CN100403921C - 一种饲料添加剂及其生产工艺和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种能够改善禽畜舍内的环境，又能提高禽畜免疫力，提高禽畜受孕率、产仔率、成活率，提高饲料转化率，提高产量、降低死亡率，减少抗生素的使用，提高经济效益，提高肉蛋奶的品质，并可用于发酵青贮、黄贮饲料的饲料添加剂及其生产工艺和用途。本发明饲料添加剂，是由光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌、放线菌的发酵菌液按比例混合而成。
Description
技术领域
本发明属于饲料领域，具体涉及一种微生物饲料添加剂及其生产工艺和用途。
背景技术
我国生物饲料行业起步晚，与发达国家还相差很大的距离，饲料添加剂工业标准化体系不健全，质量参差不齐，各种微生物饲料添加剂中的添加的菌种单一，有些生物饲料添加剂使用过程繁锁，需要二次发酵。
本发明的生物饲料添加剂，技术水平已达到国际先进水平，是由多种有益活性微生物经过科学配比，共同复合而成，真正达到了多效性，有效活菌数远远超过国家标准。
本发明中的生物饲料添加剂使用效果更明显；使用更方便(直接饮水或拌料，节省劳动力)；作用更范围广(除饮水或常规的添加在饲料中外，还可用来发酵青贮饲料和黄贮饲料，大大增加了植物秸秆的利用率，解决人畜分粮的矛盾，同时减少了这些原料对环境所造成的污染)；用量少，成本低；
本发明中的生物饲料添加剂应用到环境的处理上，可以有效的消除环境异味；此种饲料添加剂，不含抗生素成分，对提高产品的品质有很大的作用，已通过中国有机产品认证。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够改善禽畜舍内的环境，又能提高禽畜免疫力，提高禽畜受孕率、产仔率、成活率，提高饲料转化率，提高产量、降低死亡率，减少抗生素的使用，提高经济效益，提高肉蛋奶的品质的饲料添加剂及其生产工艺和用途。
本发明公开了一种饲料添加剂，其特征在于，是由光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸杆菌、放线菌的发酵菌液按比例混合而成。优选地，各发酵菌液按体积计用量比例为：放线菌5％、光合细菌15％、芽孢杆菌15％、酵母菌25％、乳酸杆菌40％。
本发明还公开了所述饲料添加剂的生产工艺，包括步骤：
(1)分别将光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸杆菌、放线菌的母种接种于一级培养基进行培养，获得一级菌种；
(2)分别将光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸杆菌、放线菌的一级菌种接种于二级培养基进行培养，获得二级菌种；
(3)分别将光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸杆菌、放线菌的二级菌种接种于发酵培养基进行培养，获得发酵菌液；
(4)将各发酵菌液按比例混匀即得。
优选地，所述光合细菌为沼泽红假单孢菌(Rhodopseudomonaspalustris)；所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；所述酵母菌为啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；所述乳酸杆菌为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)；所述放线菌为泾阳链霉菌(Streptomyces jingyangesis)。
本发明所述生产工艺，优选地，其中步骤(2)、(3)光合细菌为间歇式通气培养；芽孢杆菌为通气培养；酵母菌为通气培养；乳酸杆菌为静置不通气培养；放线菌为通气培养。
本发明所述生产工艺(图1)详述如下：
各发酵菌液的生产：
光合细菌生产工艺：
一、培养基：
一级培养基：
MgSO4·7H2O 0.2g、(NH4)2SO41.0g、NaHCO35.0g、K2HPO40.5g、NaCl0.2g、蛋白胨1.5g。
其中(NH4)2SO4可以用NH4Cl代替，MgSO4可用0.25ml饱和MgCl2代替，配制时将各成分溶于400ml水中，用H3PO4和Na2CO3调PH，再加入水至1000ml，pH为7.1-7.2，115℃灭菌10分钟。
二级培养基：
醋酸钠3g、NaCl 0.1g、(NH4)2SO4 0.3g、MgSO4 0.2g、KH2PO3 0.5g、K2HPO3 0.3g、柠檬酸铁铵7ml、蛋白胨1.2g、水定容至1000ml。用H3PO4和Na2CO3调pH为7.1～7.2。
发酵培养基：
醋酸钠2.6g、NaCl 0.07g、(NH4)2SO4 0.25g、MgSO4 0.16g、KH2PO30.38g、K2HPO3 0.25g、柠檬酸铁铵5ml、蛋白胨1.0g、水定容至1000ml、用H3PO4和Na2CO3调pH为7.1～7.2。
发酵培养分两个阶段：
100L种子罐培养；2吨发酵罐培养。
二、接种
培养基配制好后，应立即进行接种。光合细菌生产性培养的接种量比较高，一般为20％～50％，即菌种量和新配培养量之比为1∶4(20％)～1∶1(50％)，且不应低于20％，尤其微气培养接种总量应高些，否则，光合细菌在培养液中很难占绝对优势。
三、生长所需环境条件
1、培养介质：蒸馏水
2、酸碱度，pH值在8～8.5为最好，光合细菌的适应pH范围在6-10之间。
3、温度，以28～36℃为最适生长温度。
4、光照强度，以3000～4000勒克斯(LX)为最佳，即每25公斤菌液需要用相当于60瓦左右的白炽灯作光源。
5、培养时间：7-10天
四、培养管理
1、搅拌或充气：光合细菌培养过程中必须搅拌或充气，其作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照，保持菌细胞的良好生长。摇瓶厌气培养是用人工摇动培养容器的方法使菌细胞上浮，可在接种前在培养容器中加入少量玻璃珠，摇动时易于搅起菌细胞；发酵罐培养时用搅拌轴进行搅拌，每天至少摇动或搅拌3次，定时进行。
2、调节光照度：培养光合细菌需要连续进行照明，因此在日常的管理工作中，应根据要求经常调整光照度。刚接入菌种时由于细菌密度低，光照强度调为3000lx，当中后期细菌生长繁殖快，菌细胞的密度高，光照强度应提高到4000lx。
3、调节温度：在光合细菌的培养过程中，能有效地将温度控制在最适宜的条件下，当然是最理想的。在培养过程中温度都控制在32-36℃。
4、酸碱度的测定和调整：为了延长光合细菌的指数生长期，提高培养基的利用率和单位水体的产量，测定和调整pH值是一项重要措施。一般采用加醋酸的办法降低菌液的酸碱度，在日常的管理工作中，必须每天测定菌液的pH值，当pH值上升超出8.5，即加酸调整至7.5。
5、测定光密度(O.D.)值：光密度值和细胞干重之间是近似线性关系，这种相关关系常用来测定培养物的浓度。首先根据测定的数据画出相关的标准曲线图，然后测定菌液的光密度值，即可根据标准曲线大致估算出菌细胞的浓度。光密度值常用分光光度计测定。在日常管理工作中，通过测定菌液的光密度，可以了解光合细菌的生长繁殖情况。
芽胞杆菌生产工艺：
一级培养基：
牛肉膏0.3％、蛋白胨1.0％、氯化钠0.5％、琼脂2.0％、蒸馏水1000ml，pH7.0-7.2。
或：牛肉膏1.0％、蛋白胨1.0％、氯化钠0.5％、琼脂2.0％、蒸馏水1000ml，pH7.0～7.2。
培养条件：30～32℃，23～25小时。
二级培养基：
同一级培养基。
250ml克氏瓶装65～70ml培养基，每一瓶斜面大小应一致。
培养条件：30-37℃，2～3天。
发酵培养基：
淀粉0.3％、蔗糖0.5％、30.8mg/Kg硫酸锰溶液0.2％、磷酸氢二钾0.3％、磷酸二氢钾0.15％、豆粕3.0％，水补足100％，pH7.0～7.5。
或：豆饼粉3.0％、玉米粉2.0％、麸皮3.0％、磷酸氢二钠0.4％、磷酸二氢钾0.03％、水补足100％，pH7.0～7.5。
发酵培养分两级进行
1、100L种子罐条件：按发酵培养基配料；消后体积59～61升；调整pH7.0～7.5；温度：34～37℃，通风比1∶0.3～0.5；培养周期14～16小时；
全程搅拌。
2、2吨发酵罐条件：按发酵培养基配料；消后体积1.3～1.4吨(立方米)；调pH7.0～7.5；温度：33～37℃，通风比1∶0.3～0.5，6-8小时后调整到0.6～0.8；全程搅拌，转速200rpm/min左右；培养周期：不超过26小时；发酵终点芽孢比例应达到95％以上。
酵母菌生产工艺
一级培养基：
a、PDA培养基：
马铃薯汁1000ml、葡萄糖20g、琼脂20g。
马铃薯浸汁的制法：500g马铃薯，去皮切块，用1000ml水，煮软；用纱布过滤，补足1000ml水。
b、麦芽汁培养基：12度波林(糖度单位)的麦芽汁1000ml，加15-20g琼脂，溶解后分装。
培养条件：温度29～30℃，时间2～3天。
二级培养基：酵母膏1％、蛋白胨2％、葡萄糖2％、硫酸镁0.06％、磷酸氢二钾0.25％、水补足100％，pH6.0～6.3。
培养条件：温度28～30℃，转速150～160rpm/min，培养周期24～28小时，终点pH6左右，接种量：200/1000。
发酵培养基：
葡萄糖3％、蛋白胨0.3％、硫酸镁0.04％、硫酸铵0.3％、磷酸氢二钾0.2％、水补足100％。
发酵培养分两级进行：
1、种子罐培养条件：消后pH6.8～7.0；培养温度28～30℃；全程搅拌；通风比1∶0.3～0.5，6～8小时后调整到0.6～0.8，转速200rpm/min左右，培养周期24～28小时，终点pH5.5左右。
2、2吨发酵罐培养条件：消后pH6.8～7.0；消后体积1.4吨左右；培养温度28～30℃；全程搅拌；通风比1∶0.3～0.5，6～8小时后调整到0.6～0.8，转速220rpm/min左右，培养周期30～36小时；终点pH4左右。
乳酸菌生产工艺：
一级培养基：
a、MRS培养基：蛋白胨10.0g、牛肉浸膏10.0g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖10.0g、吐温-801.0g、磷酸氢二钾2.0g、醋酸钠5.0g、柠檬酸三钠2.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g、琼脂20g、蒸馏水补足1000ml、pH7.5。
b、脱脂乳培养基：脱脂乳粉11.0g、酵母浸膏0.2g、琼脂2g、蒸馏水补足100ml，用前加0.27g L-半胱氨酸盐酸盐(也可不加)。
培养条件：温度38～40℃，周期1～2天。
二级培养基：
蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、吐温-801g、磷酸氢二钾2g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、硫酸镁0.2g、硫酸猛0.05g、蒸馏水补足1000ml、pH6.5～6.8。
培养条件：温度38～40℃，不通气静置培养，周期24～36小时，接种量：200/1000。
发酵培养基：
蛋白胨8.8g、牛肉浸膏7.2g、酵母浸膏4.1g、葡萄糖12g、吐温-801.0g、磷酸氢二钾1.6g、醋酸钠3.8g、柠檬酸三钠1.1g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.04g、水1000ml、pH7.3～7.5。
发酵培养分两级进行：
1、种子罐培养条件：培养温度38～40℃，消后pH6.8-7.0，不通气静置培养，周期18～22小时。
2、2吨发酵罐培养条件：培养温度37～40℃，消后pH6.8-7.0，消后体积1.4吨左右，不通气静置培养，周期10-15小时，终点pH4.0以下。
放线菌生产工艺：
一级培养基：
高氏一号合成培养基：硝酸钾1g、可溶性淀粉20g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸镁0.5g、氯化钠0.5g、硫酸亚铁0.01g、琼脂20g、蒸馏水补足1000ml、pH7.2～7.4。
培养条件：27～29℃，5～7天。
也可用PDA培养基。
二级培养基：硝酸钾0.8g、可溶性淀粉8g、葡萄糖5g、酵母汁5g、磷酸氢二钾0.3g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.4g、硫酸亚铁0.05g、水补足1000ml、pH7.2～7.4。
培养条件：27～29℃，150～160rpm/min，4～5天。
发酵培养基：葡萄糖1％、酵母汁1％、磷酸氢二钾0.015％、氯化钠0.02％、硫酸亚铁0.003％、水补足100％、pH7.2～7.5。
发酵培养分两级进行：
1、种子罐培养条件：27～30℃，160～170rpm/min，通风比1∶0.3～0.5，6～8小时后调整到0.6～0.8，5～6天。
2、2吨发酵罐培养条件：27～30℃，160～180rpm/min、通风比1∶0.3～0.5，6～8小时后调整到0.6～0.8，5～8天。
混合成品：
1、将五种发酵好的菌液分别进行取样检验，如合格后按比例打入储液罐。(混合比例为：放线菌5％；光合细菌15％；芽孢杆菌15％；酵母菌25％；乳酸杆菌40％)
2、将储液罐的菌液混合均匀后进行取样检验，如合格即为成品。
本发明进一步公开了所述饲料添加剂在改善禽畜饲养中巢舍环境中的应用。
环境处理：圈舍在投放禽畜前3天用300倍菌液喷洒一次，之后每隔10-15天用500倍菌液喷洒一次(注：浓度倍数以本发明饲料添加剂菌液来计算，菌液即指本发明饲料添加剂)。
本发明还公开了所述饲料添加剂的应用，其特征在于，禽畜食用干料时，在饮水时按比例加入所述饲料添加剂；禽畜食用潮拌料时，按比例在饲料中加入所述饲料添加剂搅拌均匀即可。
优选地，如果禽畜食用的是干料，只需在饮水时加入稀释的菌液：开始1-3天，用300倍的饮水，之后用1000倍的饮水(注：浓度倍数以菌液来计算)；如果禽畜食用的是潮拌料，只需在饲料中加入菌液搅拌均匀即可，比例同上。
本发明所述饲料添加剂有益效果体现在如下几个方面：
一、改善禽畜舍内的环境
环境污染是现代化养殖业遇到的一大难题，禽畜舍里的臭气可以引发多种疾病，直接威胁着禽畜的健康。采用本发明饲料添加剂生物技术，可以将形成恶臭的氨、硫化氢、甲基硫醇、三甲胺等物质分解还原，从而解决了这一难题。
二、提高免役力，有效预防各种疾病的发生，提高受孕率、产仔率、成活率
采用本发明微生物饲料添加剂技术喂养的禽畜，可以使有益的活性微生物在动物的肠道内形成良性的微生物群落，从而抑制有害病菌的滋生，对动物胃肠道具有明显的调理功能，提高动物的免疫能力，从而达到预防疾病，(如：猪的综合并发症，鸡的各种肠道疾病，牛的乳房炎及牛蹄病等)。
三、提高饲料转化率、降低料肉比、料蛋比，降低成本
本发明微生物饲料添加剂有很强的分解能力，可以有效的分解饲料中的有效养分，提高蛋白质利用率，可以进一步的提高饲料的转化率，同时产生动物未知生长因子，有利动物较快生长，使肉料、蛋料比、奶料比明显提高，从而降低成本。
四、提高产量、降低死亡率，降低蛋破损率
五、减少抗生素的使用，提高经济效益，提高肉蛋奶的品质
用本发明微生物饲料添加剂饲养，大大降低抗生素类药物的使用量，使生产出来的产品无毒、无药物残留、无激素、提高产品的品质，完全符合有机产品的要求。
六、除直接饮水或常规添加在饲料中外，还可用来发酵青贮饲料和黄贮饲料，大大增加了植物秸秆的利用率，解决人畜分粮的矛盾，同时减少了这些原料对环境所造成的污染。
青贮、黄贮饲料气味芬香，柔软多汁，适口性好等特点，成为牛羊等草食家畜优质粗饲料之一，并可收到提高采食量，增加产奶量，改善膘情的良好效果。
附图说明
图1：微生物菌液生产工艺流程图。
图2：奶牛示范产奶量对比图。
具体实施方式
实施例1：
各发酵菌液的生产：
1、将光合细菌沼泽红假单孢菌(Rhodopseudomonas palustris)母种接种于一级培养基(MgSO4·7H2O 0.2g、(NH4)2SO4 1.0g、NaHCO35.0g、K2HPO4 0.5g、NaCl 0.2g、蛋白胨1.5g；将各成分溶于400ml蒸馏水中，用H3PO4和Na2CO3调pH7.1，再加入蒸馏水至1000ml，115℃灭菌10分钟。)上，在温度30℃，光照强度3000勒克斯条件下培养时间7天，得到一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(醋酸钠3g、NaCl 0.1g、(NH4)2SO40.3g、MgSO4 0.2g、KH2PO3 0.5g、K2HPO3 0.3g、柠檬酸铁铵7ml、蛋白胨1.2g、蒸馏水定容至1000ml，用H3PO4和Na2CO3调pH为7.2。)上，接种前在培养容器中加入少量玻璃珠，在温度30℃，光照强度4000勒克斯条件下培养8天，人工摇动培养容器使菌细胞上浮，每天摇动3次，培养期间调节pH7.5，得到二级菌种；
将二级菌种接种于100L种子罐，种子罐中培养基为发酵培养基(醋酸钠2.6g、NaCl 0.07g、(NH4)2SO4 0.25g、MgSO4 0.16g、KH2PO30.38g、K2HPO3 0.25g、柠檬酸铁铵5ml、蛋白胨1.0g、水定容至1000ml、用H3PO4和Na2CO3调pH为7.1～7.2。)，接种量25％，即菌种量和新配培养基量之比为1∶3，培养条件：温度28℃，光照强度3000勒克斯条件下培养时间7天，培养时用搅拌桨进行搅拌，每天搅拌4次，定时进行，培养期间调节pH8.5以下；
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)，接种量为20％，即菌种量和新配培养基量之比为1∶4，培养条件：温度30℃，光照强度4000勒克斯条件下培养8天，培养时用搅拌桨进行搅拌，每天搅拌5次，定时进行，培养期间调节pH值在8.5以下。
2、将芽胞杆菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )母种接种于一级培养基(牛肉膏0.3％、蛋白胨1.0％、氯化钠0.5％、蒸馏水1000ml，pH7.0。)，培养条件：30℃，23小时，获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(牛肉膏1.0％、蛋白胨1.0％、氯化钠0.5％、琼脂2.0％、蒸馏水1000ml，pH7.0。)，250ml克氏瓶装70ml培养基，每一瓶斜面大小应一致。培养条件：温度30℃，2天，获得二级菌种；
将二级菌种接种于100L种子罐：按发酵培养基配料(淀粉0.3％、蔗糖0.5％、30.8mg/Kg硫酸锰溶液0.2％、磷酸氢二钾0.3％、磷酸二氢钾0.15％、豆粕3.0％，水补足100％，pH7.0。)；消后体积59升；通风比1∶0.5，温度：37℃，周期超过14小时，全程搅拌。
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐：按发酵培养基配料(豆饼粉3.0％、玉米粉2.0％、麸皮3.0％、磷酸氢二钠0.4％、磷酸二氢钾0.03％、水补足100％，pH7.0)；消后体积1.4吨(立方米)；通风比1∶0.3，6小时后调整到0.6；全程搅拌，转速200rpm/min左右；培养周期26小时；发酵终点芽孢比例达到95％。
3、将酵母菌啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Meyen etHansen )的母种接种于一级培养基(PDA培养基：马铃薯汁1000ml、葡萄糖20g、琼脂20g。)，培养条件：温度29℃，时间2天，获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(酵母膏1％、蛋白胨2％、葡萄糖2％、硫酸镁0.06％、磷酸氢二钾0.25％、水补足100％，pH6.0)，培养条件：温度28℃，转速150rpm/min，培养周期24小时，终点pH6左右，接种量：200/1000，获得二级菌种；
将二级菌种接种于种子罐内装发酵培养基(葡萄糖3％、蛋白胨0.3％、硫酸镁0.04％、硫酸铵0.3％、磷酸氢二钾0.2％、水补足100％。)，培养条件：消后pH6.8；培养温度28℃；全程搅拌；通风比1∶0.5，8小时后调整到0.6，转速200rpm/min左右，培养周期24小时，终点pH5.5左右。
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)培养条件：消后pH6.8；消后体积1.4吨；培养温度28℃；全程搅拌；通风比1∶0.3，6小时后调整到0.6，转速220rpm/min左右，培养周期30小时；终点pH4左右。
4、将乳酸菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的母种接种于一级培养基(MRS培养基：蛋白胨10.0g、牛肉浸膏10.0g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖10.0g、吐温-801.0g、磷酸氢二钾2.0g、醋酸钠5.0g、柠檬酸三钠2.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g、琼脂20g、蒸馏水补足1000ml、pH7.5。)，培养条件：温度38℃，周期1天，获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、吐温-801g、磷酸氢二钾2g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、硫酸镁0.2g、硫酸猛0.05g、蒸馏水补足1000ml、pH6.5。)培养条件：温度38℃，不通气静置培养，周期24小时，接种量：200/1000，获得二级菌种；
将二级菌种接种于内装发酵培养基(蛋白胨8.8g、牛肉浸膏7.2g、酵母浸膏4.1g、葡萄糖12g、吐温-801.0g、磷酸氢二钾1.6g、醋酸钠3.8g、柠檬酸三钠1.1g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.04g、水1000ml、pH7.3。)的种子罐，培养条件：培养温度38℃，消后pH6.8，不通气静置培养，周期18小时；
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)，培养条件：培养温度37℃，消后pH6.8，消后体积1.4吨，不通气静置培养，周期10小时，终点pH4.0以下。
5、将放线菌泾阳链霉菌(Streptomyces jingyangesis)的母种接种于一级培养基(高氏一号合成培养基：硝酸钾1克，可溶性淀粉20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.5克，氯化钠0.5克，硫酸亚铁0.01克，琼脂20克，蒸馏水补足1000ml，pH7.2～7.4。)，培养条件：27℃，5天。获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(硝酸钾0.8克，可溶性淀粉8克，葡萄糖5克，酵母汁5克，磷酸氢二钾0.3克，硫酸镁0.2克，氯化钠0.4克，硫酸亚铁0.05克，水补足1000ml，pH7.2～7.4。)培养条件27℃，150rpm/min，4天，获得二级菌种；
将二级菌种接种于内装发酵培养基(葡萄糖1％，酵母汁1％，磷酸氢二钾0.015％，氯化钠0.02％，硫酸亚铁0.003％，水补足100％，pH7.2～7.5。)的种子罐，培养条件：消后pH6.8，27℃，160rpm/min，通风比1∶0.3，6小时后调整到0.6，5天。
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)，培养条件：消后pH6.8，27℃，160rpm/min，通风比1∶0.3，6小时后调整到0.6，5天。
混合成品：
1、将五种发酵好的菌液分别进行取样检验，如合格后按比例打入储液罐。(混合比例为：放线菌5％；光合细菌15％；芽孢杆菌15％；酵母菌25％；乳酸杆菌40％)
2、将储液罐的菌液混合均匀后进行取样检验，如合格即为成品。
实施例2：
各发酵菌液的生产：
1、将光合细菌沼泽红假单孢菌(Rhodopseudomonas palustris)母种接种于一级培养基(MgSO4·7H2O 0.2g、(NH4)2SO4 1.0g、NaHCO35.0g、K2HPO4 0.5g、NaCl 0.2g、蛋白胨1.5g；将各成分溶于400ml蒸馏水中，用H3PO4和Na2CO3调pH7.2，再加入蒸馏水至1000ml，115℃灭菌10分钟。)上，在温度34℃，光照强度3000勒克斯条件下培养时间7天，得到一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(醋酸钠3g、NaCl 0.1g、(NH4)2SO40.3g、MgSO40.2g、KH2PO3 0.5g、K2HPO3 0.3g、柠檬酸铁铵7ml、蛋白胨1.2g、蒸馏水定容至1000ml，用H3PO4和Na2CO3调pH为7.2。)上，接种前在培养容器中加入少量玻璃珠，在温度34℃，光照强度4000勒克斯条件下培养10天，人工摇动培养容器使菌细胞上浮，每天摇动3次，培养期间调节pH8.2，得到二级菌种；
将二级菌种接种于100L种子罐，种子罐中培养基为发酵培养基(醋酸钠2.6g、NaCl 0.07g、(NH4)2SO4 0.25g、MgSO4 0.16g、KH2PO30.38g、K2HPO3 0.25g、柠檬酸铁铵5ml、蛋白胨1.0g、水定容至1000ml、用H3PO4和Na2CO3调pH为7.1～7.2。)，接种量25％，即菌种量和新配培养基量之比为1∶3，培养条件：温度32℃，光照强度3000勒克斯条件下培养时间7天，培养时用搅拌桨进行搅拌，每天搅拌4次，定时进行，培养期间调节pH8.5以下；
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)，接种量为20％，即菌种量和新配培养基量之比为1∶4，培养条件：温度36℃，光照强度4000勒克斯条件下培养10天，培养时用搅拌桨进行搅拌，每天搅拌5次，定时进行，培养期间调节pH值在8.5以下。
2、将芽胞杆菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)母种接种于一级培养基(牛肉膏0.3％、蛋白胨1.0％、氯化钠0.5％、蒸馏水1000ml，pH7.2。)，培养条件：32℃，25小时，获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(牛肉膏1.0％、蛋白胨1.0％、氯化钠0.5％、琼脂2.0％、蒸馏水1000ml，pH7.2。)，250ml克氏瓶装70ml培养基，每一瓶斜面大小应一致。培养条件：温度37℃，3天，获得二级菌种；
将二级菌种接种于100L种子罐：按发酵培养基配料(淀粉0.3％、蔗糖0.5％、30.8mg/Kg硫酸锰溶液0.2％、磷酸氢二钾0.3％、磷酸二氢钾0.15％、豆粕3.0％，水补足100％，pH7.5。)；消后体积61升；通风比1∶0.5，温度：37℃，周期超过16小时，全程搅拌。
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐：按发酵培养基配料(豆饼粉3.0％、玉米粉2.0％、麸皮3.0％、磷酸氢二钠0.4％、磷酸二氢钾0.03％、水补足100％，pH7.5)；消后体积1.4吨(立方米)；通风比1∶0.3，6小时后调整到0.6；全程搅拌，转速200rpm/min左右；培养周期26小时；发酵终点芽孢比例达到95％。
3、将酵母菌啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Meyen etHansen)的母种接种于一级培养基(PDA培养基：马铃薯汁1000ml、葡萄糖20g、琼脂20g。)，培养条件：温度30℃，时间3天，获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(酵母膏1％、蛋白胨2％、葡萄糖2％、硫酸镁0.06％、磷酸氢二钾0.25％、水补足100％，pH6.3)，培养条件：温度30℃，转速160rpm/min，培养周期28小时，终点pH6左右，接种量：200/1000，获得二级菌种；
将二级菌种接种于种子罐内装发酵培养基(葡萄糖3％、蛋白胨0.3％、硫酸镁0.04％、硫酸铵0.3％、磷酸氢二钾0.2％、水补足100％。)，培养条件：消后pH7.0；培养温度30℃；全程搅拌；通风比1∶0.5，8小时后调整到0.8，转速200rpm/min左右，培养周期28小时，终点pH5.5左右。
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)培养条件：消后pH7.0；消后体积1.4吨；培养温度30℃；全程搅拌；通风比1∶0.3，6小时后调整到0.8，转速220rpm/min左右，培养周期36小时；终点pH4左右。
4、将乳酸菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的母种接种于一级培养基(MRS培养基：蛋白胨10.0g、牛肉浸膏10.0g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖10.0g、吐温-801.0g、磷酸氢二钾2.0g、醋酸钠5.0g、柠檬酸三钠2.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g、琼脂20g、蒸馏水补足1000ml、pH7.5。)，培养条件：温度40℃，周期2天，获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、吐温-801g、磷酸氢二钾2g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、硫酸镁0.2g、硫酸猛0.05g、蒸馏水补足1000ml、pH6.8。)培养条件：温度40℃，不通气静置培养，周期36小时，接种量：200/1000，获得二级菌种；
将二级菌种接种于内装发酵培养基(蛋白胨8.8g、牛肉浸膏7.2g、酵母浸膏4.1g、葡萄糖12g、吐温-801.0g、磷酸氢二钾1.6g、醋酸钠3.8g、柠檬酸三钠1.1g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.04g、水1000ml、pH7.3～7.5。)的种子罐，培养条件：培养温度40℃，消后pH7.0，不通气静置培养，周期22小时；
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)，培养条件：培养温度40℃，消后pH7.0，消后体积1.4吨，不通气静置培养，周期15小时，终点pH4.0以下。
5、将放线菌泾阳链霉菌(Streptomyces jingyangesis))的母种接种于一级培养基(高氏一号合成培养基：硝酸钾1克，可溶性淀粉20克，磷酸氢二钾0.5克，硫酸镁0.5克，氯化钠0.5克，硫酸亚铁0.01克，琼脂20克，蒸馏水补足1000ml，pH7.4。)，培养条件：29℃，7天。获得一级菌种；
将一级菌种接种于二级培养基(硝酸钾0.8克，可溶性淀粉8克，葡萄糖5克，酵母汁5克，磷酸氢二钾0.3克，硫酸镁0.2克，氯化钠0.4克，硫酸亚铁0.05克，水补足1000ml，pH7.4。)培养条件：29℃，160rpm/min，5天，获得二级菌种；
将二级菌种接种于内装发酵培养基(葡萄糖1％，酵母汁1％，磷酸氢二钾0.015％，氯化钠0.02％，硫酸亚铁0.003％，水补足100％，pH7.5。)的种子罐，培养条件：消后pH7.0，30℃，170rpm/min，通风比1∶0.5，8小时后调整到0.8，6天。
将种子罐培养物接种于2吨发酵罐(内装发酵培养基)，培养条件：消后pH7.0，30℃，180rpm/min，通风比1∶0.5，8小时后调整到0.8，8天。
混合成品：
1、将五种发酵好的菌液分别进行取样检验，如合格后按比例打入储液罐。(混合比例为：放线菌5％；光合细菌15％；芽孢杆菌15％；酵母菌25％；乳酸杆菌40％)
2、将储液罐的菌液混合均匀后进行取样检验，如合格即为成品。
实验例1：本发明饲料添加剂改善禽畜舍环境试验
表1本发明饲料添加剂改善臭气的情况单位：毫克/升
| 有害气体 | 处理前 | 处理后 |
| 氨 | 2.209 | 0.005 |
| 硫化氢 | 1.850 | 检不出 |
| 甲基硫醇 | 0.016 | 检不出 |
| 三甲胺 | 0.035 | 检不出 |
实验例2：提高免役力，有效预防各种疾病的发生，提高受孕率、产仔率、成活率
2005年3月在北京市顺义区陈各庄东方种猪场进行了僵猪、赖猪的示范，一共选出40头僵、赖猪，随机分成20头/组，示范60天的结果：
僵、赖猪是环境恶化、遗传疾病、黄白痢预防不好的原因形成的，一般要占仔猪的10％-15％左右，专家定为综合并发症，这种猪干吃不长。
表2运用本发明饲料添加剂效果：单位：只、公斤
通过示范，用此种生物饲料添加剂饲养的僵、赖猪，在10天左右，僵、赖猪开始恢复正常，通过60天的示范，已达到商品猪的要求(同胎正常猪日增重为0.605公斤)。
如果从种猪开始使用本发明饲料添加剂喂养，可以减少或杜绝僵、赖猪的发生，并可以提高受孕率、产仔率、成活率。产仔数可提高25.12％，产活仔数可提高29.17％，初生重可提高21.56％，初生窝可提高28.19％。
表3本发明饲料添加剂对鸡大肠杆菌、沙门氏菌、球虫的杀死率
| 大肠杆菌杀死率 | 沙门氏菌杀死率 | 球虫杀死率 |
| 96％ | 94％ | 46％ |
表4奶牛使用本发明饲料添加剂的具体效果(北京三河牛场)
| 日产奶量提高率 | 乳房炎减少率 | 牛蹄病减少率 |
| 8.2％-20％ | 45.3％-76.5％ | 40.4％-54.6％ |
实验例3：提高饲料转化率试验
表5本发明饲料添加剂饲养育肥猪77天的效果对比(广东省茂名市电白县)重量：公斤
| 组别 | 头数 | 均始重 | 均末重 | 总均增重 | 均日增重 | 料肉比 |
| 示范组 | 20 | 18.96 | 61.03 | 42.07 | 0.546 | 2.42 |
| 对照组 | 20 | 19.67 | 54.76 | 35.09 | 0.456 | 2.57 |
从上面表格中数据可以得出日增重提高了19.7％，料肉比降低了5.83％。
实验例4：提高产量、降低死亡率，降低蛋破损率试验
在北京市平谷区夏各庄养鸡场进行试验
表6用本发明饲料添加剂示范蛋鸡43天的对比数据
| 组别 | 只数 | 日只采食量(g) | 日产蛋量(g) | 料蛋比 | 死亡率 | 蛋破损率 |
| 示范组 | 5526 | 142.03 | 59.31 | 2.4 | 0.8 | 0.08 |
| 对照组 | 4846 | 147.57 | 57.44 | 2.6 | 0.9 | 0.14 |
| 增减量(示范-对照) | -5.54 | 1.87 | -0.2 | -0.1 | -0.06 | |
| 增减率 | -3.8％ | 3.3％ | -7.7％ | -11.1％ | -42.9％ |
实验例5：减少抗生素的使用，提高肉蛋奶的品质试验
2005年4月在辽宁省葫芦岛市连山区新工大街养鸡场进行了肉鸡示范，随机抽出两笼做对比，从购进鸡雏到出栏共50天，市场价格7元/公斤，对比数据如下：
表7使用本发明饲料添加剂的增益情况
由上表数据分析可以得出：使用此饲料添加剂饲养的肉鸡比传统饲养的肉鸡死亡率降低了68.5％，投入成本降低了4.56％，出栏均重提高了10.94％，只净收益增加了73.98％。
示范组总收益＝(3500-57)*7.69＝26476.67元，对照组总收益＝(3500-181)*4.42＝14669.98元，示范组比对照组多收益11806.69元。
表8本发明饲料添加剂喂养蛋鸡生产的鸡蛋与普通鸡蛋的对比(质检中心检测数据)：
| 组别 | 蛋白质 | 脂肪 | 胆固醇(mg/100g) | 磷脂(mg/100g) |
| 示范组 | 12.1 | 8.33 | 217 | 495.4 |
| 对照组 | 12.7 | 11.1 | 585 | 140.0 |
| 增减量(示范-对照) | -0.6 | -2.77 | -368 | 355.4 |
| 增减率 | -4.7％ | -24.95％ | -62.9％ | 253.86％ |
从上表可以看出，使用微生物饲料添加剂技术饲养蛋鸡生产的鸡蛋，品质有很大地提高，该鸡蛋的胆固醇为217mg/100g，远远低于出口日本、欧洲国家的胆固醇标准(300mg/100g)；而对人体特别是大脑有益的磷脂，该鸡蛋的检测值为495.4mg/100g，远远高于140.0mg/100g的市场平均水平；而脂肪的含量也低于国家平均水平。该鸡蛋的营养价值远远高于普通鸡蛋，达到有机食品的标准。
实验例6：用于青贮和黄贮，提高产奶量，延长产奶高峰期
于2004年7月在北京丰台三和奶牛场进行了奶牛示范，随机抽出20头牛，示范和对照组分别为10头，示范53天，除去换饲料的15天适应期，后38天平均每周测奶一次，共测六次。
表9平均每头牛产奶量单位：公斤
| 日期 | 示范组 | 对照组 | 增长量 | 增长率 | 备注 |
| 7月21日示范前 | 18.48 | 18.66 | -0.18 | 示范前数据不参与对比 | |
| 8月1日 | 20.40 | 19.54 | 0.86 | 4.40％ | |
| 8月8日 | 20.90 | 19.00 | 1.90 | 10.00％ | |
| 8月15日 | 19.83 | 18.43 | 1.40 | 7.60％ | |
| 8月24日 | 20.60 | 16.53 | 4.07 | 24.62％ | 对照组一头牛因患乳房炎不能继续产奶 |
| 9月3日 | 17.40 | 10.90 | 6.50 | 59.63％ | 对照组三头牛患乳房炎 |
| 9月8日 | 16.80 | 10.99 | 5.81 | 52.87％ | 对照组三头牛患乳房炎 |
| 均日产奶量 | 19.32 | 15.90 | 3.42 | 21.51％ |
从产奶量来分析：以每公斤牛奶2元钱计算，每头牛每天多产奶增加收入6.84元，减去使用本产品的成本1.44元，每头牛每天比对照组增加5.4元收入。
另需要说明的是示范期间，对照组有3头牛在不同时期患了乳房炎，不能继续产奶，治疗费用会增加成本；如果长期使用此饲料添加剂，产奶高峰期可延长10-15天。
Claims (5)
1.一种饲料添加剂，其特征在于，是由沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)；枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)；啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillusacidophilus)；泾阳链霉菌(Streptomyces jingyangesis)的发酵液按比例混合而成；所述的发酵液体积计用量比例为：泾阳链霉菌5％；沼泽红假单胞菌15％；枯草芽胞杆菌15％；啤酒酵母25％；嗜酸乳酸杆菌40％。
2.一种权利要求1所述的饲料添加剂的生产方法，包括步骤：
(1)分别将沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)；枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)；啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)；泾阳链霉菌(Streptomycesjingyangesis)的母种接种于一级培养基进行培养，获得一级菌种；
(2)分别将沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)；枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)；啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)；泾阳链霉菌(Streptomycesjingyangesis)的一级菌种接种于二级培养基进行培养，获得二级菌种；
(3)分别将沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)；枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)；啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)；泾阳链霉菌(Streptomycesjingyangesis)的二级菌种接种于发酵培养基进行培养，获得发酵菌液；
(4)将各发酵菌液按比例混匀即得。
3.根据权利要求2所述的生产方法，其特征在于，步骤(2)、(3)中的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)为间歇式通气培养；枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)为通气培养；啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为通气培养；嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillusacidophilus)为静置不通气培养；泾阳链霉菌(Streptomyces jingyangesis)为通气培养。
4.权利要求1所述饲料添加剂在改善禽畜舍环境中的的应用。
5.根据权利要求4所述饲料添加剂的应用，其特征在于，禽畜食用干料时，在饮水时按比例加入所述饲料添加剂；禽畜食用潮拌料时，按比例在饲料中加入所述饲料添加剂搅拌均匀即可。
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Addressee: Wang Liping Document name: Notification of Passing Examination on Formalities |
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Owner name: BEIJING SANSE WEIGUI TECHNOLOGY GROUP CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: BEIJING SANSE WEIGU TECHNOLOGY CO., LTD. |
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Address after: 100097, Beijing, Haidian District, on the far road on the 1st Village, District 1, building 5, room 701 Patentee after: Beijing tricolor micro Valley Technology Group Co.,Ltd. Address before: 100097, Beijing, Haidian District, on the far road on the 1st Village, District 1, building 5, room 701 Patentee before: Beijing tricolor micro Valley Technology Co.,Ltd. |
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Denomination of invention: A feed addictive, its preparation process and use Effective date of registration: 20151228 Granted publication date: 20080723 Pledgee: Beijing Golden Eagle Investment Center (limited partnership) Pledgor: Liaoning tricolor micro Valley Technology Co.,Ltd. Registration number: 2015990001179 |
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