CH659827A5

CH659827A5 - METHOD FOR ISOLATING L-AMINO ACIDS.

Info

Publication number: CH659827A5
Application number: CH8884A
Authority: CH
Inventors: Masaharu Ohoka; Yukihiro Yoshikawa; Nobuyuki Kawashima; Nobuhiro Kawashima; Syosuko Nagai; Takao Takano
Original assignee: Mitsui Toatsu Chemicals
Priority date: 1982-08-11
Filing date: 1984-01-06
Publication date: 1987-02-27
Also published as: DE3400574A1; JPH0453509B2; GB2152030B; AU2284083A; DE3400574C2; JPS5928484A; FR2557872A1; NL8304496A; FR2557872B1; GB2152030A; AU567903B2; CA1215069A; GB8334070D0

Description

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PATENTANSPRUCH Verfahren zur Isolierung einer L-Aminosäure aus einer Reaktionsmischung, die die L-Aminosäure und einen Mikroorganismus enthält, und welche durch die Herstellung der L-Aminosäure unter Verwendung des Mikroorganismus erhalten wurde, dadurch gekennzeichnet, dass die Reaktionsmischung mit einem stark sauren Kationenaustauscherharz des H-Types behandelt wird, wobei die L-Aminosäure in gelöstem Zustand bleibt. Claim for a method for isolating an L-amino acid from a reaction mixture containing the L-amino acid and a microorganism, and which was obtained by producing the L-amino acid using the microorganism, characterized in that the reaction mixture is treated with a strongly acidic cation exchange resin H-types is treated, whereby the L-amino acid remains in the dissolved state.

Diese Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren der wirkungsvollen Isolierung einer T.-Aminosäure aus einer Reaktionsmischung, die die L-Aminosäure und einen Mikroorganismus enthält, die durch die Herstellung von L-Aminosäure durch die Verwendung des Mikroorganismus erhalten wurde. This invention relates to a method of effectively isolating a T. amino acid from a reaction mixture containing the L-amino acid and a microorganism obtained by producing L-amino acid by using the microorganism.

Es sind schon viele Verfahren zur Isolierung von L-Aminosäure aus einer L-Aminosäure enthaltenden Reaktionsmischung, die durch Verwendung eines Mikroorganismus erzeugt wurde, bekannt, worin Ionenaustauscherharze zum Einsatz kommen. Beispielsweise sind die folgenden Verfahren bekannt: Die Trennung von basischen Aminosäuren durch Kationenaustauscherharze des Carbonsäuretypes (US-A- 2 549 378), die Trennung von sauren Aminosäuren durch schwach basische Anionenaustauscherharze (D.T. Eaglis and H.A. Fiess: Ind. Eng. Chem., Vol. 36, 604,1944; R.K. Cannan, J. Biol. Chem., Vol. 152, 401, 1944), und die Trennung von Aminosäuren unter Verwendung von stark basischen Kationenaustauscherharzen des H-Types oder stark basische Anionenaustauscherharze des OH-Types (S.M. Par-tridge and R.C. Blimeley, Biochem. J., Vol. 51, 628, 1952). Many methods for isolating L-amino acid from a reaction mixture containing L-amino acid, which was generated by using a microorganism, are known, in which ion exchange resins are used. For example, the following methods are known: the separation of basic amino acids by cation exchange resins of the carboxylic acid type (US Pat. No. 2,549,378), the separation of acidic amino acids by weakly basic anion exchange resins (DT Eaglis and HA Fiess: Ind. Eng. Chem., Vol . 36, 604, 1944; RK Cannan, J. Biol. Chem., Vol. 152, 401, 1944), and the separation of amino acids using strongly basic cation exchange resins of the H type or strongly basic anion exchange resins of the OH type ( SM Par-tridge and RC Blimeley, Biochem. J., Vol. 51, 628, 1952).

Für die industrielle Isolierung von Reaktionsprodukten durch Ionenaustauscherharze beschreibt die JP-A-5050/1964 ein Verfahren, das dadurch gekennzeichnet ist, dass ein polymères Ausflockungsmittel des Polyamidtypes zu einer Lösung, welche ein Saccharid und eine Aminosäure enthält, gegeben wird, um die Unreinheiten auszuflocken und auszufällen, und sie an einem Ionenaustauscherharz zu reinigen; und die JP-A-21105/1973 beschreibt ein Verfahren zur Gewinnung einer gemischten Aminosäurelösung, welche L-Trypto-phan enthält, durch ein Ionenaustauscherharz des Sulfon-säuretypes, welche einen Vernetzungsgrad, dargestellt durch den DVB-Gehalt, von nicht mehr als 6% aufweist. For the industrial isolation of reaction products by ion exchange resins, JP-A-5050/1964 describes a method which is characterized in that a polymeric flocculant of the polyamide type is added to a solution containing a saccharide and an amino acid in order to flocculate the impurities and precipitate and purify them on an ion exchange resin; and JP-A-21105/1973 describes a process for obtaining a mixed amino acid solution containing L-tryptophan by a sulfonic acid type ion exchange resin having a degree of crosslinking represented by the DVB content of not more than 6 % having.

Diese älteren Verfahren haben sich jedoch nicht als befriedigend für die industrielle Produktion von Aminosäuren erwiesen, da in diesen Methoden vor der Reinigung durch die Ionenaustauscherharze die Entfernung der verwendeten Mikroorganismen von der Reaktionsmischung erforderlich ist, beispielsweise durch Zentrifugation, Ausflockung und Ausfällung durch Zugabe eines polymeren Flockungsmittels, Filtration auf einer Ultrafiltrationsmembrane etc., und viel Arbeit musste in die Entfernung des Mikroorganismus gesteckt werden. However, these older processes have not proven to be satisfactory for the industrial production of amino acids, since in these methods the microorganisms used have to be removed from the reaction mixture, for example by centrifugation, flocculation and precipitation by adding a polymeric flocculant, before the purification by the ion exchange resins , Filtration on an ultrafiltration membrane, etc., and a lot of work had to be done to remove the microorganism.

Aufgabe dieser Erfindung ist es, ein Verfahren zur wirkungsvollen Gewinnung einer L-Aminosäure aus einer L-aminosäurehaltigen Reaktionsmischung, die durch Verwendung eines Mikroorganismus erhalten wurde, zur Verfügung zu stellen. The object of this invention is to provide a process for the effective recovery of an L-amino acid from a reaction mixture containing L-amino acid, which was obtained by using a microorganism.

Gegenstand der Erfindung ist das im Patentanspruch definierte Verfahren. The invention relates to the method defined in the claim.

Das erfindungsgemässe Verfahren wird durchgeführt, indem die L-aminosäurehaltige Reaktionsmischung direkt mit einem stark sauren Kationenaustauscherharz des H-Types behandelt wird. Dieses Verfahren erlaubt die gleichzeitige The process according to the invention is carried out by treating the L-amino acid-containing reaction mixture directly with a strongly acidic cation exchange resin of the H type. This procedure allows simultaneous

Entfernung des in der Reaktion verwendeten Mikroorganismus und die Isolierung der erhaltenen L-Aminosäure. Removal of the microorganism used in the reaction and isolation of the L-amino acid obtained.

Das Grundprinzip der vorliegenden Erfindung besteht darin, dass wenn ein L-aminosäurehaltiges Reaktionsge-5 misch, das einen Mikroorganismus enthält, durch eine Schicht eines stark sauren Kationenaustauschers des H-Types fliesst, um die L-Aminosäure an der Harzschicht zu adsorbieren, sie zu isolieren und zu reinigen, der in der Reaktionsmischung gelöste oder suspendierte Mikroorganismus io durch den Kontakt mit dem Ionenaustauscherharz ausgeflockt wird und leicht durch Waschen des Harzes mit Wasser entfernt werden kann. Die Ausflockung des Mikroorganismus findet vermutlich statt, weil der im Wasser gelöste oder suspendierte Mikroorganismus, der mit dem stark sauren 15 Kationenaustauscherharz des H-Types in Kontakt kommt, durch die Sulfonsäuregruppen am Ionenaustauscherharz modifiziert wird. The basic principle of the present invention is that when an L-amino acid-containing reaction mixture containing a microorganism flows through a layer of a strongly acidic cation exchanger of the H type to adsorb the L-amino acid on the resin layer, it is added isolate and clean, the microorganism dissolved or suspended in the reaction mixture is flocculated by contact with the ion exchange resin and can be easily removed by washing the resin with water. The flocculation of the microorganism presumably takes place because the microorganism dissolved or suspended in water, which comes into contact with the strongly acidic cation exchange resin of the H type, is modified by the sulfonic acid groups on the ion exchange resin.

Das Verfahren dieser Erfindung findet Anwendung auf eine Reaktionsmischung, die einen Mikroorganismus und ei-20 ne L-Aminosäure enthält, die durch die Herstellung der L-Aminosäure unter Verwendung des Mikroorganismus erhalten wurde (wird zur Vereinfachung nachstehend auch als «Aminosäurereaktionsgemisch» bezeichnet). The process of this invention is applied to a reaction mixture containing a microorganism and a 20-ne L-amino acid obtained by producing the L-amino acid using the microorganism (hereinafter also referred to as "amino acid reaction mixture" for convenience).

Beispiele einer solchen Aminosäurereaktionsmischung 25 umfassen eine L-Tryptophan enthaltende Reaktionsmischung, hergestellt aus DL-Serin und Indol in Gegenwart von Escherichia coli Pseudomonas putida; eine L-Trypto-phan enthaltende Reaktionsmischung, hergestellt aus L-Se-rin und Indol in Gegenwart von Escherichia coli; eine L-3o Tryptophan enthaltende Reaktionsmischung, erhalten unter Verwendung von Anthralinsäure als Vorläufer in Gegenwart von Bacillus subtilis; eine L-Tryptophan enthaltende Reaktionsmischung, hergestellt aus Indol. Brenz-Traubensäure und Ammoniak in Gegenwart von Aerobacter aerogenes; ei-35 ne L-Tryptophan enthaltende Reaktionsmischung, hergestellt aus Indol. Serin und Glukose unter Verwendung eines Bakteriums des Genus Aerobacterium; eine L-Serin enthaltende Reaktionsmischung, hergestellt in einem Glycin enthaltenden Kulturmedium, das Methanol als Kohlenstoff-40 quelle enthält, unter Verwendung eines Methanol verwendenden Mikroorganismus des Genus Aeromonas, Aerobacter oder Pseudomonas; und eine L-Serin enthaltende Reaktionsmischung, hergestellt in einem Glycin enthaltenden Kulturmedium in Gegenwart des Mikroorganismus des Ge-45 nus Nocardia. Dies sind nur Erläuterungen, und das erfindungsgemässe Verfahren kann breit auf die Reinigung von allen L-Aminosäurereaktionsmischungen, die durch die Verwendung von Mikroorganismen erhalten wurden, angewendet werden. Examples of such an amino acid reaction mixture 25 include a reaction mixture containing L-tryptophan, made from DL-serine and indole in the presence of Escherichia coli Pseudomonas putida; a reaction mixture containing L-tryptophan, prepared from L-serine and indole in the presence of Escherichia coli; a reaction mixture containing L-30 tryptophan obtained using anthralinic acid as a precursor in the presence of Bacillus subtilis; a reaction mixture containing L-tryptophan, made from indole. Pyruvic acid and ammonia in the presence of Aerobacter aerogenes; e-35 ne L-tryptophan-containing reaction mixture made from indole. Serine and glucose using a bacterium of the genus Aerobacterium; an L-serine-containing reaction mixture prepared in a glycine-containing culture medium containing methanol as a carbon source using a methanol-using microorganism of the genus Aeromonas, Aerobacter or Pseudomonas; and a reaction mixture containing L-serine, prepared in a culture medium containing glycine in the presence of the microorganism of Ge-45 nus Nocardia. These are only explanations, and the method according to the invention can be widely applied to the purification of all L-amino acid reaction mixtures obtained by using microorganisms.

so Beispiele der stark sauren Kationenaustauscherharze des H-Types, welche im erfindungsgemässen Verfahren verwendet werden, sind Lewatit sp-120 (Warenname der Bayer AG), Lewatit sc-102 (Warenname der Bayer AG), Diaion pk-208 (Warenname von Mitsubishi Chemical Co., Ltd.), 55 Diaion sk-102 (Warenname von Mitsubishi Chemical Co., Ltd.), und Amberlite XE-100 (Warenname von Rohm & Haas Co.). Examples of the strongly acidic cation exchange resins of the H type which are used in the process according to the invention are Lewatit sp-120 (trade name of Bayer AG), Lewatit sc-102 (trade name of Bayer AG), Diaion pk-208 (trade name of Mitsubishi Chemical Co., Ltd.), 55 Diaion sk-102 (trademark of Mitsubishi Chemical Co., Ltd.), and Amberlite XE-100 (trademark of Rohm & Haas Co.).

Die Aminosäurereaktionsmischung, entweder als solche oder wenn die Aminosäure in Form von Kristallen ausge-6o schieden wird, nach Verdünnen mit Wasser bei Zimmertemperatur bis zur vollständigen Auflösung wird in der Regel durch eine Schicht eines zur H-Form regenerierten Kationenaustauscherharzes des Sulfonsäure-Types fliessen gelassen, um die Aminosäure am Ionenaustauscherharz zu adsor-65 bieren. Der Mikroorganismus der Reaktionsmischung wird dabei durch den Kontakt mit dem Ionenaustauscherharz modifiziert und wird im ausgeflockten Zustand angelagert. Dann kann Wasser mit einer bestimmten Fliessrate in entge The amino acid reaction mixture, either as such or if the amino acid is excreted in the form of crystals, after dilution with water at room temperature until complete dissolution is generally allowed to flow through a layer of a cation exchange resin of the sulfonic acid type which has been regenerated into the H form to adsor-65 beer to the amino acid on the ion exchange resin. The microorganism of the reaction mixture is modified by contact with the ion exchange resin and is deposited in the flocculated state. Then water can flow in with a certain flow rate

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gengesetzter Richtung durch die Ionenaustauscherharzschicht fliessen gelassen werden (dieses Verfahren wird «back washing» genannt), um die ausgeflockten Mikroorganismen von der Harzschicht auszuwaschen. flow in the opposite direction through the ion exchange resin layer (this process is called “back washing”) in order to wash out the flocculated microorganisms from the resin layer.

Die Adsorption der Aminosäure, die Ausflockung des Mikroorganismus und die Entfernung des ausgeflockten Mikroorganismus vom Ionenaustauscherharz werden üblicherweise in einer Säule, die mit dem Ionenaustauscherharz gefüllt ist, durchgeführt. Es ergeben sich keine Probleme, sogar wenn ein Verfahren verwendet wird, in welchem nach der Adsorption der Aminosäure am Ionenaustauscherharz das Ionenaustauscherharz in ein Reaktionsgefäss gegossen wird und unter Aufschlämmung mit Wasser gewaschen wird. The adsorption of the amino acid, the flocculation of the microorganism and the removal of the flocculated microorganism from the ion exchange resin are usually carried out in a column filled with the ion exchange resin. There are no problems even if a method is used in which after the adsorption of the amino acid on the ion exchange resin, the ion exchange resin is poured into a reaction vessel and washed with water with a slurry.

Wenn eine mit einem Ionenaustauscherharz gefüllte Säule verwendet wird, lässt man die Aminosäurereaktionsmischung mit einer festen Fliessgeschwindigkeit oben in die Säule einfliessen, um die Aminosäure am Ionenaustauscherharz zu adsorbieren. Zu diesem Zeitpunkt sind beinahe alle in der Aminosäurereaktionsmischung enthaltenen Mikroorganismen modifiziert und in der Harzsäule ausgeflockt und werden physikalisch am Harz festgehalten. Ein Teil der Mikroorganismen fliesst aus dem unteren Ende der Harzsäule weg, zusammen mit der zu verwertenden Flüssigkeit. When a column filled with an ion exchange resin is used, the amino acid reaction mixture is allowed to flow into the top of the column at a fixed flow rate to adsorb the amino acid on the ion exchange resin. At this point, almost all of the microorganisms contained in the amino acid reaction mixture are modified and flocculated in the resin column and are physically attached to the resin. Some of the microorganisms flow out of the lower end of the resin column, together with the liquid to be used.

Wenn nach obiger Operation Wasser mit einer bestimmten Fliessgeschwindigkeit von unten durch die Ionenaustauscherharzsäule geschickt wird, um das «back washing» durchzuführen, wird der ausgeflockte Mikroorganismus, der am Harz angelagert ist, weggeschwemmt und fliesst vom oberen Teil der Säule weg und kann somit wirkungsvoll entfernt werden. If, after the above operation, water is sent through the ion exchange resin column at a certain flow rate from below to carry out the “back washing”, the flocculated microorganism that is attached to the resin is washed away and flows away from the upper part of the column and can thus be removed effectively will.

Der Mikroorganismus in der L-Aminosäurereaktionsmi-schung, welcher in die Ionenaustauscherharzschicht gegeben wird, kann wirkungsvoll vollständig entfernt werden, da zur Zeit der Adsorption der L-Aminosäure am Ionenaustauscherharz, ein Teil des Mikroorganismus zusammen mit der verworfenen Flüssigkeit entfernt wird und zur Zeit des «back washing» die meisten der Mikroorganismen eine ausgeflockte Masse bilden, die von der Harzschicht entfernt wird. The microorganism in the L-amino acid reaction mixture which is put in the ion exchange resin layer can be effectively removed completely because at the time of adsorption of the L-amino acid on the ion exchange resin, part of the microorganism is removed together with the discarded liquid and at the time of "Back washing" most of the microorganisms form a flocculated mass that is removed from the resin layer.

Das Ionenaustauscherharz, welches die L-Aminosäure an sich adsorbiert hat, wird dann wie üblich mit wässrigem Ammoniak behandelt, um die L-Aminosäure zu entfernen. Durch Konzentrierung und Kristallisation des Eluates, wird die gewünschte L-Aminosäure leicht isoliert. The ion exchange resin, which has adsorbed the L-amino acid itself, is then treated with aqueous ammonia as usual to remove the L-amino acid. The desired L-amino acid is easily isolated by concentrating and crystallizing the eluate.

Die erhaltene L-Aminosäure hat eine hohe Reinheit gegen den Reinigungseffekt durch das Ionenaustauscherharz. The L-amino acid obtained has a high purity against the cleaning effect by the ion exchange resin.

Durch die Behandlung der L-Aminosäurereaktionsmi-schung, die einen Mikroorganismus enthält, mit einem stark sauren Kationenaustauscherharz des H-Types, macht es das erfmdungsgemässe Verfahren möglich, die L-Aminosäure zu isolieren und den Mikroorganismus, durch welchen sie produziert wurde, zu entfernen, was in industriellem Massstab durch übliche Methoden sehr schwierig ist. Das erfmdungsgemässe Verfahren hat somit eine grosse industrielle Bedeutung, als Methode zur Reinigung von Erzeugnissen, welche durch Reaktionen unter Verwendung von Mikroorganismen erhalten werden. By treating the L-amino acid reaction mixture containing a microorganism with a strongly acidic cation exchange resin of the H type, the process according to the invention makes it possible to isolate the L-amino acid and to remove the microorganism by which it was produced , which is very difficult on an industrial scale by conventional methods. The method according to the invention is therefore of great industrial importance as a method for cleaning products which are obtained by reactions using microorganisms.

Die folgenden Beispiele erläutern das erfmdungsgemässe Verfahren im einzelnen. The following examples explain the process according to the invention in detail.

Beispiel 1 example 1

Zellen, welche Escherichia coli enthalten, wurden bei einem pH-Wert 7 und bei einer Temperatur von 30 °C unter Schütteln und Belüftung in Gegenwart von Monokalium-phosphat, Dikaliumphosphat, Ammoniumsulfat, Calci-umchlorid, Eisensulfat, Hefeextrakt, Polypepton und anderen erforderlichen Materialien unter Zugabe von Glukose und Indol kultiviert. Die Endkonzentration der Zellen war 30-35 g/1. Cells containing Escherichia coli were grown at pH 7 and at a temperature of 30 ° C with shaking and aeration in the presence of monopotassium phosphate, dipotassium phosphate, ammonium sulfate, calcium chloride, iron sulfate, yeast extract, polypeptone and other required materials cultivated with the addition of glucose and indole. The final concentration of the cells was 30-35 g / l.

In der gleichen Weise wie oben wurden Zellen, welche Pseudomonas putida enthielten, im gleichen Kulturmedium 5 wie oben kultiviert, mit der Ausnahme dass es kein Indol enthielt. In the same manner as above, cells containing Pseudomonas putida were cultured in the same culture medium 5 as above, except that it did not contain indole.

In beiden Fällen wurden die gewachsenen Zellen aus der Kulturbrühe gewonnen unter Verwendung eines gewöhnlichen Superzentrifugalseparators, und es wurde ein Creme-io kuchen, der einen Wassergehalt von 75-85% enthielt, erhalten. In both cases, the grown cells were recovered from the culture broth using an ordinary super centrifugal separator, and a cream-io cake containing 75-85% water was obtained.

Eine wässrige Lösung, die sich aus 77,3 g von DL-Serin, 10,5 g Ammoniumsulfat und 486 g Wasser zusammensetzte, wurde in einen Reaktor gegeben und mit 29% wässrigem 15 Ammoniak auf einen pH-Wert 8,5 eingestellt. Dann wurden 51,2 g des oben erhaltenen Cremekuchens von Escherichia coli-Zellen und 23,2 g des oben erhaltenen Cremekuchens von Pseudomonas putida-Zellen zugegeben und die Mischung wurde gut gerührt. Anschliessend wurden 392 g einer 20 Toluol-Lösung, welche 78,4 g Indol enthielt, zugegeben und dann bei 35 °C während 40 h umgesetzt. An aqueous solution composed of 77.3 g of DL-serine, 10.5 g of ammonium sulfate and 486 g of water was placed in a reactor and adjusted to pH 8.5 with 29% aqueous 15 ammonia. Then 51.2 g of the cream cake of Escherichia coli cells obtained above and 23.2 g of the cream cake of Pseudomonas putida cells obtained above were added and the mixture was stirred well. Then 392 g of a 20 toluene solution which contained 78.4 g of indole were added and then reacted at 35 ° C. for 40 h.

Der Anteil von L-Tryptophan, welcher in der Reaktionsmasse gebildet wurde, wurde durch Flüssigchromatographie analysiert, wobei 129,8 g gefunden wurden (Ausbeute 25 95,0%, auf Basis von Indol). The proportion of L-tryptophan which was formed in the reaction mass was analyzed by liquid chromatography, whereby 129.8 g were found (yield 25 95.0%, based on indole).

Die Reaktionsmischung wurde destilliert, um das Toluol zu entfernen. Dann wurde die Reaktionsmischung mit Wasser verdünnt, sodass die L-Tryptophan-Kristalle vollständig aufgelöst wurden und die Konzentration 1,0 Gew.-% be-30 trug. The reaction mixture was distilled to remove the toluene. Then the reaction mixture was diluted with water so that the L-tryptophan crystals were completely dissolved and the concentration was 1.0% by weight.

Andererseits wurden 4,86 1 Lewatit sp-120 (starksaures Kationenaustauscherharz) durch Salzsäure zur H-Form regeneriert und in die Säule gefüllt. Die obengenannte L-Tryp-tophan-Lösung (125 g) wurde durch die Säule von ihrem 35 oberen Ende her mit einer festen Fliessgeschwindigkeit fliessen gelassen, um das L-Tryptophan am Ionenaustauscherharz zu adsorbieren. On the other hand, 4.86 l of Lewatit sp-120 (strongly acidic cation exchange resin) were regenerated to the H form by hydrochloric acid and filled into the column. The above L-tryp-tophan solution (125 g) was flowed through the column from its top end at a fixed flow rate to adsorb the L-tryptophan on the ion exchange resin.

Dann wurde die Säule mit 24,9 g Wasser rückgewaschen, um die schwimmende ausgeflockte Masse der mikrobischen 40 Zellen auszuwaschen. Anschliessend wurde das L-Trypto-phan aus der Harzsäule unter Verwendung von wässrigem Ammoniak eluiert, mit einem Anteil der zweimal der Austauschkapazität des Ionenaustauscherharzes entsprach. Das Eluat wurde auf 100 °C erwärmt, um den Ammoniak zu ent-45 fernen und wieder zu gewinnen. Der Rückstand wurde auf Zimmertemperatur gekühlt. Die ausgefällten L-Tryptophan-Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das L-Tryptophan hatte eine Reinheit von 99,8% und wurde in einer Menge von 1,0 g erhalten. The column was then backwashed with 24.9 g of water to wash out the floating flocculated mass of the 40 microbial cells. The L-tryptophane was then eluted from the resin column using aqueous ammonia, with a fraction which corresponded twice to the exchange capacity of the ion exchange resin. The eluate was heated to 100 ° C to remove and recover the ammonia. The residue was cooled to room temperature. The precipitated L-tryptophan crystals were separated by filtration and dried. The L-tryptophan was 99.8% pure and was obtained in an amount of 1.0 g.

so Das Zellgleichgewicht stellte sich bei der Ionenaustauscherbehandlung so ein, dass 3% der Zellen in der ausfliessenden Flüssigkeit, die während der Zeit der Adsorption des L-Tryptophans durch die Säule floss, vorhanden waren und 97% der Zellen, in der während der Rückwaschung ausge-55 waschenen Flüssigkeit vorhanden waren (das Zellgleichgewicht wurde aus dem Gewicht der Zellen, die zur Trockenheit konzentriert wurden, und aus der Kohlenstoffbilanz, die durch die Elementaranalyse erhalten wurde, bestimmt). The cell balance in the ion exchange treatment was such that 3% of the cells were present in the outflowing liquid which flowed through the column during the time when the L-tryptophan was adsorbed and 97% of the cells were in the cell during the backwash -55 washing liquid was present (cell equilibrium was determined from the weight of the cells concentrated to dryness and from the carbon balance obtained by elemental analysis).

so Beispiel 2 see example 2

L-Tryptophan wurde aus L-Serin und Indol in Wasser hergestellt, unter Verwendung eines Cremekuchens von Escherichia coli-Zellen, die in gleicher Weise wie in Beispiel 1 kultiviert wurden. Zur Vermeidung einer Verminderung 65 der Enzymaktivität durch Indol wurde die Reaktion durchgeführt, indem man das Indol graduell zuführte, wobei seine Konzentration kontinuierlich ermittelt wurde, sodass die In-dolkonzentration im Wasser bei 200 ppm oder niedriger ge L-tryptophan was prepared from L-serine and indole in water using a cream cake from Escherichia coli cells cultured in the same manner as in Example 1. To avoid a decrease in enzyme activity by indole, the reaction was carried out by gradually adding the indole, and its concentration was continuously determined, so that the indole concentration in the water was 200 ppm or lower

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halten wurde. Die Ausbeute des erhaltenen L-Tryptophans war 100% auf Basis des Indols und 85% auf Basis von L-Se-rin. Die Schlusskonzentration des akkumulierten L-Tryptophans war 120 g/1. Die L-Tryptophan-Reaktionsmischung wurde durch Zentrifugation entwässert, wobei ein Reak-tions-Cremekuchen erhalten wurde, der L-Tryptophan und die mikrobischen Zellen enthielt. was holding. The yield of the L-tryptophan obtained was 100% based on the indole and 85% based on L-Se-rin. The final concentration of the accumulated L-tryptophan was 120 g / 1. The L-tryptophan reaction mixture was dewatered by centrifugation to obtain a reaction cream cake containing L-tryptophan and the microbial cells.

Der Reaktions-Cremekuchen wurde mit Lewatit sc-102 (H-Form) als Ionenaustauscherharz behandelt, durch das gleiche Verfahren wie in Beispiel 1 beschrieben, um die Zellen zu entfernen und das L-Tryptophan zu isolieren. The reaction cream cake was treated with Lewatit sc-102 (H form) as the ion exchange resin by the same procedure as described in Example 1 to remove the cells and isolate the L-tryptophan.

Der Anteil des isolierten L-Tryptophans war 1,1g und seine Reinheit betrug 99,9%. Die Zellen in der L-Trypto-5 phan-Reaktionsmischung wurden in einem Anteil von 2,5% während der Zeit der Adsorption an das Ionenaustauscherharz entfernt und 97,5% während der Zeit der Rückwa-schung der Ionenaustauscherharzsäule. The proportion of L-tryptophan isolated was 1.1 g and its purity was 99.9%. The cells in the L-trypto-5 phan reaction mixture were removed at a rate of 2.5% during the time of adsorption to the ion exchange resin and 97.5% during the time of backwashing the ion exchange resin column.

C C.