CN100586474C - 药物组合物、试剂盒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种已知的细胞因子融合蛋白(IL-2/Fc)和一种中药复方861它们的药物组合，含有它们的药物组合物和试剂盒，以及它们作为免疫增强剂应用于增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受。
Description
技术领域
本发明涉及乙型肝炎治疗领域，更具体地，本发明涉及一种细胞因子融合蛋白IL-2/Fc和一种中药复方861它们的药物组合，含有它们的药物组合物和试剂盒，以及它们作为免疫增强剂(特别是增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受的免疫增强剂)的应用。
背景技术
乙型肝炎是一种全球性感染性疾病，在我国尤为多发，据世界卫生组织之资料，全世界约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿为慢性HBV感染者，每年有100万人死于HBV感染。我国人口中乙肝感染率为57％，HBsAg阳性率为9.09％，每年死于HBV相关疾病约30万人。因而，乙型肝炎是一种对人民健康危害很大的疾病。然而，对于慢性乙型肝炎的治疗迄今仍是很困难的，尤其是以下几种情况：
1.对于乙肝控制来说，无疑新生儿乙肝疫苗预防注射很重要，但是目前应用疫苗阻断母婴传播的保护率为87.8％，也就是说12.2％的注射疫苗不发生免疫应答(即免疫逃逸)，不产生保护性乙肝抗体，他们仍会受感染乃至传染他人，这是必须设法解决的。
2.我国乙肝的传染主要是经母婴传播，在15-20岁以前，患者基本上属于免疫耐受期，即体内虽有病毒复制，但不发生免疫反应，治疗往往无效，因而其中90％发展为慢性肝炎；
3.慢性乙肝发展至第三期即非活动性病毒携带状态期，这一时期由于机体免疫能力低下，病毒呈低复制，而难以清除，若干年后病毒可能又再度活跃导致病情恶化，也难治疗；
4.现有的抗病毒治疗效果有限，干扰素对乙肝的清除率不过30％。近年来出现的核苷类似物如拉米呋定，阿德福韦，LdT等等，均只能抑制病毒复制，而不能消除乙肝病毒复制的模版cccDNA，病毒最终仍将因此而再度复制。
由于细胞因子在免疫反应中起着很重要的调节作用，因而使用细胞因子以增强免疫接种所诱发的免疫反应，已引起极大的重视，并获得很有希望的实验结果。然而，使用细胞因子以增强免疫应答，并应用于临床，至今并没有取得实质性的、突破性的进展，而且很多体外实验的明显结果往往在体内难以得到重复与验证。
究其原因，细胞因子自身短暂的血浆循环半衰期是关键性的障碍。大多数细胞因子应免疫刺激而分泌并发挥其调节作用。但它们的血浆半衰期都很短暂，从生理角度这是一种机体避免过度的免疫反应的保护机制。其中以白介素2(IL-2)为例，其体内循环半衰期仅仅为6.9分钟。因而使用生物白介素2，或重组合成白介素2于体内，难以达到稳定的有效的血浆浓度，也达不到预期的白介素2所能介导的免疫增强及调节的效果。
虽然目前应用的乙肝疫苗接种已取得明显的预防乙肝传播的效果。然而仍有10～20％的经免疫接种的人群，未能产生有效的免疫应答反应。称为“免疫逃逸”。目前尚未有一种有效的方法能使“免疫逃逸”的人群产生有效的免疫反应，从而使这些易感人群得不到免疫保护。同时我们还面临着更严峻的挑战，即占我国及部分亚洲国家的总人口5～10％的人群为乙型肝炎病毒携带者。这些患者为乙型肝炎的携带者，也是传播者，因其乙肝病毒表面抗原检测为阳性，又称“澳抗阳性”患者。大多数“澳抗阳性”患者，虽携带乙肝病毒，但体内未产生保护性的免疫应答反应，病毒与患者处于一种“和平共处”的状态，也称免疫耐受状态。乙肝病毒携带者即是乙肝病毒的潜在传染源，同时长期病毒在体内复制，也引起慢性肝脏细胞炎症坏死、纤维化，而导致肝硬变乃至肝癌。目前尚无有效的广泛使用的方法能打破“免疫耐受”，激活机体保护性的针对乙肝病毒的免疫应答，同时保护肝脏细胞及功能，因而也不能达到清除病毒，使患者痊愈的目的。
基于上述，可见当前国内外对乙肝的预防和治疗，主要难题在于如何解决乙肝感染者的免疫应答低下或免疫耐受。
发明内容
针对上述研究背景，本发明人经多年研究，发明了白介素2融合蛋白，将它与中药复方861(新方)联合应用，建立一个新的治疗方案，实验证明能有效地提高机体体液免疫、细胞免疫对抗乙肝病毒，又保护肝细胞，以解决上述治疗及预防所遭遇的问题。
因此，本发明的一个目的是提供一种细胞因子融合蛋白(IL-2/Fc)，其氨基酸序列如下(SEQ ID NO.1)：(以下带下划线部分为IL-2，其余部分为Fc片段)
M Y S M Q L A S C V T L T L V L L V N S A P T S S S T S S S T A E A Q Q Q Q Q Q Q Q Q Q Q Q H L E Q L L M D L Q E L L S R M E N Y R N L K L P R M L T F K F Y L P K Q A T E L K D L Q C L E D E L G P L R H V L D L T Q S K S F Q L E D A E N F I S N I R V T V V K L K G S D N T F E C Q F D D E S A T V V D F L R R W I A F C Q S I I S T S P Q D P R G P T I K P C PP C K C P A P N L E G G P S V F I F PP K I K D V L M I S L S P I V T C VV V D V S E D D P D V Q I S W F V NN V E V H T A Q T Q T H R E D Y N ST L R V V S A L P I Q H Q D W M S GK A F A C A V N N K D L P A P I E RT I S K P K G S V R A P Q V Y V L PP P E E E M T K K Q V T L T C M V TD F M P E D I Y V E W T N N G K T EL N Y K N T E P V L D S D G S Y FM Y S K L R V E K K N W V E R N S YS C S V V H E G L H N H H T T K S FS R T P G K ＊
本发明的细胞因子融合蛋白(IL-2/Fc)已经被美国Chimerigen公司(http://www.chimerigen.com)商业化生产和销售，可以获自Chimerigen，USA(商品号MF-12002)。或者，本发明的细胞因子融合蛋白(IL-2/Fc)也可以通过本发明具体实施方案中描述的方法合成。
本发明另一个目的是提供上述的细胞因子融合蛋白(IL-2/Fc)作为免疫增强剂的应用，优选所述免疫增强剂是增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受的免疫增强剂。
本发明还有一个目的是提供一种药物组合，其包含上述细胞因子融合蛋白(IL-2/Fc)和中药复方861(新方)。所述中药复方861(新方)是一种治疗乙型肝炎的药物，该药物的特征在于包括按重量份计的下述组分：鸡血藤5-20、人工虫草菌丝5-15、陈皮5-40、丹参20-60、赤芍5-40、川芎10-60、黄芪15-60、当归5-40、红花5-40、柴胡5-20、香附2.5-10。
本发明的重点在于上述的药物组合作为免疫增强剂的应用，优选所述免疫增强剂是增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受的免疫增强剂。
具体地，本发明涉及以下各项：
1.一种药物组合物，其在药用载体中包含细胞因子融合蛋白IL-2/Fc和中药复方861。
2.根据上述1的药物组合物，其中所述细胞因子融合蛋白IL-2/Fc具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
3.根据上述1的药物组合物，其中所述中药复方861是一种治疗乙型肝炎的药物，该药物的特征在于包括按重量份计的下述组分：鸡血藤5-20、人工虫草菌丝5-15、陈皮5-40、丹参20-60、赤芍5-40、川芎10-60、黄芪15-60、当归5-40、红花5-40、柴胡5-20、香附2.5-10。
4.根据上述1-3任何一项所述的药物组合物，其另外包含乙肝疫苗。
5.根据上述1-3任何一项所述的药物组合物作为免疫增强剂的应用，优选所述免疫增强剂是增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受的免疫增强剂。
6.一种试剂盒，其包含细胞因子融合蛋白IL-2/Fc和中药复方861。
7.根据上述6的试剂盒，其中所述细胞因子融合蛋白IL-2/Fc具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
8.根据上述6的试剂盒，其中所述中药复方861是一种治疗乙型肝炎的药物，该药物的特征在于包括按重量份计的下述组分：鸡血藤5-20、人工虫草菌丝5-15、陈皮5-40、丹参20-60、赤芍5-40、川芎10-60、黄芪15-60、当归5-40、红花5-40、柴胡5-20、香附2.5-10。
9.根据上述6-8任何一项所述的试剂盒，其另外包含乙肝疫苗。
10.根据上述6-8任何一项所述的试剂盒，其另外包含使用说明书，该说明书指导将所述细胞因子融合蛋白IL-2/Fc和中药复方861联合给药于患者以增强患者中的乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受。
实验证明，使用本发明的白介素2-免疫球蛋白融合蛋白(IL-2/Fc)及中药复方861(新方)可以增强乙肝病毒疫苗所激发的保护性体液及细胞免疫反应，保护肝脏功能，使免疫“逃逸”的人群得到应有的免疫保护。使乙肝病毒携带者打破对病毒的耐受状态，达到清除病毒而治疗乙肝的目的。白介素2-免疫球蛋白融合蛋白及中药复方861(新方)联合给药的实验结果如图12-15所示。
附图说明
图1所示为IL-2/Fc融合蛋白的结构；
图2所示为CTLL-2细胞增殖分析；
图3所示为rIL-2和IL-2/Fc与IL-2受体结合的竞争性实验分析；
图4所示为IL-2/Fc循环半衰期(经一次性100μg IL-2/Fc融合蛋白静脉注射后IL-2/Fc的半衰期显示双期向组成，有一个初始的快速清除期，大约是3.5小时(图4，A)，跟随着一个缓慢的终止期，大约是25小时(图4，B))；
图5所示为补体介导的细胞毒实验；
图6所示为与Fc受体结合实验；
图7所示为IL-2/Fc增强乙肝疫苗接种的治疗方案；
图8所示为IL-2/Fc增强乙肝疫苗激发的抗病毒特异的抗体；
图9所示为IL-2/Fc增加HBV疫苗引起的病毒特异性CD8+T细胞的增殖(上图从左至右分别为：A.小鼠没有接受第一次及第二次HB免疫接种；B.小鼠只接受第二次HB免疫接种；C.小鼠同时接受第一次及第二次HB免疫接种；D.小鼠接受第一次HB免疫接种及IL-2/Fc治疗，又接受了第二次HB免疫接种)；
图10所示为复方861提高HBV疫苗免疫后小鼠抗-HBs的生成(从上到下的四条曲线分别依次对应于：胸腺肽α-1组，复方861组，IL-2/Fc组，单纯疫苗免疫组)；
图11所示为复方861对小鼠CTL活性的影响(从左至右分别为对照组、疫苗组、861复方+疫苗组、胸腺肽+疫苗组和IL2/Fc+疫苗组。在1组中，三个用药组与疫苗组相比P均＜0.05；在2组中，三个用药组与疫苗组相比无统计学差异)；
图12所示为IL-2/Fc和861复方联合应用以增强HBV疫苗的抗体应答效果的实验方案；
图13所示为861复方与IL-2/Fc联合应用对HBV疫苗抗体应答有协同增效作用；
图14所示为861复方与IL-2/Fc联合应用对HBV疫苗引起的病毒特异性CD8+T细胞增殖有协同增效作用；
图15所示为861复方与IL-2/Fc联合应用对HBV疫苗引起的病毒特异性CD4+T细胞增殖有协同增效作用。
图16所示为IL-2/Fc融合蛋白基因构建体示意图。
具体实施方式
下文将参考实施例详细描述本发明，所述实施例仅是意图举例说明本发明，而不是意图限制本发明的范围。本发明的范围由后附的权利要求具体限定。
实施例1.白介素2免疫球蛋白Fc(也称IL-2/Fc融合蛋白)表达载
体的构建和蛋白表达
为了保持白介素2的全部生物活性，而且增加其体内的循环半衰期。我们用基因工程方法，将白介素2(IL-2)与免疫球蛋白Fc段基因相融合，并在哺乳动物细胞中得到表达，从而创造出一种新型的IL-2/Fc融合蛋白(图1，IL-2/Fc融合蛋白的结构)。
构建过程：
使用合成的引物，将小鼠的IL-2cDNA(GenBank accessionnumber，NM008366)从ATCC 37553质粒模板中克隆出来。N末端引物，加上限制性酶切点NotI。C-末端引物，附加上限制酶切点BamHI。小鼠Fcr2a cDNA(GenBank accession number，BC108375)是从MIgG2a分泌杂交瘤细胞(ATCC HB129)的mRNA逆转录而来。Fcr2a片段则由合成的引物附加限制酶切点BamHI于N-末端，XbaI于C-末端，从Fcr2a cDNA模板中克隆出来。哺乳细胞蛋白表达载体选用pRC/CMV(Invitrogen San Diego，CA，USA)，IL-2，Fcr2a按照氨基酸正确转译顺序克隆进pRC/CMV表达载体之中(重组表达质粒的构建过程：NotI与XbaI酶切点克隆入pRC/CMV表达质粒，详见附图16；IL-2/Fc融合蛋白是以双链形式表达并发挥生物活性)。
带有IL-2/Fc的重组载体质粒经电转染到CHO(Chinese HamsterOrary，ATCC CCL-6)细胞中，经过抗菌素G418选择挑选出融合蛋白高产量细胞株。分泌IL-2/Fc蛋白的细胞在不含血清的培养液(Invitrogen，Cat#12045-076)中进行培养生长，IL-2/Fc融合蛋白经Protein A亲合层析柱(GE Healthcare)分离提纯，提纯的蛋白经1×PBS的透析过夜，经0.22μm的过滤膜过滤灭菌，然后在-20℃冰箱内保存。
实验证明，IL-2/Fc融合蛋白兼具有IL-2的全部生物活性。在经典的检测IL-2活性的分析中，融合蛋白IL-2/Fc与重组IL-2(rIL-2)(注射用重组人白介素-2(125Ala)，北京双鹭药业股份有限公司，批准文号S-01-04)一样，支持IL-2依赖性的CTLL-2细胞(ATCC T1B214)的增殖(图2，CTLL-2细胞增殖分析)，在放射性的125I释放的分析中，IL-2/Fc具有与重组IL-2一样的与IL-2受体结合的亲和性(图3，竞争性的与IL-2受体结合的实验分析)。(上述测定的参考文献，Nature，1977：268，154-156)。IL-2受体阳性CTLL-2细胞为受体组合靶细胞。CTLL-2细胞经pH 3的RPMI(Invitrogen)处理20秒，以去除结合受体上的IL-2。细胞经RPMI(pH 7)洗两遍后与125I(Dupont，Boston，MA)共同培养60分钟于37℃温箱，放射标志的CTLL-2细胞经洗两遍后，与不同浓度的rIL-2或IL-2/Fc在冰上培养60分钟，上清液转至玻璃试管中进行放射性测定。而且IL-2/Fc保留免疫球蛋白半衰期，为检测融合蛋白的血清半衰期特殊设计了一种酶联免疫检测方法(ELISA)，使用大鼠抗小鼠IL-2单克隆抗体(18161D，Pharmingen clone R19-15，Pharmingen，San Diego，CA，USA)为检测第二抗体，这种ELISA是特异性的针对IL-2/Fc、IL-2和mIgG2a，不会产生假阳性反应。我们可以对血清中的IL-2/Fc浓度进行定量的分析，从而测出IL-2/Fc的循环半衰期。与重组IL-2相比较，其体内循环半衰期延长近700倍(图4，IL-2/Fc循环半衰期)。
由于某些亚型的免疫球蛋白的Fc段具有激活补体及与Fc受体结合的能力，故而具有潜在的抗体介导的细胞杀伤及激活补体介导的细胞毒性功能。我们采取两种方案以保留Fc半衰期长的特点，避免其潜在的免疫效应功能。其一为选择免疫球蛋白亚型，其Fc介导的免疫效应功能为最低；其二为使用基因工程方法，替换Fc段中激活补体及结合Fc受体的功能氨基酸。此两种方法都可以达到清除或最大限度减弱Fc介导的免疫效应功能的目的。
补体依赖性细胞溶性是经51Cr释放而测定的，实验使用IL-2受体阳性的CTLL-2细胞为靶细胞，CTLL-2细胞经低pH(pH 3)RPMI处理20秒钟。以去除结合在细胞表面的IL-2。细胞经RPMI培养液洗后与51Cr共同培养60分钟于37℃培养箱中(DuPont，Boston，MA)，51Cr放射标记CTLL-2细胞经RPMI培养液清洗两遍后，加入96孔平板培养板中，密度为5×104细胞孔，加入不同浓度的本发明的IL-2/Fc，非溶细胞性IL-2/Fc(IL-2/Fc-/-，商购自chimerigen，USA)或mIgG2a(Sigma，St.Louis，MO，USA)于冰上60分钟。然后以1∶15稀释的低毒性免补体(cedarlane，Hornbn，Ontario，Canada)或1％Nonider P-40(NP-40)(Sigma，St.Louis，MO，USA)加入培养板中，经37℃培养60分钟并经缓慢的摇动。经10分钟200rpm离心，140μl的上清液从每个培养孔中吸出并转至玻璃试管中进行γ测定。特异性的细胞溶性百分比经由下列公式进行计算：％特异溶细胞＝(加补体的实验组-加补体的对照)/NP-40组-只加补体的对照)×100％(图5，补体介导的细胞毒实验。NP40：Nonider P-40；IL-2/Fc+C’：IL-2/Fc+补体；IL-2/Fc-/-+C’：IL-2/Fc-/-+补体；mIg+C’：mIgG2a+补体；C’：补体)。
为测定IL-2/Fc与FcrR1(高亲和性Fc受体I)受体结合的能力，从基因组中PCR扩增获得的FcrR1 cDNA(GenBank：X14356)在NotI与XbaI酶切点之间克隆入pRC/CMV表达质粒，经转染进入CHO-K1细胞(ATCC CCL-6)，CHO细胞是FcrRI和FcrRII以及IL-2R(IL-2受体)阴性细胞。FcrR1表达阳性CHO细胞经FCM缓冲液(PBS，0.1％FCS及0.1％叠氮化钠(Sigma，St.Louis，MO，USA))清洗后，与10μg/ml mIgG2a，IL-2/Fc或IL-2/Fc-/-混合置冰上60分钟，经FCM缓冲液洗两次，再与荧光标记的羊抗IgGFc抗体(Pharmingen，San Diego，CA，USA)混合置冰上60分钟，细胞经FCM缓冲液洗两次后加入1％Formalin/PBS进行FACS分析(BectonDickinson Sam Jose，CA)，补体结合有关的Glu318，Lys320，Lys322功能氨基酸用Ala替代，Fc受体结合有关的Leu235功能氨基酸用Glu替代。(图6，IL-2/Fc与Fc受体结合实验)。
如此，我们创造出一种长效的白介素2即IL-2/Fc融合蛋白。
实施例2.IL-2/Fc显著地增强乙肝疫苗激发的体液免疫反应和增强
针对乙肝病毒的CD8
+
T细胞的细胞免疫
由于IL-2/Fc具有IL-2的全部生物活性且具有长达20小时的循环半衰期，我们使用IL-2/Fc作为免疫增强剂以增强易感免疫激发的体液及细胞免疫反应。我们首先采用了IL-2/Fc融合蛋白腹腔注射的方案。Balb/c小鼠(商购自北京维通利华动物有限公司，合格证号0060937)接受了皮内乙肝疫苗免疫接种(重组酵母乙肝疫苗，为北京天坛生物技术有限公司产品，批号20080304，每鼠每侧腹股沟皮下注射各1μg，总剂量2μg/只)，从第二天始，接受每日一次腹腔注射IL-2/Fc(商购自美国Chimerigen公司，商品号MF-12002，1μg/只)共28天。第28日(从第一次免疫接种计算起)，小鼠接受第二次腹腔内乙肝疫苗接种(每鼠每侧腹股沟皮下注射各1μg，总剂量2μg/只)。第二次免疫接种二周之后，按照本领域常规方法对接种小鼠的血清抗乙肝病毒的抗体滴度及针对乙肝病毒的CD4+、CD8+T细胞的增殖反应进行了测定(图7，IL-2/Fc增强乙肝疫苗接种的治疗方案)。
实验结果证明，IL-2/Fc显著的增强乙肝疫苗激发的体液免疫反应。一般疫苗单独接种的Balb/c小鼠仅产生微弱的抗乙肝病毒IgG，而联合使用乙肝疫苗与IL-2/Fc的全部Balb/c小鼠(n＝8)，其抗乙肝病毒抗体滴度均在1000～1200倍(图8，IL-2/Fc增强乙肝疫苗激发的抗病毒特异的抗体，对照组为生理盐水注射组)。(抗HBs抗体滴度的检测方法：小鼠眶后静脉丛采血约0.5ml，4℃冰箱放置过夜，次日离心3500rpm×5rpm，分离血清储存于-20℃，测定时将上述血清400倍稀释∶5μl血清加至2ml生理盐水中，混匀后上机测定，采用美国雅培检测系统测定)。
使用CFSE(Carboxy Fluorescein Diacetate Succinimidyl Easter)荧光标记的手段进行体内的T细胞增殖反应分析(参考文献：WellAD，Audmundsdottir H and Turka LA.Folling the Fate of individual Tcells throughout activiation and clonal expression.J Clin Inves.1998，100：3173-3183)。乙肝病毒单独接种的Balb/c小鼠的CD4+T与CD8+T细胞均有明显的针对乙肝病毒刺激的增殖反应。然而，IL-2/Fc与乙肝疫苗联合使用的小鼠，其CD8+T(潜在的细胞毒性细胞)的增殖反应有更明显的进一步增强。
实验证明IL-2/Fc与乙肝疫苗联合使用的确可以成百倍、千倍的增加针对乙肝病毒的体液反应，而且显著地增加CD8+T细胞(即清除细胞内病毒的潜在的细胞毒细胞)针对乙肝病毒的增殖反应(图9)。此种方法未见到副作用，的确可以进一步发展、使用在临床，以使免疫“逃逸”的人群产生抗体而得到应有的免疫保护。同时加以下文所述的中药861，增强免疫反应保护肝脏细胞，可应用于“澳抗阳性”患者以打破对病毒的耐受状态，提高免疫应答能力，达到清除病毒，而治疗乙肝感染的目的。
实施例3.中药复方丹芪合剂(新方)(以下简称复方861(新方))
关于中药861旧方参见参考文献1和2。本发明涉及一种改进的复方861(新方)，具体地也可以参见参考文献3。
1.内含成分：丹参、黄芪、虫草菌丝、柴胡、赤芍、当归、红花、香附、陈皮、鸡血藤、川芎等十一味药。
2.制作工艺：首先将各单味药的生药经提取浓缩、干燥、制粒等工艺步骤，制成颗粒剂。然后将各颗粒剂(由江苏省江阴市天江制药厂或北京市首创大地药业有限公司制备提供，提供剂型为颗粒剂)按重量份计将下列剂量均匀混合成复方861(新方)(本复方系以以上各厂制成的颗粒剂混合而成，并非共煎所得，而旧方系共煎所得)：鸡血藤5-20、人工虫草菌丝5-15、陈皮5-40、丹参20-60、赤芍5-40、川芎10-60、黄芪15-60、当归5-40、红花5-40、柴胡5-20、香附2.5-10。
以上剂量较以前的861方有很大缩减，原861方十味生药每付共计147克，新方系将各味生药单独提取，喷雾干燥成颗粒，以每味药的得率回算所用生药药量，再按比例混合，新方最后实际提取生药共每付74克，我们的实验证明，颗粒剂混合成方与群药共煎效果相等(见参考文献3)。后又经实验证明，新方之2/3与原861方的抗肝纤维化效果相等(见参考文献3中的数据)，因而达到了新方所用药材显著减量的效果。
3.质量控制：江阴市天江制药厂系以高压液相色谱分析进行质量控制，北京市首创大地药业有限公司以红外光谱指纹图谱进行质量控制，从而保证了混合制成的中药复方丹芪合剂新方的质量和可重复性。
4.复方861(新方)对机体特异性体液免疫的增强作用：以Balb/c小鼠50只分5组。以基因重组乙肝疫苗腹股沟皮下注射2μg/只，第1天、第14天各注一次以激发抗乙肝抗体之产生。在疫苗注射同时，于另4组分别给予复方861(新方)(以3.15g/kg/日计算混悬液，每日一次灌胃)、胸腺肽α1(美国SciClone制药公司提供，2μg/只，每日一次腹腔注射)、白介素2融合蛋白(IL-2/Fc，美国Chimerigen公司合成，1μg/只，每日一次腹腔注射)，结果表明，各组之抗体滴度均较单纯疫苗组明显为高(表1，图10)，说明复方861(新方)有进一步增强乙肝疫苗所激发的体液免疫的作用，其作用与各已知的免疫增强剂相仿。
5.复方861(新方)对机体特异性细胞免疫的增强作用：用Balb/c小鼠，于第1天、14天及28天分别三次基因工程乙肝疫苗皮下注射(疫苗为北京天坛生物技术有限公司产品，每鼠每侧腹股沟皮下注射各1μg，总剂量2μg/只)，再经两周后处死小鼠，由脾脏制备乙肝特异性杀伤T细胞(CTL)作为效应细胞(制备方法见参考文献4)与靶细胞混合孵育。靶细胞为转染了HBsAg质粒的小鼠肥大细胞瘤细胞(P815-S)并以51Cr标记(由北京友谊医院肝病中心尤红博士惠赠，含有HBV-S抗原的真核表达质粒)。两种细胞混合孵育，以靶细胞破坏后释放的51Cr的放射性计数(CPM)标志CTL的活性(检测方法见参考文献4)，结果显示，复方861(新方)对P815-S的杀伤率较正常P815细胞(系北京友谊医院肝病中心保存)为高(27.3％vs 11.9％，P＜0.05)，说明复方861(新方)提高了CTL的特异性杀伤活性(表2，图11，对照组为生理盐水)。
6.经随机、双盲、安慰剂对照的临床研究(具体方案见参考文献3)，服用中药复方861(新方)能：(1)减轻慢性乙肝患者肝脏炎症及坏死，使肝功能改善；(2)控制肝内星状细胞活化；(3)明显减少肝纤维化；(4)提高血清胶原酶的活性，抑制TIMP-1的水平(数据未显示)。
表2复方861对小鼠CTL活性的影响
注：与单纯疫苗免疫组比较＊P＜0.05＊＊P＜0.01；与1组比较##P＜0.01P815-S：特异性靶细胞 P815：非特异性靶细胞
以上研究表明，中药复方861(新方)可增强乙肝患者的体液免疫、细胞免疫，与前述IL-2/Fc的作用相一致，同时中药复方861(新方)能改善肝脏炎症坏死及肝功能，逆转肝纤维化，与IL-2/Fc联用既可协同增强免疫，达到治疗目标，又可保护肝脏，以减少因免疫效应的增强而可能发生的某种程度的肝脏损伤，收到中西医结合的良效。
综上所述，本发明的细胞因子白介素-2与免疫球蛋白Fc段的融合蛋白(IL-2/Fc)具有与重组IL-2受体结合的亲和性，使半衰期明显延长，且具有IL-2的全部生物活性；IL-2/Fc显著增强了乙肝疫苗激发的体液免疫反应，其抗乙肝病毒抗体滴度均在1000～1200倍；IL-2/Fc显著增强针对乙肝病毒的CD8+T细胞的细胞免疫。因而可应用于乙肝病毒携带状态，包括免疫清除期及非活动性HBV携带状态期的患者。
在另一方面，中药复方861(新方)药味减少至10-11味，应用新的制作工艺，将单味药精制的颗粒剂按处方比例配制而成，剂量较以前的861有很大减少，经临床及实验证明，药效与原861方至少等效。一个新的发现是，实验证明861(复方)能增强乙肝疫苗所激发的乙肝的形成，提高乙肝特异性杀伤T细胞(CTL)的特异性杀伤活性。经随机、双盲、安慰剂对照的临床研究，中药复方861(复方)能减轻慢性乙肝患者肝脏炎症及坏死，改善肝功能，明显减少肝纤维化。
因此，联合应用IL-2/Fc及复方861(新方)，二者协同作用，优势互补，预期可发挥抗打破乙肝免疫耐受同时又保护肝脏，收到中西医结合的良效。
实验例4.复方861(新方)与IL-2/Fc的协同增效作用
为测定复方861(新方)与IL-2/Fc联合给药对增强乙肝疫苗激发的免疫反应的作用。我们采用了IL-2融合蛋白腹腔注射及复方861(新方)口服的单独治疗及联合用药的方案。分成3组(每组8只)的Balb/C小鼠(北京维通利华动物有限公司提供，合格证号0060937)接受了皮内乙肝疫苗接种(重组酵母乙肝疫苗，为北京天坛生物技术有限公司产品，批号20080304，每鼠每侧腹股沟皮下注射各1μg，总剂量2μg/只)，从第二天始二组小鼠接受每日一次腹腔注射IL-2/Fc(美国Chimerigen公司合成，1μg/只)共7天。其中一组联合接受每日一次口服复方861(新方)单独治疗。第7天及第14天小鼠接受第二次，第三次腹腔乙肝疫苗接种(重组酵母乙肝疫苗，为北京天坛生物技术有限公司产品，批号20080304，每鼠每次注射1μg，总剂量3μg/只)，第三次免疫接种后一周，对接种小鼠的血清乙肝病毒的抗体滴度及针对乙肝病毒的CD8+T细胞的增殖反应进行了测定(图12，13，14，15)。
实验结果表明，复方861(新方)与IL-2/Fc联合应用对于增强乙肝疫苗激发的体液免疫反应，增强针对乙肝病毒的CD8+T细胞的细胞免疫反应有协同增效作用。
参考文献
1.WangBE，Jia JD.Treatment of liver fibrosis.Update on HepatobiliaryDiseases.Klumer Acadermic Publisher，London.1996：193-211
2.段钟平，王宝恩，王泰龄，等。复方861治疗及逆转肝炎肝纤维化的临床研究。中华肝脏病杂志，1999，7(1)
3.张福奎，王宝恩，王泰龄，等。复方861不同制剂对实验性肝纤维化的疗效比较，中西医结合肝病杂志，2000，10(2)：15-16
4.张均田主编，现代药理实验方法。北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1997
序列表
<110>北京炎黄麒麟生物技术开发有限公司
<120>细胞因子融合蛋白(IL-2/Fc)联合中药复方861增强乙肝疫苗免疫
应答及打破乙肝病毒免疫耐受的新方案
<130>IB067980
<160>1
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>402
<212>PRT
<213>人工序列
<400>1
Met Tyr Ser Met Gln Leu Ala Ser Cys Val Thr Leu Thr Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Val Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Ser Ser Ser Thr Ala
20 25 30
Glu Ala Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln His Leu
35 40 45
Glu Gln Leu Leu Met Asp Leu Gln Glu Leu Leu Ser Arg Met Glu Asn
50 55 60
Tyr Arg Asn Leu Lys Leu Pro Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Leu
65 70 75 80
Pro Lys Gln Ala Thr Glu Leu Lys Asp Leu Gln Cys Leu Glu Asp Glu
85 90 95
Leu Gly Pro Leu Arg His Val Leu Asp Leu Thr Gln Ser Lys Ser Phe
100 105 110
Gln Leu Glu Asp Ala Glu Asn Phe Ile Ser Asn Ile Arg Val Thr Val
115 120 125
Val Lys Leu Lys Gly Ser Asp Asn Thr Phe Glu Cys Gln Phe Asp Asp
130 135 140
Glu Ser Ala Thr Val Val Asp Phe Leu Arg Arg Trp Ile Ala Phe Cys
145 150 155 160
Gln Ser Ile Ile Ser Thr Ser Pro Gln Asp Pro Arg Gly Pro Thr Ile
165 170 175
Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly
180 185 190
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile
195 200 205
Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp
210 215 220
Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His
225 230 235 240
Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg
245 250 255
Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys
260 265 270
Ala Phe Ala Cys Ala Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu
275 280 285
Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr
290 295 300
Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu
305 310 315 320
Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp
325 330 335
Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val
340 345 350
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu
355 360 365
Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His
370 375 380
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro
385 390 395 400
Gly Lys
Claims (7)
1.一种用于增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受的药物组合物，其在药用载体中包含细胞因子融合蛋白IL-2/Fc和中药复方861，其中所述中药复方861是一种治疗乙型肝炎的药物，该药物的特征在于由按重量份计的下述组分制成：鸡血藤5-20、人工虫草菌丝5-15、陈皮5-40、丹参20-60、赤芍5-40、川芎10-60、黄芪15-60、当归5-40、红花5-40、柴胡5-20、香附2.5-10。
2.根据权利要求1的药物组合物，其中所述细胞因子融合蛋白IL-2/Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其另外包含乙肝疫苗。
4.根据权利要求1或2所述的药物组合物在制备免疫增强剂中的应用，其中所述免疫增强剂是增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受的免疫增强剂。
5.一种用于增强乙肝疫苗免疫应答及打破乙肝病毒免疫耐受的试剂盒，其包含细胞因子融合蛋白IL-2/Fc和中药复方861，其中所述中药复方861是一种治疗乙型肝炎的药物，该药物的特征在于由按重量份计的下述组分制成：鸡血藤5-20、人工虫草菌丝5-15、陈皮5-40、丹参20-60、赤芍5-40、川芎10-60、黄芪15-60、当归5-40、红花5-40、柴胡5-20、香附2.5-10。
6.根据权利要求5的试剂盒，其中所述细胞因子融合蛋白IL-2/Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其另外包含乙肝疫苗。
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| US7943146B2 (en) * | 2001-12-21 | 2011-05-17 | Myrexis, Inc. | Immunizing compositions comprising HIV-1 proviral constructs with an inactive p6 gag TSG101 UEV binding domain capable of producing budding-defective viral particles that remain tethered to the cell surface |
| AU2003254129A1 (en) * | 2002-07-19 | 2004-02-09 | Myriad Genetics, Inc | Method and composition for treating and preventing hepatitis b infection and symptoms thereof |
| WO2004016738A2 (en) * | 2002-07-19 | 2004-02-26 | Myriad Genetics, Inc. | Method and composition for treating and preventing hepatitis c infection |
-
2006
- 2006-12-28 CN CN200610169756A patent/CN100586474C/zh active Active
-
2007
- 2007-12-26 WO PCT/CN2007/003802 patent/WO2008080302A1/zh active Application Filing
Non-Patent Citations (9)
| Title |
|---|
| IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达. 陈红梅等.医学研究生学报，第17卷第1期. 2004 |
| IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达. 陈红梅等.医学研究生学报，第17卷第1期. 2004 * |
| Management of Chronic Hepatitis B Treatment of chronicliverdiseases with traditional Chinese medicine. Bao-En Wang.Journal of Gastroenterology and Hepatology,Vol.15 No.s2. 2000 |
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| 阻断及逆转肝纤维化的实验与临床研究. 王宝恩.医学研究杂志，第30卷第7期. 2001 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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