CN100510716C - 一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置 - Google Patents
一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100510716C CN100510716C CNB2005101318544A CN200510131854A CN100510716C CN 100510716 C CN100510716 C CN 100510716C CN B2005101318544 A CNB2005101318544 A CN B2005101318544A CN 200510131854 A CN200510131854 A CN 200510131854A CN 100510716 C CN100510716 C CN 100510716C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fluorescence
- excitation
- fluorescence lifetime
- waveform
- signal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，为了克服现有测量方法测量荧光寿命的困难，以测量发射波形相对于激发波形的相位延迟计算得到荧光寿命的相移法为基础，采用具有一定调制度和频率可调谐的激发光源激励荧光样品。由计算机分别对激发波形和发射波形进行傅利叶级数展开，只需提取基频分量间的相位延迟，就可以根据相位延迟和荧光寿命的关系计算得到准确荧光寿命值，从而避开了激发波形中含有的高次谐波对实验结果的影响，提高了测量荧光寿命的准确度。解决了目前相移法必须依靠高简谐度激发波形等问题。提供一种由周期性任意波形激发光源就可以测量荧光寿命的方法，提高准确度外还降低了对激发光源驱动电路的要求。
Description
所属技术领域
本发明涉及一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置，本发明涉及一种测量荧光寿命的方法，尤其是激发光源是周期性的任意波形就能够测量得到荧光寿命。属于测量技术领域。
背景技术
目前，普遍使用脉宽极窄的脉冲光源激发荧光样品，测量发光随时间的衰减来得到荧光寿命。这种时域测量技术通常要求光脉冲持续时间远小于荧光寿命，当光脉冲持续时间和荧光寿命同一数量级时，需要解卷积得到荧光寿命，设备比较复杂。由于对脉冲产生装置的要求非常高，其要能够产生比荧光寿命相当或者更短的脉冲，而荧光寿命通常较小，现实当中产生这样的脉冲不易实现而且仪器成本很高。另外，这种极短脉冲容易受到噪音干扰，实验仪器的分辨率也不能无限增强。
为了消除噪音等的影响，还使用简谐波调制的具有一定相位和调制度的激发光源激发荧光样品，通过激发波形和发射波形的相位延迟得到荧光寿命。虽然这种频域测量方法具有方便、容易实现、对探测仪器要求不高等优点，但是却要求激发波形严格简谐，以便于直观比较与发射波形的相位延迟，调制度的大小变化。
一般地，激发波形不能够达到严格简谐。如果激发波形非简谐，含有高次谐波成分，再或者激发波形是一个任意波形，去激发荧光按单指数规律衰减的样品，得到的发射波形和激发波形其波形间没有可比性，这时相移法显得无能为力。
发明内容
为了克服现有技术结构的不足，本发明提供一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置。一方面能简化测量设备，降低对激发光源驱动电路的要求，避免产生严格简谐波形的不易，另一方面有效提高实验准确度，也可望使测量范围加大。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明提出的由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，
有以下步骤：
(1)用单色仪对光信号进行分光，得到预定波长范围内特定波长下的光信号；
(2)用光电倍增管将该光信号转换成电信号；
(3)用数字存储示波器记录下该电信号，得到该特定波长下的光波形；
(4)数字示波器记录的数据最后导入计算机进行数据处理；
(5)由计算机分别对激发波形和发射波形进行傅利叶级数展开，获取各阶分量；
(6)取出一阶分量，得到激发波形基频分量和发射波形基频分量间的相位延迟，根据相位延迟和荧光寿命的关系得到荧光寿命值。
周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，还包括用于对单色仪进行波长控制的计算机。
一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的装置，主要包括发光激励源、荧光信号探测系统和数据采集记录系统；由LED及其驱动电路构成的发光激励源连接光谱仪、光电倍增管、电源构成荧光信号探测系统；示波器和计算机连接构成数据采集记录系统。
发明的有益效果：周期性任意波形可以作傅利叶级数展开得到各阶简谐分量，从而在现有的相移法基础上，比较某一阶相位延迟或者调制度的变化从而得到荧光寿命。避开激发波形非简谐对实验结果的影响，避免目前的相移法必须依靠高简谐度激发波形的实际困难。降低对激发光源的硬件要求，提高测量荧光寿命的准确度，也可望使测量范围加大。
附图说明
下面结合附图和实施例对发明进一步说明。
图1是装置图；
图2是在简谐波e(t)的激发下，荧光样品稳态发光F(t)随时间的变化图；
图3是周期性任意波形、这里是脉冲e(t)的激发下，荧光样品稳态发光F(t)随时间的变化图。
具体实施方式
实施例1：一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，当激发波形为正弦波形但是含有高次谐波的时候，有以下步骤：
(1)用发光强度随时间以正弦波形周期变化但不要求严格简谐的光源作为激发光源；
(2)用单色仪对激发光信号进行分光，得到激发光对应波长下的光信号；
(3)用光电倍增管将该光信号转换成电信号；
(4)用数字存储示波器记录下该电信号，得到激发光的光波形；
(5)把数字示波器记录的数据导入计算机；
(6)用上述激发光源激发待测样品，使其发光；
(7)用单色仪对样品的发光信号进行分光，得到特定波长下的光信号；
(8)用光电倍增管将该光信号转换成电信号；
(9)用数字存储示波器记录下该电信号，得到样品发光的光波形；
(10)把数字示波器记录的数据导入计算机；
(11)由计算机分别对激发波形和发射波形进行傅利叶级数展开，获取各阶分量；
(12)取出一阶分量，得到激发波形基频分量和发射波形基频分量间的相位延迟，根据相位延迟和荧光寿命的关系得到荧光寿命值。
紫色发光二极管发出的408nm的正弦调制光波照射到荧光样品上，激发样品产生荧光。.将光谱仪调节在发射光谱的峰值位置，这一波长随时间变化的光信号经过光电倍增管转变为随时间变化的电信号，并且此电信号输出到数字示波器，显示出发光波形，最后数字示波器记录的数据导入计算机进行数据处理。激励光源的电流信号作为示波器的触发信号。激励光的波形也用这个系统测量和处理。由计算机分别对激发波形和发射波形进行傅利叶级数展开，获取各阶分量，取出一阶分量，得到激发波形基频分量和发射波形基频分量间的相位延迟，根据相位延迟和荧光寿命的关系得到荧光寿命值。
如图1所示，主要包括发光激励源、荧光信号探测系统和数据采集记录系统。1是由LED及其驱动电路构成的发光激励源；2是荧光样品；3是光谱仪、4是光电倍增管、7是电源，它们构成荧光信号探测系统；5示波器和6计算机构成数据采集记录系统。
如图2所示，发射波形F(t)相对于激发波形e(t)具有相位延迟Φ，另外调制度也变化了。但是这时的激发波形e(t)和发射波形F(t)都不是严格简谐波形，含有少量高频波。为避免高频分量对测量结果的影响，由计算机分别对激发波形和发射波形进行傅利叶级数展开，获取各阶分量，取出一阶分量，得到激发波形基频分量和发射波形基频分量间的相位延迟，根据相位延迟和荧光寿命的关系得到准确荧光寿命值。
实施例2：一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，其它步骤如实施例1，有步骤包括用周期性脉冲波形的激发光源激发样品而得到所述光信号。
如图3所示，可以看出激发波形e(t)和发射波形F(t)的相位没有直观可比性。在此基础上，由计算机分别对激发波形e(t)和发射波形F(t)进行傅利叶级数展开，获取各阶分量，取出一阶分量，得到激发波形基频分量和发射波形基频分量间的相位延迟，根据相位延迟和荧光寿命的关系得到准确荧光寿命值。
实施例3.一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，其它步骤如实施例1，有步骤包括用周期性任意波形的激发光源激发样品而得到所述光信号。
实施例4.一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，其它步骤如实施例1，有步骤所述相移法中的相位延迟参数值通过计算机程序来确定。
实施例5.一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，其它步骤如实施例1，有步骤所述单色仪可以用滤光片代替。适用于弱光波信号滤光。这样也可以使装置进一步简化。
Claims (8)
1.一种由周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)用单色仪对激发光信号和荧光信号进行分光，得到预定波长范围内特定波长下的激发光信号和荧光信号；
2)用光电倍增管将该激发光信号和荧光信号分别转换成电信号；
3)用数字存储示波器记录下该激发光电信号和荧光电信号，得到该特定波长下的光波形；
4)数字示波器记录的数据最后导入计算机进行数据处理；
5)由计算机分别对激发波形和发射波形进行傅利叶级数展开，获取各阶分量；
6)取出一阶分量，得到激发波形基频分量和发射波形基频分量间的相位延迟，根据相位延迟和荧光寿命的关系得到荧光寿命值。
2.如权利要求1所述的周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，其特征在于包括用含有高次谐波的任意激发波形激发样品而得到所述荧光信号。
3.如权利要求1或2所述的周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，其特征在于所述步骤利用计算机来进行。
4.如权利要求1或2所述的周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，其特征在于所述取分量按相移法作比较是从第一阶开始的任意阶分量，只需要为同阶分量。
5.如权利要求3所述的周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，其特征在于所述取分量按相移法作比较是从第一阶开始的任意阶分量，只需要为同阶分量。
6.如权利要求5所述的周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，其特征在于包括在一般驱动电路下作为激励源的LED只要含有高次谐波的任意波形即用于激发荧光样品从而得到荧光信号。
7.如权利要求6所述的周期性任意激发光源测量荧光寿命的方法，其特征在于还包括用于对单色仪进行波长控制的计算机。
8.一种实现权利要求1或2所述方法的由周期性任意波形激发测量荧光寿命的装置，主要包括发光激励源、荧光信号探测系统和数据采集记录系统；其特征在于由LED及其驱动电路构成了发光激励源，发光激励源连接示波器；单色仪连接光电倍增管、光电倍增管连接电源构成荧光信号探测系统；示波器和计算机连接构成数据采集记录系统。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005101318544A CN100510716C (zh) | 2005-12-20 | 2005-12-20 | 一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005101318544A CN100510716C (zh) | 2005-12-20 | 2005-12-20 | 一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1987429A CN1987429A (zh) | 2007-06-27 |
| CN100510716C true CN100510716C (zh) | 2009-07-08 |
Family
ID=38184309
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2005101318544A Expired - Fee Related CN100510716C (zh) | 2005-12-20 | 2005-12-20 | 一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100510716C (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101207957B (zh) * | 2007-12-19 | 2011-01-19 | 北京交通大学 | 纳秒量级荧光寿命测量用高频调制光源 |
| CN101321032B (zh) * | 2008-06-24 | 2012-09-26 | 中兴通讯股份有限公司 | 光信号波形记录的方法和装置 |
| JP4540751B1 (ja) * | 2009-01-09 | 2010-09-08 | 三井造船株式会社 | 蛍光検出装置及び蛍光検出方法 |
| CN101832856A (zh) * | 2010-04-19 | 2010-09-15 | 北京交通大学 | 用恒定幅度及脉宽的可变频光源测定发光期间的方法 |
| CN111504496B (zh) * | 2019-01-31 | 2021-11-12 | 西安和其光电科技股份有限公司 | 一种用于荧光解调温度的信号处理方法 |
| CN110196218A (zh) * | 2019-03-18 | 2019-09-03 | 北京信息科技大学 | 一种脉冲时延估计的荧光寿命表征方法 |
| CN110208228B (zh) * | 2019-05-15 | 2023-05-09 | 杭州柔谷科技有限公司 | 荧光寿命检测方法、装置、计算机设备和存储介质 |
-
2005
- 2005-12-20 CN CNB2005101318544A patent/CN100510716C/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| A nonparametric method for analysis of fluorescenceemissionin combined time and wavelength dimensions. Olga V.Ivanova等.Annals of Biomedical Engineering,Vol.33 No.4. 2005 |
| A nonparametric method for analysis of fluorescenceemissionin combined time and wavelength dimensions. Olga V.Ivanova等.Annals of Biomedical Engineering,Vol.33 No.4. 2005 * |
| 光谱测量中的相敏检测. 冯稷，陈佳圭.物理，第22卷第3期. 1993 |
| 光谱测量中的相敏检测. 冯稷，陈佳圭.物理，第22卷第3期. 1993 * |
| 激光诱导荧光寿命及其测量. 阎吉祥，李家泽.光学技术，第2期. 1997 |
| 激光诱导荧光寿命及其测量. 阎吉祥，李家泽.光学技术，第2期. 1997 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1987429A (zh) | 2007-06-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100510716C (zh) | 一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法及装置 | |
| US5818582A (en) | Apparatus and method for phase fluorometry | |
| Gratton et al. | Multifrequency cross‐correlation phase fluorometer using synchrotron radiation | |
| US8330123B2 (en) | System and method for digital parallel frequency fluorometry | |
| JPH03504765A (ja) | ピコ秒多重調波フーリエ蛍光計 | |
| CN102012311B (zh) | 发光二极管的输出通量测量的系统和方法 | |
| JP7114406B2 (ja) | 電子スピン共鳴測定装置及び方法 | |
| CA2629296A1 (en) | Apparatus and method for system identification | |
| US11808831B2 (en) | Measurement apparatus and measurement method | |
| CN100494989C (zh) | 微弱荧光光谱的测量方法及装置 | |
| Berndt et al. | Phase‐modulation fluorometry using a frequency‐doubled pulsed laser diode light source | |
| Chen et al. | A practical implementation of multifrequency widefield frequency‐domain fluorescence lifetime imaging microscopy | |
| CN105527483A (zh) | 一种电光独立调制的瞬态光电压测试系统 | |
| CN104297598A (zh) | 一种vcsel的多参数测试装置及方法 | |
| CN102545038A (zh) | 分布反馈激光器驱动调制装置及痕量气体检测系统 | |
| Sulkes et al. | Measurement of luminescence decays: High performance at low cost | |
| Iwata et al. | Phase-modulation fluorometer using an ultraviolet light-emitting diode | |
| Hieftje et al. | Correlation-based approaches to time-resolved fluorimetry | |
| Bright et al. | Rapid frequency-scanned fiber-optic fluorometer capable of subnanosecond lifetime determinations | |
| Iwata et al. | Photon-counting phase-modulation fluorometer | |
| CN216870371U (zh) | 一种用于测量发光动力学实现电泵浦的装置 | |
| CN112129492A (zh) | 基于发光二极管的简易光源频闪测试仪的校准方法及校准系统 | |
| CN108333161A (zh) | 一种基于光纤的脉冲激光多次往返利用装置与荧光信号检测方法 | |
| CN207832673U (zh) | 一种基于光纤的脉冲激光多次往返利用装置 | |
| CN204807456U (zh) | 荧光寿命光谱仪 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090708 Termination date: 20111220 |