Procédé pour séparer, dans une solution, une ptéridine des impuretés qui l'accompagnent. Il est décrit et revendiqué, au brevet prin cipal, un procédé pour séparer, dans une solu- tion contenant une ptéridine correspondant à la formule générale: -
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où R est le reste d'un aminoacide ou d'un peptide, ladite ptéridine des impuretés qui l'accompagnent et notamment de ptéridines de formule autre que la formule ci-dessus.
Il a été découvert maintenant que ce même processus peut s'appliquer, avec tous les avan tages mentionnés au brevet principal, aux ptéridines renfermant le groupement
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dans lequel R est le reste d'un aminoacide. La présente invention a donc pour objet un procédé pour séparèr, dans une solution contenant une ptéridine présentant le groupe- ment: .
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dans lequel R_ est le reste d'un aminoacide, ladite ptéridine des impuretés qui l'accom- pagnent et notamment des ptéridines de for mule autre que la formule ci-dessus, ce pro-_ cédé étant caractérisé par le fait qu'on ajoute, à cette solution contenant une ptéridine ayant la formule générale ci-dessus, un sel soluble de zinc, de préférence Lui sel acide de zinc à une solution alcaline d'un mélange réactionnel cru, et règle le pH du liquide à une valeur comprise entre 10,5 et 11,2 et en ce qu'on sépare les matières précipitées constituées essentiellement desdites impuretés sous forme de combinaisons de zinc,
d'avec la solution qui contient la majeure partie de la ptéridine désirée sous forme d'un sel de zinc soluble, et régénère finalement cette ptéridine. La pré cipitation peut avoir lieu aussi bien dans une solution froide que chaude.
Pour la régénération, le pg de la solution débarrassée des impuretés peut ensuite être ré duit jüsqu'aiLx limites comprises entre 6,5 et 7 environ, en ajoutant des quantités supplé mentaires d'un sel acide de zinc ou par l'addi tion d'acide. Dans ces conditions, les sels de zinc des composés désirés ont une solubilité minimum et précipitent.
Ils sont recueillis et transformés en ptéridines libres. - Etant donné que la solubilité des sels de zinc des - ptéridines désirées n'augmente que faiblement ou pas du tout lorsqu'on élève la température, tandis que la solubilité des sels des autres ptéridines tend à augmenter, il est indiqué que la précipitation des sels de zinc. des ptéridines désirées s'effectue à une tempé rature élevée, de préférence entre 50 et 95 C environ.
Bien que les sels de zinc précipités aient une pureté sensiblement améliorée, il est ordi nairement désirable de répéter le processus jusqu'à l'élimination pratiquement totale des impuretés. A cet effet, on dissout par exemple les sels de zinc dans une solution aqueuse d'un alcali (hydrate de sodium, de calcium, de baryum ou autres) à un pH supérieur à 11,5. L'hydrate insoluble de zinc ainsi que d'autres substances insolubles peuvent être alors éliminées par filtration, puis 6n répète l'opération qu'on vient de décrire.
Lorsqu'on estime que la purification a été suffisamment poussée, en traitant le sel de zinc avec un acide pour abaisser le pH à une valeur inférieure à 5 et de préférence à 3, on obtient la précipitation de la ptéridine libre. Le produit peut être séparé de son eau-mère puis séché ou conditionné pour obtenir des produits pharmaceutiques de diffé rentes sortes. L'invention est décrite avec phis de détails dans les exemples qui suivent.
Exemple <I>1:</I> 30,8 parties de sulfate de 2,4,5-triamino-6- hydroxy-pyrimidine, 29,3 parties de chlorure de baryum dihydraté et 600 parties d'eau sont chauffées à 60 C pendant quelques minutes, puis refroidies à 40 C. On ajoute ensuite 13,3 parties d'acide p-aminobenzoylglutamique et on ajuste le pH à 3. En l'espace de 25 mi nutes, on ajoute 17,5 parties de butylchloral (2,2,3-trichlorobutanal) avec de la soude caus tique pour maintenir le pH à 3. Après avoir agité pendant une demi-heure encore, on re froidit, on filtre et on sèche le mélange.
Le rendement est de 49,1 parties et l'analyse chi mique donne 181/o de produit actif.
Le produit cru obtenu ci-dessus contenant l'acide 4-{ N-[1-(2-amino-4-hydroxypyrimido- [4, 5-b ] -pyrazyl) - 6-éthyl ] -amino ? -benzoylglut- amique est purifié comme indiqué ci-après. 3 parties (réelles) de la matière crue sont mélangées avec 6 parties de chaux dans 3000 parties d'eau . On chauffe à 60 C et enfin on filtre le mélange. On ajuste le pH du filtrat à 10,8 à l'aide de chlorure aqueux de zinc et on filtre de nouveau.
En ajoutant du chlorure de zinc jusqu'au pH de 6,8 à 80 -C, un sel de zinc de l'acide désiré précipite et on le filtre à chaud. On mélange ensuite le gâteau de sel de zinc avec, 3000 parties d'eau et de la soude caustique pour porter de pH à 12 en viron. La bouillie est ensuite ajustée de nou veau au pH de 6,8 à l'aide de chlorure de zinc, puis filtrée. On précipite une troisième fois le sel de zinc de la même faon. Le gâteau est ensuite mélangé avec 4,5 parties de chaux et 700 parties d'eau à 90 C, on filtre, on acidifie jusqu'au pH de 3, puis on refroidit et. on filtre.
Le gâteau est ensuite mélangé avec 6 parties de carbonate de magnésiiuu et 460 parties d'eau à 90 C. On ajoute 1,6 parties de char bon de bois et l'on filtre la bouillie avant de l'acidifier au pl-I de 3, puis on refroidit et on filtre. Le rendement est. de 1,81 parties et l'analyse chimique donne 791/o de produit actif.
Exemple <I>2:</I> Un mélange de 25,7 g de sulfate de 2,4,5- tr iamino-6-hydroxypyrimidine monohydraté, 24,4 g de chlorure de baryum dihydraté et 700 cm3 d'eau sont chauffés pendant 10 mi nutes à 60 C. Après avoir refroidi à 40 C, on ajoute 32,4 g de p-méthylaminobenzoyl- glutamate disodique, puis on règle le mélange à un pH de 3 à 4.
Simultanément et à 40 C, on ajoute des solutions de 21,6 g de 2,3-di- bromopropionaldéhyde dans de l'acide acéti que, de 12,5 g d'iode et 25 g d'iodure clé po tassium dans 100 cm3 d'eau, et enfin clé la soude caustique pour maintenir le pH à 3 à 4.
L'acide 4- [N- (2-amino-4-hydrobypyrimido- [4,5-b] pyrazyl-6-éthyl-N-méthylamino]-ben- zoylglutamique cru ainsi isolé possède une activité antagoniste par rapport à l'aide pté- roy1glutamique. La moitié de la matière crue, préparée de la façon indiquée ci-dessus, est chauffée avec 2 litres d'eau et 9 g de chaux pendant. 40 mi nutes.
Après avoir ajouté 25 g d'auxiliaire de filtration, filtré et lavé, on traite le filtrat avec 25 g supplémentaires d'auxiliaire de fil tration et une solution de chlorure de zinc à 101/o jusqu'au pH de 10,99 et l'on filtre. On chauffe le filtrat à 80 C et l'on- ajoute une solution de chlorure de zinc à 20 % pour obte- nir un pH de 6,9.
Après filtrage à l'aide de 25 g d'auxiliaire de filtration, on traite le gâteau avec 3 litres d'eau et de la. soude caus tique jusqu'au pH de 11 à 12 à 80 C pendant 10 minutes. A 80 C, on ajoute une solution de chlorure de zinc à 20 0% pour abaisser le pH à 6,9. On sépare par filtration un sel de zinc et on renouvelle six fois encore l'opéra tion de précipitation décrite. La pureté du produit s'améliore à chaque précipitation. Finalement, on acidifie jusqu'au pH de 3 pour régénérer l'acide.
A process for separating, in a solution, a pteridine from the impurities which accompany it. There is described and claimed in the main patent a process for separating, in a solution containing a pteridine corresponding to the general formula: -
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where R is the residue of an amino acid or of a peptide, said pteridine of the impurities which accompany it and in particular of pteridines of formula other than the formula above.
It has now been discovered that this same process can be applied, with all the advantages mentioned in the main patent, to pteridines containing the group
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where R is the residue of an amino acid. The subject of the present invention is therefore a process for separating, in a solution containing a pteridine having the group :.
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in which R_ is the residue of an amino acid, said pteridine of the impurities which accompany it and in particular pteridines of the formula other than the above formula, this process being characterized by the fact that one adds , to this solution containing a pteridine having the general formula above, a soluble zinc salt, preferably the acidic zinc salt to an alkaline solution of a raw reaction mixture, and adjust the pH of the liquid to a value between 10.5 and 11.2 and in that the precipitated materials consisting essentially of said impurities are separated in the form of zinc combinations,
with the solution which contains most of the desired pteridine as a soluble zinc salt, and ultimately regenerates this pteridine. Precipitation can take place in both cold and hot solution.
For regeneration, the pg of the solution freed from impurities can then be reduced to limits of between about 6.5 and 7, by adding additional amounts of an acid salt of zinc or by adding 'acid. Under these conditions, the zinc salts of the desired compounds have minimum solubility and precipitate.
They are collected and transformed into free pteridins. - Since the solubility of the zinc salts of the desired pteridines increases only slightly or not at all with increasing the temperature, while the solubility of the salts of the other pteridines tends to increase, it is indicated that the precipitation of the zinc salts. of the desired pteridines is carried out at an elevated temperature, preferably between 50 and 95 C approximately.
Although the precipitated zinc salts have significantly improved purity, it is ordinarily desirable to repeat the process until the impurities are substantially removed. For this purpose, for example, the zinc salts are dissolved in an aqueous solution of an alkali (sodium, calcium, barium or other hydrate) at a pH greater than 11.5. The insoluble zinc hydrate as well as other insoluble substances can then be removed by filtration, then 6n repeats the operation which has just been described.
When it is judged that the purification has been sufficiently thorough, by treating the zinc salt with an acid to lower the pH to a value below 5 and preferably below 3, the precipitation of free pteridine is obtained. The product can be separated from its mother liquor and then dried or packaged to obtain pharmaceutical products of different kinds. The invention is described in more detail in the examples which follow.
Example <I> 1: </I> 30.8 parts of 2,4,5-triamino-6-hydroxy-pyrimidine sulfate, 29.3 parts of barium chloride dihydrate and 600 parts of water are heated to 60 C for a few minutes, then cooled to 40 C. Then 13.3 parts of p-aminobenzoylglutamic acid are added and the pH is adjusted to 3. Within 25 minutes, 17.5 parts of butylchloral ( 2,2,3-trichlorobutanal) with caustic soda to maintain the pH at 3. After stirring for a further half an hour, the mixture is cooled, filtered and dried.
The yield is 49.1 parts and chemical analysis gives 181% of active product.
The raw product obtained above containing 4- {N- [1- (2-amino-4-hydroxypyrimido- [4, 5-b] -pyrazyl) - 6-ethyl] -amino acid? -benzoylglut- amic is purified as indicated below. 3 parts (real) of the raw material are mixed with 6 parts of lime in 3000 parts of water. The mixture is heated to 60 ° C. and finally the mixture is filtered. The pH of the filtrate is adjusted to 10.8 with aqueous zinc chloride and filtered again.
By adding zinc chloride up to pH 6.8 at 80 ° C, a zinc salt of the desired acid precipitates and is filtered hot. Then the zinc salt cake is mixed with 3000 parts of water and caustic soda to bring the pH to about 12. The slurry is then adjusted again to pH 6.8 using zinc chloride, then filtered. The zinc salt is precipitated a third time in the same way. The cake is then mixed with 4.5 parts of lime and 700 parts of water at 90 ° C., filtered, acidified to pH 3, then cooled and. we filter.
The cake is then mixed with 6 parts of magnesium carbonate and 460 parts of water at 90 C. 1.6 parts of charcoal are added and the slurry is filtered before acidifying it with pl-I. 3, then cooled and filtered. The yield is. of 1.81 parts and chemical analysis gives 791 / o of active product.
Example <I> 2: </I> A mixture of 25.7 g of 2,4,5-tr iamino-6-hydroxypyrimidine sulfate monohydrate, 24.4 g of barium chloride dihydrate and 700 cm3 of water are heated for 10 minutes at 60 ° C. After cooling to 40 ° C., 32.4 g of disodium p-methylaminobenzoyl-glutamate are added, then the mixture is adjusted to a pH of 3 to 4.
Simultaneously and at 40 ° C., solutions of 21.6 g of 2,3-di-bromopropionaldehyde in acetic acid, 12.5 g of iodine and 25 g of key potassium iodide in 100 are added simultaneously. cm3 of water, and finally the caustic soda to maintain the pH at 3 to 4.
The raw 4- [N- (2-Amino-4-hydrobypyrimido- [4,5-b] pyrazyl-6-ethyl-N-methylamino] -benzoylglutamic acid thus isolated has antagonistic activity with respect to pte- roy1glutamic aid Half of the raw material, prepared as above, is heated with 2 liters of water and 9 g of lime for 40 minutes.
After 25 g of filter aid has been added, filtered and washed, the filtrate is treated with an additional 25 g of filter aid and a solution of zinc chloride at 101% until pH 10.99 and 1. 'we filter. The filtrate is heated to 80 ° C. and a 20% solution of zinc chloride is added to obtain a pH of 6.9.
After filtering with 25 g of filter aid, the cake is treated with 3 liters of water and. caustic soda up to pH 11 to 12 at 80 C for 10 minutes. At 80 ° C., a 20 0% solution of zinc chloride is added to lower the pH to 6.9. A zinc salt is filtered off and the described precipitation operation is repeated six times. The purity of the product improves with each precipitation. Finally, it is acidified to pH 3 to regenerate the acid.