CN100434532C - 点突变基因的检测方法及装置 - Google Patents

点突变基因的检测方法及装置 Download PDF

Info

Publication number
CN100434532C
CN100434532C CNB02134518XA CN02134518A CN100434532C CN 100434532 C CN100434532 C CN 100434532C CN B02134518X A CNB02134518X A CN B02134518XA CN 02134518 A CN02134518 A CN 02134518A CN 100434532 C CN100434532 C CN 100434532C
Authority
CN
China
Prior art keywords
enzyme
sample
point mutation
bipyridine
cut
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB02134518XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN1392270A (zh
Inventor
邢达
朱德斌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Normal University
Original Assignee
South China Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Normal University filed Critical South China Normal University
Priority to CNB02134518XA priority Critical patent/CN100434532C/zh
Publication of CN1392270A publication Critical patent/CN1392270A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100434532C publication Critical patent/CN100434532C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明提供一种点突变基因的检测方法，利用待测序列的突变位点发生突变后恰巧能形成一个限制性内切酶酶切位点，用该内切酶可切去标记在突变型样品上的电化学发光底物而导致检测不到电化学发光信号；野生型样品由于不存在酶切位点，因此酶切前后检测到的电化学发光信号基本一致；通过比较样品酶切前后电化学发光信号强度的变化来区分点突变是否发生；一种点突变基因检测装置包括如下组件：样品池、恒电位仪、光纤、光电倍增管、模数转换器、微型计算机和数据处理软件；本发明具有灵敏、快速、准确、操作简便等优点。

Description

点突变基因的检测方法及装置
(一)技术领域
本发明涉及一种点突变基因的检测方法及装置。
(二)背景技术
目前，常用的点突变基因检测方法有：等位特异性PCR、单链构象多态性分析、变性梯度凝胶电泳、异源双链分析、RNA酶裂解法、化学错配裂解法、酶错配裂解法、毛细管电泳、变性高效液相色谱分析、碱基切割序列扫描、DNA芯片技术和直接测序法等。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一种点突变基因的检测方法及装置。在该发明中，待测序列的突变位点发生突变后恰巧能形成一个限制性内切酶酶切位点，用该内切酶可切去标记在突变型样品上的电化学发光底物而导致检测不到电化学发光信号；野生型样品由于不存在酶切位点，因此酶切前后检测到的电化学发光信号基本一致。
本发明的点突变基因的检测方法包括以下步骤：
(1)用一段标记生物素的3端引物和一段标记三联吡啶钌复合物的5’端引物扩增一段包含一个突变位点的待测序列，点突变发生后，恰巧能在该处形成一个限制性内切酶酶切位点；
(2)扩增后，样品被分成两等份，一份用限制性内切酶酶切，只有当点突变发生后，该酶才能将标记三联吡啶钌复合物的5端从标记生物素的3’端切去；另一份保持不变；
(3)生物素标记的DNA序列通过与链霉亲和素包被的磁珠连接而被收集到样品池中，其它成分则被洗去；
(4)通过检测由样品池中的三联吡啶钌复合物产生的电化学发光信号确定两份样品中与生物素标记的DNA连接的三联吡啶钌复合物的量；。
(5)通过比较样品酶切前后电化学发光信号强度的变化来区分点突变是否发生。
一种点突变基因的检测装置包括样品池、恒电位仪、光纤、光电倍增管、模数转换器、微型计算机，其中样品池由进样管、对电极、工作电极、参比电极、出样管组成；样品池、光纤、光电倍增管、模数转换器、微型计算机依次连接；恒电位仪分别与样品池中的对电极、工作电极、参比电极相连。
样品由进样管进入样品池中，在工作电压下发射出光子，光子通过光纤接收进入光电倍增管中，光电倍增管将光信号放大并转化为电信号，电信号由模数转换器转换为数字信号后输入微型计算机中，对数据进行处理后将结果输出；反应后的样品从出样管流出。
本发明具有灵敏、快速、准确、操作简便等优点。
附图说明
图1是本发明一种点突变基因的检测装置示意图；
图2是实例中酶切前后的突变型PS-1基因外显子8中待测序列的电化学发光信号检测结果图；
图3是实例中酶切前后的野生型样品和酶切前后的突变型样品的电化学发光信号强度对比图。
具体实施方式
我们将该方法及装置应用于检测PS-1基因密码子235处的点突变，该突变位点位于PS-1基因外显子8上，步骤如下：用一段标记生物素的3’端引物和一段标记三联吡啶钌复合物的5端引物扩增PS-1基因外显子8中的一段包含一个突变位点的待测序列，点突变发生后，恰巧能在该处形成一个Hpa II限制性内切酶酶切位点。扩增后，样品被分成两等份。一份用HpaII酶切，只有当点突变发生后，HpaII才能将标记三联吡啶钌复合物的5端从标记生物素的3’端切去；另一份则保持不变。生物素标记的DNA序列通过与链霉亲和素包被的磁珠连接而被收集到样品池中，其它成分则被洗去。通过检测由样品池中的三联吡啶钌复合物产生的电化学发光信号确定两份样品中与生物素标记的DNA连接的三联吡啶钌复合物的量。通过比较样品酶切前后电化学发光信号强度的变化来区分点突变是否发生。
图1给出了本发明一种点突变基因检测的装置示意图。由图1可见，本装置包括样品池1、恒电位仪2、光纤3、光电倍增管4、模数转换器5、微型计算机6和数据处理软件；其中样品池1由进样管1-1、对电极1-2、工作电极1-3、参比电极1-4、出样管1-5组成。
图2给出了酶切前后的突变型PS-1基因外显子8中待测序列的电化学发光信号的检测结果图，其中1代表样品酶切前的电化学发光信号强度曲线，2代表样品酶切后的电化学发光信号强度曲线。由图3可以看出：样品酶切前检测到的电化学发光信号强度约为243cps；样品酶切后检测到的电化学发光信号强度约为114cps，接近本底信号强度108cps，在该实验中，我们可认为基本检测不到电化学发光信号。
图3出了酶切前后的野生型样品和酶切前后的突变型样品的电化学发光信号强度对比图。在图3中，A代表未酶切的野生型样品，B代表酶切后的野生型样品，C代表未酶切的突变型样品，D代表酶切后的突变型样品，E代表本底信号。由图3可以看出：野生型样品酶切前后的电化学发光信号强度基本保持不变，都约为242cps；突变型样品酶切前后的电化学发光信号强度变化很大，基本上可以认为由有到无。因此，由样品酶切前后电化学发光信号强度的变化可以很容易地判断点突变是否发生。

Claims (1)

1、一种点突变基因的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)用一段标记生物素的3’端引物和一段标记三联吡啶钌复合物的5’端引物扩增一段包含一个突变位点的待测序列，点突变发生后，恰巧能在该突变位点处形成一个限制性内切酶酶切位点；
(2)扩增后，样品被分成两等份，一份用上述限制性内切酶酶切，只有当点突变发生后，限制性内切酶才能将标记三联吡啶钌复合物的5’端从标记生物素的3’端切去；另一份保持不变；
(3)生物素标记的DNA序列通过与链霉亲和素包被的磁珠连接而被收集到样品池中，其它成分则被洗去；
(4)通过检测由样品池中的三联吡啶钌复合物产生的电化学发光信号确定两份样品中与生物素标记的DNA连接的三联吡啶钌复合物的量；
(5)通过比较样品酶切前后电化学发光信号强度的变化来区分点突变是否发生。
CNB02134518XA 2002-08-06 2002-08-06 点突变基因的检测方法及装置 Expired - Fee Related CN100434532C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB02134518XA CN100434532C (zh) 2002-08-06 2002-08-06 点突变基因的检测方法及装置

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB02134518XA CN100434532C (zh) 2002-08-06 2002-08-06 点突变基因的检测方法及装置

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1392270A CN1392270A (zh) 2003-01-22
CN100434532C true CN100434532C (zh) 2008-11-19

Family

ID=4747774

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB02134518XA Expired - Fee Related CN100434532C (zh) 2002-08-06 2002-08-06 点突变基因的检测方法及装置

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN100434532C (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100569955C (zh) * 2004-12-22 2009-12-16 华南师范大学 多元基因探针检测转基因的方法及其装置

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000061720A2 (en) * 1999-04-12 2000-10-19 Nanogen/Becton Dickinson Partnership Allele-specific strand displacement amplification primers and method
CN1308135A (zh) * 2001-02-12 2001-08-15 成都国嘉制药有限责任公司 细胞内的基因分析方法
CN1340705A (zh) * 2000-08-25 2002-03-20 程新建 一种检测等位基因点突变的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000061720A2 (en) * 1999-04-12 2000-10-19 Nanogen/Becton Dickinson Partnership Allele-specific strand displacement amplification primers and method
CN1340705A (zh) * 2000-08-25 2002-03-20 程新建 一种检测等位基因点突变的方法
CN1308135A (zh) * 2001-02-12 2001-08-15 成都国嘉制药有限责任公司 细胞内的基因分析方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN1392270A (zh) 2003-01-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9938573B2 (en) Methods and kits for nucleic acid sequencing
EP0932700B1 (en) Method of sequencing dna
Tao et al. A new mode for highly sensitive and specific detection of DNA based on exonuclease III-assisted target recycling amplification and mismatched catalytic hairpin assembly
Su et al. Highly sensitive detection of CpG methylation in genomic DNA by AuNP-based colorimetric assay with ligase chain reaction
CN108588236B (zh) 一种近交系遗传质量监控的snp快速检测方法和snp位点及其引物
Caux‐Moncoutier et al. EMMA, a cost‐and time‐effective diagnostic method for simultaneous detection of point mutations and large‐scale genomic rearrangements: application to BRCA1 and BRCA2 in 1,525 patients
CN101260431A (zh) 基于滚环扩增技术检测转基因物种的方法
CN112326637B (zh) 一种检测5-羟甲基胞嘧啶的化学发光生物传感器及其检测方法和应用
CA2268753A1 (en) Nucleic acid primers and probes for detecting oncogenic human papillomaviruses
CN113774114A (zh) 一种核酸分析方法及应用
CN111073964B (zh) 用于检测人类白细胞抗原hla-abcdrdq基因分型的试剂盒
Butler et al. High Throughput Genotyping of Forensic STRs and SNPs using Time-of-Flight Mass Spectrometry
Fojta et al. A Single‐Surface Electrochemical Biosensor for the Detection of DNA Triplet Repeat Expansion
CN110777154A (zh) 用于结核分枝杆菌耐药检测的突变基因、及其检测方法和试剂盒
CN100434532C (zh) 点突变基因的检测方法及装置
Ricci et al. Infrared fluorescent automated detection of thirteen short tandem repeat polymorphisms and one gender‐determining system of the CODIS core system
EP1266970A3 (en) Detecting nucleic acid deletion sequences
DK1546354T3 (da) Analytdetektion
Zhang et al. Single-molecule counting of oxidative DNA damage in telomeres from cancer cells
Ye et al. Prenatal diagnosis of trisomy 21 by quantitatively pyrosequencing heterozygotes using amniotic fluid as starting material of PCR
CN113774165A (zh) 一种hbv基因分型检测方法及试剂盒
Kamahori et al. A new single nucleotide polymorphisms typing method and device by bioluminometric assay coupled with a photodiode array
Sitbon et al. A colorimetric minisequencing assay for the mutation in codon 506 of the coagulation factor V gene
CN110577985A (zh) Dna甲基化的检测方法
Köster et al. DNA analysis by mass spectrometry: applications in DNA sequencing and DNA diagnostics

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Assignee: Guangdong Guanghong Jiujiang Feed Co. Ltd.

Assignor: South China Normal University

Contract fulfillment period: 2008.12.10 to 2013.12.9 contract change

Contract record no.: 2009440001681

Denomination of invention: Detection method and device for point mutation gene

Granted publication date: 20081119

License type: Exclusive license

Record date: 20091020

LIC Patent licence contract for exploitation submitted for record

Free format text: EXCLUSIVE LICENSE; TIME LIMIT OF IMPLEMENTING CONTACT: 2008.12.10 TO 2013.12.9; CHANGE OF CONTRACT

Name of requester: GUANGDONG PROVINCE GUANGHONG JIUJIANG FEED CO., LT

Effective date: 20091020

C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20081119

Termination date: 20110806