CN100389776C - Cm101在制备药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明方法通过施予从B组β-溶血性链球菌提取的CM101或GBS毒素提供治疗有伤口患者的方法，特别是通过减小疤痕和加速伤口愈合。可治疗的伤口类型包括表面和内部伤口。本发明方法也包括将CM101或GBS毒素施予患肿瘤的手术患者以促进伤口愈合和减小肿瘤发展的可能性。

Description

CM101在制备药物中的用途
技术领域
本发明涉及通过减少疤痕形成和加速愈合来促进患者伤口愈合。本发明也涉及减少与伤口有关的肿瘤发展。
背景技术
手术或外伤所致皮肤伤口的正常愈合过程涉及血凝块和常有的结痂形成。更具体而言，一期愈合或初级愈合一般发生在清洁切口，而二期愈合或次级愈合发生在边缘裂开的伤口。蛋白纤维填充伤口周围皮肤边缘，结痂封闭伤口和避免感染。当炎症反应引发该区域血细胞数量增加而有助于修复过程时，伤口边缘上皮组织再生和来自血管的毛细血管生长。伤口区域毛细血管再生成并参与肉芽组织形成，而肉芽组织又造成瘢痕形成。
伤口发生后大约5天肉芽组织开始在伤口部位形成并且填充该部位。肉芽组织含有新胶原、成纤维细胞、新血管和炎症细胞，特别是巨噬细胞(E.Rubin和J.L Farber，病理学(Pathology)，Lippincott，publ.，85-95页(1994))。7-10天后，伤口仅恢复组织原强度的10％。
二期愈合引起较大的炎症反应和更多的肉芽组织形成。此外，伤口收缩，起因于肉芽组织成纤维细胞的收缩，引起伤口边缘合拢、加速愈合过程，但有时引起变形和消耗性疤痕。另外，细胞外基质过度沉积导致瘢痕疙瘩或者肥大疤痕形成，所述瘢痕疙瘩或肥大疤痕是形状不规则、趋向于进展性增大的凸起的疤痕。
一般认为血管生成是修复的一个必要特征(Kovacs，E.等.，纤维生成性细胞因子和组缔组织的产生FASEB J.，8：854-861(1994))。许多生长因子和细胞因子，起初由血小板对聚集反应而分泌、然后是巨噬细胞对低氧和乳酸中毒反应而分泌，刺激血管生成(Shah，M.等.，The Lancet，339：213-214(1992))。血管生成一般于伤后大约4天在显微镜水平变得可见，早在2或3天由于对血小板和巨噬细胞释放的化学趋向因子反应新的毛细血管即开始从业已存在的小静脉抽芽并向受伤处生长。在一期闭合的伤口中，抽芽的血管很快与伤口对面迁移过来的血管相遇，从而重新建立流经伤口的血流。未闭合伤口或闭合不好的伤口中，新的毛细血管仅同相邻的相同方向迁移物融合，并形成大量肉芽组织。
正常的伤口愈合，伤口周围组织遭受一定程度的低氧并伴发血管内皮生长因子或VEGF分泌增加，典型地出现于伤后1～2天(Brown，L.F.等，在伤口愈合中上皮角质化细胞中VPF(VEGF)的表达，实验医学杂志 (J.Exp.Med.)，176：1375-79(1992))。VEGF刺激血管内皮细胞迅速增生，导致形成茂密的抽芽毛细血管。这种快速低氧诱导的VEGF驱动的血管形成刺激炎症细胞浸润并最终导致疤痕形成。
尽管炎症引起疤痕形成，但炎症仍是有益的。炎症细胞释放生长信号和对修复非常重要的溶解酶。事实上，接受抗炎剂的患者由于伤口部位炎症不足而经常经历愈合削弱。
伤口修复的一个重要方面是所涉及的时间。伤口以什么样的速度愈合蕴含着预防感染和改进患者的全面健康。从医学和美容的观点出发，期望没有过度收缩的快速、平滑愈合。
再者，认识到的一个临床现象是，在肿瘤患者的手术中如果手术切口接近肿瘤部位，则可能导致肿瘤发展。此外，手术切口显示出对转移性植入高度易感。(Murthy等，癌(Cancer)，64：2035-2044(1989)；Murthy等，癌(Cancer)，68：1724-1730(1991)；Schackert，H.K.等，国际癌症杂志(Int.J.Cancer)，44：177-81(1989))。伤口对肿瘤的刺激作用表现为加速手术介入部位附近残余肿瘤的生长，以及增加手术部位转移性植入的可能性。还有，位于肿瘤部位的伤口有规律地不能愈合(Gatenby，R..A.等，患肿瘤动物中伤口愈合的抑制，癌症研究(Cancer Research)，50：7997-8001(1990))。连续不断促进肿瘤进展的持续伤口可能是一个与癌症治疗有关的手术介入的常有副作用。因此，决定是否对肿瘤患者施行手术经常是一个困难的决定，其中手术的益处必须与恶化癌症患者整体状况的风险相比较。
因此，本发明的一个目的是，提供一种在伤口愈合过程期间预防疤痕或将疤痕形成减至最小的方法。
本发明的另一目的是提供一种加快伤口愈合速度的方法。
本发明进一步的目的是提供一种促进肿瘤患者伤口愈合并将肿瘤发展的可能性减至最小的方法。
发明概述
本发明提供治疗有伤口患者的方法，其中通过施予患者CM101使疤痕形成减至最小和加速伤口愈合；所述CM101是一种从B族β-溶血性链球菌(GBS)细菌中分离的通常无毒的多糖。本发明发现不仅可用于治疗内部伤口而且可用于治疗表面伤口。
本发明另一方面是提供一种通过切除瘢痕疙瘩和给予CM101来治疗瘢痕疙瘩的方法。
本发明也提供了一种通过在肿瘤患者手术或其它伤口产生前、中和/或后施予CM101而将肿瘤发展的可能性减至最小的方法，所述肿瘤发展即伤口诱导的肿瘤增生或转移性植入。
本发明还公开了一种包含GBS毒素，特别是CM101，并配有治疗指导的制成品，以及该制成品的制备方法。
一方面，本发明涉及CM101在制备用于加速患者伤口愈合的药物中的用途。
另一方面，本发明涉及CM101在制备用于加速患者伤口愈合和使疤痕形成减至最小的药物中的用途。
再一方面，本发明涉及CM101在制备用于减少患者伤口周围新血管形成、加速伤口愈合和使疤痕形成减至最小的药物中的用途。
在一个实施方案中，其中CM101基本上是纯的。
在另一个实施方案中，其中CM101具有至少约90％的纯度。
在另一个实施方案中，其中CM101被配制成非肠道给予患者的形式。
在另一个实施方案中，其中CM101被配制成静脉内给予患者的形式。
在另一个实施方案中，其中CM101被配制成适于在接近伤口部位施用的形式。
在另一个实施方案中，其中CM101被配制成适于在30分钟或更少期间内单次输注给予的形式。
在另一个实施方案中，其中所述患者患有肿瘤。
在另一个实施方案中，其中所述患者未患已知肿瘤。
在另一个实施方案中，其中所述患者至少4天大。
在另一个实施方案中，其中所述患者至少7天大。
在另一个实施方案中，其中伤口由外伤所致。
在另一个实施方案中，其中伤口由手术所致。
在另一个实施方案中，其中伤口在血管内。
附图简述
图1是用CM101或盐水溶液治疗的未患肿瘤小鼠的伤口周围血管密度图。
图2是用CM101或盐水溶液治疗的患肿瘤小鼠的伤口周围血管密度图。
图3是显示CM101对受伤后皮肤强度恢复作用的图示。
发明详述
本发明部分基于发现GBS毒素，特别是CM101，可促进伤口愈合，其促进快速愈合而疤痕形成很小。CM101大概通过减少有助于与伤口愈合有关的瘢痕形成的快速低氧相关的VEGF驱动的新血管化而产生这些有益作用。该作用机制也有助于肿瘤患者伤口的快速、平滑愈合，由此减少了在手术或其它伤口部位肿瘤增生或转移性植入的可能性。
CM101，一种GBS毒素，是从B族β-溶血性链球菌(GBS)细菌中分离的多糖分子。尤其是，致病性B族β-溶血性链球菌产生一种多糖外毒素。该外毒素是推定的致新生儿中GBS肺炎或“早发性疾病”的物质。这些新生婴儿可患有败血症、粒细胞减少、和呼吸窘迫，即肺动脉高血压和蛋白质性肺水肿(Hellerqvist，C.G.等，对B族β-溶血性链球菌的研究I.细胞外毒素的分离和部分鉴定，儿科研究(Pediatr.Res.)，12：892-898(1981))。据信CM101受体主要存在于新生儿的肺部，使它们对早发性疾病易感，但是大约在出生后4到7天肺细胞CM101受体消失。这样，除了GBS对新生儿的有害作用外，CM101未见对年长一些的人类引起毒性。
已经证明分离和提纯的CM101对模拟GBS婴儿肺炎的绵羊试验模型具有毒性作用(Hellerqvist，C.G.等，对B族β-溶血性链球菌的研究I.细胞外毒素的分离和部分鉴定，儿科研究(Pediatr.Res.)，12：892-898(1981))。在该新生儿早发性疾病绵羊模型中，GBS毒素引起肺动脉高血压、肺血管通透性增加、粒细胞减少症和粒细胞的肺分离。
CM101分子量大约300,000道尔顿，包含N-乙酰-半乳糖胺、N-乙酰-葡糖胺、葡萄糖、半乳糖，和甘露糖残基，其比例大约为1∶1∶1∶3∶1。羧酸残基也被认为是分子的组成部分。重复性活性表位极有可能通过交联靶内皮上的受体而在对CM101的病理生理学反应中起重要作用(Hellerqvist，C.G.等，癌症病人中CM101的I期临床试验的早期结果，癌症研究年会美国协会的报告(Proceedings of the American Association of Cancer Research Annual Meeting)，36：224(1995))。
GBS毒素的制备方法在美国专利5,010,062中提供。然而，优选地，按照在这里引入参照的国际申请PCT/US97/17535讲授的方法提纯CM101。
用于分离本发明方法使用的CM101的起始物料可通过培养新近感染或能够感染新生儿的B族β-溶血性链球菌的菌株获得。这种菌株的分离菌可从感染的新生儿血液或脑脊液中获得。
本发明使用的GBS毒素限定为任何自天然或溶解的GBS细菌分离的成分或组分，或从溶解和/或高压灭菌GBS细菌的培养上清液中得到，并且所述毒素经诱导绵羊呼吸窘迫试验证实具有生物学活性(Hellerqvist，C.G.等，对B族β-溶血性链球菌的研究I.细胞外毒素的分离和部分鉴定，儿科研究12：892-898(1981))或者通过肿瘤组织标本过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)实验证实能激活补体和结合新脉管系统(Hellerqvist，C.G.等，GBS毒素的抗肿瘤效果：一种来自B族链球菌的多糖外毒素，J.Canc Res.Clin.Oncol.，120：63-70(1993)；和Hellerqvist，C.G.等，癌症病人中CM101的I期临床试验的早期结果，癌症研究年会美国协会的报告(Proceedings of the American Association of Cancer Research Annual Meeting)，36：224(1995))。GBS毒素也指与具有前述活性的任何GBS-衍生分子同样结构或功能的任何天然或合成多糖。
基本上纯的GBS毒素指GBS毒素大于40％纯度的制剂(如，以至少40％重量浓度存在)，优选地至少大约60％纯，更优选地至少90％纯，及最优选地至少95％纯。GBS毒素纯度在PCT/US97/17535中作了更详细的讨论。这里描述的剂量指用95％纯GBS毒素。低纯度GBS毒素的剂量应当相应地换算。
本发明的一个方面是，一种通过施予足以减少疤痕形成和/或加速伤口愈合量的一种GBS毒素如CM101来治疗有伤口患者的方法。减少疤痕形成和/或加速愈合的测定可以通过各种方法完成，包括，但不限于，视觉观察、测量伤口部位血管密度，如通过核磁共振成像，测量肉芽组织形成的数量和/或速度、测量伤口部位皮肤张力强度。
CM101或其它GBS毒素优选地同药学适用载体结合并系统地施予患者。载体优选地是一种与CM101方便地混合形成可由静脉(IV)方式给药之组合物的载体。因此，载体优选地是盐水，盐水可含有其它药学适用赋形剂，包括确保它适于静脉给药的赋型剂。形成的组合物无菌和具有可接受的渗透压特性。通常，按照本领域技术人员公知的标准技术制备适宜的静脉内制剂。例如，Salvatore J.Turco在第18版的Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mach Publishing Co.(1990)第85章中题目为“Intravenous Admixtures”，(静脉用混合物)，在此引作参考，提供了制备本发明有用的药学适用静脉组合物的标准技术。也可使用其它剂量形式施予CM101。作为系统给药的替代，CM101可局部施予伤口部位。可在手术或创伤制造伤口前、期间、和/或之后施予患者CM101。优选地，在受伤后适宜时间范围内给予CM101。最优选在制造伤口后很快给予CM101。例如，1天内施予，或优选地最好在6小时内给予。
施予患者的用以减少疤痕形成或加速伤口愈合的CM101量，是足以减少伤口部位肉芽组织形成量或速度的量，或者，是足以减少伤口部位血管形成，特别是血管密度的量。优选的剂量范围是1～100μg/kg体重。然而，更优选剂量范围1～50μg/kg体重，最优选剂量范围是1～25μg/kg体重。但是，应当理解，对于任何特定患者的特定剂量水平将取决于各种因素，包括年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食和伤口严重程度。每个剂量优选地在可长达120分钟内输注给予，更优选的时间范围是5～60分钟，最优选时间范围是5～30分钟。优选每周治疗一次，这可能是显示结果的充足条件。
CM101治疗抑制各种类型组织的疤痕形成和加速伤口愈合而且适于各种深度的伤口。本发明的治疗优选与肌肉组织缝合或一些其它已知的对深的或组织边缘未对合在一起的伤口组织的操作联合使用。通过本发明方法可减少表皮水平以及内部的疤痕形成。这里使用的疤痕是由组织的结缔组织替代形成的皮肤或其它组织的不规则性，特别是伤口过程损害的组织。在本文中粘连也被认为是一种疤痕。这里使用的伤口是指受伤或损伤，其中，皮肤和其它组织受到不利影响，特别是皮肤和其它组织被烧灼、刺穿、切割或撕裂。
此外，本发明也可用于治疗由手术伤口或受损伤伤口引起的再灌注损伤。如，在进行手术期间流向身体某部的血液可能暂时闭塞，如通过钳夹。闭塞解除后，先前缺血区域的再灌注可以导致该组织的再灌注损伤，特别是血管内部。再灌注损伤是移植手术中造成器官衰竭和器官排斥的主要因素。闭塞前施予患者CM101可以将缺血和再灌注引起的损伤减至最小。闭塞发生之后也可施予CM101。再狭窄，常起因于血管内疤痕形成而导致管腔狭窄，也可通过本发明方法得到有益的治疗。再者，本发明可用于将粘连形成的可能性减至最小，如作为腹部手术结果而有时发生的粘连类型。很显然，本方法可用于特殊类型手术，如整形或美容手术、植入、再造术、移植术、旁路手术，和囊血管成形术，在这些手术中改善伤口愈合是决定性的而且疤痕形成是特别成问题的。据信这些过程许多涉及低氧诱导的新血管化或血管生成。
CM101在治疗有瘢痕疙瘩的患者方面特别有用。正常情况下，手术切除这些过度增长的疤痕是不成功的，因为疤痕疙瘩以更大量和更不雅观的形式持续地复发。本发明提供了一种治疗方法，通过手术切除瘢痕疙瘩和制造新的伤口后立即给予CM101，从而取得使疤痕形成减至最小的愈合。
如上面所指出的，伤口对肿瘤的刺激作用是一种已经认识到的表现为加速手术介入部位附近残余肿瘤生长，以及增加手术部位转移性植入可能性的临床现象。本发明也包括将CM101施予患肿瘤的手术患者，以促进伤口愈合和使转移性植入及肿瘤增生减至最小。在肿瘤患者手术中伤口愈合的治疗包括预防或减少发生的可能性，以及减少迁移到伤口部位的任何肿瘤。
很显然，术前给予CM101以减少疤痕形成和加快伤口愈合具有很大实用性并将对医学界产生有益影响。同样地，对具有意外伤害所致伤口的患者施予CM101在促进伤口愈合方面有很大实用性。
不受特定理论限制，据信GBS毒素，而且特别是CM101，由于其干扰了导致组织增生和疤痕形成的低氧诱导、VEGF-驱动的血管形成，而不影响伤口愈合所必要的生理性血管修复过程，故在加速伤口愈合并使疤痕形成减至最小方面起重要作用。据信血管形成包括对低氧状态时VEGF上调反应的内皮细胞去分化，最终导致稠密抽芽的毛细血管快速形成。另一方面，生理性新血管化据信是一个基本的修复机制，它涉及伤口损伤所致接触抑制破坏后现存的内皮细胞增生。由于CM101允许进行生理性修复机制，但干扰病理性血管形成，故它是利于伤口治疗的十分有用的化合物。进一步建议是通过C3补体活化CM101调理使毛细血管抽芽，从而抑制疤痕形成所必要的炎症性血管形成。据信VEGF驱动的血管形成也存在于再灌注损伤型伤口，因此，施予CM101在预防此类损伤方面是有效的。
本申请部分发明者先前的工作是将GBS毒素作为治疗肿瘤的抗癌剂使用。尤其是，授予Hellerqvist的美国专利5,010,062和相应的欧洲专利EP 0 445 280 B1提供了一种通过非肠道施予患者抑制有效剂量GBS毒素以至少部分抑制发展中实体肿瘤血管化的方法。
先前的工作引发GBS毒素特别是CM101对伤口部位脉管系统影响的研究，早期研究的结论是CM101对伤口愈合没有影响。特别是，Quinn，T.E.等，J.Cancer Res.Clin.Oncol.121：253-6(1995)在小鼠中使用聚乙醇(PVA)海绵埋入技术作为伤口愈合模型和胭脂红染料注入方法测量新血管形成。那项研究中，用CM101或对照葡聚糖治疗的小鼠在脉管系统水平上无明显差异。这对正常的和患肿瘤小鼠均是如此。这些结果表明CM101对用海绵模型测量的伤口愈合新脉管系统无显著作用。这样，CM101对伤口愈合作用的早期研究导致人们远离本发明。
磁共振成象(MRI)对于观测血管形成和提供血管密度的相对测量是有用的。该技术已经用于观察活体裸鼠伤口-肿瘤的交互作用(Abramovitch R.，Meir G.和Neeman M.，新血管生成诱导的所植入C6神经胶质瘤多细胞球体的生长：磁共振微成像，癌症研究55：1956-1962(1995))并且证明伤口通过刺激肿瘤新血管形成间接地和通过诱导肿瘤细胞增生而直接地影响肿瘤发展。在观察过程中，位于肿瘤部位的伤口没有愈合。
许多抗血管生成或抗新血管形成治疗(Broadley，K.N.等，Lab. Investigation，61(5)：571-575(1989)；Stout，A.J.等，Int.J.Exp.Pathol.，74(1)：79-85(1993)；Pierce，G.F.，Annu.Rev.Med.，46：467-481(1995))，除CM101外，抑制伤口愈合，因而不能用于抑制对肿瘤生长的手术刺激作用。先前证实CM101抑制肿瘤新血管形成(美国专利5,010,062号)，在先研究者得出CM101对伤口新血管形成无显著作用的结论(Quinn T.E.，Thurman G.B.，Sundell A.K.，Zhang M.，和Hellerqvist C.G.，多糖抗肿瘤剂CM101不抑制鼠模型中的伤口愈合，J.Cancer Res.Clin.Oncol.，121：253-256(1995))。本发明，恰恰相反，发现CM101增加伤口愈合速度、减少疤痕形成和进一步地，在癌症患者中，起着抑制伤口刺激肿瘤增生的作用。
本发明另一方面是制成品如试剂盒和制造制成品的方法。制成品包括含有GBS毒素特别是CM101和药用载体的药物组合物。药物组合物可以放置于一个合适的容器中，后者是本领域所公知的。制成品中也包括按照本发明方法治疗患者的指导。
参考下面的实施例可以更好地理解已总体描述的本发明，实施例只是为说明而给出但不能认作对本发明范围或精神的限定。
实施例
实施例1：CM101在未患肿瘤主体中促进伤口愈合。
用未患肿瘤的CD-1裸鼠测定了CM101对伤口愈合的作用。伤口由精细的手术剪刀制造和由4mm厚皮肤切口组成。用无菌粘连绷带(TegademTm，美国)覆盖每个伤口。
在实验0天，静脉给予小鼠240μg/kg CM101或盐水并制造伤口。使用磁共振微成像(MRI)对每个伤口部位的新血管形成进行评定，在0、1、2、3和5天做MRI检查。
MRI实验在一个水平位4.7 T活组织分光计上进行(Bruker，德国)，分光计使用一个2cm表面射频线圈。用10.5和20ms回声时间获取梯度回声像(切片厚度0.5mm，TR 100ms，256×256像素，110μm平面分辨率)。毛细血管床的生长通过切口周围1mm区域的平均强度减少而反映出来。血管生成对照(AC)限定为切口周围1mm区域的平均强度与远离切口组织平均强度的比值。表观血管密度用1-AC表示。然后将每一只麻醉小鼠仰卧位放置于MRI设备中，并使切口部位定位于表面线圈的中央，记录1小时的MRI成像。
图1显示试验时程中用MRI测得的血管密度。如图1所示，盐水治疗对照小鼠的伤口显示伤口附近强的新血管形成。此新血管形成高峰在受伤后第2天出现。与此相比，CM101治疗的小鼠伤口周围新血管形成水平明显减少。
实施例2：CM101促进患肿瘤主体的伤口愈合。
使用植入了神经胶质瘤球状体的小鼠检测CM101对伤口新血管形成的作用。将单个C6胶质瘤球状体(直径大约800μm)植入每一只雄性CD-1裸鼠背下部皮下(Abramovitch R.，Meir G.和Neeman M.，新血管生成诱导的所植入C6神经胶质瘤多细胞球体的生长：磁共振微成像，癌症研究，55：1956-1962(1995))。
8天后，在试验0天，腹腔注射75μg/g氯胺酮和3μg/g赛拉嗪麻醉小鼠。经尾静脉给小鼠注射含0、60、120或240μg/kg CM101的生理盐水。如实施例1所描述，使用磁共振成像(MRI)评价伤口部位新血管形成。每一只麻醉小鼠仰卧位放置于MRI设备中并使肿瘤定位于表面线圈的中央，记录1小时的MRI成像。
观察和MRI记录1小时后，距离肿瘤5-10mm处切开4mm的皮肤而使小鼠受伤。如前所述，由精细的手术剪刀制造穿透4mm组织厚度的伤口并用无菌粘连绷带(TegademTm，美国)覆盖。接下来，在第2、5、7和13天拍摄新血管形成的MRI成像。
单次注射CM101改善患胶质瘤小鼠的伤口愈合。受伤后2天CM101治疗小鼠显示出伤口边缘血管密度降低大约6倍，见图2。CM101治疗小鼠受伤后大量新血管形成起始波被抑制，但该抑制并不妨碍伤口愈合。事实上，受伤后24和48小时，CM101治疗小鼠的伤口在外表上几乎察觉不到，而对照小鼠则更清晰地显露出伤口。进一步，与盐水治疗对照小鼠比较，CM101治疗的患肿瘤小鼠在受伤后13天时几乎没有可察觉的疤痕。
因此，在患肿瘤主体用CM101治疗明显减少受伤后1-2天伤口周围的大量新血管形成、加速伤口愈合、及疤痕形成减至最小。
实施例3：CM101治疗促进良好的切口愈合。
视觉观察伤口也提供了CM101治疗的有益证据。如前面实施例所述使2只小鼠受伤。然后1只小鼠静脉给予盐水溶解的剂量为240μg/kg的CM101。使用同样操作给予对照小鼠盐水。
切口后和CM101治疗后48小时视觉观察伤口部位证实几乎察觉不到伤口部位。与此相比，在同样时间点对照动物的相对应伤口部位则显示出清晰的伤害迹象。在以后的时间点试验动物与对照动物相比也很少呈现出结疤迹象。
实施例4：CM101加速伤口愈合。
用CD-1裸鼠评价伤口裂开强度，或横跨伤口的组织张力强度。静脉注射30和60μg/kg CM101或盐水后在右侧腰部制造穿透整个皮肤厚度层的切口。切口后40小时和7天测定裂开伤口所需的力量。证实CM101治疗的动物相对于对照动物显著增加愈合伤口的强度。
试验0天制造6毫米的切口。于第2天和第7天使用真空装置(Dimensional Analysis Systems，Inc.)测定跨越伤口的张力强度并通过发射红外线的电视摄像机自动记录伤口每侧所加反射材料的两个小点的运动。图3显示第2天，CM101治疗伤口和对照伤口之间有可测得的差别。到第7天，CM101治疗小鼠未见疤痕，组织具有未受伤组织的强度。与此相比，未治疗伤口较CM101治疗伤口强度低50％。
实施例5：CM101降低伤口诱导肿瘤发展的作用。
准备24只皮下携带至少5mm直径C6胶质瘤的CD-1裸鼠。
使用植入了胶质瘤球状体的小鼠检测CM101对肿瘤增生和转移性植入的作用。将单个C6胶质瘤球状体(直径至少5mm)植入24只雄性CD-1裸鼠的每一只的背下部皮下(Abramovitch R.，Meir G.和NeemanM.，新血管生成诱导的所植入C6神经胶质瘤多细胞球体的生长：磁共振微成像，癌症研究，55：1956-1962(1995))。
8天后，在试验0天，一组小鼠(n＝8)在接近肿瘤处(肿瘤边缘3mm内)接受4mm皮肤切口损伤，第二组小鼠(n＝8)在远离肿瘤的部位(距肿瘤边缘大于10mm)接受4mm皮肤切口损伤，和一个没有伤口的小鼠对照组(n＝8)。在同一天内，小鼠接受0、60、120或240μg/kg CM101(如上所述的每一组中，2只接受特定浓度的CM101)治疗。
2周时间内，肿瘤在原位生长，肿瘤植入伤口部位，并按照实施例1所描述的，用磁共振微成像(MRI)评价伤口部位新血管形成。2周末，杀死小鼠并用甲醛固定肿瘤周围组织和伤口以供伤口愈合组织学和肿瘤形态学分析。
伤口接近肿瘤的动物，CM101治疗减少肿瘤向伤口部位增生。同样地，在肿瘤远离伤口的小鼠CM101抑制转移的肿瘤植入伤口部位。
实施例6：CM101有效对抗再灌注损伤。
使用已经建立的动物模型检测CM101防止再灌注损伤的能力(Han等，Sialyl Lewisx寡糖减小兔耳中局部缺血再灌注损伤，免疫学杂志，(J.of Immunol.)，155(8)：4011-4015(1995)，Missawa等，Sialyl Lewisx在总肝局部缺血和再灌注中的作用，美国外科医生学院杂志，(J.of the American College of Surgeons)，182：251-256(1996)，Lopez-Neblina等，局部缺血大鼠肾中异博定通过阻止嗜中性粒细胞浸润的保护机制，外科研究杂志，(J. Surg.Res.)，61(2)：469-472(1996))。在不论耳模型还是肾模型中，CM101治疗的器官较未治疗器官均显示出损害显著降低。
小鼠耳模型：给Balb/c小鼠静脉注射磷酸缓冲盐水(n＝10)或者用磷酸缓冲盐水配制的CM101 60μg/kg(n＝10)。注射后，在每一只小鼠，钳夹为一只耳供应血液的动脉60分钟。到时间后，被钳夹的耳失去颜色，表明阻塞有效。去除夹具，使每只鼠的耳正常再灌注。整个试验期间小鼠供养于室温24℃的笼中。6小时后，直接肉眼和在显微镜下(100×)检测所有小鼠的耳。也使用标准测径器完成肿胀的测量。
检测每一只盐水治疗小鼠遭受钳夹的耳，表明与另一侧耳相比有肿胀和由出血与炎症浸润显示出的显著血管渗漏。与此相比，每一只CM101治疗小鼠的再灌注耳与同一只小鼠的对照耳相比未见显著差别。
小鼠肾模型：将麻醉的Balb/c小鼠剖腹并钳夹阻断一侧肾血流。钳夹一侧肾脏之后，经每一只小鼠尾静脉静脉输注磷酸缓冲盐水(小组A)或者用磷酸缓冲盐水配制的CM101 60μg/kg(小组B)。输注后5分钟，钳夹每一只动物的另一侧肾血流。到达指定阻断期间后将每只小鼠的两个夹具一齐去除并使进行正常的再灌注。保持稳定的24℃室温。到达指定的再灌注期间后，杀死每一只小鼠进行检测。第一组小鼠{6只盐水治疗小鼠(组1A)和6只CM101治疗小鼠(组1B)}肾脏血流被阻断30分钟和进行2小时再灌注。第二组小鼠{6只盐水-治疗小鼠(组2A)和6只CM101治疗小鼠(组2B)}肾脏血流被阻断45分钟和再灌注5小时。第三组小鼠{6只盐水治疗小鼠(组3A)和6只CM101治疗小鼠(组3B)}阻断60分钟之后再灌注6小时。
盐水治疗的小鼠中，盐水治疗的肾脏组织学检测揭示再灌注损伤征象，表明随着再灌注时间增加损伤加重。因此，2小时再灌注组(组1A)毛细血管破坏明显，而在6小时再灌注小鼠(组3A)则观察到明显的血管形成、出血和炎症。另外，在再灌注4小时组(组2A)观察到细胞死亡。与此相比，在所有时间点CM101治疗的小鼠显示较小的血管扩张，但血管之间没有出血、炎症，或细胞死亡。这证实CM101在缺血和再灌注损伤时的保护作用。
说明书中提到的所有出版物和专利申请在此引作参考，引用到这样的程度就象每一个单独出版物或专利申请被详细说明和独特地指出的那样被引入参考。
现在全部描述了本发明，很明显对一个本领域普通技术人员来说可进行不背离所附权利要求精神和范围的许多变化和更改。

Claims (16)

1.CM101在制备用于加速患者伤口愈合的药物中的用途。
2.CM101在制备用于加速患者伤口愈合和使疤痕形成减至最小的药物中的用途。
3.CM101在制备用于减少患者伤口周围新血管形成、加速伤口愈合和使疤痕形成减至最小的药物中的用途。
4.权利要求1至3任一项的用途，其中CM101基本上是纯的。
5.权利要求1至3任一项的用途，其中CM101具有至少约90％的纯度。
6.权利要求1至3任一项的用途，其中CM101被配制成非肠道给予患者的形式。
7.权利要求1至3任一项的用途，其中CM101被配制成静脉内给予患者的形式。
8.权利要求1至3任一项的用途，其中CM101被配制成适于在接近伤口部位施用的形式。
9.权利要求1至3任一项的用途，其中CM101被配制成适于在30分钟或更少期间内单次输注给予的形式。
10.权利要求1至3任一项的用途，其中所述患者患有肿瘤。
11.权利要求1至3任一项的用途，其中所述患者未患已知肿瘤。
12.权利要求1至3任一项的用途，其中所述患者至少4天大。
13.权利要求11的用途，其中所述患者至少7天大。
14.权利要求1至3任一项的用途，其中伤口由外伤所致。
15.权利要求1至3任一项的用途，其中伤口由手术所致。
16.权利要求1至3任一项的用途，其中伤口在血管内。
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