CN1008818B

CN1008818B - 带有次苯基的斯伯格埃林类化合物的生产方法

Info

Publication number: CN1008818B
Application number: CN86105401A
Authority: CN
Inventors: 梅泽浜夫; 竹内富雄; 守口诚; 梅田芳久; 中村辉也; 藤井昭男
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1985-08-27
Filing date: 1986-08-26
Publication date: 1990-07-18
Also published as: CN86105401A; EP0212606A1; JPS6248659A; EP0212606B1; DE3676006D1; JPH075538B2; CA1287841C; KR900000871B1; KR870002061A

Abstract

一种制备带有次苯基的斯伯格埃林类化合物或其盐的方法，该化合物由通式I表示。该方法包括通式II的化合物或其盐还原，式中R是氢原子，低级羟烷基或低级烷氧基，n是3～5的整数，该方法有利于大规模生产。

Description

本发明叙述了新型带有次苯基的斯伯格埃林类化合物（Spergualinrclated Compounds）及其盐的生产方法。使用该方法可大规模地生产斯伯格埃林类化合物。

斯伯格埃林是本发明人从能产生斯伯格埃林的芽胞菌属细菌培养滤液中分离出的一种化合物，其结构式如下：

斯伯格埃林具有抑制革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌生长的作用。在对小白鼠白血病L-1210，小白鼠白血病EL-4，Ehrlich癌和肉瘤180（S-180）的治疗试验中表明，它还具有明显的治疗和延长生命的作用，并且它是一种很有潜力的抗肿瘤试剂（日本专利公开48957/1982）。据报道，斯伯格埃林化合物也可由合成方法获得〔抗菌素杂志，34，1625（1981）〕。

分子内带有半缩醛的斯伯格埃林在水溶液中是不稳定的。因此人们做了大量研究，以便得到在水溶液中稳定且显示高活性的斯伯格埃林化合物。业已发现，由式Ⅲ表达的带有次苯基的斯伯格埃林化合物即在水溶液中稳定，活性又高（日本专利申请038615/1984）。

〔Ⅲ〕

其中R₁是氢原子或低级羟烷基;n是3至5的整数。

这些带有次苯基的斯伯格埃林类化合物一般由具有通式Ⅳ的1，5-二位被保护的1，5，10-三氮癸烷合成制得。

其中X₁和X₂表示氨基保护基，可以相同或不同。

但是式Ⅳ化合物不适于工业生产，这是因为它们的合成需要几个氨基保护基，并涉及了几个反应步骤。

如果用一种简单的方法选择酰化式Ⅲ中在亚精胺（1，5，10-三氮癸烷）N¹⁰位上的伯胺，则可以大批地生产由式Ⅲ表示的带有次苯基的斯伯格埃林类化合物。

本发明的目的是提供一种适于对所述的斯伯格埃林类化合物进行大量生产的方法。

本发明叙述了由式Ⅰ表示的带有次苯基的斯伯格埃林类化合物或其盐的生产方法;

…〔Ⅰ〕

其中R是氢原子，低级羟烷基或低级烷氧基;n是3～5的整数。该方法包括将下式化合物或其盐还原：

…〔Ⅱ〕

其中R和n的定义同上。

采用任何已知反应，将式Ⅱ的腈化合物中的-CN还原成-CH₂NH₂，同时不影响式Ⅱ中的酰胺，可以合成出通式Ⅰ的斯伯格埃林类化合物。较好的方法包括使用阮内镍催化剂的催化还原，以及用硼氢化钠在过渡金属盐（如氯化钴或氯化镍）存在下进行还原〔《四面体》，52，4555（1969）〕。

如果通式Ⅰ中的R不是氢原子，而是一个取代基，则该化合物的空间构型可任意为S-，R-和SR-型。式Ⅰ化合物的典型例子以及结构名称列于表Ⅰ中。

…Ⅰ

式Ⅰ化合物可与酸形成盐，形成盐的酸可以是无机或有机酸。对所用的酸没有特别的限定，但是从容易处理的角度看，盐酸较好。

典型式Ⅰ化合物的盐酸盐的IR吸收光谱（用KBr片测定），质子NMR谱（用TMS为参照物在d-MeOH 中测定）和旋光率示于表2中。

式Ⅱ化合物的原料是新的，可由下述任一方法合成。一种方法是将式Ⅴ化合物或其反应衍生物与式Ⅵ的N-2-氰基乙基-1，4-丁二胺缩合：

…〔Ⅴ〕

其中R和n的定义同式Ⅰ。

H₂N（CH₂）₄NH（CH₂）₂CN Ⅵ

另一种合成其中R为氢原子或低级羟烷基，n为3～5的整数的式Ⅱ化合物（即式Ⅱa化合物）及其盐的制备方法，

…〔Ⅱa〕

（其中R₁是氢原子或低级羟烷基）是将式Ⅶ化合物或其反应衍生物和式Ⅷ化合物缩合，

其中R₁和n的定义同上。

将1，4-二胺丁烷和丙烯腈缩合很容易得到价廉的式Ⅵ的N-2-氰基乙基-1，4-丁二胺〔医用化学杂志，2，710（1964）〕。式Ⅱ的腈化合物可通过将式Ⅵ二胺中的伯胺选择酰化而合成。本发明人通过将该腈化合物还原从而实现了带有次苯基的斯伯格埃林类化合物的合成。

如果式Ⅱ中R不是氢而是取代基，那么该化合物的空间构型可任意是S-，R-和SR-型。式Ⅱ化合物的典型例子及其结构式和名称示于表3中。

式Ⅱ化合物可与酸形成盐，成盐的酸可以是无机或有机酸，对所用的酸没有特殊的限定，但是盐酸较好，因为它易处理。

式Ⅱ典型化合物的盐酸盐的IR吸收光谱（用KBr片测定），质子NMR谱（用TMS为参照物在d-MeOH中测定）和旋光率示于表4中。

在合成式Ⅱ原料的第一个方法中，式Ⅵ化合物与式Ⅴ化合物可以按照形成钛键的任一方法进行缩合。例如采用二环己基碳化二亚胺或1-乙基-8-（3-二甲基氨基丙基）-碳化二亚胺的碳化二亚胺法;始于酰肼的叠氮化物法;混合酸酐法;采用被取代或未被取代的苯酯或羟基琥珀酰亚胺酯的活性酯法;O-酰基羟胺衍生物法;以及N-酰基化合物法。缩合溶剂可选自常用于钛键形成的溶剂。因为式Ⅴ化合物一般以与酸形成的盐的形式使用，所以考虑到溶解这类盐的能力，采用酰胺较好，如二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺。

当式Ⅵ的N-2-氰基乙基-1，4-丁二胺与式Ⅴ化合物缩合时，可以按等克分子量加入酸（如盐酸），仅仅使式Ⅵ中的仲胺转变成盐的形式，这样使伯胺被选择酰化。

伯胺的酰化最好使用过量（1，2～2摩尔当量）的N-2-氰基乙基-1，4丁二胺。缩合反应可以等摩尔量的式Ⅴ和式Ⅵ化合物进行。为了得到高产率，加入的式Ⅵ化合物最好过量。

式Ⅴ化合物是新的，可由下列程序合成。将式Ⅶ化合物：

（其中n是3～5的整数）与甘氨酸或丝氨酸类化合物缩合，其中羧基由适当的保护基保护，然后再由常规方法除去羧基保护基。该缩合反应可任意由上述常规形成钛键的方法进行。

式Ⅴ化合物（其中R是低级烷氧基）或式Ⅴa化合物：

（其中R₂是低级烷氧基;n是3～5的整数）可由下述程序合成之：将式Ⅶ化合物酯化，再用氨处理;将二羟乙酸连接到生成的酰胺上，形成由式Ⅸ表示的化合物。

（其中n是3～5的整数）;将低级烷醇在酸催化剂的存在下与式Ⅸ化合物作用，进行O-烷基化和酯化，然后用碱将酯水解。

在第二种合成式Ⅱ原料中，按照上述第一方法中缩合反应的同样方式将Ⅶ化合物与式Ⅷ化合物缩合。在缩合前，可将式Ⅷ化合物进行处理，仅仅使仲胺转变成盐，这样可对伯胺进行选择酰化。较好的伯胺酰化也可通过使用过量（1，2～2摩尔当量）式Ⅷ化合物达到。

式Ⅷ化合物是新的，可由下述程序合成：将甘氨酸或丝氨酸（其中胺由适当的保护基保护）这类化合物与式Ⅵ的N-2-氰乙基-1，4-丁二胺缩合，后用常规方法消除胺基保护基。在缩合之前，可将N-2-氰乙基-1，4-丁二胺进行处理，仅使仲胺转变成盐构型，使伯胺进行选择酰化，伯胺的优先酰化也可通过使用过量（1，2～2摩尔当量）的N-2-氰乙基-1，4-丁二胺实现。

下面给出的实施例用来进一步说明本发明，但不能理解为是对本发明的限定。

实施例1：10-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-甘氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐

将21.71克（45.8毫摩尔）的8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐溶解在70毫升甲醇中，用氨气饱和该溶液。在加入阮内镍（30克）后，混合物于45℃下氢气流（15公斤/厘米²）中搅拌6小时。再滤掉催化剂，蒸馏出溶剂。得到的固体残物溶解于500毫升水中。溶液用2NHCl中和，并用1000毫升水稀释。将稀释液装入填有300毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中，用水（1000毫升）洗涤之后，用0.2～0.3MNaCl洗脱该柱。收集活性组分，真空蒸发至干燥。将甲醇加入到固体残物中，滤掉不溶的NaCl。两次重复上述程序。得到的滤液装入填有1000毫升Sephadex LH20的柱中，再用甲醇洗脱。收集活性组分，真空下浓缩之。得到的固体残物（13.55克）在甲醇-乙醇（1∶4）中结晶，由此得到10.81克（45.8%产率）的10-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-甘氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐。

实施例2：10-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-甘氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐

将由69.4毫克（0.138毫摩尔）8-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐和49.3毫克（0.207毫摩尔）氯化钴（CoCl₂·6H₂O）组成的混合物溶解在3毫升甲醇中。向该被冰冷却着的溶液中缓慢加入104.4毫克（2.76毫摩尔）的硼氢化钠。混合物在室温下搅拌1小时，加入水（10毫升）后，用2NHCl使溶液变成酸性，以便溶解黑色沉淀物，然后用2NNaOH调节溶液至pH值为7.0。蒸掉溶剂，得到的固体残物用甲醇萃取。蒸除提出物中的甲醇，将固体残物溶解于300毫升水中，然后装入填有25毫升CM-SephadexC-25（Na型）的柱子中，用水（300毫升）洗涤之后，用250毫升水和250毫升1MNaCl对柱子进行梯度洗脱。收集活性馏份，并真空蒸发至干燥。加入甲醇后，滤掉不溶的NaCl。重复两次上述程序。再将得到的滤液装入填有150毫升SephadexLH-20的柱子中，并用甲醇洗脱。收集活性馏份，并在真空下浓缩。将得到的固体残物（32.1毫克）在乙醇中重结晶，得到28.4毫克（37.8%产率）的10-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-甘氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐。

实施例3：10-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-L-丝氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐

将185.4克（368毫摩尔）8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐溶于400毫升甲醇中，并用氨气饱合之。加入阮内镍（70克）后，将该溶液于40℃下，氢气流（12公斤/厘米²）中进行搅拌过液。然后滤掉催化剂，蒸除溶剂。得到的固体残物被溶于500毫升水中，用2NHCl调节溶液的pH值至7.0。用500毫升水稀释调节过的溶液，并将其装入填有2.5×10³毫升的CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中，用5000毫升水洗涤之后，再用0.3～0.4MNaCl洗脱柱子。收集活性馏份，体积为35×10³毫升，再用4倍的水稀释。将稀释过的溶液装入填有1500毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中，用0.8MNaCl洗脱。收集活性馏分，体积为5000毫升，真空蒸发至干燥。将得到的固体残物与甲醇混合，滤掉不溶的NaCl。重复两次上述程序，将所得到的滤液装入填有12×10³毫升SephadexLH-20的柱子中，并用甲醇洗脱。收集活性馏份，在真空下浓缩之。得到的固体残物从甲醇-乙醇（1∶4）中结晶，得到115.44克（57.6%产率）的10-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-L-丝氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐。

实施例4：10-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-L-丝氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐

将由106.6毫克（0.206毫摩尔）8-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐和73.5毫克（0.309毫摩尔）氯化钴（CoCl₂·6H₂O）组成的混合物溶于3毫升甲醇中。向该冰冷却着的溶液中缓慢加入155.9毫克（4.12毫摩尔）硼氢化钠。室温下搅拌1小时后，加入10毫升水，然后用2NHCl使该混合物呈酸性，令黑色沉淀溶解。随后用2NNaOH将溶液的pH值调至7，蒸出溶剂。生成的固体残物再用甲醇萃取。蒸出萃取液中的甲醇，固体残物溶于300毫升水中，将溶液装入填有25毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中。用水（300毫升）洗之后，再用300毫升水和1MNaCl（300毫升）对柱子进行梯度洗脱。收集活性馏份，真空蒸发至干燥。将甲醇加到残物中，滤掉不溶的NaCl。重复上述程序两次。得到的滤液装入填有150毫升SephadexLH-20的柱子中，并用甲醇洗脱。收集活性馏份，在真空下浓缩，得到42.8毫克固体残物。令该残物从甲醇中结晶，得到40.35毫克（产率35.1%）的10-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-L-丝氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐。

实施例5：10-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐

将508毫克8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐溶于20毫升甲醇中，并用氨气饱和之。加入200毫克阮内镍后，该溶液于室温下，氢气流（9公斤/厘米²）中过夜进行催化还原。滤出催化剂，蒸出溶剂。向固体残物中加入10毫升水，用2NHCl将溶液的pH值调至7.0。调节后的溶液被装入填有100毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中，用100毫升水洗涤后，再用300毫升水和1MNaCl对柱子进行梯度洗脱。收集活性馏分后，于真空下浓缩。向固体残物中加入甲醇，滤掉不溶的NaCl。重复上述程序二次，将得到的滤液装入填有200毫升SephadexLH-20的柱子中，并用甲醇洗脱。收集活性馏分，再在真空下浓缩，得到342毫克（产率为62.1%）10-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷三盐酸盐。

参照实施例1：8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的合成

将由14.73克（57.2毫摩尔）4-（4-胍基苯基）丁酰基盐酸盐和7.90克（68.6毫摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于75毫升二甲基甲酰胺中。再向该冰冷过的溶液中滴加溶于75毫升二甲基甲酰胺中的14.15克（68.6毫摩尔）二环己基碳化二亚胺。然后令混合物在室温下搅拌过夜，滤掉沉淀的二环己基脲。将滤液滴加到在75毫升二甲基甲酰胺中含有12.81克（64.6毫摩尔）8-（N-甘氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷单盐酸盐的溶液中。生成的混合物于室温下搅拌1小时。蒸出溶剂后，将固体残物溶于1000毫升水中，再装入填有300毫升CM-SephadexC-25（钠型）（药用精细化学品公司）的柱子内。用1000毫升水洗涤之后，该柱子再用1500毫升水和1500毫升0.5MNaCl进行梯度洗脱。收集活性馏份，真空蒸发至干燥，向固体残物中加入甲醇，滤掉不溶的NaCl。重复上述程序二次。得到的滤液装入填有1000毫升SephadexLH-20（药用精细化学品公司）的柱子内。并用甲醇洗脱。收集活性馏份，在真空下浓缩，得到21.78克8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的浆液，产率为80.2%。

参照实施例2：8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的合成

将由25.24克（80.2毫摩尔）4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酸盐酸盐和11.1克（96.2毫摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于100毫升二甲基甲酰胺中，再向该冰冷过的溶液中滴加溶于100毫升二甲基甲酰胺中19.9克（96.2毫摩尔）二环己基碳化二亚胺的溶液。然后令混合物在室温下搅拌过夜，滤掉沉淀的二环己基脲。将滤液滴加到在80毫升二甲基甲酰胺内含有17.0克（120.3摩尔）N-2-氰基乙基-1，4-丁二胺的溶液中。生成的混合物于室温下搅拌3小时。蒸出溶剂后，将固体残物溶于500毫升0.5MNaCl中，装入填有2500毫升用0.5MNaCl调节的Diaion HP-200（Mitsubishi化学工业有限公司）的柱子中。柱子用8000毫升0.5MNaCl，3000毫升0.25MNaCl和1×10⁴毫升水洗涤，并用2×10⁴毫升水一甲醇（9∶1）和2×10⁴毫升水-甲醇（8∶2）洗脱。收集活性馏份，在真空下浓缩，得到25.74克8-｛〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的浆液，产率为67.7%。

参照实施例3：8-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的合成

将由109毫克（0.38毫摩尔）6-（4-胍基苯基）己酸盐酸盐和52.5毫升（0.46毫摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于1毫升二甲基甲酰胺中，再向该冰冷过的溶液中滴加溶于1毫升二甲基甲酰胺中的94.9毫克（0.46毫摩尔）二环己基碳化二亚胺。然后令混合物搅拌8小时。在与0.142毫升（1.01毫摩尔）的三乙胺混合后，将该混合物滴加到在1毫升二甲基甲酰胺中含有124.7毫克（0.46毫摩尔）的8-（N-甘氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的溶液中，再在室温下搅拌过夜。滤掉沉淀的二环己基脲。向滤液中加入20毫升水。后用1NHCl中和，并用水稀释至300毫升。随后将该稀释过的溶液装入填有25毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中。用250毫升水洗涤之后，该柱子再用250毫升水和250毫升0.5MNaCl进行梯度洗脱。收集活性馏份，真空蒸发至干燥，固体残物用甲醇萃取。蒸出萃取液中的甲醇，将固体残物溶于0.5MNaCl中，并装入填有25毫升用0.5MNaCl调节的Diaion HP-207（Mitsubishi化学工业有限公司）的柱子中。柱子用150毫升0.5MNaCl洗涤，并用300毫升水和200毫升甲醇洗脱。收集活性馏份，在真空下浓缩，得到69.4毫克8-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的浆液，产率为36.3%。

参照实施例4：8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的合成

将由107.5毫（417毫摩尔）4-（4-胍基苯基）丁酸盐酸盐和57.5克（500毫摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于500毫升二甲基甲酰胺中，再向该冰冷过的溶液中滴加溶于500毫升二甲基甲酰胺中的103.2克（500毫摩尔）二环己基碳化二亚胺。然后令混合物在室温下搅拌5小时。滤掉沉淀的二环己基脲。在与140.5毫升（1摩尔）三乙胺混合后将滤液滴加到在400毫升二甲基甲酰胺中含有150.6克（500毫摩尔）8-（N-L-丝氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的溶液中。生成的混合物于室温下搅拌过夜。蒸出溶剂后，将固体残物溶于5000毫升水中，再装入填有3000毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中。用5000毫升水洗涤之后，该柱子再用0.2～0.3MNaCl（1500毫升）进行洗脱。收集活性馏份，真空蒸发至干燥。向固体残物中加入甲醇，滤掉不溶的NaCl。重复上述程序二次。得到的滤液装入填有12×10³毫升Sephadex LH-20的柱子中。并用甲醇洗脱。收集活性馏份，在真空下浓缩，得到185.4克8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的浆液，产率为88.2%。

参照实施例5：8-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的合成。

将由114毫克（0.40毫摩尔）6-（4-胍基苯基）己酸盐酸盐和55.2毫克（0.48毫摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于1毫升二甲基甲酰胺中，向该冰冷过的溶液中滴加溶于1毫升二甲基甲酰胺中的123.8毫克（0.60毫摩尔）二环己基碳化二亚胺。混合物在室温下搅拌7小时。然后将该混合物滴加到在1毫升二甲基甲酰胺中含有182.6毫克（0.80毫摩尔）8-（N-L-丝氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷的溶液中。再在室温下搅拌2小时。滤掉沉淀的二环己基脲，滤液用20毫升水混合。混合物用1NHCl中和并用300毫升水稀释至300毫升体积。将稀释液装入填有25毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中。用250毫升水洗涤之后，用250毫升水和250毫升0.5MNaCl对柱子进行梯度洗脱。收集活性馏份，真空蒸发至干燥。固体残物用甲醇萃取。从萃取液中蒸出甲醇，固体残物溶于0.5MNaCl中。将得到的溶液装入填有25毫升用0.5MNaCl调节过的Diaion Sp207的柱子中。该柱子用150毫升0.5MNaCl洗涤，再用150毫升水和150毫升甲醇洗脱。收集活性组份，在真空下浓缩，得到106.6毫克8-｛N-〔6-（4-胍基苯基）己酰基〕-L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的浆液，产率51.5%。

参照实施例6：8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的合成。

将由11.03克（32.0毫摩尔）4-（4-胍基苯基）丁酰基-α-甲氧基甘氨酸盐酸盐和5.50克（48.0毫摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于50毫升二甲基甲酰胺中，向该溶液中滴加溶于50毫升二甲基甲酰胺中的10.09克（48毫摩尔）二环己基碳化二亚胺。混合物在室温下搅拌过夜。滤掉沉淀的二环己基脲，滤液被滴加到在50毫升二甲基甲酰胺中含有6.80克（48.0毫摩尔）N-2-氰基-乙基-1，4-丁二胺的溶液中，混合物在室温下搅拌过夜。溶剂在真空下浓缩，得到的固体残物溶于500毫升水中。将该溶液装入填有500毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中。用2000毫升水洗涤之后，用1500毫升水和1500毫升1MNaCl对柱子进行梯度洗脱。收集活性馏份，真空下浓缩。固体残物用甲醇萃取。并将固体残物溶于20毫升水中。得到的溶液再装入填有500毫升DiaionSp207的柱子中。该柱子用1500毫升水洗涤，再用水-甲醇（9∶1）洗脱。收集活性组份，在真空下浓缩，得到8.39克8-｛N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷单盐酸盐的浆液，产率52.0%。

参照实施例7：8-（N-甘氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷二盐酸盐的合成

将由231.1克（1.1摩尔）苄氧羰基甘氨酸和139.3 克（1.21摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于700毫升二噁烷中。向该冰冷过的溶液中滴加溶于400毫升二噁烷中的249.7克（1.21摩尔）二环己基碳化二亚胺。然后混合物在室温下搅拌过夜。滤出沉淀的二环己基脲，从滤液中蒸出溶剂。将固体残物溶于500毫升乙酸乙酯中，再滴加到溶于1000毫升乙酸乙酯的233.0（1.65摩尔）N-2-氰基-乙基-1，4-丁二胺中。混合物在室温下搅拌过夜。再加入2000毫升饱和的NaHCO₃水溶液。用乙酸乙酯（1000毫升）三次萃取该混合物。合并乙酸乙酯层，用饱和的NaCl水溶液洗涤两次，并用Na₂SO₄干燥。蒸出溶剂，得到的固体残物（266.6克）溶解于500毫升乙醇中，再加入浓盐酸，直至溶液呈酸性。滤出沉淀的催化剂，得到195.9克8-（苄氧羰基甘氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷盐酸盐。产率48.3%，熔点：151～153℃。将所得到的一部分（22.8克，68.6毫摩尔）8-（苄氧羰基甘氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷盐酸盐溶解于275毫升甲醇中。加入10%Pd-C（1.5克）后，溶液在氢气流下搅拌两天。然后滤出催化剂，滤液在真空下浓缩，得到12.8克8-（N-甘氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷单盐酸盐浆液。该产品立即作为后续反应的原料。

参照实施例8：8-（N-L-丝氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷盐酸盐的合成

将由598克（2.5摩尔）苄氧羰基-L-丝氨酸和317克（2.75摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于2500毫升二噁烷中。向该冰冷过的溶液中滴加溶于2000毫升二噁烷中的576克（2.75摩尔）二环己基碳化二亚胺。然后混合物在室温下搅拌过夜。滤出沉淀的二环己基脲。滤液滴加到溶于1000毫升二噁烷的530克（3.75摩尔）N-2-氰基-乙基-1，4-丁二胺溶液中。混合物在室温下搅拌过夜。将1500毫升水加入到该反应混合物中，溶液在真空下浓缩。再向生成的固体残物中加入2500毫升饱和的NaHCO₃水溶液。用乙酸乙酯（1500毫升）六次萃取该混合物。合并乙酸乙酯层，用饱和的NaCl水溶液洗涤两次，并用无水Na₂SO₄干燥。蒸出溶剂，得到的固体残物（计算700克）溶解于2500毫升乙醇中，再加入用盐酸气饱和的乙醇，直至溶液呈酸性。滤出沉淀的催化剂，得到693克8-（苄氧羰基-L-丝氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷盐酸盐。产率69.5%，熔点：151～153℃。〔α〕²⁵-4.6°（C＝1，CH₃OH）。将所得到的350克（0.88摩尔）8-（苄氧羰基-L-丝氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷盐酸盐溶解于4000毫升甲醇中。加入8.75克10%Pd-C后，溶液在氢气流下搅拌两天。然后滤出催化剂，滤液在真空下浓缩，得到233克8-（N-丝氨酰）-1-氰基-3，8-二氮辛烷单盐酸盐浆液。该产品立即作为后续反应的原料。

参照实施例9：〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酸盐酸盐的合成

将由35.0克（136毫摩尔）4-（4-胍基苯基）丁酸盐酸盐和18.8克（163毫摩尔）N-羟基琥珀酰亚胺组成的混合物溶于150毫升二甲基甲酰胺中，向该冰冷过的溶液中滴加溶于100毫升二甲基甲酰胺中的33.6克（163毫摩尔）二环己基碳化二亚胺。然后在室温下搅拌混合物5小时。滤掉沉淀的二环己基脲。将滤液滴加到在200毫升二甲基甲酰胺中含有22.8克（163毫摩尔）甘氨酸乙酯盐酸盐和24.8毫升三乙胺的溶液中，得到的混合物在室温下搅拌过夜。蒸出溶剂，剩余固体溶于500毫升水中。将该溶液装入填有2500毫升Diaion HP-20的柱子中，用水洗涤之后，再用25%的甲醇水溶液洗脱。收集活性馏份，真空下浓缩，得到38.0克〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酸乙酯盐酸盐的浆液，产率为81.5%。

将所得到的38克（110毫摩尔）上述化合物溶于400毫升甲醇中，向该冰冷过的溶液加入133毫升1NNaOH，并于室温下搅拌1小时。调节该混合物的pH值为7.0，真空下蒸出甲醇。用过滤器回收沉淀物，得到22.8克〔4-（4-脲基苯基）丁酰基〕甘氨酸，产率74%，熔点257℃（伴有分解），将部分（22.3克，80毫摩尔）上述化合物溶于80毫升1NHCl中，真空蒸发至干燥，得到25.2克〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕甘氨酸盐酸盐。

参照实施例10：N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酸盐酸盐的合成。

将51.6克（0.2摩尔）4-（4-胍基苯基）丁酸溶于300毫升甲醇中，加入2克Dowex50W×4（H型）（道化学公司）之后，令溶液沸腾5小时，再加入活性碳并搅拌混合物30分钟。滤出Dowex50W×4和活性碳。滤液在真空下浓缩，得到50.69克（0.187摩尔）〔4-（4-胍基苯基）丁酸甲酯盐酸盐，产率93.3%。

将所得到的化合物（50.69克）溶于500毫升28%的氨水中，溶液在室温下搅拌过夜。反应混合物在真空下浓缩，固体残物溶于200毫升水中。再装入有1000毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中，用 5000毫升水洗过之后再用0.5MNaCl洗脱。收集活性馏分，真空下浓缩。固体残物溶于100毫升水中。再将此溶液装入填有100毫升Diaion Sp207的柱子中，用1200毫升水洗之后，用水-甲醇（9∶1）洗脱。真空下浓缩活性馏份，得到41.94克（0.154摩尔）4-（4-胍基苯基）丁酰胺盐酸盐，产率77.2%。

将所得到的部分上述化合物（25.7克，0.1摩尔）溶于257毫升二甲基甲酰胺中，再加入10.1克（0.11摩尔）二羟乙酸和257毫升丙酮。将该溶液在油浴（90℃）中回流2.5小时。蒸出溶剂，得到的固体残物溶于200毫升水中，并装入填有1250毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中，然后用水洗脱。收集活性馏份，真空下浓缩，得到22.55克（0.0766摩尔）N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-羟基甘氨酸，产率为76.6%。

将部分（22.0克，0.748摩尔）上述得到的化合物溶于580毫升无水甲醇中。向该冰冷过的溶液中加入10毫升浓硫酸，令混合物在室温下搅拌3小时。向反应溶液中加入1500毫升水，用2NNaOH调节混合物的pH值为11.0。2小时以后，调节pH值至6.5并于真空下浓缩。得到的残物装入填有1250毫升CM-SephadexC-25（钠型）的柱子中，用水洗脱。收集活性馏份，真空下浓缩，得到19.33克（62.7毫摩尔）N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酸，产率为83.8%。

将19.33克（62.7毫摩尔）上述得到的化合物溶于62.7毫升1NHCl中。溶液在真空下浓缩，得到19.84克N-〔4-（4-胍基苯基）丁酰基〕-α-甲氧基甘氨酸盐酸盐。

在制备带有次苯基的斯伯格埃林类化合物的先有技术中，必须合成出亚精胺的选择性氨基保护型，然后消除保护基。根据本发明，该种化合物可采用较短的路线，由廉价的原料（N-2-氰基乙基-1，4-丁二胺合成出来。

因此本发明提供了一种制备带有次苯基的斯伯格埃林类化合物的经济的方法。

表1

化合物号 n R 名称

1 3 H 10-｛N-[4-（4-胍基苯基）丁酰基]甘

氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷

2 5 H 10-｛N-[6-（4-胍基苯基）己酰基]甘

氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷

3 3 CH₂OH 10-｛N-[4-（4-胍基苯基）丁酰基]-

L-丝氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷

4 5 CH₂OH 10-｛N-[6-（4-胍基苯基）己酰基]-

L-丝氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷

5 3 OCH₃10-｛N-[4-（4-胍基苯基）丁酰基]-

α-甲氧基甘氨酰｝-1，5，10-三氮癸烷

表2

化合物号 IR吸收光谱质子NMR谱〔α〕²⁴ _D

δ值

3310，2950，1660， 1.4-2.5（CH₂x5），

1580，1550，1515， 2.66（CH₂），

1 1460，1410，1255， 2.9-3.4（NCH₂x4）， -

1160，1110，1030， 3.78（CH₂），

830 7.0-7.4（CHx4）

3430，2950，2870， 1.3-2.0（CH₂x5），

1680，1660，1580， 2.0-2.4（CH₂x2），

2 1560，1520，1470， 2.62（CH₂）， -

1420，1260 2.9-3.3（NCH₂x4），

3.79（CH₂），

7.0-7.4（CHx4）

3380，2925，1630， 1.4-2.5（CH₂x5），

1570，1500，1450， 2.67（CH₂），

3 1390，1250，1150， 2.9-3.4（NCH₂x4）， -13.3°

1060 3.75（CH₂），（C＝1，H₂O）

4.33（CH），

7.0-7.5（CHx4）

3460，2960，2895， 1.3-2.0（CH₂x5），

2710，1690，1670， 2.0-2.5（CH₂x2），

4 1595，1570，1540， 2.70（CH₂）， -12.3°

1470，1270，1090 2.9-3.4（NCH₂x4），（C＝1，H₂O）

3.78（CH₂），4.36（CH），

7.1-7.4（CHx4）

3400，2950，2860， 1.5-2.2（CH₂x3），

2840，2275，1670， 2.30（CH₂），2.73（CH₂），

5 1610，1580，1540， 2.9-3.5（NCH₂x3，CH₂）， -

1520，1470，1460， 3.35（OCH₃），5.29（CH），

1260，1200，1150， 7.20（CHx2），7.30（CHx2）

1100，1020，570

表3

化合物号 n R 名称

1 3 H 8-｛N-[4-（4-胍基苯基）丁酰基]甘

氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷

2 5 H 8-｛N-[6-（4-胍基苯基）己酰基]甘

氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷

3 3 CH₂OH 8-｛N-[4-（4-胍基苯基）丁酰基]-

L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷

4 5 CH₂OH 8-｛N-[6-（4-胍基苯基）己酰基]-

L-丝氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷

5 3 OCH₃8-｛N-[4-（4-胍基苯基）丁酰基]-

2-甲氧基甘氨酰｝-1-氰基-3，8-二氮辛烷

表4

化合物号 IR吸收光谱质子NMR谱〔α〕²⁵ _D

δ值

3450，2950，2870， 1.4-2.2（CH₂x3）

2270，1650，1630， 2.32（CH₂），2.69（CH₂）

1580，1560，1520， 2.74（CH₂），

1 1460，1420，1260， 2.9-3.4（NCH₂x3）， -

1160，1030，830， 3.80（CH₂），7.20（CHx2），

580 7.30（CHx2）

3400，2950，2860， 1.3-2.0（CH₂x5），

2810，2275，1670， 2.34（CH₂），2.68（CH₂），

2 1650，1640，1580， 3.08（CH₂）， -

1560，1520，1470， 2.9-3.5（NCH₂x3），

1460，1420，1260， 3.86（CH₂），

1060，1030，840，

670，630， 7.1-7.4（CHx4）

3350，2950，2850， 1.4-2.2（CH₂x3），

2770，2250，1650， 2.39（CH₂），2.73（CH₂），

3 1630，1575，1540， 3.00（CH₂）， -12.1

1505，1450，1400， 2.9-3.6 NCH₂x3），（C＝1，H₂O）

1250，1060，820， 3.79（CH₂），4.37（CH），

560，520 7.20（CHx2），

7.30（CHx2），

3440，2955，2880， 1.2-1.9（CH₂x5），

2280，1650，1630， 2.26（CH₂），2.59（CH₂），

4 1580，1560，1520， 2.9-3.4（NCH₂x3）， -12.1

1480，1460，1350， 3.74（CH₂），4.30（CH），（C＝1，H₂O）

1270，1150，1070， 7.1-7.4（CHx4），

1040，990，960，

920，620 2.97（CH₂）

3400，2950，2860， 1.5-2.2（CH₂x3），

2840，2275，1670， 2.30（CH₂），2.73（CH₂），

5 1610，1580，1540， 2.9-3.5（NCH₂x3）， -

1520，1470，1460， 3.35（OCH₂），5.29（CH），

1260，1200，1150， 7.20（CHx2），

1100，1020，570 7.30（CHx2）

Claims

1、一种制备由通式Ⅰ表示的带有次苯基的斯伯格埃林类化合物或其盐的方法，

其中R是氢原子，C_1-3低级羟烷基或C_1-3低级烷氧基；n是3～5的整数，所说的该方法包括将具有通式Ⅱ的化合物或其盐还原。

[Ⅱ]

其中R和n的定义同上。

2、根据权利要求1的方法，其中的R是羟甲基。

3、根据权利要求1的方法，其中的n是3或5。

4、根据权利要求1的方法，其中的n是3，R是氢原子或羟甲基。