CN100998866A - 一种由药物敏感虫株组成的鸡球虫病四价活疫苗的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种由药物敏感虫株组成的鸡球虫病四价活疫苗制备方法，它是在偏僻山区散养鸡中采集鸡球虫样品，以实验室笼养试验法和球虫耐药性检测技术筛选出药物敏感株，并以这些药物敏感株为亲本，根据鸡球虫早熟选育致弱的原理，选育获得柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella、堆型艾美耳球虫E.acervulina、巨型艾美耳球虫E.maxima、毒害艾美耳球虫E.necatrix的早熟系，研制出鸡球虫病四价(含柔嫩、毒害、巨型、堆型4个种)活疫苗。上述四价活疫苗一方面具有发挥其免疫防制鸡球虫病的作用，另一方面发挥其稀释—替换现有多重耐药野外虫株的潜能，恢复常用化学抗球虫药物的抗球虫效果，使化学防治重获新生，使鸡球虫病的防治走上良性循环之路。
Description
技术领域：
本发明属于兽用疫苗，更确切地说，本发明是一种由药物敏感虫株组成的经早熟选育致弱而成的鸡球虫病四价活疫苗。
背景技术：
鸡球虫病广泛分布于世界各地，是严重危害养鸡业的疾病之一。据统计，全世界每年因鸡球虫病造成的经济损失达45亿美元。迄今，鸡球虫病防制的主要手段是使用抗球虫药物进行化学防治。化学防治对控制鸡球虫病的暴发和流行，到目前为止，已有超过40多种抗球虫药物曾被用于鸡球虫病的化学防治。然而，随着抗球虫药物的广泛和连续使用，球虫耐药性也以惊人的速度产生着，Schnitzer和Grunberg曾言“耐药性总是形影不离地伴随着化学治疗药物的发展而发展，一部化学治疗史也就是耐药性产生的历史”。进入20世纪90年代以来，新药的开发速度已经赶不上耐药虫株出现的速度，鸡球虫耐药性的严重性和普遍性实在令人担忧。目前，鸡球虫的耐药性已经成为世界性难题。因此，鸡球虫病疫苗这一切实可行的球虫病防制技术手段的推广应用，也许是目前有效控制鸡球虫病和恢复常用抗球虫药物敏感性的惟一选择。
Jeffers(1986年)曾设想，活卵囊鸡球虫病疫苗和化学防治药物轮换使用可能会使耐药虫株被敏感虫株替代，并设想这是一种保持球虫对药物敏感的好方法。1989年Mathis和McDougald报道，在使用了一种由敏感虫株组成的火鸡球虫病疫苗后，二硝托胺(球痢灵)和氨丙啉对火鸡球虫的抗球虫效果恢复了。世界著名球虫病学家Chapman博士1994年发表了支持在使用无耐药性活卵囊鸡球虫病疫苗后，可能会将鸡舍中的耐药虫株替换成敏感虫株的试验报告。试验结果显示，在连续使用一种无耐药性鸡球虫病疫苗后，敏感性已经降低的莫能霉素对从同鸡舍分离获得的球虫虫株的抗球虫效果明显提高和恢复了。此后，进一步的研究使Chapman更明确地提出，鸡球虫病疫苗中的药物敏感虫株可以替换鸡场原有的耐药虫株并提出无耐药性鸡球虫病疫苗和化学治疗药物轮换使用的球虫病控制策略，认为这是解决鸡球虫耐药性问题的有效手段和保持球虫对药物敏感的好方法。
古人云：它山之石可以攻玉。面对鸡球虫耐药性这一世界性难题，欧美国家的做法值得我们借鉴。欧美国家所倡导的理念就是：无耐药性鸡球虫病疫苗免疫防制与化学防治相结合——即无耐药性鸡球虫病疫苗与化学防治药物轮换使用的鸡球虫病防制策略。我们认为，该球虫病防制策略，可以让我们从此走出鸡球虫病的防制只依赖化学防治所不可避免的“新药——耐药——新药——耐药”的怪圈，它代表了当今世界鸡球虫病防制的潮流和发展方向。
发明内容：
本发明的目的就是针对我国鸡球虫极高的多重耐药率，常用抗球虫药物极高的耐药虫株比率，导致有效抗球虫药物少之又少，甚至到了无药可选用的程度，肉鸡球虫病化学防治已经举步维艰的严峻现实；因此，研制出一种无耐药性的鸡球虫病疫苗，一方面发挥其免疫防制鸡球虫病的作用，另一方面发挥其稀释一替换现有多重耐药野外虫株的潜能，恢复常用化学抗球虫药物的抗球虫效果，使化学防治重获新生，使鸡球虫病的防治走上良性循环之路。
本发明是通过下述技术方案步骤来实现的：
1、取样，在偏僻山区散养鸡中采集鸡球虫样品；
2、筛选出药物敏感株，以实验室笼养试验法和球虫耐药性检测技术筛选出药物敏感株；
3、获取4种鸡艾美耳球虫药敏早熟系卵囊，以这些药物敏感株为亲本，根据鸡球虫早熟选育致弱的原理，选育获得柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella、堆型艾美耳球虫E.acervulina、巨型艾美耳球虫E.maxima、毒害艾美耳球虫E.necatrix的早熟系；
4、混合，将上述4种鸡艾美耳球虫药敏早熟系卵囊按比例混合即得出鸡球虫病四价(含柔嫩、毒害、巨型、堆型4个种)活疫苗。
采用上述步骤步骤制备的四价活疫苗能发挥其稀释-替换现有多重耐药野外虫株的潜能，恢复常用化学抗球虫药物的抗球虫效果，据实验测定，我们选用的鸡柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫对9种常用抗球虫药物马杜拉霉素、莫能霉素、盐霉素、氨丙啉、二硝托胺、尼可巴嗪+乙氧酰胺苯甲酯、氯苯胍、地克珠利、磺胺喹沙啉等均敏感。通过十多代的早熟选育，柔嫩艾美耳球虫潜隐期由原来的133h缩短为118h(缩短了15h)，毒害艾美耳球虫潜隐期由原来的143h缩短为127h(缩短了16h)，巨型艾美耳球虫潜隐期由原来的144h缩短为123h(缩短了21h)，堆型艾美耳球虫潜隐期由原来的98h缩短为72h(缩短了26h)。
本发明通过将上述4种鸡艾美耳球虫药敏早熟系卵囊按一定比例混合而成的鸡球虫病四价活疫苗，经实验室试验和临床中试证实对强毒虫株的攻击具有良好的免疫保护，并且既有早熟弱毒特性，又有药物敏感性，在生产实际应用时，一方面能用药物有效控制疫苗反应，另一方面可通过疫苗虫株的多次使用后，逐步替代鸡场中原有的抗药性虫株，使鸡场因长期应用抗球虫药而产生的抗药性虫株恢复其敏感性，为球虫病的有效控制创造良好的生态条件。
具体实施方式
本发明是一种由药物敏感虫株组成的鸡球虫病四价活疫苗；其步骤如下：
1、取样，在偏僻山区散养鸡中采集鸡球虫样品；
2、筛选出药物敏感株，以实验室笼养试验法和球虫耐药性检测技术筛选出药物敏感株；
3、获取4种鸡艾美耳球虫药敏早熟系卵囊，以这些药物敏感株为亲本，根据鸡球虫早熟选育致弱的原理，选育获得柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella、堆型艾美耳球虫E.acervulina、巨型艾美耳球虫E.maxima、毒害艾美耳球虫E.necatrix的早熟系；
4、混合，将上述4种鸡艾美耳球虫药敏早熟系卵囊按比例混合即得出鸡球虫病四价(含柔嫩、毒害、巨型、堆型4个种)活疫苗。
下面用实例进一步说明本发明的效果：
例1鸡球虫病四价活疫苗疫苗反应的控制
顺德乐从霍丙源竹丝鸡场位处鱼塘边，湿度较大，鸡球虫病一直困扰该场，一旦发病，以往用药1～2次就能治愈，以后不再复发，现在多种抗球虫药联合或轮换应用仍无济于事，病程长达1周以上，且经常复发多次。该场常为治疗球虫病而耗费大量的人力、物力、精力，迫使其改用本发明来控制球虫病的发生。第一次使用本疫苗时，由于免疫时间不合理，首免于10日龄，二免于15日龄，16日龄下网垫到地面平养，结果出现严重的疫苗反应：鸡只于21日龄下午出现零星血便，但由于没有引起足够重视，次日血便迅速递增，部分鸡只精神沉闷，食欲减退，死亡28只。立即以治疗量饮服三字球虫粉，23日龄鸡只仍死亡30只，但血便大大减少，大部分鸡只精神状况已恢复正常，24日龄死亡1只，之后不再见有球虫病发生。病愈之快，得到了场方的认同。由此可见，由药物敏感虫株组成的鸡球虫病四价活疫苗，可有效控制免疫反应。
例2鸡球虫病四价活疫苗对恢复生产现场耐药虫株敏感性的作用
为了验证本发明能否发挥到稀释-替换现有多重耐药野外虫株的作用，我们对高明家乐鸡场鸡球虫病四价活疫苗的使用情况作了全程监测，并将免疫前和免疫6个月后的场地虫株进行分离，以实验室笼养试验法和抗球虫指数法对其耐药性进行检测，结果见表1和表2。
表1免疫前分离虫株的药物敏感性试验结果
| 组别 | 药物浓度及用法 | 试验鸡数(只) | 保护率(％) | 平均增重(g) | 相对增重率(％) | 平均病变记分 | 病变值 | 卵囊数(×106/只) | 卵囊值 | ACI |
| 感染不给药组 | - | 20 | 65.0 | 51.06 | 44.21 | 3.42 | 34.2 | 20.24 | 40 | 35.01 |
| 空白对照组 | - | 2O | 100.0 | 115.50 | 100.00 | 0 | 0 | 0 | 0 | 200.00 |
| 地克珠利组 | 1mg/kg，拌料 | 20 | 60.0 | 58.58 | 50.72 | 3.42 | 34.2 | 26.97 | 40 | 36.52 |
| 球净组 | 125mg/kg，拌料 | 20 | 95.0 | 108.42 | 93.87 | 2.58 | 25.8 | 13.23 | 40 | 123.07 |
| 球速克组 | 200mg/kg，饮水 | 20 | 85.0 | 88.74 | 76.83 | 2.94 | 29.4 | 19.81 | 40 | 92.43 |
| 马杜拉霉素组 | 5mg/kg，拌料 | 20 | 85.0 | 104.82 | 90.75 | 2.94 | 29.4 | 20.37 | 40 | 106.35 |
| 球痢灵组 | 125mg/kg，拌料 | 20 | 75.0 | 77.17 | 66.81 | 3.10 | 31.0 | 18.96 | 40 | 81.17 |
表2免疫6个月后分离虫株的药物敏感性试验结果
| 组别 | 药物浓度及用法 | 试验鸡数(只) | 保护率(％) | 平均增重(g) | 相对增重率(％) | 平均病变记分 | 病变值 | 卵囊数(×106/只) | 卵囊值 | ACI |
| 感染不给药组 | - | 20 | 100.0 | 96.58 | 83.62 | 2.76 | 27.6 | 12.99 | 40 | 116.02 |
| 空白对照组 | - | 20 | 100.0 | 115.50 | 100.00 | 0 | 0 | 0 | 0 | 200.00 |
| 地克珠利组 | 1mg/kg，拌料 | 20 | 100.0 | 112.50 | 97.40 | 1.03 | 10.3 | 5.44 | 20 | 167.10 |
| 球净组 | 125mg/kg，拌料 | 20 | 100.0 | 115.75 | 100.22 | 0.81 | 8.1 | 4.89 | 20 | 172.12 |
| 球速克组 | 200mg/kg，饮水 | 20 | 100.0 | 114.98 | 99.55 | 0.90 | 9.0 | 1.43 | 10 | 180.55 |
| 马杜拉霉素组 | 5mg/kg，拌料 | 20 | 100.0 | 115.25 | 99.78 | 0.83 | 8.3 | 3.18 | 20 | 171.48 |
| 球痢灵组 | 125mg/kg，拌料 | 20 | 100.0 | 111.62 | 96.64 | 1.15 | 11.5 | 5.63 | 20 | 165.14 |
从表1和表2可以看出，使用鸡球虫病四价活疫苗前，该场虫株对常用抗球虫药严重耐药，使用本疫苗6个月后，耐药虫株逐渐被疫苗药敏虫株所替代，常用化学抗球虫药物的抗球虫效果得以大大恢复。可见，鸡球虫病四价活疫苗确实能发挥恢复生产现场耐药虫株敏感性的作用。
Claims (1)
1、一种由药物敏感虫株组成的鸡球虫病四价活疫苗制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：
(1)、取样，在偏僻山区散养鸡中采集鸡球虫样品；
(2)、筛选出药物敏感株，以实验室笼养试验法和球虫耐药性检测技术筛选出药物敏感株；
(3)、获取4种鸡艾美耳球虫药敏早熟系卵囊，以这些药物敏感株为亲本，根据鸡球虫早熟选育致弱的原理，选育获得柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella、堆型艾美耳球虫E.acervulina、巨型艾美耳球虫E.maxima、毒害艾美耳球虫E.necatrix的早熟系；
(4)、混合，将上述4种鸡艾美耳球虫药敏早熟系卵囊混合即得出鸡球虫病四价(含柔嫩、毒害、巨型、堆型4个种)活疫苗。
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