CN100560051C - 一种促进毛发生长的组成物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种促进对象体的毛发生长的组成物，该组成物的有效成分为乳铁蛋白，所述乳铁蛋白的用量为100-250毫克/毫升。
Description
技术领域
本发明涉及一种促进毛发生长的组成物，特别涉及一种乳铁蛋白(lactoferrin)的用途，其用于制备促进毛发生长的组成物。
背景技术
乳铁蛋白(lactoferrin)为一种78-80kDa的糖蛋白(Nuijen，1996)，主要分布在如哺乳动物的母乳、唾液、眼泪与黏膜分泌(mucosal secretion)等体液内，并可因发炎反应由活化的嗜中性白血球(neutrophil)所释放。乳铁蛋白在人类与动物的生理作用上扮演着多种调节角色。例如，特定浓度的乳铁蛋白可有效抑制大肠杆菌(Escherichia coli)、链球菌(Streptococcus)、双球菌(Neisseria)与其它细菌的生长，促进淋巴球细胞的分化，并调节巨噬细胞(macrophage)与颗粒细胞(granulocyte)的增生。乳铁蛋白可以在肠胃进行铁离子的传输与吸收功能。根据最近的研究报导，发现乳铁蛋白能抑制癌细胞的增生与转移，甚至能用来对抗与肠病毒有关的疾病、严重急性呼吸道症候群(SARS)以及C型肝炎。
在一项已核准的日本专利(JP8040824)中披露了以乳铁蛋白制作成多种改善皮肤粗糙度的化妆品，其中乳铁蛋白移除了细菌中的铁离子以展现其抗菌效果。根据另一项日本专利(JP5065214)所披露的内容，一种组成物中使用的乳铁蛋白可保护毛发不受物理性破坏，其保护毛发的物理特性，特别是其抗张力与弹性，不会因空气与光线曝晒而遭破坏。然而，目前并未有任何公知公开技术教导使用乳铁蛋白来促进毛发生长。
典型促进毛发生长的方法着重在控制细胞死亡避免过早产生秃头或白发。尽管针对生发剂进行了许多的研究发展，传统生发剂对于毛发养育作用，也就是避免毛发脱落、毛发生长以及类似效果并不够。而许多由生长因子、荷尔蒙、植物萃取物与其结合所发展的毛发生长刺激物达到的成效也相当有限。
目前皮肤科医师认可的治疗秃头方法包括口服的柔沛(PROPECIA)与外用的落建(Rogaine)(Messenger AG，Rundegren J.Minoxidil：Mechanismsof action on hair growth.Br J Dermatol.2004Feb；150(2)：186-94.Review)。柔沛为美国食品药物管理局(FDA)首先且唯一核准治疗男性在头顶与前额脱发的药丸，但对女性使用者却无效果并可能具有损害男性性功能的副作用。落建过去被称为敏诺西代(minoxidil)并可局部使用以刺激男性在后头部秃发部位的毛发生长，落建能增加女性使用者额头区域的毛发生长。然而，当病患有发炎或有不正常头皮的情形时，会造成头皮对敏诺西代的吸收增加，导致包括血压下降、心跳速率增加以及体重上升(体液滞留)等副作用。此外，落建中含醇的主要成份会造成眼睛的不适。
因此，长久以来一直需要一种使用毛发生长促进剂促进人类毛发生长而不会产生上述副作用的组成物。本发明可符合此需要。
发明内容
本发明提供一种促进对象体的毛发生长的组成物，该组成物的有效成分为乳铁蛋白，所述乳铁蛋白的用量为100-250毫克/毫升。
本发明也提供一种乳铁蛋白的用途，其用于制备促进对象体的毛发生长的组成物，至少包括对该对象体的皮肤皮下组织内的增生与活化毛囊的其中一项有效量的乳铁蛋白。
附图说明
当并同各附图而阅览时，即可更佳了解本发明的前述摘要以及下文详细说明。为本发明的说明目的，各附图里表示有现属较佳的各具体实施例。然应了解本发明并不限于所示的精确排置方式及设备装置。
在各附图里：
图1A是宏观图像(macroscopic image)，以俯视面显示一只两个月大的远交品种(ICR)小鼠具有一块已剃除毛发的背部皮肤，该块皮肤还标有三个不同处理区域；
图1B是如图1A所标示的三个处理区域的放大图；
图2A是显微镜图像(microscopic image)，显示处以对照组载体(水)的两个月大的远交品种小鼠的皮肤组织切片，该图像具有100倍的放大倍率以及100微米的比例尺；
图2B是显微镜图像，显示处以乳铁蛋白的两个月大的远交品种小鼠的皮肤组织切片，该图像具有与图2A相同的放大倍率；
图3A至图3D显示十一个月大的远交品种小鼠在第零日(d0)、第三日(d3)、第五日(d5)与第十一日(d11)，三个处理区域的渐次毛发生长；
图4A是显微镜图像，显示处以控制载具(水)的十一个月大的远交品种小鼠的皮肤组织切片，该图像具有100倍的放大倍率以及100微米的比例尺；
图4B是显微镜图像，显示处以乳铁蛋白的十一个月大的远交品种小鼠的皮肤组织切片，该图像具有与图4A相同的放大倍率；以及
图5是以俯视面显示一只四个月的远交品种母鼠具有一块已剃除毛发的背部皮肤，在标示区域进行三种不同处理。
具体实施方式
为使本发明内容清楚易懂，以下将对所使用的专有名词做更详尽的解释。
在此所使用的冠词“一”意指一或多于一(也就是至少一)的文法对象的冠词，除非是另行解释该冠词仅为以单一观念的特定使用。
“毛囊”一词在此指皮肤下的毛发结构具有类似囊状(stocking-like)结构包含不同功能的多层。每一毛发在开始生长与数年后的掉落之间需经过三个明显阶段，也就是生长期(anagen)、退化期(catagen)与终止期(telogen)。生长期是毛囊的活跃生长期，在毛发根部的细胞快速的分裂且增加至发干(hair shaft)；退化期是指在生长期末了的短暂转换阶段，示意毛发积极生长的终结；终止期为毛囊的静止阶段，在此期间毛囊完全呈终止状态且完全形成高尔夫球杆状的毛发(club hair)(发根由完全角质化细胞组成的球状扩大(bulbous enlargement)所包围)。
本发明提供一种促进对象体的毛发生长的组成物，包括至少对该对象体的皮肤皮下组织的增生与活化毛囊的其中一项有效量的乳铁蛋白。在此“对象体”一词是指人类或具有毛发的动物，特别是温血动物包括具有毛囊或毛囊表皮细胞的哺乳类动物以及鸟类。
在此有效的量是指提供促进对象体毛发生长有效果的量，所属技术领域的技术人员可以根据本发明所披露的内容，以其知识与惯行实验的标准方法轻易判断有效量以及剂量与施用频率。
在此所使用的“乳铁蛋白”包括牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin)、兔乳铁蛋白、人乳铁蛋白、由其它动物种所萃取的乳铁蛋白、以人工合成方式所取得的乳铁蛋白、以及上述种类乳铁蛋白的衍生物，如乳铁蛋白素(lactoferricin)也提供促进毛发生长的有利特性。在本发明的较佳实施例中，组成物中的乳铁蛋白包括牛乳铁蛋白，可轻易的以商业方式，例如自Sigmal化学公司(美国密苏里州，圣路易市)所购得。
本发明发现重新进入生长期的活化毛囊数目增加，其中毛囊的新陈代谢作用特别活跃，皮下组织变厚且在以乳铁蛋白处理皮肤的毛发能迅速生长。根据本发明，发现乳铁蛋白不论对象体的年纪或性别均能有效促进毛发生长，并且以乳铁蛋白处理的动物比未以乳铁蛋白处理的动物，其毛发生长的更快且毛发生长量也更多。
包含乳铁蛋白的组成物可通过该领域所熟知的任何方法施行在对象体的皮肤，包括但不限于局部涂抹、喷洒、蒸泡或喷射该包含乳铁蛋白的组成物至欲促进毛发生长的皮肤上或皮肤内。另外，具有生发问题的对象体也可以浸泡或浴泡在该包含乳铁蛋白的组成物内。根据本发明，组成物内的乳铁蛋白含量可为50-500毫克/毫升，较佳为100-250毫克/毫升，更佳为200毫克/毫升。
包含乳铁蛋白的组成物制作可以将乳铁蛋白与其它活性或非活性成分混合成多种形式以便于使用。其它成份可包括非限制实施例如佐药(adjuvant)、载具(vehicle)或赋形剂(excipient)、香料(perfume)、着色剂(colorant)、稳定剂(stabilizer)或其它非活性成分，或不论是否含有其它非活性成分的任何组合。较佳的非活性成分包括，例如二甲基亚砜(DMSO)、甘油(glycerol)、胶原蛋白(collagen)以及玻尿酸(hyaluronan(HA))。根据不受限制的实施例，组成物可制作成软膏(ointment)、洗发精、润发乳、涂剂、生发水、发胶或摩丝(mousse)的形式。本发明的组成物可包括不同的添加活性成分与平常用于局部配方的补充成分，如生长因子、荷尔蒙与所属技术领域的技术人员所知的细胞增生因子，其含量并不会影响乳铁蛋白促进毛发生长效果。
乳铁蛋白活性成份的适当剂量如上述定义可不需过度实验便能轻易地根据本发明的披露内容所决定，乳铁蛋白活性成份的剂量可不受限制为大约1毫克(mg)或少于大约20毫克以上，较佳为大约3-15毫克的乳铁蛋白，而更佳为大约6-12毫克的乳铁蛋白。乳铁蛋白组成物基于方便，可一天施用一次，较佳为一天两次且早晚各一次，或根据该对象体促进毛发生长的需求每天施用超过两次。
本发明也提供一种促进动物毛发生长的乳铁蛋白的新用途。
本发明将参照下列特定但非限制的实例作更详尽的描述。
实例1
乳铁蛋白在幼鼠增加毛发生长的效果
在研究乳铁蛋白在幼鼠内的毛发生长效果中，将五只远交品种(ICR)，每一只为两个月大的公鼠刮除毛发以曝露出一部分的背部皮肤。每一只处理的幼鼠，其背部皮肤的曝露部位还标有三个如图1A所示的区域，随后施行不同处理。如图1B所示，以局部涂抹暴露皮肤区域的方式一天两次分别对三个标记区域(从左到右)施以60微升(μl)的牛乳铁蛋白(作成100毫克/毫升的水溶液)、60微升(μl)的牛乳铁蛋白(作成200毫克/毫升的水溶液)、以及60微升(μl)的对照组载体(水)。在第一次处理后每天观察标记区域的毛发生长。如图1A与图1B所示，在以乳铁蛋白处理的皮肤所观察的毛发生长比以对照组载体处理的皮肤快。施以200毫克/毫升的乳体蛋白的五只老鼠均可在处理2至4天后观察到毛发生长，施以100毫克/毫升的乳体蛋白的老鼠在处理后3至5天也有毛发生长。相反的，仅曝露于对照组载体(水)的皮肤仅在处理15-17天后才展现毛发生长。
进行苏木紫-伊红染色(Hematoxylin and Eosin(H&E)staining)以使用显微镜检视200毫克/毫升的乳体蛋白或对照组载体处理14天的皮肤区域。在处理14天后，皮肤组织分析显示在以对照组载体处理与以乳铁蛋白处理的皮肤区域发现显著数目的生长期毛囊，如图2A与图2B所示。如图2B所示，在乳铁蛋白处理区域的生长期毛囊数目大约为以控制载具处理区域的两倍。因此，生长期毛囊的增生明显地反映出在乳铁蛋白处理区域的毛发生长。然而，在以乳铁蛋白处理与对照组载体处理之间并没有明显的皮肤厚度差异。因此这些数据显示施用有效量的乳铁蛋白会造成幼鼠的毛发生长。
实例2
使用乳铁蛋白增加成鼠的毛发生长
为进一步测试乳铁蛋白是否能诱发成鼠的毛发生长，将五只远交品种，每一只为十一个月大的公鼠以相同于实例1所描述的方式刮除毛发并在曝露的背部皮肤标示出三个区域。以局部涂抹曝露皮肤区域的方式一天两次分别对成鼠的标记区域施用60微升的牛乳铁蛋白(100毫克/毫升)、60微升的牛乳铁蛋白(200毫克/毫升)、以及60微升的对照组载体(水)。在第一次处理后每天观察标记区域的毛发生长。如图3A至图3D所示，在处理11天后，以200毫克/毫升乳铁蛋白处理的皮肤可观察到显著的毛发生长，但仅以对照组载体处理的皮肤却没有毛发生长。施用200毫克/毫升的乳体蛋白的成鼠一般在处理4至6天后处理区域开始生长毛发，施以100毫克/毫升的乳体蛋白的成鼠在处理6至8天后也有毛发生长，而在处理21-23天后才观察到对照组区域的自然毛发生长。在所有测试的成鼠均可一致观察到乳铁蛋白促进毛发生长的效果。
如图4A与图4B所示，组织学检验证实了乳铁蛋白活化毛囊的效果。以相同于实例1的方法进行苏木紫-伊红染色以检验处以200毫克/毫升的乳体蛋白或对照组载体14天的皮肤区域。如图4B所示，在以乳铁蛋白处理区域的皮下组织发现大量的生长期毛囊(如箭头所标示)。相反的，控制区域在真皮组织(dermis)呈现如图4A所示的均匀终止期毛囊。因此，毛囊明显被活化或促进以重新由终止期进入生长期。毛囊的活化也反映在以乳铁蛋白处理区域所观察的毛发生长。除此之外，在乳铁蛋白处理区域所观察到的皮下脂肪与皮肤厚度与相同成鼠的对照组区域相比更为增加。以乳铁蛋白处理成鼠的皮肤并未发现任何发炎或型态异常(morphologicalabnormalities)。因此结果显示给予有效量的乳铁蛋白能显著地刺激成鼠的毛发生长。
实例3
乳铁蛋白素(lactoferricin)的制备
乳铁蛋白素是由包含抗菌区域的乳铁蛋白所衍生的生物活化胜肽段片(3196Da)，乳铁蛋白素是抗微生物胜肽并通常是由胃液素切开(gastricpepsin cleavage)乳铁蛋白所产生。
乳铁蛋白素一般是由蛋白切割酵素，胃液素切割乳铁蛋白所制备，但也可使用其它酸性蛋白酶。首先取5克乳铁蛋白与100毫升双道去离子水(double deionized water(ddH2O))混合形成可商业取得牛乳铁蛋白溶液。利用1M的盐酸(hydrocholoric acid)调整溶液以获得pH2.5的酸碱值，接着在溶液中溶入30毫克的胃液素A的粉末，使切割乳铁蛋白成乳铁蛋白素的酵素反应在摄氏37度进行至少4小时。另外，在摄氏80度的热水浴中加热溶液15分钟以终止反应后再于室温冷却。使用1M的氢氧化钠(NaOH)中和溶液并进行15分钟的高速离心(摄氏4度，每分钟17000转)，收集离心后的上清液以获得乳铁蛋白素，上述取得的乳铁蛋白素也可与其它成分混合以形成在后续方法中促进生发的组成物。
实例4
使用乳铁蛋白与乳铁蛋白素增加母鼠的毛发生长
毛发生长效果的研究是使用两只远交品种，每一只为四个月大的母鼠以相同于实例1所描述的方式刮除毛发并在暴露的背部皮肤标示出三个区域，如图5所示的一只母鼠。以局部涂抹暴露皮肤区域的方式一天两次分别对母鼠的标记区域施以60微升的牛乳铁蛋白(200毫克/毫升)、60微升的对照组载体(水)、以及如实例3所获得的60微升的牛乳铁蛋白素(200毫克/毫升)。在第一次处理后每天观察标记区域的毛发生长。如图5所示，在处理10天后，以200毫克/毫升乳铁蛋白以及200毫克/毫升乳铁蛋白素处理的皮肤可观察到显著的毛发生长，但仅以对照组载体处理的皮肤却没有毛发生长。另外，毛发生长量在以200毫克/毫升的乳铁蛋白素处理的区域较以相同剂量的乳铁蛋白处理的区域更多。在所有测试的母鼠均可一致观察到乳铁蛋白或乳铁蛋白素促进毛发生长的效果。虽然乳铁蛋白素可由实例3所述的方法制备，本发明并不限于仅使用此方式所制备的乳铁蛋白素，其它方式所制备的乳铁蛋白素也在本发明所保护的范围内。
因此本发明提供一种有效促进动物毛发生长的组成物，没有性别或年龄的局限。在对动物处以包含有效量的乳铁蛋白或乳铁蛋白素的组成物后，可于老鼠的处理皮肤区域上观察到毛发生长。此外，所属技术领域的技术人员应可根据本发明的内容了解乳铁蛋白与其它衍生物或乳铁蛋白类似物也可用于本发明的方法以促进因疾病或自然因素造成脱发的动物的毛发生长。
综上所述，本发明提供一种乳铁蛋白促进动物毛发生长的新用途。乳铁蛋白一般被美国食品药物管理局认定为安全组成物，其对测试动物具有轻过敏(hypoalergic)以及非炎症性(non-inflammatory)的额外好处。
虽然上述实例的结果是根据老远交品种小鼠以显示乳铁蛋白促进动物毛发生长的新用途，本发明的范围并非应局限于此。所属技术领域的技术人员应可根据本发明内容了解本发明的方法可同样应用在任何具有毛囊或生长毛发的毛囊表皮细胞的温血动物，包括人类、商业相关的哺乳类动物，如牛、猪、马、羊、狗、小鼠、大鼠、兔子与宠物、鸟类包括商业相关的鸟类，如鸡、鸭、鹅以及火鸡。本发明不应局限于仅使用牛乳铁蛋白，其它不会造成道德问题的乳铁蛋白来源也可用于本发明。
所属技术领域的技术人员应即了解，可对前述各具体实施例进行修改而不致悖离其广义发明概念。从而应了解本发明并不限于上述的各项特定具体实施例，而为涵盖归属如权利要求中所定义的本发明精神及范畴的修改项目。
Claims (10)
1.一种促进对象体的毛发生长的组成物，其特征是，该组成物的有效成分为乳铁蛋白，所述乳铁蛋白的用量为100-250毫克/毫升。
2.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该组成物通过至少涂抹、喷洒、蒸泡或喷射的其中一种方式施用在处理的皮肤区域上或处理皮肤区域内。
3.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该组成物的施用是通过将该对象体浸泡或浴泡在该组成物。
4.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该组成物的施用是通过局部涂抹在该对象体的皮肤。
5.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该组成物包括200毫克/毫升的乳铁蛋白。
6.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该对象体是温血动物具有毛囊或生长毛发的毛囊表皮细胞。
7.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该乳铁蛋白包括牛乳铁蛋白。
8.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该组成物制作成型式选自于包括软膏、洗发精、润发乳、涂剂、生发水、发胶、以及摩丝的族群。
9.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该组成物进一步还包括可制药接受载体。
10.根据权利要求1所述的组成物，其特征是该组成物进一步包括至少一种选自于包括二甲基亚砜、甘油、胶原蛋白、玻尿酸以及其混合物的组分。
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