CH431819A - Procédé de préparation d'un vaccin - Google Patents

Description

  
 



  Procédé de préparation d'un vaccin
 La présente invention a pour objet un procédé de préparation d'un vaccin destiné à combattre l'infection par la Salmonella dublin chez les veaux. L'infection par la Salmonella dublin est une infection bactérienne qui affecte les veaux, généralement à l'âge de 1 à 4 mois.



  La maladie peut s'étendre rapidement dans un troupeau et est souvent fatale ou, lorsque l'animal survit, provoque un amaigrissement tel que l'animal doit être abattu. On a déjà traité cette maladie à l'aide d'antibiotiques, mais ce traitement ne donne pas toujours satisfaction, et on recherche donc des mesures prophylactiques contre l'infection par la Salmonella dublin.



   La Salmonella dublin, comme c'est le cas pour de nombreux autres micro-organismes, peut exister sous des formes rugueuses et lisses, et la recherche de souches d'organismes pouvant convenir pour la préparation de vaccins s'est concentrée sur les formes rugueuses. Cependant, un très grand nombre de colonies rugueuses, qui ont été sélectionnées dans les cultures bactériennes, se sont montrées inutilisables. On a souvent dû renoncer à utiliser des colonies rugueuses pour la vaccination, car des formes rugueuses sont parfois trop virulentes et provoquent des symptômes pathologiques inacceptables chez l'animal ou parce qu'ils ne provoquent pas une réaction immunogène suffisante, ou parce qu'ils sont insuffisamment stables et reviennent in vivo à des formes plus virulentes.



   Deux procédés de sélection distincts ont été employés dans des tentatives d'obtenir des souches rugueuses de Salmonella dublin convenant pour la production de vaccins. Ces méthodes sont la sélection visuelle et la sélection par des phages, et cette dernière méthode, après une expérimentation prolongée, a conduit à l'isolement d'une forme rugueuse qui convient pour la production de vaccins. En effet, cette forme présente une combinaison acceptable de non-pathogénicité pour les veaux, d'immunogénicité et de stabilité. Cette forme rugueuse, dénommée à l'origine   HWS 51  , a été déposée à la American Type Culture Collection,
Maryland, USA et a reçu le   No    de dépôt A.T. C. C. 15480.



   Le procédé selon l'invention comprend la culture de la souche atténuée de Salmonella dublin portant le numéro de dépôt   A. T. C. C.    15480. Le vaccin obtenu est de préférence sous la forme d'un vaccin injectable préparé au moyen d'organismes lyophilisés.



   Par exemple, on peut préparer un vaccin injectable en ajoutant un diluant injectable aux organismes lyophilisés de manière à former une composition contenant 108 à 109 bactéries viables par ml de vaccin. Un vaccin contenant une concentration bactérienne de cet ordre s'est avéré convenir pour la vaccination des veaux lorsqu'une dose unique de 1 à 10 ml peut être administrée.



  Ces compositions peuvent être préparées sous forme de dose-unités, chaque unité contenant 108 à 109 bactéries viables.



   Les diluants injectables utilisables pour la préparation de ces vaccins peuvent être pris parmi les diluants injectables utilisés couramment dans l'art vétérinaire, par exemple eau distillée stérile, solutions salines ou solutions tamponnées aux phosphates. L'emploi des bactéries lyophilisées est commode pour la préparation de ces compositions, mais il n'est pas obligatoire d'utiliser des organismes dans cet état.   I1    est possible de récolter les organismes dans une culture ordinaire, par exemple une culture sur agar-agar nutritif, et de les remettre en suspension dans un diluant tel que ceux mentionnés ci  dessus.

   I1 est également possible d'utiliser directement une culture des organismes en bouillon comme vaccin, à condition que les précautions évidentes concernant la stérilité, etc., soient prises, et des résultats très satisfaisants ont été obtenus dans la pratique avec de tels vaccins.



   Bien que l'administration du vaccin par voie orale ait donné des résultats positifs chez la souris, la méthode préférée d'administration est par la voie parentérale, et l'injection sous-cutanée s'est montrée particulièrement avantageuse pour combattre l'infection par la Salmonella dublin chez le veau.



   Exemple
 On a ensemencé   20 mi    d'un bouillon nutritif stérile avec une culture de Salmonella dublin isolée des organes d'un veau qui était mort par suite d'infection par la
Salmonella dublin, et on a cultivé l'organisme à 370 C pendant 24 heures. Ce bouillon a été préparé à partir d'un concentré de marque ( Oxoid   No    1, formule   CM 67  )    et contenait un g par litre d'extrait de boeuf   Lab Lemco  , 2 g par litre d'extrait de levure (  Oxoid
L 20  ), 5 g par litre de peptone (  Oxoid L 37  ) et 5 g par litre de chlorure de sodium.

   Le pH était d'environ   7,4.    On a ensuite étendu la culture en bouillon nutritif sur une plaque d'agar-agar nutritif contenant les mêmes substances nutritives que le bouillon, avec 15 g par litre d'agar-agar et, lorsqu'elle a été sèche, on a fait tomber sur cette culture une goutte de suspension de phages Salmonella anti-O   No    1 (Felix et Callow, British Medical
Journal, 1943, 2, 127). On a incubé la plaque à 370 C pendant 24 heures, au cours desquelles une lyse complète s'est produite dans la zone d'application du phage.



  Cependant, on a constaté que plusieurs colonies résistantes aux phages proliféraient dans cette zone et on a pu établir que ces dernières étaient rugueuses, par le test à l'acraflavine sur lame de verre (Braun et Bonestell,
Amer. J. Vet. Res. 1948, 8, 386).



   On a sélectionné l'une de ces colonies rugueuses et on l'a encore purifiée par culture directe sur plaque cinq fois sur agar-agar à l'extrait de boeuf/extrait de levure/peptone/chlorure de sodium, une seule colonie étant choisie chaque fois pour être remise en culture.



  Les organismes choisis dans la cinquième plaque d'agaragar sont les organismes stables déposés par   A. T. C. C.    sous le numéro de dépôt 15480. Ces organismes ont également été désignés   HWS 51   pour les études de laboratoire au Animal Health Trust Farm Livestock
Research Centre. La possibilité de les utiliser pour la préparation d'un vaccin a été par détermination de l'atténuation, de la stabilité et de   l'immunogénicité    sur la souris et le veau.



   On a lyophilisé les organismes de la cinquième plaque d'agar-agar en les cultivant sur une surface oblique d'agar-agar pendant 24 heures à 370 C, en suspendant un échantillon des bactéries dans du Mist. Desiccans (glucose et sérum de cheval) de manière à former une suspension épaisse et on a séché la suspension dans une machine de lyophilisation commerciale. Le A. T. C. C.



  15480 peut également être conservé par culture sur un milieu à l'oeuf de Dorset pendant 24 heures à 370 C, puis en maintenant la culture à 50 C.



   On peut préparer une vaccin injectable suspendant les organismes lyophilisés dans de l'eau distillée stérile.



  Les organismes de la cinquième plaque ont également été cultivés dans le bouillon nutritif stérile mentionné cidessus à   37O,    et le bouillon de 24 heures contenant approximativement 5 X 108 bactéries viables par   ml    a été utilisé pour la vaccination directe de veaux comme décrit ci-dessous.



   Une culture de 18 heures en bouillon de A. T. C. C.



  15480 consiste en un dépôt pulvérulent fin   surmonté    d'une couche liquide trouble. Une suspension de l'organisme dans une solution saline isotonique est stable et s'agglutine immédiatement et complètement lorsqu'elle est soumise au test à l'acraflavine sur lame de verre.



   Dans cet exemple, on ne mentionne que les opérations qui ont conduit à la production de la souche vaccinale finalement sélectionnée.   I1    convient cependant de relever qu'un grand nombre d'autres formes rugueuses obtenues par les mêmes opérations ou par des opérations semblables ont été essayées mais qu'elles ont toutes été abandonnées, car ne convenant pas pour la préparation de vaccins.



   Les vaccins produits en application des méthodes décrites dans cet exemple ont été soumis à des essais pratiques. Des veaux ont été vaccinés et l'efficacité du vaccin a été éprouvée par agression artificielle par l'organisme virulent. Les essais ont été conduits sur des veaux mâles de race Ayrshire âgés de 3 semaines, qui avaient été sevrés à l'âge d'environ une semaine, puis nourris uniquement avec un produit de remplacement de marque à base de lait liquide, donné deux fois par jour. On a vacciné les veaux avec une seule injection sous-cutanée de 5   ml    du vaccin, consistant en bouillon de 24 heures contenant approximativement 5 X 108 bactéries viables par ml, décrit dans cet exemple. Trois semaines après la vaccination, l'efficacité du vaccin a été éprouvée par inoculation de l'organisme virulent par voie orale.



   La température corporelle, l'appétit et l'aspect général des veaux ont été notés avant et après la vaccination et avant et après l'infection, et les lésions ont été recherchées sur les animaux. Le foie, et fréquemment d'autres organes, de veaux qui étaient morts ont été examinés bactériologiquement pour confirmer que la mort était due à l'organisme Salmonella dont ils avaient été infectés. Les veaux ont été examinés pendant 21 jours après l'infection, après quoi les individus survivants étaient presque entièrement guéris. Les résultats détaillés de ces expériences sont donnés dans le tableau ci-dessous, qui contient également les résultats d'expériences semblables, effectuées avec les mêmes vaccins sur des veaux de la Frise.

   Ces veaux, qui étaient des individus mâles élevés intensivement pour la production de boeuf, ont été vaccinés à l'âge de trois semaines et maintenus sous un régime d'aliments concentrés solides pendant une semaine avant l'infection, faite à l'âge approximatif de 6 semaines. Les veaux ont été observés pendant environ 14 jours après l'infection, après quoi les individus survivants ne présentaient aucun effet pathologique dû à la vaccination ou à l'infection.  



   Nombre Mortalité cumulative aux jours Nombre
Veaux Vaccin de veaux vaccinés suivants après l'infection de survivants
 234567
Ayrshire A. T. C. C. 15480 5 0 0 0 0 1 1 4
 aucun 14 4 10 13 13 13 14 0
 7 8 9 10   ll      1l+   
Frisons A. T. C. C. 15480 10 0 0 0 0 0 0 10
 aucun 10 0 1 2 3 5 6 4
  

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé de préparation d'un vaccin, caractérisé en ce qu'on cultive la souche atténuée de Salmonella dublin portant le numéro de référence A.T. C. C. 15480 dans un milieu nutritif.

   SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication, pour la préparation d'un vaccin injectable, caractérisé en ce qu'on dilue la souche atténuée avec de l'eau distillée stérile.

   2. Procédé selon la sous-revendication 1, caractérisé en ce qu'on utilise un nombre d'organismes tel que le vaccin terminé contienne 108 à 109 bactéries viables par ml.

   3. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le milieu nutritif est un bouillon liquide ou un agaragar solide.

   4. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on récolte les organismes cultivés, on les lyophilise et on prépare le vaccin à partir des organismes lyophilisés.