CN100558877C - 建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法 - Google Patents
建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100558877C CN100558877C CNB2004100268581A CN200410026858A CN100558877C CN 100558877 C CN100558877 C CN 100558877C CN B2004100268581 A CNB2004100268581 A CN B2004100268581A CN 200410026858 A CN200410026858 A CN 200410026858A CN 100558877 C CN100558877 C CN 100558877C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tomato
- hairly root
- root
- fungi
- substratum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 32
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 title description 13
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 9
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 claims abstract 12
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 2
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 claims description 2
- QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 claims description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 4
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 4
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 206010016825 Flushing Diseases 0.000 description 1
- 241000235502 Gigaspora margarita Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000005213 imbibition Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 239000010979 ruby Substances 0.000 description 1
- 229910001750 ruby Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 description 1
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
本发明涉及一种建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根的共生关系的方法,首先通过将发芽后的番茄苗用发根农杆菌菌悬液浸泡后接种于蔗糖琼脂培养基上培养,诱导长出毛状根,然后将番茄毛状根转移到M培养基上,接种AM真菌孢子后置25℃黑暗培养,待发芽菌丝侵入根系后既表明已建立起番茄毛状根与AM真菌的共生关系。本发明成功地诱导了番茄毛状根,并与AM真菌在无菌的培养基上建立共生关系。通过本发明提供的系统,可以用于AM真菌的增殖以获得无菌的AM真菌材料,又可以用于无菌条件下进行AM真菌的相关研究。
Description
[所属技术领域]
本发明涉及一种建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法。
[背景技术]
丛枝菌根真菌(Arbuscular Mycorrhizal Fungi,AM真菌)是一类能够与80%的植物种建立共生关系的土壤真菌。人们早已认识到,AM真菌可以明显地促进植物根系对矿质营养的吸收,增强植物对多种土传病害的抗性,从而改善植物的生长。因此,各国科学家一致认为AM真菌在大多数的农作物和园艺作物上有广阔的应用前景,并称之为“生物肥料”和“生物农药”(ScientiaHorticulturae,1997,68:1-24)。目前,对于AM真菌的研究越来越广泛,也越来越深入,许多研究需要在无菌的条件下进行,或者需要获得无菌的AM真菌材料。然而,到目前为止,AM真菌仍然不能纯培养,必须与宿主植物建立共生关系后才能完成生命周期。正因为如此,我国目前的AM真菌繁殖主要采用基质栽培宿主植物的方式进行,这些基质主要包括土壤、河沙、蛭石、玻璃珠等,在这些培养条件下,无法获得无菌条件。对于丛枝菌根真菌的生物学特性、与土壤微生物的互作关系等方面的研究需要在无基质干扰、无菌的条件下进行,因此以前的AM真菌培养方法难以应用于此类研究。
[发明内容]
本发明的目的在于针对目前的AM真菌培养方法的局限性,提供一种在无菌培养基上与丛枝菌根真菌建立共生关系的方法,以获得无菌的AM真菌材料或在无菌条件下进行AM真菌的相关研究。
本发明所提供的在无菌培养基上与丛枝菌根真菌建立共生关系的方法,主要是以番茄种子、发根农杆菌、AM真菌为材料,通过诱导形成番茄毛状根,然后在无菌培养基上接种AM真菌孢子,待形成侵染之后即建立了番茄毛状根与AM真菌之间共生关系,具体操作方法如下:
1、番茄毛状根的诱导
番茄种子用95%乙醇和10%次氯酸钠进行表面灭菌后,水洗后播种到2%的蔗糖琼脂培养基上,25℃暗黑条件下发芽7~10天后,在超净工作台上将幼苗分切成下胚轴、中胚轴和上胚轴3个部分,在107~108cfu/ml的发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)菌悬液中浸泡20~30分钟,在无菌水中洗3-5次后,无菌滤纸吸去多余菌液,接种到2%的蔗糖琼脂培养基上,约7~15天后植物组织表面开始出现毛状根;待毛状根长至2~5cm后,用灭菌剪刀剪下毛状根,放置在含抗生素的MS培养基上,经过3-5次继代培养,直至没有发根农杆菌菌落出现;
2、AM真菌的接种
将番茄毛状根转移到M培养基上,在毛状根的表面和边上接种灭菌后的AM真菌(Gigaspora margarita)孢子;
3、共生体系的建立
接种后的培养皿在25℃暗黑条件下培养,1~5天后AM真菌孢子即可萌发,5-10天后发芽菌丝可以侵入根系,3周后可以见到外生菌丝在培养基表面生长,此时,表明共生体系已经建立;
4、培养与继代
共生体系建立以后可以在25℃暗黑条件下继续培养2-3周,以后若需要进行继代培养,即剪取一段含有外生菌丝的根段,转移到新的M培养基上,继代培养时间以1个月为宜。
上述方法中提到的MS培养基为植物组织培养的常用培养基,M培养基参考Becand G,FortinJA 1988在New Phytologist(108:211-218)杂志上发表的文章,M培养基组成成分为:
[附图说明]:
图1:番茄毛状根与AM真菌共生体系模式图;
图2:AM真菌孢子的侵染(左)和外生菌丝(右)。
图1中,1-培养皿;2-AM真菌外生菌丝;3-番茄毛状根
[具体实施方式]
实施例1
1、番茄毛状根的诱导:
取红宝石和丰顺番茄种子各10颗,放在水中充分吸胀12~24小时,用10%次氯酸钠消毒15~20分钟,无菌水洗涤5次后,播种在2%的蔗糖琼脂培养基上;培养皿放在25℃暗黑条件下培养7~10天后,在超净工作台上将幼苗分切成下胚轴、中胚轴和上胚轴3个部分,分别在107~108cfu/ml的发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)R1000菌悬液中浸泡20~30分钟,取出后用无菌水洗涤5次,再用无菌滤纸拭干植物组织表面的水分,接种到2%的蔗糖琼脂培养基上,置于25℃暗黑条件下培养;培养期间,经常观察毛状根的形成,约7~15天后植物组织表面开始出现毛状根;待毛状根长至2~5cm后,用灭菌剪刀剪下毛状根,转移到添加250mg/L的氨苄青霉素的MS培养基上,以去除发根农杆菌;在含抗生素的MS培养基上培养2~3周后继代1次,继代3次后毛状根周围将没有发根农杆菌的菌落出现,此时已经完全除菌;将完全除菌的毛状根转移到毛状根专用的M培养基上培养7~10天后,毛状根恢复生长;
2、AM真菌的接种
湿筛法收集AM真菌孢子:称取20-50g AM真菌菌剂放入1L的烧杯中,用手小心捏碎土壤颗粒后加入0.7L自来水,用玻璃棒猛烈搅动后静置1-3分钟后将悬浊液倒入叠在一起的筛网中(上部筛网的孔径为1mm,下部筛网的孔径为100μm),向烧杯中剩余的沉淀物再加入0.5L自来水,玻璃棒搅动后静置1分钟左右,悬浊液在倒入前述的筛网中,反复多次直至悬浊液清澈为止;用自来水充分冲洗1mm筛网中的混合物,然后去除1mm筛网,再仔细冲洗100μm筛网中的混合物,并小心将混合物全部冲洗至一角,用洗瓶将混合物全部冲洗转移到100ml的烧杯中,用超声波清洁器震荡30s后重新倒入100μm筛网中,自来水仔细冲洗后小心转移到培养皿中,在20倍实体显微镜下将培养皿中的孢子用尖嘴吸管收集;在超声波清洁器中处理30秒以去除孢子表明的污物,用蒸馏水洗涤孢子后在2%的氯胺-T溶液中处理30分钟,再用混合抗生素(0.02%的链霉素和0.01%的庆大霉素)处理于4℃冰箱中12-18小时;在超净工作台上将灭菌的孢子接种到恢复生长的毛状根的表面和旁边;
3、共生体系的建立
接种后的培养皿在25℃暗黑条件下培养,每天用显微镜跟踪观察,一般接种1~5天后孢子开始萌发,5~10天后可以对毛状根形成侵染,3周后可以见到外生菌丝从毛状根出来,在培养基表面生长;此时,番茄毛状根与AM真菌的共生关系已经建立。
Claims (6)
1、一种建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法,通过将发芽后的番茄细苗用发根农杆菌菌悬液浸泡后接种于蔗糖琼脂培养基上培养,诱导长出毛状根;然后将番茄毛状根转移到M培养基上,接种AM真菌孢子后置黑暗条件下培养,待发芽菌丝侵入根系,即表明已建立起AM真菌与番茄毛状根的共生关系;其特征在于操作过程如下:
(1)番茄毛状根的诱导:将番茄种子用95%乙醇和10%次氯酸钠进行表面灭菌,水洗后播种到蔗糖琼脂培养基上,黑暗条件下发芽7~10天后,在超净工作台上将幼苗分切成下胚轴、中胚轴和上胚轴3个部分,在发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)菌悬液中浸泡20~30分钟,在无菌水中洗5次后,无菌滤纸吸去多余菌液,接种到蔗糖琼脂培养基上,约7~15天后植物组织表面开始出现毛状根;待毛状根长至2~5cm后,放置在含抗生素的MS培养基上,经过3-5次继代培养直至没有发根农杆菌菌落出现;
(2)AM真菌的接种:将番茄毛状根转移到M培养基上,在毛状根的表面和边上接种灭菌后的AM真菌孢子;
(3)共生体系的建立:接种后的培养皿在暗黑条件下培养,1~5天后AM真菌孢子即可萌发,5-10天后发芽菌丝可以侵入根系,3周后可以见到外生菌丝在培养基表面生长,此时表明共生体系已经建立;
(4)培养与继代:共生体系建立以后可以在暗黑条件下继续培养2-3周,以后需要进行继代培养时即剪取一段含有外生菌丝的根段,转移到新的M培养基上。
2、权利要求1所述的方法,使用的蔗糖琼脂培养基的浓度为2%。
3、权利要求1所述的方法,发根农杆菌菌悬液的浓度为107~108cfu/ml。
4、权利要求1所述的方法,暗黑条件下培养的温度为25℃。
5、权利要求1所述的方法,AM真菌孢子的灭菌方法为:将AM真菌孢子用2%的氯胺-T溶液中处理30分钟,再用0.02%的链霉素和0.01%的庆大霉素溶液4℃处理12-18分钟。
6、权利要求1所述的方法,继代培养的时间为1个月。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2004100268581A CN100558877C (zh) | 2004-04-15 | 2004-04-15 | 建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2004100268581A CN100558877C (zh) | 2004-04-15 | 2004-04-15 | 建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1682584A CN1682584A (zh) | 2005-10-19 |
CN100558877C true CN100558877C (zh) | 2009-11-11 |
Family
ID=35262243
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB2004100268581A Expired - Lifetime CN100558877C (zh) | 2004-04-15 | 2004-04-15 | 建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN100558877C (zh) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101263778B (zh) * | 2007-12-06 | 2010-08-18 | 云南大学 | 一种快速建立dse与植物共生培养体系的方法及其应用 |
CN101595803B (zh) * | 2008-06-03 | 2011-04-13 | 上海市农业科学院 | 一种菌根食用菌菌根苗的生产方法 |
CN102166367B (zh) * | 2010-12-30 | 2013-07-10 | 西北农林科技大学 | 丛枝菌根真菌孢子的表面消毒方法 |
LU92274B1 (en) * | 2013-08-30 | 2015-03-02 | Symplanta Gmbh & Co Kg | System and methods for continuous propagation and mass production of arbuscular mycorrhizal fungi |
CN105052499A (zh) * | 2015-08-20 | 2015-11-18 | 云南大学 | 一种快速建立瓶霉属真菌与农作物共生体系的方法 |
CN105063084A (zh) * | 2015-09-02 | 2015-11-18 | 甘肃农业大学 | 一种获取西兰花毛状根的方法 |
CN105532411A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-05-04 | 南京农业大学 | 一种保存丛枝菌根真菌的方法 |
CN106857260A (zh) * | 2017-03-06 | 2017-06-20 | 江门市鸿豪实友生物有限公司 | 一种植物培养方法 |
CN108444956A (zh) * | 2018-01-26 | 2018-08-24 | 浙江师范大学 | 用激光共聚焦显微镜和荧光染料观察am真菌丛枝结构的方法 |
CN111073842A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-28 | 华南农业大学 | 脱落酸在促进丛枝菌根真菌产孢中的应用 |
CN113403204B (zh) * | 2021-05-12 | 2022-10-11 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 一种促进丛枝菌根真菌非共生产孢的方法及其应用 |
-
2004
- 2004-04-15 CN CNB2004100268581A patent/CN100558877C/zh not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
目前AM真菌培养特性方面研究的基本概况. 张英等.微生物学通报,第29卷第4期. 2002 |
目前AM真菌培养特性方面研究的基本概况. 张英等.微生物学通报,第29卷第4期. 2002 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1682584A (zh) | 2005-10-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN100558877C (zh) | 建立丛枝菌根真菌与番茄毛状根共生关系的方法 | |
CN104263684A (zh) | 一种产铁载体类芽孢杆菌及其应用 | |
CN106399129A (zh) | 一株哈茨木霉菌株及其应用 | |
CN103103155B (zh) | 一株短小芽孢杆菌及其在防治小麦禾谷孢囊线虫病中的应用 | |
Donald et al. | A sand—solution culture technique used to observe the effect of calcium and pH on root hair and cortical stages of infection by Plasmodiophora brassicae | |
CN110669691A (zh) | 一种防治植物线虫病害的巨大芽孢杆菌及其应用 | |
CN103146609B (zh) | 一株荧光假单胞菌及其对辣椒疫霉病的防治方法 | |
CN102732434B (zh) | 一株哈茨木霉菌株及其在防控马铃薯晚疫病中的应用 | |
CN110317747A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌jt68及其在防治茶炭疽病的应用 | |
CN114196585A (zh) | 一株用于防治番茄青枯病的伯克霍尔德菌及其应用 | |
CN103642704A (zh) | 棉花内生真菌cef-714及其在棉花黄萎病防治中的应用 | |
CN111334458B (zh) | 一种生防放线菌及其在生姜茎基腐病或大豆疫病防治方面的应用 | |
CN110317735B (zh) | 生防寡雄腐霉菌及应用 | |
CN107467075A (zh) | 一种短小芽孢杆菌作为水稻生长促进剂的用途 | |
Gangwar et al. | Growth and survival of Trichoderma harzianum and Pseudomonas fluorescens on different substrates and their temporal and spatial population dynamics in irrigated rice ecosystem | |
CN110178579B (zh) | 一种十字花科根肿病鉴定方法 | |
CN109804913B (zh) | 一种白羊草-内生真菌共生体的构建方法 | |
CN108587969B (zh) | 可防治棉花黄萎病的大丽轮枝菌的菌株hcx-01的制备及其应用 | |
CN102719364B (zh) | 一株哈茨木霉菌株及其在防控辣椒疫病中的应用 | |
CN102382776B (zh) | 一株用于防治苏门白酒草的小孢茎点霉 | |
CN112458021B (zh) | 一种生防荧光假单胞菌及其培养方法和应用 | |
CN104312945A (zh) | 一株油菜内生菌解淀粉芽孢杆菌4-3及其应用方法 | |
CN108148768A (zh) | 一株球托霉菌菌株及其应用 | |
CN103627643B (zh) | 棉花内生真菌cef-818及其在棉花黄萎病防治中的应用 | |
CN106167767A (zh) | 防治香蕉枯萎病的内生真菌l‑14及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 510070 No. 100 martyrs Middle Road, Guangdong, Guangzhou Patentee after: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY) Address before: 510070 No. 100 martyrs Middle Road, Guangdong, Guangzhou Patentee before: Guangdong Institute of Microbiology |
|
CX01 | Expiry of patent term | ||
CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20091111 |