CH616937A5 - Process for producing 9-hydroxyellepticine derivatives - Google Patents

Description

La présente invention concerne un procédé pour l'obtention de nouveaux produits, des dérivés de l'hydroxy-9-ellipticine ou hydroxy-9 diméthyl-5, 11(6H) pyrido[4,3-b] carbazole, qui sont notamment applicables à titre de médicament ou en tant que principe de compositions pharmaceutiques, en particulier pour le traitement des cancers, et se sont révélés présenter une efficacité exceptionnelle pour le traitement des différentes formes de cancers.

On a déjà décrit la préparation et l'application thérapeutique de l'hydroxy-9-ellipticine, dans la demande de brevet français no 73 38416 déposée le 29 Octobre 1973 au nom de la demandresse. On avait aussi décrit auparavant la préparation et l'application thérapeutique d'un dérivé d'ellipticine, le lactate de méthoxy-9 ellipticine. C'est ainsi que des études récentes, rapportées dans un article de G. Mathe et al. dans Rev. Europ. Etudes Clin. Biol. 15,1970, pp. 541-545 et dans un article de J Le Men et al., op. cit. pp.534-538, on montré que le lactate de méthoxy-9 ellipticine, outre une action on-constatique sur la leucémie 11210 et la tumeur BP 8 de la souris, présente une activité contre la leucémie aiguë myélob-lastique, mais se révèle inefficace pour le traitement de la leucémie aiguë lymphoblastique et de la maladie de Hodgkin; de plus, bien qu'il possède une action immunodépressive quand il est administré après l'antigène, le lactate de méthoxy-9 ellipticine ne manifeste pas cette activité lorsqu'il est administré à l'homme. La méthoxy-9 ellipticine est un alcaloïde essentiel des feuilles d'Ochrosia.

De plus, aussi bien pour le lactate de méthoxy-9 ellipticine que pour d'autres composés couramment utilisés en thérapeutique humaine pour le traitement de certaines tumeurs, tels que par exemple la bis-bêtachloroéthyl nitroso urée, l'Ame-thopterin ou Methotrexate, la mercapto-6-purine, le fluoro-5-uracile, ou le cyclophosphamide ou Endoxan, l'activité antitumorale manifestée par ces composés n'est importante qu'à des doses fortes voisines de la dose létale ou DL 50. Or, il serait au contraire très intéressant, en particulier en thérapeutique humaine, de pouvoir administrer les principes actifs antitumo-reaux à des doses les plus éloignées possibles des doses toxiques.

On a maintenant trouvé que de nouveaux composés, dérivés de l'hydroxy-9 ellipticine, présentent des propriétés antitumorales très nettement supérieures, vis-à-vis de nombreuses tumeurs et en particulier vis-à-vis de la leucémie murine L 1210 et de la leucémie P 388, comparativement à celles des composés connus mentionnés plus haut, y compris l'hydroxy-9 allipticine elle-même.

Ces nouveaux composés ont pour formule développée plane:

CH

H,

'2

R

CH

dans laquelle R est un groupe alkyle, Ri, et R2 sont respectivement un atome d'hydrogène et un groupe acyle, un groupe alkyle et un atome d'hydrogène, ou un groupe alkyle et un groupe acyle, et X est un atome d'halogène.

Ces composés sont préparés à partir de Thydroxy-9 ellipticine dont la formule, les caractéristiques et un procédé pour sa

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préparation ont été décrits dans le demande de brevet français 73 38416.

Les procédés selon l'invention, pour la préparation de ces composés, sont définis dans les revendications 1 et 5.

Parmi les halogénures d'alkyle utilisables pour quaterniser l'atome d'azote en position 2, on préfère tout particulièrement l'iodure de méthyle et l'iodure d'éthyle.

Pour préparer l'hydroxy-9 ellipticine de départ, on peut procéder comme indiqué dans la demande de brevet français précitée, c'est-à-dire par déméthylation de méthoxy-9 ellipticine, par exemple au moyen de chlorhydrate de pyridine, d'acide acétique glacial saturé d'acide chlorhydrique, d'acide bromhydrique gazeux ou d'acide iodhydrique. On préfère cependant réaliser la déméthylation de la méthoxy-9 ellipticine en présence de chlorhydrate de pyridine, avantageusement de chlorhydrate de pyridine préalablement distillé et recristallisé, car avec cet agent de déméthylation on obtient de l'hydroxy-9 ellipticine pure, c'est-à-dire exempte de produits secondaires indésirables.

L'agent de déméthylation doit de préférence être utilisé en un large excès molaire par rapport à la méthoxy-9 ellipticine mise en œuvre.

La méthoxy-9 ellipticine de départ peut être obtenue par extraction à partir d'une source naturelle, ou par synthèse (voir à ce sujet entre autres les articles de J.W. Loder dans Austr. J. Chem. 1967, 20, pp. 2715-2727 et de J. Poisson et C. Miet dans Ann. Pharm. Franc. 1967, 25, p. 523).

Parmi les composés nouveaux ainsi obtenus par le procédé selon l'invention, il faut citer tout particulièrement:

l'iodométhylate d'acétoxy-9 ellipticinium,

l'iodométhylate d'acétoxy-9 méthyl-6 ellipticinium, et l'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium.

Les composés optenus selon l'invention peuvent contituer le principe actif d'une composition pharmaceutique anti-cancé-reuse en renfermant une quantité thérapeutiquement efficace, ladite composition pouvent par exemple être sous la forme d'une solution injectable ou de préparations solides admini-strables par os.

On a en effet pu établir que les composés obtenus selon l'invention, et parmi eux plus particulièrement l'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-7 ellipticinium et l'iodométhylate d'acét-oxy-9 méthyl-6 ellipticinium, présentent une efficacité tout à fait exceptionnelle et imprévisible pour les traitements anticancéreux. Cette efficacité est telle qu'elle permet de parvenir à la destruction de 99,999% de cellules leucémiques pour un inoculum de 105 cellules de la leucémie murine L 1210, alors même que les doses nécessaires pour ce faire sont très nettement inférieures à la dose létale, ce qui présente un avantage considérable tant du point de vue médical que du point de vue économique.

Afin de tester l'activité antitumorale des composés selon l'invention, on a utilisé l'effet sur les leucémies murines L 1210 ou P 388.

La tumeur expérimentale qu'est la leucémie L 1210 de la souris est en effet couremment utilisée pour l'évaluation de tous les composés antitoumoraux actuellement mis en œuvre en thérapeutique humaine, ainsi qu'il est décrit, par exémple par C.C. Zubrod dans Proc. Nat. Acad. Sci. USA 69, 1972, pp. 1042-1067. Le système tumoral ainsi constitué expérimentalement permet une évaluation quantitative très précise de l'activité du composé testé et par conséquent aussi une comparaison objective entre les activités respectives de différents composés, par exemple selon les méthodes décrites par H.E. Skipper, F.M. Schabel Jr, et W.S. Wilcox dans Cancer Chemother. Rep., 35,1964, pp. 1-111 et 45,1965, pp. 5-28.

En pratique, on a utilisé des souris ayant reçu par voie intrapéritonéale un inoculum de cellules de leucémie L 1210 et ayant été, pour la moitié d'entre elles, soumises 24 heures après ladite inoculation tumorale à une injection intrapéritonéale d'une dose unique de l'un des composés à tester; l'autre moitié des souris a reçu une injection d'un volume identique d'un solvant inactif et servait de série témoin. On a réparti les souris au hasard dans chaque série expérimentale. Une première expérimentation de routine a permis de déterminer la mortalité par toxicité et de fixer ainsi les doses infra-létales.

Conformément à la convention en usage dans ce domaine, on considérait comme guéris les animaux qui survivaient plus de 45 jours après l'inoculation de cellules tumorales.

On a ainsi pu déterminer la mortalité par toxicité sous l'effet d'une injection unique de l'un des composés à différentes doses (doses infra-létales DL 50 et DL 100) et évaluer le taux de survie du groupe d'animaux auxquels on n'avait injecté qu'une dose infra-létale d'un composé selon l'invention.

On a calculé le taux de survie à partir d'une analyse statistique des résultats expérimentaux, par comparaison avec les résultats obtenus avec la série témoin, selon les méthodes bien connues de Mann-Whitey et de Wilcoxon; le pourcentage de cellules leucémiques tuées par le traitement réalisé était calculé par la méthode décrite par H.E. Skipper et coll. dans les articles cités plus haut en prenant pour base, suivant le cas, soit l'augmentation de la survie moyenne en l'absence de survivants, soit le pourcentage de survivants.

Pour l'évaluation de l'activité thérapeutique des composés obtenus selon l'invention, on a exprimé les doses dudit composé en les rapportant à la dose infra-létale 30 jours, que l'on a posée égale à 1. Cette dose infra-létale s'est en effet avérée plus facile à déterminer pour les composés obtenus selon l'invention que la DL 10, dont elle est d'ailleurs très voisine et qui est habituellement prise comme référence pour l'évaluation de l'activité thérapeutique de composés à effet antitumoral (voir H.E. Skipper et coli, ouvrages cités).

L'activité thérapeutique sur la leucémie P 388 de la souris est comparable à celle obtenue sur la leucémie L 1210 pour les mêmes doses, le protocole étant identique.

On a ainsi pu déterminer que les composés obtenus selon l'invention, et notamment l'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium et l'iodométhylate d'acétoxy-9 6 ellipticinium, permettent de tuer, à des doses très inférieures à la dose létale, jusqu'à 99,999% des cellules leucémiques, pour un inoculum de 10s de la leucémie murine 11 1210, ce qui est tout à fait exceptionell, comparé aux résultats obtenus selon la littérature sur le même matériel tumoral et avec les produits actuellement couramment utilisés en thérapeutique humaine et cités plus haut.

Or, c'est naturellement aux doses les plus éloignées possibles des doses toxiques qu'il est intéressant de pouvoir utiliser de tels composés actifs, en particulier en térapeutique humaine.

L'invention est décrite plus en détail dans les exemples ci-après.

Exemple 7 Iodométhylate d'acétoxy-9 ellipticinium a) Hydroxy-9 ellepticine

On a chauffé à doux reflux, pendant 30 à 90 minutes, un mélange d'une partie en poids de méthoxy-9 ellipticine obtenue par extraction à partir de «Bois jaune» de L'île de la Réunion (Ochrosia maculata) et de 3 à 11 parties en poids de chlorhydrate de pyridine. La masse réactionnelle s'est coloré en brun foncé; on l'a alors versée sur de la glace pilée, on a essoré le précipité formé et on l'a lavé plusieurs fois avec de l'eau glacée et ensuite recristallisé dans du méthanol. Les cristaux obtenus avaient une couleur orangée.

Le point de fusion du produit cristallin était sensiblement supérieur à 330°C. La formule brute de ce produit, dont on s

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avait pu établir qu'il était cristallisé avec 1 mole de méthanol, était C18H18N2O2, ce qui donnait la formule brute C17H14N2O pour l'hydroxy-9 ellipticine pure; le poids moléculaire de cette dernière étant de 262, l'analyse élémentaire a donné:

C H N O

calculé 73,53% 5,17% 9,53% 10,88%

trouvé 73,50% 5,35% 9,48% 10,84%

Le spectre IR du composé obtenu présentait à 3100 cm1 la bande caractéristique du groupe -OH.

Son spectre de masse révélait un pic moléculaire M=262 et l'analyse par Chromatographie en couche mince avec comme support de l'alumine et comme éluant un mélange 28/2 de benzène/éthanol a donné un Rf de 0,44.

b) Acétoxy-9 ellipticine

On a dissous 1 g d'hydroxy-9 ellipticine dans 20 ml de pyridine séchée sur potasse et on a ajouté une solution de 3 g d'anhydride acétique dans 10 ml de pyridine, sous agitation magnétique.

La solution de couleur orangée a d'abord noirci, puis elle est devenue rouge et limpide. On l'a diluée avec de Feau et il s'est alors formé un précipité, que l'on a essoré et dissous dans du CHCb. On a lavé la solution chloroformique à l'eau; on a séché sur Na2SÛ4, on a filtré et on a chassé le solvant. On a ensuite recristallisé dans du benzène et obtenu 1 g de produit, qui était formé de fins cristaux jaunes fondant à 282°C.

L'analyse par Chromatographie en couche mince avec comme support du Silicagel et comme éluant un mélange 24/6 de benzène/éthanol a donné un Rf de 0,40.

La formule brute de ce composé étant C10H16N2O2 +1/2 H2O et son poids moléculaire 304,33 + 9 = 313,33, l'analyse élémentaire a donné:

C H N

calculé -73,14% 5,47% 8,98%

trouvé 73,07-73,21% 5,73-5,75% 8,65-8,81%

On a également procédé à un autre contrôle analytique et à une différenciation entre hydroxy-9 ellipticine et acétoxyl-9 ellipticine. Les résultats en sont rapportés dans le tableau ci-après.

Test au

Détection

Détection

FeCIa

UV: 320-380 nm parvapeur

Fluorescence d'iode

Hydroxy-9 ellipticine positif

Pas de

Rouge

fluorescence

Acétoxy-9 ellipticine négatif

Fluorescence

Brun

jaune

On a traité une solution 9 ellipticine (base), dissoute dans du diméthylformamide pur et anhydre, avec une solution éthérée d'acide chlorhydrique gazeux. Il s'est formé un précipité du chlorhydrate, qu'on a essoré, lavé à l'éther anhydre et recristallisé dans de l'étanol absolu, en le précipitant à nouveau par de l'éther anhydre.

Les fins cristaux jaunes formés se décomposaient en char-bonnant, sans fondre, vers 300°C. Ce composé avait pour formule brute C19H16N2O2,1/2 H2O, HCl.

c) Iodométhylate d'acétoxy-9 ellipticinium

On a dissous 1 g d'acétoxy-9 ellipticine (base) dans 10 ml de diméthylformamide pur et anhydre. Sous agitation magnétique, on a ajouté 3 g d'iodure de méthyle. Après 2 heures, on a essoré le précipité formé et on l'a lavé avec de l'éther anhydre. On a obtenu de fins cristaux jaunes, ayant un point de fusion >330°C.

La formule brute du composé étant C20H19N2O2 et son poids moléculaire 446 286, l'analyse élémentaire a donné:

C H N I

calculé 53,82% 4,29% 6,28% 28,52%

trouvé 53,70-53,92% 4,15-4,18% 6,30-6,35% 28,45%

Exemple 2

Iodométhylate d'acétoxy-9 méthyl-6 ellipticinium a) Acétoxy-9 méthyl-6 ellipticine (base)

On a dissous 1 g d'acétoxy-9 ellipticine dans 10 ml de diméthylformamide pur et anhydre (sur tamis moléculaire). On a ajouté 0,1 g d'hydrure de sodium (en suspension à 50% dans de l'huile), préalablement lavé plusieurs fois à l'éther anhydre.

Sous agitation magnétique et à la température ambiante, on a introduit 0,453 g d'iodure de méthyle.

Après 30 minutes d'agitation, on a dilué à l'eau et on a extrait deux fois avec du CHCb (25 ml à chaque fois). On a lavé la solution chloroformique à l'eau, puis on a séché sur du Na2S04, on a filtré et on a chassé le solvant.

On a recristallisé dans un mélange de 1 volume d'éthanol et 4 volumes de benzène, obtenant ainsi de fins cristaux jaunes.

L'analyse par Chromatographie en couche mince avec comme support du Silicagel et comme éluant un mélange 24/6 de benzène/éthanol a donné un Rf de 0,50.

La formule brute de ce composé étant C20H18N2O2 et son poids moléculaire 318 378, l'analyse élémentaire a donné:

C H N

calculé 75,46% 5,70% 8,80%

trouvé 75,42-75,38% 5,75-5,82% 8,63-8,50%

b) Iodométhylate d'acétox-9 méthyl-6 ellipticinium

On a dissous 1 g d/acétoxy-9 méthyl-6 ellipticine (base)

dans 10 ml de diméthylformamide pur et anhydre.

On a ajouté 3 g d'iodure de méthyle et on a laissé au repos pendant 3 heures.

On a essoré le précipité et on l'a lavé avec de l'éther anhydre. Le composé obtenu était constitué de fins cristaux jaunes, qui ne fondaient pas à 330°C, mais se décomposaient vers 335°C.

La formule brute de ce composé étant C21H21N2O2I et son poids moléculaire 460 313, l'analyse élémentaire a donné:

C H N O I

calculé 54,83% 4,60% 6,09% 6,96% 27,59% trouvé 54,66% 4,56% 5,88% 7,22% 27,48%

Exemple 3

Iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium a) Hydroxy-9 méthyl-6 ellipticine (base)

On a dissous 1 g d'acétoxy-9 méthyl-6 ellipticine (base)

dans 10 ml d'éthanol absolu. Sous agitation magnétique, on a ajouté quelques gouttes de lessive de soude de densité d: 1,33, jusqu'à un pH de 9.

On a poursuivi l'agitation pendant encore 30 minutes. On a précipité par de l'éther anhydre; on a essoré et on a lavé avec de l'éther, obtenant ainsi des cristaux jaunes, ayant un point de fusion de 314-315°C.

La formule brute de composé obtenu étant C18H16N2O et son poids moléculaire 276 32, l'analyse élémentaire a donné:

s

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calculé trouvé

78,25% 78,20-78,08%

H

5,83% 5,75-5,65%

N

10,13% 10,06%

O

5,79% 5,55%

On a également procédé à un autre contrôle analytique et à une différenciation entre acétoxy-9 ellipticine, acétoxy-9 méthyl-6 ellipticine et hydroxy-9 méthyl-6 ellipticine. Les résultats en sont rapportés dans le tableau ci-après:

CCM (Silicage) Benzène/éthanol 26/4

Test au FeCl3

Détection

UV: 320-380 nm

Fluorescence

Détection avec vapeurs d'iode

Acétoxy-9 ellipticine négatif

Fluorescence jaune brun

Acétoxy-9 méthyl-6 ellipticine négatif

Fluorescence jaune mais migre plus haut brun

Hydroxy-9 méthyl-6 ellipticine positif

Pas de fluorescence mais même Rf que acétoxy-9 ellipticine brun foncé

formes de leucémies; la leucémie murine L 1210 et la leucémie murine P 388.

La dose létale DLo était de 50 mg/kg de poids du corps des animaux soumis à l'expérimentation.

On a administré par voie intrapéritonéale à 20 souris femelles de souche DBA/2, âgées de 2 à 3 mois, un inoculum tumoral de 105 cellules de leucémie L 1210. Après 24 heures, on a fait à une moitié de ces souris une injection unique par voie intrapéritonéale d'une dose variable du composé à tester, tandis qu'on injectait par la même voie à l'autre moitié des souris un même volume de solvant; cette dernière moitié du groupe de souris servait donc de série témoin. On a réparti les souris au hasard dans chaque série expérimentale.

On considérait comme guéris les animaux survivant plus de 45 jours. On a pris comme base de l'activité thérapeutique des composés de l'invention la dose létale DLo, soit 50 mg/kg.

Dans le tableau I ci-après figurent les résultats que l'on a obtenus en faisant varier la dose de composé actif injectée.

Tableau I

Effet thérapeutique de doses variables (en injection unique, par voie intra-péritonéale) d'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium pour un inoculum tumoral de 10s cellules

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b) Iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium

On a dissous 1 g d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticine (base)

dans 10 ml de diméthylformamide pur et anhydre. Sous agitation magnétique, on a ajouté 3 g d'iodure de méthyle et on a 30 poursuivi l'agitation pendant 2 heures. On a ensuite essoré le précipité formé et on l'a lavé avec de l'éther anhydre, obtenant ainsi de fins cristaux jaunes, ayant un point de fusion supérieur à 330°C.

La formule brute du composé obtenu étant C19H19N2OI et 35 son poids moléculaire 418,26, l'analyse élémentaire a donné:

Dose d'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium en fraction de la dose infra-létale de 50 mg/kg

Survie moyenne en jours des souris témoins

Survie moyenne en jours des souris traitées de cellules tumorales tuées par le traitement

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9,0±0,4

10,3 ±0,4

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9,0±0,4

10,4±0,4

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0,05

9,4±0,4

12,7+0,6

98

0,1

9,4±0,4

14,0±0,5

99, 96

0,2

9,0±0,4

13,4±0,6

99, 95

1

8,7±0,5

16,1±0,8

99,999

H

N

calculé 54,59% 4,57% 6,69%

trouvé 54,90-55,01% 4,64-4,59% 6,31-6,39%

I

30,34% 40 30,20%

Essais phramacologiques 1 Iodométhylate d'hydroxy-9-méthyl-6-ellipticinium

Afin de le tester, on l'a mis sous une forme hydrosoluble, à savoir sous la forme de l'acétate d'hydroxy-9 diméthyl-2,6 ellipticinium.

Pour ce faire, on a dissous une quantité donnée d'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium, préparé comme indiqué à l'exemple 3-b), dans une quantité minimale de diméthylformamide pur. On a dilué à 50% par addition d'eau distillée et on a fait absorber sur une colonne (genre Pipette Pasteur) d'Amberlite CG-50. On a lavé un volume d'eau distillée égal à environ 10 fois le volume de la colonne, et on a ensuite élué avec de l'acide chlorhydrique 0,1 molaire.

Il faut noter qu'il est important d'opérer rapidement, en pratique sur une durée n'excédant pas 60 minutes, car la solution est métastable.

On a alcalinisé d'éluant avec une solution de soude IN, jusqu'à pH 12, et on a laissé au repos pendant 30 minutes. Il s'est formé un précipité que l'on a filtré sur une membrane spéciale de stérilisation et lavé avec de la soude 0,01 molaire. On a ensuite remis ce précipité en solution dans du CH3COOH 0,1 molaire. On a ramené le pH à 5,5 avec une solution de soude 0,1 N et on a obtenu une solution limpide d'acétate d'hydroxy-9 diméthyl-2,6 ellipticinium.

On a testé l'activité biologique de ce composé sur deux

A la lecture de ce tableau, on remarque que:

- l'index thérapeutique de l'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium est extrêmement élevé;

- pour une dose égale au l/100ème de las dose infra-létale, on a observé une activité encore très grande, puisque 90% des cellules leucémiques étaient alors tuées;

- pour une dose qui n'est encore qu'égale au l/10ème de la dose infra-létale, l'activité était telle que 99,96% des cellules leucémiques étaient tuées, ce qui équivaut à l'effet thérapeutique que l'hydroxy-9 ellipticine permet d'obtenir seulement à la dose infra-létale, c'est-à-dire avec des quantités injectées 10 fois plus élevées, en tout cas trop proches de la dose létale pour pouvoir être acceptables; à l'heure actuelle, il semble bien qu'aucune autre substance n'ait été trouvée, possédant sur ce système expérimental de la leucémie L 1210 un index thérapeutique aussi élevé;

- dans les mêmes conditions expérimentales, à la dose infra-létale, l'activité anti-tumorale de l'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium apparaît, avec 99,999% de cellules leucémiques tuées, très supérieure à celle de l'hydroxy-9 ellipticine, qui n'était que de 99,99%.

2 Iodométhylate d'acétoxy-9 méthyl-6 ellipticinium

On a pu établir, par des essais semblables à ceux rapportés dans 1 ci-dessus, que l'activité antitumorale de l'iodométhylate d'acétoxy-9 méthyl-6 ellipticinium est comparable à celle de l'iodométhylate d'hydroxy-9 méthyl-6 ellipticinium. La dose infra-létale était de 50 mg/kg.

Pour cette dose infra-létale et dans les mêmes conditions expérimentales que celles indiquées sous 1, on a pu obtenir 99,999% de cellules leucémiques tuées.

B

Claims (6)

1. 616 937
2. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que R est un groupe méthyle ou éthyle.

   2

   REVENDICATIONS 1. Procédé pour l'obtention d'halogénures d'ammonium quaternaires répondant à la formule

   CH

   R

   CH.

   R

   dans laquelle R est un groupe alkyle, Ri est un atome d'hydrogène, R2 est un groupe acyle et X est un atome d'halogène, ainsi que des acylates d'ammonium quaternaires correspondants, caractérisé en ce qu'il à:

   - acyler le groupe OH en position 9 de l'hydroxyde-9-ellipticine,

   - quaterniser l'atome d'azote en position 2, au moyen d'un composé RX dans lequel R et X sont tels que définis, et, le cas échéant,

   - remplacer l'anion Xe par un anion acylate.
3. 3. Procédé de préparation des halogénures d'ammonium quaternaires de formule I ci-dessus dans laquelle R et Ri sont chacun un groupe alkyle, R2 est un groupe acyle et X est un atome d'halogène, ainsi que des acylates d'ammonium quaternaires correspondants; caractérisé en ce qu'il consiste à

   - acyler le groupe OH en position 9 de l'hydroxy-9-ellipti-cine,

   - alkyler l'atome d'azote en position 6, et

   - quaterniser l'atome d'azote en position 2, au moyen d'un composé RX dans lequel R et X sont tels que définis, et, le cas échéant,

   - remplacer l'anion Xe par un anion acylate.
4. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que R est un groupe méthyle ou éthyle.
5. 5. Procédé de préparation des halogénures d'ammonium quaternaires de formule I ci-dessus dans laquelle R et Ri sont chacun un groupe alkyle, R2 est un atome d'hydrogène et X est un atome d'halogène, ainsi que des acylates d'ammonium quaternaires correspondants, caractérisé an ce qu'il consiste à:

   - acyler le groupe OH en position 9 de l'hydroxy-9-ellipti-cine,

   - alkyler l'atome d'azote en position 6,

   - libérer par hydrolyse le groupe OH en position 9, et

   - quaterniser l'atome d'azote en position 2, au moyen d'un composé RX dans lequel R et X sont tels que définis, et, le cas échéant,

   - remplacer l'anion Xe par un anion acylate.
6. 6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que R est un groupe méthyle ou éthyle.