Procédé de préparation de nouveaux dérivés de l'héparine
La présente invention a pour objet un procédé de préparation de dérivés de l'héparine appelés héparinamides, comportant notamment une proportion de 60 à 95 % des groupes aarboxyles amidifiés.
Certains de ces nouveaux composés, et notamment les N-méthyihéparinamides, présentent des propriétés physiologiques utiles, en particulier une activité antilipémique élevée, tout en étant pratiquement exempts d'activité anticoagulante typique pour les composés de cette famille de corps.
En particulier, lle sel de sodium du N-méthyl- héparinamide peut être utilise pour le traitement de l'hyperlipémie postprandiale ou chronique, de l'hy- percholestérolémie, de l'athéromatose, des stéatoses hépatiques et des néphroses lipoldiques.
Le procédé suivant l'invention consiste à faire réagir un dérivé fonctionnel de l'héparine, soit avec l'ammoniac pour obtenir un héparinamîde simple, soit avec une amine primaire pour obtenir le dérivé
N-alcoylé correspondant.
Dans un premier mode d'exécution on prépare, comme dérivé fonctionnel, un ester d'alcoyle inférieur de l'héparine en soumettant celle-ci, sous forme de sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne, à l'action d'un agent d'estérification correspondant.
I1 est particulièrement avantageux d'utiliser, pour la réaction d'amidification, l'ester méthylique de l'héparine auquel on accède facilement en faisant réagir le diazométhane sur l'héparine sous forme de sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne.
La réaction d'amidification par l'ammoniac est de préférence effectuée dans un milieu aqueux.
La réaction avec les amines primaires, notamment avec la méthylamine, est très avantageusement effeotuée dans un milieu aqueux mais on obtient aussi de bons résultats - comme il est montré plus loin - en opérant dans un milieu anhydre qui peut être constitué par un solvant tel que le formamide.
On peut préparer ainsi au moyen des amines primaires telles que la méthuylamine, l'éthylamine, la propylamine, l'isopropylamine, la butylamine,
I'isobutylamine, la ter-butylamine, etc., les N-alcoyl héparinamides correspondants, à savoir: - le N-méthyl-héparinamide, -le N-éthyl-héparinamide, - le N-propyl-héparinamide, -le N-isopropyl-héparinamide, -le N-butyl-héparinamide, - le N-isobutyl-hép ; arin, amide, -le N-ter-butyl-héparinamide, etc.
Il est avantageux de conduire les réactions d'ami dification sous refroidissement de préférence, à des températures comprises entre -30 et +250 C.
Dans le cas de la préparation du N-méthyî- héparinamide, une variante du procédé de l'invention consiste à préparer d'abord l'héparinamide simple et à méthyler ensuite celui-ci, sous forme de sel d'ammonium quaternaire à longue chaîne, à l'aide du diazométhane.
Le degré d'amidification des carboxyles des produits ainsi obtenus dépend de la nature de l'amine et des conditions opératoires, en particulier de la concentration en amine du milieu, le taux d'amidi- fixation étant généralement plus élevé quand le milieu est plus riche en amine.
Dans un deuxième mode d'exécution on prépare, comme dérivé fonctionnel, un anhydride mixte de l'héparine et de l'acide formique en faisant réagir l'héparine, sous forme de sel d'un ammonium quaternaire, à longue chaîne, avec un chloroformiate d'alcoyle inférieur.
Comme ammoniums quaternaires à longue chaîne, on emploie avantageusemenlt les produits suivants le chlorure de benzyldiméthyl-2-[2-(p-1,1,3,3,-tétraméthylbutylphénoxy)-éthoxy]-éthyl-ammonium, de de formule brute C27H42ClNO2,H2O et de formule développée:
EMI2.1
désigné ci-après par le terme commercial hyamine 1622 , l'hyamine 2389 décrite à l' Index des huiles sulfonées et détergents modernes , de J. P-Sisley, II, p. 373, le Cequartyl BE figurant page 287 de l'Index susmentionné, 1' Arquad 2C# page 261, ou le Zéphirol page 286 du même Index.
Comme chloroformiate on choisit, de préférence, le chloroformiate d'éthyle.
La réaction de l'amidifioation. peut être conduite en milieu anhydre, mais elle donne aussi de très bons résultats en opérant en présence d'une faible quantité d'eau.
Ce deuxième mode d'exécution conduit à des produits dont l'activité antilipémique est aussi élevée que celle des produits obtenus par le premier, mais dont l'activité anticoagulante est réduite de moitié par rapport auxdits produits.
Les exemples suivants illustrent l'invention.
Les températures sont indiquées en degrés centigrades.
Exemple 1
Préparation d'un héparinamide (sel de potassium)
Stade A : Ester méthylique d'héparine (sel de
potassium) a) Préparation du sel d'hyamine acide de l'héparine
On dissout 40 g d'héparinate de sodium, solvaté à 7,2 % dans 160 cm3 d'eau, ajoute 10cm3 d'acide formique puis 810 cm3 d'une solution à 10 0/o d'hyamine 1622.
Le mélange réactionnel eslt agité pendant quelques minutes ; on essore le produit précipité, lave à l'eau et sèche pour recueillir 86,8 g (soit 91,4 %) de sel d'hyamine acide de l'héparine. b) Estérification par le diazométhane
30 g de sel d'hyamine acide de l'héparine sont dissous dans 300cm3 de chlorure de méthylène, on refroidit à 00 C et introduit lentement 51 cm5 d'une solution chlorométhylénique renfermant 14, 7 g de diazométhane par 100cm3 et abandonne le mélange réactionnel pendant 10 minutes à 00 C. On distille ensuite le solvant sous vide, dissout le résidu dans 450 cm3 de butanol saturé d'eau et extrait la solution butanolique avec une solution à 20 % d'acétate de potassium.
Les extraits sont versés dans l'éthanol, on abandonne une heure au repos, essore, lave le produit obtenu à l'éthanol et à l'éther et recueille 12-, 86 g de l'ester méthylique d'héparine, sel de potassium. Le produit est solvate à 4,4O/o. Il se présente sous forme d'un solide blanc, insoluble dans les solvants organiques usuels tels que l'alcool, l'éther, l'acétone, le benzène, le chloroforme et soluble dans l'eau et les alcalis dilués aqueux. Il se décompose dans les acides dilués aqueux. [α]D20 = + 450 (c = 1 /o, elau).
Analyse
C52H78O73N4S11K11 = 2705
Calculé
C 23,08% H 2.72% N 2,O-70/o OCH5 4,60/o
Trouvé
C22,8-22,9% H 3,0-2,7% N1,9% OCH3 4,4%
Ce produit n'est pas décrit dans la littérature.
De manière similaire, on prépare l'ester méthylique de l'héparine, sel de sodium, en utilisant une solution d'acétate de sodium à la place de la solution d'acétate de potassium pour l'extraction de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.
Stade B : Amidification
On sature par du gaz ammoniac, à +3 C, 800 cm3 de solution ammoniacale à 220 Bé. On ajoute sous agitation, à + 30 C, une solution de 8 g d'ester méthylique d'héparine, sel de potassium, dans 40 cm3 d'eau distillée, sature de nouveau avec l'ammoniac puis abandonne pendant quarante-huit heures à 00 C. On chasse ensuite l'ammoniac par distillation sous vide au-dessous de 200 C.
A la solution aqueuse résiduelle, on ajoute une solution de 16 g d'hyamine 1622 dans 160 cm3 d'eau distillée. Le sel d'hyamine précipite, on l'essore et le lave à l'eau, puis on le dissout dans du butanol saturé d'eau et on extrait avec une solution aqueuse à 20 /o d'acétate de potassium. On verse les extraits dans l'éthanol et essore la substance précipitée qu'on sèche sur anhydride phosphorique. On obtient 7,08 g de produit à taux d'amidification d'environ 72 % présentant les caractéristiques suivantes : solvation: 7,75 0/o - fonction ester: 0.
Analyse
C48H69O69S11N8K11 = 2.645
Calculé
C21,79% H2.62% N4,23% S 13,33%
Trouvé
C22,0-22.1% H2,6% N3,5-3,6% S12.3%
Activité physiologique:
Antilipémique: 1 116 U/mg, soit corrigé 136 U/mg
Anticoagulante: 25 U/mg, soit corrigé 30U/mg
Ce produit n'est pas décrit dans la littérature.
De manière similaire, on prépare un héparinamide, sel de sodium en utilisant une solution d'acétate de sodium à la place de la solution d'acétate de potassium pour l'extraction de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.
Exemple 2
Préparation d'un N-méthyl-héparinamide (sel de
sodium) en milieu anhydre
On condense à une température comprise entre -30 et -400 30 cm3 de monométhylamine, ajoute une solution refroidie à 00 C de 0,5 g d'ester móthy- lique d'héparine sel de sodium et 15 cm3 de formamide. Le mélange réactionnel est maintenu à une température comprise entre 100 et 150 C pendant deux heures. On chasse ensuite sous vide l'excès de la méthylamine, puis ajoute une solution de 15 g d'hyamine 1622 dans 100 cm3 d'eau. Après un abandon d'une nuit, on essore le sel d'hyamine qu'on introduit dans 20 cm3 de butanol saturé d'eau.
On extrait avec une solution aqueuse à 20 % d'acétate de sodium, verse les extraits dans l'alcool et essore le N-méthyl-héparinamide qu'on lave à l'alcool et sèche sur anhydride phosphorique.
Rendement 458 mg (soit 88 /o) de produit solvaté à 13,1 /o.
Activité antilipémique ; $151 U/mg.
Activité anticoagulante: 11 U/mg (valeurs cor
rigées).
Taux d'azote: 3,8% (la théorie étant de 4,410/o).
D'après le pourcentage d'azote, le taux d'amidification est 71,5 /o.
Ce produit n'est pas décrit dans la littérature.
De manière similaire, on prépare un N-méthylhéparinamide sel de potassium en utilisant une solution d'acétate de potassium à la place de la solution d'acétate de sodium pour l'extraction de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.
Exemple 3
Préparation d'un N-méthyl-héparinamide (sel de
sodium) en milieu aqueux
On fait barboter la monométhylamine dans 25cm3 d'eau maintenue entre 0 et + 50 C jusqu'à ce que le volume atteigne 50 cm3, ajoute 0,5 g d'ester méthylique d'héparine, sel de sodium, et agite le mélange formé pendant deux heures à + 100 C.
On chasse ensuite la méthylamine sous vide, ajoute une solution de 1,5 g d'hyamine 1622 dans 100 cm3 d'eau et abandonne ensuite à la température ambiante pendant une nuit. On essore, dissout le produit essoré dans 20 cm3 de butanol saturé d'eau et extrait avec une solution d'acétate de sodium. On verse les extraits dans l'alcool, essore le N-méthyl- héparinamide qu'on sèche sur anhydride phosphorique.
Rendement: 478 mg de produit (soit 95,5 %) solvaté à 9,95 %. [ai20 = + 50,70 (c = 1 0/o, eau).
Activité antilipémique: 148 U/mg.
Activité anticoagulante: 10,5 U/mg (valeurs cor
rigées)
Analyse: C52H77O69S11N8Na11 = 2,524.
Taux de soufre: 13,03 % (théorie: 13,97 /o).
Taux d'azote: 4,1 0/o.
D'après le pourcentage d'azote, le taux d'amidification est de 85 /o.
Exemple 4
Préparation d'un N-méthyl-héparinamide (sel de
potassium) par méthylation de l'héparinamide
On dissout 2 g d'héparinamide, sel de sodium, obtenu selon l'exemple 1, dans 10 omss d'eau, ajoute 2 cm3 d'acide formique puis 34 cm3 d'une solution à 10 /o d'hyamine 1622. Le sel acide d'hyamine qui précipite est essoré et bavé à l'eau. Après séchage sur anhydride phosphorique, on le dissout dans 50 cm3 de chlorure de méthylène, puis introduit 10 om3 d'une solution de diazométhane à 11 g/litre.
Le mélange réactionnel est abandonné pendant quel- ques minutes puis concentré sous vide. Le résidu est repris dans 75 cm3 de butanol saturé d'eau et extrait avec une solution aqueuse à 20% d'acétate de potassium. On verse les extraits dans l'alcool, essore le précipité qu'on lave et sèche pour recueillir 1,7 g de produit solvaté à 7,1 0/o et renfermant 5,05 % d'acétate de potassium.
Pourcentage d'azote : 3,5-3,6 % (corrigé, théo
rie: 4,23 /o).
Activité antilipémique: 125 U/mg.
Activité anticoagulante : 8,9 U/mg (valeurs cor-
rigées).
Le pourcentage d'azote confirme que le taux d'amidification du produit de départ de 72 % est resté constant dans le produit obtenu.
De manière similaire, on prépare un N-méthylhéparinamide sel de sodium en utilisant une solution d'acétate de sodium à la place de la. solution d'acé- tate de potassium, pour l'extraction de la solution butanolique contenant le sel d'hyamine.
Exemple 5
Préparation d'un N-méthyl-héparinamide
A une solution refroidie à une température comprise entre 0 et +20 C, contenant 0,3 % d'eau, de 6 g de sel neutre d'hyamine de l'héparine préparée selon le brevet suisse NO 380878 dans 120cm3 de tétrahydrofuran, on ajoute 2 cm de chloroformiate d'éthyle. On agite quinze minutes à une température comprise entre 00 et +20 C ; puis on fait barboter de la monométhylamine de façon à introduire 4 litres de gaz en quinze minutes en refroidissant pour ne jamais dépasser +70 C. On agite encore pendant quarante-cinq minutes à une température comprise entre 00 et +20 C. On distille à sec sous vide à température ambiante. Le résidu est dissous dans 80 cm3 de butaol n saturé d'eau.
On effectue 4 extractions successives avec 6cm3 de solution aqueuse à 20 /o d'acétate de sodium. Ces extraits réunis sont traités par 43 cmss d'une solution d'hyamine 1622 à 10 lo. Après repos d'une heure on essore, lave à l'eau, reprend par 60 Oms de butanol saturé d'eau, effectue 3 extractions par 6 cm3 de solution aqueuse d'acétate de sodium à 20 % à chaque fois.
Le produit obtenu est blanc, insoluble dans l'alcool et l'éther, soluble dans l'eau et les acides ou alcalis dilués aqueux.
[a] D =+ 55 à 580 (c = 1 /o, eau).
Taux d'amidification: 90 0/o.
Solvatation: 7,7 /o.
Soufre: 13,75 % (la théorie étant de 13,98).
Activité antilipémique : 179 unités/g.
Activité anticoagulante: 4,1 unités/mg.
Process for the preparation of new heparin derivatives
The present invention relates to a process for the preparation of heparin derivatives called heparinamides, comprising in particular a proportion of 60 to 95% of the amidized aarboxyl groups.
Some of these new compounds, and in particular the N-methyihparinamides, exhibit useful physiological properties, in particular high antilipemic activity, while being substantially free of anticoagulant activity typical for compounds of this family of bodies.
In particular, the sodium salt of N-methylheparinamide can be used for the treatment of postprandial or chronic hyperlipemia, hypercholesterolemia, atheromatosis, hepatic steatosis and lipoldic nephrosis.
The process according to the invention consists in reacting a functional derivative of heparin, either with ammonia to obtain a simple heparinamide, or with a primary amine to obtain the derivative.
Corresponding N-alkylated.
In a first embodiment is prepared, as functional derivative, a lower alkyl ester of heparin by subjecting the latter, in the form of a long-chain quaternary ammonium salt, to the action of an agent. corresponding esterification.
It is particularly advantageous to use, for the amidation reaction, the heparin methyl ester, which is easily accessed by reacting the diazomethane with heparin in the form of a long-chain quaternary ammonium salt.
The ammonia amidification reaction is preferably carried out in an aqueous medium.
The reaction with primary amines, in particular with methylamine, is very advantageously carried out in an aqueous medium but good results are also obtained - as is shown below - by operating in an anhydrous medium which may consist of a solvent such as formamide.
It is thus possible to prepare by means of primary amines such as methuylamine, ethylamine, propylamine, isopropylamine, butylamine,
Isobutylamine, tert-butylamine, etc., the corresponding N-alkyl heparinamides, namely: - N-methyl-heparinamide, -N-ethyl-heparinamide, - N-propyl-heparinamide, -the N- isopropyl-heparinamide, -N-butyl-heparinamide, - N-isobutyl-hep; arin, amide, N-ter-butyl-heparinamide, etc.
It is advantageous to carry out the ami dification reactions under cooling, preferably at temperatures between -30 and +250 C.
In the case of the preparation of N-methyl-heparinamide, a variant of the process of the invention consists in first preparing the simple heparinamide and then in methylating the latter, in the form of a long-chain quaternary ammonium salt. , using diazomethane.
The degree of amidification of the carboxyls of the products thus obtained depends on the nature of the amine and on the operating conditions, in particular on the amine concentration of the medium, the rate of amidi-fixation being generally higher when the medium is higher. rich in amine.
In a second embodiment, a mixed anhydride of heparin and formic acid is prepared as a functional derivative by reacting heparin, in the form of a long-chain quaternary ammonium salt, with a lower alkyl chloroformate.
As long-chain quaternary ammoniums, the following products are advantageously employed: benzyldimethyl-2- [2- (p-1,1,3,3, -tetramethylbutylphenoxy) -ethoxy] -ethyl-ammonium chloride, of the crude formula C27H42ClNO2 , H2O and structural formula:
EMI2.1
designated hereinafter by the trade term hyamine 1622, hyamine 2389 described in the Index of sulfonated oils and modern detergents, by J. P-Sisley, II, p. 373, Cequartyl BE appearing on page 287 of the aforementioned Index, 1 'Arquad 2C # page 261, or Zephirol on page 286 of the same Index.
As chloroformate, ethyl chloroformate is preferably chosen.
The reaction of amidification. can be carried out in an anhydrous medium, but it also gives very good results by operating in the presence of a small quantity of water.
This second embodiment leads to products whose antilipemic activity is as high as that of the products obtained by the first, but whose anticoagulant activity is reduced by half compared to said products.
The following examples illustrate the invention.
Temperatures are given in degrees centigrade.
Example 1
Preparation of a heparinamide (potassium salt)
Stage A: Heparin methyl ester (salt of
potassium) a) Preparation of the acidic hyamine salt of heparin
40 g of sodium heparinate, solvated at 7.2% in 160 cm3 of water, are dissolved, 10 cm3 of formic acid then 810 cm3 of a 10 0 / o solution of hyamine 1622.
The reaction mixture is stirred for a few minutes; the precipitated product is filtered off, washed with water and dried to collect 86.8 g (ie 91.4%) of heparin acid hyamine salt. b) Esterification with diazomethane
30 g of heparin acid hyamine salt are dissolved in 300cm3 of methylene chloride, cooled to 00 C and slowly introduced 51 cm5 of a chloromethylene solution containing 14.7 g of diazomethane per 100cm3 and abandon the reaction mixture for 10 minutes at 00 ° C. The solvent is then distilled off under vacuum, the residue is dissolved in 450 cm3 of butanol saturated with water and the butanol solution is extracted with a 20% solution of potassium acetate.
The extracts are poured into ethanol, left to stand for one hour, filtered off, the product obtained is washed with ethanol and with ether and 12-, 86 g of the methyl ester of heparin, potassium salt are collected. . The product is solvated at 4.4O / o. It is in the form of a white solid, insoluble in the usual organic solvents such as alcohol, ether, acetone, benzene, chloroform and soluble in water and dilute aqueous alkalis. It decomposes in dilute aqueous acids. [α] D20 = + 450 (c = 1 / o, elau).
Analysis
C52H78O73N4S11K11 = 2705
Calculated
C 23.08% H 2.72% N 2, O-70 / o OCH5 4.60 / o
Find
C22.8-22.9% H 3.0-2.7% N1.9% OCH3 4.4%
This product is not described in the literature.
Similarly, heparin methyl ester, sodium salt, is prepared by using sodium acetate solution instead of potassium acetate solution for the extraction of the butanol solution containing the salt. of hyamine.
Stage B: Amidification
Saturated with ammonia gas at +3 C, 800 cm3 of ammoniacal solution at 220 Bé. A solution of 8 g of heparin methyl ester, potassium salt, in 40 cm3 of distilled water is added with stirring at + 30 ° C., again saturated with ammonia and then left for forty-eight hours at 00 C. The ammonia is then removed by vacuum distillation below 200 C.
To the residual aqueous solution is added a solution of 16 g of hyamine 1622 in 160 cm3 of distilled water. The hyamine salt precipitates, is filtered off and washed with water, then it is dissolved in water-saturated butanol and extracted with a 20% aqueous solution of potassium acetate. The extracts are poured into ethanol and the precipitated substance is filtered off and dried over phosphorus pentoxide. 7.08 g of product with an amidification rate of approximately 72% is obtained, exhibiting the following characteristics: solvation: 7.75 0 / o - ester function: 0.
Analysis
C48H69O69S11N8K11 = 2.645
Calculated
C21.79% H2.62% N4.23% S 13.33%
Find
C22.0-22.1% H2.6% N3.5-3.6% S12.3%
Physiological activity:
Antilipemic: 1116 U / mg, corrected 136 U / mg
Anticoagulant: 25 U / mg, or corrected 30U / mg
This product is not described in the literature.
Similarly, a heparinamide sodium salt is prepared by using sodium acetate solution in place of potassium acetate solution for the extraction of butanol solution containing hyamine salt.
Example 2
Preparation of an N-methyl-heparinamide (salt of
sodium) in anhydrous medium
Condensed at a temperature between -30 and -400 30 cm3 of monomethylamine, added a solution cooled to 00 C of 0.5 g of heparin methyl ester sodium salt and 15 cm3 of formamide. The reaction mixture is maintained at a temperature between 100 and 150 ° C. for two hours. The excess methylamine is then removed under vacuum, then a solution of 15 g of hyamine 1622 in 100 cm3 of water is added. After leaving it overnight, the hyamine salt is filtered off and introduced into 20 cm3 of water-saturated butanol.
Extracted with a 20% aqueous solution of sodium acetate, the extracts are poured into alcohol and the N-methyl-heparinamide is filtered off and washed with alcohol and dried over phosphorus pentoxide.
Yield 458 mg (ie 88 / o) of product solvated at 13.1 / o.
Antilipemic activity; $ 151 U / mg.
Anticoagulant activity: 11 U / mg (cor values
rigées).
Nitrogen rate: 3.8% (the theory being 4.410 / o).
Based on the nitrogen percentage, the amidification rate is 71.5 / o.
This product is not described in the literature.
Similarly, an N-methylheparinamide potassium salt is prepared by using a potassium acetate solution instead of the sodium acetate solution for the extraction of the butanol solution containing the hyamine salt.
Example 3
Preparation of an N-methyl-heparinamide (salt of
sodium) in aqueous medium
The monomethylamine is bubbled in 25cm3 of water maintained between 0 and + 50 C until the volume reaches 50 cm3, added 0.5 g of heparin methyl ester, sodium salt, and the mixture formed is stirred. for two hours at + 100 C.
The methylamine is then removed in vacuo, a solution of 1.5 g of hyamine 1622 in 100 cm3 of water is added and then left at room temperature overnight. The product is filtered off, dissolved in 20 cm3 of water-saturated butanol and extracted with sodium acetate solution. The extracts are poured into alcohol and the N-methylheparinamide is filtered off and dried over phosphorus pentoxide.
Yield: 478 mg of product (ie 95.5%) solvated at 9.95%. [ai20 = + 50.70 (c = 10 / o, water).
Antilipemic activity: 148 U / mg.
Anticoagulant activity: 10.5 U / mg (cor values
rigées)
Analysis: C52H77O69S11N8Na11 = 2.524.
Sulfur rate: 13.03% (theory: 13.97 / o).
Nitrogen rate: 4.1 0 / o.
According to the percentage of nitrogen, the rate of amidification is 85 / o.
Example 4
Preparation of an N-methyl-heparinamide (salt of
potassium) by methylation of heparinamide
2 g of heparinamide, sodium salt, obtained according to Example 1, are dissolved in 10 omss of water, 2 cm3 of formic acid and then 34 cm3 of a 10 / o solution of hyamine 1622 are added. acid salt of hyamine which precipitates is drained and soaked in water. After drying over phosphorus pentoxide, it is dissolved in 50 cm3 of methylene chloride, then introduced 10 om3 of a diazomethane solution at 11 g / liter.
The reaction mixture is left for a few minutes and then concentrated in vacuo. The residue is taken up in 75 cm3 of butanol saturated with water and extracted with a 20% aqueous solution of potassium acetate. The extracts are poured into alcohol, the precipitate is filtered off, washed and dried to collect 1.7 g of product solvated at 7.1% and containing 5.05% of potassium acetate.
Percentage of nitrogen: 3.5-3.6% (corrected, theo
rie: 4.23 / o).
Antilipemic activity: 125 U / mg.
Anticoagulant activity: 8.9 U / mg (cor-
rigées).
The nitrogen percentage confirms that the degree of amidification of the starting product of 72% has remained constant in the product obtained.
Similarly, an N-methylheparinamide sodium salt is prepared by using sodium acetate solution in place of 1a. potassium acetate solution, for the extraction of the butanol solution containing the hyamine salt.
Example 5
Preparation of an N-methyl-heparinamide
In a solution cooled to a temperature between 0 and +20 C, containing 0.3% water, of 6 g of neutral hyamine salt of heparin prepared according to Swiss patent NO 380878 in 120cm3 of tetrahydrofuran, one add 2 cm of ethyl chloroformate. Stirred fifteen minutes at a temperature between 00 and +20 C; then bubbled monomethylamine so as to introduce 4 liters of gas in fifteen minutes while cooling so as never to exceed +70 C. The mixture is stirred for forty-five minutes at a temperature between 00 and +20 C. The mixture is distilled at dry under vacuum at room temperature. The residue is dissolved in 80 cm3 of n butaol saturated with water.
4 successive extractions are carried out with 6 cm3 of a 20% aqueous solution of sodium acetate. These combined extracts are treated with 43 cmss of a solution of hyamine 1622 to 10 lo. After standing for one hour, filtered, washed with water, taken up in 60 Oms of butanol saturated with water, carried out 3 extractions with 6 cm3 of 20% aqueous sodium acetate solution each time.
The product obtained is white, insoluble in alcohol and ether, soluble in water and in dilute aqueous acids or alkalis.
[a] D = + 55 to 580 (c = 1 / o, water).
Amidification rate: 90 0 / o.
Solvation: 7.7 / o.
Sulfur: 13.75% (the theory being 13.98).
Antilipemic activity: 179 units / g.
Anticoagulant activity: 4.1 units / mg.