CN100427140C - 注射用薄芝糖肽冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种注射用薄芝糖肽冻干粉针剂及其可工业化的制备方法，所述冻干粉针剂是由薄芝糖肽浓缩液和冻干赋形剂制备得到；所述薄芝糖肽浓缩液与冻干赋形剂的重量比为10∶0.3～1；所述薄芝糖肽浓缩液是从薄树芝菌丝体中提取制成，每毫升薄芝糖肽浓缩液含多糖以葡萄糖计不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg。注射用薄芝糖肽冻干粉针剂与薄芝糖肽注射液相比具有稳定性好，易运输，易保存等优点。经稳定性试验、影响因素试验、加速试验及室温留样观察，与水针剂相比，冻干粉针剂质量稳定，长期放置样品外观、pH值、含量均无明显变化。

Description

注射用薄芝糖肽冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及薄芝糖肽制剂，尤其涉及薄芝糖肽注射用制剂及其制备方法。

背景技术

灵芝作为药物首载于汉代的《神农本草经》内。古代医学家均认为灵芝能治疗多种疾病，是滋补强壮，扶正固本的珍贵药物。灵芝俗称灵芝草，民间有“灵芝治百病”等传说。灵芝是一种珍贵的药用真菌，属于担子菌纲，多孔菌科，灵芝属。本属约有100种，常见的有赤芝(Ganoderma lucidum)、紫芝(G.japonicum)、薄树芝(G.capense)等。古代称之为″仙草″。灵芝是祖国中医药宝库中珍贵的药用植物。灵芝性温，味淡，具有安神养精，滋补强壮，止咳平喘之功效，常作为补品出现于古书中。研究表明，灵芝主要成分为麦角甾醇、真菌溶菌酶、甘露醇、多肽、氨基酸等，具有扶正固本、整体调节、增强免疫、抑制肿瘤、健脑益肾、滋补强壮、解毒、保肝、强心、镇静、抗缺氧、抗惊厥、止咳平喘等多方面生物活性；用于心绞痛、动脉粥样硬化、高血脂、急性病毒性肝炎、神经衰弱、慢性支气管炎等症。

灵芝除了对人类三大死因的癌症、脑溢血、心脏病有疗效以外，还对胃肠、肝脏、肾脏、白血病、神经衰弱、慢性支气管炎、哮喘、过敏等疾病有显著的疗效。此外，灵芝还有强精、消炎、镇痛、抗菌、解毒、利尿、净血等多种作用和功效。灵芝不但具有很好的保健作用，而且对多种中老年慢性代谢性疾病有辅助治疗作用。灵芝的抗癌研究也受到国内外学者的瞩目，灵芝抗癌药品已成功上市，并取得了良好的治疗效果。国内外的药理研究均证明，灵芝有明显的抑制肿瘤作用，抑瘤率在50％～70％。灵芝还能显著降低致死剂量的放射线照射动物或注射化疗药动物的死亡率。

目前我国灵芝多糖主要从灵芝子实体中提取。人工栽培灵芝子实体生产周期长，而采用深层培养的方法来获得灵芝菌丝体和灵芝多糖，可缩短生产周期。北京赛生药业生产的薄芝糖肽是以薄树芝(G.capense)菌株经液体深层发酵制得的灵芝属薄树芝[Ganoderma capense(Lloyd)Teng]干燥菌丝体粉末中提取制成的，其主要成分为多肽和多糖。薄芝糖肽具有调节机体免疫功能的作用，对机体非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫等均有促进作用；具有抗氧化作用，能够清除氧自由基；此外，尚有促进核酸、蛋白质生物合成等作用。薄芝糖肽适用于进行性肌营养不良、萎缩性肌强直，及前庭功能障碍、及高血压等引起的眩晕和植物神经功能紊乱、癫痫、失眠等症。亦可用于肿瘤、肝炎的辅助治疗。

林永奇、马骉等研究了硼配基亲和层析技术纯化薄芝糖肽的方法(生物技术，2004，14，No.z1，31-32)。方法为：用乙酸铵缓冲液考察不同pH条件下加入不同浓度NaCl对薄芝糖肽吸附解吸的影响，找出静态最佳吸附解吸条件；依据Chase模型求出最大静态吸附容量、吸附常数以及动态吸附糖及蛋白的容量.结果表明：在pH8.2、NaCl浓度加至0.15mol/L条件下薄芝糖肽的吸附量达到最大，因此为最佳吸附解吸条件；在此条件下的最大静态吸附容量qm＝55.57mg/g湿基，吸附常数Kd＝5.312g/L；动态吸附多糖容量为43.1mg/g湿基，动态吸附蛋白容量为10.3mg/g湿基。说明该系统使用的亲和层析能有效地分离纯化薄芝糖肽。

经多年临床应用，已证明薄芝糖肽具有很好的疗效。目前市场上经静脉给药剂型只有水针剂，经过国家批准生产的只有薄芝糖肽注射液。该药品在临床应用多年，疗效可靠，市场用量大，但存在稳定性差，澄明度不好，产品收率低，保存、运输过程中易受温度变化影响等问题。

发明内容

针对现有技术存在的上述技术问题，本发明人成功地研制出薄芝糖肽冻干粉针剂，其极大地提高了药物的稳定性，在低温和较高温度下贮存均较稳定，而且解决了澄明度不好的问题；并且提高了产品收率，运输、携带方便。

因此，本发明的一个目的在于提供一种注射用薄芝糖肽冻干粉针。

本发明的另一个目的在于提供该冻干粉针的制备方法。

根据本发明的一方面，本发明提供了一种注射用薄芝糖肽冻干粉针，其特点为：

所述冻干粉针剂是由薄芝糖肽浓缩液和冻干赋形剂制备得到；

所述薄芝糖肽浓缩液与冻干赋形剂的重量比为10∶0.3～1；

所述薄芝糖肽浓缩液是从薄树芝菌丝体中提取制成，每毫升薄芝糖肽浓缩液含多糖以葡萄糖计不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg。

所述冻干赋形剂可以为氨基酸类，如甘氨酸、丙氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺等；也可以为甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、右旋糖酐、多元醇肌醇、白蛋白、明胶、聚乙二醇等。

优选的，所述冻干赋形剂为选自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸等的一种或多种。

更优选的，所述冻干赋形剂为甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。

最优选的，所述薄芝糖肽浓缩液与冻干赋形剂的重量比为10∶0.5。

本发明所述水针剂是薄芝糖肽加适当稳定剂制成的灭菌水溶液，所述冻干粉针剂是薄芝糖肽加适当辅料制成的冻干粉针剂。

在本发明的较佳实施方式中，所述冻干粉针剂含多糖以葡萄糖(C₆H₁₂O₆)计和多肽通常不低于标示量的90％。

所述薄芝糖肽浓缩液是以薄树芝(G.capense)菌株经液体深层发酵制得的灵芝属薄树芝[Ganoderma capense(Lloyd)Teng]干燥菌丝体粉末中提取制成的，其主要成分为多肽和多糖。

应用灵芝属的其它品种，如赤芝、紫芝等，也可制备得到包含多糖和多肽量与本发明所用薄芝糖肽浓缩液相似的糖肽提取液，本领域技术人员可以理解，由这些糖肽提取液制备得到的粉针剂也应包括在本发明的范围之内。

本发明提供的粉针剂可按照粉针剂的常规使用方法以有效剂量给予患者。

根据本发明的另一方面，本发明提供了一种注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备方法，包括下述步骤：

A、从薄树芝菌丝体中提取制成薄芝糖肽浓缩液，每毫升薄芝糖肽浓缩液含多糖以葡萄糖计不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg；

B、将重量比为10∶0.3～1的薄芝糖肽浓缩液与冻干赋形剂混合，分装入瓶，冷冻干燥后，封口，即得注射用薄芝糖肽冻干粉针剂。

根据本领域的公知常识，用于制备冻干粉针剂的薄芝糖肽浓缩液应为无菌无热原，分装入瓶应在无菌条件下进行。

在制备薄芝糖肽冻干粉针剂时，提取薄芝糖肽浓缩液所用的薄树芝菌丝体通常应为便于工业生产的薄树芝干燥菌丝体。

优选的，所述冻干赋形剂为选自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸等的一种或多种。

更优选的，所述冻干赋形剂为甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。

最优选的，所述薄芝糖肽浓缩液与冻干赋形剂的重量比为10∶0.5。

在本发明中，所述薄芝糖肽浓缩液可以采用传统的分离纯化方法如热水或乙醇沉淀法从灵芝属薄树芝干燥菌丝体粉末中提取制得；也可先制备薄芝糖肽粗提物，然后采用亲和层析纯化技术制备得到。

因此，在步骤A中，所述薄芝糖肽浓缩液可通过下述步骤制备得到：

a1、将薄树芝干燥菌丝体粉碎，过筛，得菌丝体粉；

a2、将菌丝体粉用92～94％乙醇回流提取3～6次，趁热过滤，合并滤液，于70℃以下减压浓缩至小体积，加水再进行减压浓缩至蒸馏液中无乙醇为止，得乙醇浸液；

a3、将上述乙醇浸液移至分液漏斗中，加乙醚萃取8～12次，收集水层液，并将醚层液加水洗涤，将水洗液合并在水层液中，得水层液；

a4、将水层液置水浴中浓缩，驱醚，得薄芝糖肽浓缩液。

在步骤A中，所述薄芝糖肽浓缩液也可通过下述步骤制备得到：

b1、将薄树芝干燥菌丝体粉碎，过筛，得菌丝体粉；

b2、采用乙醇和水作为提取溶剂，从上述菌丝体粉提取分离得到薄芝糖肽粗提物；

b3、采用硼配基亲和层析法，从上述薄芝糖肽粗提物分离纯化得到薄芝糖肽浓缩液。

步骤b3中所用硼配基亲和层析法的具体工艺条件可参见林永奇、马骉等公开的相关文献(薄芝糖肽亲和层析纯化技术，生物技术，2004，14，No.zl，31-32)。

在步骤B中，所述冷冻干燥为真空冷冻干燥，并按照如下步骤进行：

先以每分钟0.1～10℃速冻至-45℃，按冻干曲线保持真空，在真空状态下以每小时0.5～10℃的速度缓慢升温至35℃，停止加热。

在本发明的一个具体实施方式中，所述注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备方法如下：

1、制备薄芝糖肽浓缩液；

2、按照制剂规格、批量及配方要求，准备无菌无热原的薄芝糖肽浓缩液；

3、用注射用水溶解可药用辅料，超滤除热原；

4、在百级洁净区将上述原辅料按配方要求量取，置于无菌无热原配液容器内充分混匀；

5、经0.22μm滤膜除菌过滤；

6、滤液准确分装于药用内包装瓶，置真空干燥箱；

7、冷冻干燥：先以每分钟0.1～10℃速冻至-45℃，按冻干曲线保持真空，在真空状态下以每小时0.5～10℃的速度缓慢升温至35℃，停止加热；

8、自然冷却降至室温后取出，立即压盖即得冻干粉针剂。

影响因素试验结果表明，本发明提供的薄芝糖肽冻干粉针前后无明显变化，而水针的性状和pH值发生了较明显变化，说明粉针稳定性明显高于水针。

目前，薄芝糖肽注射液采用管制抗生素瓶包装，瓶塞和注射液长期接触，造成在澄明度检查时检查出许多纤维和玻点，导致产品收率较低，而本发明提供的冻干粉针避免了药品与瓶塞的长期接触，从而提高了澄明度，大大提高了产品收率。

本发明提供的注射用薄芝糖肽冻干粉针的优点在于：

1、注射用薄芝糖肽冻干粉针剂与薄芝糖肽注射液(水针)等其它剂型相比具有稳定性好，易运输，易保存等优点。

2、经稳定性试验、影响因素试验、加速试验及室温留样观察，与水针相比，冻干粉针质量稳定，长期放置样品外观、pH值、含量均无明显变化。

3、冻干粉针60℃保存10天，才有分解产物，水针60℃保存2天，有分解产物产生。由此可见冻干粉针稳定性提高，且抗降解能力优于水针。

4、冻干粉针采用西林瓶，质量稳定，易于保管和运输。

5、产品收率提高。

6、解决了薄芝糖肽水针剂澄明度不好的问题。

为了更好地理解本发明的本质，下面通过对本发明较佳实施方式的描述，详细说明但不限制本发明。

具体实施方式

本发明所用试验材料，如无特别说明，均为市售购买产品。

薄树芝干燥菌丝体粉的制备及其质量标准

【实施例1】

经液体发酵培养法，由薄树芝菌株制备得到灵芝属薄树芝[GanodermaCapense(Lloyd)Teng]干燥菌丝体(由北京赛而生物药业有限公司提供)，经粉碎机粉碎，过20目筛，得粉状菌丝体。

按照薄树芝干燥菌丝体的质量标准检验，本发明的菌丝体粉符合相应的质量标准。质量标准如下：

1、性状：本品为淡褐色和黄褐色颗粒状粉末。

2、干燥失重：取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过8％。

3、毒性和抗菸碱作用检查：取干燥菌丝体30克，以90％乙醇回流提取2小时，趁热过滤，继以乙醇回流提取3次，合并乙醇提取液，于水浴上减压浓缩至小体积，后再加入约1/3体积的水，继续减压浓缩至馏出液无乙醇为止。再加入乙醚适量萃取10次左右，将水层于水浴上浓缩，驱醚，将浓缩的提取液配成每ml相当2克干燥菌丝体的溶液和每ml相当1克干燥菌丝体的溶液，分别做毒性及抗菸碱作用检查。

3.1抗菸碱作用：取18～22克体重的小鼠20只，等分两组，一组腹腔注射上述制备的每ml相当1克的干燥菌丝体的溶液(剂量按每公斤体重40克)，对照组注射同体积的生理盐水，之后每鼠均静脉注射浓度为0.2mg/ml的菸碱(剂量按每公斤体重1mg)，记录小鼠因强直性惊厥而死亡数。

※P＜0.05进行毒性测定，如在边缘可重复一次，如在未注射菸碱前小鼠中有死亡，则可作适当稀释后再重复实验。

对照组小鼠死亡数	用药组小鼠死亡数不得超过
		10/10	5/10
9/10	4/10
		8/10	3/10

3.2毒性测定：用体重18～22克小鼠10只，腹腔注射上述每ml相当于2克干燥菌丝体溶液(剂量按每公斤40克)于24小时内，小鼠死亡数不得过5只。

薄芝糖肽浓缩液的制备及其质量标准

【实施例2】薄芝糖肽浓缩液的制备

方法一：将薄树芝菌株经液体发酵培养法制得的灵芝属薄树芝[GanodermaCapense(Lloyd)Teng]干燥菌丝体经粉碎机粉碎，过20目筛，得粉状菌丝体。取30g菌丝体粉，加入92～94％乙醇回流2小时，趁热过滤。再继以乙醇回流提取3次，合并乙醇提取液，于水浴上减压浓缩至小体积后，再加入约1/3体积的水，再减压浓缩至蒸馏液用乙醇比重计测定比重为0止。放冷，加入乙醚适量萃取约10次左右，弃去中间层，收集醚层及水层。将水层于水浴上浓缩，驱醚，即为浓缩的薄芝注射液部分，取浓缩液配成100％和200％两种浓度各5ml，进行生物检查。

方法二：取检验合格的干燥菌丝体经粉碎机粉碎，过20目筛，得粉状菌丝体。用5倍量、4倍量、3倍量的92～94％乙醇回流提取四次，每次回流2小时，趁热过滤。合并滤液，于70℃以下减压浓缩至小体积，加水再行减压浓缩至蒸馏液中无乙醇为止，得乙醇浸液。将上述乙醇浸液移至分液漏斗中，加乙醚萃取至醚层颜色较浅，收集水层液，并将醚层液加少量水洗涤，水洗液亦合并于水层液中，得水层液。将水层液置水浴中浓缩，驱醚，得薄芝糖肽浓缩液，按薄芝糖肽浓缩液质量标准进行检验。

【实施例3】薄芝糖肽浓缩液质量标准

按照薄芝糖肽浓缩液质量标准检验，本发明的薄芝糖肽浓缩液符合相应的质量标准。质量标准如下：

本品系用薄树芝菌株，经液体发酵培养法制得的灵芝属薄树芝[GanodermaCapense(Lloyd)Teng]干燥菌丝体提取制得的溶液，每毫升溶液含多糖以葡萄糖(C₆H₁₂O₆)计不得低于2.5mg，多肽不得低于0.5mg。

1、性状：本品为淡黄色至淡棕黄色的澄明液体。

2、鉴别

(1)取本品1ml，加蒽酮溶液(取蒽酮0.2g，加硫酸100ml使溶解；临用新配)5ml，置水浴放置，溶液呈蓝绿色。

(2)取本品2ml，加茚三酮约10mg，摇匀，滴于滤纸上，热风吹干，应出现蓝紫色。

(3)取本品10ml，小火加热浓缩至约2ml，冷却至室温后，加碘化铋钾试液2滴，即产生橙红色或红棕色的沉淀。

3、检查

pH值：取本品，用注射用水稀释至含多糖约2.5mg/ml或含多肽0.5mg/ml，依法测定(中国药典2000年版二部附录VIH)，应为5.0～7.0。

蛋白质：取本品2ml，加20％磺基水杨酸溶液1ml，摇匀，溶液不得产生浑浊。

鞣质：取本品1ml，加4％明胶溶液2～3滴，摇匀，溶液不得产生浑浊。

异常毒性：取本品，用注射用水稀释至含多肽约0.5mg/ml或含多糖2.5mg/ml，依法检查(中国药典2000年版二部附录XIC)，按静脉法给药，应符合规定。

细菌内毒素：取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录XIE)，每1mg多肽所含的细菌内毒素应小于10EU，每1mg多糖所含的细菌内毒素应小于2EU。

4、含量测定

多肽：量取本品适量，加水制成每1ml中含多肽0.15mg的溶液，作为供试品溶液。按照福林酚测定法(见实施例4)测定，从回归方程中求出多肽含量。

多糖：参比溶液的制备取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇匀。

供试品溶液的制备：精密量取本品，加水稀释每1ml约含0.0375mg的溶液。

标准曲线的制备：精密量取参比溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，分别置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述5个浓度的参比溶液各1.0ml，另取水1.0ml，作空白，分别置具塞试管中，置于冰水浴中，分别精密加入蒽酮溶液5.0ml，摇匀，置水浴中反应10分钟，取出，用冷水冷却至室温，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV B)，在620nm的波长处测定吸收度，以测得吸收度与其对应的浓度进行回归方程计算。

测定法：精密量取供试品溶液1.0ml，置具塞试管中，照标准曲线制备项下自“置于冰水浴中，分别精密加入蒽酮溶液5.0ml”起，依法测定吸收度，从回归方程中计算多糖的含量。

5、类别：免疫调节药。

6、贮藏：避光，低温保存。

【实施例4】福林酚测定法

试剂碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使其溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使其溶解将两液混合作为乙液。

临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。

操作法对照溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。

供试品溶液的制备照各品种项下规定的方法制备。

标准曲线的制备精密量取对照溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液(取福林试液中的贮备液1→16)4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV B)，在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与相对应的吸光度计算回归方程。

测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液”起，依法测定，从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。

注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备及其质量标准

【实施例5】注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备

制备本发明注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的具体过程和步骤如下：

1、薄芝糖肽浓缩液的制备

参照实施例2的方法，并按照制剂规格、批量及配方要求，准备无菌无热原的薄芝糖肽浓缩液；

2、配液

准备：各种配液用品准备齐全；

量取液体：量取处方量的薄芝糖肽浓缩液(按成品计算)，二人复核；

辅料配制：称取药用辅料甘露醇适量，用注射用水溶解至终浓度为10％，超滤除热原；

除菌过滤：在百级洁净区将上述原辅料和稀释液按配方要求量取，置于无菌无热原配液容器内充分混匀；过0.22um滤膜；

无菌药品的药液从配制到除菌过滤的时间间隔应不超过3小时，检查半成品含量、pH及细菌内毒素等，清场。

3、灌装

试车：装好机器、接通电源，检查各部运转情况，由低速到高速运行完好后，方可使用

准备：装瓶上塞，将西林瓶送入理瓶盘，将胶塞装入理塞器内；

调装量：按半成品含量测定结果确定装量，旋转调量螺母，调到确定的装量。

理想装量1±0.2ml；

灌装：理盘作顺时针旋转，将瓶子送入理瓶轨道，进入分度齿盘，分度齿盘以每分钟10-50次间歇速度旋转，将瓶子拨到灌装位置，灌装机构以同步间歇的上下往返运行进行灌装，灌装后的西林瓶转至按塞位，进行按塞。

胶塞由理塞器输塞轨道将其送到按塞轮处，胶塞在真空吸力下牢靠的跟随按塞轮做间歇转位，使塞对准瓶口，按塞推杆将瓶上推，使塞对准瓶口，此时真空自动关闭，塞脱开按塞轮，随瓶进入输瓶轨道。

将灌装半加塞的药瓶装盘，送入冻干机，清场。

从过滤结束到灌装结束时间间隔应不超过7小时。

4、冷冻干燥

4.1预冻：隔板温度控制在-35℃至-40℃，制品温度达-35℃以下，从视窗可见冻结成冰；

4.2升华：前期缓慢升温至制品全白(-25℃左右)，同时将系统真空度保持在6～8Pa，然后，升温速度可稍快至板温与制品接近。

4.3再干燥：制品38℃～40℃，保持4～6小时

3.4清场。

5、轧盖、检漏、灯检后，抽取样品送质检部门检验，检验合格后即得注射用薄芝糖肽冻干粉针剂。

【实施例6】注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备

取检验合格无菌无热原的薄芝糖肽浓缩液适量，加适量甘露醇，使甘露醇在溶液中最终浓度为5％，无菌灌装冻干，即得注射用薄芝糖肽。具体制备方法同实施例4。

【实施例7】注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备

取检验合格无菌无热原的薄芝糖肽浓缩液适量，加适量右旋糖酐，使右旋糖酐在溶液中最终浓度为5％，无菌灌装冻干，即得注射用薄芝糖肽。具体制备方法同实施例4。

【实施例8】注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备

取检验合格无菌无热原的薄芝糖肽浓缩液适量，加适量甘氨酸，使甘氨酸在溶液中最终浓度为5％，无菌灌装冻干，即得注射用薄芝糖肽。具体制备方法同实施例4。

【实施例9】注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的质量标准

按照注射用薄芝糖肽冻干粉针剂质量标准检验，本发明的注射用薄芝糖肽冻干粉针剂符合相应的质量标准。质量标准如下：

本品为薄芝糖肽冻干粉针剂，系用薄树芝菌株，经液体发酵培养法制得的灵芝属薄树芝[Ganoderma Capense(Lloyd)Teng]干燥菌丝体提取制得的，含多糖以葡萄糖(C₆H₁₂O₆)计和多肽均不得低于标示量的90.0％。

1、性状：本品为白色至淡黄色冻干粉末。

2、鉴别

(1)取本品1支加水2ml，从中量取1ml，加蒽酮溶液(取蒽酮0.2g，加硫酸100ml使溶解；临用新配)5ml，置水浴放置，溶液呈蓝绿色。

(2)取本品1支，加水2ml，加茚三酮约10mg，滴于滤纸上，热风吹干，应出现蓝紫色。

(3)取本品3支，共加水1ml溶解，加碘化铋钾试液2滴，即产生橙红色或红棕色的沉淀。

3、检查

pH值：取供试品，每支用2ml注射用水溶解，依法(中国药典2000年版二部附录VIH)检查pH值，应为5.5～7.0。

蛋白质：取本品1支，加水2ml，加20％磺基水杨酸溶液1ml，摇匀，溶液不得产生浑浊。

鞣质：取本品3支，分别加水2ml，混匀后量取1ml，加4％明胶水溶液2～3滴，摇匀，溶液不得产生浑浊。

异常毒性：取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI D)，按静脉注射给药，应符合规定。

热原：取供试品每支以2ml注射用水溶解，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI D)，剂量按家兔体重每1kg注射1ml。

溶液的澄清度：取本品，每支以2ml注射用水溶解，溶液应澄清。

干燥失重：取本品，依法检查(中国药典2000年版附录VIII L)，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过5.0％。

其他：应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版二部附录I B)。

4、含量测定

多肽：取本品3支加水制成每1ml中含多肽0.15mg的溶液，作为供试品溶液。照福林酚测定法测定，从回归方程中求出多肽含量。

多糖：

参比溶液的制备取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液的制备：精密量取本品3ml，置200ml量瓶中，加水稀释至刻度。

标准曲线的制备：精密量取参比溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，分别置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述5个浓度的参比溶液各1.0ml，以水作空白，分别置具塞试管中，置于冰水浴中，分别精密加入蒽酮溶液5.0ml，摇匀，置水浴中准确反应10分钟，取出，用冷水冷却至室温，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV B)，在620nm的波长处测定吸光度，以测得吸收度与其对应的浓度进行回归方程计算。

测定法：精密量取供试品溶液1.0ml，置具塞试管中，照标准曲线制备项下自“置于冰水浴中，分别精密加入蒽酮溶液5.0ml”起，依法测定吸收度，从回归方程中计算多糖的含量。

5、规格：5mg(多糖)，1mg(多肽)。遮光，阴凉处保存。有效期暂定2年。

薄芝糖酐冻干粉针剂与注射液的稳定性比较试验

【实施例10】

影响因素试验条件及结果见表1和2。从试验结果可以看出，粉针的影响因素试验前后无明显变化，而水针的性状和pH值发生了较明显变化，说明粉针稳定性明显高于水针。

表1注射用薄芝糖肽冻干粉针剂影响因素试验结果(n＝6)

表2薄芝糖肽注射液影响因素试验结果(n＝6)

以上对本发明较佳实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (6)

1、一种注射用薄芝糖肽冻干粉针剂，其特征在于，

所述冻干粉针剂是由薄芝糖肽浓缩液和冻干赋形剂制备得到；

所述薄芝糖肽浓缩液与冻干赋形剂的重量比为10∶0.3～1；

所述薄芝糖肽浓缩液是从薄树芝菌丝体中提取制成，每毫升薄芝糖肽浓缩液含多糖以葡萄糖计不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg，

其中，所述冻干赋形剂为选自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸的一种或多种。

2、根据权利要求1所述的冻干粉针剂，其特征在于，所述冻干赋形剂为甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。

3、一种注射用薄芝糖肽冻干粉针剂的制备方法，包括下述步骤：

A、从薄树芝菌丝体中提取制成薄芝糖肽浓缩液，每毫升薄芝糖肽浓缩液含多糖以葡萄糖计不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg；

B、将重量比为10∶0.3～1的薄芝糖肽浓缩液与冻干赋形剂混合，分装入瓶，冷冻干燥后，封口，即得注射用薄芝糖肽冻干粉针剂，

其中，所述冻干赋形剂为选自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸的一种或多种。

4、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述冻干赋形剂为甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。

5、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤A中，所述薄芝糖肽浓缩液是通过下述步骤制备得到：

a1、将薄树芝干燥菌丝体粉碎，过筛，得菌丝体粉；

a2、将上述菌丝体粉，用92～94％乙醇回流提取3～6次，趁热过滤，合并滤液，于70℃以下减压浓缩至小体积，加水再进行减压浓缩至蒸馏液中无乙醇为止，得乙醇浸液；

a3、将上述乙醇浸液移至分液漏斗中，加乙醚萃取8～12次，收集水层液，并将醚层液加水洗涤，将水洗液合并在水层液中，得水层液；

a4、将上述水层液置水浴中浓缩，驱醚，得薄芝糖肽浓缩液。

6、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤A中，所述薄芝糖肽浓缩液是通过下述步骤制备得到：

b1、将薄树芝干燥菌丝体粉碎，过筛，得菌丝体粉；

b2、采用乙醇和水作为提取溶剂，提取分离得到薄芝糖肽粗提物；

b3、采用硼配基亲和层析法，分离纯化得到薄芝糖肽浓缩液。