67(m，3H)，2.50-2.47(m，2H)，1.95-1.82(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 721(C₃₁H₂₈Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值721).

实施例7

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸甲酯

在0℃向实施例6的化合物(50mg，0.07mmol)在无水甲醇(1mL)中的溶液中添加三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2M，在醚中)，直到黄色持续不变。在室温下搅拌15分钟后，将混合物浓缩至干燥，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，8.21(m，1H)，8.06-8.04(m，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.77(t，1H)，7.63-7.61(m，2H)，7.23-7.21(m，2H)，4.76(m，1H)，4.30-4.29(m，1H)，3.74(a，3H)，3.58-3.57(m，1H)，3.28-3.24(m，2H)，3.10-3.08(m，1H)，2.87-57(m，5H)，2.04-1.92(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 735(C₃₂H₃₀Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值735).

实施例8

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(S)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氨异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1所述的一般过程，将顺式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯变为反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯，得到标题化合物，为无色泡沫：LRMS(ESI)m/z 749(C₃₃H₃₃Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值749)。

实施例9

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(S)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基)-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)后，从实施例8的化合物得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.65(s，2H)，8.24(s，1H)，8.09-8.03(m，2H)，7.77(t，1H)，7.36(d，2H)，7.37(d，2H)，4.73-4.69(m，1H)，4.41-4.38(m，1H)，3.75-3.40(m，7H)，3.30-3.25(m，2H)，3.10(dd，1H)，2.55-2.48(m，3H)，2.28-2.21(m，1H)；LRMS(ESI)m/z 721(C₃₁H₂₉Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值721).

实施例10

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4，4-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变为4，4-二氟哌啶盐酸盐，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.56(s，2H)，8.13(s，1H)，8.06(d，1H)，7.91(d，1H)7.70(t，1H)，7.64(br s，1H)，7.54(d，2H)，7.20(d，2H)，7.06(br d，1H) 4.83-4.81(m，1H)，4.25(q，2H)，4.17(d，1H)，3.64-3.61(m，1H)，3.26(dd，1H)，3.10(dd，1H)，2.90(t，1H)，2.80-2.70(m，1H)，2.48-2.39(m，4H)，2.31-2.25(dd，1H)，1.94-1.83(m，4H)，1.59-1.51(m，1H)，1.32(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C₃₄H₃₅Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值763).

实施例11

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4，4-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，从实施例10的化合物得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，8.23(s，1H)，8.04-8.02(m，2H)，7.75(t，1H)，7.63(d，2H)，7.34(d，2H)，4.70-4.67(m，1H)，4.40(d，1H)，3.73-3.72(m，1H)，330(dd，1H)，3.28-3.05(m，3H)，2.58-2.54(m，4H)，2.13-2.12(m，1H)，1.95-1.80(m，5H)；LRMS(ESI)m/z 735(C₃₂H₃₁Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值735).

实施例12

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸-2-甲氧基乙酯

将碳酸钾(33.0mg，0.24mmol)添加到实施例2的化合物(60.0mg，0.08mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(22.0mg，0.16mmol)和DMF(1.5mL)的溶液中。在24小时后，添加三氟乙酸(45.6mg，0.40mmol)，混合物直接用制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0乙腈-水0.01％TFA)，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，8.49(br d，1H)，8.17(s，1H)，8.02(d，1H)，7.93(d，1H)，7.71(t，1H)，7.65(d，2H)，7.35(d，2H)，4.68-4.60(m，1H)，4.49(d，1H)，4.30-4.20(m，2H)，3.82(dd，1H)，3.67-3.60(m，3H)，3.34(s，3H)，3.32-3.30(m，1H)，3.28(dd，1H)，3.20-3.13(m，1H)，3.03-3.10(dd，1H)，2.95-2.90(m，2H)，2.27(dd，1H)，2.08-1.96(m，3H)，1.90-1.80(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 793(C₃₅H₃₇Cl₂F₂N₆O₇S，M+H，计算值793).

实施例13

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟哌啶基]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸-胆碱酯

使用实施例12所述的一般过程，将1-溴-2-甲氧基乙烷变为2-溴-N，N，N-三甲基乙铵溴化物，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，8.60(br d，1H)，8.23(s，1H)，8.09(d，1H)，8.05(d，1H)，7.79(t，1H)，7.62(d，2H)，7.34(d，2H)，4.75-4.70(m，1H)，4.65-4.52(m，2H)，4.33-4.31(m，1H)，3.80-3.70(m，1H)，3.78-3.66(m，2H)，3.30(dd，1H)，3.16-3.10(m，13H)，2.80-2.68(m，2H)，2.54-2.52(m，2H)，1.91-1.80(m，4H)，1.65-1.70(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 820(C₃₇H₄₂Cl₂F₂N₇O₆S+，M+H，计算值820).

实施例14

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)苯丙氨酸胆碱酯

使用实施例12所述的一般过程，使用实施例6的化合物和2-溴-N，N，N-三甲基乙铵溴化物，在制备性反相HPLC纯化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)后，得到标题化合物，为无色泡沫：

1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.65(s，2H)，8.28-8.25(m，1H)，8.14-8.12(m，1H)，8.06-8.04(m，1H)，7.80-7.77(t，1H)，7.64-7.60(m，2H)，7.34-7.32(m，2H)，4.79-4.75(m，1H)，4.65-4.50(m，2H)，4.24-4.22(m，1H)，3.70-3.61(m，3H)，3.57-3.14(m，12H)，2.87-2.55(m，5H)，2.10-1.95(m，3H)，1.80-1.78(m，1H)；LRMS(ESI)m/z 806(C36H40Cl2F2N7O6S+，M+H，计算值806).

实施例15

N-{N-[(3，5二氟苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤1-3所述的一般过程，将3-氰基苯-1-磺酰氯变为3，5-二氟苯-1-磺酰氯，得到标题化合物，为无色泡沫：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.62(s，2H)，7.63-7.61(m，2H)，7.48-7.45(m，2H)，7.36-7.29(m，3H)，4.73-4.70(m，1H)，4.32-4.30(m，1H)，4.22-4.17(q，2H)，3.72-3.70(m，1H)，3.23-3.22(m，1H)，3.10-3.04(m，2H)，3.00-2.94(m，1H)，2.61-2.50(m，2H)，2.38(m，2H)，2.10-2.05(m，1H)，1.83-1.77(m，3H)，1.65(m，2H)，1.28-1.25(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 774(C₃₃H₃₃Cl₂F₄N₅O₆S，M+H，计算值774).

实施例16

N-{N-[(3，5-二氟苯)磺酰基]-4(R)-[3，3-二氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)后，从实施例15的化合物得到标题化合物，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，7.63-7.62(d，2H)7.43-7.31(m，5H)，4.64-4.60(m，2H)，4.20-4.14(m，1H)，4.00-3.96(m，1H)，3.72-3.56(m，3H)，3.46-3.01(m，4H)，2.50-2.06(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 746(C₃₁H₂₉Cl₂F₄N₅O₆S，M+H，计算值746).

实施例17

N-{N-[3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2(S)-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}- 4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变为2(S)-(三氟甲基)吡咯烷，得到标题化合物，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，8.17(m，1H)，8.03-8.00(m，2H)，7.77-7.74(t，1H)，7.63-7.62(d，2H)，732-7.30(d，2H)，4.72-4.70(m，1H)，4.35-4.32(m，1H)，4.22-4.18(q，2H)，3.62-3.60(m，1H)，3.48-3.42(m，1H)，3.35-3.30(m，2H)，3.09-3.01(m，2H)，2.88-2.73(m，1H)，2.52-2.44(m，1H)，2.00-1.80(m，4H)，1.76-1.74(m，2H)，1.28-1.25(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 781(C₃₄H₃₃Cl₂F₃N₆O₆S，M+H，计算值781).

实施例18

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2(S)-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}- 4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，从实施例17的化合物得到标题化合物，为米白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.65(s，2H)，8.21(s，1H)，8.04-8.02(m，2H)，7.79-7.76(t，1H)，7.66-7.64(d，2H)，7.36-7.34(d，2H)，4.74-4.72(m，1H)，4.39-4.37(m，1H)，3.64-3.61(m，1H)，3.53-3.45(m，1H)，3.33-3.29(m，2H)，3.11-3.05(m，2H)，2.90-2.89(m，1H)，2.53-2.51(m，1H)，2.06-1.78(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 753(C₃₂H₃₀Cl₂F₃N₆O₆S，M+H，计算值753).

实施例19

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变为2-(三氟甲基)吡咯烷，得到标题化合物，为白色固体，是非对映体的混合物：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.62(s，2H)，8.22-8.18(m，1H)，8.05-8.00(m，2H)，7.77-7.74(m，1H)，7.63-7.62(m，2H)，7.32-7.30(m，2H)，4.73-4.70(m，1H)，4.35-4.33(m，1H)，4.22-4.18(m，2H)，3.62-3.60(m，1H)，3.48-3.22(m，3H)，3.09-3.04(m，2H)，2.90-2.91(m，1H)，2.52-2.44(m，1H)，2.00-1.80(m，4H)，1.76-1.74(m，2H)，1.28-1.25(m，3H)；LRMS(ESI)m/z 781(C₃₄H₃₃Cl₂F₃N₆O₆S，M+H，计算值781).

实施例20

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[2-(三氟甲基)吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，从实施例19的化合物得到标题化合物(为非对映体的混合物)，为米白色固体：

¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δ8.63(s，2H)，8.21-8.19(m，1H)，8.02-8.00(m，2H)，7.76-7.71(m，1H)，7.63-7.61(m，2H)，7.34-7.31(d，2H)，4.71-4.69(m，1H)，4.36-4.34(m，1H)，3.61-3.58(m，1H)，334-3.27(m，3H)，3.09-3.02(m，2H)，2.89-2.87(m，1H)，2.51-2.50(m，1H)，2.03-1.75(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 753(C₃₂H₃₀Cl₂F₃N₆O₆S，M+H，计算值753).

实施例21

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3S)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变成(3S)-3-氟吡咯烷盐酸盐，在制备性反相HPLC纯化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，10∶90→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，得到标题化合物，为白色固体：

¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δ8.62(s，2H)，8.16(s，1H)，8.09-8.07(m，1H)，7.96-7.95(m，1H)，7.77-7.71(m，2H)，7.56-7.54(m，2H)，7.34-7.30(m，1H)，5.30-5.25(m，1H)，4.89-4.87(m，1H)，4.31(q，2H)，4.23(d，1H)，3.85(t，1H)，3.55-3.46(m，2H)，3.40-3.37(dd，2H)，3.20-3.15(m，2H)，3.04-3.00(m，1H)，2.54-2.50(m，1H)，2.35-2.30(m，2H)，2.05-1.98(m，1H)，1.90-1.85(m，1H)，1.39-1.34(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 732(C₃₃H₃₄Cl₂FN₆O₆S，M+H，计算值732).

实施例22

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3S)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，从实施例21的化合物得到标题化合物，为白色固体：

¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δ8.63(s，2H)，8.49-8.48(m，1H)，8.11(s，1H)，8.00-7.99(m，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.68-7.63(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，5.47-5.36(m，1H)，4.63-4.58(m，2H)，4.09-4.07(m，1H)，3.94-3.91(m，1H)，3.80-3.40(m，5H)，3.3 1-3.26(m，1H)，3.04-3.00(M，1H)，2.44-2.25(m，4H)，LRMS(ESI)m/z 704(C₃₁H₃₀Cl₂FN₆O₆S，M+H，计算值704).

实施例23

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3R)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变成(3R)-3-氟吡咯烷盐酸盐，在制备性反相HPLC纯化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，10∶90→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，得到标题化合物，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.65(s，2H)，8.60-8.59(m，1H)，8.16(m，1H)，8.04-8.03(m，1H)，7.90-7.89(m，1H)，7.73-7.66(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，5.49-5.38(m，1H)，4.64-4.62(m，2H)，4.19(q，2H)，4.10-4.00(m，1H)，3.93-3.89(m，1H)，3.80-3.70(m，1H)3.65-3.35(m，3H)，3.27-3.04(m，3H)，2.40-2.29(m，4H)，1.33-1.26(m，3H)，LRMS(ESI)m/z 732(C₃₃H₃₄Cl₂FN₆O₆S，M+H，计算值732).

实施例24

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[(3R)-3-氟吡咯烷]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，从实施例23的化合物得到标题化合物，为白色固体：

¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64(s，2H)，8.51-8.48(m，1H)，8.14(s，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.85-7.83(m，1H)，7.71-7.67(m，3H) 7.40-739(m，2H)，5.50-5.40(m，1H)，4.67-4.60(m，2H)，4.12-3.80(m，1H)，3.92-3.79(m，2H)，3.70-3.45(m，4H)，3.34-3.29(m，3H)，3.06-3.02(m，1H)，2.49-2.30(m，4H)，LRMS(ESI)m/z 704(C₃₁H₃₀Cl₂FN₆O₆S，M+H，计算值704).

实施例25

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4-氟哌啶]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变成4-氟哌啶盐酸盐，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4uMax-RP 80A，100×20.2mm，10∶90→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)后，得到标题化合物，为白色固体：

¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δ8.63(s，2H)，8.58-8.57(m，1H)，8.15(s，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.89-7.87(m，1H)，7.71-7.64(m，3H)，7.35-7.33(m，2H)，4.98-4.81(m，1H)，4.61-4.58(m，2H)，4.17(q，2H)，4.06-3.94(m，2H)，3.55-3.51(m，1H)，3.34-3.30(m，2H)，3.24-3.02(m，3H)，2.42-2.30(m，2H)，2.20-2.00(m，3H)，1.38-1.35(m，2H)，1.24(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 746(C₃₄H₃₆Cl₂FN₆O₆S，M+H，计算值732).

实施例26

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[4-氟哌啶]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)之后，从实施例25的化合物得到标题化合物(为非对映体的混合物)，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.62(s，2H)，8.48-8.47(m，1H)，8.12(s，1H)，8.00-7.99(m，1H)，7.83-7.81 (m，1H)，7.68-7.64(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，4.94-4.82(m，1H)，4.64-4.57(m，2H)，4.04-3.92(m，2H)，3.53-3.50(m，1H)，3.40-3.26(m，5H)，3.04-3.00(m，1H)，2.47-2.43(m，1H)，2.47-2.05(m，5H)，LRMS（ESI)m/z 718(C₃₂H₃₂Cl₂FN₆O₆S，M+H，计算值718).

实施例27

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

步骤1：N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]甲酯的合成

在0℃向(3S)-羟基-(L)-脯氨酸(Acros，20g，0.15mol)和碳酸钠(26g，0.25mol)在500mL的水中的溶液中添加粉状3-氰基苯磺酰氯(25g，0.12mol)。在室温搅拌过夜后，反应混合物用浓盐酸(pH＝3)酸化，产物用EtOAc(3×100mL)提取。有机提取物经干燥(MgSO₄)、过滤并浓缩至干。然后将残余物溶于二氯甲烷(100mL)和甲醇(100mL)中，在0℃添加三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2M，在醚中)，直到黄色持续不变。在室温搅拌15分钟后，将混合物浓缩至干，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3(S)-羟基-(L)-脯氨酸甲酯(31.5g)。

在0℃向在200mL的EtOAc中的上述化合物(31.5g，0.10mol)中添加TEA(20mL，0.14mol)和MsCl(9.5mL，0.12mol)。在0℃搅拌20分钟后，反应用100mL的碳酸氢钠水溶液淬灭。在搅拌15分钟后，反应混合物在EtOAc(300mL)和碳酸氢钠水溶液(200mL)之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，并浓缩至干，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3(S)-甲磺酰基氧基-(L)-脯氨酸甲酯(40g)。

向上述化合物(39.5g，0.10mol)在300mL的AcCN的溶液中添加TEA(35mL，0.25mol)。在75℃加热4小时后，反应混合物冷却到室温并浓缩。将残余物溶于EtOAc(600mL)中并用1N的NaOH水溶液和盐水洗涤，浓缩至干，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-2，3-脱氢脯氨酸甲酯(28g)。

向N-[(3-氰基苯)磺酰基]-2，3-脱氢脯氨酸甲酯(0.7g，2.4mmol)在5mL的DMF中的悬浮液中添加3，3-二氟吡咯烷盐酸盐(2g，14.0mmol)和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(2.4mL，14.0mmol)。在50℃加热24小时后，使反应混合物冷却至室温并浓缩。残余物在硅胶上纯化(1∶99→30∶70的乙酸乙酯-己烷)，得到N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]甲酯，为外消旋的无色油状物的混合物：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.16-8.15(m，1H)，8.10-8.08(m，1H)，7.88-7.86(m，1H)，7.69-7.65(m，1H)，4.30(d，1H)，3.75(s，3H)，3.56-3.47(m，2H)，3.14-3.12(m，1H)，2.88-2.83(m，2H)，2.73-2.70(m，2H)，2.19-2.09(m，3H)1.98(M，1H)；LRMS(ESI)m/z 400(C₁₇H₁₉F₂N₃O₄S，M+H，计算值400).

使用实施例1步骤3所述的一般过程，将(2S，4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(3，3-二氟哌啶-1-基)吡咯烷-2-羧酸甲酯变为N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]甲酯，得到标题化合物，为白色固体，为非对映体的混合物：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.64-8.63(m，2H)，8.26-8.24(m，1H)，8.16-8.09(m，1H)，8.02-8.01(m，1H)，7.77-7.73(M，1H)，7.61-7.58(m，2H)，7.31-7.29(m，2H)，4.77-4.74(m，1H)，4.24-4.21(m，2H)，4.10-4.06(m，1H)，3.61-3.49(m，1H)，3.33-3.26(m，2H)，3.09-3.06(m，1H)，2.70-2.51(m，5H)，1.94-1.88(m，4H)，1.30-1.26(m，3H)；LRMS(ESI)m/z 749(C₃₃H₃₂Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值749).

实施例28

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟吡咯烷]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→100∶0的乙腈-水0.01％TFA)之后，从实施例27的化合物得到标题化合物(为非对映体的混合物)，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.54-8.53(d，2H)，8.16-8.10(m，1H)，7.90-8.06-7.90(m，2H)，7.67-7.61(m ，1H)，7.51-7.49(m，2H)，7.24-7.22(m，2H)，4.68-4.61(m，1H)，4.09-4.05(m，1H)，3.46-3.18(m，2.5H)，3.00-2.91(m，1.5H)，2.90-2.64(m，5H)，1.95-1.82(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 721(C₃₁H₂₈Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值721).

实施例29

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氨异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例27步骤1-2所述的一般过程，将3，3-二氟吡咯烷盐酸盐变为3，3-二氟哌啶盐酸盐，得到标题化合物，为白色固体，为非对映体的混合物：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.48-8.47(d，2H)，8.07-8.04(d，1H)，7.98-7.83(m，2H)，7.63-7.56(m，1H)，7.46-7.43(m，2H)，7.17-7.12(m，2H)，4.57-4.50(m，1H)，4.10-4.00(m，3H)，3.26-3.24(m，2H)，3.11-3.09(m，1H)，2.86-2.70(m，2H)，2.30-2.24(m，3H)，2.06-1.90(m，1H)，1.73-1.60(m，4H)，1.45-1.20(m，2H)，1.15-1.07(m，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C₃₄H₃₄Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值763).

实施例30

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[3，3-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，从实施例29的化合物得到标题化合物(为非对映体的混合物)，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.52-8.51(d，2H)，8.10-8.09(d，1H)，8.05-7.93(dd，1H)，7.90-7.88(m，1H)，7.66-7.61(m，1H)，7.48-7.47(d，2H)，7.22-7.21(d ,2H)，4.55-4.50(m，1H)，4.03-3.97(m，1H)，3.43-3.30(m，1H)，3.25-3.15(m，2H)，3.00-2.98(m，1H)，2.87-2.76(m，1H)，2.34-2.26(m，3H)，2.06-1.90(m，1H)，1.89-1.60(m，4H)，1.45-1.20(m，2H)；LRMS(ESI)m/z 735(C₃₂H₃₀Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值735).

实施例31

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[4，4-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例27步骤1-2所述的一般过程，将3，3-二氟吡咯烷盐酸盐变为4，4-二氟哌啶盐酸盐，分离得到标题化合物的两种异构体：I和II，在各自异构体用1N盐酸盐在二乙醚中处理后，得到盐酸盐：

异构体I：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.65(s，2H)，8.05(s，1H)，8.01-8.00(d，1H)，7.78-7.76(d，1H)，7.69-7.66(m，3H)，7.43-7.42(d，2H)，4.87-4.84(m，1H)，4.63-4.60(m，1H)，4.23-4.20(m，2H)，4.10-4.09(m，1H)，3.85(m，1H)，3.71-3.38(m，5H) 3.29-3.25(m，1H)，3.11-3.08(m，1H)，2.52-2.38(m，5H)，2.31-2.25(m，1H)，1.30-1.26(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C₃₄H₃₄Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值763).异构体II：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.67(s，2H)，8.22(s，1H)，8.15-8.13(d，1H)，8.04-8.03(d，1H)，7.77-7.74(t，1H)，7.60-7.59(d，2H)，7.32-7.30(d，2H)，4.74-4.71(m，1H)，4.36-4.31(m，2H)，3.85-3.82(m，1H)，3.75-3.72(m，1H)，3.52-3.29(m，7H)，3.07-3.02(m，1H)，2.47-2.30(m，6H)，1.35-1.33(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 763(C₃₄H₃₄Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值763).

实施例32

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-3-[4，4-二氟哌啶基]-脯氨酰基}-4-[(3’，5’-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，将实施例31的化合物的异构体I和异构体II转化成标题化合物，在各自异构体用1N的盐酸在二乙醚中处理后得到盐酸盐。从异构体I乙酯得到的酸：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.41(s，2H)，8.05(s，1H)，7.89-7.87(d，1H)，7.83-7.81(d，1H)，7.59-7.54(t，1H)，7.36-70.34(d，2H)，7.11-7.09(d，2H)，4.35-4.32(m，1H)，3.85-3.84(m，1H)，3.43-3.10(m，3H)，2.92-2.88(m，1H)，2.77-2.76(m，1H)，2.22-2.19(m，2H)，2.08-2.06(m，2H)，1.54-1.42(m，6H)；LRMS(ESI)m/z 735(C₃₂H₃₀Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值735).

从异构体II乙酯得到的酸：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.41(s ，2H)，8.09(s，1H)，7.97-7.96(d，1H)，7.82-7.81(d，1H)，7.58-7.54(t，1H)，7.36-7.34(d，2H)，7.11-7.10(d，2H)，4.39-4.36(m，1H)，3.91-3.88(m，1H)，3.32-3.28(m，1H)，3.21-3.20(m，1H)，3.10-3.09(m，1H)，2.92-2.91(m 1H)，2.72-2.71(m，1H)，2.14-2.12(m，2H)，2.04-2.01(m，2H)，1.80-1.77(m，1H)，1.63-1.53(m，1H)，1.47-1.41(m，4H)；LRMS(ESI)m/z 735(C₃₂H₃₀Cl₂F₂N₆O₆S，M+H，计算值735).

实施例33

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[1’-吡咯烷-2’(R)-羧酸叔丁基酯]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3”，5”-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸乙酯

使用实施例1步骤2-3所述的一般过程，将3，3-二氟哌啶盐酸盐变成D-脯氨酸叔丁基酯，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi4u Max-RP 80A，100×20.2mm，20∶80→90∶10的乙腈-水0.01％TFA)后，得到标题化合物，为白色固体：

¹HNMR(500MHz，CD₃OD)δ8.63(s，2H)，8.55-8.54(m，1H)，8.13(s，1H)，8.03-8.01(m，1H)，7.87-7.85(m，1H)，7.71-7.64(m，3H)，7.35-7.33(m，2H)，4.61-4.59(m，2H)，4.22-4.16(m，3H)，4.10-4.00(m，1H)，3.88-3.84(m，1H)，3.59-3.51(m，2H)，3.24-3.20(m，2H)，3.04-3.01(m，1H)，2.50-2.41(m，1H)，2.26-2.22(m，2H)，2.12-2.10(m，2H)，2.00-1.94(m，1H)，1.50(s，9H)，1.25(t，3H)；LRMS(ESI)m/z 814(C₃₈H₄₃Cl₂N₆O₈S，M+H，计算值814).

实施例34

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[1’-吡咯烷-2’(R)-羧酸叔丁基酯]-(L)-脯氨酰基}-4-[(3”，5”-二氨异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

使用实施例2所述的一般过程，在制备性反相HPLC纯化(Phenomenex Synergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈-水0.01％TFA)后，从实施例33的化合物得到标题化合物，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.62(s，2H)，8.47-8.45(m，1H)，8.10(s，1H)，8.02-8.00(m，1H)，7.81-7.79(m，1H)，7.69-7.64(m，3H)，7.37-7.36(m，2H)，4.63-4.57(m，2H)，4.32-4.29(m，1H)，4.15-4.05(m，1H)，3.88-3.84(m，1H)，3.68-3.60(m，1H)，3.56-3.52(m，1H)，3.31-3.26(m，2H)，3.02-2.98(m，1H)，2.53-2.45(m，1H)，2.31-2.10(m，4H)，2.00-1.94(m，1H)，1.50(s，9H)；LRMS(ESI)m/z 786(C₃₆H₃₈Cl₂N₆O₈S，M+H，计算值786).

实施例35

N-{N-[(3-氰基苯)磺酰基]-4(R)-[1’-吡咯烷-2’(R)-羧酸]-(L)-脯氨酰基}-4- [(3”，5”-二氯异烟酰基)氨基]-(L)-苯丙氨酸

向实施例34的固体化合物(86mg，0.1mmol)中添加三氟乙酸(2.5ml)。在4小时后，将反应浓缩，在制备性反相HPLC纯化(PhenomenexSynergi 4u Max-RP 80A，100×20.2mm，0∶100→80∶20的乙腈--水0.01％TFA)，得到标题化合物，为白色固体：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ8.62(s，2H)，8.48-8.47(m，1H)，8.10(s，1H)，8.01-7.97(m，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.69-7.61(m，3H)，7.38-7.36(m，2H)，4.63-4.58(m，2H)，4.44-4.41(m，1H)，4.22-4.12(m，1H)，3.90-3.86(m，1H)，3.69-3.62(m，1H)，3.61-3.58(m，1H)，3.33-3.26(m，2H)，3.03-2.98(m，1H)，2.59-2.48(m，1H)，2.37-2.10(m，4H)，2.00-1.89(m ，1H)；LRMS(ESI)m/z 730(C₃₂H₃₁Cl₂N₆O₈S，M+H，计算值730).

Claims

1.式(I)表示的化合物：

或其可药用盐，其中：

A是N或N⁺-O^-；

X和Y独立地选自卤素、C_1-3烷基和C_1-3烷氧基；

R²是氢或甲基；

R³和R⁴之一是氢，且另一个为

k是0-4；

R^a选自(1)-OR^d、(2)-NR^dS(O)_mR^e、(3)-NO₂、(4)卤素、(5)-S(O)_mR^d、(6)-SR^d、(7)-S(O)₂OR^d、(8)-S(O)_mNR^dR^e、(9)-NR^dR^e、(10)-O(CR^fR^g)_nNR^dR_e、(11)-C(O)R^d、(12)-CO₂R^d、(13)-CO₂(CR^fR^g)_nCONR^dR^e、(14)-OC(O)R^d、(15)-CN、(16)-C(O)NR^dR^e、(17)-NR^dC(O)R^e、(18)-OC(O)NR^dR^e、(19)-NR^dC(O)OR^e、(20)-NR^dC(O)NR^dR^e、(21)-CR^d(N-OR^e)、(22)CF₃、(23)-OCF₃、(24)C_3-8环烷基、和(25)杂环基；其中环烷基和杂环基任选被1-3个独立地选自R^c的取代基取代；