CN100503828C - 一种抗hbv s-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因 - Google Patents

一种抗hbv s-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因 Download PDF

Info

Publication number
CN100503828C
CN100503828C CNB018104401A CN01810440A CN100503828C CN 100503828 C CN100503828 C CN 100503828C CN B018104401 A CNB018104401 A CN B018104401A CN 01810440 A CN01810440 A CN 01810440A CN 100503828 C CN100503828 C CN 100503828C
Authority
CN
China
Prior art keywords
variable region
surface antigen
cdna
monoclonal antibody
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB018104401A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1441844A (zh
Inventor
李钟郁
高仁泳
康熙根
南定铉
宋武泳
文炯珍
宋泰勋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yuhan Corp
Original Assignee
Yuhan Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yuhan Corp filed Critical Yuhan Corp
Publication of CN1441844A publication Critical patent/CN1441844A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100503828C publication Critical patent/CN100503828C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及一种抗乙型肝炎病毒S-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因，一种包含上述基因的重组载体及一种从上述重组载体获得的转化体。

Description

一种抗HBV S-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因
技术领域
本发明涉及一种抗乙型肝炎病毒S-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因，一个包含上述基因的重组载体及一个从上述重组载体获得的转化体。
背景技术
乙型肝炎病毒(以下称为“HBV”)，原称丹氏颗粒，具有直径为42nm的球型特征。其外膜含有大量的乙型肝炎表面抗原，并包被着由180个乙型肝炎核心蛋白组成的内层核壳体。核壳体包含HBV基因组、聚合酶等(Summers等，国家科学院院刊(Proc.Nat.Acad.Sci)，72，4579，1975；Pierre Tiollais等，科学(Science)，213，406-411，1981)。
在HBV基因组中，HBV表面抗原的编码区包括三个开放阅读框的起始位点，它们使用一个共同的终止密码子，产生相同的S区。因此，HBV表面抗原可分为三种类型，即(1)小型HBV表面抗原(以下称为“S-表面抗原”)，仅包括S区，(2)中型HBV表面抗原(以下称为“M表面抗原”)，包括S区和另外一个55个氨基酸的区，称为Pre-S2，及(3)大型HBV表面抗原(以下称为“L表面抗原”)，包括Pre-S1区，Pre-S2区及S区。在这些表达的表面抗原中，S-表面抗原占80％或以上。
S-表面抗原的亚型依据其抗体识别特征进行分类。在所有的表面抗原中均表达的抗原区域被分类为a决定簇(determinant a)。其它四种亚型是d或y及w或r。d决定簇在122位残基处为赖氨酸，而y为精氨酸。类似地，w决定簇在160位残基处为赖氨酸，而r为精氨酸(Kennedy R.C.等，免疫学杂志(J.Immunol.)130，385，1983)。因此，血清学型可以被分为四种亚型，例如adr，adw，ayr和ayw(Peterson等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)257，10414，1982；Lars O.Marnius等，Intervirology，38，24-34，1995)。
S-表面抗原可特异地与肝细胞结合(Leenders等，肝脏学(Hepatology)，12，141，1990；Irina Ionescu-Matiu等，医学病毒学杂志(J.Med.Virology)，6，175-178，1980；Swan N.T.等，肠胃病学(Gastroenterology)80，260-264，1981；Swan N.T.等，肠胃病学(Gastroenterology)，85，466-468，1983；Marie，LM.等，Proc.Nat.Acad.Sci，81，7708-7712，1984；)。而且已证明人的肝质膜含有能与S-表面抗原特异结合的靶蛋白，如脱辅基脂蛋白H和内联蛋白II(Mehdi H.等，病毒学杂志(J.Virol.)，68，2415，1994.；Hertogs K.等，病毒学(Virology)，197，265，1993)。
与此同时，在开发一种有用的治疗性单克隆抗体的过程中，因为从鼠中获得的单克隆抗体在应用到人时会产生免疫反应，所以人源化抗体是优选的。
韩国专利公开号1999-8650最近已公开一个抗Pre-S1抗原决定部位的单克隆抗体的可变区，该Pre-S1仅存在于三种HBV表面抗原(S-，M-和L-表面抗原)中的L表面抗原中，一个编码该区的基因，及一种使用其的人源化抗体。但是，因为L表面抗原仅占所表达的表面抗原的1-2％，所以L表面抗原作为靶来用于诊断及治疗目的抗HBV抗体的研发是不合适的。
发明概述
因此，本发明的一个基本目标是提供一种编码单克隆抗体的可变区的基因，该可变区可特异识别S-表面抗原，特别是能识别普遍存在于所有HBV表面抗原中的a决定簇。
本发明的另一个目标是提供一种包含上述基因的重组载体。
本发明的进一步目标是提供一种用上述重组载体所获得的转化体。
本发明的另一个目标是提供上述单克隆抗体的可变区。
根据本发明的一个方面，提供一种编码特异识别HBV S-表面抗原的单克隆抗体可变区的基因。
本发明人使用S-表面抗原的adr型决定簇(International Enzymes Inc.，美国)免疫小鼠，该型在韩国HBV患者中最为常见。然后，将从免疫小鼠中获得的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2O-Ag14，ATCC CRL-1581)融合以产生大量的杂交瘤细胞，经过随后的克隆和选择程序，最后得到大量的单克隆抗体。本发明人在大量的单克隆抗体中选择能特异地与a决定簇结合的单克隆抗体；从而最终获得了杂交瘤细胞系(A9-11-5)，该细胞系能产生与a决定簇以高亲和性特异结合的特殊的单克隆抗体。
本发明人从上述杂交瘤细胞系中分离总RNA，以便合成轻链和重链的cDNA，并且，最终分别获得了包括SEQ ID NO.5的大约440bp的轻链cDNA基因和包括SEQ ID NO.6的大约460bp的重链cDNA基因。
从上述的单克隆抗体的轻链和重链中，检测CDR(互补性决定区)残基。结果，确定轻链的CDR残基存在于23-36，52-58及91-98的位置，其分别代表SEQ ID NOs.9，10和11的肽。另外，发现重链的CDR残基存在于31-35，50-65及98-103的位置，其分别代表SEQ ID NOs.12，13和14的肽。
因此，本发明，在其范围内，包括一种编码抗HBV S-表面抗原的单克隆抗体轻链可变区的cDNA，上述轻链可变区包括序列为SEQ ID NOs.9，10和11的肽。另外，本发明包括一种其中的轻链可变区具有SEQ ID
NO.7的氨基酸序列的cDNA，并且优选地，包括SEQ ID NO.5的核苷酸序列的cDNA。
而且，本发明，在其范围内，包括一个编码抗HBV S-表面抗原的单克隆抗体重链可变区的cDNA，上述重链可变区包括SEQ ID NOs.12，13和14的肽。另外，本发明包括一种其中的重链可变区具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列的cDNA，并且优选地，包括SEQ ID NO.6的核苷酸序列的cDNA。
上述编码单克隆抗体的轻链或重链可变区的cDNA基因可以插入到质粒载体如pCRII(Invitrogen Co.美国)中，得到重组载体。因此，本发明，在其范围内，包括含有上述编码轻链可变区的cDNA的重组载体pCRA9Lv，及含有上述编码重链可变区的cDNA的重组载体pCRA9Hv。
另外，微生物，如大肠杆菌，可以用上述重组载体，pCRA9Lv和/或pCRA9Hv进行转化得到转化体。因此，本发明包括转化体大肠杆菌DH5α/YRC-pCRA9Lv(KCTC 1011BP)和转化体大肠杆菌DH5α/YRC-pCRA9Hv(KCTC 1010BP)，它们分别是用重组载体pCRA9Lv和pCRA9Hv转化而得到的。
重组载体从上述转化体中用已知方法进行回收(J.Sambrook等，Molecular cloning，Vol.1，1.25-1.28)。例如，转化体的细胞膜可用溶液1(50mM葡萄糖，25mM Tris·HCl和10mM EDTA)弱化。用溶液2(0.2NNaOH和1％ SDS)破坏细胞膜，并使蛋白质和染色体变性。重组载体之外的成分可用溶液3(5M醋酸钾和醋酸)聚集，然后离心。获得的重组载体层可用乙醇沉淀以回收重组载体。
本发明，在其范围内，包括一种单克隆抗体的可变区，该区由包含SEQID NOs.9，10和11的肽的轻链和包含SEQ ID NOs.12，13，14的肽的重链组成。另外，优选的是一种单克隆抗体的可变区，其中的轻链可变区具有SEQ ID NO.7的氨基酸序列，并且重链可变区具有SEQ ID NO.8的氨基酸序列。
从上述编码根据本发明的单克隆抗体的可变区的cDNA基因可获得人源化的抗HBV的单克隆抗体，其是通过将S-表面抗原直接结合的CDR区(也就是说，对轻链来说，编码SEQ ID Nos.9，10和11的肽的基因；而对重链来说，编码SEQ ID Nos.12，13和14的肽的基因)与人抗体基因融合，或通过用编码本发明的单克隆抗体的可变区的基因替代人抗体可变区而实现的。
如上所述，编码本发明的单克隆抗体的可变区的基因对识别HBV S-表面抗原，尤其是HBV表面抗原中有最高表达率的a决定簇是特别有效的。因此，本发明的基因可用于生产广泛用于各种类型的HBV表面抗原，如adr，adw，ayr和ayw的单克隆抗体，来中和和/或除去HBV。
实施本发明的最佳方式
本发明将通过以下实施例进一步进行详细说明，但是本发明并不局限于这些实施例。
实施例1 从细胞系(A9-11-5)中分离RNA及其cDNA合成
将1 X 108个A9-11-5细胞加入10ml 4M异硫氰酸胍中破裂细胞，向其中加入8ml酸性酚溶液。混合物进行离心(10000rpm，10分钟)以提取RNA。向5μg提取的RNA中加入0.5ng寡聚dT，0.5单位的RNA酶抑制剂和100单位莫洛尼鼠白血病毒反转录酶(M-MLV)。所得的混合物在37℃反应1小时合成cDNA。
用2μg合成的cDNA作为模板；对轻链而言，以SEQ ID Nos.1和2的DNA寡核苷酸作为引物；而对重链而言，以SEQ ID Nos.3和4的DNA寡核苷酸作为引物，用AmpliTaq聚合酶(Perkin-Elmer BiosystemCo.，美国)进行聚合酶链式反应(PCR)。在PCR的第一步中，反应在以下的条件下：94℃ 1.5分钟，55℃ 2分钟，和72℃ 3分钟，重复30个循环。在第二步中，反应在94℃ 1.5分钟，55℃ 2分钟及72℃ 10分钟的条件下进行一个循环。
将扩增的PCR产物用1.5％的琼脂糖凝胶进行电泳。用100ml 0.5μg/ml溴化乙锭溶液染色20分钟后，较之于100bp标准DNA ladder(Lifetechnology Co.美国)，重链的扩增的基因产物表现为大约460bp，而轻链为大约440bp。
实施例2 cDNA克隆
在实施例1中进行1.5％的琼脂糖电泳后，用透析膜(Spectrum Co.美国)回收440bp的基因片段(轻链基因片段)，通过向其中加入200μl酚和200μl氯仿，除去杂质，然后加入2.5ml的乙醇纯化该基因片段。将纯化的基因片段亚克隆到pCRII载体(Invitrogen Co.，美国)，用其转化大肠杆菌DH5α(Lifetechnology Co.美国)，得到转化体(Cohen，S.N.等，Proc.Nat.Acad.Sci.69，2110，1972)。获得的转化体在含有100μg/ml氨苄青霉素的LB培养基中培养过夜，然后提取质粒。将质粒用限制性内切酶EcoRI(Biolab Co.美国)进行酶切，得到插入了上述440bp基因片段的克隆子Lv-1，Lv-4和Lv-7。
对460bp的基因片段(重链基因片段)进行同样的操作，得到重组载体，通过用其转化大肠杆菌DH5α(Lifetechnology Co.美国)得到转化体。转化体在含有100g/ml氨苄青霉素的LB培养基中过夜培养，然后提取质粒。将质粒用限制性内切酶EcoRI(Biolab Co.美国)进行酶切，得到插入上述460bp基因片段的克隆子Hv-1，Hv-4和Hv-7。
向从上述克隆中所获得的100μg/ml的每种质粒溶液中加入60μl聚乙二醇溶液(20％聚乙二醇及2.5M氯化钠)，然后离心。向所得的沉淀中加入100μl蒸馏水，用50μl酚溶液抽提两次，然后用200μl乙醇纯化质粒。
向50μl含有2μg纯化的质粒的溶液中加入5μl 2N的氢氧化钠和10110mM EDTA。然后，混合物在37℃反应30分钟。向反应混合物分别加入1pmol M13和T7引物。整个反应物在65℃反应2分钟，然后室温静置。每个克隆的核苷酸序列用DNA测序酶试剂盒II(DNA sequenaseversion II kit)(United States Biochemical Co.，美国)进行分析。
结果表明，三个轻链克隆(Lv-1，Lv-4和Lv-7)的核苷酸序列是相同的。从这些克隆中获得的质粒载体命名为pCRA9Lv。而携带pCRA9Lv质粒载体的转化体被命名为大肠杆菌DH5α/YRC-pCRA9Lv，该菌株最初于2000年5月16日保存在韩国生物科学和生物技术研究所中的韩国典型培养物保藏中心(KCTC)(Korean Collection for Type Cultures(KCTC)in Korea Research Institute of Biosci.& Biotech.)(KCTC18021P)，并且然后于2001年5月16日转为在布达佩斯条约下的保藏(KCTC1011BP)。
此外，三个重链克隆(Hv-1，Hv-4和Hv-7)的核苷酸序列是相同的。从这些克隆中获得的质粒载体被命名为pCRA9Hv。而携带pCRA9Hv质粒载体的转化体被命名为大肠杆菌DH5α/YRC-pCRA9Hv，该菌株最初于2000年5月16日保存在韩国生物科学和生物技术研究所中的韩国典型培养物保藏中心(KCTC)(KCTC18020P)，然后于2001年5月16日转为在布达佩斯条约下的保藏(KCTC 1010BP)。
实施例3 cDNA的核苷酸序列分析
对从细胞系A9-11-5获得的单克隆抗体的可变区氨基酸序列(Harris.L.等，蛋白质科学(Protein Sci.)4，306-310，1995.；Kabat.E.A.等，免疫学目的的蛋白质的测序(Sequence of proteins of immunological interest)第五版，1991.；Williams A.F.等，免疫学年度综述(Annu.Rev.Immunol.)6，381-406，1988)的分析的结果表明，该重链属于I(B)亚型(subgroup)，而轻链属于λ1系列。
在可变区中，重链的抗原识别CDR残基在31-35(CDR1)，50-65(CDR2)和98-103(CDR3)的位置，而轻链的抗原识别CDR残基在23-36(CDR1)，52-58(CDR2)和91-98(CDR3)的位置。
实施例4 从杂交瘤细胞系A9-11-5获得的单克隆抗体的结合亲和性
将从细胞系A9-11-5获得的2.0 X 10-11M的单克隆抗体加入到各种浓度(1.0 X 10-6-1.2 X 10-12M)的HBV S-表面抗原(International Enzymes Inc.，美国)溶液中，然后，混合物在室温下反应3小时。
将100μl每种混合物加入到用0.1μg上述的S-表面抗原预先包被的96孔酶联免疫板(immulon plates)(Dinatech Co.，美国)中。混合物在37℃温育2小时，除去上清。然后，向每孔中加入200μl 0.5％酪蛋白-磷酸盐缓冲盐水，并且再在37℃温育1小时。加入100μl结合了辣根过氧化物酶的稀释的(X 1000)羊抗鼠多克隆抗体(Sigma Co.，美国)，然后用ELISA阅读仪(reader)(Dinatech Co.，美国)测定其光密度。
从细胞系A9-11-5中获得的单克隆抗体具有1.84 X 10-9M-1的高结合亲和性。术语结合亲和性是指当50％的单克隆抗体结合受抑制时，抗原浓度的倒数(Friguet B.等，免疫学方法杂志(J.of Immunological Method)，77，305-319，1985)。
本发明已参照具体的实施方式进行了描述，应该意识到由那些在本发明领域中技术人员可以进行各种改进和变化，而这些改进和变化也在所附加的权利要求所限定的本发明范围内。
序列表
<110>株式会社柳韩详行
<120>一种抗HBV S-表面抗原的单克隆
抗体的可变区及其编码基因
<130>YHK200005
<150>KR10-2000-0028938
<151>2000-05-29
<160>14
<170>KOPATIN1.71
<210>1
<211>34
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>1
<210>2
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>2
Figure C01810440D00111
<210>3
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>3
Figure C01810440D00112
<210>4
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>4
Figure C01810440D00121
<210>5
<211>327
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<400>5
Figure C01810440D00122
<210>6
<211>342
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<400>6
<210>-7
<211>109
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>7
Figure C01810440D00141
<210>8
<211>114
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>8
Figure C01810440D00142
Figure C01810440D0015093124QIETU
<210>9
<211>14
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>9
Figure C01810440D00151
<210>10
<211>7
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>10
Figure C01810440D00152
<210>11
<211>8
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>11
Figure C01810440D00161
<210>12
<211>5
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>12
Figure C01810440D00162
<210>13
<211>16
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>13
<210>14
<211>6
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>14
Figure C01810440D00171
国际承认的用于专利程序的微生物保藏的布达佩斯条约
物材料国际保藏证明
根据7.1条
 
保藏人 株式会社柳韩洋行
地址 韩国汉城市
保藏日 2000年5月16日在该国际机构保藏，并且于2001年5月16日转成在布达佩斯条约下的保藏。
保藏号 KCTC 1010BP
微生物分类命名 大肠杆菌DH5@/YRC-pCRA9Hv
国际保藏单位名称 韩国典型培养物保藏中心(KoreanCollection for Type Cultures)
国际承认的用于专利程序的微生物保藏的布达佩斯条约
物材料国际保藏证明
根据7.1条
 
保藏人 株式会社柳韩洋行
地址 韩国汉城市
保藏日 2000年5月16日在该国际机构保藏，并且于2001年5月16日转成在布达佩斯条约下的保藏。                           
保藏号 KCTC 101lBP
微生物分类命名 大肠杆菌DH5@/YRC-pCRA9Lv
国际保藏单位名称 韩国典型培养物保藏中心(KoreanCollection for Type Cultures)      
序列表
<110>株式会社柳韩洋行
<120>一种抗HBV S-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因
<130>YHK200005
<160>14
<170>KopatentIn1.71
<210>1
<211>34
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>1
Figure C01810440D00201
<210>2
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>2
Figure C01810440D00202
<210>3
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>3
Figure C01810440D00203
<210>4
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>4
Figure C01810440D00211
<210>5
<211>327
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<400>5
Figure C01810440D00212
<210>6
<211>342
<212>DNA
<213>大肠杆菌
<400>6
Figure C01810440D00213
<210>7
<211>109
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>7
Figure C01810440D00222
<210>8
<211>114
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>8
Figure C01810440D00223
Figure C01810440D00231
<210>9
<211>14
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>9
<210>10
<211>7
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>10
<210>11
<211>8
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>11
Figure C01810440D00234
<210>12
<211>5
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>12
Figure C01810440D00241
<210>13
<211>16
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>13
Figure C01810440D00242
<210>14
<211>6
<212>PRT
<213>大肠杆菌
<400>14
Figure C01810440D00243

Claims (10)

1.一种单克隆抗体的可变区，它由轻链和重链组成，所述轻链由SEQ ID NO：7的氨基酸序列组成，所述重链由SEQ ID NO：8的氨基酸序列组成。
2.一种cDNA，其编码权利要求1的单克隆抗体可变区的轻链可变区或重链可变区。
3.权利要求2的cDNA，其中轻链可变区由SEQ ID NO.7的氨基酸序列组成。
4.权利要求3的cDNA，其由SEQ ID NO.5的核苷酸序列组成。
5.权利要求2的cDNA，其中重链可变区由SEQ ID NO.8的氨基酸序列组成。
6.权利要求5的cDNA，其由SEQ ID NO.6的核苷酸序列组成。
7.一种重组载体pCRA9Lv，其通过将编码权利要求1的单克隆抗体可变区的轻链可变区的cDNA克隆入载体pCRII而获得。
8.一种重组载体pCRA9Hv，其通过将编码权利要求1的单克隆抗体可变区的重链可变区的cDNA克隆入载体pCRII而获得。
9.一种转化体大肠杆菌DH5α/YRC-pCRA9Lv，其保藏号为KCTC1011BP，其转化了重组载体pCRA9Lv。
10.一种转化体大肠杆菌DH5α/YRC-pCRA9Hv，其保藏号为KCTC1010BP，其转化了重组载体pCRA9Hv。
CNB018104401A 2000-05-29 2001-05-28 一种抗hbv s-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因 Expired - Fee Related CN100503828C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2000-0028938A KR100419555B1 (ko) 2000-05-29 2000-05-29 비형간염바이러스의 에스-표면항원을 인식하는단일클론항체의 가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
KR28938/2000 2000-05-29

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1441844A CN1441844A (zh) 2003-09-10
CN100503828C true CN100503828C (zh) 2009-06-24

Family

ID=36686692

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB018104401A Expired - Fee Related CN100503828C (zh) 2000-05-29 2001-05-28 一种抗hbv s-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因

Country Status (10)

Country Link
US (3) US6680053B2 (zh)
EP (1) EP1297141B1 (zh)
JP (1) JP4112972B2 (zh)
KR (1) KR100419555B1 (zh)
CN (1) CN100503828C (zh)
AT (1) ATE309357T1 (zh)
AU (1) AU6276301A (zh)
DE (1) DE60114829T2 (zh)
IL (2) IL153066A0 (zh)
WO (1) WO2001092529A1 (zh)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100423614B1 (ko) * 2001-05-16 2004-03-22 주식회사유한양행 비형간염바이러스의 에스-표면항원을 인식하는단일클론항체의 가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
US20090191213A9 (en) * 2003-07-02 2009-07-30 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for regulating NK cell activity
EP1639013B1 (en) 2003-07-02 2012-09-12 Innate Pharma Pan-kir2dl NK-receptor antibodies and their use in diagnostic and therapy
KR100789645B1 (ko) * 2004-04-14 2007-12-27 주식회사유한양행 Ｂ형 간염바이러스의 ｓ-표면항원을 인식하는 인간화 항체및 이의 제조방법
GB0411378D0 (en) * 2004-05-21 2004-06-23 Astrazeneca Ab Pharmaceutical compositions
PL2287195T3 (pl) 2004-07-01 2019-10-31 Novo Nordisk As Przeciwciała pan-kir2dl receptora nk i ich zastosowanie w diagnostyce i terapii
EP1789043A2 (en) * 2004-08-13 2007-05-30 Migenix Inc. Compositions and methods for treating or preventing hepadnaviridae infection
PL1835937T3 (pl) 2005-01-06 2012-09-28 Novo Nordisk As Kompozycje i sposoby leczenia infekcji wirusowej
CA2594922A1 (en) * 2005-01-14 2006-07-20 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Se Cretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind or neutralize hepatitis b virus
EP2217625B1 (en) 2007-11-08 2021-08-04 Precision Biologics, Inc. Recombinant monoclonal antibodies and corresponding antigens for colon and pancreatic cancers
US8790651B2 (en) 2011-07-21 2014-07-29 Zoetis Llc Interleukin-31 monoclonal antibody
US9753036B2 (en) 2014-04-29 2017-09-05 Edp Biotech Corporation Methods and compositions for screening and detecting biomarkers
CN112135628A (zh) 2018-03-16 2020-12-25 硕腾服务有限责任公司 抗白介素31的肽疫苗
US11530262B2 (en) 2018-03-16 2022-12-20 Zoetis Services Llc Interleukin-31 monoclonal antibodies for veterinary use
US20200011871A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 Edp Biotech Corporation Kits and methods for detecting markers
TW202221039A (zh) 2020-10-19 2022-06-01 美商碩騰服務公司 犬及貓抑瘤素Ｍ受體β之抗體及其用途
CN112521492B (zh) * 2020-12-18 2022-05-20 杭州贤至生物科技有限公司 乙肝表面抗原单克隆抗体的制备
WO2022173967A1 (en) 2021-02-11 2022-08-18 Edp Biotech Corporation Kits and methods for detecting markers and determining the presence or risk of cancer

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61104796A (ja) * 1984-10-26 1986-05-23 Chemo Sero Therapeut Res Inst モノクロ−ナル抗体の製造方法
DE4425115A1 (de) * 1994-07-15 1996-01-18 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur Modifizierung der Stabilität von Antikörpern
IL118626A0 (en) * 1996-06-11 1996-10-16 Xtl Biopharmaceuticals Limited Anti HBV antibody
US6541198B1 (en) * 1997-06-27 2003-04-01 Akzo Nobel N.V. Antibodies and other binding molecules specific for hepatitis B viral antigens
KR100250832B1 (ko) 1997-07-02 2000-04-01 박호군 비형 간염 바이러스의 표면 항원 프리-에스1 에피토프를 인식하는 생쥐 단일클론항체의 가변 영역,이를 암호하는 유전자 및 그의 염기 서열
ES2207278T3 (es) * 1998-07-28 2004-05-16 Micromet Ag Heterominicuerpos.
KR100345467B1 (ko) * 1998-08-12 2002-12-26 주)녹십자 B형 간염바이러스의 표면항원 s에 대한 인간화 항체 및 이의제조방법
US6589534B1 (en) * 1999-09-30 2003-07-08 Yeda Research And Development Co., Ltd. Hepatitis B virus binding proteins and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
KR100419555B1 (ko) 2004-02-19
US6680053B2 (en) 2004-01-20
WO2001092529A1 (en) 2001-12-06
US20020061581A1 (en) 2002-05-23
ATE309357T1 (de) 2005-11-15
EP1297141A4 (en) 2004-07-14
EP1297141A1 (en) 2003-04-02
JP4112972B2 (ja) 2008-07-02
IL153066A0 (en) 2003-06-24
US20050249753A1 (en) 2005-11-10
DE60114829T2 (de) 2006-08-03
US6924368B2 (en) 2005-08-02
KR20010107418A (ko) 2001-12-07
DE60114829D1 (de) 2005-12-15
JP2003534802A (ja) 2003-11-25
US20040191259A1 (en) 2004-09-30
IL153066A (en) 2010-11-30
EP1297141B1 (en) 2005-11-09
CN1441844A (zh) 2003-09-10
US7112664B2 (en) 2006-09-26
AU6276301A (en) 2001-12-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100503828C (zh) 一种抗hbv s-表面抗原的单克隆抗体的可变区及其编码基因
JP2003534802A6 (ja) Ｂ型肝炎ウイルスのｓ−表面抗原に対するモノクローナル抗体の可変領域及びこれをコードする遺伝子
CN1980956B (zh) 抗乙型肝炎病毒s-表面抗原的人源化抗体
CN100516222C (zh) 一种针对hbv s-表面抗原的单克隆抗体可变区及编码它的基因
JP3552103B2 (ja) Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原ｐｒｅ−Ｓ１に対するヒト化抗体及びその製造方法
EP1322761A1 (en) A humanized antibody to surface antigen s of hepatitis b virus and a preparing method thereof
KR100250832B1 (ko) 비형 간염 바이러스의 표면 항원 프리-에스1 에피토프를 인식하는 생쥐 단일클론항체의 가변 영역,이를 암호하는 유전자 및 그의 염기 서열
KR100246127B1 (ko) 비형 간염 바이러스의 표면항원 프리-에스1에 대한 생쥐 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 그의 제조방법
KR100308758B1 (ko) Ｂ형 간염 바이러스의 표면항원 프리-ｓ2에 대한 인간화 항체 및그의 제조방법
KR100246128B1 (ko) 비형 간염 바이러스의 표면항원 프리-에스1에 대한 생쥐 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 그의 제조방법
KR20040058606A (ko) 비형간염바이러스의 에스-표면항원을 인식하는 인간화항체 및 이의 제조방법
JPH08509974A (ja) Ｂ型肝炎表面抗原に対する抗体の組成物
KR100250831B1 (ko) 비형 간염 바이러스의 표면 항원 프리-에스1 에피토프를 인식하는 생쥐 단일클론 항체의 가변 영역,이를 암호하는 유전자 및 그의 염기 서열
KR100345469B1 (ko) B형간염바이러스의표면항원프리-s1에대한인간화항체및이의제조방법
CN117887668A (zh) 检测HIV-1 p24抗原的杂交瘤细胞HB3及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20090624

Termination date: 20110528