CN100369548C - 海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100369548C CN100369548C CNB2006101222762A CN200610122276A CN100369548C CN 100369548 C CN100369548 C CN 100369548C CN B2006101222762 A CNB2006101222762 A CN B2006101222762A CN 200610122276 A CN200610122276 A CN 200610122276A CN 100369548 C CN100369548 C CN 100369548C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- pesticidal compound
- sea
- preparation
- marine actinomycete
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
本发明公开了一种海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用。该化合物是从海洋放线菌南海8号的菌体中提取分离而得到。该杀虫化合物对甜菜夜蛾表现出较高的胃毒和拒食活性，同时也有较好的触杀活性。本发明杀虫化合物对甜菜夜蛾表现出较高的生物活性；并比较系统地研究了对甜菜夜蛾生物活性，为生产上应用提供了理论依据。本发明提取过程简单，为工业提取奠定了基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种杀虫化合物，特别涉及一种从海洋放线菌南海8号的菌丝体中提取分离的杀虫化合物ST及其制备方法和应用。
背景技术
甜菜夜蛾(spoptera exigua Hubner)已成为一种世界性害虫，由于食性杂，可广泛为害蔬菜、花卉、药用作物、牧草等栽培作物，已知寄主多达170种以上。近年来，该虫的危害逐渐加重，尤其在高温期为害十分突出，已成为农业生产上的一种重要害虫。甜菜夜蛾每年可繁殖数代，如福建省每年可繁殖8代，在宾川地区一年发生6～7代，世代重叠。由于在对甜菜夜蛾的防治上仍然主要依赖于大量使用化学农药，加上操作上的不规范，使甜菜夜蛾普遍产生了抗药性，其中对有机磷、拟除虫菊酯类杀虫剂普遍产生抗药性，而且抗性发展较快，抗性水平也相对较高，对氨基甲酸酯类杀虫剂也表现出较高的抗性。甜菜夜蛾对多种药剂产生的抗药性问题是不容忽视的，已在国际上引起了广泛的重视。
寻找新的农用抗生素是当今生物农药研究领域的一个重要课题，从海洋微生物中寻找有杀虫活性的抗生素更是研究的热点。杀虫抗生素作为农用抗生素中最为重要的一个部分在农用抗生素的研究中占据了重要地位。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明的首要目的在于提供一种海洋微生物来源的杀虫化合物ST。该杀虫化合物ST为通过大量的活性筛选从海洋放线菌南海8号菌体中分离纯化得到的活性组分。
本发明的另一目的在于提供上述杀虫化合物ST的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述杀虫化合物ST的应用，该杀虫化合物ST对甜菜夜蛾的较高的生物活性。
本发明所用菌种为海洋放线菌南海8号(atrptomyces sp.GDPPRA NH8)，链霉菌属(Streptomyces)，学名为Streptomyces sp，菌种在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏时间为2006年9月5日，保藏号为CCTCC No：M 206087。
GDPPRA NH8的形态特征为：在高氏一号琼脂培养基上，基丝乳白至黄白色，气丝灰褐色，无可溶性色素。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种海洋微生物来源的杀虫化合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)海洋放线菌南海8号的种子培养：将高氏一号培养基装入茄子瓶中，121℃高压灭菌30mins，取出摆斜面，冷却凝固后在无菌条件下接入菌种，在28℃下培养4～6d，即菌丝和孢子生长成熟。
(2)海洋放线菌南海8号的的发酵培养：将斜面中培养好的菌株制成浓度约为1×107个/ml的孢子悬浮液，取0.2ml孢子悬浮液接入50ml发酵培养基中，30℃160转/分钟连续培养96小时后，将培养好的发酵液过滤，收集菌丝体。
(3)在室温(28±1℃)下将海洋放线菌南海8号的菌丝体用70％乙醇按照W菌丝体∶V70％乙醇为1∶2的比例分别浸提两次，所得菌丝浸取液浓缩至固体浸膏。
(4)将固体浸膏用乙酸乙酯按照W浸膏∶V乙酸乙脂为1∶2比例分别萃取两次，将萃取得到溶液浓缩后得到萃取物。
(5)对萃取物进行真空液相层析(硅胶H，100～200目)，通过甲醇溶剂体系进行洗脱。
(6)将真空液相层析后得到的组分进行硅胶柱层析(硅胶H，100～200目)，通过V甲醇∶V三氯甲烷为1∶4进行洗脱，纯化得到淡黄色片状结晶，即为杀虫化合物。
所述菌种为海洋放线菌南海8号(Strptomyces sp.GDPPRA NH8)，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏时间为2006年9月5日，保藏号为CCTCC No：M 206087。
所述高氏一号培养基优选组成为：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl0.5g，海水精3g，K2HPO4·3H2O 0.66g，FeSO4·7H2O 0.02g，MgSO4·7H2O 1.03g，琼脂16g，PH：7.2～7.4，水1000ml。
所述的发酵培养基组成为：大豆蛋白粉30g，蔗糖40g，海水精3g，CaCO3 2g，KNO3 2g，K2HPO4·3H2O 0.66g，FeSO4·7H2O 0.02g，MgSO4·7H2O 1.03g，PH：7.2～7.4，水1000ml；在121℃高压灭菌半小时。
一种杀虫化合物ST就是通过上述制备方法制备而成。
上述杀虫化合物ST在制备防治甜菜夜蛾的药剂中的应用，该杀虫化合物ST对甜菜夜蛾具有较高的生物活性。
本发明与现有技术相比，其优点和有益效果在于：
1)本发明杀虫化合物ST作为一种新型的杀虫抗生素，对甜菜夜蛾表现出较高的生物活性；并比较系统地研究了对甜菜夜蛾生物活性，为生产上应用提供了理论依据。本发明提取过程简单，为工业提取奠定了基础。
2)本发明杀虫化合物ST本身为一种生物农药，对环境无污染。
本发明的试验证明，杀虫化合物ST对甜菜夜蛾表现出较高的胃毒和拒食活性，同时也有较好的触杀活性。甜菜夜蛾各龄幼虫的胃毒毒力测定结果：2龄幼虫24h、48h和72h的LC50分别为3.02ug/mL、2.34ug/mL和1.42ug/mL，3龄幼虫24h、48h和72h的LC50分别为6.40ug/mL、5.00ug/mL和2.73ug/mL，4龄幼虫24h、48h和72h的LC50分别为10.10ug/mL、5.06ug/mL和3.66ug/mL。ST对甜菜夜蛾3龄幼虫的拒食活性表明浓度为5ug/mL时拒食率在75％以上，对3龄幼虫的触杀活性表明在浓度为100ug/mL时24h、48h和72h死亡率都在90％以上，同时试验结果还表明杀虫化合物ST对三龄幼虫的生长发育有明显的抑制作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的介绍，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：杀虫化合物ST的提取制备
a.海洋放线菌南海8号的种子培养：
改良的高氏一号培养基，其组成为：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl0.5g，海水精3g，K2HPO4·3H2O 0.66g，FeSO4·7H2O 0.02g，MgSO4·7H2O 1.03g，琼脂16g，PH：7.2～7.4，水1000ml；上述培养基配好装入茄子瓶中，121℃高压灭菌30mins，取出摆斜面，冷却凝固后在无菌条件下从菌种保藏砂土小试管中接入菌种(海洋放线菌南海8号)，放在28℃下培养4～6d，即菌丝和孢子生长成熟。
b.海洋放线菌南海8号的发酵培养基：大豆蛋白粉30g，蔗糖40g，海水精3g，CaCO3 2g，KNO3 2g，K2HPO4·3H2O 0.66g，FeSO4·7H2O0.02g，MgSO4·7H2O 1.03g，PH：7.2～7.4，水1000ml；高压灭菌锅121℃下灭菌半小时。
c.海洋放线菌南海8号的发酵培养：将斜面中培养好的菌株(海洋放线菌南海8号)制成孢子悬浮液(浓度约为1×107)，取0.2ml孢子悬浮液接入250ml三角瓶，内装50ml发酵培养基，30℃160转每分钟在摇床上连续培养96小时后取出。
d.将上述培养好的发酵液过滤，收集菌丝体。
e.在室温(28±1℃)下将海洋放线菌南海8号的菌丝体用70％乙醇按照W菌丝体∶V70％乙醇为1∶2的比例分别浸提两次，所得菌丝浸取液浓缩至固体浸膏。
f.将固体浸膏用乙酸乙酯按照W浸膏∶V乙酸乙脂为1∶2比例分别萃取两次，将萃取得到溶液浓缩后得到萃取物。
g.应用砂芯漏斗和真空泵组成真空液相层析仪，对萃取物进行真空液相层析(硅胶H，100～200目)，通过2000ml甲醇溶剂体系进行洗脱。
i.将真空液相层析后得到的组分进行硅胶柱层析(硅胶H，100～200目)，通过V甲醇∶V三氯甲烷为1∶4进行洗脱，纯化得到淡黄色片状结晶，即为杀虫化合物ST。
实施例2
本发明的杀虫化合物ST通过试验，表明杀虫化合物ST对甜菜夜蛾表现出较高的胃毒和拒食活性，同时也有较好的触杀活性。
杀虫化合物ST用丙酮稀释，然后再用V丙酮∶V水＝3∶7进行对半稀释至所需浓度。采用鳞翅目幼虫胃毒毒力测定方法测定对各龄幼虫的活性，采用叶碟法测定拒食活性，采用点滴法测定对甜菜夜蛾的触杀活性。结果如表1、表2和表3所示。
表2 杀虫化合物ST对甜菜夜蛾3龄幼虫的触杀活性
| 有效成分浓度(ug/ml) | 24h死亡率(％) | 48h死亡率(％) | 72h死亡率(％) |
| 100.0050.0025.0012.50 | 91.04±1.4368.48±2.4456.06±2.1427.76±9.50 | 96.56±1.7472.82±2.4063.09±1.0241.70±9.51 | 99.84±0.1678.67±1.1563.09±1.2346.19±9.50 |
| 6.25空白对照 | 4.85±2.890.00±0.00 | 7.90±3.550.00±0.00 | 12.47±3.771.67±1.66 |
表1 杀虫化合物ST对甜菜夜蛾各龄幼虫的胃毒作用
| 处理 | 回归方程 | 相关系数 | LC50(ug/ml) | LC95(ug/ml) | 0.05置信区域 | |
| 2龄 | 24h48h72h | Y＝2.7169+4.7555XY＝3.5829+3.8381XY＝4.5707+2.8351X | 0.93260.97930.9556 | 3.022.341.42 | 6.706.285.39 | 2.67～3.411.90～2.891.09～1.84 |
| 3龄 | 24h48h72h | Y＝3.3169+2.0883XY＝2.9239+2.9687XY＝3.7845+2.7865X | 0.98400.98440.9607 | 6.405.002.73 | 39.2317.9210.63 | 4.94～8.283.87～6.472.04～3.66 |
| 4龄 | 24h48h72h | Y＝2.8713+2.1197XY＝3.1771+2.5883XY＝3.5931+2.4956X | 0.96400.98220.9736 | 10.105.063.66 | 60.2921.8716.71 | 7.80～13.084.06～6.312.78～4.82 |
表3 杀虫化合物ST对甜菜夜蛾3龄幼虫的拒食活性
| 有效浓度(ug/ml) | 24h拒食活性 | 48h拒食活性 | ||||
| 平均取食面积(mm<sup>2</sup>/头) | 拒食率(％) | 死亡率(％) | 平均取食面积(mm<sup>2</sup>/头) | 拒食率(％) | 死亡率(％) | |
| 20.0010.005.002.501.25空白对照 | 3.90±0.597.50±0.299.77±0.3916.50±1.0416.47±2.5028.57±2.69 | 86.36±2.3573.78±1.0165.85±1.3742.31±3.6442.42±8.75 | 65.5046.7026.7020.007.000.00 | 4.30±0.668.27±0.3714.10±1.0822.10±2.2026.57±2.4759.60±3.37 | 92.79±1.1086.13±0.6276.34±1.8162.92±3.6955.43±4.15 | 100.0080.0066.7050.3033.336.67 |
实施例3
采用胃毒作用方法在低剂量下观察杀虫化合物ST对甜菜夜蛾三龄幼虫生长发育状况，成虫采用10％蜂蜜和不同浓度化合物ST粗品稀释液饲喂，观察对成虫的影响。
试验结果表明：杀虫化合物ST能明显降低甜菜夜蛾的化蛹率，并随着浓度的增加其雌雄性比明显增高。杀虫化合物ST对甜菜夜蛾成虫产卵量和雌雄成虫寿命有显著的抑制作用。结果如表4和表5所示。
表4 杀虫化合物ST对三龄幼虫化蛹、蛹重、羽化及雌雄性比的影响
| 药剂浓度(ug/m1) | 化蛹率(％) | 蛹重(mg) | 羽化率(％) | 雌雄性比 |
| 4.02.01.00.5CK | 28.89±1.1142.22±4.0145.56±2.9463.33±3.3380.00±5.77 | 85.5±6.285.6±2.991.1±6.792.2±2.2100.1±5.2 | 92.59±3.7090.00±5.0992.62±0.4991.27±1.6592.97±1.56 | 0.53±0.070.91±0.381.22±0.391.11±0.370.55±0.06 |
表5 杀虫化合物ST对成虫产卵量和寿命的影响
| 处理(ug/mL) | 产卵量 | 雌虫寿命 | 雄虫寿命 |
| 10.05.02.5清水10％蜂蜜 | 26.0±6.2776.0±14.20184.0±12.72309.6±22.11625.2±29.11 | 4.3±0.265.0±0.355.4±0.246.2±0.168.4±0.16 | 3.5±0.134.0±0.204.6±0.325.6±0.247.4±0.44 |
从试验结果看出，本发明的杀虫化合物ST通过试验表明对甜菜夜蛾表现出较高的胃毒和拒食活性，同时也有较好的触杀活性。杀虫化合物ST能明显降低甜菜夜蛾的化蛹率，并随着浓度的增加其雌雄性比明显增高。杀虫化合物ST对甜菜夜蛾成虫产卵量和雌雄成虫寿命有显著的抑制作用。甜菜夜蛾为蔬菜上重要害虫，杀虫化合物ST作为一种新颖的活性化合物对甜菜夜蛾表现较高的生物杀虫活性，是一种新型的特效生物农药。
Claims (3)
1.一种海洋微生物来源的杀虫化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)海洋放线菌南海8号的种子培养：将改良的高氏一号培养基装入茄子瓶中，121℃高压灭菌30mins，取出摆斜面，冷却凝固后在无菌条件下接入菌种，在28℃下培养4～6d；
(2)海洋放线菌南海8号的的发酵培养：将斜面中培养好的菌株制成浓度为1×107个/ml的孢子悬浮液，取0.2ml孢子悬浮液接入50ml发酵培养基中，30℃ 160转/分钟连续培养96小时后，将培养好的发酵液过滤，收集菌丝体；
(3)在室温下将海洋放线菌南海8号的菌丝体用70％乙醇按照W菌丝体∶V70％乙醇为1∶2的比例分别浸提两次，所得菌丝浸取液浓缩至固体浸膏；
(4)将固体浸膏用乙酸乙酯按照W浸膏∶V乙酸乙脂为1∶2比例分别萃取两次，将萃取得到溶液浓缩后得到萃取物；
(5)对萃取物进行真空液相层析，通过甲醇溶剂体系进行洗脱；
(6)将真空液相层析后得到的组分进行硅胶柱层析，通过V甲醇∶V三氯甲烷为1∶4进行洗脱，纯化得到淡黄色片状结晶，即为杀虫化合物；
所述步骤(1)中菌种为海洋放线菌南海8号即Strptomyces sp.GDPPRANH8，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏时间为2006年9月5日，保藏号为CCTCC No：M 206087；
所述改良的高氏一号培养基的组成为：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl0.5g，海水精3g，K2HPO4·3H2O 0.66g，FeSO4·7H2O 0.02g，MgSO4·7H2O1.03g，琼脂16g，PH：7.2～7.4，水1000ml；
所述的发酵培养基组成为：大豆蛋白粉30g，蔗糖40g，海水精3g，CaCO32g，KNO3 2g，K2HPO4·3H2O 0.66g，FeSO4·7H2O 0.02g，MgSO4·7H2O1.03g，PH：7.2～7.4，水1000ml；121℃高压灭菌半小时。
2.一种海洋微生物来源的杀虫化合物，通过权利要求1所述的制备方法制备而成。
3.权利要求2所述的海洋微生物来源的杀虫化合物在制备防治甜菜夜蛾的药剂中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006101222762A CN100369548C (zh) | 2006-09-21 | 2006-09-21 | 海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006101222762A CN100369548C (zh) | 2006-09-21 | 2006-09-21 | 海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1923008A CN1923008A (zh) | 2007-03-07 |
| CN100369548C true CN100369548C (zh) | 2008-02-20 |
Family
ID=37815971
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2006101222762A Expired - Fee Related CN100369548C (zh) | 2006-09-21 | 2006-09-21 | 海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100369548C (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101790995B (zh) * | 2010-02-08 | 2012-07-04 | 广东省农业科学院植物保护研究所 | 一种防治花生根结线虫的生物制剂及其制备方法与应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1318642A (zh) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | 财团法人生物技术开发中心 | 新的链霉菌菌株及其相关用途 |
| CN1443842A (zh) * | 2002-03-08 | 2003-09-24 | 武汉东湖高新集团股份有限公司 | 一种新抗生素链霉菌及制备方法 |
| CN1443843A (zh) * | 2002-03-08 | 2003-09-24 | 武汉东湖高新集团股份有限公司 | 玫瑰紫链霉菌玫瑰红变种及制备方法 |
-
2006
- 2006-09-21 CN CNB2006101222762A patent/CN100369548C/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1318642A (zh) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | 财团法人生物技术开发中心 | 新的链霉菌菌株及其相关用途 |
| CN1443842A (zh) * | 2002-03-08 | 2003-09-24 | 武汉东湖高新集团股份有限公司 | 一种新抗生素链霉菌及制备方法 |
| CN1443843A (zh) * | 2002-03-08 | 2003-09-24 | 武汉东湖高新集团股份有限公司 | 玫瑰紫链霉菌玫瑰红变种及制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 油茶饼病外担菌分生孢子阶段分离培养及培养基的筛选. 王文龙等.湖南文理学院学报(自然科学版)，第16卷第1期. 2004 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101790995B (zh) * | 2010-02-08 | 2012-07-04 | 广东省农业科学院植物保护研究所 | 一种防治花生根结线虫的生物制剂及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1923008A (zh) | 2007-03-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0335796A (ja) | 環状デプシペプチド物質およびその製造法、ならびにそれを含有する駆虫剤 | |
| CN102177921B (zh) | 一种复合生防制剂及其制备方法和应用 | |
| CN104430407A (zh) | 四霉素p在抑制黄瓜立枯病菌和番茄灰霉病菌中的应用 | |
| CN103360351A (zh) | 异海松烷二萜化合物及其应用 | |
| CN102676393B (zh) | 产多杀菌素刺糖多孢菌及其培养和应用 | |
| CN104342388A (zh) | 链霉菌菌株及其防治番茄枯萎病联合应用 | |
| CN100369548C (zh) | 海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用 | |
| CN104450835A (zh) | 一种新化合物的制备方法 | |
| CN100467472C (zh) | 大环内酯类化合物的制备方法 | |
| CN113817008B (zh) | 新型琥珀酰基十六元大环内酯的制备方法及用途 | |
| CN105505825A (zh) | 一种产抗生素的链霉菌txaf2及其应用 | |
| CN109122727A (zh) | 胶孢炭疽菌bwh-1在制备除草剂中的应用 | |
| CN111153797B (zh) | 一种杀线虫活性物质及其制备方法和用途 | |
| CN101857842A (zh) | 一种能产广谱抗生素的绿僵菌gyya0601菌株及其用途 | |
| CN107722032B (zh) | 一种具有斜纹夜蛾毒杀活性的酸酐类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN101720789B (zh) | 含有瑞卡丁素的苔藓提取物及其制备方法与应用 | |
| CN100497595C (zh) | 一种土壤放线菌发酵液的提取物及其制备方法和应用 | |
| CN1312144C (zh) | 一类具有毒杀线虫活性的化合物的应用 | |
| CN104161048B (zh) | 尤韦可拟盘多毛孢代谢产物在防治辣椒疫霉菌中的应用 | |
| CN101619292B (zh) | 具有杀虫活性物质的内生菌及其在生防中的应用 | |
| CN102168030B (zh) | 一种醉马草内生菌荧光假单胞菌及其用于蚜虫病害生防中的应用 | |
| KR100447044B1 (ko) | 오발리신을 함유하는 식물역병 방제용 조성물 | |
| KR101482322B1 (ko) | 방선균 추출물을 포함하는 잔토모나스속 병원균에 대한 억제용 조성물 | |
| CN103409323B (zh) | 绞股蓝内生真菌及其用途 | |
| CN105462859B (zh) | 一种用于防治烟蚜的枝顶孢霉菌株 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |