CN100348094C

CN100348094C - 一种奶牛隐性乳房炎的诊断试剂

Info

Publication number: CN100348094C
Application number: CNB2005100416164A
Authority: CN
Inventors: 马云; 昝林森; 董书伟; 杨亚军; 侯义宏; 李芬
Original assignee: Northwest A&F University
Current assignee: Northwest A&F University
Priority date: 2005-01-10
Filing date: 2005-01-10
Publication date: 2007-11-14
Anticipated expiration: 2025-01-10
Also published as: CN1631120A

Abstract

本发明公开了一种奶牛隐性乳房炎诊断试剂，该试剂含有重量比的十二烷基苯磺酸钠73%-79%、一乙醇胺13%-17%、月桂酸-乙醇酰胺5%-9%、次氯酸钠1%-3%、硫酸钠2%-5%、其原料的总和为100%。其制备方法是：将次氯酸钠预先与水配制成含有次氯酸钠10%的水溶液，并在塑料桶内按比例加入十二烷基磺酸钠、硫酸钠和水，搅拌混合，使其全溶；再加入次氯酸钠水溶液，继续搅拌混合30分钟；用另一容器，将月桂酸-乙醇酰胺和一乙醇胺加水，加热搅拌，使其完全溶解；待塑料桶内十二烷基苯磺酸钠溶液完全漂白后，加入月桂酸-乙醇酰胺和一乙醇胺配成的溶解液后充分搅拌即可。本试剂制备和应用操作简便、成本低廉，适合在个体散养农户及中小型奶牛养殖场推广。

Description

一种奶牛隐性乳房炎的诊断试剂

技术领域

本发明属于畜牧兽医领域，具体涉及一种奶牛隐性乳房炎的诊断试剂，暂定名为YMT(杨凌乳房炎检测法Yangling Mastitis Test，YMT)。

背景技术

随着“奶业发展工程”、“学生饮用奶计划”、“豆奶工程”等重大举措的实施，我国奶业得到了快速发展，奶牛饲养量大幅度增加，推动了乳品加工业的迅猛发展，促进了人民生活水平的提高。但是奶牛的某些疾病也接踵而来，其中奶牛乳房炎是对乳品业影响最大、危害最严重的主要疾病之一。它不仅使奶产量的降低，乳品质的改变，甚至导致奶牛的泌乳机能的丧失，从而降低养殖场的经济效益；同时，临床上大量使用抗生素治疗乳房炎，引起的药物残留又危及乳制品的食用安全，危害人类健康。由此可见，隐性乳房炎对奶牛养殖业影响是相当巨大的。如果能及时发现患病牛，就能尽早采取必要的措施，控制病情发展，将损失减少到最低程度。而奶牛隐性乳房炎由于其缺乏明显的临床症状，给诊断工作带来了很大的困难，加上管理者常常忽视隐性疾病的控制，所以奶牛隐性乳房炎一直是困扰着奶牛业经济效益及其迅速发展的主要原因之一。

目前国内外对奶牛隐性乳房炎的检测主要有以下几种方法：1.乳汁细胞学检查，具体又分为直接计数法和间接计数法；直接计数法有DHI、电子计数法、直接显微镜细胞计数法；间接计数法有CMT(加州乳房炎实验)，与其相似的有LMT(兰州)、HMT(杭州)、BMT(北京)、SMT(上海)，JMT(吉林)等，还有4％苛性钠凝乳法、过氧化氢玻片法、威斯康辛乳试验(简称W.M.T)、尼氏法(简称N.E.T)；2.乳汁pH检查法，有BTB法和酒精凝乳法；3.乳汁氯化钠检查法，有硝酸银试验、AHI乳房炎检测仪(新西兰研制)、SX-1型CN乳房炎检测仪(山西农大)、XND-A型乳房炎检测仪(西北农大)、86-1型乳腺炎诊断仪(西南民族学院)和乳房炎全自动检测仪(澳大利亚)；4.乳汁病原微生物检查，对乳汁病原菌进行培养、鉴定及药敏试验；5.其它化学检查法，有BPB试管法、BPB试纸法。但上述方法由于成本高，技术要求高只适合大规模奶牛场，对于中小型奶牛场及个体散养农户的应用上述方法存在如环境、卫生条件方面等问题。而目前个体散养农户是中国奶牛养殖业的主体和原料奶生产的主要经营形式。广大养殖户一直要求有关部门或单位能够提供比较简便容易、成本低廉，适合在个体散养农户及中小型奶牛养殖场推广的隐性乳房炎的检测方法，对于及早诊断及治疗奶牛隐性乳房炎，降低其给奶牛生产造成的巨大损失有着非常重要的实际意义。

经过申请人所进行所资料检索，和本发明相关的有以下参考文献：

[1]温速新摘译.奶牛乳腺炎金葡菌血清型的分离鉴定[J].中国奶牛，2002，(2)。

[2]储明星.奶牛乳房炎的危害及其发生规律与防治[J].中国奶牛，1999，(4)：55～56。

[3]杨龙骐，沈永恕，彭义等.乳房炎防治研究进展[C].郑州牧业工程高等专科学校学报，2001，(3)。

[4]王应安，张才骏.奶牛隐性乳房炎调查[J].青海畜牧兽医杂志，1988，(6)。

[5]杨勇.青海某奶牛场隐性乳房炎调查[J].青海畜牧兽医杂志，1999，(6)：30～32。

[6]Dr M T Bond.乳房炎的预防.中国奶业协会网-奶业论坛。

[7]董德宽，等.关于牛奶中的体细胞[J].乳业科学与技术，2002，(3)：18～23。

[8]甘肃农业大学主编.兽医产科学(第二版)[M].中国农业出版社，1990，253～267。

[9]唐淑珍等，利用体细胞计数监控乳房炎[J].中国奶牛，1999，(4)：45～46。

[10]母安雄等，奶牛乳房炎抗生素防治失败原因探讨[J].中国兽医杂志，2002，(2)：18～20。

[11]何洪智，乳牛隐性乳腺炎的诊断和治疗[J].中国兽医科技，1998，(6)：31～32。

[12]萧乾庆等，奶牛隐性乳房炎的诊治试验[J].中国奶牛，1997，(4)：17～18。

[13]张淼涛等，复方中草药对乳牛隐性乳房炎细胞免疫力的影响[J].中国兽医科技，2001，(1)：24～25。

发明内容

针对SCC或CMT、LMT等隐性乳房炎检测方法的诊断试剂费用高、在中小型奶牛养殖场和散养农户中推广难的缺陷或不足，本发明的目的在于提供一种诊断比较简便、成本低廉，适合在个体散养农户及中小型奶牛养殖场推广应用的奶牛隐性乳房炎的诊断试剂。

实现上述目的的技术解决方案是，一种奶牛隐性乳房炎的诊断试剂，其特征在于该诊断试剂包含以下重量百分比的原料：十二烷基苯磺酸钠73％-79％、一乙醇胺13％-17％、月桂酸-乙醇酰胺5％-9％、次氯酸钠1％-3％、硫酸钠2％-5％、上述原料的总和为100％。

上述奶牛隐性乳房炎的诊断试剂制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

1)将次氯酸钠预先与水配制成含有次氯酸钠10％的水溶液，并在一容器内加入配方量的十二烷基磺酸钠、硫酸钠和水搅拌混合，使其充分溶解；

2)加入预先配制的含有次氯酸钠10％的水溶液，继续搅拌混合30分钟；

3)用另一容器将配方量的月桂酸-乙醇酰胺和一乙醇胺并加水混合，加热并搅拌，便其完全溶解为止；

4)待容器内十二烷基苯磺酸钠溶液完全漂白后，加入步骤3)配成的溶液充分搅拌即可。

本发明的奶牛隐性乳房炎的诊断试剂(以下称诊断试剂YMT)和LMT、SMT等诊断液的诊断机理相同，都是通过间接体细胞计数判断奶牛是否患有隐性乳房炎，但是本诊断试剂YMT诊断成本低，更适合在中小规模奶牛场和散养农户中推广使用。奶牛在患隐性乳房炎时，牛奶中的体细胞(由巨噬细胞、淋巴细胞、多形核嗜中性白细胞和少量乳腺上皮细胞等组成)，数目急剧增高。即乳中体细胞在阴离子表面活性物质和碱性药物作用下，脂类物质乳化，细胞膜被破坏后释放出DNA，DNA与诊断试剂YMT作用，使乳汁产生沉淀或形成凝胶状。根据沉淀或凝胶的多少，间接判定体细胞数的范围。

具体实施方式

按照上述方案，本发明的诊断试剂的原料为：十二烷基苯磺酸钠19.5g、一乙醇胺4g、月桂酸-乙醇酰胺1.5g、次氯酸钠0.6g、硫酸钠1.1g、水250ml；具体制备方法包括以下步骤：

(1)将0.6g的次氯酸钠预先与水配制成含有次氯酸钠10％的水溶液；

于塑料桶内，加入配方量的十二烷基磺酸钠、硫酸钠和水200ml，搅拌混合，使其全部溶解。

(2)加入预先配制的次氯酸钠10％的水溶液，继续搅拌混合30分钟。

(3)用另一容器，将配方量的月桂酸一乙醇酰胺和一乙醇胺加入剩余水共同加热搅拌，直至完全溶解。

(4)待塑料桶内十二烷基苯磺酸钠溶液完全漂白后，加入(3)配成的溶液充分搅拌即可。

使用方法：

取2ml新鲜乳样放入表面皿中，然后加入2ml诊断试剂YMT，缓缓做同心圆转动10-15秒，立即观察变化，并根据诊断标准判出结果。其诊断标准见下表1：

表1 诊断试剂YMT诊断奶牛隐性乳房炎标准 (万/ml)

显性程度	体细胞数范围	判定依据
显性程度	体细胞数范围	判定依据	阴性(-)	0-20	混合物呈液状，倾斜检验盘时，液体移动流畅，盘底无沉淀物。
可疑(±)	20-75	混合物呈液状，倾斜检验盘时，盘底有微量沉淀。	阴性(-)	0-20	混合物呈液状，倾斜检验盘时，液体移动流畅，盘底无沉淀物。
可疑(±)	20-75	混合物呈液状，倾斜检验盘时，盘底有微量沉淀。	弱阳性(+)	50-100	盘底出现少量稀薄性粘性沉淀，但不成胶状，倾斜检验盘时，沉淀物散布于杯底，有一定的粘附性。
阳性(++)	80-500	盘底沉淀物量较多，较粘稠，并有少量胶状物；倾斜检验盘时，沉淀物有明显粘附于盘底而难以流动现象；旋转摇动时，沉淀物有聚中心倾向。	弱阳性(+)	50-100	盘底出现少量稀薄性粘性沉淀，但不成胶状，倾斜检验盘时，沉淀物散布于杯底，有一定的粘附性。
阳性(++)	80-500		强阳性(+++)	350以上	盘内混合物的大部分或全部形成明显胶状，几乎完全粘附于盘底，旋转检验盘时，凝集物聚中心呈团块状难以散开。

发明效果

用本发明的诊断试剂YMT和LMT对274个乳样进行了诊断，并将其诊断结果进行了对比。结果显示本发明的诊断液YMT与LMT的阳性符合率为97.37％。统计学分析表明该诊断液YMT可以在实际生产中代替LMT推广应用。274个乳样的诊断结果见下表2。

表2 YMT-I、YMT-II与LMT、SCC结果符合率统计表(％)

诊断液	LMT			SCC
	LMT			SCC			阳性符合率	阴性符合率	可疑符合率	阳性符合率	阴性符合率	可疑符合率
	YMT-I	97.37	90.91	77.78	96.77	90.00	阳性符合率	阴性符合率	可疑符合率	阳性符合率	阴性符合率	可疑符合率	41.18
YMT-II	YMT-I	97.37	90.91	77.78	96.77	90.00	97.37	90.91	66.67	96.77	90.00	35.29	41.18
YMT-II	LMT	-	-	-	96.77	90.00	97.37	90.91	66.67	96.77	90.00	35.29	41.18

注：YMT-I、YMT-II分别为不同浓度的诊断液LMT为国内常用的兰州乳房炎检测法

上述是发明人给出的一个实际的例子，申请人在多次实验中总结出了本发明的配方，在配方范围内均可实现本发明的目的。

综上所述，本发明的诊断试剂YMT可以代替LMT对奶牛进行定期诊断，监控乳房炎的发生，尽早发现患病牛，以便采取相应的治疗措施，减少奶损失，增加饲养的经济效益，而且其诊断试剂YMT的成本低廉，更容易使中小型奶牛养殖场和散养农户接受，有利于推广使用，具有很重大的实用价值和现实意义。

Claims

1.一种奶牛隐性乳房炎的诊断试剂，其特征在于该诊断试剂的液体中含有以下重量百分比的原料：十二烷基苯磺酸钠73％-79％、-乙醇胺13％-17％、月桂酸-乙醇酰胺5％-9％、次氯酸钠1％-3％、硫酸钠2％-5％，上述原料的总和为100％。

2.权利要求1所述的奶牛隐性乳房炎的诊断试剂制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

1)将次氯酸钠预先与水配制成含有次氯酸钠10％的水溶液，并在一容器内加入配方量的十二烷基磺酸钠、硫酸钠和水200ml搅拌混合，使其充分溶解；

3)用另一容器将配方量的月桂酸-乙醇酰胺和一乙醇胺并加水50ml混合，加热并搅拌，使其完全溶解为止；

4)待步骤1)的容器内十二烷基苯磺酸钠溶液完全漂白后，加入步骤3)配成的溶液充分搅拌即可。