CN100413514C - 木豆叶药材及其提取物、制剂及其用途 - Google Patents

木豆叶药材及其提取物、制剂及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种木豆叶的提取物及其制备方法,还公开了木豆叶药材及其提取物的新药物用途,即木豆叶用于制备治疗股骨头缺血性坏死药物、治疗骨质疏松症药物、改善血液流变学指标药物、抗炎镇痛药物、增强免疫功能药物、治疗冠心病心绞痛药物、制备治疗骨折药物、制备治疗脑梗塞药物、治疗褥疮药物、治疗感染创面药物和治疗开放性骨折感染创面药物的用途。

Description

木豆叶药材及其提取物、制剂及其用途
技术领域
本发明涉及木豆叶药材及其提取物,以及以木豆叶药材或其提取物制成的药物制剂,本发明还涉及木豆叶药材及其提取物的新用途,特别是在制药领域中的新用途,本发明属于中药领域.
背景技术
木豆叶生长于南方,为蝶形花科popilionaccae,属adjonus亚热带灌木植物.木豆叶又名柳豆、扭豆、豆蓉、柳点,其具有清热解毒、活血化瘀、抗菌消炎的作用,该药根部有清热解毒、止血止痛和杀虫作用,嫩叶嚼烂用于治疗口疮,压汁内服可消黄疸,捣烂的浆汁对外伤有祛腐生肌作用,叶的煎剂对咳嗽、腹泻等有效.CN1174052A报道了木豆叶的药物用途,由于该药物是木豆叶与其他组份混合配伍使用,并没有对木豆叶进行提取,不能够清楚地获得木豆叶的有效部位,限制了木豆叶的应用.
发明的公开
本发明的一个目的是提供一种木豆叶的提取物,即其药物有效部位,
本发明的另一目的是提供一种制备所述木豆叶提取物的方法,
本发明的又一目的是提供以木豆叶药材或其提取物为药物活性成分的药物制剂,
本发明的再一目的是提供木豆叶及其提取物的新用途,即在制药中的新用途.
本发明的制备木豆叶提取物的方法如下
(一)原药材净化、炮制
木豆叶
[炮制]取木豆叶干燥的幼嫩枝叶,除去杂质和老枝,洗净、阴干.切成约5cm的小段,置洁净容器中备用.
(二)药材提取、浓缩、干燥
取木豆叶,置多功能提取罐中,加药材量的10倍量水浸泡约0.5-2小时,加热煎煮1-4次,每次煎煮1-2小时,过滤,滤液立即抽入真空浓缩器(真空度为-0.08MPa,温度为60℃)中,浓缩至相对密度为1.05-1.15(60℃热测),用80目滤布过滤,滤液采用连续式离心过滤,然后用喷雾干燥器干燥离心液,得到干浸膏粉,将所得的干浸膏粉置于洁净密闭容器中,制成了本发明的木豆叶有效部位提取物.
优选的药材提取物的制备方法为.取木豆叶,置多功能提取罐中,加药材量的10倍量水浸泡约1小时,加热煎煮3次,每次煎煮1.5小时,过滤,滤液立即抽入真空浓缩器,于真空度为-0.08MPa,温度为60℃的条件下浓缩至相对密度为1.05-1.15(60℃热测),用80目尼龙布过滤,滤液采用连续式离心过滤,离心过滤的转述为15000r.p.m,流量为50L/小时,离心液经喷雾干燥器干燥,喷雾干燥器的进风口温度为180℃,干燥时间为4秒,出风口温度为80℃,将干燥后得到的干浸膏粉置于洁净密闭容器中.
本发明的木豆叶提取物作为药物活性成分,可以按照常规的制剂工艺制成临床制剂,例如,片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、口服液等,其中药物制剂中木豆叶提取物的含量为治疗有效量,一般为0.01-99.9%,优选1-90%,更优选为5-80%,最优选为10-70%.另外也可将晒干的木豆叶药材磨成粉末,以其作为药物活性成分,按常规方法制成临床制剂.
本发明的木豆叶胶囊制备方法为.
在木豆提取物加入常规的赋形剂,如淀粉,或不加赋形剂,然后装入胶囊,即得.
本发明经过实验研究,证明了木豆叶药材及其提取物的以下新药物用途.
1.木豆叶药材及其提取物用于制备治疗骨质疏松症的药物的用途
采用维甲酸制骨质疏松模型,观察木豆叶胶囊对实验性骨质疏松的影响.结果显示木豆叶胶囊能显著提高血清钙、磷含量,降低碱性磷酸酶含量,显著提高大鼠的BMC和BMD.病理切片下观察,显示木豆叶胶囊能显著提高骨小梁质量  减少破骨细胞数量,促进成骨细胞生长,从而达到防治骨质疏松的作用。
2.木豆叶药材及其提取物用于制备股骨头缺血性坏死的药物的用途
建立新西兰兔马血清一激素造成股骨头缺血性坏死的模型,之后给予高、中  低不同剂量木豆叶提取物胶囊剂治疗,同时设定正常对照组、模型对照组.通过股骨近端密度测定、放大X线片观察、光镜病理检查、电镜观察、骨组织代谢动力测定,结果显示木豆叶胶囊治疗激素性股骨头缺血性坏死有明显的效果.
3.木豆叶药材及其提取物改善血液流变学指标的作用
大鼠肠系膜微循环实验显示木豆叶胶囊能显著提高血液流速、流速微积分  流态微积分.对大鼠急性血瘀模型血液流变学指标的观察显示,木豆叶胶囊能显著提高全血比粘度、血浆比粘度、降低血沉.
4.木豆叶药材及其提取物用于制备抗炎镇痛药物的用途
小鼠耳廓二甲苯致炎实验和大鼠棉球肉芽肿实验表明,木豆叶胶囊能显著减轻二甲苯致炎的耳肿胀,减轻棉球肉芽肿.小鼠扭体法和热板法实验表明,木豆叶胶囊能显著减少扭体鼠数,延长第一次扭体时间及提高镇痛百分率,提高小鼠痛阈值.
5.木豆叶药材及其提取物用于制备增强免疫功能的药物的用途.
对醋酸泼尼松致小鼠免疫功能低下模型,木豆叶胶囊有提高单核细胞吞噬功能的趋势,能显著增加小鼠免疫器官(胸腺、脾脏)重量,显著增加鸡红细胞作免疫原的小鼠溶血素含量,并显著提高植物血凝素(PHA)刺激的体内过渡态T淋巴母细胞百分率和淋巴细胞转化率.
6.木豆叶药材及其提取物用于制备治疗褥疮的药物的应用
通过临床观察可见,使用木豆叶药材及其提取物治疗褥疮与传统的生肌膏相比,疗效明显优异,其不仅能缩短疗程,而且愈后瘢痕少.
7.木豆叶及其提取物用于制备治疗感染创面的药物的应用
木豆叶药材及其提取物具有促进创面上皮肉芽组织生长,增加创面血液供应,加速创面愈合,减少巴痕组织形成,提高愈合质量等作用.在抗感染方面观察到其对感染创面有较好的抗感染能力,反映在创面及炎症反应消退快,尤其是用药后创面渗出很快减少,创面干净,提示该药有较好的抗炎性渗出的作用.
8.木豆叶及其提取物用于制备治疗开放性骨折感染创面的药物的应用
木豆叶药材及提取物对临床感染创面具有较好的抗感染能力,能促进肉芽组织生长,增加创面血液供应,促进创面愈合的作用,尤其能在裸露于创面的骨面上生长出肉芽组织——“骨肉芽岛”.
同时临床治疗结果还显示了木豆叶及其提取物对冠心病心绞痛、脑梗塞、骨折都具有良好的疗效.
为了更好地理解本发明的实质,下面结合实施例对木豆叶提取物的制备、木豆叶药材及其提取物的药理试验及其结果进行详细的描述,以说明其在制药领域中的新用途.
实现本发明的最佳方式
实施例1  木豆叶提取物及其胶囊制剂的制备
取同一批木豆叶药材10kg,切段,加药材10倍量水,加热煎煮三次,每次煎煮1.5小时,过滤,合并滤液,于-0.08Mpa的真空度和60℃下真空浓缩至相对密度为1.15,离心(15000r.p.m)去沉淀,滤液喷雾干燥成干浸膏粉(0.81kg),将得到的干浸膏粉置于洁净密闭容器中备用.
将得到的木豆叶干浸膏粉按0.5g/颗装入药用胶囊中制成胶囊制剂,以下称其为生脉成骨胶囊.
实验例2  木豆叶制剂治疗骨质疏松症的药理作用
(一)维甲酸骨质病变实验
实验材料
药物  生脉成骨胶囊,维甲酸,上海第六制药厂,批号  960322,龙牡壮骨冲剂,武汉健民制药厂,批号  960111.
动物  SD系大鼠,厂东省卫生厅动物场,体重250-300g,雄性100只,合格证  96A02
饲料  厂东省卫生厅动物场提供标准饲料
仪器  美国康宁系列  55自动生化分析仅,美国TECHNICON,RA2000,DEXA(HologicQDR-2000operators Manual)
试剂  澳川TRACE(上海长征公司经销)
方法与结果
动物随机分为六组,即对照组、模型组、龙牡壮骨冲剂组和三个生脉成骨胶囊剂量组(三个剂量组的剂量分别为7.68g/kg/天、3.84g/kg/天  1.92g/kg/天,临床生药用量力1g/1kg/天).对模型组  龙牡壮骨冲剂组和三个生脉成骨胶囊剂量组同时灌胃给予维甲酸70mg/kg/天和药物两周后,停服维甲酸,对龙牡壮骨冲剂组和三个生脉成骨胶囊剂量组继续给药五周.对照组和模型组灌服蒸馏水20ml/kg/天。测定以下各项指标.
(1)血清钙、磷  碱性磷酸酶(AKP)
清晨眼球取血5ml,测定血清钙、磷、AKP,仪器采用550自动生化分析仅,美国TECHNICON,RA2000,澳洲TRACE,结果如表1所示.
结果显示  模型组血清磷含量与对照组相比,有显著降低(P<0.001)。生脉成骨胶囊高、中、低剂量组钙、磷含量与模型组相比,有显著提高(P<0.001、P<0.01、或P<0.05),生脉成骨胶囊低剂量组碱性磷酸酶与模型组相比,有显著降低(P<0.05).
(2)双光子骨密度测定骨面积(AREA)、骨矿密度(BMD)、骨矿含量(BMC).
大鼠采用DEXA(Hologic QDR-2000 operators Manual),在戊巴比妥纳麻醉下测定大鼠AREA、BMD、BMC.定点测定Global(整体大鼠)、R1(左股骨头)、R2(右股骨头)、R3(右股骨)、R4(左股骨)、R5(腰椎)、NETAVG(R1、R2、R3、R4、R5之和)的AREA、BMD、BMC.(结果见表2、表3)
Figure C0080909600091
结果显示:模型组Global的AREA、BMC和BMD与对照组相比有显著降低(P<0.001、P<0.01或P<0.05).生脉成骨胶囊高、中剂量组Global的AREA、BMC、和BMD与模型组相比有显著提高(P<0.001、P<0.01或P<0.05).模型组R5(腰椎)的BMD与对照组相比有显著降低(P<0.01),生脉成骨胶囊组R5的BMD与模型组相比有显著提高(P<0.05),生脉成骨胶囊组的BMC和AREA与模型组相比,有提高趋势.
表3生脉成骨胶囊对大鼠NETAVG AREA、BMC、BMD的影响
Figure C0080909600101
结果显示:模型组NETAVG的BMD与对照组相比有显著降低(P<0.01),生脉成骨胶囊高、中剂量组的BMD与模型组相比有显著提高(P<0.05),生脉成骨胶囊组的BMC和AREA与模型组相比,有提高趋势.
(3)组织形态学检查
a.方法
沿股骨头冠状面及股骨中段横断面剖截,10%福尔马林缓冲液固定,5%硝酸脱钙后流水冲洗.石蜡包埋,切片,HE染色.在骨骼HE切片中观察骨小梁、成骨细胞、破骨细胞有无变化.
b.结果
正常对照组:骨小梁规则、致密、无断裂.
模型组:骨小梁断裂、变细、减少、结构紊乱,甚至消失,造血细胞明显减少,髓腔扩大;成骨细胞明显减少,破骨细胞明显增多.
龙牡壮骨冲剂组  骨梁结构不规则,但没有明显变细,成骨细胞较模型组增多,破骨细胞无明显增加。
生脉成骨胶囊高剂量组  骨小梁结构正常、规则,无变细、减少,造血细胞丰富,成骨细胞增多,破骨细胞减少.
生脉成骨胶囊中剂量组  骨小梁结构基本正常、规则、无变细、减少,造血细胞较丰富,髓腔无明显扩大;成骨细胞增多,破骨细胞无明显增加.
生脉成骨胶囊低剂量组  骨小梁结构基本正常、规则,无明显变细,成骨细胞稍增多,破骨细胞无明显增加.
小结
以上实验探讨了生脉成骨胶囊对维甲酸致骨质疏松的防治作用,结果显示生脉成骨胶囊能显著提高血清钙、磷含量,促进成骨细胞生长,提高骨小梁的质量,增加骨矿含量和骨矿密度,提示该药通过上述多种途径起到了补骨健骨作用,从而防治了骨质疏松.
(二)木豆叶胶囊治疗骨质疏松症的临床观察
1.临床资料
选择200例病例,其中,男78例,女122例;年龄45-50岁9例,51-60岁28例,61-70岁122例,71-80岁34例,81-99岁7例,平均年龄65岁.王诉均有程度不同的自发性骨痛,呈持续或间歇发作,以腰背痛或髋膝关节痛多见,腰膝酸软无力,劳累后加重,不耐久坐,易疲乏,活动功能障碍或受限,有的甚至需常服止痛药以求缓解,但止痛效果差或药后又复痛.病程3个月-3.5年不等,平均9个月.查体127例有程度不同的驼背或脊柱后突畸形,132例伴有脊椎棘突压痛,叩击痛和髋膝关节叩击痛.X射线检查示有脊椎压缩骨折者112例,髋部骨折15例,腕部骨折27例,上臂骨折5例,多发性骨折6例,均显示骨密度降低,骨皮质变薄、骨小梁纤细稀疏等明显的骨质疏松症,而排除其他骨病或转移癌等病理骨折.
2.治疗方法
2.1一般治疗  脊椎轻度压缩或中心凹陷性压缩骨折无需卧床,椎体压缩≤1/3者卧床2周,压缩≥1/2或多椎体压缩变形,稳定性较差者卧床3-5周,均于伤椎中心加垫小枕以减轻日后脊突畸形.髋部骨折配合骨牵引或螺纹钉固定,卧床期间注意预防褥疮及肺部和泌尿系感染.
2.2内服生脉成骨胶囊治疗
2.3辅助治疗 中后期鼓励患者坚持一定的户外活动,以增加骨的应力刺激,增强骨骼的坚韧性,使筋骨强健,关节灵活.但要避免过剧的运动及搬负重物.有骨折者,局部配合红外线,TDP灯照射和中药熏洗等方法治疗,以促进康复。
3 治疗结果
3.1疗效评定标准
显效  临床症状全部消失,恢复正常活动功能,骨折愈合或压缩变形椎体部分恢复,骨质疏松症改善.
有效  临床症状大部分消失,骨折愈合或延迟愈合,椎体压缩无加重,骨质疏松症改善或无明显变化,可恢复日常活动,或主要临床症状消失,活动功能明显改善.
无效  主要临床症状、体征如骨痛症状、活动功能及骨质疏松症均无改善或加重。
3.2疗效评定结果  治疗2-5个月后,按上述标准评定疗效,结果显效89例,有效29例,总有效率85.5%.其中63例经3-5年随访,均无再次发生骨折,身体状况恢复良好,38例脊椎压缩骨折者恢复体力劳动.
实验例3  木豆叶胶囊治疗冠心病心绞痛观察
1.临床资料
45例中男30例,女15例,年龄最大者75岁,最小者38岁,平均54岁,病程最短者1个月,最长者10年,平均3年又2个月.
按1981年世界卫生组织冠心病发作的诊断标准,及1980年第一届全国内科学木会议心血管病专业组制定的“冠状动脉性心脏病命名及诊断标准”,关于劳力性心绞痛分级确诊  劳力性心绞痛37例(I级5例,II级16例,III级10例,IV级6例),自发型心绞痛8例,其中伴有各种心律失常者16例.
2.治疗方法
以生脉成骨胶囊治疗,治疗前及治疗后每周查心电图1次.
3.疗效标准与治疗结果
3.1疗效标准
参照1979年9月全国中西医结合防治冠心病心绞痛,心律失常研究座谈会修订的冠心病心绞痛疗效评定标准.
3.2治疗结果
心绞痛症状治疗  显效29例,改善15例,无效1例,心电图疗效  显效13例  改善16例,无效16例.所述合并心律失常者,其症状多数消失或明显减少.
实验例4 木豆叶胶囊治疗脑梗塞的作用
1.一般资料
选择60例符合《中风病中医诊断和疗效评定标准》的病例,并经CT检查确诊.随即将该60例病例分为两组,其中治疗组32例,男23例,女9例,年龄53-78岁,平均年龄64.8岁;病程3天-1个月.对照组28例,其中男22例,女6例 年龄54-72岁,平均年龄61.3岁,病程2-7个月.
2.治疗方法
采用生脉成骨胶囊治疗.用法 一次四颗,每日三次.三个月为一个疗程.对照组采用复方丹参片治疗,一次三片,一日三次.全部患者治疗六个月.恢复期配合理疗和针灸治疗.
3.疗效观察
3.1疗效标准
基本治愈  肌力提高2级以上,神经系统体征基本消失,生活自理.
显效  肌力提高1-2级,生活不能自理.
无效  肌力提高不足1级.
3.2 治疗结果
治疗组病例中,基本治愈14例(43.75%),显效13例(40.63%),有效2例(6.25%),无效3例(9.37%),总有效率为90.63%.对照组基本治愈8例(28.57%)、显效11例(39.29%)、有效4例(14.28%)  无效5例(17.86%),总有效率为82.14%.两组对照有明显差异(t=3.425,p<0.01).
实验例5  木豆叶胶囊治疗骨折的临床观察
1.临床资料
1.1选择108例均为四肢新鲜闭合骨折的病例,其中男60例,女48例,年龄小18岁,最大79岁,平均年龄40.8岁,肱骨骨折11例,尺骨骨折30例,掌骨骨折14例,股骨骨折17例,胫腓骨骨折21例,跖趾骨骨折15例,所有病人都按就诊顺序分为两组,奇数为治疗组,偶数为对照组,各组54例.两组病人的年龄、性别、骨折部位大致相同(p>0.05),有可比性(见表4-表6).
表4两组患者年龄分布情况
Figure C0080909600141
表5两组患者性别分布情况
Figure C0080909600142
表6两组患者骨折部位分布情况
1.2治疗方法 两组病人均常规采用传统的复位、固定、功能锻炼方法治疗.在此基础上治疗组口服木豆叶胶囊,每次4颗,每日3次,15天为1个疗程,视病情需要可连服1-3个疗程或更长,对照组口服三七胶囊,每次4颗,每日3次,15天为1个疗程.
1.3  疗效标准  根据骨折愈合时间评价
治愈  比同类骨折愈合提前1/3以上达到临床愈合标准.
显效  比同类骨折愈合时间提前1/4以上达到临床愈合标准.
有效  比同类骨折愈合时间提前1/5以上达到临床愈合标准.
无效  与同类骨折折愈合时间相同.
骨折的临床愈合标准和常见骨折的临床愈合时间参照汤氏等的标准.功能恢复情况按杨氏评定标准,优  骨折愈合,关节活动范围正常或接近正常,恢复工作,良  骨折愈合,关节活动要受即在30度以上,生活可以自理,差  骨折愈合,关节活动明显辗转,上肢前臂旋转受限或不能持重物,下肢关节疼痛或不负重步行。
1.4治疗结果.
两组病例接受治疗1-3个疗程,骨折愈合时间比较见表7.经统计学处理X2检验,两组间总有效率比效(P>0.05),差异无显著性.但对照组出现1例差级病例  且优良率较治疗组略低.
表7 两组患者骨折愈合时间比较(天)
Figure C0080909600161
表8 两组患者功能恢复情况比较
Figure C0080909600162
实验例6 木豆叶胶囊治疗股骨头缺血性坏死的药效学实验
1.目的 评价生脉成骨胶囊治疗激素性股骨头缺血性坏死药效.
2方法 本实验建立马血清+激素致新西兰兔股骨头缺血性坏死的模型,5月后确立模型成立,然后给予高、中、低不同剂量生脉成骨胶囊治疗,同时设定正常对照组、模型对照组.8周后处死动物,行放大X线片、骨密度、光镜、电镜、骨代谢动力学等检查,以评价疗效.
3.结果.(1)马血清+激素可制造出典型的股骨头缺血性坏死模型;(2)药效实验表明(i)放大X线片示生脉成骨胶囊高、中剂量组形态接近正常,模型组股骨近端骨密度不均,呈坏死表现,(ii)光镜下各剂量组动物股骨头内空骨陷窝率均有下降,而血管计数、成骨细胞计数均有增加,与模型组比有显著差异(P<0.05),(iii)电镜下各剂量组成骨细胞功能细胞器丰富,骨细胞以成骨相和吸收相为主,(iv)股骨近端骨密度低剂量组高于其它各组,与模型组、正常对照组相比有显著差异(P<0.05);(v)骨代谢动力学 高、低剂量组骨生长值与模型组相比有显著提高(P<0.05);(vi)血液生化  血清总胆固醇,甘油三脂水平在各组间无显著差异.
4.结论  生脉成骨胶囊治疗激素性股骨头缺血性坏死的作用显著,其作用机理主要是促进骨组织血管、骨髓修复和再生,促进新骨生长.
实施例7  木豆叶胶囊改善大鼠急性血瘀模型血流变学指标实验
1.实验材料
药物  生脉成骨胶囊,盐酸肾上腺素注射液1mg/ml,杭川民生药厂提供,批号 951012,磷酸川芎嗪,广州市桥制药厂提供,批号  950116,戊巴比妥纳,比号950202。
动物  SD雄性大鼠60只,体重150-200g,由广东省卫生厅动物场提供.合格证号96A02。
2 方法与结果
大鼠随机分成六组,即正常对照组、血瘀模型组、磷酸川芎嗪组和三个生脉成骨胶囊剂量组(剂量见表9),对照组和血瘀模型组灌服等体积蒸馏水,各给药组按2ml/100g/天体重灌服不同浓度药液,每天定时一次,连续20天,于末次给药24h后,除正常对照组外,各组动物皮下注射肾上腺素2次(0.8mg/kg),间隔3小时,并在首次注射肾上腺素1.5小时后,将大鼠置于4±1℃水中浸泡5分钟,然后禁食,次日上午麻醉下(戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射)眼球取血,测定包括全血比粘度、血浆比粘度、血沉、红细胞压积的血流变指标.
Figure C0080909600181
3.实验结果
血瘀模型组与正常对照组相比较,全血比粘度、血沉、红细胞压积均有显著性增高(p<0.05、p<0.01).川芎嗪组和生脉成骨胶囊组的全血比粘度、血沉和模型组相比有显著降低.生脉成骨胶囊中低剂量组的血浆比粘度与模型组相比有显著降低(P<0.01或P<0.05),以上两个实验表明生脉成骨胶囊具有活血化瘀作用.
实施例8 木豆叶胶囊的镇痛作用实验
(一)小鼠扭体法实验
(1)实验材料
药物 生脉成骨胶囊,消炎痛,广东石岐制药厂提供,批号950306,0.6%醋酸,批号 951025.
动物 NIH小鼠42只,体重18-22g,雌雄各半,由广东省卫生厅动物场提供,合格证号96A03.
(2)实验方法
小鼠随机分为5组,即对照组(0.2ml/10g蒸馏水)、消炎痛组(0.013g/kg),三个生脉成骨胶囊剂量组(剂量见表10).灌胃给药7天,第7天给药60分钟后腹腔注射0.6%醋酸溶液(0.2ml/只),观察每只小鼠第一次因疼痛引起扭体的时间,10分钟内出现小鼠扭体鼠数和镇痛百分率,结果做统计学处理如表10所示.
表10 生脉成骨胶囊对小鼠镇痛作用的影响(扭体法) (x±s)
Figure C0080909600191
与对照组比较#P<0.05 ##P<0.01 ###P<0.001
(3)实验结果
结果显示消炎痛组及生脉成骨胶囊高、中剂量组与对照组相比,第一次出现扭体时间均有显著性延长(P<0.001),扭体鼠数减少(P<0.01)和镇痛百分率提高(P<0.01),表明生脉成骨胶囊有抑制醋酸致小鼠疼痛的作用.
(二)小鼠热板法实验
(1)实验材料
药物·生脉成骨胶囊,消炎痛  广东石岐制药厂提供,批号950306.
动物·NIH小鼠75只,雌性,体重18-22g,由广东省卫生厅动物场提供,合格证号96A03.
(2)实验方法
将水浴箱调节恒温55℃±1℃,放一大烧杯于水中,将小鼠投入烧杯,记录小鼠从投入杯至受热疼痛舔足的时间,作为该鼠的痛阈值.筛选痛阈值在5-30秒的雌性小鼠,随机分组为对照组、消炎痛组和三个生脉成骨胶囊剂量组(剂量见表11),灌胃给药7天,于第7天给药后30分钟、60分钟分别测小鼠痛阈值,观察给药后痛阈值的变化.室温应控制在15-20℃.
(3)实验结果
表11  生脉成骨胶囊对小鼠镇痛作用的影响(热板法)  (x±s)
Figure C0080909600201
注.与对照组比较#P<0.05  ##P<0.01  ###P<0.001
实验结果如表结果11所示,可见各组小鼠灌胃前的痛阈值相比,无显著性差异,灌胃后30分钟,消炎痛组和生脉成骨胶囊中剂量组与对照组相比痛阈值有显著提高(P<0.01或P<0.001),60分钟后消炎痛组和生脉成骨胶囊高、中、低剂量组与对照组相比痛阈值有显著提高.(P<0.05、P<0.01或P<0.001)
实施例9木豆叶胶囊的抗炎消肿实验
(一)小鼠耳廓二甲苯致炎实验
(1)实验材料
药物 生脉成骨胶囊,
动物 NIH小鼠40只,体重18-22g,由厂东省卫生厅提供,合格证号96A03.
(2)实验方法
小鼠随机分为5组,即对照组、消炎痛组和三个生脉成骨胶囊剂量组(剂量见表12),每组8只.小鼠按不同药物浓度灌胃给药7天,于第7天上午给药30分钟后,用二甲苯棉球接触左耳5秒,15分钟后将小鼠断颈处死,以打孔器将小鼠双耳同部位等面积切下,扭力天平称重,以每只鼠左耳减去右耳重量之差为肿胀程度,将对照组与给药组的肿胀程度做统计学处理.
(3)实验结果
表12 生脉成骨胶囊对二甲苯所致小鼠耳廓炎症的影响(x±s)
Figure C0080909600211
注 与对照组相比#P<0.05  ##P<0.01
实验结果如表12所示,可见生脉成骨胶囊高、低剂量组鼠耳廓肿胀程度与对照组相比,有显著降低(P<0.05或P<0.01),表明生脉成骨胶囊有抑制二甲苯致鼠耳廓肿胀作用.
(二)大鼠棉球肉芽肿实验
(1)实验材料
药物 生脉成骨胶囊;醋酸泼尼松,仙居制药股份有限公司,批号.950523.
动物SD大鼠60只,体重150-200g,由广东省卫生厅动物场提供,合格证号96A02.
(2)实验方法
大鼠随机分为5组,即对照组、醋酸泼尼松组和三个生脉成骨胶囊剂量组(剂量见表13),每组12只.在戊巴比妥纳麻醉下,无菌操作,在鼠背中线做一切口,将已灭菌的棉球植入背部,缝合.用药组木前3天开始灌胃给药,木后再灌胃给药7天,第八天将大鼠剪头处死,剥离并取出棉球肉芽组织,于60-90℃烘箱内干燥1小时后称重,减去原棉球重量,即为肉芽肿净重.比较各组的肉芽肿重量,做统计字处理.
(3)实验结果
表13 生脉成骨胶囊对大鼠棉球肉芽肿作用的影响(x±s)
Figure C0080909600221
注 与对照组相比  #P<0.05 ##P<0.01  ###P<0.001
实验结果如表13所示,可见与对照组比较,醋酸泼尼松组、生脉成骨胶囊各剂量组肉芽肿净重(P<0.05、P<0.01或P<0.01),表明生脉成骨胶囊有抑制肉芽肿的作用.
实施例10 木豆叶胶囊的增强免疫功能作用实验
(一)非特异性免疫功能实验
1.实验材料
药物  生脉成骨胶囊;左旋咪唑,由广东石岐制药厂提供,批号  950406,醋酸泼尼松,由仙居制药股份有限公司提供,批号  950523
动物 NIH小鼠65只,体重18-22g,雌雄各半,由广东省卫生厅动物场提供,合格证号96A03.
2.实验方法
小鼠动物随机分为六组,即对照组、模型组  左旋咪唑组、三个生脉成骨胶囊剂量组(剂量见表14)  其中模型组、左旋咪唑组和三个生脉成骨胶囊组用0.3%醋酸泼尼松灌胃0.2ml/10g六天,同时以不同药物灌胃20天,而对照组用蒸馏水灌胃.在第20天时给药后于30分钟,尾静脉注入中华墨汁0.01ml/10g后于2、12分钟眼眶取血10ul放入0.1%Na2CO3溶液3ml摇匀,置722光栅光度计(λ=620)比色,测定光密度(OD),按下式计算吞噬指数K及吞噬指数α
K = log OD 1 - log OD 2 T 1 - T 2 X = W WLS K 3
式中OD为不同时间所取血样的光密度,T2-T1为取两血样本的时间差,W为体重,WLS为肝脾合重,结果做统计学处理.最后将动物脱颈处死,分别称取脾、胸腺重量.按免疫器官重量法测定各鼠免疫器官重量,对计算免疫器官指数结果做统计学处理。
3.实验结果
表14 生脉成骨胶囊对小鼠单核吞噬细胞功能的影响(x±s)
表14为木豆叶胶囊对小鼠单核吞噬细胞功能的影响,可见模型组K与对照组相比有显著降低(P<0.01),生脉成骨胶囊各剂量组的α和K有增高趋势.
表15 生脉成骨胶囊对小鼠免疫器官的影响(x±s)
表15是木豆叶胶囊对小鼠免疫器官的影响,可见生脉成骨胶囊高、中两个剂量组均可显著增加其免疫器官胸腺,脾脏的重量(P<0.01或P<0.001).说明生脉成骨胶囊可提高小鼠的非特异性免疫功能,有对抗免疫功能低下的作用.
(二)小鼠溶血素含量实验
1.实验材料
药物  生脉成骨胶囊,左旋咪唑,由广东石岐制药厂提供,批号  950406,醋酸泼尼松,由仙居制药股份有限公司提供,批号  950523,5%生理盐水鸡红细胞混悬液、10%补体(生理盐水.鼠血清=3∶2).
动物 NIH小鼠60只,体重18-22g,雌雄各半,由广东省卫生厅动物场提供,合格证号96A03.
2.实验方法
动物给药与分组与前述非特异性免疫功能实验相同,于给药第一天腹腔注射5%鸡红细胞0.2ml/只,免疫后7天,眼球取血,离心,取血清用生理盐水稀释100倍,取稀释血清1ml,与5%鸡红细胞悬液0.5ml和10%补体0.5ml混合,在37℃恒温箱中保温30分钟后,0℃冰箱中中止反应.
对配成的实验液施行离心操作,取上清液置722光栅光度计(λ=620)比色,测定光密度(OD),另设不加血清的对照组,取其上清液注入作为比色时调“0”的基础,以OD续数作为判定血清溶血素的指标,结果做统计学处理.
3.实验结果
表16 生脉成骨胶囊对鸡红细胞作免疫原的小鼠溶血素含量影响(x±s)
Figure C0080909600251
实验结果如表16所示,可见模型组与对照组比较,OD值有显著降低(P<0.001),表明醋酸泼尼松能显著降低小鼠用鸡红细胞作免疫原的溶血素含量.生脉成骨胶囊中、低剂量组与模型组相比,OD有显著降低(P<0.05或P<0.01).表明生脉成骨胶囊可显著增加醋酸泼尼松致免疫功能低下时鸡红细胞作免疫原的小鼠溶血素的含量,具有提高体液免疫,对抗免疫抑制的作用.
(三)细胞免疫实验
1.实验材料
药物  生脉成骨胶囊,左旋咪唑,由广东石岐制药厂提供,批号  950406,PHA(植物血凝素)暨南大学生物系提供,批号·960611,5%生理盐水鸡红细胞混悬液、10%补体(生理盐水  鼠血清=3∶2).
动物 NIH小鼠60只,体重18-22g,雌雄各半,由厂东省卫生厅动物场提供,合格证号96A03.
2.实验方法
小鼠随机分为6组,即对照组、模型组、左旋咪唑组和三个生脉成骨胶囊剂量组(剂量见表17).灌胃给药,每天一次,连续7天.末次给药后,所有动物均腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0.2ml进行免疫,并且给予PHA 0.025ml/10g腹腔注射,连续三天(PHA 1支+生理盐水0.7ml),除对照组外,其他组每天灌服醋酸泼尼松3g/kg,连续7天,末次给药后12小时按鸡红细胞作免疫原的溶血素测定法进行实验.
3.实验结果
表17 生脉成骨胶囊对小鼠淋巴细胞转化反应的影响(x±s)
实验结果如表17所示,可见模型组的过渡态细胞和淋巴细胞转化率与正常对照组相比有显著降低(P<0.01或P<0.001),模型组的淋巴母细胞与对照组比较有降低趋势;生脉成骨胶囊三个剂量组和左旋咪唑组淋巴母细胞和淋巴细胞转化率与模型组相比,有显著提高(P<0.001),生脉成骨胶囊高、低剂量组和左旋咪唑组的过渡态细胞与模型组相比有显著提高(P<0.05),表明生脉成骨胶囊有提高小鼠细胞免疫功能的作用.
实验例11 木豆叶药材及提取物对褥疮合作作用的临床研究
1.药物
木豆叶药材及其提取物,生肌膏,其由氧化锌、冰片、黄丹、石碳酸、凡士林、硼酸等物组成,是广州中医药大学第一附属医院骨科与外科治疗创面感染30余年的经验方.
2.纳入标准
2.1褥疮的分期标准  依据全国中等卫生学校试用教材《基础护理学》中有关褥疮的分期标准与判断标准.
第一期即瘀血红润期  局部皮肤受压后,出现暂时的血液循环障碍(反应性瘀血)表现为红、肿、热、痛.
第二期为炎性浸润期,局部红肿部分向外浸润、扩大、变影,皮肤转为紫黑色,常在表皮有水泡形成,患者有疼痛感。
第三期即浅度溃疡期  水泡破溃,局部感染,浅层组织坏死,溃疡形成.
第四期即坏死溃疡期  坏死组织侵入真皮下层和肌肉层,露出韧带,脓液较多,坏死组织呈黑色,有臭味,可脱落,感染向周围和深层组织扩展,可达骨骼,严重者甚至引起脓血症.
2.2褥疮的计算方法标准 (1)面积  按照平面几何图形的面积计算方法计算.(2)褥疮愈合时间指数 褥疮愈合时间指数-(褥疮面积×褥疮期数)/褥疮愈合天数.
2.3疗效判定标准 (1)愈合时间  从开始用药到创面完全愈合的天数.(2)愈合标准 上皮覆盖创面,创面完全自失为愈合。
2.4病例选择的纳入标准 (1)病种 只选择颅脑损伤、下肢骨折、脊柱损伤合并截瘫的褥疮患者.(2)部位  只统一选取骶尾部褥疮的病例.(3)褥疮分期的选择标准 符合(1)、(2)标准,褥疮为II期以上者.(4)年龄和性别符合(1)(2)(3)标准者,任何年龄、性别均可.
2.5病例的排除标准  烧伤感染溃疡或痛疽、疖肿病例,以及结核、痔疮溃疡等引起的骶尾部感染病例排除在外.
3.治疗方法
3.1清创 按褥疮的伤口情况进行清创,常规消毒后,消除全部坏死无活力的软组织及死骨,直到软组织或骨面渗血为止,用双氧水或优琐、生理盐水冲洗伤口.
3.2换药 在清创后的创面上,用生肌膏或木豆叶药材及其提取物,余布整个伤口,每天换药一次,每次换药必须按换药常规洗净旧药,敷上新药.创面开始长出上皮后,均改为每3-4天换药一次.
4.两组患者的一般情况
4.1木豆叶药材及其提取物组  男34例,女16例,年龄19-86岁,褥疮面积最大者为19cm×12cm(IV期),最小者为2cm×1cm(II期),平均面积为17.5cm2.
4.2生肌膏组男22例,女17例,年龄19-90岁,褥疮面积最大者为8cm×7cm(IV期),最小者为2cm×1cm(II期),平均面积为9.9cm2.
5.结果
5.1两组褥疮愈合时间对照
结果如表18所示,可见木豆叶药材及其提取物组对于褥疮的愈合时间比生肌膏组短14天(P<0.01).差别有显著性意义.
表18 两组褥疮愈合时间对照表(X±S)
5.2褥疮分期愈合时间(天数)比较
结果如表19所示,可见两组褥疮分期的治疗愈合时间差别不显著,提示疗效相近。
表19 两组中期到褥疮愈合时间比较表(X±S)
Figure C0080909600282
P<0.05   P<0.001  P<0.01
5.3褥疮愈合时间指数对比
表20 两组褥疮愈合时间指数对比(X±S)
P<0.01  P<0.01  P<0.01  P<0.01
计算愈合时间作为对比,是衡量比较药物功效的较为科学和准确可靠的方法,指数越高,说明功效越好,指数越低,功效越差.两组褥疮愈合时间指数的对比情况如表20所示,可见木豆叶药材及其提取物对褥疮的治疗作用确切、优异.
临床上观察到当褥疮处的骨质裸露时,使用木豆叶药材及提取后可在裸露骨质表面出现数个小点血管翳,继而生长成肉芽,与周围向中央生长的肉芽连成一片,形成肉芽组织而覆盖创面.而生肌膏则未能观察到这一现象,其肉芽组织只从四周向中央慢慢爬行  很难覆盖裸露的骨面,须改用其他提取物的抑菌作用.可见使用木豆叶药材及其提取物的病例,褥疮创面肉芽出现快,能够迅速覆盖创面,分泌物少  同时木豆叶药材及其提取物经体外抑菌实验证实对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果,其作用相当于庆大毒素(平面纸片法),动物实验也证实该药对于急性、亚急性、慢性炎症模型均有抑菌作用.我们在临床应用该药过程中,一直没有发现该药有毒副作用,患者反映良好。
实验例12  木豆叶药材及其提取物对治疗开放性骨折感染创面的作用的临床研究
1.临床资料
病例18个,年龄从14岁到70岁,病因有6例由于创伤引起,7例创伤后行内固定木后,3例创伤引起截肢,2例由于坏疽截肢木后.其中并胫腓骨下1/3骨折8例,胫腓骨上1/3骨折3例,股骨下1/3骨折2例.
2.治疗方法
所有病例创面局部仅用木豆叶药材及提取物外敷治疗,浓度为1  2(即木豆叶药材及提取物加注射用蒸馏水配制成的浓度为1∶2的溶液),PH值为5.3,消毒后瓶装备用.按无菌要求换药,将浸泡过药液的纱块浸湿创面,外以凡士林油纱及无菌敷料覆盖、包扎,创面感染明显时,每日给药一次,肉芽组织出现,创面渗出物减少时,每日给药一到两次  当创面被新鲜肉芽组织完全覆盖后,改用庆大雾素生理盐水混合液湿敷,三天后中厚皮片游离植皮,木后三天,继续中药湿敷,直至创面愈合.
3.观察内容
在用药前与用药后的不同时间进行创面动态彩色摄像,观察创面感染变化,将创面分泌物做细菌培养及药敏实验,观察上皮肉芽组织、肉芽岛出现时间、演变规律、生长情况及创面愈合时间.对创面肉芽做组织学检查.
4.结果
临床中15例创面在3天内感染得到控制,3例因创面感染时间较长,且伴有骨感染、骨坏死,需将死骨摘除后感染方能控制.用药后渗出物很快减少,创面肉芽组织在用药后2-5天出现,呈鲜红色,触之易出血,到四周即可覆盖创面.
5.结论
木豆叶药材及提取物对临床感染创面具有较好的抗感染能力,能促进肉芽组织生长,增加创面血液供应,促进创面愈合的作用,尢其能在裸露于创面的骨面上生长出肉芽组织-“骨肉芽岛”.
实验例13 木豆叶药材及提取物对开放性感染创面的愈合作用
1.木豆叶药材及提取物对开放性感染创面愈合的影响
1.1实验材料
木豆叶药材及提取物,浓度为1  2(即木豆叶药材及提取物加注射用蒸馏水配制成的浓度为1·2的溶液),PH值为5.3,消毒后瓶装备用.
建立家兔双前肢感染创面的模型  健康家兔19只,雌雄不分,体重2-2.8kg.分三批手木建立双前肢开放性创伤面模型,随后接种细菌.通过预实验证实在创面接种细菌后72小时创面感染达高峰.
1.2药物应用
创面感染达到高峰后外用上药,第一周每日给药两次,第2周至创面基本愈合时每日给药一次,创面基本愈合到完全愈合,每隔三日换药一次;每次换药保证药量一致.以呋喃西林为对照组.
1.3指标的观察与评定方法
测量时点为创面形成后、创面用药前、用药后每三天一次,测量方法采用创面周沿描绘法,通过对创面面积随时间变化的曲线图以及各组各时点的面积数值进行统计学处理,并对创面上皮与肉芽组织以及疤痕组织进行肉眼观察与光镜检查;进行创面愈合时间的测定.
1.4实验结果
木豆叶药材及提取物对创面的修复作用在用药第9天后较对照明显占优,最终愈合时间较对照组提前一周左右,其差异有显著性意义(p<0.05).
1.5实验结论
本豆叶药材及提取物具有促进创面上皮肉芽组织生长,增加创面血液供应,加速创面愈合,减少疤痕组织形成,提高愈合质量等作用.
2.木豆叶药材及提取物对开放性感染创面的抗感染能力
2.1实验材料
木豆叶药材及提取物,浓度为1∶2(即木豆叶药材及提取物加注射用蒸馏水配制成的浓度为1∶2的溶液),PH值为5.3,消毒后瓶装备用.
建立家兔双前肢感染创面的模型  健康家兔6只,雌雄不分,体重2.5-3kg.分三批手木建立双前肢开放性创伤面模型,随后接种细菌,病菌浓度增加到9亿个细菌/ml.通过预实验证实在创面接种细菌后36小时创面感染达到高峰.
2.2药物应用
创面感染达到高峰后外用上药,每日给药两次(上午八时,下午四时各一次),以生理盐水为对照组.
2.3观察内容
在用药前与用药的不同时间进行创面动态彩色摄像,观察创面感染变化;观察创面周围红晕环范围大小及颜色变化,了解创面无血情况,观察周围肿胀程度及创面分泌物数量的变化情况,以了解创面的渗出情况.
2.4实验结果
木豆叶药材及提取物对创面的修复作用在用药第9天后较对照组明显占优,最终愈合时间较对照组提前一周左右,其差异有显著性意义(p<0.05).
2.5实验结论
木豆叶药材及提取物对感染创面有较好的抗感染能力,反映在创面及炎症反应消退快,尢其是用药后创面渗出很快减少,创面干净,提示该药有较好的抗炎性渗出的作用.
实验例14  木豆叶药材及提取物应用于感染创面564例疗效观察
1.临床资料
将木豆叶药材及其提取物6年多来临床应用于外伤创面、感染创面、烧伤感染、褥疮等病种,对564例病例的疗效进行观察.
2.实验方法
感染创面分泌物细菌培养、多使用绿脓杆变形杆菌、大肠杆菌  白色葡萄球菌全黄色葡萄球菌、少数枯草杆菌、产气杆菌.感染创面经用木豆叶药材及提取物外敷3-5天后,分泌物、臭味减少,腐烂组织较快祛除,逐步呈现出鲜红的肉芽创面,较大创面经敷药2周,基本可以植皮  暴露骨骼,经敷药后见哈佛氏系统生长肉芽岛,逐渐复盖骨面,肌腱部位一定要用药液保持显润,以免坏死.
3.常用制剂
(1)木豆鲜叶洗净经1‰新洁尔灭浸泡20分钟,晾干后捣烂,直接敷于创面,或是在创面上敷一层纱布,然后将药敷在纱布外,药液可以透过纱布作用于创面,外加敷料包扎.(2)用200‰的木豆叶药材及提取物浓缩剂,湿敷创面,二者相比前者疗效较好.(3)用叶煮水浸泡创面30分钟左右.
4.结果
(1)临床观察木豆叶药材及提取物对于感染创面有去腐生肌的作用,一般外敷3-5天,较大创面外敷1-2周,分泌物即明显减少,臭味很快地消除,疗效较满意.
(2)外敷木豆叶药材及提取物后生长的肉芽呈鲜红色,很少有水肿,较优琐(Eusol)液、1‰腐植酸钠液、生理盐水等外敷后所产生的肉芽更为鲜红而旺盛,鲜叶较煮出液效果更好,因此认为木豆叶药材及提取物不但有杀菌、抑菌的作用,而且有消炎的作用,可能还有一种促进细胞生长的营养因素.烧伤点状植皮后的感染创面用木豆叶药材及提取物湿敷后不但可以控制感染,而且可以看到所植皮片的生长速度较未用该药部位的皮片生长速度为快。
(3)烧伤创面的痂下感染,或植皮以后引起的感染,处理上比较困难,尤其是植皮后有绿脓杆菌感染,我们使用200%木豆叶药材及提取物湿敷半暴露,效果比用抗生素湿敷更好,不会有由于抗菌素引起抗药性的顾虑.
工业应用性
木豆叶是南方亚热带地区种植的种豆类多年生植物,故其药源广泛,便于推广应用,且本发明提供的制备木豆叶提取物的方法简便易行.经动物试验和临床疗效观察证明,木豆叶及其提取物对股骨头缺血性坏死、骨质疏松症、改善血液流变学指标、抗炎镇痛  增强免疫功能、冠心病心绞痛、骨折、脑梗塞、褥疮、感染创面药物和开放性骨折感染创面等病症具有明显的疗效,药理作用强.木豆叶及其提取物作力药物活性成分可按照常规的制剂工艺制成如片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、口服液等各种临床制剂,具有良好的工业应用性.

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1. 一种木豆叶药材及其提取物在制备治疗冠心病心绞痛药物中的应用。
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