CN100478001C - 刺蒺藜提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种刺蒺藜提取物,其包括含量在50%以上的刺蒺藜总螺甾皂苷和刺蒺藜总呋甾皂苷,其中该刺蒺藜总螺甾皂苷含量在15%~40%;刺蒺藜总呋甾皂苷含量在15%~40%;上述含量均以提取物总重量为计。本发明还公开了该刺蒺藜提取物的制备方法,以及以其为活性成分的药物组合物。本发明的刺蒺藜提取物及其药物组合物具有预防或治疗抑郁症的效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种刺蒺藜提取物及其制备方法,以该刺蒺藜提取物作为活性成分的药物组合物,以及该刺蒺藜提取物及其药物组合物在抗抑郁症方面的用途。
背景技术
中药刺蒺藜为蒺藜科(Zygophyllaceae)、蒺藜属(Tritulus)植物蒺藜(Tritulus terrestris)的干燥成熟果实,又名蒺藜、白蒺藜,蒺藜子,硬蒺藜。性味辛、苦,微温,有小毒,入肝、肺经,具有散风、明目、下气、行血、补肾益精之功效。刺蒺藜在我国民间有悠久的用药历史,《神农本草经》将“蒺藜子”列为上品药物,言其“主恶血,破症结积聚,喉痹,乳难,久服长肌肉,明目,轻身”。中国药典记载其功能“平肝解郁,活血祛风,明目,止痒。用于头痛眩晕,胸胁胀痛,乳闭乳痈,目赤翳障,风疹瘙痒”。
近年来,各国对该植物研究未艾。研究表明,刺蒺藜提取物包括刺蒺藜甾体皂苷(皂甙)、黄酮、多糖及生物碱等成分,其中甾体皂苷的主要成分包括总螺甾皂苷和总呋甾皂苷两类,故又称总皂苷;而总螺甾皂苷和总呋甾皂苷又分别包括各种单体化合物——皂苷元(皂甙元)。另外,不同刺蒺藜部位作为原料(如地上部分和果实),和/或不同的制备方法得到的刺蒺藜提取物中的总皂苷含量有所不同,其中的总螺甾皂苷和总呋甾皂苷的含量,乃至所含各皂苷元的组成也有差异(Wang,Y.,etc.Steroidal saponins from fruitsof Tribulus terrestris.Phytochemistry,1999,45(4),811~817或黄金文等.蒺藜甾体皂甙元化学成分研究.天然产物研究与开发,2003,15(2),101~103),从而各提取物的药理作用、作用效果也可能会有不同。如国外以刺蒺藜果为原料开发出了用于增强性功能的“Tribustan”和“Vitanone”及软化血管的“Tribusaponin”等制剂,我国亦用蒺藜的茎叶为原料开发出“心脑舒通”治疗心血管疾病。而目前认为刺蒺藜提取物具有药理活性的主要是皂苷类,如公开号为CN 1413588A的专利申请,其公开了从刺蒺藜(果实)中提取的、主要成分为总皂苷的提取物,虽提及该总皂苷的含量>50%,但根据说明书,未能得知该总皂苷及其中呋甾皂苷及螺甾皂苷的具体含量,且只用于改善脑血液循环。
发明内容
本发明要解决的技术问题之一是提供一种新的刺蒺藜提取物。
本发明的刺蒺藜提取物,其包括基本由刺蒺藜总螺甾皂苷和刺蒺藜总呋甾皂苷组成的刺蒺藜总皂苷,该总皂苷含量在50%以上,其中该刺蒺藜总螺甾皂苷含量在15%~40%;刺蒺藜总呋甾皂苷含量在15%~40%;上述含量均以提取物总重量为计。
较佳地,该刺蒺藜总螺甾皂苷和刺蒺藜总呋甾皂苷的总含量为50%~60%,该刺蒺藜总螺甾皂苷含量在20%~40%;刺蒺藜总呋甾皂苷含量在20%~30%;更佳地,该刺蒺藜总螺甾皂苷含量在25%~35%;刺蒺藜总呋甾皂苷含量在25%~30%,两者总重量为55%~60%。
根据本发明,术语刺蒺藜同中国药典,是指蒺藜果实;刺蒺藜提取物是指从蒺藜果实中提取的产物。
本发明要解决的技术问题之二是提供上述刺蒺藜提取物的制备方法。
本发明的制备方法,其包括下列步骤:
a、取原料蒺藜果实,用10%~90%乙醇提取,过滤提取液,滤液冷却、放置10~12小时左右,以除去粘液质,高速离心后取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱;
b、上柱后,先用水洗至无色后,再用10%~30%乙醇洗至无色,然后用50%~95%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,即得本发明提取物。
其中,步骤a中乙醇提取是指常规的回流提取,或在相应温度下,如78~85℃,进行加热提取;提取次数可为1~3次,较佳的是2~3次;每次2~3小时;每次原料与乙醇的重量比为1∶8~12;滤液冷却、放置的温度为0~10℃,通常在通风阴凉处或冰箱冷藏放置。
而步骤a中高速离心是指速度为4000~5000转/分钟的离心,一般离心5分钟左右即可;该乙醇浓度最佳的是75%;该大孔吸附树脂柱较佳地是HPD100、HPD300、HPD100a、XAD-2或HP20等相同或相似类别的非极性大孔吸附树脂柱。
根据本发明,步骤b中最好用70%浓度乙醇洗脱。
本发明制备方法在步骤b后还可以包括步骤c:干燥得本发明提取物干粉,所说的干燥可以是喷雾干燥、减压或常压下干燥、或冷冻或真空干燥等常规的干燥方法。
本发明要解决的另一技术问题是提供以本发明刺蒺藜提取物为活性成分的药物组合物。
本发明的药物组合物包括有效量的本发明刺蒺藜提取物,以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
根据本发明,“有效量”系指在普遍认同的医学判定范畴内,化合物的用量足以改善待治病情,且治疗时并未出现严重的副作用。某化合物的有效量应根据具体的待治病情、接受治疗的病人的年龄和生理状况、病情严重程度、疗程长短、药用载体及给药途径等因素而确定。
而一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂,可以是添加剂、稀释剂、崩解剂、分散剂、载体或抛射剂等。本发明的药物组合物可以用如下形式口服给药:片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或混悬液(含有如约0.05-5%悬浮剂)、糖浆(含有如约10-50%糖)、和酏剂(含有约20-50%乙醇),或者以无菌可注射溶液或混悬液形式(在等渗介质中含有约0.05-5%悬浮剂)进行非肠胃给药。
从易于制备和给药的立场看,本发明优选的药物组合物是固态组合物,尤其是片剂、颗粒剂和固体填充或液体填充的胶囊;口服给药是优选的。
口服用药的固体药剂如上所述,包括粉剂、粒剂、片剂、丸剂、胶囊等。这种剂型可用有效组分与至少一种赋形剂混合而成,这些赋形剂包括蔗糖、乳糖、纤维素糖、甘露醇、麦芽糖、葡聚糖、淀粉、琼脂、藻酸炎、壳质、壳聚糖、果胶、黄耆胶、阿拉伯胶、明胶、胶原、酪蛋白、白蛋白以及合成或半合成的聚合物和甘油酯,一般这些剂型可含有另外的添加剂,包括惰性稀释剂,润滑剂如硬脂酸镁,防腐剂如对羟苯甲酸酯类,山梨酸,抗氧剂如维生素C、α-维生素E和半胱氨酸,分解剂,粘结剂,增稠剂,缓冲液,甜味剂,调味剂和香料。片剂和丸剂也可覆以肠衣。口服的液体剂型包括可药用的乳剂、糖浆、酊剂、混悬液和溶液,可以含有常用的惰性稀释剂,如水。
本发明的刺蒺藜提取物含有含量较高,即纯度较高的总皂苷,且其中含有一定含量的有效物质——刺蒺藜总螺甾皂苷和刺蒺藜总呋甾皂苷;而基本除去了黄酮类及多糖类等其它非有效成分。另外,本发明的刺蒺藜提取物及含有其的药物组合物具有新的用途——抗抑郁症作用,其通过制成药品、保健食品或食品,可用于预防、治疗或辅助治疗抑郁症。
具体实施方式
下面通过实施例及效果实施例进一步说明本发明。其中,
1)本发明刺蒺藜提取物中总皂苷含量的测定采用香草醛-高氯酸法,具体步骤为:
取刺蒺藜提取物干粉0.1g,以甲醇溶解,定容至10ml,取20ul于试管中,挥干甲醇,残渣用5%醋酸香草醛溶液在60℃显色15分钟,加入5ml醋酸,在455nm处测定;含量以薯蓣皂苷标准品(国家中药标准对照品研究中心提供)计。
2)本发明刺蒺藜提取物中总呋甾皂苷含量的测定(殷翔、刘维、严伟民.蒺藜皂甙水提工艺研究.上海医药;2004,25(5):231~232),具体步骤为:
精密称取氯化钴(分析纯CoCl2·6H2O)0.6g,置25ml量瓶中,加水溶解,并稀释至刻度,摇匀,备用。取本发明提取物适量(约含呋甾皂苷20mg),精密称定,置25ml量瓶,加甲醇适量,振摇20分钟,用甲醇稀释至刻度,摇匀,静置,精密量取上清液2ml,置10ml量瓶中,加对二甲氨基苯甲醛试液5ml,加甲醇稀释至刻度,摇匀,密塞,58±2℃水浴中保温2小时,取出并迅速冷却至室温,以甲醇代替样品液同样处理,所得的溶液作为空白,照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)在515nm波长处测定吸收度AS。另以水作为空白,同样于515nm波长处测定吸收度AR,按下式计算呋甾皂苷的百分含量∶百分含量(%)=(AS×5WR×0.0093)/(AR×WS)×100%
式中,AS为供试品吸收度;AR为氯化钴溶液的吸收度;WS为供试品重量;WR为氯化钴重量;0.0093是参比品与呋甾皂甙对照品的换算系数。
3)本发明刺蒺藜提取物中总螺甾皂苷含量的测定是通过总皂苷含量减去总呋甾皂苷含量推算出来。
另外,本发明刺蒺藜提取物中未检测到黄酮类及多糖类物质。
实施例1本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,每次用8倍重量的10%(v/v)乙醇回流提取3次(2.5小时/次),提取液合并,过滤,滤液在阴凉处(10℃)放置12小时,高速(4500转/分)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(HPD100a);上柱后,先用水洗至无色后,再用10%乙醇洗至无色,然后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,喷雾干燥成干粉;即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷50%,其中含总呋甾皂苷25%,含总螺甾皂苷25%。
实施例2本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,每次用12倍重量的90%乙醇提取2次(2小时/次),提取液合并,过滤,滤液在阴凉处(0℃)放置12小时,高速(5000转/分)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(HPD300);上柱后,先用水洗至无色后,再用30%乙醇洗至无色,然后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,减压干燥成干粉;即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷60%,其中含总呋甾皂苷20%,总螺甾皂苷40%。
实施例3本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,用10倍重量的20%乙醇提取1次(2小时),提取液合并,过滤,滤液在阴凉处(0℃)放置12小时,高速(4000转/分)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(HPD100);上柱后,先用水洗至无色后,再用20%乙醇洗至无色,然后用80%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,常压下干燥成干粉;即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷55%,其中含总呋甾皂苷40%,含总螺甾皂苷15%。
实施例4本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,每次用10倍重量的50%乙醇提取2次(3小时/次),提取液合并,过滤,滤液在阴凉处(5℃)放置12小时,高速(4500转/分)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(HPD100a);上柱后,先用水洗至无色后,再用30%乙醇洗至无色,然后用75%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,真空干燥成干粉;即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷55%,其中含总呋甾皂苷20%,含总螺甾皂苷35%。
实施例5本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,每次用8倍重量75%乙醇回流提取3次,每次2.5小时,提取液合并,过滤,滤液在阴凉处(8℃)放置12小时,高速(4000转/分钟)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(HPD100);上柱后,先用水洗至无色后,再用30%乙醇洗至无色,然后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,喷雾干燥成干粉,即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷60%,其中含呋甾总皂苷25%,含螺甾总皂苷35%。
实施例6本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,用12倍量30%乙醇在回流提取3小时,提取液过滤,滤液在阴凉处(8℃)放置10小时,高速(4500转/分钟)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(XAD-2);上柱后,先用水洗至无色后,再用30%乙醇洗至无色,然后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,喷雾干燥成干粉,即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷55%,其中含呋甾总皂苷30%,含螺甾总皂苷25%。
实施例7本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,每次用12倍量70%乙醇回流提取2次,每次2.5小时,提取液合并,过滤,滤液冰箱冷藏放置12小时,高速(4500转/分钟)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(HP20);上柱后,先用水洗至无色后,再用10%乙醇洗至无色,然后用50%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,喷雾干燥成干粉,即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷55%,其中含呋甾总皂苷15%,含螺甾总皂苷40%。
实施例8本发明刺蒺藜提取物的制备
取原料蒺藜果实1kg,每次用10倍量10%乙醇回流提取3次,每次3小时,提取液合并,过滤,滤液冰箱冷藏放置12小时,高速(4500转/分钟)离心5分钟后,取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱(HPD100);上柱后,先用水洗至无色后,再用30%乙醇洗至无色,然后用95%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,喷雾干燥成干粉,即得本发明刺蒺藜提取物。其含刺蒺藜总皂苷55%,其中含呋甾总皂苷35%,含螺甾总皂苷20%。
实施例9本发明药物组合物片剂的制备
任取上述实施例刺蒺藜提取物10g,赋形剂采用乳糖18g、微晶纤维素10g、羧甲基淀粉钠1g、交联聚维酮1g,以3%羟丙甲纤维素的30%乙醇溶液为粘合剂,制备软材,20目筛网制颗粒、整粒、加硬脂酸镁后压片,即得。
实施例10本发明药物组合物颗粒剂的制备
任取上述实施例刺蒺藜活性部位10g,赋形剂采用淀粉10g、糊精10g、蔗糖5g、可可粉5g、羧甲基淀粉钠0.5g以及矫味剂等,以30%乙醇为润湿剂制备软材,过18目筛网制颗粒、整粒、即得。
实施例11本发明药物组合物胶囊的制备
任取上述实施例刺蒺藜活性部位10g,赋形剂采用淀粉20g、糊精10g,以30%乙醇为润湿剂制备软材,过18目筛网制颗粒、整粒后装入胶囊即得。
上述实施例中的大孔吸附树脂柱HPD系列为沧州宝恩化工有限公司产品,XAD-2为美国Amberlite产品,HP20为日本三菱化学产品。其余原料、试剂均为常规市售产品。
效果实施例本发明蒺藜提取物对抑郁模型大鼠抗抑郁作用-强迫游泳实验
①造模:wistar大鼠(200-220g)放入内径20cm、高40cm的玻璃圆缸中,每缸1只,缸中水深24cm,水温28℃-29℃(每缸水仅用1次)。实验第一天,每只大鼠预游15min,随后取出,于灯下擦干,放入笼中,24h后进行测试。大鼠重新放入水缸中,连续观察5min,累计大鼠在水中停止挣扎、呈漂浮直立状态、仅有偶尔的肢体运动以保持头部浮在水面的持续时间(不动时间),连续十六天强迫游泳。以不动时间超过150s者定为抑郁模型动物。
②灌胃给药:以实施例5的蒺藜提取物作为样品,分高低剂量组。高剂量组(200mg/kg)、低剂量组(100mg/kg)、以盐酸舍曲林(上海医药工业研究院生产)作为对照组(4.5mg/kg)、以生理盐水为空白对照(5ml/只),每只大鼠给药3次,测定不动时间前24h、5h、1h灌胃给药。
③游泳实验:灌胃给药后按①的步骤要求进行强迫游泳实验,计录每只wistar大鼠5min内游泳不动时间,结果见表1。
④监测:游泳结束后处死大鼠,取出大脑,采用荧光法测定大鼠脑内单胺类神经递质,5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)及去甲肾上腺素(NA),结果见表2。
表1wistar大鼠强迫游泳不动时间
与空白组相比*p<0.01
表2荧光法测定wistar大鼠脑内神经递质
与空白组相比*p<0.01,**p<0.05
上述实验结果显示:本发明的提取物(100mg-200mg)/kg灌胃给药能明显缩短抑郁模型大鼠强迫游泳不动时间,(200mg/kg)灌胃给药能显著提高Wistar大鼠脑中5-HT以及5-HIAA的含量,但对Wistar大鼠脑中DA、NE的含量无影响,其作用结果与第三类抗抑郁药舍曲林相类似。因此,本发明刺蒺藜提取物及其药物组合物可以用于制备抗抑郁药品、保健食品或食品,也可用于抑郁症病人的辅助治疗。
Claims (13)
1、一种刺蒺藜提取物,为从蒺藜果实中提取的产物,其包括含量55~60%的刺蒺藜总皂苷,该刺蒺藜总皂苷基本由刺蒺藜总螺甾皂苷和刺蒺藜总呋甾皂苷组成,其中该刺蒺藜总螺甾皂苷含量在15%~40%,刺蒺藜总呋甾皂苷含量在15%~40%,上述含量均以提取物总重量为计;所述的刺蒺藜提取物由下列制备方法制得:
a、取原料蒺藜果实,用10%~90%乙醇提取,过滤提取液,滤液冷却、放置10~12小时,高速离心后取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱;
b、上柱后,先用水洗至无色后,再用10%~30%乙醇洗至无色,然后用50%~95%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,即得提取物。
2、如权利要求1所述的刺蒺藜提取物,其特征在于步骤a中提取次数为1~10次,每次2~3小时,蒺藜果实与乙醇每次的重量比为1∶8~12,滤液冷却、放置的温度为0~10℃。
3、如权利要求2所述的刺蒺藜提取物,其特征在于步骤a中提取次数为2~3次;该高速离心是指速度为4000~5000转/分钟的离心;该乙醇浓度为75%;该大孔吸附树脂柱是非极性大孔吸附树脂柱HPD100、HPD300、HPD100a、XAD-2或HP20。
4、如权利要求1所述的刺蒺藜提取物,其特征在于步骤b中用70%浓度乙醇洗脱。
5、如权利要求1所述的刺蒺藜提取物,其特征在于该刺蒺藜总螺甾皂苷含量在25%~35%,刺蒺藜总呋甾皂苷含量在25%~30%。
6、如权利要求1所述的刺蒺藜提取物的制备方法,其包括下列步骤:
a、取原料蒺藜果实,用10%~90%乙醇提取,过滤提取液,滤液冷却、放置10~12小时,高速离心后取上清液,回收乙醇,浓缩至干浸膏,用水溶解成溶液后经过大孔吸附树脂柱;
b、上柱后,先用水洗至无色后,再用10%~30%乙醇洗至无色,然后用50%~95%乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,即得提取物。
7、如权利要求6所述的制备方法,其特征在于步骤a中提取次数为1~10次,每次2~3小时,蒺藜果实与乙醇每次的重量比为1∶8~12,滤液冷却、放置的温度为0~10℃。
8、如权利要求7所述的制备方法,其特征在于步骤a中提取次数为2~3次;该高速离心是指速度为4000~5000转/分钟的离心;该乙醇浓度为75%;该大孔吸附树脂柱是非极性大孔吸附树脂柱HPD100、HPD300、HPD100a、XAD-2或HP20。
9、如权利要求6所述的制备方法,其特征在于步骤b中用70%浓度乙醇洗脱。
10、如权利要求6所述的制备方法,其特征在于其在步骤b后还包括步骤c:干燥得提取物干粉。
11、如权利要求1~5任一项所述的刺蒺藜提取物在制备治疗或预防抑郁症的药品中的用途。
12、一种药物组合物,其包括有效量的权利要求1~5任一项所述的刺蒺藜提取物,以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
13、如权利要求12所述的药物组合物在制备治疗或预防抑郁症的药品中的用途。
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大孔吸附树脂法提取蒺藜总皂甙. 金京玲,任东鲜等.延边大学医学学报,第22卷第1期. 1999 |
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珍一散治疗抑郁症32例临床观察. 贺湘荣.湖南中医学院学报,第24卷第6期. 2004 |
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