Procédé de séparation par chromatographie en couche mince
et dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé
Dans le brevet belge No 625013 du 19. 11. 1962 de la titulaire, on décrit un procédé pour la fabrication de plaques destinées à la chromatographie en couche mince qui repose sur cette idée qu'il faut climatiser les plaques destinées à la chromatographie en couche mince si l'on veut obtenir des résultats reproductibles lors de l'utilisation, donc lors du développement.
La présente invention a pour objet un procédé et un dispositif permettant d'exécuter pratiquement cette climatisation et notamment, d'effectuer simultanément la climatisation et le développement de plaques pour chromatographie en couche mince.
Pour obtenir des résultats reproductibles dans la chromatographie en couche mince, il n'est pas seulement nécessaire d'utiliser des plaques que l'on a climatisées dans les mêmes conditions après l'application de l'adsorbant et le séchage, plus précisément à une même valeur de l'humidité relative, mais en outre, il est néces saire de veiller à maintenir les mêmes conditions climatologiques lors de l'utilisation des plaques, donc lors du développement.
Dans la fabrication des couches de chromatographie et dans leur développement, l'humidité relative exerce une influence décisive sur les résultats de la séparation, et par suite sur leur reproductibilité. I1 n'est pas possible non plus d'amener directement dans une enceinte climatisée les couches de chromatographie préparées qui ont été précédemment exposées à une atmosphère quelconque et de les y développer purement et simplement, car le temps qui est nécessaire à l'établissement de l'équilibre quant à l'humidité relative est plus long que le temps nécessaire au développement lui-même.
fl est donc nécessaire de laisser séjourner la matière de plaques préalablement itraitée dans la même enceinte, sans ouvrir entreWtemps les couvercles, sas, etc., et de la laisser s'équilibrer avec une atmosphère qui est déterminée par la température, l'humidité relative et éventuellement la tension de vapeur de l'agent d'élution utilisé, et de commenoer ensuite le développement des plaques, par exemple en les plongeant partiellement dans un agent d'élution approprié. Pendant le développement, on peut maintenir constantes les conditions climatologiques ou les faire encore varier.
Le procédé selon l'invention est caractérisé par le fait qu'on climatise préalablement la plaque de chromatographie en couche mince dans une enceinte dans laquelle règnent des conditions climatologiques choisies, et que l'on développe ladite plaque dans cette même enceinte en maintenant les conditions climatologiques choisies.
Le dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé est caractérisé en ce qu'il comprend une enceinte de climatisation possédant un couvercle amovible, des moyens permettant d'amener à l'intérieur de l'enceinte un éluant, des moyens permettant une climatisation de l'enceinte, ainsi que des moyens pour tenir en place une plaque de chromatographie en couche mince à l'intérieur de l'enceinte.
Le dessin annexé représente, à titre d'exemple, deux formes d'exécution du dispositif objet de l'invention pour la mise en oeuvre du procédé également objet de l'invention.
La fig. 1 est une perspective d'ensemble du dispositif constituant la -première forme d'exécution.
La fig. 2 est une élévation de face de l'enceinte de climatisation avec couvercle.
La fig. 3 est une élévation longitudinale partiellement en coupe de la cuve tubulaire destinée à recevoir l'éluant.
La fig. 4 est une élévation latérale partiellement en coupe de la chambre aplatie avec une partie du cône ou coin que l'on peut interposer dans le joint de rabatte- ment de cette chambre.
La fig. 5 est une coupe de la chambre aplatie représentée sur la fig. 4 et de la cuve d'élution.
La fig. 6, enfin, montre ¯ partiellement en coupe - une élévation latérale du dispositif constituant la seconde forme d'exécution.
Les fig. 1-5 peuvent être expliquées comme suit: une cuve d'élution, de forme tubulaire, 3, est munie à une extrémité d'un appui 16 qui s'appuie par des porfions 17 et 18 sur le fond 20 d'une enceinte de climatisation 1. De l'autre côté, la-cuve tubulaire s'appuie par une joue moletée 19 sur le fond de l'enceinte de climatisation. De préférence, l'enceinte de climatisation et son couvercle 2 sont en verre. De préférence, l'enceinte est en forme de boute et comporte des récipients 4 destinés à un agent desséchant nécessaire à la climatisation, par exemple de l'acide sulfurique Dans une fente 21 pratiquée dans le haut de la cuve d'élution se trouve une plaque de châssis 14 munie de bandes d'espacement 12 et qui, avec la plaque de chromatographie en couche mince 13 normalement séchée au préalable et munie d'adsorbant, constitue une chambre aplatie.
Les dimensions de la plaque 13 sont le plus-souvent de 200 X 200 ou de 200 X¯400mm. La chambre apIatie est main- tenue fermée par une pince à ressort 15. Le couvercle est muni de percées -22 à 25 destinées¯a deux tiges 7, à un axe 26 et à un entonnoir -à robinet 5: Les- tiges 7 sont reliées grâce à des manchons 9 munis de vis de blocage 10, à des- coins ou cônes 8 qui sont par exemple fabriqués en - polytétrafluoréthylène.
Quand ces tiges coulissent vers le bas, les coins viennent s'interposer dans le joint de rabattement des plaques 13 et 14, de sorte que la chambre aplatie s'ouvre-et que l'atmosphère de l'enceinte de climatisation peut entrer dans la chambre aplatie et atteindre l'adsorbant. A l'axe 26 est fixé un agitateur à ailettes 6. L'entonnoir à robinet 5 sert à
amener-l'éluant à la cuve 3.
Le dispositif représenté aux fig. 1 à 5 fonctionne comme suit:
On prend unie plaque de chromatographie en couche mince, normalement séchée au préalable et munie de corps à séparer, et on la couvre de la plaque de châssis 14, on met en place la pince 15 et on amène le tout dans la cuve 3 placée dans l'enceinte 1. Puis on ferme l'enceinte à l'aide du couvercle 2. Si l'on utilise des plaques de 200 X 200 mm, on pousse l'un des cônes ou coins entre les plaques, et dans le cas contraire on les pousse tous- les deux, des façon que l'atmosphère désirée puisse entrer en contact avec l'adsorbant.
De préférence, on utilise aussi l'agitateur 6.- Une fois que l'adsorbant a été climatisé, on retire le ou les coins, et par l'entonnoir à robinet, on introduit de l'éludant dans la cuve tubulaire 3.
On- fltilise à cet effet la-7 perforation A de la fig. 3.
Le dispositif suivant la fig. 6 est constitué comme suit: la chambre de climatisation 1 est de préférence en verre et est munie d'un couvercle 2 présentant quatre percées destinées respectivement à un entonnoir à robinet 3, à des - tubes d'amenée et d'évacuation de gaz 4 et 5, avec robinet, à une tige 6 avec manchon de liaison 7, par exemple en polytétrafluoréthylène, auquel est suspendue la plaque de chromatographie en couche mince 9. La tige est maintenue par un manchon 8 avec vis 10. L'entonnoir à robinet est relié à un anneau de verre muni de perforations B, ce qui permet de mouiller d'éluant le papier filtre A suspendu contre la paroi intérieure de la chambre.
On a désigné par 1 1 un déversoir destiné à un liquide thermostatique que l'on peut faire circuler le long de la paroi extérieure de la chambre.
Le dispositif de la fig. 6 fonctionne comme suit: sur la plaque normalement séchée, on applique les corps à séparer et on la suspend dans la chambre de climatisation de façon telle qu'elle ne touche pas le fond de celle-ci. On peut alors refouler de l'azote sec dans la chambre par 4, ou bien aspirer de l'air humide dans la chambre par le tube 5, jusqu'à oe que le climat désiré soit atteint. De préférence, on fait passer l'air aspiré par un flacon laveur contenant de l'acide sulfurique à la concentration nécessaire pour r le climat désiré. On peut mesurer l'humidité relative de la chambre à l'aide d'un hygromètre (non représenté). Une fois que le climat désiré est atteint, on humidifie le papier filtre avec l'éluant.
Au bout d'environ cinq minutes, quand l'atmosphère de la chambre est saturée de vapeur d'éluant, on plonge la plaque, en desserrant la vis 10, dans l'éluant situé au fond de la chambre. On obtient la température désirée en faisant circuler en circuit fermé un liquide thermostatique à travers la chemise extérieure de la chambre.
REVENDICATIONS
I. Procédé de séparation par chromatographie en couche mince, caractérisé- par le fait qu'on climatise préablement la plaque de chromatographie en couche mince dans une enceinte dans laquelle règnent des conditions climatologiques choisies, et que l'on développe ladite plaque dans cette même enceinte en maintenant les conditions climatologiques choisies.
Thin Layer Chromatography Separation Process
and device for implementing this method
In the Belgian patent No. 625013 of 19. 11. 1962 of the holder, a process is described for the manufacture of plates intended for thin layer chromatography which is based on the idea that the plates intended for layer chromatography must be air-conditioned. thin if one wants to obtain reproducible results during use, therefore during development.
The present invention relates to a method and a device making it possible to carry out this air conditioning in practice and in particular to carry out the air conditioning and the development of plates for thin layer chromatography simultaneously.
To obtain reproducible results in thin layer chromatography, it is not only necessary to use plates which have been conditioned under the same conditions after application of the adsorbent and drying, more precisely at a temperature. same value of relative humidity, but in addition, it is necessary to ensure that the same climatological conditions are maintained when using the plates, and therefore during development.
In the manufacture of chromatography layers and in their development, relative humidity has a decisive influence on the results of the separation, and hence on their reproducibility. It is also not possible to bring directly into an air-conditioned chamber the prepared chromatography layers which have been previously exposed to any atmosphere and to develop them there purely and simply, because the time which is necessary for the establishment of equilibrium with respect to relative humidity is longer than the time required for development itself.
It is therefore necessary to let the previously itreated plate material stay in the same chamber, without opening the lids, airlocks, etc. in the meantime, and to let it equilibrate with an atmosphere which is determined by the temperature, the relative humidity and optionally the vapor pressure of the eluting agent used, and then starting the development of the plaques, for example by partially immersing them in a suitable eluting agent. During development, the climatological conditions can be kept constant or further varied.
The method according to the invention is characterized by the fact that the thin layer chromatography plate is pre-conditioned in an enclosure in which selected climatological conditions prevail, and that said plate is developed in this same enclosure while maintaining the conditions. climatological selected.
The device for implementing this method is characterized in that it comprises an air conditioning enclosure having a removable cover, means allowing an eluent to be brought inside the enclosure, means allowing air conditioning of the enclosure, as well as means for holding in place a thin layer chromatography plate inside the enclosure.
The appended drawing represents, by way of example, two embodiments of the device which is the subject of the invention for implementing the method which is also the subject of the invention.
Fig. 1 is an overall perspective of the device constituting the -première embodiment.
Fig. 2 is a front elevation of the air conditioning enclosure with cover.
Fig. 3 is a longitudinal elevation partially in section of the tubular vessel intended to receive the eluent.
Fig. 4 is a partially sectioned side elevation of the flattened chamber with a portion of the cone or wedge interposed in the flap seal of that chamber.
Fig. 5 is a section through the flattened chamber shown in FIG. 4 and the elution tank.
Fig. 6, finally, shows ¯ partially in section - a side elevation of the device constituting the second embodiment.
Figs. 1-5 can be explained as follows: an elution tank, of tubular shape, 3, is provided at one end with a support 16 which rests by porfions 17 and 18 on the bottom 20 of a chamber of air conditioning 1. On the other side, the tubular vessel is supported by a knurled cheek 19 on the bottom of the air conditioning chamber. Preferably, the air conditioning enclosure and its cover 2 are made of glass. Preferably, the enclosure is in the form of a bottle and comprises receptacles 4 intended for a drying agent necessary for air conditioning, for example sulfuric acid. In a slot 21 made in the top of the elution tank there is a chassis plate 14 provided with spacer strips 12 and which, together with the thin layer chromatography plate 13 normally pre-dried and provided with adsorbent, constitutes a flattened chamber.
The dimensions of the plate 13 are most often 200 X 200 or 200 X¯400mm. The apiatic chamber is kept closed by a spring clip 15. The cover is provided with holes -22 to 25 intended for two rods 7, an axis 26 and a funnel -with valve 5: The rods 7 are connected by means of sleeves 9 provided with locking screws 10, to wedges or cones 8 which are for example made of - polytetrafluoroethylene.
When these rods slide downward, the wedges interpose themselves in the folding joint of the plates 13 and 14, so that the flattened chamber opens and the atmosphere of the air conditioning chamber can enter the chamber. flattened chamber and reach the adsorbent. A vane stirrer 6 is attached to the shaft 26. The valve funnel 5 serves to
bring the eluent to the tank 3.
The device shown in FIGS. 1 to 5 works as follows:
We take a thin layer chromatography plate, normally dried beforehand and provided with bodies to be separated, and we cover it with the frame plate 14, we put in place the clamp 15 and we bring the whole into the tank 3 placed in enclosure 1. Then the enclosure is closed using the cover 2. If using plates of 200 X 200 mm, push one of the cones or wedges between the plates, and in the opposite case they are both pushed so that the desired atmosphere can come into contact with the adsorbent.
Preferably, the stirrer is also used 6. Once the adsorbent has been conditioned, the wedge or corners are removed, and through the funnel with a stopcock, eludant is introduced into the tubular vessel 3.
For this purpose use is made of the perforation A of FIG. 3.
The device according to FIG. 6 is made as follows: the air conditioning chamber 1 is preferably made of glass and is provided with a cover 2 having four openings intended respectively for a funnel with a tap 3, for - gas supply and discharge tubes 4 and 5, with stopcock, to a rod 6 with connecting sleeve 7, for example made of polytetrafluoroethylene, from which is suspended the thin-layer chromatography plate 9. The rod is held by a sleeve 8 with screw 10. The stopcock funnel is connected to a glass ring provided with perforations B, which makes it possible to wet the filter paper A suspended against the interior wall of the chamber with eluent.
1 1 denotes a weir for a thermostatic liquid which can be circulated along the outer wall of the chamber.
The device of FIG. 6 operates as follows: on the normally dried plate, the bodies to be separated are applied and suspended in the air conditioning chamber in such a way that it does not touch the bottom thereof. Dry nitrogen can then be forced back into the chamber by 4, or else humid air can be sucked into the chamber through tube 5, until the desired climate is reached. Preferably, the air sucked in is passed through a washing bottle containing sulfuric acid at the concentration necessary for the desired climate. The relative humidity of the chamber can be measured using a hygrometer (not shown). Once the desired climate is reached, the filter paper is moistened with the eluent.
After about five minutes, when the atmosphere in the chamber is saturated with eluent vapor, the plate is immersed, loosening screw 10, in the eluent located at the bottom of the chamber. The desired temperature is obtained by circulating a thermostatic liquid in a closed circuit through the outer jacket of the chamber.
CLAIMS
I. A method of separation by thin layer chromatography, characterized by the fact that the thin layer chromatography plate is pre-conditioned in an enclosure in which selected climatological conditions prevail, and that said plate is developed in the same. enclosure while maintaining the selected climatological conditions.