CN100455289C - 孟德拉明类抗癌药 - Google Patents

Abstract

本发明涉及由孟德拉明(Methenamine)或其衍生物，或共轭物构成的抗癌化合物，以及包含孟德拉明的这些化合物在治疗癌症上的应用。

Description

孟德拉明类抗癌药

本申请有一部份内容是二零零三年五月二十日所递交之申请(美国序列号60/471,966)的继续，其内容己结合到本申请中。

技术领域

本发明涉及孟德拉明(methenamne)或含孟德拉明的化合物治疗癌症的应用。

背景技术

早在1894年，孟德拉明(Methenamine，又称Hexamine，Hexamethylenetetramine，或Urotropin；其化学结构见图1，以下统称URIN)便在临床上用作抗尿路感染药。其衍生物包括各种盐类如孟德拉明扁桃酸盐(Methenamine mandelate，以下简称MAIN)、孟德拉明马尿酸盐(Methenaminehippurate)、和孟德拉明磺基水杨酸盐(Methenamine sulfosalicylate)。Methenamine盐类被用作口服用抗泌尿系统感染药。近年来，这类抗尿道感染药己被更强效的抗菌药如Ampicillin或Tetracyclin所替代。

在酸性环境中，一个methenamine分子可被水解成四个amonia(氨)分子和六个formaldehyde(福尔马林)分子(见图1)。甲醛(Formaldehyde)可使蛋白质变性，导致微生物和真核细胞死亡。Formaldehyde是methenamine及其衍生物methenamine mandelate、methenamine hippurate和methenamine sulfosalicyclate等的有效成份。

Methenamine在pH中性的液体中十分稳定，在血清和正常细织中不会释出formaldehyde(Kucers A，et al.：Te Use of Antibiotics：A clinical review of antibacterial，antifungal and antiviral drugs.Fifth Edition.The Bath Press，Avon.1997，p932-935)。Methenamine水解及formaldehyde的释放仅发生于酸性环境如酸化的尿液中。Methenamine水解的速度随间质酸度的增加而增加。在冶疗尿路感染时，常加用蛋氨酸(methionine)或维生素C等，以提高尿液的酸度及产生formaldehyde的速度，从而提高它们的抗菌效果。Methenamine类药物毒性极低，十分安全，Kucers A等认为：“所推荐常用剂量，可用于长期治疗”(Kucers A等，见前文)。

美国一项公共卫生服务合作研究(Public Health Service Cooperative Study)将孟德拉明扁桃酸盐(Methenamine mandelate)与其它药物及安慰剂对249个男性患者作为期两年的研究，发现因长期使用这些制剂所致的副作用可以忽略(Freeman RB，et al.：Long-term therapy for chronic batceriuria in men.Ann InternMed.1975；83：133；Kda-Kimble MA，et.al.：Applied Therapeutics.AppliedTherapeutics，Inc.Vancouver，Washington.1992，p43-12to-13；Kda-KimbleMA，et.al.：Applied Therapeutics.Applied Therapeutics，Inc.Vancouver，Washington.1992，p43-12to-13)。Gibson GR发现：“在推荐的剂量范围，末观察到骨髓抑制、肝损害、或周围神经炎的证据”(Gibson GR：A clinical appraisalof methenaimne hippurate in urinary track infections.Med J.Aust.1：83，1970)。仅有十分少数的病人发生胃肠系统的症状，如恶心、呕吐、和腹泻。提高剂量或延长给药或可因formaldehyde的释放而引起尿道刺激征(Kucers A等，见前文)。

近来，科研人员试图利用肿瘤酸度较高的现象，提高能在酸性环境中转变成有效成份的惰性药物(prodrug)的疗效，效果十分有限(Zhou R et al.：Intracellular acidification of human melanoma xenograph by the respiratoryinhibition m-iodobenzylguanidine plus hyperglycemia：a 31P magnetic resonancespectroscopy study.Cancer Research 60：3532-6，2000；Stubbs M，et al.：Causes andconsequences of acidic pH in tumors：a magnetic resonance study.Advanced EnzymeRegulation 39：13-30，1999)。在实验室和临床都发现，多种化学物质或物理方法，可进一步降低肿瘤的酸度(Zhou R等，见前文)。

临床上，许多肿瘤仍为不治之症。研发出效果更强大而副作用极低的抗癌药将是医学的一大进步。

发明内容

本发明涵盖抗癌药Methenamine及其衍生物，包括Methenamine盐类、及Methenamine化合物(composition)，配以与给药途径及所针对癌症类型相适应的、制药学上通用的佐剂。本发明还涵盖治疗癌患者的方法，如该类抗癌药的给药方法、及制备这类制剂的方法。本发明还进一步包括综合疗法，即同时使用Methenamine化合物及其它治疗措施，以达到协同作用的效果。

文中引用的所有参考文献将以引用文献的形式结合到本专利申请中。

附图说明

图1.Methenamine的分子结构及其在酸性pH液体中的水解反应示意图。在酸性环境中，一个Methenamine分子与六个水分子及四个氢离子起反应产生六个福尔马林分子与四个氨分子(Craig CR，and Stitzel RE.Modern Pharmacology，Second Edition.1986，P652.Little and Brown Company，Boston，Toronto)。

具体实施方式

除非特别说明，所有术语的意思与熟悉本发明相关技术者的术语相一致。

多年前就己知道，人和动物肿瘤pH值偏酸性(Warburg，O.：The metabolismof tumors.Arnold Constable，London(1930))。近来，用精密技术包括31pMagnetic Resonance Spectrophy(MRS，磁共振电子能谱)，进一步确定，肿瘤细胞外的pH是酸性的(pH6.5-6.8，Griffiths JR et al.：Why are cancer acidic？Acarrier-mediated diffusion model for H+transport in the interstitial fluid.NorvatisFound Symp 2001；240：46-62，Discussion 62-7)，而癌细胞内的pH值接近中性(Stubbs M等，见上文)，或轻度碱性(Webb SD，et al.：Modelling tumor acidityand invasion.Novartis Found Symp.2001；240：169-81；discussion 181-5)许多人和动物肿瘤，其pH值比正常组织低0.2以上(Stubb M等，见上文)。通常，许多肿癌的组织间液酸碱度为pH6.5-6.8。有时，特别是发展至坏死时，肿瘤的酸度可低至pH5.2。

虽然本发明不限于理论上药物如何起作用，本发明阐明，经口服或静脉注射的Methenamine，不论以其碱基、其盐类或其它化合物形式给药，均会在肿瘤细胞外的酸性微环境中降解释出formaldehyde，使蛋白质和其它大分子变性而将肿癌细胞杀死。理论上，methenamine杀死癌细胞的机理与杀死感染尿道细菌的机制基本相同。以此推测，只要在体内的肿瘤细胞有一酸性环境，methenamine类药物便会有抗癌作用。肿瘤细胞外的酸性微环境，是由肿瘤细胞本身造成的。肿瘤在其生长过程中或坏死过程中均可造成酸性微环境。尽管methenamine类化会物是在肿瘤细胞间隙中释出formaldehyde，但推测formaldehyde可弥散进入癌细胞，使细胞内蛋白质和核糖核酸等大分子变性而将癌细胞杀死。Methenamine类药品抗癌作用，可因提高肿瘤细胞外微环境的酸性而增强。局部环境酸度增强，methenamine分解释出formaldehyde的速度便会加快，抗癌效果便会增强。许多方法可达到提高肿瘤微环境酸度的目的。例如，在给予methenamine的同时给予葡萄糖，便可达到协同作用的目的。因肿癌以糖酵解代谢为主，即，肿癌细胞以将葡萄糖转化成乳酸而获得ATP，即使在氧气供应充裕的情形下也如此。肿瘤细胞可将乳酸根及氢离子迅速排出，导致肿瘤细胞外微环境的pH进一步降低(Stubbs M等，见上文)，结果，formaldehyde从methenamine释出的速度增加。在正常细织，这种酸度增高现象不会发生。因为在正常细胞中，葡萄糖会彻底氧化，变成水和氧化碳。

葡萄糖选择性酸化肿瘤组织作用可因同时给予细胞呼吸抑制剂如m-iodphenzylguanidine(MIBG)而进一步增强。实验表明，在高血糖时给一剂MIBG，可使小鼠身上接种的人黑色素瘤移植物酸碱度降低pH0.59单位，使之低至pH6.35到pH6.4(Zhou R等，见上文)。应用其它化合物，如对细胞呼吸及萄葡糖酵解相关基因有调控作用的化合物，也可达到提高肿瘤细胞外酸度的目的。例如，Fructose 2，6-biphosphate是哺乳类糖酵解强有力的调节因子，它通过刺激6-phosphofructo-1-kinase(PFK-1)的活性而起作用。反过来，Fructose2，6-biphosphate的细胞内浓度，是由可诱导性基因产物6-phosphofructo-2-kinase(PFK-2)/fructose 2，6biphospophatase调控的。这两种酶在许多人类肿瘤，包括结肠、乳腺、和卵巢癌，过度表达(Atsumi T et al.：High expression of inducible6-phosphofructose-2，6-bisphosphatase(iPFK-2；PFKFB3)in human cancers.CancerRes 62：5881，2002)。除了低氧血症外，6-mercaptopurine，all-trans维生素A，Okadaic acid，xylulos-5-p等都可调节6-phosphofructo-2-kinase(PFK2)/fructose-2，6-bisphosphatase的表达(El-Maghrabi MR et al.：6-phosphofructose-2-kinase/fructose-2，6-bisphosphatase：suiting structure to need，ina family of tissue-specific enzymes.Curr Opin Clin Nutr Metab Care 4：411，2001)。故此，果糖2，6-磷酸氢盐(Fructose 2，6-biphosphate)，6-巯(基)嘌呤(6-mercaptopurine)，all-trans维生素A，大田软海绵酸(Okadaic acid)，xylulos-5-p等可被用来提高肿瘤糖酵解速度及酸度。

此外，有证据表明，局部超声波增温法可用来选择性地提高肿瘤组织的酸度(Kallinowski F，and Vaupel P，：Factors governing hyperthermia-induced pH changesin Yoshida sarcomas.Int J Hyperthermia 1989；5(5)：641-52)。总而言之，提高肿瘤所在部位局部的温度可提高肿瘤的酸度。而有许多方法可提高肿瘤所在部位的温度。例如，使用诸如直接加热、微波加热、或光加热等可使肿瘤所在部位温度般升高。总的来说，有许多己知的方法，如辐射疗法，可使波能透过正常组织，选择加热肿瘤组织。其它手段也可加热肿瘤，包括，但不局限于化学的手段，或任何瞄准肿瘤或在肿瘤定点释放的能量。现存的技术中，有许多己知提高肿瘤所在部位温度的方法。提高肿瘤的温度导致局部酸度增高，以致在应用methenamine类药物时，methenamine在原本只有轻度酸性的肿瘤细胞外微环境中激活。

本发明还包含下述概念，即为达到协同作用的目的，可应用特殊设计的、在中性环境中稳定而在酸性环境中可降解释放酸性产物以进一步降低肿瘤pH的化合物。Methenamine分子是一范例，用同样的原则，可用以设计其它化合物及药物，使之对肿瘤有选择性杀伤作用，而对正常细胞无毒或毒性极低。

Methenamine及其衍生物有可能成为极为安全的治疗恶性肿瘤的化疗药。此外，还可合成各种能在肿瘤酸性环境中释放formaldehyde的抗癌药、发展各种以选择性提高肿瘤酸度为基础的增强剂、方法和装置，以提高methenmaine类药物的抗癌效果。例如，加上侧键或各种复合基团的methenmaine，或由多个methenamine构成的聚合体等，均可能有癌抗效果。特别是，可以根据癌细胞周围为酸性，而正常细胞周围为中性(pH7.4)或偏碱性的特点，设计各种化合物。据此，任何相关的化合物，只要含有有话性的methenamine，便可以在癌细胞间隙之间的微酸性环境中释出formaldehyde。这类化合物包括但不限于methenamine或methenamine。Methenamine的衍生物或复合物、methenamine与其它methenamine类相加的聚合物，均包括在其中。

本发明还预期，Methenamine及含有Methenamine的衍生物可以用来治疗所有的实体肿瘤，包括体内所有器官各种组织类型的恶性肿瘤。有关迄今己知人体所有恶性肿瘤的目录，可参考标准医学教科书。

本发明还包括将Methenamine类药物与其它治疗合并应用，以达到协同治疗效果。其它治疗可以是化学药如环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)，抗体为基础的治疗、化疗、手术治疗、和基因治疗等。

Methenamine类药物的工作原理，也可用于其它抗癌药的设计。该原理可归纳为，该化合物能在中性环境中保持稳定、惰性、而又无毒，而在癌细胞周围微酸性的组织间液中，变得不稳定，可释出能攻击癌细胞大分子的活性分子。

Methenamine，也称hexamethylenetetramine，可根据USPN2,762,799USPN2,762,780的描述方法合成。Methenamine及其盐类化合物，可凭用作治疗尿路感的处方从药剂师或药物公司购得。Methenamine盐类衍生物包括methenmine mandelate，methenamine hippurate，和methenamine sulfosalicylate等。其它含methenamin的化合物可根据己知的合成化学工艺合成。为用于动物和人治疗，含methenamine的化合物须配以药剂学规范的、与给药途径及药物合成方法相容的佐剂，制成各种剂型。如，供静脉注射者需制成静脉注射剂型，供口服者需制成片剂或其它供口摄入的剂型。其它非胃肠途径给药者可能需要制成特殊剂型，如局部涂抹的乳霜型(如加入能遇到皮肤或空气即有酸化作用的制剂)，或可用于体腔内以释出有活性作用的methenamine成份的栓剂，抑或直接注入肿瘤瘤体内的制剂。

Methenamine mandelate可根据所治疗的肿瘤类型选择最佳给药方式，包括口服及非胃肠途径给药。非胃肠途径含静脉注射、肌肉注射、肿瘤内注射、器官内给药、及其它上述所列的给药方式。用针、导管、药泵、定时释放装置、口服剂型等等均可用来达到最有效给药之目的。

Methenamine类药物给药剂量应依病情而定，如病人体重、肿瘤漫延范围、病人对药物的耐受性、肿瘤的恶性程度、以及给药方式。上述的指标可能还用来决定给药的时间，如每天早晨一次，还是早晚各一次，或是从早到晚整天给药，或者是整星期给药。给药的疗程也取决于上述病人的指标，再加上肿瘤对治疗的反应。对广泛漫延的肿瘤，最佳的给药方法可能是每天一剂连续性五年。对别的病人，给药数月可能己足够。对于有的病人，最佳的方案可能是服药数月至一年，停药一月或数月，然后又开始服药治疗。不论任何情况，只要肿瘤复发，即表明应反复给药，或增加药物剂量和给药频率、并延长疗程。该药的无毒性剂量水平己由治疗尿道感染用药剂量所证实。

在任何情况下，接受该药治疗的所有肿瘤病人须经标准检验程序确诊。Methenamine类药物的给药剂量、给药途径(如口服还是胃肠外给药)均按照预先决定的同类肿瘤的最佳治疗方案进行。随后须用扫描、肿瘤标志物测定等标准技术，定期估计病情进展及肿瘤对治疗的反应。一旦肿瘤消失，治疗可持续一定时间后再停药，以确保肿瘤细胞被全部清除。停止治疗后第一年可每月一次，两月或三月一次定期复查。以后可每年复查一次。对所有的病人照顾，均应因病情不同而定，如开始治疗的病情及治疗反应等。

以下为一静脉点滴治疗的范例：将20克Urotropin混入500毫升百分之十葡萄糖液内，由静脉点滴注射，每天一次，连续三天后停药二天为一疗程。每个病人接受三疗程。

以下为一口服治疗的范例：Methenamine，如methenamine mandelate，每剂2克，每日两次口服。该剂量与治疗尿道感染相同。病人也可每日口服三剂，持续二周，再恢复每日两剂。如必要，疗程可持续三年。

显而易见，可采用其它给药途径将该药给予病人。

实施例

以下用数个例子来进一步说明本发明。

实施例1--静脉给药

病人可选择接受静脉滴注Urotropin(为静脉注射用之methenamine)的治疗。病人的肿瘤经标准方法如CT扫描及血肿瘤标记物检测而确诊。将20克Urotropin混入500毫升百分之十葡萄糖溶液内，由静脉点滴注射，每天一次，连续三天后停药二天为一疗程。每个病人接受三疗程。对药物的可能副作用及治疗反应作严客观察。对剂量可作适当调整。常规是一个公斤体重的病人每天Urotropin的量为20克。但该量可减至每天0.1克，或增至每天200克。每天给药次数也可调整。每天可给药一次，也可二至三次甚至更多，或一天内连续给药。两次给药的时间间隔可从一天至十天甚至更长时间。总之，Methenamine给药时间表可以调整。

实施例2--口服给药

病人可选择口服制剂methenamine盐类如Methenamine Mandelate的治疗。同样地，病人的肿瘤经标准方法如CT扫描及血肿瘤标记物检测而确诊。病人给予每次2克Methenamine(如Urised，每片500毫克，每次四片)，每天两次口服。Methenamine的治疗程序可视病情调整。如在治例1一样，每次口服药量，每天服药次数，每两次服药的间隔等均可视病情需要而变动。每两个月可随访一次，收集隔、纪录肿瘤指标及扫描资料。随着肿瘤对治疗出现阳性反应并经标准检查确定肿瘤己消失，即可调降药物剂量。

实施例3--动物实验--静脉给药

Urotropin(注射用Methenamine)将被用于若干动物肿瘤模型作试验。为试验静脉注射Urotropin的抗癌效果，将使用三组小鼠，每组十只。接种肿瘤细胞后，第一组小鼠将经静脉给予Urotropin，每公斤体重2.8克，第二组每公斤体重3.6克，均为每天两次，连注三天。在每次注射Urotropin之前，口饲10％萄糖液，每公斤体重20毫升。第三组小鼠只给萄萄糖液。将检查肿瘤体积是否缩小、是否转移至别的器官及其它标准指标，以确定治疗反应及疗效。若干不同类型的肿瘤将被选作试验。

实施例4--动物验--口服给药

将用若干动物模型试验口服Methenamine制剂(即Methenarnine Mandelate)。用三组小鼠，每组十只进行试验。接种肿瘤细胞后，两组小鼠口饲MethenamineMadelate，用量参照治疗成人尿路感染所用剂量，按小鼠体重折算。其中一组小鼠在给药一个半小时前口饲萄糖。Methenamine Mandelate将每天口饲两次，连续七天，实然后测量肿瘤的体积，检查是否有转移。小鼠对受试药物剂量增减的反应，及同时口饲葡萄糖酸化剂的协同作用，也一并确定。在所有的实验中，药物的抗癌效果均在动物接受适当时间药物治疗后进行。

实验

I.实验程序：

A.化学物及动物：Methenamine(URIN)和Methenamine Mandelate(MAIN)均购自美国Sigma-Aldrich公司(St Louis，MO，USA)。C57BL/6小鼠购自中国广州军医大学(中国，广州)，昆明种小鼠则购自广州中山医科大学(中国，广州)。

B.动物肿瘤模型：三种移植肿瘤模被用来确定URINA和MAIN的抗癌效果。

(1)昆明种小鼠S-180肉瘤模型：1×10E⁶个小鼠肉瘤S-180腹水型瘤细胞，制成0.2毫升生理盐水混悬液，注于5至6周大昆明种小鼠右前腋窝皮下。

(2)昆明种小鼠H22肿癌模型：1×10E⁶个小鼠H22腹水型肝癌细胞，制成0.2毫升生理盐水混悬液，注于5至6周大昆明种小鼠右前腋窝皮下。

(3)C57BL/6小鼠黑色素瘤模型：1×10E⁷个小鼠黑色素瘤B16细胞，制成0.2毫升生理盐水混悬液，注于5至6周大C57BL/6种小鼠右前腋窝皮下。接肿瘤细胞后，小鼠破随机分成若干实验组。

C.给药：将抗癌药URIN溶于适量的蒸馏水中，再用MAIN溶液将溶液调至pH7.4。MAIN溶液的制备，是将适量的MAIN加入氢氧化钠水溶液中，待MAIN完全溶解后再调至pH7.4。将受试药物制成每公斤小鼠体重10毫升，然后以每克体重10微升的量，腹腔注射，每天一次或两次，连续十天，给予带S-180肉瘤或H22肝癌的昆明种小鼠。而对带B16黑色素瘤的小鼠，则持续给药十五天。在上述药物注射前60至90分钟，某些组别的小鼠，将胃饲50％葡萄糖液，每公斤体重30毫升。一组小鼠只注射生理盐水，而以另一组小鼠只接受葡萄糖液而不给受试药物，分别作为生理盐水对照组及葡萄糖对照组。某些实验还包括第三组小鼠，接受腹腔注射环磷酰氨，或5-氟尿嘧啶(5-FU)，每公斤体重25至50毫克，作为阳性对照。实验结束时，记录小鼠体重，分离肉瘤S-180和肝癌H22并称重。而对黑色素瘤B16，则用标尺测量其径线，然后按下列公式计算其体积：体积＝S×S×L×0.5。公式中，S及L分别为Beck MT等(Cancer Research63：3598，2003)所定义之短、长径线。

II.结果与讨论：

A.URIN冶疗显著抑制肿瘤生长：URIN治疗(4480毫克/公斤体重，腹腔注射，每天二次)，显著抑制小鼠肉瘤S-180的生长。与接受生理盐水的对照组比较，肿瘤生长抑制率为21.9％，p＜0.05(表1.2)。URIN的抗癌效果可在小鼠H22肝癌模型上重复。同样的URIN治疗，也显著抑制肝癌H22生长，抑制率高达41.2％，p＜0.001(表2.2)。

表1.1.URIN对带肉瘤S-180小鼠体重增长的作用

*与第一组比较。

表1.2.URIN对小鼠肉瘤S-180在体内生长的作用

*与第一组比较。

表2.1.URIN对带肝癌H22小鼠体重增长的作用

*与第一组比较。

表2.2.URIN对小鼠肝癌H22在体内生长的作用

*与第一组比较.

B.葡萄糖增强URIN的抗癌效果

在注射URIN之前将葡萄糖胃饲小鼠，增强URIN对肉瘤S-180生长的抑制作用，使生长抑制率增至36.2％，p＜0.05(表3.2)。葡萄糖协同抗癌效果在C57BL/6黑色素瘤模型上可以重复。在注射URIN之前，将葡萄糖给予小鼠，即使每天仅给URIN一次，高剂量组可见肿瘤生长显著抑制作用。肿瘤生长抑制率为32.1％，P＜0.005(表4.2)。

表3.1.URIN及葡萄糖对带肉瘤S-180小鼠体重增长的作用

^*葡萄糖被制成50％水溶液并以口饲给予小鼠.

^**50％葡萄糖溶液，在注射URIN前60至90分钟口饲给予小鼠.

^***与第一组比较.

表3.2.URIN及葡萄糖对肉瘤S-180在体内生长的作用

^*与第一组比较.

表4.1.URIN对带黑色素瘤B16小鼠体重增长的作用

^*葡萄糖被制成50％水溶液并以口饲给予小鼠。

^**50％葡萄糖溶液，在注射URIN之前60至90分钟口饲给予小鼠.

^***与第一组比较.

表4.2.URIN对黑色素瘤B16在体内生长的作用

^*与第一组比较.

C.Methenamine的盐制剂(MAIN)对肿瘤生长也有显著抑制作用：MAIN是Methenamine的Mandelate盐，临床上可口服给药。如显示MAIN有抗癌作用，即证明其可用作口服抗癌药。MAIN高剂量组，小鼠肉瘤重量显著降低，瘤重减少率达45.9％，p＜0.01(表5.2)。MAIN的抗癌作用可在小鼠肝癌H22重复，该肿瘤生长抑制率高达51.4％，p＜0.01(表6.2)。

表5.1.MAIN对带肉瘤S-180小鼠体重增长的作用

^*葡萄糖被制成50％水溶液并以口饲给予小鼠。

^**50％葡萄糖溶液，在注射MAIN之前60至90分钟口饲给予小鼠.

^***与第一组比较.

表5.2.MAIN对肉瘤S-180在体内生长的作用

^*与第一组比较.

表6.1.MAIN对有肝癌H22的小鼠体重增长的作用

^*葡萄糖被制成50％水溶液并以口饲给予小鼠.

^**50％葡萄糖溶液，在注射MAIN之前60至90分钟口饲给予小鼠。

^***与第一组比较.

^****1或2只小鼠死于意外事故。

表6.2.MAIN对肝癌H22在小鼠体内生长的作用

^*与生理盐水组比较。

D.给Methenamine类药毒性轻微：所有接受URIN及MAIN的小鼠，治疗期间均显得很健康。虽然有若干小鼠实验期间死于意外事故，但没有小鼠因URIN的毒性而死亡。在四次URIN实验中，不论每天给药一次或两次，均末见小鼠生长明显阻滞的现象(表1.1，2.1，3.1，4.1)。然而，两次用MAIN盐的实验，均见小鼠生长明显阻滞的现象，即使接受低剂量水平的小鼠也然(表5.1，及6.1)。

III.结论

1.用URIN治疗显著抑制了肉S-180，肝癌H22及黑色素瘤B16的生长。

2.给URIN前口饲葡萄糖可提高其抗癌效果。

3.URIN的mandelate盐制剂Methenamine Mandelate(MAIN)也有显著抑制肿瘤生长的作用。

4.用URIN治疗末见明显的毒性作用。MAIN的轻度毒性表现为对动物生长显著抑制作用。据此表明，是Methenamione Mandelate中的酸基，而不是Uorotropin部份对动物有毒性。

5.我们的动物实验资料表明，methenamine类化合物将可用作人类有效的抗癌药。

参考文献：

Kucers A，et al.：Te Use of Antibiotics：A clinical review of anti bacterial，antifungal and antiviral drugs.FifthEdition.The Bath Press，Avon.1997，p932-935.

Freeman RB，et al.：Long-term therapy for chronic batceriuria in men.Ann Intern Med.1975；83：133；Kda-Kimble MA，et.al.：Applied Therapeutics.Applied Therapeutics，Inc.Vancouver，Washington.1992，p43-12to-13.

Kda-Kimble MA，et.al.：Applied Therapeutics.Applied Therapeutics，Inc.Vancouver，Washington.1992，p43-12to-13

Gibson GR：A clinical appraisal of methenaimne hippurate in urinary track infections.Med J.Aust.1：83，1970.Zhou R et al.：Intracellular acidification of human melanoma xenograph by the respiratory inhibitionm-iodobenzylguanidine plus hyperglycemia：a 31P magnetic resonance spectroscopy study.Cancer Research60：3532-6，2000.

Stubbs M，et al.：Causes and consequences of acidic pH in tumors：a magnetic resonance study.Advanced EnzymeRegulation 39：13-30，1999.

Craig CR，and Stitzel RE.Modern Pharmacology，Second Edition.1986，P652.Little and Brown Company，Boston，Toronto.

Warburg，O.：The metabolism of tumors.Arnold Constable，London(1930).

Griffiths JR et al.：Why are cancer acidic？A carrier-mediated diffusion model for H+transport in the interstitialfluid.Norvatis Found Symp 2001；240：46-62，Discussion 62-7.

Webb SD，et al.：Modelling tumor acidity and invasion.Novartis Found Symp.2001；240：169-81；discussion181-5.).

Atsumi T et al.：High expression of inducible 6-phosphofructose-2，6-bisphosphatase(iPFK-2；PFKFB3)in humancancers.Cancer Res 62：5881，2002.

El-Maghrabi MR et al.：6-phosphofructose-2-kinase/fructose-2，6-bisphosphatase：suiting structure to need，in afamily of tissue-specific enzymes.Curr Opin Clin Nutr Metab Care 4：411，2001.

Kallinowski F，and Vaupel P.：Factors governing hyperthermia-induced pH changes in Yoshida sarcomas.Int JHyperthermia 1989；5(5)：641-52).

Claims (5)

1.一种由孟德拉明或者其药学上可接受的盐，配以药学上通用的佐剂组成的制剂在制备抗肉瘤、黑色素瘤和肝癌的药物方面的应用，其中所述的药学上可接受的盐选自孟德拉明扁桃酸盐、孟德拉明马尿酸盐和孟德拉明磺基水杨酸盐。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的孟德拉明或者其药学上可接受的盐与药学上通用的佐剂配制成静脉注射剂型、片剂、乳膏剂。

3.一种由孟德拉明或者其药学上可接受的盐，配以药剂学上通用的佐剂和一种降低肿瘤细胞外微环境酸碱度的制剂组成的制剂在制备抗肉瘤、黑色素瘤和肝癌的药物方面的应用，其中所述的降低肿瘤细胞外微环境酸碱度的制剂包括丁酸、葡萄糖、乳酸和维生素C。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的降低肿瘤细胞外微环境酸碱度的制剂还包括二磷酸吡啶核苷酸和间位碘代苯甲基胍。

5.一种由孟德拉明或者其药学上可接受的盐，配以药剂学上通用的佐剂和抗体抗癌药组成的制剂在制备抗肉瘤、黑色素瘤和肝癌方面的应用，其中，所述的抗体抗癌药选自环磷酰胺、5-氟尿嘧啶。

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