CH639492A5

CH639492A5 - Sang etalon de controle et procede de sa preparation.

Info

Publication number: CH639492A5
Application number: CH1021978A
Authority: CH
Inventors: Allan Lee Louderback
Original assignee: Allan Lee Louderback
Priority date: 1977-11-22
Filing date: 1978-10-02
Publication date: 1983-11-15
Also published as: BE872187A; CA1091558A; JPS5757662B2; GB2008245A; DE2850627C2; DK155029B; GB2008245B; DE2850627A1; IT1157714B; FR2408838B1; JPS5479991A; DK155029C; IT7851983A0; FR2408838A1; US4126575A; DK385778A

Description

La présente invention a pour objet un procédé d'obtention de 15 sang étalon de contrôle, pour le contrôle de la qualité de la mesure du pH et des gaz du sang, ainsi que le sang étalon de contrôle ainsi préparé. Ce sang étalon, stable et utile pour le contrôle précité, est destiné à être employé en laboratoire clinique.

Le sérum sanguin est un liquide biologique complexe qui con-20 tient divers composants ayant une grande importance physiologique. Chez les sujets normaux ou en bonne santé, les concentrations de ces composants sont comprises dans certaines limites assez bien définies. Lorsque l'analyse montre que l'un quelconque de ces composants sort de la gamme normale, ce résultat peut constituer une 25 indication d'un état pathologique nécessitant des soins médicaux. La détermination des gaz du sang, des électrolytes et de l'équilibre acido-basique est un aspect important de l'analyse du sang. Les concentrations de l'oxygène et du dioxyde de carbone dans le sang peuvent indiquer des anomalies de la fonction pulmonaire. L'impor-30 tance du transport d'oxygène par le sang dans la respiration et de la régulation respiratoire de l'équilibre cationique/anionique est bien connue. Grâce à l'homéostase, l'organisme tend à conserver un état d'équilibre qui se manifeste de trois façons en ce qui concerne le métabolisme de l'eau et des électrolytes, à savoir par conservation du 35 pH ou de l'équilibre acido-basique, conservation de la composition ionique, conservation de l'osmolalité.

Les systèmes-tampons dans les espaces intra- et extra-cellulaires maintiennent le pH dans des limites étroites. Parmi les divers tampons physiologiques, seul le système bicarbonate contient un 40 composant, le dioxyde de carbone, qui est volatil à la température de l'organisme et qui, par conséquent, peut être soumis à une régulation pulmonaire. Donc, l'analyse du système-tampon bicarbonate permet une estimation directe de l'équilibre acido-basique respiratoire. Le dioxyde de carbone dissous est présent dans le plasma selon 45 l'équation suivante:

C02 + H20 ^ H2C03 H+ + HCO5-

Le dioxyde de carbone est également présent dans les hématies à l'état dissous ou combiné à l'hémoglobine sous la forme carbamino-50 C02, ou dans un complexe dû à l'effet d'une enzyme, l'anhydrase carbonique, qui est présente dans les érythrocytes.

L'interrelation entre le C02 total, les bicarbonates, l'acide carbonique, la pC02 et le pH du sang peut être représentée par l'équation bien connue d'Henderson-Hasselbach:

55 pH = pK + log(HC03-)/H2C03,

où:

pH est le pH mesuré dans le sang artériel,

pK et le logarithme de l'inverse de la constante de dissociation du système bicarbonate,

60 HCO3 est la concentration vraie en bicarbonate, exprimée en millimoles/litre,

H2C03 est la concentration en acide carbonique, exprimée en millimoles/litre.

On peut déterminer expérimentalement les valeurs du pH, du 65 C02 total et de la pC02 et on peut les relier mathématiquement au moyen de l'équation d'Henderson-Hasselbach.

On a mis au point divers appareils pour déterminer les paramètres relatifs aux gaz du sang et à l'équilibre acido-basique. Ces appa

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reils sont généralement capables de mesurer le pH, la pC02 et la p02 du sang. On peut citer, comme exemples de tels appareils, ceux décrits dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N° 3658478 et N° 3652843. Les appareils de ce type sont commercialisés par Instrumentation Laboratory Inc. sous le nom de IL 113 pH/Blood Gas Analyzer. Un autre de ces appareils est le Corning pH/Blood Gas Analyzer décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3763422. Un autre appareil du commerce convenant à la mesure du pH, de la p02 et de la pC02 du sang, est le BMS3 Mk2 Blood Micro System and Digital Acid-Base Analyzer de The London Company Radiometer A/S Instruments. Des appareils de ce type sont décrits dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N° 3654445 et N° 3874850.

L'emploi de ces appareils ainsi que d'autres pour la détermination des gaz du sang en laboratoire clinique pose des problèmes particuliers de contrôle de la qualité. Les appareils doivent bien sûr être préalablement convenablement étalonnés. On peut, pour étalonner ces appareils, y introduire des quantités mesurées de gaz étalonnés ou appliquer un liquide d'étalonnage tel qu'une solution aqueuse de bicarbonate, comme décrit par exemple dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3681255. Cependant, l'étalonnage n'est qu'un des problèmes que posent les appareils de détermination clinique des gaz du sang. Pour assurer des soins de grande qualité, on doit tester fréquemment l'appareillage, et le personnel de laboratoire doit pouvoir remédier rapidement à tout défaut de fonctionnement. Pour cela, on a mis au point des étalons de contrôle que l'on peut appliquer périodiquement aux appareils à des intervalles prédéterminés pour assurer un contrôle approprié de la qualité. Un de ces étalons de contrôle est un sérum humain lyophilisé que l'on reconstitue, avant l'emploi, avec un liquide diluant. Des exemples de ce type d'étalons de contrôle sont décrits dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N° 3466249 et N° 3629412. Cependant, ces produits ne sont pas entièrement utiles pour le contrôle, lorsque l'analyse des gaz du sang comporte la détermination de l'oxygène, car le sérum reconstitué n'a pas la teneur désirée en oxygène dissous. Us sont au contraire conçus pour le contrôle d'autres valeurs biologiques telles que celles que l'on peut déterminer avec un auto-analyseur Techni-con SMA/12.

Un autre de ces étalons de contrôle contient du sang que l'on reconstitue par addition d'un liquide contenant un fluorure et un io-doacétate ou un fluoroacétate pour stabiliser le sang, comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3859049. Cependant, de façon semblable, ce produit n'a pas les teneurs en oxygène convenant au contrôle des appareils déterminant l'oxygène du sang. Bien que l'on puisse stabiliser les cellules du sang avec divers fixateurs chimiques, comme décrit dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N° 3574137 et N° 3640896, ou par lavage soigneux pour les séparer des autres constituants du sang, comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3558522, ces produits ne conviennent qu'à la numération sanguine et à des analyses semblables et ne satisfont pas aux conditions nécessaires pour le contrôle du pH et des gaz du sang.

On sait également que l'on peut stabiliser les cellules du sang pour l'hémagglutination ou pour les utiliser comme absorbants par affinité des antigènes ou des anticorps, par traitement rigoureux avec des aldéhydes. Un tel traitement utile pour des déterminations de diagnostics est décrit dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N» 3096250, No 3426123, N° 3708572, N° 3714345, No 3925541 et N° 3914400. Dans ce cas également, ces produits conviennent pour les diagnostics indiqués, mais ne satisfont pas aux conditions précédemment décrites permettant le contrôle de la détermination du pH et des gaz du sang.

Le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3973913 décrit un sang étalon de contrôle stable, ainsi qu'un procédé pour le contrôle de la qualité des mesures du pH et des gaz du sang en laboratoire clinique. Selon ce procédé, on utilise un récipient scellé contenant des hématies spécialement traitées, surmonté d'un espace gazeux dont le volume est au moins égal environ à celui des hématies. Cependant,

cet art antérieur ne concerne pas l'obtention de teneurs variables en monoxyde de carbone avec un produit dérivant du sang total.

Si l'on se contentait d'incorporer une certaine quantité de monoxyde de carbone dans l'espace situé au-dessus du sang d'un récipient de verre par exemple, le résultat varierait selon la durée de l'introduction du monoxyde de carbone dans le flacon et l'introduction ultérieure de concentrations variables d'oxygène de dioxyde de carbone et d'azote, comme décrit dans le brevet précité.

La présente invention a pour objet un procédé d'obtention de sang étalon selon lequel le sang étalon de contrôle est contenu dans un récipient fermé contenant des érythrocytes traités et un espace gazeux sous-jacent dont le volume est au moins environ égal à celui des érythrocytes traités, ces érythrocytes étant obtenus par lavage à fond et une séparation des hématies des composants du plasma, un traitement modéré avec un aldéhyde et un séjour dans une solution-tampon. Pour cela, on prépare des hématies saturées à 100% avec du monoxyde de carbone par exposition prolongée dans une solution agitée. On mélange ensuite environ 5 parties des cellules saturées à 100% et 95 parties de cellules normales ou subnormales pour obtenir une concentration en monoxyde de carbone des cellules d'environ 5%. L'espace sous-jacent est constitué d'un gaz ou d'un mélange de gaz renfermant 0 à 15% de C02, 0 à 25% de 02, le reste étant constitué d'azote et/ou d'un gaz inerte.

On obtient ainsi un sang total étalon convenant pour vérifier les analyses d'un appareil d'oxymétrie conçu pour fournir des informations relatives à un ou plusieurs des constituants suivants:

Constituant

Egalement appelé

Exprimé en

Hémoglobine totale hémoglobine

(g/dl Hb)

Pourcentage saturation

d'oxyhémoglobine en 02

(% 02Hb)

Pourcentage de saturation

carboxyhémoglobine en CO

(% COHb)

Teneur en oxygène teneur en 02

(vol % 02)

Importance clinique des mesures des constituants précités.

Hémoglobine:

Le rôle de l'hémoglobine est bien connu et la détermination de l'hémoglobine est capitale en médecine clinique. Dans le domaine des gaz du sang, l'hémoglobine constitue le support de gaz tels que l'oxygène, le dioxyde de carbone et le monoxyde de carbone.

Oxyhémoglobine:

Elle correspond au rapport de la quantité d'hémoglobine combinée à l'oxygène à la quantité d'hémoglobine disponible pour l'oxygénation.

Monoxyde de carbone

Le monoxyde de carbone n'est normalement pas présent comme produit métabolique final dans le sang humain. L'exposition à l'environnement peut accroître de façon appréciable sa teneur. Le monoxyde de carbone est présent dans les fumées et les gaz d'échappement des automobiles. Les habitants des villes ne fumant pas ont des teneurs en carboxyhémoglobine inférieures à 3%. Chez les gros fumeurs, jusqu'à 10% ou plus de l'hémoglobine sanguine peuvent être combinés au monoxyde de carbone.

La carboxyhémoglobine n'est pas un support actif de l'oxygène du sang. On sait que son effet toxique d'inhibition de la fixation de l'oxygène à l'hémoglobine est bien plus grave que la perte d'une quantité semblable d'hémoglobine par anémie.

Méthêmoglobine :

La méthêmoglobine est une hémoglobine inactive, incapable de se combiner de façon réversible avec l'oxygène et le monoxyde de

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carbone. Elle empêche le transfert d'oxygène du sang aux tissus et provoque une cyanose pour des teneurs de 10 à 20%.

Teneur en oxygène:

C'est la quantité totale d'oxygène dans le sang; elle correspond à la somme de l'oxyhémoglobine et de l'oxygène dissous.

L'invention va maintenant être décrite en détail.

Les fractions principales du sang sont le plasma, les hématies ou érythrocytes, les plaquettes et les leucocytes. En moyenne, le corps d'un sujet humain adulte renferme environ 5 1 de sang, les hématies correspondant à environ 2,21. Selon l'invention, on sépare tout d'abord ces hématies des autres constituants du sang et on les traite comme indiqué ci-après.

Pour éviter la coagulation lors du stockage, on recueille normalement le sang total dans une solution anticoagulante constituée d'héparine ou d'EDTA, d'ACD ou de CPD. On peut normalement conserver le sang total ainsi recueilli jusqu'à 21 à 28 d, sans altération importante de la viabilité des hématies résiduelles. Depuis la fin de la Deuxième Guerre mondiale, la collecte et la conservation du sang on beaucoup changé, et divers progrès relatifs à la séparation des constituants du sang ont permis de réaliser des traitements avec ces composants. Selon ces techniques, on peut séparer les hématies du sang total par sédimentation et centrifugation. On peut traiter par le gly-cérol les hématies séparées, puis les conserver à l'état congelé pour les utiliser ultérieurement. De façon semblable, on peut également congeler et conserver le plasma séparé, ou congeler et conserver pour les utiliser ultérieurement des fractions séparées du plasma.

Selon l'invention, on peut utiliser, comme sources d'hématies, des hématies fraîches ou périmées (stockées plus de 21 à 28 d). Ces hématies peuvent être des hématies humaines ou des hématies d'autres mammifères telles que par exemple des hématies d'équidés, de bovins, de porcins ou d'ovins.

Pour assurer une séparation complète des autres composants du sang, on sédimente ou centrifuge les hématies et on les lave à fond. Pour faciliter la sédimentation, on utilise une centrifugeuse classique du sang. Les centrifugeuses permettant cette sédimentation des cellules sanguines sont bien connues et on préfère une centrifugeuse continue telle que celle commercialisée par Haemonetics Corp. Des centrifugeuses de ce type sont décrites par exemple dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3706412. Dans ce type de centrifugeuse, la cuve est constituée de deux parties dont l'une tourne et l'autre est fixe. Losque le sang ou les hématies précédemment séparées pénètrent dans la cuve de centrifugation, les cellules se répartissent sur la périphérie et au fur et à mesure du remplissage de la cuve, le surnageant se sépare des hématies. Les hématies sont maintenues en suspension par la force centrifuge, tandis que le surnageant est chassé par un orifice d'effluent pour être recueilli dans un récipient pour déchets.

On prépare une solution de lavage pour laver les hématies. La solution de lavage est une solution salée qui est de préférence du soluté salé physiologique normal contenant environ 0,9% de chlorure de sodium, mais qui peut contenir d'autres substances telles que par exemple les composants de la solution d'Alsever. La géométrie de la centrifugeuse empêche que les cellules soient entraînées par la solution de lavage fraîche et la solution de lavage usée est chassée à travers l'orifice d'effluent. Lorsque le lavage est achevé, on arrête la centrifugeuse et on siphonne les cellules lavées dans un récipient de récolte séparé.

Un autre exemple de centrifugeuse classique du sang convenant à l'emploi dans l'invention est le séparateur Celltrifuge, qui est commercialisé par American Instrument Company.

Dans les procédés de lavage précédents, on lave de préférence les hématies avec environ 5 à environ 30 volumes de la solution salée de lavage. Dans un exemple préféré, on lave une unité de sang (0,5 1) avec environ 3 à 41 de solution salée.

Après le lavage avec une solution salée, les hématies sont prêtes à subir le traitement modéré avec un aldéhyde. Si on ne les traite pas immédiatement, on préfère les conserver provisoirement dans la solution d'Alsever. On peut, pour préparer cette solution, mélanger les composants suivants dans les quantités indiquées et diluer par de l'eau à un volume de 3 1:

Composants

Quantités

Glucose (dextrose)

61,5 g

Citrate de sodium

24,0 g

Chlorure de sodium

12,6 g

Acide citrique (solution à 1%)

15,6 ml

Néomycine

300 mg

Chloramphénicol

990 mg

On doit mélanger soigneusement les composants et ajuster le pH dans la gamme d'environ 6,4 à 6,8. On peut conserver les hématies lavées dans la solution d'Alsever pendant environ 45 d entre 2 et 8 °C.

On remet tout d'abord en suspension dans une solution salée, à raison d'environ 1 partie en volume à environ 50 à 30 parties en volume de la solution salée, les hématies lavées, prêtes à subir le traitement par l'aldéhyde. Le traitement modéré par un aldéhyde consiste en une addition relativement lente d'une solution salée de l'aldéhyde aux cellules et un mélange à la température ordinaire, soit généralement entre environ 20 et environ 26 °C. La solution d'aldéhyde est de préférence constituée d'une solution salée environ 0,1 à 0,6M en aldéhyde. Les aldéhydes que l'on utilise dans la solution salée d'aldéhyde sont généralement des aldéhydes aliphatiques comportant 1 à environ 6 atomes de carbone, tels que par exemple le formol, l'acétaldéhyde, le propionaldéhyde, le butyraldéhyde, l'aldéhyde malonique, le succinaldéhyde, le glutaraldéhyde et l'aldéhyde pyruvique. La solution salée est de préférence du soluté salé physiologique et l'aldéhyde est de préférence un monoaldéhyde, en particulier le formaldéhyde. On mélange la suspension des hématies dans la solution salée d'aldéhyde, par exemple par rotation pendant 15 min à environ 4 h, de préférence pendant 60 min environ, pendant lesquelles les cellules prennent un aspect rouge brillant semblable à celui du sang artériel frais.

Après le traitement modéré avec un aldéhyde, on sédimente les cellules traitées, par exemple par centrifugation et on les lave à nouveau avec une solution salée, environ dans les mêmes gammes de proportions que pour le lavage initial avec une solution salée. Comme précédemment, on peut utiliser directement les hématies dans le stade suivant ou les conserver provisoirement dans la solution d'Alsever entre 2 et 8 °C.

Ensuite, on sature totalement une portion des hématies dans la solution salée avec du monoxyde de carbone pendant une durée de 15 à 30 min en agitant de façon continue. Après saturation, on combine 5 parties des hématies saturées en monoxyde de carbone à 95 parties de la portion non traitée par le dioxyde de carbone pour obtenir une combinaison d'hématies à 5% de monoxyde de carbone. On prépare de façon semblable d'autres concentrations, par exemple avec 10 parties d'hématies saturées en monoxyde de carbone et 90 parties d'hématies non saturées. On peut également combiner les hématies saturées en monoxyde de carbone en proportions quelconques avec des hématies non saturées.

Après achèvement du traitement, on tamponne les hématies et on les transfère dans des récipients appropriés pouvant être fermés de façon totalement étanche aux gaz de l'atmosphère ambiante. Ces récipients peuvent par exemple être des ampoules de verre, des flacons ou des bouteilles.

On tamponne les cellules, bien que cette opération ne soit pas indispensable, de façon à maintenir un pH compris entre environ 6,0 et environ 7,7, selon que le sang étalon de contrôle correspond à la gamme normale, à une acidose ou à une alcalose. Dans les conditions normales, la gamme normale est d'environ 7,4 + 0,1, tandis que pour l'acidose elle est de 7,0-7,3 et pour l'alcalose de 7,6 + 0,1. La molarité du tampon est de préférence d'environ 0,05 à environ 0,2. On peut utiliser des tampons classiques tels que par exemple les

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tampons phosphates et les tampons tris, mais les phosphates ne sont généralement utiles qu'à un pH d'environ 7,5. Les tampons que l'on préfère pour maintenir le pH désiré sont l'acide N-tris(hydroxy-méthyl)méthyl-2-aminoéthanesulfonique (TES) et l'acide N-2-hydr-oxyéthylpipérazine-N'-2-éthanesulfonique (HEPES). Ces tampons ainsi que d'autres tampons appropriés sont décrits par Good et coll. dans «Biochemistry», 5, 467-477 (1966).

On ajoute également aux hématies suffisamment d'ions bicarbonate, par exemple sous forme de NaHC03, pour que la pC02 atteigne une valeur d'environ 20 à environ 55 mmHg.

On place les cellules tamponnées dans des récipients à un niveau tel qu'il demeure un espace sous-jacent dont le volume est au moins environ égal à celui des hématies. On remplit ensuite cet espace sous-jacent avec un gaz ou un mélange gazeux constitué de 0 à 15% de C02, 0 à 25% d'02, le reste étant de l'azote ou un gaz inerte. On entend ici par gaz inerte tout gaz qui est inerte dans les réactions qui s'effectuent dans les systèmes d'électrodes des appareils d'analyse du pH et des gaz du sang. Ces gaz sont constitués des gaz inertes dont la couche électronique la plus externe est saturée, tels que par exemple He, Ne, Ar, Kr, Xe, et Rn. On peut ajouter ces gaz à partir de sources séparées ou sous la forme d'un prémélange des gaz désirés.

Les électrodes précédemment indiquées sont les électrodes classiques de détermination du pH, de la pC02 et de la p02 que l'on utilise dans les appareils d'analyse du pH et des gaz du sang précédemment décrits. Par exemple on peut suivre la concentration en ions hydrogène avec une électrode de verre sensible au pH; en association avec une électrode de préférence Ag/AgCl, on peut déterminer la pression partielle de dioxyde de carbone dans le liquide circulant avec une électrode à C02 et suivre l'oxygène avec une électrode de détection de l'oxygène.

Pour assurer la saturation par le gaz désiré du sang étalon de contrôle, on fait passer dans le récipient un volume de gaz égal à environ 10 à environ 60 fois le volume du récipient, puis on ferme immédiatement le récipient de façon hermétique avant qu'il s'effectue un échange non négligeable avec les gaz de l'atmosphère. On peut, pour obtenir l'étanchéité aux gaz désirée, utiliser par exemple une ampoule de verre comme récipient et sceller la pointe de l'ampoule par fusion à la flamme. Dans le cas de flacons ou de bouteilles, on peut utiliser d'autres types de bouchages hermétiques.

Les gaz du récipient fermé s'équilibrent avec les hématies, ce qui constitue un tonomètre miniature. Le produit final demeure stable et permet d'obtenir les valeurs désirées du pH, de la p02 et de la pC02 pendant des durées prolongées, par exemple jusqu'à 6 mois, lorsqu'on le conserve entre environ 2 et 8 °C. La présence des hématies apporte également de l'hémoglobine au sang étalon de contrôle et permet donc la détermination de l'excès de base permettant le calcul de la teneur en oxygène et de la saturation en oxygène.

Bien entendu, l'invention s'applique également au cas où il suffit de contrôler la teneur en monoxyde de carbone et la saturation en oxygène qui varie, c'est-à-dire qui diminue, proportionnellement à l'accroissement de la teneur en monoxyde de carbone.

L'invention est illustrée par l'exemple non limitatif suivant.

On traite une unité (0,51) de sang humain frais recueilli sur une solution anticoagulante ACD ou CPD avec une centrifugeuse continue d'Haemonotics Corp. Lorsque le sang pénètre dans la centrifugeuse, les hématies se répartissent sur le pourtour et le surnageant est chassé par l'orifice d'effluent. Pendant la rotation, on lave les cellules avec 3 à 41 d'une solution de lavage constituée d'une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium (soluté salé physiologique). On siphonne les hématies lavées dans un récipient de récolte, puis on les transfère dans un récipient contenant 51 de soluté salé physiologique. On ajoute lentement au mélange d'hématies et de soluté salé à 25 C, pendant une durée brève de 5 à 10 min, 500 ml de soluté salé contenant 40 ml de solution à 37% de formaldéhyde pour obtenir une solution 0,1 M en formaldéhyde dans du chlorure de sodium à

0,9%. On agite le mélange à 25 °C pendant 60 min, pendant lesquelles les cellules prennent une couleur rouge brillant semblable à celle du sang artériel frais. On transfère le mélange des cellules traité au formaldéhyde dans une centrifugeuse continue où on lave à nouveau les cellules avec 6 à 8 1 d'une solution salée à 0,9%. On siphonne ensuite les cellules lavées dans un récipient de récolte et on les tamponne avec une solution aqueuse 0,1 M d'HEPES.

On sature ensuite complètement une portion du produit avec du dioxyde de carbone pendant une durée de 15 à 30 min, en agitant de façon continue. On combine 5 parties du produit ainsi saturé avec 95 parties de la portion non saturée. De façon semblable, on combine 10 parties du produit saturé à 90 parties de la portion non saturée.#On mélange également diverses proportions du produit saturé en monoxyde de carbone avec la portion non saturée pour obtenir respectivement des teneurs en monoxyde de carbone de 5%, 10% et autres.

On ajoute ensuite une solution de NaHC03 en quantité suffisante pour ajuster la pC02 à 40 mmHg. On ajuste finalement le pH à 7,4. On transfère ensuite les hématies tamponnées par portions de 2 ml dans des ampoules de verre (verre Wheaton N° 1) ayant une capacité de 8 ml. On fait passer dans les ampoules un prémélange gazeux contenant 5% de C02,12% de 02 et 83% de N2 à un débit de 600 ml/h, en balayant chaque ampoule avec 150 ml de gaz. On scelle ensuite immédiatement les ampoules en faisant tourner la pointe dans une flamme pendant qu'on l'étiré.

Le sang étalon de contrôle de l'invention convient à un système Co-oximeter d'Instruments Laboratory et à tout appareil mesurant le monoxyde de carbone et l'hémoglobine. L'obtention de teneurs variables en monoxyde de carbone avec un produit constitué de sang total vient d'être décrite. Si l'on place simplement du monoxyde de carbone dans l'espace surmontant le sang dans un récipient de verre, comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3973913, les résultats varient selon la durée d'introduction du gaz dans les récipients et les concentrations en oxygène, en dioxyde de carbone et en azote différent, comme décrit dans le brevet précité. De plus il convient de noter que le monoxyde de carbone est inflammable et que l'on ne peut l'introduire dans un espace surmontant des hématies, puis sceller à chaud sans provoquer le jaillissement d'une petite flamme.

Ces hématies ayant une concentration désirée quelconque en monoxyde de carbone peuvent être enfermées de façon hermétique dans des récipients en verre ou comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3973913, pour qu'on obtienne un produit dont la teneur en monoxyde de carbone, la teneur en oxygène, le pH et la teneur en dioxyde de carbone, sont variables et mutuellement indépendantes. De plus on peut accroître ou diminuer la quantité d'hématies pour obtenir des teneurs différentes en hémoglobine, comme décrit dans le brevet précité.

Avant l'emploi, on traite le sang étalon de contrôle amélioré que l'on a maintenu entre 2 et 8 °C pour éliminer les erreurs dues à la température ambiante et à la manipulation de l'échantillon, par incubation à 37 °C pendant 30 min dans un bain-marie pour: a) mettre l'échantillon dans les conditions de température physiologiques de l'organisme, b) équilibrer totalement l'échantillon avec les gaz du récipient fermé, et c) amener l'échantillon à ressembler à un échantillon de sang artériel fraîchement prélevé.

Comme la mesure des gaz du sang suit les principes des lois de température des gaz naturels, il est important d'équilibrer totalement l'échantillon pour obtenir des pressions partielles correctes. Lorsque l'incubation est achevée, on casse l'ampoule et on peut aspirer directement l'étalon de contrôle dans un appareil d'analyse des gaz du sang et/ou un oxymètre ou l'introduire avec une seringue.

Bien entendu, la présente invention n'est pas limitée aux modes de réalisation décrits et représentés. Elle est susceptible de nombreuses variantes accessibles à l'homme de l'art sans que l'on s'écarte pour cela de l'esprit de l'invention.

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Claims

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1. Procédé d'obtention de sang étalon de contrôle pour le contrôle de la qualité de la mesure du pH et des gaz du sang, caractérisé en ce que ce sang étalon est contenu dans un récipient fermé contenant des érythrocytes traités et un espace gazeux sous-jacent dont le volume est au moins égal au volume des érythrocytes, ces érythrocytes étant obtenus par lavage à fond dans une solution salée, mélange modéré de la solution avec une solution salée d'aldéhyde, lavage à fond dans une solution salée pour former une suspension, traitement d'au moins une portion de la suspension des érythrocytes avec du monoxyde de carbone, puis combinaison de cette portion avec une portion des érythrocytes que l'on n'a pas traités par le monoxyde de carbone, l'espace gazeux sous-jacent contenant au plus 15% de dioxyde de carbone, au plus 25% d'oxygène, le reste étant constitué d'azote, de gaz inertes et de leurs mélanges.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le lavage à fond est fait dans une solution salée tamponnée à un pH 7 à 7,7 et que, après mélange avec le monoxyde de carbone, on mélange la solution avec des ions bicarbonate pour obtenir une pression de C02 comprise entre 20 et 55 mmHg.

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REVENDICATIONS

3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'on traite la portion de la suspension des érythrocytes traités par le monoxyde de carbone jusqu'à ce que les érythrocytes soient totalement saturés de monoxyde de carbone et en ce qu'on choisit les proportions relatives des portions non traitées et traitées de façon que, dans le produit obtenu, au moins une portion des érythrocytes ait été traitée par le monoxyde de carbone.

4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'aldéhyde est un aldéhyde aliphatique comportant 1 à 6 atomes de carbone.

5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'aldéhyde est le formaldéhyde.

6. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que la solution salée est du soluté salé physiologique.

7. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que la concentration molaire en aldéhyde est comprise entre 0,4 et 0,6.

8. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'on prépare le mélange modéré à partir d'un aldéhyde à une température comprise entre 20 et 26 C, pendant une durée de

15 min à 4 h.

9. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'on choisit le tampon parmi les tampons consistant en acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N'-2-éthanesulfonique (HEPES) ou en acide N-tris(hydroxyméthyl)méthyl-2-aminoéthanesulfonique (TES).

10. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que la concentration molaire du tampon est comprise entre 0,05 et 0,2 M.

11. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que, après la combinaison des deux portions d'érythrocy-tes, les étapes suivantes consistent à transférer dans des récipients en laissant un espace gazeux sous-jacent ayant un volume au moins environ égal à celui des érythrocytes, à balayer cet espace sous-jacent avec un gaz constitué par au plus 15% de dioxyde de carbone, par au plus 25% d'oxygène, le reste étant constitué d'azote, de gaz inertes et de leurs mélanges, puis à fermer immédiatement les récipients de façon étanche aux gaz.

12. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste à laver à fond des érythrocytes dans une solution salée, à effectuer un mélange modéré avec une solution salée d'aldéhyde, à laver à fond dans une solution salée, à tamponner à un pH compris entre 7 et 7,7 pour former une suspension, à traiter au moins une portion de la suspension d'érythrocytes avec du monoxyde de carbone, puis à combiner cette portion avec une portion d'érythrocytes que l'on n'a pas traitée avec du monoxyde de carbone, à mélanger des ions bicarbonate jusqu'à une pC02 de 20 à 25 mmHg, à transférer dans des récipients en laissant un espace gazeux sous-jacent ayant un volume au moins environ égal à celui des érythrocytes, à balayer cet espace sous-jacent avec un gaz constitué au plus de 15% de dioxyde de carbone, au plus de 25% d'oxygène, le reste étant constitué d'azote, de gaz inertes et de leurs mé-5 langes, puis à fermer immédiatement les récipients de façon étanche aux gaz.

13. Sang étalon de contrôle obtenu à l'aide du procédé selon l'une des revendications 1 à 12.

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