CN100398659C - 旋光纯(s,s)-腺甘甲硫氨酸制备的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物化学、微生物发酵、微生物药学中有机化合物的制备方法，特别涉及一种旋光纯腺甘甲硫氨酸制备的方法。解决了已有的手性分离和选择性合成旋光纯腺甘甲硫氨酸成本太高的缺陷。技术解决方案是：旋光纯腺甘甲硫氨酸制备的方法，采用微生物发酵方法，发酵方法包括制造(S，S)-SAMe的培养基，培养基可以是大肠杆菌标准培养基LB、酵母标准培养基YPD或其他微生物培养基，其发酵和发酵产物的后续处理工艺包括：产SAMe的微生物在上述培养基中发酵；发酵产物用酸提取；提取液采用阳离子树脂吸附；吸附后的树脂用1N对甲苯磺酸洗脱；洗脱液经过脱色介质脱色；浓缩液经冷冻干燥或其它干燥工艺干燥，即得目的产物，其特征是：培养基中含有0.2‰～1‰的B族维生素。主要用于旋光纯的(S，S)-SAMe的制备。

Description

旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸制备的方法
技术领域
本发明涉及生物化学、微生物发酵、微生物药学中有机化合物的制备方法，特别涉及一种旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸制备的方法。
背景技术
SAMe又名腺甘甲硫氨酸，腺甘蛋氨酸，活性甲硫腺甘，是生物体内甲基化反应的供体。具有抗氧化、保肝、抗抑郁、治疗关节炎、癌症等多种疾病的用途。已广泛用于医药临床、食品保健。
许多有机化合物以旋光性结构形式存在，也就是，它们有能力使水平极化光的平面旋转。在描述一种旋光性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子手性中心的绝对构造。具有旋光特性的化合物在生物活性方面具有较大的差异，一个典型的例子是β肾上腺素调节物的左旋结构体，即心得安，已经知道它的药效是其右旋结构体的100多倍。
SAMe具有(R，S)和(S，S)两种光学结构，试验证明，(R，S)-SAMe不但没有生物活性，而且对(S，S)-SAMe具有抑制作用【美国专利申请号：20020025926】。因此，采用旋光纯的(S，S)-SAMe在医药应用上具有显而易见的好处。
商业上使用的SAM-e可以通过发酵技术获得，其纯度为60-80％。(即，最终产物包括60-80％活性成份或者(S，S)-SAM-e和20-40％的非活性成份或者(R，S)-SAM-e.)(Gross，A.Geresh，S.and Whitesides，Gm(1983)Appl.Biochem.Biotech.8，415.)。据报到生物酶合成方法可以集中产生超过60％的非活性异构体。(Matos，JR，Rauschel FM，Wong，CH.S-Adenosylmethionine：关于化学和酶催化合成的研究。Biotechnology and Applied Biochemistry 9，39-52(1987)。已有报到光学异构体的分离技术可以解决活性异构体SAM-e的纯度问题(Matos，JR，Rauschel FM，Wong，CH.S-Adenosylmethionine：关于化学和酶催化合成的研究。Biotechnology and Applied Biochemistry 9，39-52(1987)；现有解决SAMe光学纯度的技术由于成本太高而不具有商业价值。另外，可以想到运用立体选择性合成方法合成生物活性异构体但是这种方法现今还没有成熟。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是：在发酵培养基中添加B族维生素，改变微生物发酵的代谢过程，从而可以廉价获得旋光纯的(S，S)-SAMe的旋光纯腺甘甲硫氨酸制备的方法。
本发明的技术方案是：旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸制备的方法，包括：
1、产SAMe的微生物培养基中加入0.2‰～1‰的B族维生素
2、产SAMe的微生物在上述培养基中发酵
3、发酵产物用酸提取
4、提取液采用阳离子树脂吸附
5、吸附后的树脂用1N对甲苯磺酸洗脱
6、洗脱液经过脱色介质脱色
7、浓缩液经冷冻干燥或其它干燥工艺干燥，即得目的产物。
培养基可以是大肠杆菌标准培养基LB、酵母标准培养基YPD或其他微生物培养基，微生物可以是大肠杆菌、枯草杆菌、酵母、霉菌或其它可以产生SAMe的微生物。
本发明的有益效果是：由于在在发酵培养基中添加B族维生素，改变微生物发酵的代谢过程，使得本发明的制备方法简单易行，而且成本低廉。
具体实施方式
以下为本发明的2个应用实例，2个实例是为了更好阐述本发明，而不仅仅是限于2个实例。
实施例1：旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸制备的方法，包括：
1、大肠杆菌菌株ATCC2385接种到LB斜面培养基，37摄氏度培养过夜。
2、从上述斜面接种ATCC2385到100毫升含0.5‰维生素B6的LB液体培养液中，37摄氏度振荡培养36小时，(S，S)-SAMe含量为3mg/ml.
5、5000rpm离心收集细胞，用饱和生理盐水洗涤两次。
4、加入1.5N的高氯酸10毫升，悬浮沉淀，提取细胞中的(S，S)-SAMe，注意要经常振荡，提取率为95％。
5、离心收集上清液，提取液用10g阳离子树脂732吸附，用0.01N的醋酸洗到洗脱OD260＜0.1，用去离子水30毫升洗柱。
6、用1N的对甲苯磺酸洗脱，收集洗脱液致OD260＜0.1，得洗脱液50毫升，(S，S)-SAMe含量为5mg/ml，总收率为83％。
7、用5g活性碳对洗脱液脱色，洗脱液有淡黄色转为无色，用去离子水25毫升分次洗活性炭，洗脱液合并为74毫升。
8、洗脱液中加入0.4g对甲基苯磺酸，冷冻干燥，得(S，S)-SAMe对甲苯磺酸盐0.68g.总收率为80％。(S，S)-SAMe活性成份含量为35.3％
实施例2：菌种采用毕赤酵母，培养基为YPD，培养温度为30度，时间为72小时，培养基中维生素B12含量为0.8‰，其余与实施例1相同。

Claims (3)

1.旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸制备的方法，采用微生物发酵方法，发酵方法包括制造旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸的培养基，培养基是大肠杆菌标准培养基LB、酵母标准培养基YPD或其他微生物培养基，其发酵和发酵产物的后续处理工艺包括：产腺甘甲硫氨酸的微生物在上述培养基中发酵；发酵产物用酸提取；提取液采用阳离子树脂吸附；吸附后的树脂用1N对甲苯磺酸洗脱；洗脱液经过脱色介质脱色；浓缩液经冷冻干燥或其它干燥工艺干燥，即得目的产物，其特征是：培养基中含有0.2‰～1‰的B族维生素B6或B12。
2.根据权利要求1所述的旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸制备的方法，其特征是：B族维生素B6或B12含量为0.5‰～0.8‰。
3.根据权利要求1所述的旋光纯(S，S)-腺甘甲硫氨酸制备的方法，其特征是：微生物是大肠杆菌、枯草杆菌、酵母、霉菌或其它产生腺甘甲硫氨酸的微生物。
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