CN100393738C - 纳他霉素的提取纯化方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及关于一种纳他霉素的提取纯化方法。它采用微生物发酵法，将经过培养、发酵代谢后的纳他霉素发酵液，经五个步骤及工艺条件提取纯化目标产物纳他霉素。它具有产率高、纯度高(≥80%)、成本低等优点。

Description

纳他霉素的提取纯化方法
技术领域
本发明涉及一种抗真菌素的提取纯化方法，特别是一种纳他霉素的提取纯化方法。
背景技术
纳他霉素的分子式为C33H47NO13。分子量为665.75，其结构式为：
Figure C20051003558500031
它是一种多烯大环内酯类抗真菌素，它能抑制有害真菌的生长而不作用于人体有益菌群，可作为食品防腐剂使用。目前市售的纳他霉素价格较高，其应用受到一定的影响。
本发明采用微生物发酵法即在发酵时所加进去的菌种经培养、发酵代谢后的纳他霉素发酵液，经一定的步骤及工艺条件后获取的目标产物纳他霉素，它具有产率高、纯度高、成本低等优点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效的提取纯化生物发酵液中纳他霉素的工艺方法。
本发明的目的可以通过如下措施来达到，该方法包括以下步骤及工艺条件：
步骤1.用减压浓缩法或离心法浓缩发酵液
将发酵后所获得的纳他霉素发酵液用减压浓缩法或离心法进行浓缩，减压浓缩法其温度控制在50～60℃；
步骤2.用洁净水冲洗浓缩液或固体
当发酵液浓缩至不能浓缩时或离心后，加入未浓缩前发酵液体积的10％洁净水冲洗浓缩液或固体后，再浓缩去水至不能浓缩时或离心得固体；
步骤3.加溶剂及加酸、碱调节提取液的PH值后提取。
加入与浓缩发酵液或固体等体积(1∶1V/V)的溶剂(甲醇、丙酮、乙醇)提取浓缩发酵液中的纳他霉素；加酸或加碱调节提取液的PH值后提取，加入酸时调节PH值1.0～4.5，若加入碱时调节PH值10.0～11.0，提取温度2～25℃，提取时间0.5～4.5h；
步骤4.提取液的固液分离，获得上清液
当达到提取时间后，提取液用离心方法进行固液分离，获得上清液
步骤5.调节上清液的PH值，进行固液分离，收集固体。
上清液经加酸或碱调节PH值在5.5～7.0，静置1～2h后进行固液分离，收集固体，之后用固体2倍体积的水洗固体2次，固体干燥后即得纳他霉素。
本发明具有如下优点：产率高、纯度高(≥80％)、成本低。
具体实施方式
本发明下面将结合实施例作进一步详述。
例1
步骤1.用减压法浓缩发酵液。
取发酵后所获得的纳他霉素发酵液400升(纳他霉素含量为6.0g/L)，放置于500升真空浓缩罐中，在50～60℃温度下进行浓缩，直至不能浓缩为止。
步骤2.用洁净水冲洗浓缩液。
用40升洁净水冲洗浓缩液，再浓缩去水至不能浓缩时。
步骤3.加溶剂及加酸调节提取液的PH值后提取
加入与浓缩后的发酵液等体积的丙酮，让发酵液与丙酮充分搅拌均匀。用20～30％的酸(可用盐酸、醋酸、磷酸、硝酸、硫酸、碳酸)调节PH值至1.0，在5℃下提取3h。
步骤4.提取液的固液分离，获得上清液
当达到提取时间后，提取液用离心方法进行固液分离，获得上清液。
步骤5.调节上清液PH值，进行固液分离，收集固体。
用20～30％的碱(可以用氢氧化钠、氢氧化钾)调节PH值至6.0，静置1.5h，离心，收集固体，用洁净水洗固体两次，干燥后即得纳他霉素1450g，纯度为88％。
例2
步骤1.用离心法浓缩发酵液。
取发酵后所获得的纳他霉素发酵液4000升(纳他霉素含量为5.5g/L)用离心机离心，收集固体。
步骤2.用洁净水冲洗固体。
用400升洁净水冲洗固体20min，冲洗完后再离心，收集固体。
步骤3.加溶剂及加碱调节提取液的PH值后提取。。
加入与离心后的固体等体积的甲醇，让固体与甲醇充分搅拌均匀。用20～30％的碱(可以用氢氧化钠、氢氧化钾)调节PH值至10.9，在25℃下提取0.5h。
步骤4.提取液的固液分离，获得上清液
当达到提取时间后，提取液用离心方法进行固液分离，获得上清液
步骤5.调节上清液PH值，进行固液分离，收集固体。
用20～30％的酸(可用盐酸、醋酸、磷酸、硝酸、硫酸、碳酸)调节PH值至6.0，静置1.5h，离心，收集固体，用洁净水洗固体两次，干燥后即得纳他霉素13.5kg，纯度为90％。

Claims (1)

1.一种纳他霉素的提取纯化方法，其特征在于：该方法包括以下步骤及工艺条件：
步骤1.用减压浓缩法或离心法浓缩发酵液
将发酵后所获得的纳他霉素发酵液用减压浓缩法或离心法进行浓缩，减压浓缩法其温度控制在50～60℃；
步骤2.用洁净水冲洗浓缩液或固体
当发酵液浓缩至不能浓缩时或离心后，加入未浓缩前发酵液体积的10％洁净水冲洗浓缩液或固体后，再浓缩去水至不能浓缩时或离心得固体；
步骤3.加溶剂及加酸、碱调节提取液的PH值后提取
加入与浓缩发酵液或固体等体积的溶剂提取浓缩发酵液中的纳他霉素；加酸或加碱调节提取液的PH值后提取，加入酸时调节PH值1.0～4.5，若加入碱时调节PH值10.0～11.0，提取温度2～25℃，提取时间0.5～4.5h；
步骤4.提取液的固液分离，获得上清液
当达到提取时间后，提取液用离心方法进行固液分离，获得上清液
步骤5.调节上清液的PH值，进行固液分离，收集固体
上清液经加酸或碱调节PH值在5.5～7.0，静置1～2h后进行固液分离，收集固体，之后用固体2倍体积的水清洗固体2次，固体干燥后即得纳他霉素。
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