CN100591330C - 一种氯法拉滨冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种氯法拉滨冻干粉针剂及其制备方法，含有氯法拉滨以及至少一种生物可接受的赋形剂，氯法拉滨和赋形剂的重量配比为1∶10～50，所述的赋形剂选自甘露醇和乳糖中的一种，优选的是甘露醇。其制备方法为：取氯法拉滨加注射用水使溶，再加入赋形剂，搅拌混匀，过滤，灌装，部分加塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分四阶段升温升华干燥，压塞，出箱，轧口。

Description

一种氯法拉滨冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明一种氯法拉滨冻干粉针剂及其制备方法涉及的是一种氯法拉滨的冻干制剂及其制备方法，通过本发明技术方案制备的氯法拉滨冻干粉针剂用于治疗复发和难治的儿童急性淋巴细胞白血病。

背景技术

白血病是血液系统的恶性肿瘤，发病率约2-4/10万人口，小儿白血病居小儿各种恶性肿瘤的首位。好发年龄从出生到14岁，波及整个小儿年龄时期，但以2-5岁多见。是15岁以下儿童主要死亡原因之一。根据发病的急缓、临床、血液及骨髓表现等，一般分为急性与慢性。其中，以急性白血病为主，占小儿白血病总数的97％。急性白血病又可分为急性淋巴细胞白血病及急性非淋巴细胞白血病。前者占70-85％，白血病在我国和世界各地都不少见。在我国各种恶性肿瘤死亡率中居第六或第七位。

现在国内对小儿白血病的治疗已经有相当的水平，一般情况下，急性髓系白血病完全缓解率为60％，成人急性淋巴细胞性白血病完全缓解率可达70％，儿童急性淋巴细胞白血病完全缓解率可达90％。缓解期大多无症状，常可正常工作和生活，但化疗缓解后易复发、病情恶化、免疫力破坏、全身衰竭，二次化疗白细胞产生耐药，给治疗带来难度，这种病人生存期大大缩短，急性白血病不治疗，一般生存期3-6个月，慢性粒细胞白血病生存期一般3-4，年急变后中位生存期只有4个月。

尽管白血病的治疗取得了一些进步，但抵抗性的形成仍是儿童死于癌症的主要原因，因此必需寻找新的抗白血病药物和治疗方法。

氯法拉滨(clofarabin)，由美国阿拉巴马州伯明翰市南方研究所研制，并授权英国Bioenvision公司和美国LLex Oncology公司共同开发。经多项临床研究表明，氯法拉滨对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓系白血病(AML)确有较好的疗效，可用于顽固性和复发性的ALL和AML，且耐受性良好。2004年12月28日已被美国FDA批准上市，商品名Clolar，主要用于治疗复发和难治的ALL。

由于氯法拉滨微溶于水，溶解度仅为1.5～2.0mg/ml，其水溶液在放置过程中会有微粒析出。美国上市制剂Clolar注射液为20mg氯法拉滨溶于20ml注射用水中，并用氯化钠调节等渗，静脉输注前需先用0.2μm微孔滤膜过滤，再用5％葡萄糖输液或0.9％氯化钠输液稀释，给临床应用带来了很大不便。另外，国外注射液采用西林瓶分装20ml氯法拉滨溶液再灭菌的制剂工艺，由于西林瓶壁较普通安瓿厚很多，传热差，20ml又属于较大的体积，要保证分装的氯法拉滨溶液无菌需要较高灭菌温度，过高的灭菌温度除使受热易变形铝塑组合盖存在变形的可能，还有可能使氯法拉滨发生降解。同时，氯法拉滨的溶解度受温度影响明显，在冬季气候很冷的北方地区的储存过程中就有可能析出，导致药物的浪费甚至对临床用药安全带来隐患。因此，如何制备溶解性和稳定性更好的氯法拉滨注射剂一直是人们试图解决的问题。

中国专利200610038329.2，200610045474.3及200610038023.7提出了在处方中加入大剂量的增溶剂或者用特定的酸提高氯法拉滨溶解度的制剂方案，但众所周知，增溶剂吐温、聚乙二醇、泊洛沙姆、丙二醇和聚氧乙烯蓖麻油等都有一定的溶血性，有的增溶剂如聚氧乙烯蓖麻油还会引起严重的过敏反应，加入过多的酸会增加注射液对人体的刺激性，引发的疼痛往往需要额外加入苯甲醇。这些制剂方案在解决原制剂缺陷的同时带来了新的缺陷，其他公知技术也没有改善这些缺陷的建议。

发明内容

本发明的目的是针对以上不足之处提供一种氯法拉滨冻干粉针剂，通过该方案制备的氯法拉滨冻干粉针剂，不需要加入增溶剂，也不需要用过量的酸来提高氯法拉滨溶解度，具有最小的人体刺激性和最大的临床用药安全性，采用非最终灭菌的无菌过滤工艺作为无菌保障，不需高温灭菌，也没有高温灭菌带来的铝塑组合盖存变形和氯法拉滨的降解，临床使用方便，复溶迅速，稳定性好，不会析出。

要想解决国外氯法拉滨注射液静脉高温灭菌时铝塑组合盖可能变形、氯法拉滨可能降解以及储存过程中可能析出导致的药物浪费和临床用药安全隐患等问题，最好的办法就是将氯法拉滨制成冻干制剂。通常的，将溶解性差的药物制备成冻干制剂，公知技术往往是采用加入表面活性剂等增溶剂以及用辅料对药物进行包裹等手段增溶，这类方法往往带来溶血和过敏反应，用辅料对药物进行包裹还会改变药物的体内行为；或者是将溶液调节到溶解性能最佳的酸碱度，这类方法有可能超出人体的酸碱耐受限度而导致较大的刺激和疼痛；又或者是配备适宜的专用溶剂，这类方法使得生产和包装成本大大增加，临床使用变得不便，专用溶剂中含有的许多有机溶剂同时还会导致溶血和刺激性。经过研究认为，氯法拉滨制成冻干的主要困难是如何将氯法拉滨溶解在适宜冻干的体积的溶液中(解决氯法拉滨溶解性差的问题)，如何防止灌装于西林瓶中的氯法拉滨溶液在冻干过程中析出导致分层(解决氯法拉滨溶解度受温度影响明显低温易析出的问题)，以及冻干成形后复溶的问题。通过试验发现，采用适当的体积，这个体积通常是8～14ml，可以保证氯法拉滨溶液在灌装过程中不会析出，但冻干过程中氯法拉滨在溶液完全固化之前便几乎全部析出，冻干后不成形，加入20ml注射用水也无法复溶。进一步的试验发现，每支加入适量的甘露醇或乳糖，可以减缓氯法拉滨从溶液析出，但冻干过程中氯法拉滨在溶液完全固化之前仍大量析出，冻干后分层，加入20ml注射用水也无法复溶。最后，本发明研究发现，氯法拉滨冻干无法复溶不是溶解度不够，而是采用普通方法冻干所得粉末溶解速度过于缓慢所至。通过试验，将氯法拉滨轻微加热溶解于注射用水(8～14ml/支)中，再加入不低于200mg/支的甘露醇或乳糖，搅拌使其溶解并混合均匀，滤液灌装于25ml或30ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度3小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。所得的氯法拉滨冻干粉针冻干过程中无氯法拉滨析出，冻干后成形良好，获得了溶解性能较常规冻干结晶优良的晶型，因而加入注射用水迅速复溶，彻底解决了氯法拉滨注射剂的上述问题。

一种氯法拉滨冻干粉针剂及其制备方法是采用以下方案实现的：

一种氯法拉滨冻干粉针剂，含有活性成分氯法拉滨以及至少一种生物可接受的赋形剂，氯法拉滨和生物可接受的赋形剂的重量配比为1∶10～50。

所述的氯法拉滨和生物可接受的赋形剂的重量配比优选为1∶15～30。

所述的氯法拉滨的化学名称为：2-氯-9-(2-去氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃)-9H-嘌呤-6-胺，结构式为：

分子式为：C₁₀H₁₁ClFN₅O₃          分子量为：303.7

所述的生物可接受的赋形剂选自甘露醇和乳糖中的一种，优选的是甘露醇。

一种氯法拉滨冻干粉针剂的制备方法，其特征在于其制备方法为：

取氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入赋形剂，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度3～5小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装；

所述的氯法拉滨和生物可接受的赋形剂的重量配比为1∶10～50，优选的是1∶15～30。

所述的生物可接受的赋形剂选自甘露醇和乳糖中的一种，优选的是甘露醇。

所述的氯法拉滨和注射用水的重量配比为1∶400～700，优选的是1∶500。

所述的西林瓶体积选自25ml和30ml。

所述的氯法拉滨冻干粉针剂，在使用大剂量甘露醇作为赋形剂时，还可以加入氯化钠以防止内容物在-20～-25℃因氢键断裂急剧膨胀导致的炸瓶。

所述氯化钠占所述冻干粉针剂重量的1～5％。

本发明一种氯法拉滨冻干粉针剂，通过该方案不需要加入增溶剂，没有增溶剂吐温、聚乙二醇、泊洛沙姆、丙二醇和聚氧乙烯蓖麻油等带来的溶血性和过敏反应，也不需要用过量的酸来提高氯法拉滨溶解度，避免了加入过多的酸引发刺激性和疼痛。由于采用的都是最常规的安全性有充分保证的注射级辅料，因而有最小的人体刺激性和最大的临床用药安全性。采用非最终灭菌的无菌过滤工艺作为无菌保障，不需高温灭菌，避免了高温灭菌带来的铝塑组合盖存变形和氯法拉滨的降解。采用特殊的冻干工艺，冻干过程中无氯法拉滨析出，冻干后成形良好，获得了溶解性能较常规冻干结晶优良的晶型，复溶迅速，稳定性好，复溶输液不会析出，临床使用方便。本发明大大提高了氯法拉滨冻干粉针剂在制备过程中的稳定性，制备所得的氯法拉滨冻干粉针剂有关物质含量更低，质量均一稳定，贮存和运输更加方便。本发明制备工艺简单，方便可行，重复性好，很容易实现工业化大生产，冻干时间短，废品率低，灯检剔废难度低，节约人力，较短的生产周期、较低的废品率和更低的人力成本，使生产成本大幅度降低，作为复发和难治的儿童急性淋巴细胞白血病临床治疗的又一个可靠选择，可以产生可观的经济和社会效益。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步说明本发明。应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。

实施例1：

普通方法制备氯法拉滨冻干粉针剂(-25℃)

处方

氯法拉滨        20g

甘露醇          500g

注射用水 加至  15000ml

                             

共制成          1000瓶

取处方量氯法拉滨置容器中，加80％量的注射用水，搅拌使其溶解并混合均匀，再加入处方量甘露醇，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后加入注射用水定容至全量，在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，利用导热油对板层制冷，使品温下降，当样品达到共熔点时(约-10℃)，继续冷冻至品温低于-25℃时，停止板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，开始升温升华，品温控制在每小时上升2～3℃，当品温升达10℃以上时，使品温每小时上升4～5℃，最后干燥温度品温为35℃，保持该温度3小时后，压塞，出箱，轧口。

在冻干过程中通过观察窗发现氯法拉滨在预冻阶段溶液完全固化之前大量析出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂分层，加入20ml注射用水无法复溶。有极少量炸瓶。

实施例2：

普通方法制备氯法拉滨冻干粉针剂(-40℃)

处方

氯法拉滨        20g

甘露醇          800g

注射用水 加至   15000ml

                             

共制成          1000瓶

取处方量氯法拉滨置容器中，加80％量的注射用水，搅拌使其溶解并混合均匀，再加入处方量甘露醇，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后加入注射用水定容至全量，在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，送入冻干机，关闭箱门，开启冻干机，利用导热油对板层制冷，使品温下降，当样品达到共熔点时(约-10℃)，继续冷冻至品温低于-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，开始升温升华，品温控制在每小时上升2～3℃，当品温升达10℃以上时，使品温每小时上升4～5℃，最后干燥温度品温为35℃，保持该温度3小时后，压塞，出箱，轧口。

在冻干过程中通过观察窗发现氯法拉滨在预冻阶段溶液完全固化之前大量析出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂分层，加入20ml注射用水无法复溶。有少量炸瓶。

实施例3：

处方

氯法拉滨         20g

甘露醇           200g

注射用水 加至    8000ml

                            

共制成           1000瓶

取处方量氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入处方量甘露醇，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的25ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度3小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。

在冻干过程中通过观察窗发现在预冻阶段溶液完全固化之前无析氯法拉滨出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂外形良好，加入20ml注射用水迅速复溶。无炸瓶。

实施例4：

处方

氯法拉滨       20g

乳糖           200g

注射用水 加至  8000ml

                            

共制成         1000瓶

取处方量氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入处方量乳糖，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的25ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度3小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。

在冻干过程中通过观察窗发现在预冻阶段溶液完全固化之前无析氯法拉滨出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂外形良好，加入20ml注射用水迅速复溶。

实施例5：

处方

氯法拉滨          20g

甘露醇            500g

注射用水 加至     10000ml

                               

共制成            1000瓶

取处方量氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入处方量甘露醇，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的30ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度4小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。

在冻干过程中通过观察窗发现在预冻阶段溶液完全固化之前无析氯法拉滨出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂外形良好，加入20ml注射用水迅速复溶。有极少量炸瓶。

实施例6：

处方

氯法拉滨       20g

甘露醇         500g

氯化钠         25g

注射用水 加至  10000ml

                             

共制成         1000瓶

取处方量氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入处方量甘露醇和氯化钠，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的30ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度4小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。

在冻干过程中通过观察窗发现在预冻阶段溶液完全固化之前无析氯法拉滨出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂外形良好，加入20ml注射用水迅速复溶。无炸瓶。

实施例7：

处方

氯法拉滨      20g

甘露醇        1000g

氯化纳        10g

注射用水 加至 14000ml

                             

共制成        1000瓶

取处方量氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入处方量甘露醇和氯化纳，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的30ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度5小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。

在冻干过程中通过观察窗发现在预冻阶段溶液完全固化之前无析氯法拉滨出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂外形良好，加入20ml注射用水迅速复溶。无炸瓶。

实施例8：

处方

氯法拉滨       20g

甘露醇         800g

氯化纳         20g

注射用水 加至  10000ml

                           

共制成         1000瓶

取处方量氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入处方量甘露醇和氯化纳，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的30ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度5小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。

在冻干过程中通过观察窗发现在预冻阶段溶液完全固化之前无析氯法拉滨出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂外形良好，加入20ml注射用水迅速复溶。无炸瓶。

实施例9：

处方

氯法拉滨       20g

乳糖           800g

注射用水 加至  10000ml

                            

共制成         1000瓶

取处方量氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入处方量乳糖，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的30ml西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度5小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装即得氯法拉滨冻干粉针剂。

在冻干过程中通过观察窗发现在预冻阶段溶液完全固化之前无析氯法拉滨出，冻干后所得氯法拉滨冻干粉针剂外形良好，加入20ml注射用水迅速复溶。

实施例10：

氯法拉滨冻干粉针剂有关物质测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部)测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(12.5∶87.5)为流动相；柱温为35℃，检测波长为263nm。精密称取氯法拉滨对照品、α-异构体适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各含0.05mg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，氯法拉滨峰与α-异构体峰之间分离度符合规定，理论塔板数以氯法拉滨峰计不低于2000。

取氯法拉滨冻干粉针剂内容物适量，加流动相溶解并制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氯法拉滨峰的峰高约为满量程的20％～30％。精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品色谱图至主成分峰保留时间的4～5倍。供试品溶液色谱图中如显杂质峰，量取除辅料峰外各杂质峰面积之和，计算即得氯法拉滨冻干粉针剂有关物质百分含量。

实施例11：

氯法拉滨冻干粉针剂含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部)测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(12.5∶87.5)为流动相；柱温为35℃，检测波长为263nm。精密称取氯法拉滨对照品、α-异构体适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各含0.05mg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，氯法拉滨峰与α-异构体峰之间分离度符合规定，理论塔板数以氯法拉滨峰计不低于2000。

取氯法拉滨冻干粉针剂内容物，混匀，精密称取适量，加流动相溶解并稀释成每1ml中约含0.01mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氯法拉滨对照品适量，加流动相稀释成每1ml中含0.01mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得氯法拉滨冻干粉针剂的含量。

实施例12：

氯法拉滨冻干粉针剂水分测定

取氯法拉滨冻干粉针剂内容物，照水分测定法(中国药典2005年版二部)测定。

实施例13：

取所述氯法拉滨冻干粉针剂，按实施例10、实施例11、及实施例12进行加速(40℃±2℃、RH75％±5％)和长期(25℃±2℃、RH60％±10％)条件下放置进行稳定性试验考察，实验结果见表1、表2。

         表1 注射用氯法拉滨加速试验考察结果

       表2 注射用氯法拉滨长期试验考察结果

试验结果表明，所述氯法拉滨冻干粉针剂经加速试验(40℃±2℃、RH75％±5％)放置6个月，经长期试验(25℃±2℃、RH60％±10％)留样6个月，各项考察指标，包括性状、溶液的颜色和澄清度、酸度、含量、有关物质、无菌等与放置前比较均无明显变化，质量稳定可靠。

实施例14：

取所述氯法拉滨冻干粉针剂经南京医科大学溶血试验，确定氯法拉滨冻干粉针剂在试管内终浓度为0.04mg/ml时对兔红细胞无溶血现象，临床使用对人体不会造成溶血。

实施例15：

取所述氯法拉滨冻干粉针剂经南京医科大学豚鼠全身主动过敏试验，未见动物有抓鼻、喷嚏、竖毛、抽搐等过敏症状发生，表明氯法拉滨冻干粉针剂对豚鼠无明显致敏作用。

实施例16：

取所述氯法拉滨冻干粉针剂经南京医科大学对兔血管壁刺激试验，肉眼观察，给药侧耳缘静脉未见充血水肿等刺激现象。组织学检查显示，给药侧静脉内皮细胞结构基本完整，无炎性细胞浸润等病理改变。表明氯法拉滨冻干粉针剂对兔耳缘静脉无明显刺激反应。

Claims (1)

1、一种氯法拉滨冻干粉针剂，其特征在于含有活性成分氯法拉滨以及至少一种生物可接受的赋形剂，氯法拉滨和生物可接受的赋形剂的重量配比为1∶15～30；

所述的生物可接受的赋形剂选自甘露醇和乳糖中的一种；

其制备方法为：

取氯法拉滨置无菌容器中，加入注射用水，轻微加热使溶解，再加入赋形剂，搅拌使其溶解并混合均匀，测定中间体含量，合格后在无菌条件下，用0.22μm微孔滤膜过滤至澄明，滤液灌装于无菌的西林瓶中，部分塞上丁基橡胶塞，装盘，预先开启冻干机，利用导热油对板层制冷，直至板层温度达到-40～-45℃，迅速将灌装于无菌西林瓶中的氯法拉滨溶液送入冻干机，关闭箱门，并保持板层温度-40～-45℃使品温下降，当样品达到-40℃时，停止板冷，开启冷凝器，同时利用掺冷继续保持该品温3小时，当冷凝器温度达-40℃时，开启真空系统，保温结束后开始分阶段升温升华，第一阶段升华迅速将板层温度升至-10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到-20℃时开始第二阶段升华，迅速将板层温度升至10℃，其间将前箱真空控制在15～20Pa之间，当品温达到0℃时开始第三阶段升华，迅速将板层温度升至35℃，其间将前箱真空控制在10～15Pa之间，当品温达到30℃开始解析干燥，真空不控制，保持该温度3～5小时，当关闭中隔阀前箱真空无明显下降后后，压塞，出箱，轧口，质检，包装；

所述的氯法拉滨和注射用水的重量配比为1∶400～700。