CN100467061C - 一种鱿鱼墨汁多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鱿鱼墨汁多糖的制备方法，步骤如下：按下述重量比：活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁1至99.985份、2000u/g食品级脂肪酶0.1至0.005份、100万u/g食品级木瓜蛋白酶0.1至0.001份，对墨汁采用脂肪酶和木瓜蛋白酶在温和条件下进行复合酶水解，滤液中加入95%食用乙醇或化学纯丙酮，使墨汁多糖沉淀，沉淀用去离子水溶解后，回收乙醇或丙酮，干燥后的沉淀用不锈钢粉碎机粉碎即成品鱿鱼墨汁多糖。本发明有益的效果：克服了多糖物质具有热不稳性和较小的酸碱稳定性，高温或pH＞7或pH＜5都会引起多糖的氧化和降解的难题。本方法的分离和提取都是非常简便的，利用鱿鱼墨囊为原料，分离并提取得到符合医药原料要求的鱿鱼墨汁多糖。
Description
技术领域
本发明属于海洋生物药物和抗肿瘤药物领域，主要是一种鱿鱼墨汁多糖的制备方法。
背景技术
近30年来，由于细胞生物学和分子生物学的高速发展，多糖的诸多生物学功能被逐步的揭示和认识。例如，近年来生命科学的研究证明多糖以糖链和其他生物大分子共价相连的化合物如糖蛋白、糖脂的形式参与生物的许多重要生命过程。糖蛋白、糖脂是细胞膜的重要组成部分，它们作为生物信息的携带者和传递者，调节着细胞的生长、分化、代谢及免疫反应等。由此而产生的新兴学科糖原生物学(Glycobioology)为免疫学、分子药理学、肿瘤学等提供了精确的微观描述，为从分子和分子集合体水平上认识和控制复杂的生命现象、人类疾病、研制新的糖类药物等提供了科学依据，成为国际上科学研究最热门的课题之一。
近年来，随着我国远洋水产品捕捞业的发展，鱿鱼的捕捞量和国际鱿鱼来料加工的总量已经达到了每年数十万吨，其中加工废弃物鱿鱼墨囊为鱿鱼体重的1.28％，数量相当可观。据文献报道，墨囊中的鱿鱼墨汁多糖具有抗恶性肿瘤，提高病人免疫力的作用和较强的抗辐射作用。
据日本、美国等国海洋生物药物工作者的研究，鱿鱼墨汁多糖是众多多糖物质中抗恶性肿瘤活性较高者之一。经试验，对患纤维素恶性肿瘤鼠治愈率达80％以上，鱿鱼墨汁多糖的生物活性主要表现在对癌细胞入侵正常组织细胞时的识别与阻断上，从而增强正常细胞的防御功能和提高免疫力。
据文献报道，多糖物质具有热不稳性和较小的酸碱稳定性(PH5-7)，高温或PH>7或PH<5都会引起多糖的氧化和降解。此外，作为废弃物的墨囊原料中也会混杂一些脂肪和蛋白质等，这都会增加鱿鱼墨汁多糖的分离和提取困难。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述不足，而提供一种鱿鱼墨汁多糖的制备方法。
本发明解决其技术问题采用的技术方案。这种鱿鱼墨汁多糖的制备方法，步骤如下：
(1)、首先对经过人工分拣的活体冷冻鱿鱼的墨囊进行人工取墨汁，然后按下述重量比：活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁1至99.985份、2000u/g食品级脂肪酶0.1至0.005份、100万u/g食品级木瓜蛋白酶0.1至0.001份，对墨汁采用脂肪酶和木瓜蛋白酶在温和条件下，即t＝35-38℃、PH＝5.5-6.5条件下进行复合酶水解，使墨汁中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，用板框式压滤机过滤除去杂质；
(2)在滤液中加入95％食用乙醇或化学纯丙酮，使墨汁多糖沉淀，再用板框压滤机过滤，其中滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇或丙酮后，沉淀用去离子水溶解后经膜过滤器过滤，滤液中再加入95％食用乙醇或化学纯丙酮过滤，收集沉淀于50-55℃用真空干燥机干燥，滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇或丙酮，干燥后的沉淀用不锈钢粉碎机粉碎至100目即成品鱿鱼墨汁多糖。
本发明有益的效果：克服了多糖物质具有热不稳性和较小的酸碱稳定性(PH5-7)，高温或PH>7或PH<5都会引起多糖的氧化和降解的难题。采用本方法鱿鱼墨汁多糖的分离和提取都是非常简便的，利用鱿鱼墨囊为原料，分离并提取得到符合医药原料要求的鱿鱼墨汁多糖。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1：本发明所述的鱿鱼墨汁多糖的配方为，各原料的重量配比如下：
活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁 99.985份
2000u/g食品级脂肪酶 0.005份
100万u/g食品级木瓜蛋白酶 0.01份
其中2000U/g食品级脂肪酶是深圳绿微生物工程有限公司生产的产品，国际酶学编号为EC 3.1.1.3；100万U/g食品级木瓜蛋白酶是昆明友顺食品有限公司生产的产品，国际酶学编号为EC 3.4.22.2。
本发明所述的鱿鱼墨汁多糖的制备方法为：首先对活体冷冻的鱿鱼自然解冻，人工分离墨囊，清除墨囊外包膜，取其内容物墨汁(仍呈冰渣状)；再将上述规定重量的鱿鱼墨汁和去离子水按重量比墨汁/去离子水＝1：2加入不锈钢反应釜中，开动搅拌机(30转/分)，反应釜夹套通蒸汽加温至35-38℃，加入规定重量比的脂肪酶，保温(35-38℃)水解5小时，再加入规定重量比的木瓜蛋白酶，继续保温水解5小时。水解过程中，须不断滴加7％食用碳酸钠溶液，以保持物料的PH＝5.5-6.5。水解结束后，将物料温度升至90℃灭酶20分钟，然后向反应釜夹套中通冷却水，将物料温度降至35-38℃，物料用板框压滤机过滤，产生的少量废渣用作厂区绿化的肥料。滤液转入不锈钢反应釜，开动搅拌，慢慢加入95％食用乙醇，当物料中乙醇浓度达到75％体积百分浓度(V/V)时，静止10小时，用板框压滤机过滤，滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇(或丙酮)，浓缩液另用CTAB络合法回收多糖。将收集的沉淀转入反应釜，加入沉淀重量8倍的去离子水，搅拌溶解后，用膜过滤器过滤。收集滤液并转入反应釜，搅拌，慢慢加入95％食用乙醇，当物料中乙醇(或丙酮)浓度达到体积百分浓度80％(V/V)时，静止10小时，用板框压滤机过滤，滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇(或丙酮)，浓缩液另用CTAB络合法回收多糖，沉淀于50-55℃温度下用真空干燥机干燥，再用不锈钢粉碎机粉碎至100目，经检验合格后，用铝泊袋包装(1公斤/袋、10袋/纸箱)即成产品。
实施例2：鱿鱼墨汁多糖的配方为：各原料的重量配比如下：
活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁 99.984份
2000u/g食品级脂肪酶 0.008份
100万u/g木瓜蛋白酶 0.008份
实施例2的制造方法与实施例1的制造方法相同，但多糖的沉淀剂由95％食用乙醇改为化学纯丙酮，以适应不同药厂方便选择沉淀剂。
实施例3：与实施例1不同之处在于，鱿鱼墨汁多糖的配方为：各原料的重量配比如下：
活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁 50份；
2000u/g食品级脂肪酶 0.005份；
100万u/g食品级木瓜蛋白酶 0.001份。
Claims (2)
1、一种鱿鱼墨汁多糖的制备方法，其特征在于：该方法步骤如下：
(1)、首先对经过人工分拣的活体冷冻鱿鱼的墨囊进行人工取墨汁，然后按下述重量比：活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁1至99.985份、2000u/g食品级脂肪酶0.1至0.005份、100万u/g食品级木瓜蛋白酶0.1至0.001份，对墨汁采用脂肪酶和木瓜蛋白酶在温和条件下，即t＝35-38℃、PH＝5.5-6.5条件下进行复合酶水解，使墨汁中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，用板框式压滤机过滤除去杂质；
(2)在滤液中加入95％食用乙醇或化学纯丙酮，使墨汁多糖沉淀，再用板框压滤机过滤，其中滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇或丙酮后，沉淀用去离子水溶解后经膜过滤器过滤，滤液中再加入95％食用乙醇或化学纯丙酮过滤，收集沉淀于50-55℃用真空干燥机干燥，滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇或丙酮，干燥后的沉淀用不锈钢粉碎机粉碎至100目即成品鱿鱼墨汁多糖。
2、根据权利要求1所述的鱿鱼墨汁多糖的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：
1)、先将鱿鱼墨汁和去离子水按重量比墨汁：去离水＝1：2，加入不锈钢反应釜中，开动搅拌机30转/分，反应釜夹套通蒸汽加温至35-38℃，加入脂肪酶，在35-38℃温度中保温水解5小时后，再加入木瓜蛋白酶，继续保温水解5小时，水解过程中，须不断滴加7％食用碳酸钠溶液，以保持物料的PH＝5.5-6.5；
2)、水解结束后，将物料温度升至90℃灭酶20分钟，然后向反应釜夹套中通入冷却水，将物料降温至35-38℃，物料用板框压滤机过滤，滤液转入反应釜，搅拌，慢慢加入95％食用乙醇或化学纯丙酮，当物料中乙醇或丙酮的浓度达到75％体积百分浓度时，静止10小时，用板框压滤机过滤，滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇或丙酮；
3)、将沉淀转入反应釜，加入沉淀重量8倍的去离子水搅拌溶解后，用膜过滤器过滤，收集滤液并转入反应釜，搅拌，慢慢加入95％食用乙醇或化学纯丙酮，当物料中乙醇或丙酮浓度达到80％体积百分浓度时，静止10小时，用板框压滤机过滤，滤液用不锈钢浓缩机回收乙醇或丙酮，沉淀于50-55℃温度下用真空干燥机干燥，再用不锈钢粉碎机粉碎至100目，即得成品鱿鱼墨汁多糖。
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| 乌贼墨糖胺聚糖的制备与理化性质研究. 李孝东等.中国海洋药物，第4期. 2004 |
| 乌贼墨糖胺聚糖的制备与理化性质研究. 李孝东等.中国海洋药物，第4期. 2004 * |
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